專利名稱：作為雌激素藥物的前藥取代的苯并唑化合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用作雌激素藥物的取代的苯并唑的前藥衍生物。
已很好地證明哺乳動物組織內(nèi)雌激素的多效作用，現(xiàn)在意識到雌激素可影響許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas，New EnglandJournal of Medicine 3401801-1811(1999)，Epperson，等，Psychosomatic Medicine 61676-697(1999)，Crandall，Journal ofWomens Health & Gender Based Medicine 81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，Dementia & Geriatric Cognitive Disorders 111-10(2000)，Hurn和Macrae，Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism 20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，F(xiàn)inking，等，Zeitschriftfur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，Postgraduate Medical Journal 77292-304(2001)]。雌激素能夠以幾種方式對組織發(fā)揮作用，并且最具優(yōu)良特征的作用機(jī)制為它們與導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄變化的雌激素受體相互作用。雌激素受體為配體-激活的轉(zhuǎn)錄因子并且屬于核激素受體超家族。這一家族的其它的成員包括孕酮、雄激素、糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素受體。一旦與配體結(jié)合，這些受體二聚化并且或者通過直接結(jié)合于DNA的特異性序列(稱作應(yīng)答元素)或者通過與其它的轉(zhuǎn)錄因子(諸如AP1)相互作用，然后它直接結(jié)合于特異性DNA序列，可激活基因轉(zhuǎn)錄。[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall，等，JournalofBiological Chemistry 27636869-36872(2001)，McDonnell，PrinciplesOf Molecular Regulation 351-361(2000)]。一類“共調(diào)節(jié)”蛋白也可以與配體-結(jié)合的受體相互作用并且進(jìn)一步調(diào)節(jié)它的轉(zhuǎn)錄活性[McKenna，等，Endocrine Reviews 20321-344(1999)]。它也顯示雌激素受體能夠以配體-依賴的和獨(dú)立的方式抑制NFκB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄[Quaedackers，等，Endocrinology 1421156-1166(2001)，Bhat，等，Journal of SteroidBiochemistry & Molecular Biology 67233-240(1998)，Pelzer，等，Biochemical & Biophysical Research Communications 2861153-7(2001)]。
通過磷酸化也可激活雌激素受體。通過生長因子諸如EGF介導(dǎo)這種磷酸化并在配體不存在下，引起基因轉(zhuǎn)錄變化[Moggs和Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall，等，Journal ofBiological Chemistry 27636869-36872(2001)]。
雌激素借以影響細(xì)胞頗具特點(diǎn)的方法是通過所謂的膜受體。這樣受體的存在是有爭論的，但它很好證實(shí)雌激素可非常迅速引起得自細(xì)胞的非基因組應(yīng)答。擔(dān)負(fù)傳導(dǎo)這些作用的分子實(shí)體尚未明確分離，但有證據(jù)提示它至少與雌激素受體的核形成相關(guān)[Levin，Journal ofApplied Physiology 911860-1867(2001)，Levin，TrendsinEndocrinology & Metabolism 10374-377(1999)]。
迄今已發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。約15年前已克隆第一種雌激素受體且現(xiàn)在稱為ERα[Green，等，Nature 320134-9(1986)]。最近才發(fā)現(xiàn)第二種形式的雌激素受體且稱為ERβ[Kuiper，等，Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America 935925-5930(1996)]。ERβ的最初研究集中在對多種配體定義它的親合性，并且確實(shí)觀察到與ERα的某些差異。在嚙齒動物上良好繪制ERβ的組織分布且不與ERα相一致。組織諸如小鼠和大鼠子宮主要表達(dá)ERα，而小鼠和大鼠肺主要表達(dá)ERβ[Couse，等，Endocrinology 1384613-4621(1997)，Kuiper，等，Endocrinology 138863-870(1997)]。甚至在相同器官內(nèi)，ERα和ERβ的分布可以被劃分區(qū)域。例如在小鼠卵巢中，ERβ在顆粒細(xì)胞中高度表達(dá)，并且ERα被限制于卵泡膜和基質(zhì)細(xì)胞[Sar和Welsch，Endocrinology 140963-971(1999)，F(xiàn)itzpatrick，等，Endocrinology 1402581-2591(1999)]。然而，存在受體共同表達(dá)的實(shí)例和有來自體外實(shí)驗(yàn)的證據(jù)表明，ERα和ERβ能夠形成雜化二聚體[Cowley，等，Journal of Biological Chemistry 27219858-19862(1997)]。
已描述大量化合物或者模擬或者阻斷17β-雌二醇的活性。具有與17β-雌二醇大致相同生物作用的化合物，最有效的內(nèi)源性雌激素，被稱作“雌激素受體激動劑”。那些當(dāng)與17β-雌二醇組合給予時阻斷其作用的化合物被稱作“雌激素受體拮抗劑”。事實(shí)上，存在雌激素受體激動劑與雌激素受體拮抗劑活性之間的統(tǒng)一體并且在某些組織中確實(shí)有某些化合物作為雌激素受體激動劑起作用而在其它組織中作為雌激素受體拮抗劑起作用。這些具有混合活性的化合物被稱作選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS)并且在治療上是有用的藥物(例如EVISTA)[McDonnell，Journal of the Society for GynecologicInvestigation 7S10-S15(2000)，Goldstein，等，Human ReproductionUpdate 6212-224(2000)]。相同化合物可具有細(xì)胞-特異性作用的準(zhǔn)確的原因未予闡明，但受體構(gòu)象和/或共調(diào)節(jié)蛋白的環(huán)境的差異已被提示。
曾經(jīng)一段時期已知當(dāng)結(jié)合配體時，雌激素受體采取不同的構(gòu)象。然而，僅在最近才揭示這些變化的連續(xù)性和微細(xì)區(qū)別。通過與各種配體共結(jié)晶已解決ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)并且清晰顯示當(dāng)立體阻礙受體-共調(diào)節(jié)蛋白相互作用所需要的蛋白序列時，在雌激素受體拮抗劑存在下雙螺旋12的改變[Pike，等，Embo 184608-4618(1999)，Shiau，等，Cell 95927-937(1998)]。另外，噬菌體展示技術(shù)已用于在不同配體存在下鑒定與雌激素受體相互作用的肽[Paige，等，Proceedings ofthe National Academy of Sciences of the United States of America 963999-4004(1999)]。例如肽被鑒定以區(qū)分結(jié)合于全長雌激素受體激動劑17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚的ERα。不同的肽顯示結(jié)合于ERα和ERβ的氯芪酚之間的區(qū)別。這些數(shù)據(jù)指明每一配體潛在地以獨(dú)一無二的和意想不到的可能具有獨(dú)特生物活性的構(gòu)象裝配受體。
如上所述，雌激素影響全部生物過程。另外，描述性別差異時(例如發(fā)病率、攻擊應(yīng)答等)，解釋包括男性和女性之間的雌激素水平上的差異是可能的。
具有雌激素活性的化合物在2002年12月4日提交的美國專利申請系列號為10/309,699，現(xiàn)在為美國專利號6,794,403和WO03/050095中公開，這些文獻(xiàn)的全文通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明描述本發(fā)明提供用作雌激素藥物的具有下面結(jié)構(gòu)的式I的雌激素化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中Q1和Q2獨(dú)立為H、糖殘基或S(O)t-OH，條件是Q1和Q2不都為H；t為0、1或2；R1為氫、羥基、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的三氟烷基、3-8個碳原子的環(huán)烷基、1-6個碳原子的烷氧基、1-6個碳原子的三氟烷氧基、1-6個碳原子的硫代烷基、1-6個碳原子的磺酰烷基(sulfoxoalkyl)、1-6個碳原子的亞磺酰烷基(sulfonoalkyl)、6-10個碳原子的芳基、具有1-4個選自O(shè)、N或S的雜原子的5或6-元雜環(huán)、-NO2、-NR5R6、-N(R5)COR6、-CN、-CHFCN、-CF2CN、2-7個碳原子的炔基或2-7個碳原子的鏈烯基；其中烷所述基或者鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R2和R2a每個獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R3和R3a每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、鹵素、1-4個碳原子的烷氧基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R5、R6每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基；X為O、S或NR7；R7為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或-SO2R5。
當(dāng)本發(fā)明化合物含堿性部分時，自有機(jī)酸和無機(jī)酸可形成藥學(xué)上可接受的鹽，例如所述酸為乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸和類似的已知可接受的酸。當(dāng)本發(fā)明的化合物含酸性部分時，自有機(jī)堿和無機(jī)堿也可形成鹽，例如堿金屬(例如鈉、鋰或鉀)鹽、堿土金屬鹽、銨鹽、在每一烷基中含1-6個碳原子的烷基銨鹽或在每一烷基中含1-6個碳原子的二烷基銨鹽，和在每一烷基中含1-6個碳原子的三烷基銨鹽。
術(shù)語“烷基”、“鏈烯基”和“鏈炔基”包括分支和直鏈兩者的部分。實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-甲基乙烯基等。當(dāng)烷基或者鏈烯基部分被取代時，它們通?？蔀閱?、二-、三-或者全-取代。鹵素取代基的實(shí)例包括1-溴代乙烯基、1-氟代乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。術(shù)語“鹵素”包括溴、氯、氟和碘。術(shù)語“芳基”包括6-10個碳原子的芳基，例如苯基、1-萘基或2-萘基。優(yōu)選的5-6元雜環(huán)包括呋喃、噻吩、吡咯、異吡咯、吡唑、咪唑、三唑、二硫雜環(huán)戊二烯、氧硫雜環(huán)戊二烯、異唑、唑、噻唑、異噻唑、二唑、呋咱、三唑、二唑、噻唑、四唑、吡喃、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、嗪、噻嗪或二嗪。更優(yōu)選雜環(huán)為呋喃、噻吩或噻唑。
在式I化合物的一些實(shí)施方案中，R1為2-7個碳原子的鏈烯基；其中鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代。
在本發(fā)明的化合物中，優(yōu)選式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽具有以下結(jié)構(gòu) 其中Q1和Q2獨(dú)立為H、經(jīng)修飾的或未經(jīng)修飾的己糖殘基或S(O)t-OH，條件是Q1和Q2不都為H；t為2；R1為2-7個碳原子的鏈烯基；其中所述鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R2和R2a每個獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R3和R3a每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、鹵素、1-4個碳原子的烷氧基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R5、R6每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基；X為O、S或NR7；R7為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或-SO2R5。
更優(yōu)選X為O，且仍然更優(yōu)選X為O，而R1為2-3個碳原子的鏈烯基，所述鏈烯基由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代。
更優(yōu)選Q1和Q2選自-SO3H和葡糖苷酸殘基。
在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物為2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇的單-或二硫酸酯衍生物、單-或二葡糖苷酸衍生物或葡糖苷酸-硫酸酯衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，所述化合物為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基(sulfate phenyl))-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；4-溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4-溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’，5’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’，5’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸；2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯；2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯。在另外的實(shí)施方案中，所述化合物為以下化合物的葡糖苷酸衍生物、硫酸酯衍生物或葡糖苷酸-硫酸酯衍生物2-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚；3-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(2-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；2-(3-叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；2-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚；3-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；4-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；4-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚；4-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚；6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；6-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；6-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；5-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(1-溴代乙烯基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-乙炔基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-丙基-1，3-苯并唑-5-醇；7-丁基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-環(huán)戊基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-羧酸乙酯；2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇；7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛；7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(溴甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；[5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]乙腈；7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇]；2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-異丙基-1，3-苯并唑-5-醇]；7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并唑-5-醇；2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑-5-醇；2-(3-氟-4-羥基苯基)-5-羥基-1，3-苯并唑-7-腈；4-溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇；4，6-二溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇或7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇。
本發(fā)明提供用作雌激素藥物的取代的苯并唑的前藥衍生物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物為具有一個或多個附加的硫酸酯(即-O-S(＝O)2-O-H)、未經(jīng)修飾的或經(jīng)修飾的己糖(例如葡糖苷酸)或兩者的衍生物?？裳苌纬杀景l(fā)明化合物的適合的化合物，可在2002年12月4日提交的美國專利申請系列號10/309,699中找到，該文獻(xiàn)全文通過引用結(jié)合到本文中。
如在本文中所使用的，“糖”指的是至少一個含5-6個碳原子的單糖諸如戊糖，例如核糖，以及己糖，例如葡萄糖、半乳糖或果糖。糖還包括雙糖，即含兩個單糖的糖，諸如蔗糖、乳糖和麥芽糖。糖殘基可為天然地或經(jīng)合成修飾的形式，包括，例如磷酸酯、酸和內(nèi)酯。
如在本文中所使用的，術(shù)語“己糖”意指含六個碳原子的糖。適合的己糖包括但不限于為直鏈和吡喃糖兩種形式的葡萄糖、甘露糖、半乳糖和果糖。經(jīng)修飾的己糖包括包括天然形成的己糖衍生物，例如磷酸酯和相應(yīng)的酸和內(nèi)酯形式。例如，術(shù)語“經(jīng)修飾的己糖”包括葡糖酸、葡糖酸內(nèi)酯、葡糖醛酸、包括N-乙酰基衍生物、磷酸酯衍生物的氨基衍生物等。
如在本文中所使用的，如用于特定化合物的術(shù)語“葡糖苷酸衍生物”，指的是這樣的化合物的衍生物，其中所述化合物的一個或多個羥基被式XX的部分置換 如在本文中所使用的，如用于特定化合物的術(shù)語“硫酸酯衍生物”，指的是這樣的化合物的衍生物，其中所述化合物的一個或多個羥基被式-O-S(＝O)2-O-H的部分置換。
如用于特定化合物的術(shù)語“葡糖苷酸-硫酸酯衍生物”，指的是這樣的化合物的衍生物，其中所述化合物的至少一個羥基被式XX的部分置換和該化合物的至少一個羥基被式O-S(＝O)2-O-H的部分置換。
本發(fā)明化合物為取代的苯并唑雌激素藥物，其被衍生為具有一個或多個附加的部分。在給予所述衍生的化合物時，附加的部分由內(nèi)源性的酶去除而提供非衍生的化合物。本文將這樣的化合物稱為本發(fā)明化合物的代謝物。
如依據(jù)本發(fā)明所使用的，關(guān)于提供本發(fā)明所涵蓋的化合物或物質(zhì)的術(shù)語“提供”，意指或者直接給予這樣的化合物或物質(zhì)或給予將在體內(nèi)形成有效量的化合物或物質(zhì)的前藥、衍生物或類似物。
