）狀態(tài)儲存，以使得僅需要緊接在使用之前 加入無菌載液，例如用于注射目的的水。根據(jù)該配方制備的注射液和混懸液可由無菌粉末、 顆粒劑和片劑制備。
[0091] 不用說，關(guān)于特定制劑類型，除了以上特定提到的成分之外，所述制劑還可包含本 領(lǐng)域中常用的其他試劑；因此，例如，適合口服給予的制劑可包含矯味劑。
[0092] 式I化合物的治療有效量取決于許多因素，例如包括動物的年齡和體重、需要治 療的精確病況及其嚴(yán)重性、制劑的性質(zhì)和給藥方法，且其最終由治療醫(yī)師或獸醫(yī)確定。然 而，根據(jù)本發(fā)明的化合物的有效量通常在〇. 1-100 mg/kg接受者（哺乳動物）體重/日的 范圍內(nèi)且特別典型地在1-10 mg/kg體重/日的范圍內(nèi)。因此，對于體重為70 kg的成年哺 乳動物每日的實(shí)際量通常為70-700 mg，其中該量可以每日單一劑量或通常以每日一系列 多份劑量（例如2、3、4、5或6份）給予，以使得日總劑量相同。鹽或溶劑合物或其生理學(xué) 功能衍生物的有效量可確定為本發(fā)明的化合物的有效量本身的部分。可假設(shè)類似的劑量適 合用于治療上述其他病況。
[0093] 該類型的組合治療可借助于同時、連續(xù)或單獨(dú)分配該治療的單獨(dú)組分來實(shí)現(xiàn)。該 類型的組合產(chǎn)物采用根據(jù)本發(fā)明的化合物。
[0094] 本發(fā)明另外涉及藥物，其包含至少一種式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、互 變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其所有比例的混合物，及至少一種另外的藥物活性成分。
[0095] 本發(fā)明還涉及由以下單獨(dú)包裝組成的套裝（set)(藥盒）： (a) 有效量的式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括 其所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的其它藥物活性成分。
[0096] 所述套裝包含合適的容器，例如盒（box)、單個瓶、袋或安瓿。所述套裝例如可包括 單獨(dú)的安瓿，其各自含有有效量的式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立 體異構(gòu)體，包括其所有比例的混合物， 和有效量的以溶解或凍干形式的其它藥物活性成分。
[0097] 本文使用的"治療"是指完全或部分地減輕與病癥或疾病相關(guān)的癥狀，或減慢或中 止那些癥狀的進(jìn)一步進(jìn)展或惡化，或防止或預(yù)防處于發(fā)展該疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)之中的個體 的疾病或病癥。
[0098] 關(guān)于式⑴化合物的術(shù)語"有效量"可以指能夠完全或部分地減輕與病癥或疾病 相關(guān)的癥狀，或減慢或中止那些癥狀的進(jìn)一步進(jìn)展或惡化，或防止或提供預(yù)防具有本文公 開的疾病或處于發(fā)展本文公開的疾病的風(fēng)險(xiǎn)之中的個體的疾病或病癥的量，所述疾病例如 為炎性病況、免疫病況、癌癥或代謝病況。
[0099] 在一個實(shí)施方案中，式（I)化合物的有效量為例如在體外或體內(nèi)抑制細(xì)胞中的端 錨聚合酶的量。在一些實(shí)施方案中，與在未治療的細(xì)胞中的端錨聚合酶的活性相比較，有效 量的式⑴化合物抑制細(xì)胞中的端錨聚合酶達(dá)1〇%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或 99%。例如在藥物組合物中的式（I)化合物的有效量可處于產(chǎn)生所需效果的水平；例如對于 口服給藥和腸胃外給藥兩者，在單位劑量中約0.005 mg/kg個體體重-約10 mg/kg個體體 重。
[0100] 用途 本發(fā)明化合物適合作為藥物活性成分用于哺乳動物，特別是人，以治療癌癥、多發(fā)性硬 化、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和不同形式的炎癥。
