Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2-甲硫基乙基)胺基衍生物的組合物在預防或治療胰 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的組合物在預防或治療胰腺纖維化藥物中的應用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及一種Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的組合物、制備方法及其在制備預防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有預防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Sa IV i sk i none A的苯并咪性基和二(2-甲硫基乙基)胺基衍生 物的組合物在預防或治療膜腺纖維化藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及有機合成和藥物化學領域，具體設及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 膜腺纖維化是各種原因所致慢性膜腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學特點，表現(xiàn)為大量成纖維細胞增生和富含連接組織的細胞外基質。是多種原因導致膜 腺損傷修復的結果，近期發(fā)現(xiàn)膜腺星狀細胞和多種細胞因子與膜腺纖維化有關，膜腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗膜腺纖維化藥物。
[0003] 膜腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中 尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明設及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Ayumi Ohsaki et al.， 2011 . Salviskinone A,a diterpene with a new skeleton from Salvia 口^6￥日131^;[.了日化日11日化0]11日1:1日'3 52(2011)1375-1377)的化合物，我們對化合物1進行 了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV 制備了組合物并對該組合物抗膜腺纖維化活性進行了評價，其具有抗膜腺纖維化活性。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物ΙΠ 和化合物IV組成，該組合物 中化合物ΠI和化合物IV的質量百分數(shù)分別為60 %和40 %。
[0006]
[0007]本發(fā)明公開的組合物可W制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[000引藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗膜腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] W下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加 W限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Salviskinone A的制備
[0011] 化合物Salviskinone A(I)的制備方法參照Ayumi Ohsaki等人發(fā)表的文獻(Ayumi Ohsaki et al.,2011.Salviskinone A,a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii.Tetr址e化on Letters 52(2011)1375-1377)的方法。
[0012]
[0013] 實施例2 Salviskinone A的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(312mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四下基漠化錠（TBAB) (0.08邑），1，2-二漠乙燒(3.760邑，20.00111111〇1)和61^的50%氨氧化鋼溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攬拌12h"12h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲燒萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗涂4次，再用無水硫酸鋼干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬=100:1.5，v/v)， 收集棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棟色粉末(327mg，78%)。
[001 引 iHMffi(500MHz，DMS0-d6)S6.63(s，lH)，6.37(s，lH)，5.81(s，lH)，4.51(s，2H), 3.84(s，lH)，3.79(s，2H)，2.15(s，lH)，2.04(s，lH)，1.91(s，lH)，1.65(s，lH)，1.39(s，3H), 1.08(3,6扣，0.99(3，細）.
[0016] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.07(s),183.70(s),154.38(s),147.57(s),140.21 (s),136.40(s),134.71(s),131.25(s),128.40(s),118.83(s),72.12(s),45.49(s),37.54 (s),33.58(s),31.78(s),26.17(s),25.12(s),24.66(s),23.51(s),23.17(s),22.65(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+扣+calcd for C2抽2泌r03:419.1222;found 419.1220.
[001 引
[0019] 實施例3 Salviskinone A的0-(苯并咪挫基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 將化合物II(209mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙臘當中，向其中加入無水碳酸鐘(345mg， 2.5mmol)，艦化鐘（84mg，0.5mmol)和苯并咪挫（llSOmg，lOmmol)，混合物加熱回流加。反應 結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲燒萃取Ξ次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗涂合并之后的有機相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬= 100:1.5，v/v)，收集棟色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物ΠΙ的棟色固體(215mg，43%)。
[00別]1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S8.15(s，lH),7.54(d，J=25.0Hz，2H),7.15(s，lH), 7.06(s，lH)，6.33(d，J = 84.1Hz，lH)，6.26(s，lH)，5.66(s，lH)，4.38(d，J=15.8Hz，4H)， 3.57(3，1扣，1.96(3，1扣，1.90(3，1扣，1.77(3，把），1.51(3，1扣，1.20(3,3扣，0.99(3，細）， 0.81(3，細）.