如依據(jù)本發(fā)明所使用的，術(shù)語“ERβ選擇性配體”意指在測量對ERα和ERβ結(jié)合親合力的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中配體對ERβ的結(jié)合親合力(如通過IC50測量的，其中17β-雌二醇的IC50在ERα與ERβ之間相差不大于3倍)比其對ERα的結(jié)合親和力至少大約10倍。優(yōu)選ERβ選擇性配體對ERβ具有結(jié)合親和力，它比其對ERα的結(jié)合親和力至少大約20倍。更優(yōu)選ERβ選擇性配體對ERβ具有結(jié)合親和力，它比其對ERα的結(jié)合親和力至少大約50倍。另外優(yōu)選的是ERβ選擇性配體為非-親子宮和非-激乳腺的。
如依據(jù)本發(fā)明所使用的，術(shù)語“非-親子宮的”意指在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中產(chǎn)生的濕子宮重量增加小于在相同方法中對最大有效劑量的17β-雌二醇或17α-乙炔基-17β-雌二醇所觀察到的子宮重量增加的50％。優(yōu)選增加濕子宮重量小于對雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的25％，并且更優(yōu)選濕子宮重量增加小于對雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的10％。最優(yōu)選與避免親子宮活性的對照組(例如媒介組)相比較非-親子宮的ERβ選擇性配體將不顯著(p＞0.05)增加濕子宮重量。
如依據(jù)本發(fā)明所使用的，術(shù)語“非-激乳腺的”意指具有在組織學(xué)檢查評估時，如17β-雌二醇在促進(jìn)小葉-蜂窩狀終蕾(lobular-alveolarend buds)發(fā)育上的有效性＜10％的活性。這樣的組織學(xué)檢查進(jìn)行測定的實(shí)例為本領(lǐng)域所熟悉。見，例如Harris，H.A.，等，Endocrinology144(10)4241-4249(2003)；Mulac-Jericevic，B.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.100(17)9744-9749(2003)；Bocchinfuso，W.P.，等，Endocrinology 141(8)2982-2994(2002)和Lewis，B.C.，等，Toxicological Sciences 62，46-53(2001)，其中的每一項的全文通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明也提供公開的衍生的ERβ選擇性配體在治療或抑制關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病和子宮內(nèi)膜異位中的用途。更具體地說，衍生的ERβ選擇性配體用于治療或抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或椎關(guān)節(jié)??；和克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎、感染性結(jié)腸炎或潰瘍性直腸炎。本發(fā)明還提供衍生的ERβ選擇性配體在治療或抑制關(guān)節(jié)腫脹或糜爛；或在治療或抑制繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或外科手術(shù)的關(guān)節(jié)損傷中的用途。優(yōu)選ERβ選擇性配體為非-親子宮和非-激乳腺的。
本發(fā)明也提供公開的衍生的ERβ選擇性配體在有需要的哺乳動物中用于降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、高血壓、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣；或抑制因?qū)е旅庖呓閷?dǎo)的血管損傷的細(xì)胞過程引起的血管壁損傷。
另外，公開的衍生的ERβ選擇性配體用于在有需要的哺乳動物中提供認(rèn)知增強(qiáng)或神經(jīng)保護(hù)；或治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、認(rèn)知衰退、中風(fēng)、焦慮癥或神經(jīng)退化性疾病。
本發(fā)明還提供公開的ERβ配體在有需要的哺乳動物中治療和抑制自由基誘導(dǎo)的疾病狀態(tài)、陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢癥、交媾困難、排尿困難、尿頻、尿失禁、尿道感染、血管舒縮癥、牛皮癬或皮炎、局部缺血、再灌注損傷、哮喘、胸膜炎、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、膿毒癥、出血性休克或II型糖尿病中的用途。
式I的本發(fā)明的ERβ選擇性配體也用于在有需要的哺乳動物中抑制受孕。
在一些實(shí)施方案中，哺乳動物為人，例如女人。
本發(fā)明還提供包含如在上文中描述的式I化合物和藥用載體的藥用組合物。
在制備本發(fā)明化合物中所使用的試劑或者可從商業(yè)上獲得或者可通過文獻(xiàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
可通過添加一個或多個選自硫酸酯部分和經(jīng)修飾的和未經(jīng)修飾的己糖部分衍生的式I化合物的一般制備，可依據(jù)以下的合成流程(I-VIII)制備。
流程I 在流程I中，在三乙胺存在下，用商業(yè)上可獲得的苯甲酰氯(2)處理商業(yè)上可獲得的二甲氧基苯胺(1)，產(chǎn)生酰胺(3)。在亞硫酰氯存在下回流，自商業(yè)上可獲得的苯甲酸(4)也可制備所需的苯甲酰氯(2)。于高溫(200℃)下，用吡啶鹽酸鹽處理，酰胺(3)轉(zhuǎn)變?yōu)榉踊?phenolic)苯并唑(5)。
流程II
在流程II中，用乙酸中的Br2/NaOAc溴化商業(yè)上可獲得的硝基-酚(6)，產(chǎn)生溴代苯酚(7)。用EtOAc中的Ra-Ni催化氫化(7)，得到苯胺(8)。在吡啶存在下，使(8)與苯甲酰氯(9)(商業(yè)上可獲得的或自相應(yīng)的苯甲酸和亞硫酰氯制備)偶合，產(chǎn)生酰胺-酯(10)。于高溫(150℃)下，于酸性條件下(對-甲苯磺酸)，實(shí)現(xiàn)(10)至苯并唑(11)的轉(zhuǎn)化。在二氯甲烷中的三溴化硼使(11)脫甲基，得到酚基苯并唑(12)。
流程III
在流程III中，于高溫(150℃)下，用在對-二甲苯中的苯甲酸(13)和硼酸處理，使苯胺(8)轉(zhuǎn)變?yōu)楸讲Ⅹ冗?14)。用在二氯甲烷中的三溴化硼使(14)脫甲基，得到酚基苯并唑(15)。
流程IV 在流程IV中，用乙酸中的硝酸使(16)硝化，產(chǎn)生(17)，后者在Ra-Ni存在下用氫還原，得到苯胺(18)。以在流程II中描述的類似的方法，免除在高溫(200℃)下用吡啶鹽酸鹽實(shí)現(xiàn)脫甲基步驟，把苯胺(18)轉(zhuǎn)變?yōu)楸讲Ⅹ冗?19)。
流程V
在流程V中，或者用在N，N-二甲基甲酰胺中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物/咪唑/4-二甲基氨基吡啶把苯并唑(20)的羥基保護(hù)為甲硅烷基醚(21)(R3＝Me3C(CH3)2Si)，或者用二氯甲烷中的乙酸酐/4-二甲基氨基吡啶保護(hù)為酯(21)(R3＝CH3CO)。在20℃-150℃的溫度范圍內(nèi)，伴隨用于硼酸偶合反應(yīng)的堿(即Na2CO3)存在下，在對-二甲苯、甲苯、四氫呋喃、二甲氧基甲烷或1，2-二甲氧基乙烷中，在鈀催化劑[即二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)或四重(三苯基膦)鈀(0)]存在下，苯并唑(20)和(21)與各種試劑(即三丁基(乙烯基)錫、三丁基(烯丙基)錫、三丁基(2-呋喃基)錫、硼酸或者氯化鋅)偶合，產(chǎn)生苯并唑(22)和(23)。
用氫氟酸酸(48wt.％在水中)或四丁基氟化銨使(22)(R3＝Me3C(CH3)2Si)的甲硅烷基醚脫保護(hù)，產(chǎn)生苯并唑(24)。用在二氧六環(huán)中的碳酸鉀使(22)(R3＝CH3CO)皂化，產(chǎn)生苯并唑(24)。于高溫(200℃)下，用二氯甲烷或吡啶鹽酸鹽中的三溴化硼將苯并唑(23)(R＝CH3)脫甲基，得到苯并唑(24)。
流程VI 在流程VI中，于低溫(-78℃)下，用正丁基鋰處理苯并唑(24)，隨后加入親電試劑(即CNCO2Et、Ph(CH3)NCHO、EtI等)，產(chǎn)生化合物(25)。用三溴化硼(R＝CH3)或四丁基氟化銨(R＝Me3C(CH3)2Si)將(25)脫保護(hù)，得到苯并唑(26)[R＝CHO、CO2Et、CH2CH3、C(CH3)2OH]。
于高溫(200℃)下，用吡啶鹽酸鹽處理叔醇(25)(R＝C(CH3)OH)，產(chǎn)生1-甲基-乙烯基苯并唑(27)。用H2/Pd-C還原(27)，得到異丙基類似物(28)。
流程VII 在流程VII中，用甲醇中的硼氫化鈉還原苯并唑(29)，產(chǎn)生醇(30)。用CH2Cl2中的三溴化硼處理1個小時，得到苯并唑(31)，延長(18個小時)處理得到溴化物(32)。在N，N-二甲基甲酰胺中的氰化鉀和18-冠-6醚處理下，使溴化物(32)轉(zhuǎn)變?yōu)橐译?33)。
流程VIII
在流程VIII中，首先用DMF中的氰化銅(I)處理溴代并唑(35)(R＝CH3)，產(chǎn)生相應(yīng)的芳基-腈，后者經(jīng)用三溴化硼處理，得到苯并唑(36)。自第二種合成途徑也可制備苯并唑(36)，其中在鈀催化劑[即四重(三苯基膦)鈀(0)]的存在下，用氰化鋅處理溴代并唑(35)，得到相應(yīng)的芳基-腈，后者經(jīng)用三溴化硼脫甲基，產(chǎn)生苯并唑(36)。用溴化銅(I)和在DMF中的新鮮制備甲醇鈉處理苯并唑(35)(R＝H)，產(chǎn)生甲氧基-苯并唑(37)。用乙腈中的N-溴代琥珀酰亞胺將(37)溴化，得到單溴代苯并唑(38)(主要產(chǎn)物)和二溴代苯并唑(39)(小量產(chǎn)物)。
由流程I-VIII的方法制備的化合物的葡糖苷酸、硫酸酯和葡糖苷酸-硫酸酯衍生物，可依據(jù)流程IX和X制備流程IX
UDPGA尿苷5’-二磷酸葡糖醛酸流程X PAPS＝3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸酯此外，本發(fā)明的葡糖苷酸、硫酸酯和葡糖苷酸-硫酸酯衍生物，可依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)化學(xué)合成技術(shù)制備。例如依據(jù)流程I-VIII制備的本化合物的官能團(tuán)(例如一個或多個羥基)，可用標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)保護(hù)，然后游離的羥基可與未經(jīng)修飾的或經(jīng)修飾的己糖(例如葡糖苷酸)或磺酸基偶合，得到本發(fā)明化合物。用于這樣的合成的適合的保護(hù)基，可在例如Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，Protective Groups in Organic Synthesis，第2版，New YorkJohn Wiley & Sons，N.Y.1991中找到。
藥理實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法易于測定所給出的試驗(yàn)化合物的活性分布。以下簡短概述幾種有代表性的實(shí)驗(yàn)方法并且可以包括本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)。所有試驗(yàn)，除放射配體結(jié)合試驗(yàn)以外，可用于檢測化合物的雌激素受體激動劑或者拮抗劑活性。通常，通過比較化合物對參比物雌激素(例如17β-雌二醇、17α-乙炔基、17β-雌二醇、雌酮、二乙基己烯雌酚等)的活性可測量雌激素受體激動劑活性。通常，通過用參比物雌激素共處理試驗(yàn)化合物并比較單獨(dú)用參比物雌激素得到的結(jié)果，可測量雌激素受體拮抗劑活性。在美國專利4,418,068和5,998,402中也提供SERMs的標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法，其通過引用結(jié)合到本文中。
對ERα和ERβ結(jié)合親和力的評價在常規(guī)放射配體結(jié)合試驗(yàn)中，評價本發(fā)明化合物的代謝物的代表性實(shí)施例與17β-雌二醇競爭ERα和ERβ兩者的能力。該實(shí)驗(yàn)方法為測定對ERα或ERβ受體的相對結(jié)合親和力提供方法學(xué)。下面簡短描述所采用的方法。
結(jié)合選擇性特征的受體提取物的制備。采用作為模板的全長cDNA和含當(dāng)保持用于表達(dá)的合適的讀框時亞克隆的合適的限制位點(diǎn)的引物，通過PCR得到配體結(jié)合區(qū)，在此便利定義為DNA結(jié)合區(qū)的全序列的下游。這些模板含人ERα的氨基酸M250-V595[Green，等，Nature 320134-9(1986)]和人ERβ的M214-Q530[Ogawa，等，Biochemical & Biophysical Research Communications 243122-6(1998)]。把人ERβ克隆到帶有C-末端Flag標(biāo)記物的Ncol-BamH1片段的pET15b(Novagen，Madison，WI)中。除加入N-末端His標(biāo)記物以外，按照人ERβ克隆人ERα。通過兩條譜帶的完整測序，檢定采用的所有構(gòu)造的序列。
BL21(DE3)細(xì)胞用于表達(dá)人蛋白質(zhì)。一般10mL過夜培養(yǎng)基被用于接種1L含100μg/mL的阿莫西林的Luria-Bertani(LB)媒介物的培養(yǎng)基。在37℃孵育過夜后，把異丙基-β-D-thiogulactoside(IPTG)加入到最終濃度為1mM并在25℃下孵育2個小時。經(jīng)離心(1500xg)收集細(xì)胞，細(xì)胞小球經(jīng)沖洗并重懸浮于100mL的50mM Tris-Cl(pH7.4)、150mM NaCl中。在12000psi下，通過弗氏壓碎器兩次，裂解細(xì)胞。通過在4℃下，于12,000xg下使溶解產(chǎn)物離心30分鐘并在-70℃下儲備。
用于特異性[3H]-雌二醇結(jié)合的的提取物評價。用1mM乙二胺四乙酸(EDTA)補(bǔ)充的Dulbecco’s磷酸鹽緩沖鹽水(1x最終濃度Gibco；氮，Carlsbad，CA)作為試驗(yàn)緩沖液。為使用于試驗(yàn)中的受體的量最佳化，把[3H]-17β-雌二醇(最終濃度＝2nM；New EnglandNuclear(NEN)；Perkin Elmer，Shelton，CT)±0.6μM二乙基己烯雌酚和100μL大腸桿菌溶胞產(chǎn)物的各種稀釋液加至高親和掩蔽微滴板(EG&G Wallac)上的每孔中。最終試驗(yàn)體積為120μL和且DMSO濃度≤1％。室溫下孵育5-18個小時后，吸出未結(jié)合的材料且用約300μL的試驗(yàn)緩沖液把板沖洗3次。沖洗后，將135μL液體閃爍混合劑(Optiphase Supermix，EG&G Wallac)加至每孔中，把板密封并且攪拌至少5分鐘以使閃爍物與殘余沖洗緩沖液混合。通過液體閃爍計數(shù)(Plus EG&G Wallac，Microbeta)評價結(jié)合的放射活性。
測定提供最大特異性結(jié)合的每一受體制備液的稀釋液后，采用受體制備液的各種稀釋液，通過估計未標(biāo)記17β-雌二醇的IC50進(jìn)一步使試驗(yàn)最佳化。對未標(biāo)記的17β-雌二醇的IC50，選擇每一受體制備液的最終工作稀釋液為2-4nM。
配體結(jié)合競爭試驗(yàn)方法。最初將試驗(yàn)化合物溶于二甲亞砜(DMSO)中并且DMSO在結(jié)合試驗(yàn)中的最終濃度≤1％。每一試驗(yàn)化合物的8個稀釋液被用作[3H]-17β-雌二醇的未標(biāo)記的競爭劑。通常，一系列化合物稀釋液應(yīng)在人ERα和ERβ上同時試驗(yàn)。結(jié)果作為測量的每分鐘裂解數(shù)(disintegrated)(DPM)對試驗(yàn)化合物的的濃度做圖。對劑量-應(yīng)答曲線擬合，把轉(zhuǎn)化的、稱重的數(shù)據(jù)的四參數(shù)對數(shù)模型擬合并且IC50定義為化合物減少最大[3H]-雌二醇結(jié)合達(dá)50％的濃度。
本發(fā)明的代表性實(shí)施例對ERα和ERβ(通過IC50測量)的結(jié)合親合力顯示在表(1)中。
表1本發(fā)明化合物的代表性代謝物的ER結(jié)合親和力
在以上描述的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中得到的結(jié)果證實(shí)，測試的化合物結(jié)合雌激素受體的兩種亞型。對ERβ的IC50s一般比較低，指明這些化合物優(yōu)選為ERβ選擇性配體，但仍被認(rèn)為對ERα有活性?；冢辽俨糠莼谒鼈兊氖荏w親合力選擇性概況，本發(fā)明的化合物會呈現(xiàn)一定范圍內(nèi)的活性。因?yàn)楸景l(fā)明化合物的代謝物結(jié)合ERβ比結(jié)合ERα具有更高的親合力，本發(fā)明化合物將用于治療或者抑制可通過ERβ調(diào)節(jié)的疾病。另外，因?yàn)槊恳皇荏w配體復(fù)合物是獨(dú)一無二的，并且因此它與各種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用是獨(dú)一無二的，依細(xì)胞內(nèi)容物而定本發(fā)明的化合物應(yīng)呈現(xiàn)不同的和不可預(yù)見的活性。例如，在某些細(xì)胞類型中，化合物作為雌激素受體激動劑起作用，而在其它的組織中作為雌激素受體拮抗劑起作用是可能的。具有這樣活性的化合物有時被稱為SERMs(選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑)。然而，不像許多雌激素那樣，許多SERMs不引起子宮濕重增加。這些化合物在子宮是抗雌激素的且可在子宮組織中完全拮抗雌激素受體激動劑的營養(yǎng)作用。然而，這些化合物在骨、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作為雌激素受體激動劑起作用。由于這些化合物的這種組織選擇性性質(zhì)，它們在治療或者抑制其引起或者與雌激素缺乏(在某些組織例如骨或者心血管中)或雌激素過量(在子宮或者乳腺中)有關(guān)的哺乳動物疾病癥狀或綜合征上是有用的。另外，本發(fā)明的化合物的代謝物具有對一種受體類型作為雌激素受體激動劑起作用而對另一種受體類型作為雌激素受體拮抗劑起作用的潛在性。例如，已證實(shí)化合物通過ERβ可拮抗17β-雌二醇的作用而呈現(xiàn)具有ERα的雌激素受體激動劑活性[Sun，等，Endocrinology 140800-804(1999)]。這樣的ERSAA(雌激素受體選擇性激動劑拮抗劑)活性在這一系列化合物中提供藥理學(xué)上獨(dú)特的雌激素活性。
金屬硫蛋白II mRNA的調(diào)節(jié)按照Harris[Endocrinology 142645-652(2001)]描述，通過ERβ而非ERα起作用的雌激素可向上調(diào)節(jié)在Saos-2細(xì)胞中的金屬硫蛋白IImRNA水平。自這一試驗(yàn)方法得到的結(jié)果可與自下面描述的試驗(yàn)方法(ERE報道基因試驗(yàn)方法)得到的結(jié)果相結(jié)合，以產(chǎn)生本發(fā)明化合物的代謝物的選擇性分布(也參見WO 00/37681)。本發(fā)明化合物的代表性代謝物的數(shù)據(jù)顯示在表(2)中。
表2在Saos-2細(xì)胞中的金屬硫蛋白-II mRNA的調(diào)節(jié)
在MCF-7乳腺癌細(xì)胞中采用ERE-報道試驗(yàn)方法評價試驗(yàn)化合物在DMSO中制備試驗(yàn)化合物的儲備液(通常0.1M)，然后用DMSO稀釋10-100倍以制備1或10mM的工作溶液。在4℃(0.1M)或-20℃(＜0.1M)下儲備DMSO儲備液。每周用生長培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素和2mM glutaMax-1的D-MEM/F-12培養(yǎng)基]將MCF-7細(xì)胞傳代兩次。在37℃下，在5％CO2/95％濕潤的空氣孵育箱中，于通氣燒瓶中維持細(xì)胞。處理前一天，在25,000細(xì)胞/孔下，用生長培養(yǎng)基將細(xì)胞鋪展在96孔板上并在37℃下孵育過夜。
在37℃下，于實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活活性炭剝離的胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素、2mM glutaMax-1和1mM丙酮酸鈉的無酚紅的D-MEM/F-12培養(yǎng)基]中，用50μl/孔的腺病毒5-ERE-tk-5-ERE-tk-熒光素酶的1∶10稀釋液把細(xì)胞轉(zhuǎn)染2個小時。然后，用150μl的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基把孔洗滌一次。最后，在37℃下，以8孔/復(fù)制用150μl/孔的媒介物(≤0.1％v/v DMSO)或試驗(yàn)化合物處理所述細(xì)胞24個小時，后者稀釋≥1000倍成為實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。
單獨(dú)試驗(yàn)(雌激素受體激動劑模型)或與0.1nM 17β-雌二醇(EC80；雌激素受體拮抗劑模型)組合，在單次劑量1μM下初步篩選試驗(yàn)化合物。每個96孔板也包含媒介物對照組(0.1％v/v DMSO)和雌激素受體激動劑對照組(或者0.1或者1nM 17β-雌二醇)。在活性化合物以log自10-14增至10-5M，或者在雌激素受體激動劑上和/或者在雌激素受體拮抗劑模型上進(jìn)行劑量-應(yīng)答實(shí)驗(yàn)。自這些劑量-應(yīng)答曲線，分別生成EC50和IC50值。每一治療組中最后一孔含作為雌激素受體拮抗劑對照組的5μl的3×10-5M ICI-182，780(10-6M最后濃度)。