[0101] 本發(fā)明包括式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體在 制備用于治療或預(yù)防癌癥、多發(fā)性硬化、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和不同形式的炎癥 的藥物中的用途。
[0102] 炎性疾病的實(shí)例包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀肩病、接觸性皮炎、遲發(fā)型超敏反應(yīng)等。
[0103] 還包括式I的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體在制 備用于在哺乳動物中治療或預(yù)防端錨聚合酶誘導(dǎo)的疾病或端錨聚合酶誘導(dǎo)的病況的藥物 中的用途，其中對于該方法，將治療有效量的本發(fā)明化合物給予需要所述治療的患病哺乳 動物。治療量根據(jù)特定疾病而改變，可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，而無需過度努力。
[0104] 表述"端錨聚合酶誘導(dǎo)的疾病或病況"是指病理學(xué)病況，其依賴于一種或多種端 錨聚合酶的活性。與端錨聚合酶活性相關(guān)的疾病包括癌癥、多發(fā)性硬化、心血管疾病、中樞 神經(jīng)系統(tǒng)損傷和不同形式的炎癥。
[0105] 本發(fā)明特別涉及式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其所有比例的混合物，用于治療其中端錨聚合酶的抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)節(jié)抑制起作 用的疾病。
[0106] 本發(fā)明特別涉及式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其所有比例的混合物，用于抑制端錨聚合酶。
[0107] 本發(fā)明特別涉及式I的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu) 體，包括其所有比例的混合物，用于治療癌癥、多發(fā)性硬化、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷 和不同形式的炎癥。
[0108] 本發(fā)明特別涉及用于治療或預(yù)防癌癥、多發(fā)性硬化、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損 傷和不同形式的炎癥的方法，包括給予需要其的個體有效量的式I的化合物或其藥學(xué)上可 接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體或溶劑合物。
[0109] 式I化合物可用于治療或預(yù)防的代表性癌癥包括但不限于，頭、頸、眼、口、咽喉、 食管、支氣管、喉、咽、胸、骨、肺、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、子宮、宮頸、乳腺、卵巢、睪丸 或其它生殖器官、皮膚、甲狀腺、血液、淋巴結(jié)、腎、肝、胰腺、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、實(shí)體瘤和血 載腫瘤（blood-borne tumor)的癌癥。
[0110] 式I化合物可用于治療或預(yù)防的代表性心血管疾病包括但不限于，再狹窄、動脈 粥樣硬化和其后果例如中風(fēng)、心肌梗死、對心臟、肺、腸、腎、肝、胰腺、脾或腦的缺血性損傷。 [0111] 本發(fā)明涉及治療增殖性、自體免疫、抗炎性或感染疾病病癥的方法，其包括向需要 其的個體給予治療有效量的式I化合物。
[0112] 優(yōu)選本發(fā)明涉及其中所述疾病為癌癥的方法。
[0113] 特別優(yōu)選本發(fā)明涉及其中所述疾病為癌癥的方法，其中給藥與至少一種其它活性 藥劑的給予同時、序貫或交替進(jìn)行。
[0114] 所公開的式I化合物可與包括抗癌劑的其它已知治療劑組合給予。如在此使用， 術(shù)語"抗癌劑"涉及為治療癌癥的目的而給予癌癥患者的任何藥劑。