[0022] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.90(s),183.51(s),154.17(s),147.37(s),146.27 (s),139.98(s),139.63(s),136.22(s),134.51(s),133.48(s),131.05(s),128.18(s), 123.93(s)，123.35(s)，118.56(d，J = 9.細z)，110.85(s)，68.55(s)，45.29(s)，44.74(s)， 37.34(s),33.36(s),25.96(s),24.94(s),24.46(s),23.32(s),22.96(s),22.42(s).
[0023] HRMS化SI):m/z[M+H]+calcd for C2姐33化〇3:457.2491;found:457.2493。
[0024]
[00巧]實施例4 Salviskinone A的0-(二徑乙胺基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(209mg，0.5mmo 1)溶于30mL乙臘當中，向其中加入無水碳酸鐘(690mg， S.Ommol)，艦化鐘（252mg，1.5mmol)和二乙醇胺（1051mg，lOmmol)，混合物加熱回流9h。反應 結束后將反應液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗涂合并之后的有機相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油酸/丙酬= 100:0.5，v/v)，收集黃色集中洗脫帶 并揮去溶劑即得到Salviskinone A的0-(二徑乙胺基）乙基衍生物的淡黃色固體（159.5mg， 72%)。
[0027] 1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S6.52(s，lH)，6.40(s，lH)，5.71(s，lH)，4.15(s，2H), 3.70(s，lH)，3.37(s，4H)，3.00(s，2H)，2.50(s，4H)，2.07(s，lH)，1.96(s，lH)，1.83(s，lH), 1.57((1，1 = 1.4化，3扣，1.30(3,3扣，0.99(3，細），0.90(3,6扣.
[002引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.01(S),183.52(s),154.08(s),147.15(s),140.11 (s),136.23(s),134.42(s),130.84(s),128.31(s),118.62(s),68.93(s),58.73(s),56.61 (s),53.94(s),45.20(s),37.13(s),33.49(s),25.96(s),24.84(s),24.26(s),23.43(s), 22.97(s),22.33(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C26出8N〇5:444.2750;found:444.2746。
[0030]
[0031 ] Salviskinone A的〇-(二徑乙胺基）乙基衍生物
[0032] 實施例5 Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物的合成
[0033] 將實施例4制備的Salviskinone A的0-(二徑乙胺基）乙基衍生物（0.222邑， 0.5mmol)溶于6mL氯仿，逐滴加入氯化亞諷(0.238g，2mmol)，反應物加熱回流化。將反應物 冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞諷，減壓濃縮除去溶劑。產物經硅膠柱層析純化 (石油酸/丙酬100:0.3，v/v)，得到Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物的淡黃色 固體（170.0mg，71%)。
[0034] 1h NMR(500MHz，Chloroform-dl)S6.51(s，lH)，6.22(s，lH)，5.72(s，lH)，4.16(s, lH),3.66(s,lH),3.44(s,4H),3.01(s,2H),2.80(s,2H),2.64(s,2H),2.04(s,lH),1.98(s, 1扣，1.85(3，1扣，1.59(3，1扣，1.28(3,3扣，0.97(3,6扣，0.93(3，細）.
[003引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.90(s),183.41(s),153.97(s),147.04(s),140.00 (s),136.12(s),134.31(s),130.73(s),128.20(s),118.51(s),68.82(s),55.57(s),53.94 (s),45.20(s),39.10(s),37.02(s),33.39(s),25.87(s),24.76(s),24.19(s),23.33(s), 22.88(s),22.25(s).
[0036] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C2姐36Ci2N03:480.2072;found:480.2070。
[0037]
[003引 Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物
[0039] 實施例6 Salviskinone A的0-(二(2-甲硫基乙基)胺基）乙基衍生物的合成
[0040] 將實施例5制備的Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物（0.240邑， 0.5mmo 1)溶于15mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鋼(0.2Ig，3mmo 1)，反應物加熱回流化。減壓濃 縮除去溶劑，所得產物用硅膠柱層析進行純化(石油酸/丙酬100:0.5，v/v)，得到黃色固體 物，即化合物 IV(〇.169g，67%)。
[004U 1h NMR(500MHz，Chloroform-dl)S6.48(s，lH)，6.41(s，lH)，5.65(s，lH)，4.12(s, 2H)，3.99(s，lH)，2.94(s，2H)，2.53(d，J=15.4Hz，8H)，1.99(s，lH)，1.94(s，6H)，1.90(s， 1扣，1.77(3，1扣，1.51(3，1扣，1.23(3,3扣，0.92(3,6扣，0.83(3，細）.