處理后，用25μl/孔的1X細(xì)胞培養(yǎng)基溶胞試劑(PromegaCorporation，Madison，WI)將所述細(xì)胞于搖床上溶胞15分鐘。把細(xì)胞溶胞產(chǎn)物(20μl)轉(zhuǎn)移至96孔發(fā)光計板，采用100μl孔的螢光素酶底物(Promega Corporation)，在MicroLumat LB 96P發(fā)光計(EG & GBerthold；Perkin Elmer，Shelton，CT)中測量螢光素酶活性。注射底物前，對每孔進(jìn)行1秒背景測量。注射底物后，1秒延遲后測量螢光素酶活性10秒。自發(fā)光計把數(shù)據(jù)傳遞至Macintosh個人微機(jī)并采用JMP軟件(SAS研究所，Cary，NC)分析；此程序自每孔螢光素酶測量值減去背景讀數(shù)然后測定每處理組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
通過對數(shù)換算螢光素酶數(shù)據(jù)，并且Huber M-估算法被用于使外圍轉(zhuǎn)換的觀察重量下降。JMP軟件用于分析單向ANOVA(Dunnett’s試驗(yàn))的轉(zhuǎn)化的和稱重的數(shù)據(jù)。在雌激素受體激動劑模型中，化合物處理組與媒介物對照組結(jié)果相比較，或者在雌激素受體拮抗劑模型中與陽性雌激素受體激動劑對照組結(jié)果(0.1nM 17β-雌二醇)相比較。對最初的單次劑量實(shí)驗(yàn)，如果化合物處理結(jié)果顯著區(qū)別于合適的對照組(p＜0.05)，那么結(jié)果以相對于17β-雌二醇對照組的百分率報道[即((化合物-媒介物對照組)/(17β-雌二醇對照組-媒介物對照組))×100]。JMP軟件也用于自非線性劑量-應(yīng)答曲線測定EC50和/或IC50值。
親子宮活性的評價按下面的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，可測量試驗(yàn)化合物的親子宮活性。
方法1自Taconic(Germantown，NY)獲得性未成熟(18天齡)Sprague-Dawley大鼠并提供未加以限制的酪蛋白基質(zhì)飲食(PurinaMills5K96C，Purina Mills，LLC，St.Louis，MO)和水。在第19、20和21天，用17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)、試驗(yàn)化合物或媒介物(50％DMSO/50％Dulbecco’s PBS)皮下給予大鼠。為評價雌激素受體拮抗劑活性，化合物和17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)一同給藥。每組六只大鼠并且最后一次注射后約24小時通過CO2窒息和氣胸對它們施行安樂死。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪且排出任何內(nèi)流體后稱重。組織樣品也可被速凍用于分析基因表達(dá)(例如補(bǔ)體因子3mRNA)。自本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到的結(jié)果顯示在表(3)中。
表3所選擇的化合物在大鼠親子宮試驗(yàn)方法中的評價
方法2自Taconic得到性未成熟(18天齡)129SvE小鼠并提供未加以限制的酪蛋白基質(zhì)飲食(Purina Mills5K96C)和水。在第22、23、24和25天，用化合物或者媒介物(玉米油)皮下給予小鼠。每組6只小鼠并且最后一次注射后約6小時通過CO2窒息和氣胸對它們施行安樂死。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪且排出任何內(nèi)流體后稱重。自本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到以下結(jié)果(表4)。
表4所選擇的化合物在小鼠親子宮試驗(yàn)方法中的評價的評價
骨質(zhì)疏松和類脂調(diào)節(jié)(心臟保護(hù))的評價術(shù)后1天自Taconic得到切除卵巢或者假手術(shù)的雌性Sprague-Dawley大鼠(重量范圍240-275g)。在一個室中按12/12(白天/晝夜)時間表將它們按3或4只大鼠/籠飼養(yǎng)并且任意提供食物(Purina Mills5K96C)和水。到達(dá)后1天對所有研究組開始治療并且大鼠每周給藥7天，連續(xù)6周。一組不接受任何治療的年齡相當(dāng)?shù)募偈中g(shù)大鼠用作每項研究的完整的雌激素飽滿對照組。
在50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1xDulbecco’s磷酸鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)的媒介物中，在定義的以致于治療體積為0.1mL/100g體重的濃度下，制備所有的試驗(yàn)化合物。把17β-雌二醇溶于玉米油(20μg/mL)中并以0.1mL/大鼠皮下給藥。按照組平均體重測量值，所有劑量在三周間隔內(nèi)調(diào)整，并且皮下給藥。
開始治療5周后和研究終止1周前，評價每只大鼠的骨礦物質(zhì)密度(BMD)。在麻醉的大鼠上采用XCT-960M外周定量計算機(jī)處理的X線斷層攝影術(shù)(pQCT，Stratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany)評價近端脛骨的總的和小梁的密度。如下進(jìn)行測量掃描前15分鐘，腹膜內(nèi)注射45mg/kg氯胺酮、8.5mg/kg賽拉嗪和1.5mg/kg乙酰丙嗪麻醉每只大鼠。
把右后爪通過25mm直徑的聚碳酸酯管并粘貼于丙烯酸框，使踝關(guān)節(jié)在90°角和膝關(guān)節(jié)在180°角。聚碳酸酯管被附著于活動的平臺以保持它垂直于pQCT的孔徑。調(diào)整平臺以致于股骨的遠(yuǎn)端和脛骨的近端處于掃描區(qū)。運(yùn)行二維搜索圖象10mm長和0.2mm的線性分辨率。在監(jiān)測器上展示搜索圖象后，脛骨的近端被固定。自這一點(diǎn)3.4mm遠(yuǎn)開始pQCT掃描。pQCT掃描為1mm厚，具有0.140mm的軸(三維像素)徑，并由145個貫穿切片的投射物組成。
在pQCT掃描完成后，在監(jiān)測器上展示圖象。包括脛骨但不包括腓骨的研究區(qū)域被概述。采用迭代算法，數(shù)學(xué)上去除軟組織。以mg/cm3報道剩余的骨密度(總密度)。以同心螺旋數(shù)學(xué)上揭去骨外部55％。以mg/cm3報道其余的骨密度(小梁密度)。
BMD評價一周后，通過CO2窒息和氣胸使大鼠安樂死并采集血液用于膽固醇測定。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪和排出任何內(nèi)流體后稱重。采用Cholesterol/HP試劑盒，用Boehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析儀(Roche，Alameda，CA)測定總膽固醇。采用Dunnet’s試驗(yàn)的單向方差分析，比較統(tǒng)計學(xué)意義。
用本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到下面的結(jié)果(表5)。
表5給予選擇的本發(fā)明化合物的代謝物后切除卵巢的大鼠體內(nèi)骨礦物質(zhì)密度的評價
抗氧化活性的評價自屠宰場得到豬主動脈，沖洗，遷移到冷卻的PBS中，并收獲主動脈內(nèi)皮細(xì)胞。為收獲細(xì)胞，將主動脈的肋間血管打結(jié)且把主動脈的一端夾緊。將新鮮、滅菌過濾的0.2％膠原酶(Sigma Type I)放入血管中，然后夾緊血管的另一端以形成密閉的系統(tǒng)。把主動脈于37℃下孵育15-20分鐘，之后收集膠原酶溶液并于2000xg下離心5分鐘。將每份沉淀懸浮于7mL由用活性炭剝離的FBS(5％)、NuSerum(5％)、L-谷氨酰胺(4mM)、青霉素-鏈霉素(1000U/ml，100μg/ml)和慶大霉素(75μg/ml)補(bǔ)充的無酚紅DMEM/Ham’s F12培養(yǎng)基組成的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中，在100mm培養(yǎng)皿上接種并在5％CO2中于37℃孵育。20分鐘后，用PBS沖洗細(xì)胞并加入新鮮的培養(yǎng)基，24小時再次重復(fù)這一操作。約1周后，使細(xì)胞匯合。內(nèi)皮細(xì)胞一周定期喂飼兩次，當(dāng)匯合時，胰蛋白酶消化并以1∶7的比率接種。在待評價化合物(5μM)存在下，將細(xì)胞介導(dǎo)的12.5μg/mL LDL氧化于37℃下進(jìn)行4個小時。按照通過分析游離醛的TBARS(硫代巴比妥酸活性物質(zhì))方法[Yagi，Biochemical Medicine 15212-6(1976)]測量，其結(jié)果表達(dá)成氧化過程的百分比抑制率。
黃體酮受體mRNA調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法這個實(shí)驗(yàn)方法可用于評價本發(fā)明的化合物的雌激素或抗雌激素活性[Shughrue，等，Endocrinology 1385476-5484(1997)]。本發(fā)明化合物的代表性代謝物的數(shù)據(jù)示于表6中。
表6.本發(fā)明化合物的代表性代謝物對調(diào)節(jié)大鼠腦的視前區(qū)中黃體酮mRNA的作用
大鼠熱潮紅實(shí)驗(yàn)方法以標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法可評價試驗(yàn)化合物對熱潮紅的作用，這個方法測量試驗(yàn)化合物減弱尾巴皮膚溫度增加的(反應(yīng))能力，該能力在采用納洛酮使嗎啡成癮的大鼠毒品急劇戒斷時產(chǎn)生[Merchenthaler，等，Maturitas 30307-16(1998)]。通過試驗(yàn)化合物與參照雌激素一同給藥，它也可用于檢測雌激素受體拮抗劑活性。自本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到下列數(shù)據(jù)(表7)。
表7所選擇的本發(fā)明化合物的代謝物在大鼠熱潮紅模型中的作用
在離體大鼠主動脈環(huán)上血管舒縮功能的評價Sprague-Dawley大鼠(240-260克)分成4組1.正常未切除卵巢組(完整)2.切除卵巢(ovex)媒介物治療組3.切除卵巢17β-雌二醇治療組(1mg/kg/天)4.用試驗(yàn)化合物治療切除卵巢的動物(各種劑量)治療前約3周切除動物卵巢。每只動物通過胃管接受懸浮在含1％吐溫-80的蒸餾后的去離子水中的17-β雌二醇硫酸酯(1mg/kg/天)或試驗(yàn)化合物。媒介物治療的動物接受與在藥物治療組使用的體積相當(dāng)?shù)拿浇槲铩?br> 通過吸入CO2使動物安樂死并放血。迅速摘除主動脈并放入含有下面組合(mM)的37℃的生理溶液中NaCl(54.7)、KCl(5.0)、NaHCO3(25.0)、MgCl22H2O(2.5)、D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)，通入CO2/O2，95％/5％氣體使最終pH為7.4。自外表面除去血管外膜并把血管切成2-3mm寬的環(huán)。將環(huán)懸浮于一端連接于浴的底部且另一端連接于力量傳感器的10mL組織浴中。將1克靜止的張力負(fù)荷于環(huán)上。使環(huán)平衡1個小時，獲得并分析信號。
平衡后，把環(huán)暴露于逐漸增加濃度的苯腎上腺素(10-8-10-4M)中并且記錄張力。然后用新鮮的緩沖液沖洗浴3次。洗凈后，將200mM硝基-L-精氨酸-甲基酯(L-NAME)加入到組織浴中并平衡30分鐘。然后重復(fù)苯腎上腺素濃度應(yīng)答曲線。
心臟保護(hù)活性的評價自Taconic得到載脂蛋白E-缺乏的C57/B1J(apo E KO)小鼠。嚴(yán)格按照Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)指南下實(shí)施所有動物方法。將4-7周齡的切除卵巢的雌性apo E KO小鼠飼養(yǎng)于鞋盒籠中，并允許隨意進(jìn)食和飲水。動物根據(jù)重量隨機(jī)分組(每組n＝12-15只小鼠)。采用精細(xì)給藥方案(Precise-dosing Protocol)將飲食中的試驗(yàn)化合物或者雌激素(在1mg/kg/天下的17β-雌二醇硫酸酯)給予動物，其中每周測量所消耗的飲食的量，基于動物重量相應(yīng)調(diào)整劑量。所采用的飲食為Western-款式餐(57U5)，它由Purina制備并包含0.50％膽固醇、20％豬油和25IU/KG維生素E。采用12周一個療程的這一方案給予/喂飼動物。對照組動物喂飼Western-款式餐但不接受化合物。研究期間結(jié)束時，對動物行安樂死并得到血漿樣品。首先用鹽水，然后用中性緩沖的10％福爾馬林溶液在位灌注心臟。
為測定血脂和脂蛋白，采用酶促方法，分別用商業(yè)上可獲得的來自Boehringer Mannheim(Roche，Alameda，CA)和Wako Biochemicals(Osaka，Japan)的試劑盒，測定總膽固醇和甘油三酯，并采用BoehringerMannheim Hitachii 911分析儀分析。采用FPLC體積分級分離，進(jìn)行血漿脂蛋白的分離和定量。簡言之，過濾50-100mL血清并把它注射到串連的Superose12和Superose6柱中，在恒定流速下，用1mMEDTA鈉和0.15M NaCl洗脫。采用Waters MillenniumTM軟件，對表示極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的每條曲線的面積積分，通過每對應(yīng)的色譜峰的相對百分比面積，經(jīng)總膽固醇值放大使每一脂蛋白餾分定量。
為對主動脈粥樣硬化進(jìn)行定量分析，小心分離主動脈且在操作前于福爾馬林固定劑中放置48-72小時。采用Oil Red O染色劑，鑒定動脈粥樣硬化的損傷。把血管短暫去染色，然后采用配備與作為圖像捕集軟件的IMAQ Configuration Utility(National Instrument，Austin，TX)相諧的Sony 3CCD視頻攝像系統(tǒng)的Nikon SMU800顯微鏡成像。采用常規(guī)閾值用途軟件包(Coleman Technologies，Surrey，BC，Canada)，正面(en face)沿著主動脈弓定量損傷。采用程序的閾值功能，在血管上，具體地說，在含主動脈弓的區(qū)域，從頭臂干的近邊至左鎖骨下動脈的遠(yuǎn)邊，進(jìn)行自動化損傷評估。按照嚴(yán)格地在定義的內(nèi)腔區(qū)域內(nèi)包含的損傷百分率表達(dá)主動脈粥樣硬化數(shù)據(jù)。
認(rèn)知增強(qiáng)的評價在每連續(xù)5天中，把摘除卵巢的大鼠(n＝50)置于8-臂的放射狀臂迷宮(八臂迷宮，radial arm maze)中馴化10分鐘。馴化和試驗(yàn)前使動物禁水。將100μL等分試樣的水放在每臂的末端用作補(bǔ)償(reinforcement)。通過使動物進(jìn)入一個餌誘的臂，完成在放射狀臂迷宮中的獲勝-轉(zhuǎn)換的習(xí)得任務(wù)。飲水后，動物退出此臂并重新進(jìn)入中心室，在那里它可以進(jìn)入先前訪問過的臂或者進(jìn)入新的臂。當(dāng)動物選擇進(jìn)入新的臂時，記錄正確的應(yīng)答。每只動物每天給出5次試驗(yàn)，連續(xù)3天。最后一次習(xí)得試驗(yàn)后，將動物安排至下面4組中的一組1.陰性對照組注射10％DMSO/芝麻油媒介物，一天一次，連續(xù)6天(1mL/kg，SC)2.陽性對照組注射用17β-雌二醇苯甲酸酯注射2天并且第2次注射后試驗(yàn)4天(以10μg/0.1mL給每只大鼠注射17β-雌二醇苯甲酸酯)3.雌二醇應(yīng)每天注射17β-雌二醇，連續(xù)6天(20μg/kg，SC)4.試驗(yàn)化合物每天注射，連續(xù)6天(劑量變化)。
所有注射應(yīng)在習(xí)得實(shí)驗(yàn)的最后一天開始。第1、3和4組的最后一次注射應(yīng)在工作記憶試驗(yàn)前2個小時發(fā)生。
工作記憶試驗(yàn)為延遲的與樣品非匹配的任務(wù)(DNMS)，采用15、30或者60秒的延遲。這個任務(wù)為習(xí)得實(shí)驗(yàn)的變體，其中大鼠被放置于中心室并且使之進(jìn)入前面的一個臂。一旦大鼠半途旅行經(jīng)過第一個臂，第二個臂就會開啟，并且大鼠再次需要選擇這個臂。當(dāng)它半途旅行經(jīng)過第二個臂時，兩扇門關(guān)閉并且延遲開始。一旦延遲終止，最初的兩扇門和第三個新門同時開啟。當(dāng)動物半途旅行經(jīng)過第三個、新的臂時，記錄正確的應(yīng)答。當(dāng)動物半途旅行經(jīng)過第一個或者第二個臂時，記錄不正確的應(yīng)答。在每三次延遲間隔中的一個，每只動物應(yīng)接受5次試驗(yàn)，每只動物總共15次試驗(yàn)。
對胸膜炎作用的評價依據(jù)Cuzzocrea S.等[Endocrinology 141(4)1455-63(2000)]的方法，可評價減少實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)大鼠胸膜炎的癥狀的能力。
對谷氨酸誘導(dǎo)細(xì)胞毒性(神經(jīng)保護(hù))的保護(hù)作用的評價在體外標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法中，采用谷氨酸攻擊[Zaulyanov，等，Cellular & Molecular Neurobiology 19705-18(1999)；Prokai，等，Journal of Medicinal Chemistry 44110-4(2001)]，可評價本發(fā)明化合物或其代謝物的神經(jīng)保護(hù)活性。
在由組織學(xué)檢查的乳房終蕾試驗(yàn)方法中的評價全導(dǎo)管伸長和乳房導(dǎo)管分支，及在黃體酮影響下的小葉-蜂窩狀終蕾的后續(xù)發(fā)育需要雌激素?；衔锏姆谴呷榛钚钥赏ㄟ^它們促進(jìn)小葉-蜂窩狀終蕾的能力的組織學(xué)評估測定。這樣的由組織學(xué)檢查的測定實(shí)例為本領(lǐng)域所熟悉。參見，例如Harris，H.A.，等，Endocrinology144(10)4241-4249(2003)；Mulac-Jericevic，B.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.100(17)9744-9749(2003)；Bocchinfuso，W.P.，等，Endocrinology141(8)2982-2994(2002)和Lewis，B.C.，等，Toxicological Sciences 6246-53(2001)，上述每篇文獻(xiàn)的全文通過引用結(jié)合到本文中。在本發(fā)明的上下文中，如果化合物的活性＜10％的如由組織學(xué)評估的如17β-雌二醇促進(jìn)小葉-蜂窩狀終蕾的發(fā)育有效性，則它被認(rèn)為“非催乳活性”。
用HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法評價炎性腸道疾病以模擬人炎性腸道疾病的HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法，評價本發(fā)明化合物的代表性代謝物。下面簡短描述所采用的方法和得到的結(jié)果。自Taconic得到雄性HLA-B27大鼠并不限制進(jìn)食(PMILabDiet5001，Purina Mills，Inc.，St.Louis)和水。每天觀察大鼠糞便質(zhì)量并按照以下標(biāo)準(zhǔn)分級腹瀉＝3；軟便＝2；正常糞便＝1。研究結(jié)束時，收集血清并在-70℃下貯存。制備結(jié)腸切片以用于組織學(xué)分析并對另外的部分分析髓過氧化物酶活性。
在研究A中，用下面列出的方案之一皮下給予大鼠(22-26周齡)，每天一次，連續(xù)7天。每組5只大鼠，并且安樂死之前兩個小時給予最后劑量。
·媒介物(50％DMSO/50％Dulbecco’s PBS)·實(shí)施例24(50mg/kg)得自研究A的結(jié)果顯示在表8中。給予媒介物的大鼠在整個研究過程中繼續(xù)腹瀉。用實(shí)施例24治療的大鼠糞便質(zhì)量得到改善。
表8用本發(fā)明代表性化合物皮下治療5天的HLA大鼠的糞便特性的評價
*報道的值為組的平均分?jǐn)?shù)。
3＝腹瀉；2＝軟便；1＝正常糞便在研究B中，如下口服給予大鼠(8-10周齡)，連續(xù)26天·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)·實(shí)施例25(第1-14天10mg/kg；然后在第15天增加至20mg/kg)·實(shí)施例34(10mg/kg)得到下面的結(jié)果(表9)并在用本發(fā)明化合物的代表性代謝物治療所有大鼠中顯示改善的糞便特性。
表9用媒介物或本發(fā)明化合物的代表性代謝物口服治療的HLA大鼠的糞便特性的評價
*報道的值為組的平均分?jǐn)?shù)。
ND未測定3＝腹瀉；2＝軟便；1＝正常糞便在研究C中，每天一次，用下列制劑之一口服給予大鼠(8-10周齡)，連續(xù)46天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩個小時給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)·實(shí)施例21(第1-18天10mg/kg；然后在第19天增加至20mg/kg)·實(shí)施例24(第1-24天10mg/kg；然后在第25天增加至20mg/kg)得到下面的結(jié)果(表10)并顯示給予所有的ERβ選擇性化合物(治療后)改善的糞便特性。
表10用媒介物或本發(fā)明化合物的代表性代謝物口服治療的HLA大鼠的糞便特性
*報道的值為組的平均分?jǐn)?shù)。