[0115] 以上定義的抗癌治療可作為單一療法應(yīng)用，或除了本文公開的式I化合物外可包 括常規(guī)手術(shù)或放射療法或藥物治療。此類藥物治療例如化療或靶向治療可包括一種或多 種，但優(yōu)選為以下抗腫瘤藥物中的一種： 烷化劑 諸如六甲蜜胺、苯達(dá)莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮芥、環(huán)磷酰胺、達(dá)卡巴 嗪、異環(huán)磷酰胺、英丙舒凡、甲苯磺酸鹽、洛莫司汀、美法侖、二溴甘露醇、二溴衛(wèi)矛醇、尼莫 司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、蘇消安、mechloretamine、卡波醌、阿帕齊醌、福莫司汀、 葡磷酰胺、帕利伐米、哌血生、曲磷胺、尿嘧啶氮芥、TH-302 4、VAL-0834; 鉑化合物 諸如卡鉑、順鉑、依鉑、米鉑水合物、奧沙利鉑、洛鉑、奈達(dá)鉑、皮卡鉑、沙鉑；洛鉑、奈達(dá) 鉑、皮卡鉑、沙鉑； DNA改奪劑 諸如氨柔比星、比生群、地西他濱、米托蒽醌、甲芐肼、曲貝替定、氯法拉濱；安吖啶、溴 他里辛（brostallicin)、匹克生瓊、laromustine1'3; 柘樸異構(gòu)酶抑制劑 諸如依托泊苷、依立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊苷、托泊替康；氨萘非特、貝洛替 康、依利醋銨、voreloxin ; 微管調(diào)節(jié)劑 諸如卡巴他賽、多西他賽、艾日布林、伊沙匹隆、紫杉醇、長春堿、長春新堿、長春瑞濱、 長春地辛、長春氟寧、康布斯?。╢osbretabulin)、替司他賽； 抗代謝藥 諸如天門冬酰胺酶3、阿扎胞苷、左亞葉酸鈣、卡培他濱、克拉屈濱、阿糖胞苷、依諾他 濱、氟尿苷、氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、吉西他濱、巰嘌呤、甲氨蝶呤、奈拉濱、培美曲塞、普拉曲 沙、硫唑嘌呤、硫鳥嘌呤、卡莫氟；去氧氟尿苷、艾西拉濱、雷替曲塞、沙帕他濱、替加氟 2>3、曲 美沙特； 抗癌抗牛素 諸如博來霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊達(dá)比星、左旋咪挫、米替福新、絲裂霉 素 C、羅米地辛、鏈佐星、戊柔比星、凈司他丁、佐柔比星、道諾霉素、光神霉素；阿柔比星、培 來霉素、吡喃阿霉素； 激素/桔抗劑 諸如阿巴瑞克、阿比特龍、比卡魯胺、布舍瑞林、卡魯睪酮、三對甲氧苯氯乙稀、地加瑞 克、地塞米松、雌二醇、氟可龍、氟羚甲基睪丸素、氟他胺、氟維司群、戈舍瑞林、組氨瑞林、亮 丙瑞林、甲地孕酮、米托坦、那法瑞林、諾龍、尼魯米特、奧曲肽、潑尼松龍、雷洛昔芬、他莫昔 芬、促甲狀腺激素 α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己烯雌酚；阿考比芬、達(dá)那唑、德舍瑞 林、環(huán)硫雄醇、orteronel、恩雜魯胺1' 3; 芳香酶抑制劑 諸如氨魯米特、阿那曲挫、依西美坦、法倔挫、來曲挫、睪內(nèi)脂；福美坦； 小分子激酶抑制劑 諸如克唑替尼、達(dá)沙替尼、厄洛替尼、伊馬替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、瑞 格非尼、魯索利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、維羅非尼、博舒替尼、吉非替尼、 阿西替尼；阿法替尼、alisertib、達(dá)拉菲尼、達(dá)可替尼、dinaciclib、多韋替尼、恩扎妥 林、尼達(dá)尼布、樂伐替尼、利尼伐尼、Iinsitinib、馬賽替尼、米哚妥林、莫特塞尼、來那 替尼（neratinib)、orantinib、哌立福辛、普納替尼、拉多替尼、rigosertib、替吡法尼、 tivantinib、tivozanib、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼4、卡 波替尼S-蘋果酸鹽 1A依魯替尼i3、?？颂婺醊buparlisib'cipatinilAcobimetinib 1'3、 idelalisib1'3、fedratinib1、XL-647 4; 光敏劑 諸如甲氧沙林3、卟吩姆鈉、他拉泊芬、替莫泊芬； 抗體 諸如阿侖單抗、貝西索單抗、貝倫妥單抗-維多汀、西妥昔單抗、迪諾塞麥、易普利單 抗、奧法木單抗、帕尼單抗、利妥昔單抗、托西莫單抗、群司珠單抗、貝伐單抗、帕妥珠單抗 2'3、卡妥索單抗、elotuzumab、依帕珠單抗、farletuzumab、mogamulizumab、necitumumab、尼 妥珠單抗、奧奴珠單抗、ocaratuzumab、奧戈伏單抗、雷莫蘆單抗、利妥木單抗、司妥昔單抗、 托珠單抗、扎魯木單抗、扎木單抗、馬妥珠單抗、達(dá)妥珠單抗u 