[0042] 1化 NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.81(s),183.42(s),154.08(s),147.28(s),139.90 (s),136.12(s),134.44(s),130.96(s),128.09(s),118.53(s),68.94(s),53.83(s),52.15 (s),45.21(s),37.24(s),33.29(s),31.87(s),25.85(s),24.86(s),24.38(s),23.21(s), 22.88(s),22.34(s),14.38(s).
[0043] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C2姐42N〇3S2:504.2606;found:504.2603。
[0044]
[0045] 實施例7組合物抗膜腺纖維化活性
[0046] 謝料
[0047] 1.1動物Wistar大鼠，雄性，體重180-200邑。
[004引 1.2組合物劑量:0.9mg/kg。
[0049] 組合物的制備：將研磨之后過200目網的60mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網的40mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混合即得到lOOmg組合物， 使用時用水溶解運lOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[(K)加]2實驗方法
[0051 ] 2.1造模方法:Wistar大鼠 W腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 膜臟腺細胞減少，間質內脂肪及結締組織的增生。
[0化2] 2.2分組及給藥方法
[0化3]模型大鼠隨機分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0054] 2.3檢測指標
[0化日]2.3.1實驗結束時取膜臟稱重。
[0化6] 2.3.2膜臟?脯氨酸含量測定取100mg樣本在水中勻漿，ll(rC10N肥l中水解20 小時。HC1用氮氣揮發(fā)，水解產物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml構祿酸憐酸緩沖 液(0.15M構祿酸加0.6M憐酸氨二鋼)和0.5ml溶于9M憐酸的1M過艦酸混合。加1.75ml提取緩 沖液（5份甲苯：5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震蕩30min，離屯、。組織相（0.6ml)與 EhrlichiS試劑混合放置15min。在565nm現(xiàn)憶吸收度，用4-徑-1-脯氨酸制作標準曲線計算 濃度，含量Wug/g組織表示。
[0化7] 2.3.3組織學檢查膜臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[005引3結果
[0059] 3.1組合物對大鼠膜臟臟器系數(shù)的影響
[0060] 實驗結束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和膜臟重并計算其與體重的比值(膜臟 臟器系數(shù)），結果見表1。組合物對膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物ΠΙ和化合物IV對膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0061] 表 1
[0062]
[0063] *表示p<0.05,與模型組比較
[0064] 3.2膜臟徑脯氨酸含量測定
[0065] 實驗結束時，對各組大鼠進行肺部徑脯氨酸含量測定，結果如表2。組合物對徑脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異。化合物ΠΙ和化合物IV對徑脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0066] 表 2
[0067]
[0068] *表示p<0.05,與模型組比較
[0069] 3.3組織學檢查
[0070] 實驗結束時，將大鼠處死、解剖;標本常規(guī)包埋、固定、肥染色，鏡檢。
[0071] 結果:模型組第60天可見膜導管周圍嚴重炎癥反應;嗜中粒細胞核淋己細胞浸潤， 間質水腫，出血W及偶見膜泡細胞壞死;膜泡細胞消失位置及膜泡間出現(xiàn)纖維化。
[0072] 組合物可減少炎癥反應和纖維化。評分結果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0073] 表 3
[0074]
[0075] *表示p<0.05，與模型組比較;空白對照組的炎癥細胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0076] 結論:本發(fā)明通過組合物對大鼠膜腺纖維化的影響，證實了組合物具有抗膜腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗膜腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗膜腺纖維化的藥物。
[0077] 實施例8本發(fā)明所設及組合物片劑的制備
[0078] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0079] 實施例9本發(fā)明所設及組合物膠囊的制備
[0080] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為60%和40%，2. 如權利要求1所還的紐/日、物的制爸力'/云，兵狩祉73:符彳七貧物m的粉木和化合物IV 的粉末按照質量百分數(shù)分別為60%和40%充分混合。3. -種如權利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數(shù)下降。5. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物
【文檔編號】A61P29/00GK105998003SQ201610256648
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年4月22日
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司