3＝腹瀉；2＝軟便；1＝正常糞便組織學(xué)分析。把結(jié)腸組織浸泡在10％中性緩沖的福爾馬林中。將每片結(jié)腸分割為4個樣品用于評價。在Tissue-Tek真空浸潤加工器(Miles，Inc；West Haven，Connecticut)中將福爾馬林固定的組織加工以用于石蠟埋植。將樣品切成5μm，然后用蘇木精和伊紅(H&E)染色用于采用在Boughton-Smith后改進(jìn)的計分法的雙盲組織學(xué)評價。完成評分后，樣品為非盲的，并且以數(shù)據(jù)作表且通過帶有多項平均值比較的(multiple mean comparisons)ANOVA線性模型分析。結(jié)腸組織的切片被用于評價幾種疾病適應(yīng)癥和所給出的相關(guān)分?jǐn)?shù)。如在表(11)(兩種皮下給藥研究的組合，包括研究A)中顯示的，在減少組織損傷的幾種測量中實(shí)施例24是有效的。
表11在HLA-B27大鼠模型中的疾病嚴(yán)重性的組織學(xué)評分采用皮下給藥5天的兩個研究的組合。
a得自第二項研究的數(shù)據(jù)*顯著性＜媒介物或EE+ICI#顯著性＜EE得自研究B的腸組織也經(jīng)組織學(xué)檢測(參見上面)。如下顯示(表12)，兩個化合物顯著減少總疾病分?jǐn)?shù)。
表12用本發(fā)明化合物的代表性代謝物口服治療4周的動物結(jié)腸的疾病嚴(yán)重性的組織學(xué)評分。
*顯著性＜媒介物；**報告值為平均值±SD得自研究C的腸組織也經(jīng)組織學(xué)檢測(參見上面)。如下顯示(表13)，實(shí)施例24顯著減少總疾病分?jǐn)?shù)。盡管在統(tǒng)計上沒有顯著性意義，實(shí)施例21在所有疾病參數(shù)上的分?jǐn)?shù)低于媒介物-治療的大鼠的相應(yīng)的分?jǐn)?shù)。
表13用本發(fā)明化合物的代表性代謝物口服治療7周的動物結(jié)腸的疾病嚴(yán)重性的組織評分。
*顯著性＜媒介物；**報告值為平均值±SD兩種模型關(guān)節(jié)炎的評價佐劑誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的Lewis大鼠試驗(yàn)。按照標(biāo)準(zhǔn)便利操作方法，飼養(yǎng)60只雌性，12周齡，Lewis大鼠。它們?nèi)我饨邮軜?biāo)準(zhǔn)方案的食物和水。通過標(biāo)明項目組和動物編號的籠卡區(qū)別每只動物。通過不易涂抹的墨水記號筆在尾巴上標(biāo)記每只動物編號。研究前至少10-21天，使它們麻醉并且通過標(biāo)準(zhǔn)無菌外科技術(shù)切除卵巢。
弗氏完全佐劑(Sigma Immuno Chemicals，St.Louis，MO)被用于誘發(fā)關(guān)節(jié)炎，每mL含熱殺和干燥的1mg結(jié)核分支桿菌、0.85mL礦物油和0.15mL單油酸甘露糖醇酯(批號084H8800)。
以下為兩個實(shí)驗(yàn)方法的實(shí)施例。
抑制實(shí)驗(yàn)方法30只大鼠于尾根部皮內(nèi)注射0.1mL的弗氏完全佐劑。把動物隨機(jī)分為4組，每組6只大鼠。每天，各組接受媒介物(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1xDulbecco’s磷酸鹽緩沖鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)或試驗(yàn)化合物(皮下給予)。所有大鼠第1天開始治療。本發(fā)明化合物的代表性代謝物的數(shù)據(jù)顯示在表14中。
治療實(shí)驗(yàn)方法30只大鼠于尾根部皮內(nèi)注射0.1mL的弗氏完全佐劑。把動物隨機(jī)分為4組，每組包括6只大鼠。每天，各組接受媒介物(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1xDulbecco’s磷酸緩沖鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)或者試驗(yàn)化合物(皮下給予)。所有大鼠在佐劑注射后第8天開始治療。本發(fā)明化合物的代表性代謝物的數(shù)據(jù)顯示在下文的表15、16和17中。
采用Abacus Concepts Super ANOVA(Abacus Concepts公司，Berkeley，CA)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。研究的所有參數(shù)經(jīng)歷組間Duncan’s新的多元回歸試驗(yàn)的(多元事后隨機(jī)測試，multiple range post hoctesting)方差分析。數(shù)據(jù)被表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，如果p＜0.05，認(rèn)為差異顯著。
按照下面的疾病指數(shù)后足爪紅斑、后足爪腫脹、關(guān)節(jié)觸痛和運(yùn)動及體姿，每天監(jiān)測關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重性的程度。將0-3的整數(shù)分?jǐn)?shù)用于定量紅斑(0＝正常足爪，1＝稍微紅斑，2＝中度紅斑，3＝嚴(yán)重紅斑)和腫脹(0＝正常足爪，1＝稍微腫脹，2＝中度腫脹，3＝嚴(yán)重腫脹的后足爪)的水平。每天最大分?jǐn)?shù)為12。
在研究結(jié)束時，用CO2使大鼠安樂死，尸體剖檢時切除下肢并在10％緩沖的福爾馬林中固定，并且跗關(guān)節(jié)脫鈣并包埋在石蠟中。用蘇木精和伊紅或者番紅O-堅牢綠染色液將組織切片染色。
將玻片編碼以致于檢驗(yàn)者不知道哪一組為治療組。在滑膜增殖、炎性細(xì)胞浸潤和血管翳形成的基礎(chǔ)上評價得自跗關(guān)節(jié)的滑膜組織[Poole和Coombs，International Archives of Allergy & AppliedImmunology 5497-113(1977)]，闡述如下。
另外，采用下面顯示的Mankin氏組織學(xué)分級系統(tǒng)[Mankin等，Journal of Bone & Joint Surgery-American Volume 53523-37(1971)]評價關(guān)節(jié)軟骨和骨。
表14Lewis大鼠關(guān)節(jié)炎的評價抑制方法
表15Lewis大鼠關(guān)節(jié)炎的評價治療方法
表16Lewis大鼠跗關(guān)節(jié)滑膜炎的組織學(xué)評分(平均值±SD)治療方法
*顯著性＜媒介物；**報告值為平均值±SD表17Lewis大鼠跗關(guān)節(jié)中軟骨變化(Mankin評價)的組織學(xué)評分(平均值±SD)治療方法
*顯著性＜媒介物；**報告值為平均值±SD對HLA-B27大鼠關(guān)節(jié)炎模型的評價。在模擬人關(guān)節(jié)炎的HLA-B27大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法中評價本發(fā)明化合物的代表性代謝物。下面簡短描述所采用的方法和得到的結(jié)果。雄性HLA-B27大鼠得自Taconic并提供未加以禁止食物(PMILabDiet 5001)和水。如以上對佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的Lewis大鼠模型描述，評價關(guān)節(jié)分?jǐn)?shù)和組織學(xué)。
研究1每天用下列制劑之一口服給予大鼠(8-10周齡)一次，連續(xù)46天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩個小時給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)·實(shí)施例21(第1-18天10mg/kg；然后在第19天增加至20mg/kg)·實(shí)施例24(第1-24天10mg/kg；然后在第25天增加至20mg/kg)對本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到以下結(jié)果(表18和19)。
表18得自研究1的關(guān)節(jié)炎的評價
表19得自研究1的關(guān)節(jié)組織學(xué)評價。
*顯著性＜媒介物，p＜0.07**顯著性＜媒介物，p＜0.05研究2每天用下列制劑之一口服給予大鼠(8-10周齡)一次，連續(xù)26天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩個小時給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)·實(shí)施例25(第1-14天10mg/kg；然后在第15天增加至20mg/kg)·實(shí)施例34(10mg/kg)對本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到以下結(jié)果(表20)。
表20得自研究2的HLA大鼠關(guān)節(jié)炎的評價
體內(nèi)致癌模型的評價以文獻(xiàn)中易于得到的包括下面的兩個方法的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，可評價本發(fā)明化合物及其代謝物治療和抑制各種惡性腫瘤或者過度增殖疾病的能力。
乳腺癌。自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)得到切除卵巢的無胸腺nu/nu(裸)小鼠。于腫瘤細(xì)胞注射前一天，用含0.36-1.7mg 17β-雌二醇(60或90天釋放，Innovative Research of America，Sarasota，F(xiàn)L)的時辰釋放小丸或安慰劑植入動物。采用10-刻度精確轉(zhuǎn)子，把小丸經(jīng)皮下導(dǎo)入內(nèi)雕紋區(qū)。接著，用1×107MCF-7細(xì)胞或1×107BG-1細(xì)胞皮下注射到小鼠乳腺組織中。將細(xì)胞與等體積的基底膠(matrigel)混合，后者為一種為增強(qiáng)腫瘤建立的基底膜基質(zhì)制備液。在腫瘤細(xì)胞植入(抑制方案)后一天或者腫瘤已達(dá)到某一體積(治療方案)后，通過給藥可評價試驗(yàn)化合物。每天經(jīng)腹膜內(nèi)或者口服給予在鹽水中的1％吐溫-80媒介物中的化合物。每3或7天評價腫瘤體積。
結(jié)腸癌。以Smirnoff P.，等[Oncology Research 11255-64(1999)]的實(shí)驗(yàn)方法可評價治療或抑制結(jié)腸癌的能力。
以兩種體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法評價神經(jīng)保護(hù)作用蒙古沙土鼠的瞬時總體缺血。采用下面的實(shí)驗(yàn)方法，可測量試驗(yàn)化合物預(yù)防或治療應(yīng)答于氧剝奪/再灌注腦損傷的作用。
雌性蒙古沙土鼠(60-80g；Charles River Laboratories，Kingston，NY)在Wyeth-Ayerst動物護(hù)理中心(獲Association for Assessment和Acreditation of Laboratory Animal Care(AAALAC)認(rèn)證)飼養(yǎng)，伴隨12小時光照，12小時黑暗光周期并且自由進(jìn)食自來水和低雌激素酪蛋白膳食(Purina；Richmond，IN)。順應(yīng)(3-5天)后，用異氟烷(2-3％與O2的混合物)麻醉沙土鼠，摘除卵巢(第0天)。第二天(第1天)早晨開始，每天用媒介物(10％ETOH/玉米油)、17β-雌二醇(1mg/kg，sc)或?qū)嶒?yàn)化合物皮下治療沙土鼠。第6天，用異氟烷麻醉沙土鼠(n＝4-5/組)，通過中線頸切口使常見頸動脈主動脈肉眼可視并用非創(chuàng)傷顯微動脈瘤夾鉗同時閉合兩條主動脈5分鐘。閉合后，移去夾鉗以使腦再灌注并且用創(chuàng)傷夾鉗封閉頸切口。在沙土鼠局部缺血手術(shù)之前，所有動物禁食過夜，這個步驟利于始終如一的局部缺血損傷。第12天，沙土鼠暴露于致死劑量的CO2中，在干冰上冷凍腦且在-80℃下貯存。用于這些研究的動物方法被綜述并且得到于Wyeth-Ayerst Research的Radnor/Collegeville Animal Care and Use Committee(RACUC/CACUC)批準(zhǔn)。
通過神經(jīng)顆粒素(neurogranin)mRNA的在位雜交分析，評價神經(jīng)元保護(hù)的程度。簡言之，在凝膠包衣的載玻片上收集20μm的冠狀恒冷箱切片，干燥并在-80℃下貯存。加工時，把干燥的載玻片箱溫?zé)嶂潦覝兀瑢⑤d玻片后固定在4％低聚甲醛中，用乙酸酐處理，然后用氯仿和乙醇脫脂和脫水。之后用200μl(6×106DPM/載玻片)在50％甲酰胺雜交混合液中的用于神經(jīng)顆粒素(35S-UTP標(biāo)記的NG-241，基質(zhì)99-340)的反義或者意義(對照組)核糖探針把所加工的切片-計數(shù)載玻片雜交，并且在55℃下于濕潤的載玻片室中孵育過夜而不必蓋玻片。第二天上午，收集支架上的載玻片，把它們浸泡在2×SSC(0.3M NaCl，0.03M枸櫞酸鈉，pH 7.0)/10mM DTT中，用RNase A(20μg/ml)處理并在67℃下于0.1×SSC中沖洗(2×30分鐘)以除去非特異性標(biāo)記物。脫水后，將載玻片暴露于BioMax(BMR-1，Kodak，Rochester，NY)X-射線膠片中過夜。
神經(jīng)顆粒素雜交信號水平被用于定量評價損傷后在CA1區(qū)神經(jīng)元缺失的程度并評價17β-雌二醇和實(shí)驗(yàn)化合物的效力。選擇神經(jīng)顆粒素mRNA用于這些研究，因?yàn)樗诎–A1的海馬神經(jīng)元中高度表達(dá)，但是在存在于這個腦區(qū)的神經(jīng)膠質(zhì)和其它細(xì)胞類型中缺乏。因此，存在的神經(jīng)顆粒素mRNA的量的測量值表示存活的神經(jīng)元。神經(jīng)顆粒素雜交信號的相對光密度測量值得自帶有基于圖像分析系統(tǒng)(C-Imaging Inc.，Pittsburgh，PA)的計算機(jī)的膠片放射自顯影圖。使得自每只動物的6個切片(相隔40μm)的結(jié)果求平均值并做統(tǒng)計學(xué)評價。各種數(shù)值以平均值±SEM報告。單向方差分析被用于檢驗(yàn)神經(jīng)顆粒素mRNA的水平差異并且在結(jié)果部分中的非-差異的所有陳述意味著p＞0.05。
自本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到下面的結(jié)果(表21)。
表21本發(fā)明化合物的代表性代謝物保護(hù)沙土鼠海馬神經(jīng)元的作用
小鼠中腦主動脈閉合。按照由Dubal[參見Dubal等，Proceedings ofthe National Academy of Sciences of the United States of America 981952-1957(2001)和Dubal等，Journal of Neuroscience 196385-6393(1999)]描述的實(shí)驗(yàn)方法，可評價神經(jīng)保護(hù)作用。
排卵抑制標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)方法用于測定試驗(yàn)化合物能否抑制或改變排卵的時間。它也可用于測定排卵的卵母細(xì)胞的數(shù)量[Lundeen，等，J SteroidBiochem Mol Biol 78137-143(2001)]。自本發(fā)明化合物的代表性代謝物得到以下數(shù)據(jù)(表22)。
表22本發(fā)明化合物的代表性代謝物抑制排卵的作用
子宮內(nèi)膜異位標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的評價自出版的方法[Bruner-Tran.等，Journal of Clinical Investigation 992851-2857(1997)]對這個方法稍加改進(jìn)。簡言之，體外用10nM 17β-雌二醇處理正常人子宮內(nèi)膜組織(周期天數(shù)～12)過夜，然后植入切除卵巢的無胸腺裸小鼠。為這些研究的目的，如在本文中描述的，小鼠不接受雌激素/安慰劑植入劑。使損傷建立至少10天，然后開始每天口服給藥并持續(xù)至少15天。值得一提的是所有小鼠在給藥開始時具有肉眼可見的損傷。在尸體剖檢下，測定帶有損傷的小鼠的數(shù)目以及每只小鼠的損傷。
在10mg/kg劑量下，以該方法對實(shí)施例24的化合物評價三次。在每個實(shí)驗(yàn)方法中，在尸體剖檢下，給予實(shí)施例24化合物的小鼠比那些給予媒介物的小鼠具有更少的損傷。例如，在研究1中，媒介物組中的4只小鼠中每一只具有至少1處損傷并且在這一組中總共有10處損傷。相反，實(shí)施例24治療的6只小鼠中僅有2只具有任何損傷并且每只動物僅發(fā)現(xiàn)1處損傷。因此，由于所有的小鼠在治療開始時具有損傷，實(shí)施例24的化合物在6只小鼠中有4只引起損傷。
基于在標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法中得到的結(jié)果，本發(fā)明的前藥化合物為期望得到作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑的化合物，所述化合物用于治療或抑制至少部分由雌激素缺乏或者過量介導(dǎo)的，或者可通過采用雌激素藥物治療或抑制的癥狀、紊亂或者疾病狀態(tài)。這樣的化合物特別用于治療其中所產(chǎn)生的內(nèi)源性雌激素水平被大大減少的絕經(jīng)前后(peri-menopausal)、絕經(jīng)或經(jīng)絕后的患者。經(jīng)絕一般定義為最后的自然月經(jīng)期且特征為卵巢功能的停止，導(dǎo)致血流中循環(huán)中的雌激素顯著減少。當(dāng)在此所使用時，經(jīng)絕也可包括由手術(shù)的、化學(xué)的，或者導(dǎo)致卵巢功能過早降低或停止的疾病癥狀引起的雌激素產(chǎn)生減少的情況。
本發(fā)明的前藥化合物也用于抑制或治療雌激素缺乏的其它結(jié)果，包括熱潮紅、陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢癥、交媾困難、排尿困難、尿頻、尿失禁、尿道感染。其它的生殖道用途包括治療或抑制功能性子宮出血?；衔镆灿糜谥委熁蛞种谱訉m內(nèi)膜異位癥。
本發(fā)明的前藥化合物在腦中也有活性，且因此用于抑制或治療阿爾茨海默氏病、認(rèn)知衰退、性欲減退、老年性癡呆、神經(jīng)退化性疾病、抑郁癥、焦慮癥、失眠癥、精神分裂癥和不育癥。本發(fā)明化合物還用于治療或抑制良性或惡性異常組織生長，包括腎小球硬化癥、前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、硬皮病、纖維瘤病、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳房疾病、子宮內(nèi)膜異位、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、CNS癌癥，諸如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或星母細(xì)胞瘤(astioblastomia)。
本發(fā)明的前藥化合物具有心臟保護(hù)作用且為抗氧化劑，并用于降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)和LDL水平；抑制或者治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄和血管痙攣，并且抑制由于導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細(xì)胞過程引起的血管壁損傷。
本發(fā)明的前藥化合物也用于治療與炎癥或者自動免疫疾病有關(guān)的疾病，包括炎性腸道疾病(克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎)、關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、椎關(guān)節(jié)病、骨關(guān)節(jié)炎)、胸膜炎、局部缺血/再灌注損傷(例如卒中、移植性排斥、心肌缺血等)、哮喘、巨細(xì)胞性動脈炎、前列腺炎、葡萄膜炎、牛皮癬、多發(fā)硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和膿毒癥。
本發(fā)明的前藥化合物也用于治療或抑制眼疾病，包括白內(nèi)障、葡萄膜炎和黃斑變性，并用于治療皮膚疾病例如衰老、脫發(fā)和痤瘡。
本發(fā)明的前藥化合物也用于治療或抑制代謝疾病諸如II型糖尿病、脂質(zhì)代謝(異常)、食欲(異常)(例如神經(jīng)性厭食癥和貪食癥)。
本發(fā)明的前藥化合物也用于治療或抑制出血性疾病諸如遺傳出血性毛細(xì)管擴(kuò)張、功能性子宮出血和格斗出血性休克。
本發(fā)明的前藥化合物用于治療其中閉經(jīng)是有利的疾病狀態(tài)，例如白血病、子宮內(nèi)膜切除、慢性腎病或肝病或者血凝固疾病或紊亂。
本發(fā)明的前藥化合物可用作避孕藥，特別是當(dāng)與孕激素合并使用時。
當(dāng)給藥用于治療或抑制具體的疾病狀態(tài)或者紊亂時，應(yīng)理解有效劑量可依使用的具體化合物、給藥模式、所治療的疾病和疾病的嚴(yán)重性以及與所治療的個體相關(guān)的多種身體因素而定?？稍诩s0.1mg/天-約1000mg/天的口服劑量下有效給予本發(fā)明的化合物。優(yōu)選以單劑量或以兩次或更多次分開的計量給予約10mg/天-約600mg/天，更優(yōu)選給予約50mg/天-約600mg/天。預(yù)期設(shè)想的每天劑量隨著給藥途徑而變化。
這樣的劑量可以任何用于使本文的活性化合物向著接受者的血流的方式給藥，包括口服、經(jīng)由植入、非腸道(包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)和皮下注射)、直腸、鼻內(nèi)、局部、眼(借助眼滴劑)、陰道和經(jīng)皮。