3、onartuzumatA3、雷妥莫單 抗 \ tabalumab1'3、EMD-5257974、nivolumab 1'3; 會田胞因子 諸如阿地白介素、干擾素 α2、干擾素 a 2a3、干擾素 a 2b2'3、西莫白介素、他索納明、替 西白介素、奧普瑞白介素1>3、重組干擾素 β-Ia4; 藥物軛合物 諸如地尼白介素-毒素連接物、替伊莫單抗、碘芐胍1123、松龍苯芥、曲妥珠單 抗-emtansine、雌莫司汀、吉妥珠單抗、奧唑米星、阿柏西普；cintredekin besudotox、依多 曲肽、奧英妥珠單抗、那莫單抗、莫奧珠單抗、锝（99mTc)、阿西莫單抗u、vintafolide 1'3; 痔苗 諸如 sipuleucel3、維特斯朋 3、emepepimut-S3、oncoVAX4、rindopepimut 3、troVax4、 MGN-16014、MGN-17034; 其他藥物 阿利維A酸、貝沙羅汀、硼替佐米、依維莫司、伊班膦酸、咪喹莫特、來那度胺、蘑菇多 糖、甲酪氨酸、米伐木肽、帕米磷酸、培加帕酶、噴司他丁、sipuleucel3、西佐糖、他米巴羅 汀、替西莫司、沙利度胺、維甲酸、維莫德吉、唑來膦酸、伏立諾他；塞來考昔、西侖吉肽、恩 替諾特、依他硝唑、ganetespib、idronoxil、iniparib、ixazomib、氯尼達(dá)明、尼莫唑、帕 比司他、培瑞維A酸、plitidepsin、泊馬度胺、procodazol、ridaforolimus、他喹莫德、 telotristat、胸腺法新、替拉扎明、托多司他、trabedersen、烏苯美司、伐司樸達(dá)、今又生 (gendicine)4、溶鏈菌4、reolysin4、鹽酸瑞他霉素 1>3、trebananib2'3、維魯利秦4、卡非佐米 1,3、內(nèi)皮抑素 4、iifflnucothel4、belinostat3、MGN-1703 4; 1Prop. INN (提議的國際非專屬名稱） 2Rec. INN (推薦的國際非專屬名稱） 3USAN (美國采用的名稱） 4 無 INN。
[0116] 下列縮寫分別指以下定義： aq (水性），h (小時），g (克），L (升），mg (毫克），MHz (兆赫），min.(分鐘）， mm (毫米），mm〇l (毫摩爾），mM(毫摩爾當(dāng)量），m.p.(恪點(diǎn)），eq (當(dāng)量），mL (毫升）， L(微升），ACN (乙腈），AcOH (乙酸），CDCl3 (氘化氯仿），CD3OD (氘化甲醇），CH3CN (乙腈），c-hex (環(huán)己烷），DCC (二環(huán)己基碳二亞胺），DCM (二氯甲烷），DIC (二異丙 基碳二亞胺），DIEA (二異丙基乙胺），DMF (二甲基甲酰胺），DMSO (二甲亞砜），DMS0-d6 (氖化二甲亞諷），EDC (1-(3-二甲基-氨基-丙基）_3_乙基碳二亞胺），ESI (電噴霧 電離），EtOAc (乙酸乙酯），Et2O (乙醚），EtOH (乙醇），HATU (二甲基氨基-([I，2,3] 三唑并[4, 5-b]吡啶-3-基氧基）-亞甲基]-二甲基-銨六氟磷酸鹽），HPLC (高效液相 色譜），i-Pr0H (2-丙醇），K2CO3 (碳酸鉀），LC(液相色譜），MeOH (甲醇），MgSO4 (硫酸 鎂），MS (質(zhì)譜），MTBE (甲基叔丁基醚），NaHC03 (碳酸氫鈉），NaBH4 (硼氫化鈉 ），NMM (N-甲基嗎啉），NMR (核磁共振），PyBOP (苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷子基-磷 鑰六氟磷酸鹽），RT (室溫），Rt (保留時間），SPE (固相提?。?，TBTU (2- (1-H-苯并三 唑-1-基）-1，1，3,3_四甲基脲鑰四氟硼酸鹽），TEA (三乙胺），TFA (三氟乙酸），THF (四 氫呋喃），TLC (薄層色譜），UV (紫外線）。
[0117] 體外測宙法的描沐 縮寫： GST =谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶 FRET=熒光共振能量轉(zhuǎn)移 HTRF? =(均相時間分辨熒光） HEPES = 4-(2-羥基乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸緩沖液 DTT =二硫蘇糖醇 BSA =牛血清白蛋白 CHAPS =去垢劑； CHAPS = 3-[(3_膽酰胺基（cholamido)丙基）二甲基銨基（ammonio)]-1-丙烷磺酸 鹽。