含有本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可包含任何常規(guī)使用的口服形式，包括片劑、膠囊、頰下含片制劑、錠劑、糖錠劑和口服液體、懸浮液或溶液劑。膠囊可含有活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑的混合物，所述填充劑和/或稀釋劑諸如藥學(xué)上可接受的淀粉(例如玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、蔗糖、人工甜味劑、粉末纖維素，諸如結(jié)晶和微晶纖維素、矯味劑、明膠、樹膠等。通過常規(guī)壓制、濕法制粒或干法制粒方法并使用藥學(xué)上可接受的稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、表面修飾劑(包括表面活性劑)、助懸劑或者穩(wěn)定劑，包括(但不限于)硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、枸櫞酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、滑石粉、干燥淀粉和粉末化蔗糖可制備有用的片劑。優(yōu)選的表面修飾劑包括非離子和陰離子表面修飾劑。表面修飾劑的代表性實(shí)例包括(但不限于)羥聚體188、苯扎氯銨、硬脂酸鈣、十六醇十八醇混合物、聚西托醇乳化蠟、山梨糖醇酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、硅酸鋁鎂和三乙醇胺。在此的口服制劑可使用標(biāo)準(zhǔn)延遲或定時釋放制劑，以改變活性化合物的吸收?？诜苿┮部砂ńo予在水或果汁中的活性組分，如果需要，包含合適的穩(wěn)定劑或者乳化劑。
在某些情況中，將所述化合物以氣溶膠的形式直接給予氣道是合乎需要的。
本發(fā)明的前藥化合物也可以非腸道或腹膜內(nèi)給藥。也可以在水中與適宜的表面活性劑諸如羥基丙基纖維素混合制備作為游離堿或藥理學(xué)上可接受的鹽的這些活性化合物的溶液劑或懸浮劑。也可以用甘油、液體聚乙二醇和它們在油中的混合物制備分散劑。在常規(guī)的貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以抑制微生物的生長。
適合于注射使用的藥用形式包括滅菌水溶液劑或分散劑并用于臨時制備滅菌可注射水溶液劑或分散劑的滅菌粉末。在所有情況中，所述制劑必須是滅菌的和必須是流體以達(dá)到易于注射的程度。在制備和貯存的條件下它必須是穩(wěn)定的并且必須在抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用下保存。載體可以為溶劑或分散介質(zhì)，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、它們合適的混合物和植物油。
為了本公開的目的，經(jīng)皮給藥被理解為包括所有的穿過身體表面和身體通道的內(nèi)襯包括上皮和粘膜組織的給藥。使用本化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以洗劑、霜劑、泡沫劑、貼劑、懸浮劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)，可實(shí)施這樣的給藥。
通過使用含有所述活性化合物和對所述活性化合物惰性的載體的經(jīng)皮貼劑可實(shí)現(xiàn)經(jīng)皮給藥，所述該載體對皮膚無毒，并使得藥物經(jīng)皮膚傳遞全身吸收進(jìn)入血流。所述載體可采取任何數(shù)目的形式，例如霜劑和軟膏劑、糊劑、凝膠劑和封堵器(occlusive devices)。霜劑和軟膏劑可為水包油或油包水型的粘稠液體或半固體乳劑。由分散于含有活性組分的石油或親水石油中的可吸收粉末組成的糊劑也可以是合適的。多種封堵器可用于把活性組分釋放進(jìn)入血流，例如包含貯庫的半透膜，后者含有含或不含載體的活性成分，或者含有活性成分的基質(zhì)。在文獻(xiàn)中已知其它的封堵器。
從傳統(tǒng)材料，包括可可脂，伴隨加入或不加入蠟以改變栓劑的熔點(diǎn)，和甘油，可制備栓劑。也可使用水溶性栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇。
實(shí)施例可衍生形成本發(fā)明化合物的化合物，其代表性實(shí)施例的制備描述如下。
實(shí)施例12-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚步驟a)n-(2，5-二甲氧基苯基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺將2，5-二甲氧基苯甲酸(5.0g，27.5mmol)和亞硫酰氯(15mL)的混合物回流1個小時。然后真空除去揮發(fā)物。把殘余物溶于THF(20mL)中并加入到2，5-二甲氧基苯胺(4.6g，30.2mmol)、三乙胺(5mL，35.9mmol)和THF(40mL)的冷的(0℃)溶液中。使反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，傾到入水中，用HCl(2N)酸化并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 2/1)純化，得到白色固體(8.1g，93％收率，m.p.121-123℃)；MS m/e 318(M+H)+。
對C17H19NO5分析理論值C，64.34；H，6.03；N，4.41實(shí)測值C，64.29；H，5.95；N，4.44步驟b)2-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚。
于200℃下，將N-(2，5-二甲氧基苯基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺(1.0g，3.1mmol)和吡啶鹽酸鹽(2.0g，17.3mmol)的混合物攪拌1個小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入HCl(10mL，2N)。然后用EtOAc提取反應(yīng)混合物且有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 2/1)純化，得到白色固體(0.8g，76％收率，m.p.309-311℃)；MS m/e 242(M-H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，63.98；H，3.71；N，5.62實(shí)施例23-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2，3-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物。得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.239-241℃；MS m/e 244(M+H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，63.86；H，3.90；N，5.74實(shí)施例32-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.262-268℃；MS m/e 244(M-H)+。
對C13H8FNO3分析理論值C，63.68；H，3.29；N，5.71實(shí)測值C，64.01；H，3.25；N，5.63實(shí)施例42-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和3-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 260(M-H)+。
對C13H8ClNO3分析理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35實(shí)測值C，59.59；H，3.02；N，5.25實(shí)施例52-(2-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.253-255℃；MS m/e 262(M+H)+。
對C13H8ClNO3分析理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35實(shí)測值C，59.79；H，2.87；N，5.36實(shí)施例62-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.269-271℃；MS m/e 244(M-H)+。
對C17H17NO3分析理論值C，63.68；H，3.29；N，5.71實(shí)測值C，63.53；H，3.71；N，5.38實(shí)施例72-(3-叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-叔丁基-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.220-222℃；MS m/e 284(M+H)+。
對C17H17NO3分析理論值C，72.07；H，6.05；N，4.94實(shí)測值C，72.03；H，6.43；N，4.72實(shí)施例82-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，5-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.278-280℃；MS m/e 244(M+H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，64.09；H，3.14；N，5.65實(shí)施例93-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，3-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.256-258℃；MS m/e 244(M+H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，63.91；H，3.98；N，5.72實(shí)施例104-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.282-284℃；MS m/e 242(M-H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測值C，63.57；H，3.68；N，5.63實(shí)施例112-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 262(M+H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，63.57；H，3.68；N，5.63實(shí)施例122-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到淺黃色固體的產(chǎn)物，m.p.264-267℃；MS m/e 228(M+H)+。
對C13H9NO3分析理論值C，68.72；H，3.99；N，6.16實(shí)測值C，67.87；H，4.05；N，6.23實(shí)施例134-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.大于300℃；MS m/e 242(M-H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，63.92；H，3.74；N，5.56
實(shí)施例142-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.大于300 ℃；MS m/e 226(M-H)+。
對C13H9NO3分析理論值C，68.72；H，3.99；N，6.16實(shí)測值C，68.09；H，4.01；N，6.05實(shí)施例154-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.293-296℃；MS m/e 242(M-H)+。
對C13H9NO4分析理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76實(shí)測值C，64.43；H，3.77；N，5.74實(shí)施例166-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟A)N-(4-氯-2，5-二甲氧基苯基)-3-氟-4-甲氧基苯甲酰胺。
以與在實(shí)施例1的步驟a中描述的基本相同的方法，從4-氯-2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.197-199℃；MS m/e 340(M+H)+。
對C16H15ClFNO4分析理論值C，56.56；H，4.45；N，4.12實(shí)測值C，56.33；H，4.35；N，4.05步驟b)N-(4-氯-2，5-二羥基苯基)-3-氟-4-羥基苯甲酰胺。
將三氟化硼二甲硫復(fù)合物(70mL)加入到N-(4-氯-2，5-二甲氧基苯基)-3-氟-4-甲氧基苯甲酰胺(1.75g，5.15mmol)和CH2Cl2(35mL)的混合物。攪拌20個小時后，在氮?dú)饬飨?，在防護(hù)罩中蒸發(fā)溶劑和過量的試劑。用冰和HCl(1N)的混合物吸收殘余物并用EtOAc提取。有機(jī)層以HCl(1N)洗滌和經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/己烷/EtOAc 5/3/2和AcOH 10mL每1升的洗脫溶劑)純化，得到為白色固體的產(chǎn)物(1.4g，91％收率，m.p.254-256℃)；MS m/e 296(M-H)+。
對C13H9ClFNO4分析理論值C，52.46；H，3.05；N，4.7 1實(shí)測值C，51.98；H，2.98；N，4.56步驟c)6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例1的步驟b中描述的基本相同的方法，從N-(4-氯-2，5-二羥基苯基)-3-氟-4-羥基苯甲酰胺和吡啶鹽酸鹽并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.258-260℃；MS m/e 278(M-H)+。
對C13H17ClFNO3分析理論值C，55.83；H，2.52；N，5.01實(shí)測值C，55.35；H，2.59；N，4.91實(shí)施例176-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從4-溴-2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.224-226℃；MS m/e 322(M-H)+。
對C13H17BrFNO3分析理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32實(shí)測值C，48.69；H，2.36；N，4.59實(shí)施例18
6-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從4-氯-2，5-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.260-262 ℃；MS m/e 260(M-H)+。
對C13H8ClNO3分析理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35實(shí)測值C，59.09；H，3.06；N，5.11實(shí)施例195-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從5-氯-2，4-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 262(M+H)+。
對C13H8ClNO3分析理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35實(shí)測值C，59.40；H，2.97；N，5.22實(shí)施例207-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2-溴-4-甲氧基-6-硝基苯酚。
將乙酸(20mL)中的溴(16.0g，100mmol)加入到4-甲氧基-2-硝基苯酚(16.9g，100mmol)、乙酸鈉(16.4g，200mmol)和乙酸(100mL)的混合物中。于室溫下把反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后于70℃下攪拌2個小時，傾到入含濃縮硫酸(10mL)的水(1.51)中。過濾沉淀的固體和從氯仿/己烷中結(jié)晶，得到棕色的固體，m.p.116-118℃；MS m/e246(M-H)+。
對C7H6BrNO4分析理論值C，33.90；H，2.44；N，5.65
實(shí)測值C，34.64；H，2.16；N，5.43步驟b)2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚。
將阮內(nèi)鎳(2.5g)加入到2-溴-4-甲氧基-6-硝基苯酚(8.8g，35.5mmol)的EtOAc(100mL)溶液中。在帕爾裝置中，于25磅/平方英寸的氫氣壓下，把混合物振搖2.5個小時。通過硅藻土(Celite)過濾反應(yīng)混合物并真空濃縮，得到灰色固體(7.4g，96％收率；95-97℃)；MSm/e 218(M+H)+。
對C7H8BrNO2分析理論值C，38.56；H，3.70；N，6.42實(shí)測值C，38.32；H，3.77；N，6.24步驟c)2-溴-4-甲氧基-6-[(4-甲氧基苯甲酰基)氨基]苯基-4-甲氧基苯甲酸酯將無水吡啶(37.0mL，468.5mmol)逐滴加入到2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚(20.0g，91.7mmol)、4-甲氧基苯甲酰氯(38.9g，229.0mmol)和CH2Cl2(250mL)的冷的(0℃)混合物(機(jī)械攪拌的)中。在加入吡啶期間形成沉淀。把反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后加入乙醚(250mL)。濾出沉淀的固體并用乙醚洗滌。用水吸收固體并攪拌20分鐘。然后濾出固體并干燥，得到灰白色固體(42.5g，95％收率，m.p.73-75℃)；MS m/e 484(M-H)+。
對C23H20BrNO6分析理論值C，56.80；H，4.15；N，2.88實(shí)測值C，56.50；H，3.78；N，2.83步驟d)7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑。
途徑a)伴隨連續(xù)除去水(迪安-斯達(dá)克榻分水器)，將2-溴-4-甲氧基-6-[(4-甲氧基苯甲?；?氨基]苯基4-甲氧基苯甲酸酯(42.0g，86.4mmol)、對-甲苯磺酸單水合物(32.8g，172.8mmol)和無水對-二甲苯(800mL)的懸浮液回流1個小時。在回流溫度下，最初的懸浮液變?yōu)樽厣芤?。把反?yīng)混合物冷卻至室溫并用NaOH(2N)洗滌。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)層。蒸發(fā)并從丙酮/乙醚中結(jié)晶，得到灰白色固體(23.5g，82％收率，m.p.139-141℃)；MS m/e 334(M+H)+。
對C15H12BrNO3分析理論值C，53.91；H，3.62；N，4.19實(shí)測值C，53.83；H，3.37；N，4.01途徑b)使用迪安-斯達(dá)克榻分水器，將2-氨基-6-溴-甲氧基苯酚(100mg，0.46mmol)、4-甲氧基-苯甲酸(77mg，0.5mmol)和硼酸(31mg，0.5mmol)在對-二甲苯(9mL)中的混合物回流24個小時。把反應(yīng)混合物冷卻至室溫并真空濃縮。經(jīng)快速層析法(30％EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到淺桃紅色固體(99mg，65％收率，m.p.136-138℃)；MS m/e 334(M+H)+。
對C15H12BrNO3分析理論值C，53.91；H，3.62；N，4.19實(shí)測值C，53.78；H，3.55；N，4.01.
步驟e)7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇。
途徑a)將三溴化硼(1M，89.9mL，89.8mmol)逐滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(10.0g，29.94mmol)和CH2Cl2(50mL)的冷的(-70℃)懸浮液在中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。在溫?zé)崞陂g，懸浮液變?yōu)樯钌芤?。于室溫下，把反?yīng)混合物攪拌2天，然后緩慢傾到入冷的(0℃)乙醚(1000mL)中。于20分鐘內(nèi)，將甲醇(200mL)緩慢加入到新的反應(yīng)混合物。然后把反應(yīng)混合物傾到入水(1.51)中。用水把有機(jī)層洗滌三次，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并從丙酮/乙醚/己烷中結(jié)晶，得到灰白色固體(8.4g，92％收率，m.p.298-299℃)；MS m/e 306(M+H)+。
對C13H8BrNO3分析
理論值C，51.01；H，2.63；N，4.58實(shí)測值C，50.96；H，2.30；N；4.42途徑b)將三溴化硼(0.25mL，2.7mmol)逐滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(130mg，0.39mmol)和二氯甲烷(1.5mL)的冷的(-78℃)混合物中。使反應(yīng)混合物逐漸恢復(fù)到室溫并攪拌1個小時。將反應(yīng)混合物傾到入冰中并用EtOAc提取。用鹽水洗滌有機(jī)提取液并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)和經(jīng)快速層析法(30％-40％EtOAc/石油醚)，得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物(102mg，86％收率)，m.p.295-298℃；MS m/e 304(M-H)+。
對C13H8BrNO3分析理論值C，51.01；H，2.63；N，4.58實(shí)測值C，51.06；H，2.77；N，4.36.
實(shí)施例217-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2-溴-6-[(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)氨基]-4-甲氧基苯基3-氟-4-甲氧基苯甲酸酯。
將3-氟-4-甲氧基苯甲酸(39.0g，229mmol)、亞硫酰氯(100mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)的混合物回流1個小時。真空除去揮發(fā)物。用苯吸收固體(兩次)和真空除去揮發(fā)物。把殘余物溶于CH2Cl2(100mL)中并加入到2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚(20.0g，91.7mmol)和CH2Cl2(150mL)的冷的(0℃)混合物中(機(jī)械攪拌的)。將無水吡啶(37.0mL，468.5mmol)逐滴加入到新的反應(yīng)混合物。在加入吡啶期間形成沉淀。把反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后加入乙醚(250mL)。濾出沉淀的固體并用乙醚洗滌。用水吸收固體并攪拌20分鐘。然后濾出固體并干燥，得到灰白色固體(46.5g，97％收率，m.p.184-186℃)；MS m/e 520(M-H)+。
對C23H18BrF2NO6分析理論值C，52.89；H，3.47；N，2.68實(shí)測值C，52.79；H，3.23；N，2.63步驟b)7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑。
伴隨連續(xù)除去水(迪安-斯達(dá)克榻分水器)，將2-溴-6-[(3-氟-4-甲氧基苯甲?；?氨基]-4-甲氧基苯基3-氟-4-甲氧基苯甲酸酯(46.0g，88.1mmol)、對-甲苯磺酸單水合物(33.5g，177.2mmol)和無水對-二甲苯(11)的懸浮液回流3個小時。在回流溫度下，最初的懸浮液變?yōu)樽厣芤?。濾出固體并用乙醚洗滌。把固體懸浮于乙醚(200mL)中，攪拌10分鐘，濾出并干燥，得到褐色固體(25.1g，m.p.175-177℃)。將乙醚層濃縮至20mL，得到2.5g另外的產(chǎn)物(90％總收率)。MS m/e 352(M+H)+。
對C15H11BrFNO3分析理論值C，51.16；H，3.15；N，3.98實(shí)測值C，51.10；H，2.92；N，3.89步驟c)7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例20的步驟e中描述的基本相同的方法，制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.265-267℃；MS m/e 332(M-H)+。
對C13H7BrFNO3分析理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32實(shí)測值C，48.19；H，2.29；N，4.19實(shí)施例227-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2-氟-4-甲氧基苯甲酸。
向Ag2O(13.5g，58.4mmol)、NaOH(19.5g，487mmol)和水(200mL)的溫?zé)?55℃)的混合物中加入2-氟-4-甲氧基苯甲醛(15g，97.4mmol)。把反應(yīng)混合物攪拌1個小時，濾出并用熱水(10mL)洗滌沉淀的固體。伴隨劇烈攪拌下，把濾液緩慢加入到冷的(0℃)HCl(5N)中。過濾沉淀的固體，用水洗滌并干燥，得到白色固體(13.6g，82％得率，m.p.194-196℃)；MS m/e 169(M-H)+。
對C8H7FO3分析理論值C，56.48；H，4.15實(shí)測值C，56.12；H，4.12步驟b)7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，自2-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.248-250℃；MSm/e 324(M+H)+。
對C13H7BrFNO3分析理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32實(shí)測值C，47.89；H，1.95；N，4.18實(shí)施例237-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸甲基酯將碘甲烷(10.7mL，172.5mmol)加入到2，3-二氟-4-羥基苯甲酸(10.0g，57.5mmol)、碳酸鋰(12.7g，172.5mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(100mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于40℃下攪拌12h，然后傾到入水并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 5/1)純化，得到為白色固體的產(chǎn)物(10.2g，88％收率，m.p.66-68℃)；MS m/e 203(M+H)+。
對C9H8F2O3分析理論值C，53.47；H，3.99實(shí)測值C，53.15；H，3.83步驟b)2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸。
將氫氧化鈉(2N，50mL)加入到2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸甲酯(10.0g，49.5mmol)、THF(100mL)和MeOH(100mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于室溫下攪拌6個小時，并用HCl(2N)酸化。濾出沉淀的固體，用水洗滌和干燥，得到白色固體(8.9g，96％收率，m.p.194-196℃)；MS m/e 187(M-H)+。
對C8H6F2O3分析理論值C，51.08；H，3.21實(shí)測值C，50.83；H，2.92步驟c)7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，自2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.258-260℃；MS m/e 342(M+H)+。
對C13H6BrF2NO3分析理論值C，45.64；H，1.77；N，4.09實(shí)測值C，45.33；H，1.62；N，4.02實(shí)施例242-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇途徑a)步驟a)7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-1，3-苯并唑。
將叔丁基(氯代)二甲基硅烷(23.2g，154mmol)分批加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(16.6g，51.4mmol)、咪唑(17.5g，257mmol)，N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.0g，8.1mmol)和DMF(300mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物攪拌3個小時，傾到入水并用乙醚提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 50/1)純化，得到白色固體(27.5g，97％收率，m.p.98-99℃)；MS m/e 552(M+H)+。
對C25H35BrFNO3Si2分析理論值C，54.34；H，6.38；N，2.53實(shí)測值C，54.06；H，6.52；N，2.24步驟b)5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑。
二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(0.63g，0.79mmol)加入到7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-1，3-苯并唑(14.7g，26.6mmol)、三丁基(乙烯基)錫(10.5g，33.25mmol)和對-二甲苯(85mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于90℃下攪拌24個小時，冷卻至室溫，用乙醚(100mL)稀釋并用活性炭處理。將反應(yīng)混合物通過MgSO4過濾并濃縮。經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 50/1)純化，得到白色固體(11.8g，89％收率，m.p.93-95℃)；MS m/e 500(M+H)+。
對C27H38FNO3Si2分析理論值C，64.89；H，7.66；N，2.80實(shí)測值C，64.59；H，7.70；N，2.73步驟c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇。
將氫氟酸(48wt.％in水，1mL)加入到5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑(1.5g，3.0mmol)、THF(6mL)和乙腈(3mL)的溶液中。把反應(yīng)混合物于65℃下攪拌8個小時，然后傾到入水中。濾出沉淀的固體并干燥。從丙酮/乙醚結(jié)晶該產(chǎn)物，得到白色固體(0.72g，81％收率，m.p.249-251℃)；MS m/e 272(M+H)+。
對C15H10FNO3分析理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16實(shí)測值C，66.31；H，3.85；N，4.96途徑b)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇。
將二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(0.87g，1.1mmol)加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(7.16g，22.1mmol)、三丁基(乙烯基)錫(10.5g，33.25mmol)和乙二醇二乙醚(65mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于115℃下攪拌48個小時，冷卻至室溫并用活性炭處理。通過MgSO4過濾反應(yīng)混合物并濃縮。經(jīng)酸性硅膠上的快速層析法(己烷/EtOAc/CH2Cl21/1/1)純化，得到白色固體(4.35g，72％收率，m.p.250-252℃)；MS m/e 272(M+H)+。
對C15H10FNO3分析理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16實(shí)測值C，66.03；H，3.68；N，5.09途徑c)步驟a)4-[5-(乙酰氧基)-7-溴-1，3-苯并唑-2-基]-2-氟苯基乙酸酯。
將乙酸酐(1.0mL，9.95mmol)加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(1.24g，3.8mmol)、N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.1g，9.18mmol)和1，4-二氧六環(huán)(13mL)的冷的(0℃)溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?0個小時。向反應(yīng)混合物中加入水(50mL)，用EtOAc提取和經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并從EtOAc/己烷中結(jié)晶，得到灰白色固體(0.87g，56％收率)；MS m/e 408(M+H)+。
對C17H11BrFNO5分析理論值C，50.02；H，2.72；N，3.43實(shí)測值C，49.58；H，2.59；N，3.37步驟b)2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-基乙酸酯。
二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(46mg，0.06mmol)加入到4-[5-(乙酰氧基)-7-溴-1，3-苯并唑-2-基]-2-氟苯基乙酸酯(0.8g，1.98mmol)、三丁基(乙烯基)錫(0.9g，2.8mmol)和對-二甲苯(9mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于130℃下攪拌5個小時，冷卻至室溫，用乙醚(10mL)稀釋并用活性炭處理。通過MgSO4過濾反應(yīng)混合物并濃縮。經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 5/1)純化，得到白色固體(0.4g，56％收率，m.p.154-156℃)；MS m/e 356(M+H)+。
對C19H14FNO5分析理論值C，64.23；H，3.97；N，3.94實(shí)測值C，63.94；H，3.78；N，3.76步驟c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇。
將碳酸鉀(55mg)加入到2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-基乙酸酯(0.14g，0.39mmol)和1，4-二氧六環(huán)(3mL)的溶液中。把反應(yīng)混合物于90℃下攪拌1個小時，傾到入水，用HCl(2N)酸化并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并從EtOAc/己烷中結(jié)晶，得到白色固體(0.06g，46％收率，m.p.250-252℃)；MS m/e272(M+H)+。
對C15H10FNO3分析理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16實(shí)測值C，66.32；H，3.47；N，5.18實(shí)施例252-(2-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例24途徑a)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.274-275℃；MS m/e 272(M+H)+。
對C15H10FNO3分析理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16實(shí)測值C，66.18；H，3.47；N，4.97實(shí)施例262-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例24途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇制備標(biāo)題化合物，得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.276-278℃；MS m/e 290(M+H)+。
對C15H9F2NO3分析理論值C，62.29；H，3.14；N，4.84實(shí)測值C，61.90；H，3.05；N，4.52實(shí)施例272-(4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例24途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.249-250℃；MS m/e 254(M+H)+。
對C15H11NO3分析理論值C，70.99；H，4.39；N，5.52實(shí)測值C，70.75；H，4.34；N，5.46實(shí)施例28和294-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇(EX.28)和4，6-二溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇(EX.29)。
將N-溴代琥珀酰亞胺(0.49g，2.77mmol)加入到2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇(0.75g，2.77mmol)和乙腈(30mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于室溫下攪拌16個小時，傾到入水并用EtOAc提取。有經(jīng)MgSO4干燥機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc/CH2Cl22/1/1)純化，得到為白色固體的Ex.28(0.45g，m.p.226-228℃)；MS m/e 349(M+H)+。
對C15H9BrNO3分析理論值C，51.45；H，2.59；N，4.00實(shí)測值C，51.08；H，2.40；N，3.90；和為白色固體的Ex.29(0.18g，m.p.272-274℃)；MS m/e 428(M+H)+。
對C15H8Br2NO3分析理論值C，41.99；H，1.88；N，3.26實(shí)測值C，42.25；H，1.90；N，3.14實(shí)施例307-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑。
以與在實(shí)施例24途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，MS m/e 282(M+H)+。
對C17H15NO3分析理論值C，72.58；H，5.37；N，4.98實(shí)測值C，72.33；H，5.26；N，4.72步驟b)7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇。
將三溴化硼(0.85mL，8.95mmol)逐滴加入到5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑(0.31g，1.12mmol)和CH2Cl2(4mL)的冷的(-78℃)混合物中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝亍Ｓ谑覝叵聰嚢?8個小時后，把反應(yīng)混合物緩慢傾到入冷的(0℃)乙醚(20mL)中。然后將甲醇(10mL)緩慢加入到反應(yīng)混合物中。新的反應(yīng)混合物以水洗滌(三次)并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 3/1)純化，得到淺黃色固體(0.27g，59％收率，m.p.175-177℃)；MS m/e 412(M+H)+。
對C15H11Br2NO3分析理論值C，43.62；H，2.68；N，3.39實(shí)測值C，43.85；H，2.44；N，3.33實(shí)施例31
7-(1-溴代乙烯基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇將1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.25g，1.65mmol)加入到7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(0.4g，0.96mmol)和乙腈(4mL)的溶液中。把反應(yīng)混合物攪拌24個小時，傾到入冷的(0℃)HCl(1N，10mL)中并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/己烷/異丙醇15/5/1)純化，得到白色固體(185mg，58％收率，m.p.228-230℃)；MS m/e 332(M+H)+。
對C15H10BrNO3分析理論值C，54.24；H，3.03；N，4.22實(shí)測值C，54.27；H，2.94；N，4.20實(shí)施例327-(1-溴代乙烯基)-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例29-30中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物并得到灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.235-237℃；MS m/e 350(M+H)+。
對C15H9BrFNO3分析理論值C，51.45；H，2.59；N，4.00實(shí)測值C，51.63；H，2.38；N，3.98實(shí)施例337-(1-溴代乙烯基)-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例29-30中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2，3-二氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物并得到灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.240-242℃；MS m/e 366(M-H)+。
對C15H8BrF2NO3分析理論值C，48.94；H，2.19；N，3.80實(shí)測值C，49.63；H，2.33；N，3.61
實(shí)施例347-烯丙基-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例24的途徑c、步驟b中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑、烯丙基三丁基錫和二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀，隨后按照實(shí)施例20的步驟e脫甲基化，制備標(biāo)題化合物。得到淺桃紅色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.169-171℃；MS m/e 284(M-H)+。
對C16H12FNO3分析理論值C，67.37；H，4.24；N，4.91實(shí)測值C，67.37；H，4.16；N，4.66實(shí)施例357-乙炔基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇將四重(三苯基膦)鈀(0)(52mg，0.045mmol)加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(0.3g，0.9mmol)、碘化銅(I)(17.1mg，0.09mmol)、乙炔基(三甲基)硅烷(0.2g mg，2mmol)和三乙胺(12mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物于110℃下攪拌4個小時，傾到入氯化銨水溶液中并用EtOAc/THF(1/1)提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 6/1)純化，得到灰白色固體(0.27g，85％收率)。將該產(chǎn)物溶于CH2Cl2(2mL)中，冷卻至-78℃并逐滴加入三溴化硼(0.6mL)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。于室溫下攪?8個小時后，將混合物緩慢傾到入冷的(0℃)乙醚(10mL)中。然后將甲醇(3mL)緩慢加入到反應(yīng)混合物中。新的反應(yīng)混合物以水洗滌(三次)并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 3/1)純化，得到黃色固體(86mg，38％收率，m.p.229-231℃)；MS m/e 252(M+H)+。
對C15H9NO3分析理論值C，71.71；H，3.61；N，5.58
實(shí)測值C，71.39；H，3.49；N，5.32實(shí)施例362-(4-羥基苯基)-7-丙基-1，3-苯并唑-5-醇將四重(三苯基膦)鈀(0)(70mg，0.06mmol)加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(0.4g，1.2mmol)、溴(丙基)鋅(0.5M在THF中，3.6mL，1.8mmol)和THF(4mL)。把反應(yīng)混合物于室溫下攪拌48個小時，傾到入HCl(1N)中并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 6/1)純化，得到灰白色固體(0.14g)。將該產(chǎn)物溶于CH2Cl2(2mL)，冷卻至-78℃并逐滴加入三溴化硼(0.35mL)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。于室溫下攪?8個小時后，將反應(yīng)混合物緩慢傾到入冷的(0℃)乙醚(10mL)中。然后將甲醇(3mL)緩慢加入到反應(yīng)混合物中。新的反應(yīng)混合物以水反應(yīng)混合物以水洗滌(三次)和經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 4/1)純化，得到白色固體(90mg，27％收率，m.p.110-112℃)；MS m/e 270(M+H)+。
對C16H15NO3分析理論值C，71.36；H，5.61；N，5.20實(shí)測值C，71.02；H，5.58；N，4.94實(shí)施例377-丁基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇實(shí)施例387-環(huán)戊基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例35中描述的基本相同的方法，自7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑和溴(環(huán)戊基)鋅制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.220-222℃；MS m/e 296(M+H)+。
對C18H17NO3分析
理論值C，73.20；H，5.80；N，4.74實(shí)測值C，73.05；H，5.74；N，4.59實(shí)施例395-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-羧酸乙酯步驟a)7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)-1，3-苯并唑。
以與在實(shí)施例24的途徑a步驟a中描述的基本相同的方法，自7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑和叔丁基(氯代)二甲基硅烷制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.90-91℃；MS m/e 534(M+H)+。
對C25H36BrNO3Si2分析理論值C，56.16；H，6.79；N，2.62實(shí)測值C，55.66；H，6.86；N，2.68步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-羧酸乙酯。
將正丁基鋰(2.5M，0.3mL，0.75mmol)逐滴加入到7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)-1，3-苯并唑(0.4g，0.75mmol)和THF(4mL)的冷的(0℃)溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃，然后攪拌2個小時。將THF(1ML)中的[(氰基羰基)氧基]乙烷(84mg)加入到反應(yīng)混合物中，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃并攪拌1個小時。用氯化銨水溶液猝滅該反應(yīng)，用EtOAc提取并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/CH2Cl2/異丙醇18/2/1)純化，得到無色油(340mg)。將該產(chǎn)物溶于THF(3.5mL)中并用四丁基氟化銨(1M在THF中，1.4mL)處理。把反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，傾到入HCl(1N)并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/CH2Cl2/異丙醇5/2/1)純化，得到白色固體(119mg，53％收率，m.p.305-307℃)；MS m/e 300(M+H)+。
對C16H13NO5分析
理論值C，64.21；H，4.38；N，4.68實(shí)測值C，64.04；H，4.43；N，4.40實(shí)施例402-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-苯基-1，3-苯并唑使7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(200mg，0.60mmol)和四重(三苯基膦)鈀(0)(63mg，0.03mmol)溶于甲苯(5mL)中并在氮?dú)夥障?，于室溫攪?0分鐘。加入苯硼酸(110mg，0.90mmol)，隨后加入碳酸鈉水溶液(2M，1.5mL)和乙醇(2mL)。使反應(yīng)混合物回流12個小時，用水稀釋并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(20％-40％EtOAc/石油醚)純化，得到為淺桃紅色固體的標(biāo)題化合物，mp 92℃；MS m/e 332(M+H)+。
對C21H17NO3分析理論值C，76.12；H，5.17；N，4.23實(shí)測值C，75.86；H，5.08；N，4.07步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)中的方法，制備標(biāo)題化合物，得到為紫色固體的產(chǎn)物，m.p.255-258℃；MS m/e 302(M-H)+。
對C19H13NO3x0.25H2O分析理論值C，74.14；H，4.42；N，4.55實(shí)測值C，73.81；H，4.40；N，4.35實(shí)施例415-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-腈步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-腈。
在干燥氮?dú)庀?，?-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(200mg，0.60mmol)在無水N，N二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液與氰化銅(I)(80mg，0.90mmol)攪拌并加熱回流4個小時。使反應(yīng)混合物冷卻并傾到入過量的乙二胺四乙酸水溶液中。分離粗品產(chǎn)物，從30％EtOAc/石油醚中得到為褐色針晶的腈(164mg，98％收率)；m.p.180-183℃；MS m/e 281(M+H)+。
對C16H12N2O3x0.2H2O分析理論值C，66.84；H，4.48；N，9.74實(shí)測值C，66.63；H，4.33；N，9.60步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-腈按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法制備標(biāo)題化合物，得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物，mp 297-303℃；MS m/e 253(M+H)+。
對C14H8N2O3x0.5H2O分析理論值C，64.37；H，3.47；N，10.72實(shí)測值C，64.44；H，3.49；N，9.92實(shí)施例425-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲酰胺從實(shí)施例40步驟b的反應(yīng)物分離為作為淺褐色固體的小量產(chǎn)物的標(biāo)題化合物，m.p.325℃；MS m/e 271(M+H)+。
對C14H10N2O4x0.5H2O分析理論值C，60.22；H，3.97；N，10.03實(shí)測值C，59.71；H，3.91；N，9.84實(shí)施例432-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇將7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(100mg，0.33mmol)和溴化銅(I)(56mg，0.39mmol)在無水N，N二甲基甲酰胺(1.5mL)中的混合物與新鮮制備甲醇鈉(15wt％在甲醇中，1ml)攪拌并加熱至120℃4個小時。使反應(yīng)混合物冷卻并用HCl(1N，5ml)稀釋。用乙酸乙酯分離粗品產(chǎn)物，隨后經(jīng)快速層析法(40％-50％EtOAc/石油醚)，得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(50mg，60％收率，mp 225-228℃)；MS m/e 258(M+H)+。