[0118] 鏈霉抗生物素-XLent?是高等級鏈霉抗生物素-XL665綴合物，對此偶合條件已被 優(yōu)化以產(chǎn)生具有用于一些測定，特別是需要高靈敏性的測定的增強(qiáng)性能的綴合物。
[0119] 端錨聚合酶1和2的生物化學(xué)活性測試：自動聚ADP核糖化（Autoparsylation) 測定 自動聚ADP核糖化測定以兩個步驟進(jìn)行：酶促反應(yīng)（其中GST-標(biāo)記的端錨聚合酶-1、 resp端錨聚合酶-2將生物素化ADP-核糖由作為共同底物的生物素化NAD轉(zhuǎn)移至其自身） 和檢測反應(yīng)（其中分析了結(jié)合于酶的GST標(biāo)簽的穴狀化合物標(biāo)記的抗-GST和結(jié)合生物 素-聚ADP核糖化殘基的Hent?標(biāo)記的-鏈霉抗生物素之間的時間分辨FRET)。自動聚 ADP核糖化活性可經(jīng)由HTRF信號的增加直接檢測。
[0120] 自動聚ADP核糖化測定作為格雷納低量（Greiner low volume) nb 384-孔微量 滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio, Codolet, France)測定形式進(jìn)行并用于高通量篩 選。在試驗(yàn)化合物（10倍稀釋濃度）不存在或存在下，將250 nM GST-標(biāo)記的端錨聚合 酶-1 (1023-1327 aa)，分別約 250 nM GST-標(biāo)記的端錨聚合酶-2 (873-1166 aa)和 5 μΜ bio-NAD (Biolog, Life science Inst·, Bremen, Germany)作為共同底物以總體積 5 μL (50 mM HEPES、4 mM 氯化鎂、0.05 % 普流羅尼克 F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMS0, pH 7.7) 于30°C孵育90 min。通過加入1 μL 50 mM EDTA溶液停止反應(yīng)。加入2 μL檢測溶液（1.6 μΜ SA-Xlent? (Cisbio, Codolet, France), 7.4 nM 抗-GST-K? (Eu-標(biāo)記的抗-GST, Cisbio, Codolet, France)在下列中：50 mM HEPES，800 mM KF、0. 1 % BSA、20 mM EDTA、 0· I % CHAPS, pH 7· 0)。于室溫下孵育1小時后，用Envision多模閱讀器（Perkin Elmer LAS Germany GmbH)以激發(fā)波長340 nm (激光模式）和發(fā)射波長615 nm和665 nm測量 HTRF。測定發(fā)射信號的比率。所用的全值為無抑制劑的反應(yīng)。所用的藥理學(xué)零值為在5 μΜ 的最終濃度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值（IC50)使用程序Symyx Assay Explorer?或 者來自 GeneData 的 Condosseo? 測定。
[0121] 端錨聚合酶的細(xì)胞抑制作用的測定 因?yàn)槎隋^聚合酶已被描述為調(diào)節(jié)Axin2的細(xì)胞水平（Huang等人，2009 !Nature)， Axin2水平的增加被用作在基于Luminex的測定法中測定端錨聚合酶的細(xì)胞抑制作用的讀 數(shù)。
[0122] 將結(jié)腸癌細(xì)胞系DLDl的細(xì)胞以每孔I. 5xl04個細(xì)胞接種于96孔板。第二天，用系 列稀釋的試驗(yàn)化合物以7個步驟，按0. 3%的最終DMSO濃度一式三份處理細(xì)胞。24小時后， 在裂解緩沖液（20mM Tris/HCl pH 8. 0、150mM NaCl、l% NP40、10%甘油）中裂解細(xì)胞并通 過96孔濾出板（0. 65Mm)離心清除裂解產(chǎn)物。通過與結(jié)合于焚光羧基珠粒（carboxybeads) 的單克隆抗_Axin2抗體（R&D Systems #MAB6078) -起孵育從細(xì)胞裂解產(chǎn)物分離Axin2蛋 白。然后，用多克隆抗-Axin2抗體（Cell Signaling #2151)和適宜的PE-熒光第二抗體 特異性檢測結(jié)合的Axin2。根據(jù)制造商說明書，在Luminexa