對C14H11NO4x0.75H2O分析理論值C，62.11；H，4.65；N，5.17實(shí)測值C，62.53；H，4.73；N，5.02。
實(shí)施例447-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)7-乙基-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑。
將正丁基鋰(2.5N，0.43mL，1.08mmol)逐滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(300mg，0.90mmol)和THF(2mL)的到冷的(-78℃)混合物中。使反應(yīng)混合物攪拌0.5個小時。將碘乙烷(0.14mL，1.8mmol)逐滴加入到反應(yīng)混合物中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?個小時。用氯化銨水溶液猝滅該反應(yīng)，將其傾到入水并用EtOAc提取。有機(jī)提取液用鹽水洗滌并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(20％EtOAc/石油醚)，得到淺棕色固體樣產(chǎn)物(231mg，91％收率)m.p.85℃；MS m/e 284(M+H)+。
對C17H17NO3x0.2H2O分析理論值C，70.28；H，6.17；N，4.94。
實(shí)測值C，70.12；H，5.74；N，4.82。
步驟b)7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法制備標(biāo)題化合物，得到為淺棕色固體的產(chǎn)物(98％收率)，m.p.110-115℃；MS m/e 256(M+H)+。
實(shí)施例457-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)7-乙基-5-甲氧基-2-(2-乙基-4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑按照實(shí)施例43的步驟a的方法，使用兩個當(dāng)量的正丁基鋰制備標(biāo)題化合物，并且將粗品產(chǎn)物直接用于下一步驟。
步驟b)7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法，從7-乙基-5-甲氧基-2-(2-乙基-4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為灰色固體的產(chǎn)物(87％收率)；MS m/e 284(M+H)+。
實(shí)施例465-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛。
按照實(shí)施例43步驟a的方法，使用N-甲基甲酰苯胺作為親電試劑制備標(biāo)題化合物，得到淺橙色固體(94％，m.p.153-155℃)；MS m/e284(M+H)+。
對C16H13NO4分析理論值C，67.84；H，4.63；N，4.94實(shí)測值C，67.58；H，4.53；N，4.75步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛制備標(biāo)題化合物，得到為深黃色固體的產(chǎn)物(99％收率，m.p.273-275℃)；MS m/e 256(M+H)+。
對C14H9NO4x0.25H2O分析理論值C，64.74；H，3.69；N，5.39實(shí)測值C，64.32；H，3.59；N，5.18。
實(shí)施例477-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑于0℃下，將硼氫化鈉(66.8mg，1.76mmol)加入到5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛(250mg，0.88mmol)的無水MeOH(8mL)溶液中。把反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。將殘余物溶于二乙醚并用水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥并過濾。蒸發(fā)和經(jīng)快速層析法(50％EtOAc/石油醚)，得到產(chǎn)物(210mg，83％)，其直接用于下一反應(yīng)。
步驟b)7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇。
按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為淺棕色固體的產(chǎn)物，m.p.282℃(分解)；MS m/e 258(M+H)+。
對C14H11NO4x0.5H2O分析理論值C，63.16；H，4.54；N，5.26實(shí)測值C，63.33；H，4.36；N，5.04實(shí)施例487-(溴甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑，同時在三溴化硼的存在下延長攪拌，制備標(biāo)題化合物，得到為淺棕色固體的產(chǎn)物，m.p.250-260℃(分解)；MS m/e 321(M+H)+。
對C14H10BrNO3分析理論值C，52.52；H，3.15；N，4.38實(shí)測值C，52.26；H，3.17；N，4.07實(shí)施例49[5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]乙腈向7-(溴甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(122mg，0.40mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中加入18-冠-6-醚(202mg，0.80mmol)和氰化鉀(131mg，2mmol)。使反應(yīng)混合物攪拌2個小時，然后將其傾到入水并用EtOAc提取。有機(jī)提取液用鹽水洗滌并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)和經(jīng)快速層析法(50％-60％EtOAc/石油醚)，得到灰色固體樣產(chǎn)物(80mg，75％收率)，m.p.170-180℃；MS m/e 265(M-H)+。
對C15H10N2O3x1.5H2O分析理論值C，61.43；H，4.47；N，9.55實(shí)測值C，61.41；H，4.21；N，9.19實(shí)施例507-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇]步驟a)2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]丙烷-2-醇按照實(shí)施例43的步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑，使用丙酮作為親電試劑制備標(biāo)題化合物，得到白色固體(78％收率，m.p.149℃)；MS m/e 314(M+H)+。
對C18H19NO4分析理論值C，68.99；H，6.11；N，4.47。
實(shí)測值C，68.78；H，6.13；N，4.35。
步驟b)7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇]按照實(shí)施例20的步驟e(途徑b)的方法，從2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]丙烷-2-醇制備標(biāo)題化合物，得到為深棕色固體的產(chǎn)物(90％收率，m.p.180-185℃)；MS m/e 286(M+H)+。
對C16H15NO4x0.5H2O分析理論值C，65.30；H，5.48；N，4.76實(shí)測值C，65.03；H，5.20；N，4.72實(shí)施例51
2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并唑-5-醇使吡啶鹽酸鹽(400mg)加熱至190℃。向該融化物中加入2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]丙烷-2-醇(114mg，0.36mmol)且攪拌反應(yīng)物2個小時。把反應(yīng)混合物冷卻至室溫，溶于水并用EtOAc提取。合并有機(jī)層并用HCl(1N)、水然后用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(50％-60％EtOAc/石油醚)純化，得到淺紅棕色固體樣產(chǎn)物(40mg，41％收率)，m.p.225-228℃；MS m/e268(M+H)+。
對C16H13NO3x0.5H2O分析理論值C，69.56；H，5.11；N，5.06實(shí)測值C，69.46；H，5.22；N，4.56實(shí)施例522-(4-羥基苯基)-7-異丙基-1，3-苯并唑-5-醇]使2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并唑-5-醇(64mg，0.24mmol)溶于EtOAc(5mL)和無水乙醇(5mL)的混合物中并在含有氬氣的惰性氣氛下放置。向該溶液中加入10％Pd-C(25mg)。將溶液在帕爾裝置中于25磅/平方英寸下氫化3個小時。使該溶液通過硅藻土Celite過濾和用乙醇沖洗。濃縮濾液且殘余物經(jīng)快速層析法(50％EtOAc/石油醚)純化，得到為褐色固體的產(chǎn)物(58mg，90％收率)，m.p.200℃；MS m/e 270(M+H)+。
實(shí)施例537-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2-溴-4-甲氧基-6-{[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲?；鵠氨基}苯基4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸酯。
以與在實(shí)施例20步驟c中描述的基本相同的方法，從2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚和4-甲氧基-3-三氟甲基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物，得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.205-208℃；MS m/e 622(M+H)+。
對C25H18BrF6NO6分析理論值C，48.25；H，2.92；N，2.25實(shí)測值C，48.47；H，2.76；N，2.16步驟b)7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-1，3-苯并唑以與在實(shí)施例20的步驟d(途徑a)中描述的基本相同的方法，從2-溴-4-甲氧基-6-{[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基}苯基4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸酯和對-甲苯磺酸單水合物制備標(biāo)題化合物，得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.183-185℃；MS m/e 402(M+H)+。
對C16H11BrF3NO3分析理論值C，47.79；H，2.76；N，3.48實(shí)測值C，47.60；H，2.50；N，3.37步驟c)7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例20的步驟e(途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為淺黃色固體的產(chǎn)物(50％收率，m.p.200-210℃)；MS m/e 372(M-H)+。
對C14H7BrF3NO3x0.5H2O分析理論值C，43.89；H，2.10；N，3.65實(shí)測值C，43.59；H，2.04；N，3.6實(shí)施例547-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑?qū)?-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑(300mg，0.90mmol)和二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(71mg，0.09mmol)溶于對-二甲苯(3mL)中并在氮?dú)夥障拢谑覝叵聰嚢?0分鐘。加入2-(三丁基甲錫烷基)呋喃(449mg，1.26mmol)且反應(yīng)混合物回流4個小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液稀釋并用EtOAc提取。有機(jī)提取液用水然后用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥并濃縮。經(jīng)快速層析法(20％-30％EtOAc/石油醚)純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(99％收率，m.p.120-121℃)；MS m/e 322(M+H)+。
對C19H15NO4分析理論值C，71.02；H，4.71；N，4.36實(shí)測值C，70.23；H，4.7；N，4.19步驟b)7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例50的方法制備標(biāo)題化合物，得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物(64％收率，m.p.283-287℃)；MS m/e 294(M+H+)。
對分析C17H11NO4理論值C，69.62；H，3.78；N，4.78實(shí)測值C，69.11；H，3.6；N，4.64實(shí)施例552-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑。
按照實(shí)施例53的步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為琥珀色結(jié)晶的產(chǎn)物(73％收率，m.p.155℃)；MS m/e 340(M+H)+。
對C19H14FNO4分析理論值C，67.25；H，4.16；N，4.13實(shí)測值C，66.88；H，3.97；N，4.04步驟b)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例50的方法，從2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為灰色固體的產(chǎn)物(81％收率，m.p.245-250℃)；MS m/e 312(M+H)+。
對C17H10FNO4x0.7C3H6O分析
理論值C，65.04；H，4.37；N，3.79實(shí)測值C，64.84；H，4.29；N，3.70實(shí)施例562-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-噻吩-2-基)-1，3-苯并唑按照實(shí)施例53的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑和2-(三丁基甲錫烷基)噻吩制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物(95％收率)，m.p.95-100℃)；MS m/e 338(M+H)+。
步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并唑-5-醇按照實(shí)施例50的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-噻吩-2-基)-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為灰色固體的產(chǎn)物(80％收率，m.p.278-280℃)；MS m/e 310(M+H)+。
對C17H11NO3Sx0.25H2O分析理論值C，65.06；H，3.69；N，4.46實(shí)測值C，64.93；H，3.84；N，4.21實(shí)施例572-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑-5-醇步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑。
按照實(shí)施例53的步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并唑和2-(三丁基甲錫烷基)噻唑制備標(biāo)題化合物，得到為灰白色固體的產(chǎn)物(93％收率，m.p.132-136℃)；MS m/e 339(M+H)+。
對C18H14N2O3S分析理論值C，63.89；H，4.17；N，8.28實(shí)測值C，63.53；H，3.94；N，8.15步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑-5-醇。
按照實(shí)施例50的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑制備標(biāo)題化合物，得到為黃色固體的產(chǎn)物(55％收率，m.p.245-255℃)；MS m/e 311(M+H)+。
對C16H10N2O3Sx1.5H2O分析理論值C，56.97；H，3.88；N，8.30實(shí)測值C，57.24；H，3.95；N，7.50實(shí)施例582-(3-氟-4-羥基苯基)-5-羥基-1，3-苯并唑-7-腈按照實(shí)施例35的方法，從7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并唑和氰化鋅制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.308-310℃，MS m/e 269(M-H)+。
對C14H7FN2O3x1.5H2O分析理論值C，61.01；H，2.77；N，10.16實(shí)測值C，60.68；H，2.46；N，9.77實(shí)施例59和604-溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇(EX.59)4，6-二溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇(EX.60)按照實(shí)施例28的方法，從2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇和N-溴代琥珀酰亞胺制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物(Ex.59)，m.p.246-248℃，MS m/e 336(M+H)+。
對C14H10BrNO4x.1H2O分析理論值C，49.49；H，3.08；N，4.12實(shí)測值C，49.28；H，2.89；N，3.87.
得到為白色固體的產(chǎn)物(Ex.60)，m.p.260-262℃，MS m/e 414(M+H)+。
對C14H9Br2NO4分析
理論值C，40.52；H，2.19；N，3.37實(shí)測值C，40.21；H，2.00；N，3.3實(shí)施例617-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從3，5-二氟-4-甲氧基苯甲酸和2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.270-272℃；MS m/e 340(M-H)+。
對C13H6BrF2NO3分析理論值C，45.64；H，1.77；N，4.09實(shí)測值C，45.81；H，1.73；N，3.89實(shí)施例622-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例24的途徑b中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇制備標(biāo)題化合物，得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.160-262℃；MS m/e 288(M-H)+。
對C15H9F2NO3x0.1H2O分析理論值C，61.52；H，3.23；N，4.78實(shí)測值C，61.53；H，3.10；N，4.72實(shí)施例637-溴-2-(4-羥基-2-甲基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從4-甲氧基-2-甲基苯甲酸和2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚制備標(biāo)題化合物，得到為淺紫色固體的產(chǎn)物，m.p.120-135℃；MS m/e 320(M+H)+。
對C14H10BrNO3分析理論值C，52.52；H，3.15；N，4.38實(shí)測值C，52.24；H，2.97；N，4.15
實(shí)施例642-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-醇將氟化氫吡啶(1.14mL)逐滴加入到2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-基乙酸酯(0.25g，0.7mmol)在環(huán)丁砜(3mL)中的冷的(0℃)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，然后一批加入1，3-二溴-5，5-二甲基咪唑烷-2，4-二酮(120mg)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌24個小時，用HCl(1N)稀釋并用EtOAc提取。有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/異丙醇0.3％)純化，得到為白色固體的7-(2-溴-1-氟乙基)-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇(0.25g，m.p.185-186℃)。用乙腈(2mL)吸收該產(chǎn)物并加入1，8-二氮雜雙環(huán)[54.0]十一碳-7-烯(150mg)。將反應(yīng)混合物攪拌24個小時，傾到入冷的(0℃)HCl(1N，10mL)中并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(20％EtOAc/己烷)純化，得到為白色固體的產(chǎn)物(160mg，m.p.213-214℃)；MS m/e 290(M+H)+。
對C15H9BrF2NO3x0.3H2O分析理論值C，61.15；H，3.28；N，4.75實(shí)測值C，60.84；H，3.41；N，4.57實(shí)施例652-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇(ERB-041)的代謝物的制備和分析。
實(shí)施ERB-041在大鼠肝臟微粒體和細(xì)胞溶質(zhì)中的大規(guī)模孵育，以分離葡糖苷酸(在本文稱為M5和M6)和硫酸酯(在本文稱為M9和M9A)用于NMR分析?；?H-和19F-NMR分析的結(jié)果，M5和M6的結(jié)構(gòu)被清楚地被指定為ERB-041-4’-葡糖苷酸(M5)和ERB-041-5-葡糖苷酸(M6)。M9和M9A的結(jié)構(gòu)被分別確定為ERB-041-4’-硫酸酯和ERB-041-5-硫酸酯。
M5、M6、M9和M9A的結(jié)構(gòu)示于如下 SD大鼠的肝微粒體(雄性，批號VJF，20mg/mL)和細(xì)胞溶質(zhì)(雄性，批號100007，20mg/mL)得自In Vitro Technologies，Inc.，Baltimore，MD。使用得自BD Gentest，Woburn，MA的細(xì)胞溶質(zhì)進(jìn)行另外的大鼠肝臟孵育。輔因子尿苷5’-二磷酸葡糖醛酸(UDPGA)和3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸酯(PAPS)購自Sigma Chemical Co，St Louis，MO。所有其它試劑為分析級。
在UDPGA的存在下的ERB-041的微粒體孵育在UDPGA的存在下，在含1mg/mL大鼠肝臟微粒體蛋白質(zhì)及最終濃度5mM氯化鎂和4mM UDPGA的磷酸鹽緩沖液(0.1M，pH 7.4)中，將伴有雄性SD大鼠肝臟微粒體的ERB-041進(jìn)行分析規(guī)模的孵育。使用100μM的底物濃度于37℃孵育60分鐘進(jìn)行小規(guī)模的孵育(pilot incubation)(1.0mL孵育體積)。通過加入等體積的冷凍的乙腈終止過程。
隨后如上所述，將用于闡明結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生足量葡糖苷酸代謝物的大規(guī)模孵育(共37批孵育@5.0mL孵育體積)于37℃進(jìn)行60分鐘。也進(jìn)行合適的底物對照和未加入UDPGA的孵育。
在PAPS存在下的ERB-041的細(xì)胞溶質(zhì)的孵育在PAPS的存在下，在含1mg/mL肝細(xì)胞溶質(zhì)、0.114mg/mLPAPS 0.1mg/mL BSA、5mM二硫蘇糖醇和5mM MgCl2的tris緩沖液(50mM，pH 7.4)中，將伴有雄性SD大鼠和人肝細(xì)胞溶質(zhì)部分的ERB-041進(jìn)行分析規(guī)模的孵育。于37℃，使用100μM ERB-041的底物濃度，進(jìn)行這些小規(guī)模的孵育(1.0mL孵育體積)60分鐘，通過加入等體積的冷凍的乙腈終止孵育。
隨后如上所述，將用于闡明結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生足量硫酸酯代謝物的大規(guī)模孵育(總60批孵育@1.0mL孵育體積)于37℃進(jìn)行60分鐘。進(jìn)行合適的底物對照和未加入PAPS的孵育。以相同的方法也進(jìn)行另外的孵育(總120@2.0mL孵育體積、50μM ERB-041)以分離足量的ERB-041-硫酸酯，以使全部結(jié)構(gòu)鑒定成為可能。
樣品制備終止孵育后，使反應(yīng)混合物離心(3000rpm，10-15分鐘)，然后上清液用于隨后的制備型HPLC分離。
高效液相色譜反相-HPLC用于所有代謝物的分析。為了確認(rèn)在小規(guī)模孵育中的ERB-041的葡糖苷酸和硫酸酯共軛物的形成，使用裝備二極管陣列檢測器的Agilent 1100 LC系統(tǒng)(Agilent Technologies，Wilmington，DE)進(jìn)行HPLC分析。將二極管陣列檢測器的波長設(shè)置為254nm。使用Phenomenex Prodigy，5ODS[4.6×250mm]柱(Phenomenex，Inc.Torrance，CA)和使用梯度系統(tǒng)A1.0 mL/min流速實(shí)現(xiàn)分離。
梯度(A)
在孵育提取物的大規(guī)模分析期間，在以下條件下實(shí)現(xiàn)分析檢測使用帶有UV檢測(254和280nm)的Waters 2690 Alliance LC系統(tǒng)(Waters Corp.，Milford，MA)，并采用Phenomenox LUNA-苯基/己基柱[4.6×250mm，5μ]使用梯度系統(tǒng)B(葡糖苷酸)和梯度系統(tǒng)C(硫酸酯)，實(shí)現(xiàn)分離。
梯度(B)
梯度(C)
在以下條件下實(shí)現(xiàn)共軛代謝物的制備型HPLC分離使用帶UV檢測(254和280nm)的Waters Delta Prep 4000系統(tǒng)，并使用ZorbaxRX-C18柱[21.1×250mm，10μ](Agilent Technologies，Wilmington，DE)柱采用梯度系統(tǒng)D(葡糖苷酸)和E(硫酸酯)，實(shí)現(xiàn)分離。
梯度(D)
梯度(E)
共扼代謝物的分離和純化對于葡糖苷酸，使得自UDPGA存在下的大鼠肝臟微粒體孵育的合并提取物經(jīng)歷用水和甲醇連續(xù)洗脫的反相快速層析。含ERB-041同分異構(gòu)的葡糖苷酸(M5和M6)流分合并和濃縮后，進(jìn)一步用制備型HPLC分離。采用梯度D于ZorbaxRX-C18柱[21.1×250mm，10μ]上使用Waters Delta Prep 4000系統(tǒng)，在制備型HPLC上分離共扼代謝物。通過于254和280nm的UV檢測下監(jiān)控分離，且收集含需要的代謝物(Rt＝26.8-27.3分鐘，M5和Rt＝28.0-28.5分鐘，M6)的峰。真空蒸發(fā)有機(jī)溶劑后，凍干殘余物得到純的葡糖苷酸(M5和M6)，用于隨后的1H-和19F-NMR分析。
對于硫酸酯，通過在ZorbaxRX C-18柱上的制備型HPLC分離合并的粗品孵育產(chǎn)物。使用梯度溶劑E于280nm和250nm的UV監(jiān)測下實(shí)現(xiàn)制備型HPLC分離。且收集需要的M9A(Rt＝28.5-29分鐘)和M9(Rt＝29.3-29.8分鐘)的峰。真空蒸發(fā)有機(jī)溶劑后，凍干殘余物得到純的硫酸酯共扼物(M9A和M9)，用于隨后的19F-NMR分析。
在制備型HPLC過程中分析檢測，以及如以上所描述的分別使用梯度B和C用于葡糖苷酸和硫酸酯，進(jìn)行純化的葡糖苷酸和硫酸酯的分析。
LC-MS分析使用與HP 1100 MSD質(zhì)譜儀偶聯(lián)的Agilent 1100 HPLC系統(tǒng)對分離的代謝物的LC-MS特征進(jìn)行鑒定。在單位分辨率上得到全掃描的電噴霧電離(ESI)質(zhì)譜。ESI正電離模式應(yīng)用于葡糖苷酸的質(zhì)譜記錄，而ESI負(fù)模式被選擇用于硫酸酯的質(zhì)譜記錄。采用XTerraC18柱(2.1×250mm，5μ；Waters Corp.)并用梯度F(低)作為溶劑系統(tǒng)。
梯度(F)
用于LC-MS分析以確定葡糖苷酸共扼物形成的HPLC條件在之前已描述。使用如以上描述的相同的LC-MS條件(梯度A)，不同的是采用2×250mm柱和0.35mL/min的流速，證實(shí)硫酸酯代謝物的大規(guī)模產(chǎn)生。所用的HPLC系統(tǒng)為Waters Alliance 2690 HPLC泵系統(tǒng)。所用的質(zhì)譜儀為裝備電噴霧電離(ESI)源的Finnigan TSQ Quantum(Thermo Finnigan，San Jose，CA)并在負(fù)電離模式下運(yùn)行。單位質(zhì)量分辨率用于所有分析。
NMR分析為了比較葡糖苷酸的1H-NMR波譜與ERB-041的波譜，基于1H-NMR、13C-NMR、HMBC和HMQC實(shí)驗(yàn)，使ERB-041的化學(xué)位移明確地歸屬(assigned)。使用Bruker 400 AMX波譜儀(Bruker，Billerica，MA)獲得所有NMR分析。
對于葡糖苷酸，CD3CN/DMSO-d6混合物作為溶劑用于1H-NMR和CD3OD用于19F-NMR分析。對于硫酸酯共扼物，含0.005％TFA的CD3OD用于19F-NMR分析和氟-苯標(biāo)準(zhǔn)(δF-113.12ppm)被用于在獲得硫酸酯共扼物之前調(diào)節(jié)儀器設(shè)置。
數(shù)據(jù)分析針對LC 3D的ChemStation的版本為Rev.A.09.01的Agilent色譜軟件(Agilent Technologies Inc.，Wilmington，DE)用于檢測代謝物峰。Xcalibur版本1.3軟件用于LC-MS儀器的對照和記錄自LC-MS分析的數(shù)據(jù)。
大鼠肝臟微粒體中的葡萄糖醛酸化作用(glucuronidation)在UDPGA存在下，將ERB-041與得自大鼠肝臟微粒體的微粒體蛋白一起進(jìn)行孵育時，檢測兩種主要的代謝物，M5和M6。M5和M6的LC-MS分析(ESI，正電離)顯示，這些峰為ERB-041的在4’-OH(苯基)和5-OH(苯并唑)位的酚基葡糖苷酸。在大規(guī)模孵育中形成M5和M6的進(jìn)一步確認(rèn)可通過LC-MS分析(ESI，正電離)證實(shí)。使用如以上所描述的梯度溶劑系統(tǒng)B，實(shí)現(xiàn)兩種代謝物的分離。
大鼠肝臟細(xì)胞溶質(zhì)中的硫酸化作用(sulfation)在PAPS的存在下，將ERB-041與得自大鼠和人肝部分的細(xì)胞溶質(zhì)一起進(jìn)行孵育時，通過HPLC和LC-MS分析檢測兩種代謝物(M9A和M9)。大鼠肝臟和人肝細(xì)胞溶質(zhì)孵育產(chǎn)生相似的結(jié)果。兩種代謝物M9A和M9在m/z 350均產(chǎn)生與人和大鼠細(xì)胞溶質(zhì)孵育中的ERB-041-硫酸酯一致的[M-H]-。使用LC-MS分析(ESI，負(fù)電離)獲得對得自大規(guī)模孵育的分離代謝物M9A和M9的鑒定的進(jìn)一步證實(shí)。在大規(guī)模孵育中，約23％的ERB-041轉(zhuǎn)變?yōu)閮煞N硫酸酯共扼物。通過使用如上所述的梯度溶劑系統(tǒng)C實(shí)現(xiàn)該兩種硫酸酯代謝物的分離。
ERB-041共扼代謝物的結(jié)構(gòu)說明得到針對ERB-041葡糖苷酸(代謝物M5和M6)和硫酸酯(代謝物M9和M9A)的質(zhì)譜并且證實(shí)它們存在于大規(guī)模孵育提取物中。LC-MS數(shù)據(jù)顯示兩個環(huán)(苯基和苯并唑)的酚基葡萄糖醛酸化和/或硫酸化?；?9F-和1H-NMR分析測定共扼的位點(diǎn)。下面討論各代謝物的詳細(xì)質(zhì)譜和NMR數(shù)據(jù)。
代謝物M5(ERB-041-4’-葡糖苷酸)代謝物M5顯示在m/z 448的[M+H]+；因此，證實(shí)代謝物M5為之前報告的或者苯基(C-4’)的酚基或者苯并唑(C-5)環(huán)的ERB-041-葡糖苷酸。此由存在m/z 470(+22質(zhì)量單位，Na加合物)和m/z 272(失去葡糖苷酸部分)的[M+Na]+得到進(jìn)一步支持。然而，缺失任何特征的質(zhì)譜片段使得無法區(qū)分基于LC-MS數(shù)據(jù)的葡萄糖醛酸化的各位點(diǎn)。
由19F-和1H-NMR數(shù)據(jù)還獲得對該結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步解釋。ERB-041的19F-NMR分析顯示為伴有δF-138ppm的化學(xué)位移的信號(3’-F)。得自代謝物M5和M6的19F-NMR分析結(jié)果顯示，M5中的3’-F信號移向δF-134ppm，而M6的信號維持在δF-138ppm不受影響。這些結(jié)果還明顯地與對于M5葡萄糖醛酸化的位點(diǎn)為C4’-位(苯環(huán))相一致。在C4’-OH位的葡萄糖醛酸化還通過1H-NMR分析證實(shí)。這個代謝物的質(zhì)子NMR波譜與ERB-041的相似，不同的是H-5’的顯著的低場位移(downfield shift)(從ERB-041中的δ7.19ppm移向M5中的δ7.45ppm)。另外，與端基異構(gòu)(anomeric)質(zhì)子一致的在δ5.2ppm上的信號在代謝物波譜中也是明顯的，進(jìn)一步表示為葡糖苷酸結(jié)構(gòu)。所有其它質(zhì)子化學(xué)位移保持不變。H-5’信號為經(jīng)歷與維持不受影響的苯并唑環(huán)的所有質(zhì)子低場位移的僅有信號，進(jìn)一步確定葡萄糖醛酸化的位點(diǎn)為苯環(huán)的4’-酚基。需要注意的是，雙重信號在與葡糖醛酸的β和α差向異構(gòu)體一致的M5的1H-NMR波譜中是明顯的。觀察到的葡糖醛酸部分的端基異構(gòu)質(zhì)子與M5的ROSEY波譜中的H-5’的NOEs一致，進(jìn)一步支持歸屬結(jié)構(gòu)為4’-O-葡糖苷酸。
代謝物M6(ERB-041-5-葡糖苷酸)與代謝物M5相似，M6的質(zhì)譜分析顯示出m/z 448的[M+H]-，確認(rèn)其為ERB-041單葡糖苷酸。如上所述，通過m/z 470([M+Na]+)和m/z 272(失去葡糖苷酸部分)的存在，進(jìn)一步支持這一確認(rèn)。再有，由于缺失任何特征的質(zhì)譜片段，僅基于LC-MS數(shù)據(jù)，不能區(qū)分葡萄糖醛酸化作用的各位點(diǎn)。如上討論的，M6的19F-NMR分析表示，M6中的3’-F信號不受通過葡萄糖醛酸化的影響并且顯示出δF-138ppm的化學(xué)位移，與其母體ERB-041(δF-138ppm)的相同。這些結(jié)果明顯與葡萄糖醛酸化的位點(diǎn)為M6的C5-OH(苯并唑環(huán))位置相一致。通過1H-NMR分析，在C-5的葡萄糖醛酸化被進(jìn)一步證實(shí)，與其母體ERB-041比較，相應(yīng)于H-4和H-6的質(zhì)子信號明顯顯示出向低場的位移。1H-NMR的結(jié)果是一致的并且進(jìn)一步證實(shí)葡萄糖醛酸化的位點(diǎn)為苯并唑環(huán)的C5-酚基。
代謝物M9(ERB-041-4’-硫酸酯)由于失去硫酸酯部分，代謝物M9在m/z 350顯示出分子離子[M-H]-，及在m/z 270的片段；因此，證實(shí)M9為ERB-041-硫酸酯。可在任一酚基(C-4’，苯基或C-5，苯并唑環(huán))發(fā)生硫酸化。然而，缺失任何特征的質(zhì)譜片段，使得無法區(qū)分基于LC-MS數(shù)據(jù)的硫酸化的各個位點(diǎn)。基于附加的19F-NMR分析，作出明了無誤的硫酸酯代謝物結(jié)構(gòu)歸屬(assignment)。因此，M9的19F-NMR分析顯示出伴有δF-130ppm的化學(xué)位移的信號(3’-F)，該信號可與ERB-041的δF-138ppm比較。如以上針對葡糖苷酸M5和M6的討論，在此觀察到的顯著低場位移明顯表示在C-4’位的硫酸酯結(jié)合。當(dāng)觀察到的針對M9A中的3’-F的化學(xué)位移于δF-138ppm維持不變時，進(jìn)一步證實(shí)該歸屬。代謝物M9A(ERB-041-5-硫酸酯)代謝物M9A在m/z 350顯示出與在m/z 270的片段相同的分子離子[M-H]-，該片段相當(dāng)于M9所見的失去硫酸酯；因此，也可斷定代謝物M9A為直接的ERB-041-硫酸酯共扼物。與M9的類似，或者C4’(苯基)或者C5(苯并唑)為可用的硫酸化位點(diǎn)。此外，缺失任何特征的質(zhì)譜片段，使得無法區(qū)分基于LC-MS數(shù)據(jù)的硫酸化的各個位點(diǎn)?；?9F-NMR分析作出明了無誤的的M9A結(jié)構(gòu)歸屬。將M9A的δF與ERB-041比較，沒有觀察到化學(xué)位移變化。在兩種情況下，觀察到的δF為-138ppm，與遠(yuǎn)端C5-苯并唑OH基團(tuán)硫酸化的結(jié)果一致。
意欲將在本發(fā)明文件中提及的每一專利、申請和印刷出版物，包括書籍，在此全文通過引用結(jié)合于本文。本申請要求2004年8月26日提交的美國臨時申請?zhí)?0/604,835的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其在此全文通過引用結(jié)合于本文。
正如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會理解的那樣，在不脫離本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)的情況下，可對于優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案進(jìn)行大量的改變和修飾。期望所有這樣的改變都落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種具有下式結(jié)構(gòu)的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中Q1和Q2獨(dú)立為H、糖殘基或S(O)t-OH，條件是Q1和Q2不都為H；t為0、1或2；R1為氫、羥基、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的三氟烷基、3-8個碳原子的環(huán)烷基、1-6個碳原子的烷氧基、1-6個碳原子的三氟烷氧基、1-6個碳原子的硫代烷基、1-6個碳原子的磺酰烷基、1-6個碳原子的亞磺酰烷基、6-10個碳原子的芳基、具有1-4個選自O(shè)、N或S的雜原子的5或6-元雜環(huán)、-NO2、-NR5R6、-N(R5)COR6、-CN、-CHFCN、-CF2CN、2-7個碳原子的炔基或2-7個碳原子的鏈烯基；其中所述烷基或鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R2和R2a每個獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R3和R3a每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、2-7個碳原子的鏈烯基、2-7個碳原子的炔基、鹵素、1-4個碳原子的烷氧基、1-6個碳原子的三氟烷基或1-6個碳原子的三氟烷氧基；其中所述烷基、鏈烯基，或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；R5、R6每個獨(dú)立為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基；X為O、S或NR7；R7為氫、1-6個碳原子的烷基、6-10個碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或-SO2R5。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為2-7個碳原子的鏈烯基；其中所述鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代。
3.依據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中X為O。
4.依據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中R1為2-3個碳原子的鏈烯基，所述鏈烯基由羥基、-CN、鹵素、三氟烷基、三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、-CONR5R6、-NR5R6或-N(R5)COR6任選取代。
5.依據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1為乙烯基、1-溴代乙烯基、1-氟代乙烯基或烯丙基。
6.權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中t為2。
7.權(quán)利要求1-6中任一項的化合物，其中的糖殘基為經(jīng)修飾的或未經(jīng)修飾的己糖殘基。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中所述經(jīng)修飾的己糖殘基為葡糖苷酸殘基。
9.權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中Q1和Q2獨(dú)立選自-S(O)2-OH和H。
10.權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中Q1和Q2獨(dú)立選自-S(O)2-OH和經(jīng)修飾的或未經(jīng)修飾的己糖殘基。
11.權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中Q1和Q2獨(dú)立選自H和經(jīng)修飾的或未經(jīng)修飾的己糖殘基。
12.權(quán)利要求10或11的化合物，其中所述經(jīng)修飾的己糖殘基為葡糖苷酸殘基。
13.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
14.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
15.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
16.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
17.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
18.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
20.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
21.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
22.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
23.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
24.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
25.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
26.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
27.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
28.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
29.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
30.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
31.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
32.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
33.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
34.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
35.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
36.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
37.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
38.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
39.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
40.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
41.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
42.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
43.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
44.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
45.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
46.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
47.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
48.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4，6-二溴-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
49.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
50.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
51.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
52.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
53.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
54.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
55.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
56.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
57.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
58.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
59.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
60.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
61.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
62.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
63.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
64.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2’，3’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
65.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
66.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
67.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
68.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
69.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
70.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
71.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
72.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為7-烯丙基-2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
73.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
74.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
75.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
76.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
77.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
78.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
79.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
80.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’，5’-二氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
81.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
82.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
83.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
84.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
85.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
86.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
87.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
88.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-(1-氟代乙烯基)-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
89.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-葡糖苷酸苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
90.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-硫酸酯基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
91.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-葡糖苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
92.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為2-(3’-氟-4’-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-硫酸酯或其藥學(xué)上可接受的鹽。
93.一種化合物，它為以下化合物的葡糖苷酸衍生物、硫酸酯衍生物或葡糖苷酸-硫酸酯衍生物a)2-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚；b)3-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；d)2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；e)2-(2-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；f)2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；g)2-(3-叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；h)2-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，4-二酚；i)3-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；j)4-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，2-二酚；k)2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；l)4-(5-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚；m)4-(6-羥基-1，3-苯并唑-2-基)苯-1，3-二酚；n)6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；o)6-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；p)6-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；q)5-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-6-醇；r)7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；s)7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；t)7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；u)2-(4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；v)7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；w)7-(1-溴代乙烯基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；x)7-乙炔基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；y)2-(4-羥基苯基)-7-丙基-1，3-苯并唑-5-醇；z)7-丁基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；aa)7-環(huán)戊基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；bb)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-羧酸乙酯；cc)2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并唑-5-醇；dd)2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇；ee)7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；ff)7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；gg)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-甲醛；hh)7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；ii)7-(溴代甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；jj)[5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-7-基]乙腈；kk)7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇]；ll)2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并唑-5-醇；mm)2-(4-羥基苯基)-7-異丙基-1，3-苯并唑-5-醇]；nn)7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟代甲基)苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；oo)7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；pp)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并唑-5-醇；qq)2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并唑-5-醇；rr)2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并唑-5-醇；ss)2-(3-氟-4-羥基苯基)-5-羥基-1，3-苯并唑-7-腈；tt)4-溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇；uu)4，6-二溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并唑-5-醇；或vv)7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并唑-5-醇；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
94.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制前列腺炎或間質(zhì)性膀胱炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
95.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制炎性腸道疾病、克羅恩氏病、潰瘍性直腸炎或結(jié)腸炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
96.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳房疾病、子宮內(nèi)膜異位、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或星母細(xì)胞瘤的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
97.一種在有需要的哺乳動物中降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動脈粥樣硬化、高血壓、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣；或抑制因?qū)е旅庖呓閷?dǎo)的血管損傷的細(xì)胞過程引起的血管壁損傷的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
98.一種在有需要的哺乳動物中提供認(rèn)知增強(qiáng)或神經(jīng)保護(hù)；或治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、認(rèn)知衰退、中風(fēng)、焦慮癥或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
99.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制自由基誘導(dǎo)的疾病狀態(tài)的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
100.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢癥、交媾困難、排尿困難、尿頻、尿失禁、尿道感染的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
101.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制血管舒縮癥的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
102.一種在有需要的哺乳動物中抑制受孕的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
103.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
104.依據(jù)權(quán)利要求103的方法，其中所述關(guān)節(jié)炎為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或椎關(guān)節(jié)病。
105.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制關(guān)節(jié)腫脹或糜爛；或治療或抑制繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或外科手術(shù)的關(guān)節(jié)損傷的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
106.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制牛皮癬或皮炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
107.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制局部缺血、再灌注損傷、哮喘、胸膜炎、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、膿毒癥、出血性休克或II型糖尿病的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
108.一種在有需要的哺乳動物中治療或抑制子宮內(nèi)膜異位的方法，該方法包括提供給所述哺乳動物有效量的權(quán)利要求1-93中任一項的化合物。
109.一種藥用組合物，它包含權(quán)利要求1-93中任一項的化合物和藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明提供具有下式結(jié)構(gòu)(I)的式I的雌激素受體調(diào)節(jié)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Q
文檔編號A61K31/423GK101044126SQ200580036279
公開日2007年9月26日 申請日期2005年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月26日
發(fā)明者S·埃爾馬拉克比, 蔡平, A·錢德拉塞卡蘭, M·魯彭, R·塔拉特 申請人:惠氏公司