專利名稱：用于治療的噻唑并嘧啶類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及瘞唑并嘧啶類在治療痛覺過敏性疼痛病癥及其癥狀中的治 療用途。
背景技術(shù)：
痛覺過敏性疼痛病癥是由組織損傷引起的痛覺增加的病癥。這些病癥 是一種受損個體神經(jīng)系統(tǒng)的自然應(yīng)答，顯然是用于促進受損組織的保護以 獲得用于發(fā)生組織修復(fù)的時間。痛覺過敏性疼痛病癥的癥狀包括痛覺過 敏、異常性疼痛(觸覺、熱)和感覺異常。痛覺過敏是一種對痛覺刺激的異 常疼痛反應(yīng)。異常性疼痛是一種在正常刺激引起疼痛的情況下的病癥。感 覺異常是一種皮膚的感覺異常，比如麻木、麻刺感、刺痛感、燒灼感、沒 有^1觀原因的蠕動感。這些病癥存在兩種已知的基本原因，即感覺神經(jīng)元 活性的增加和脊髓中存在的感受傷害信息的神經(jīng)元處理的改變。在慢性炎 癥中和當(dāng)感覺神經(jīng)損傷已發(fā)生(即神經(jīng)病理性疼痛)時，這些病癥可被削弱。 如上所述，痛覺過敏性疼痛病癥在大多數(shù)組織損傷情況下是一種后果，所 述組織損傷為對感覺神經(jīng)的直接損傷，或者對某一已知感覺神經(jīng)支配的組 織的損傷。
涉及包含神經(jīng)病理性疼痛的組元的感覺神經(jīng)損傷的疾病包括但不限于 糖尿病神經(jīng)病變、癌癥痛、纖維肌痛、肌筋膜痛綜合征、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺 痛、骨盆/會陰痛、皰滲后神經(jīng)痛、復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征、坐骨神經(jīng)痛/
腰部神經(jīng)根病、推管狹窄、顳頜關(guān)節(jié)紊亂、HIV痛、三叉神經(jīng)痛、慢性神 經(jīng)病理性疼痛、下背部痛、背部手術(shù)失敗疼痛(failed back surgery pain )、 術(shù)后痛、身體創(chuàng)傷后疼痛(包括槍擊、RTA、燒傷)、心痛、胸痛、骨盆痛 /pid、關(guān)節(jié)痛(腱炎、滑嚢炎、急性關(guān)節(jié)炎)、頸痛、產(chǎn)痛(分^/C-切開)、腎 絞痛、急性帶狀皰滲痛、急性胰腺炎、爆發(fā)性疼痛(breakthrough pain) (癌癥)和痛經(jīng)/子宮內(nèi)膜異位癥。
已知兩種主要類型的鎮(zhèn)痛藥(i)非甾體抗炎藥(NSAIDs)及其相關(guān) COX-2抑制劑；和(ii)基于嗎啡的麻醉藥。兩種類型的鎮(zhèn)痛藥均在控制正常痛、即時痛(immediatepain)或傷害性疼痛中相當(dāng)有效。然而，它們對于 抗某些類型的痛覺過敏性疼痛(比如神經(jīng)病理性疼痛)的有效性較低。許 多醫(yī)師不愿開用于影響神經(jīng)病理性疼痛所需的高劑量的麻醉劑，這是因為 施用這些化合物引起的副作用及患者可能對其上癮的可能性。NSAID比麻 醉劑的功效低得多，所以需要更高劑量的這些化合物。然而，這是不想要 的，因為這些化合物引起胃腸道的刺激。
因此，需要有抗痛覺過敏性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛治療，所述治療足 以有效控制神經(jīng)病理性及其它痛覺過敏性綜合征中的痛覺，并且沒有嚴重 的副作用或引起患者對其上癮。
EP國A-0050671描述了式(I)
<formula>formula see original document page 5</formula>(1》
的噻唑并[3，2-a嘧咬衍生物
其顯示出免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)，并可用作治愈自身免疫性疾病比如腎炎和類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎的藥劑。 一種具體的式(I)化合物為6-(對-氯節(jié)基)-5H-2，3,6，7-四氫 -5,7-二氧代瘞唑并[3,2-3嘧啶，或者稱為奴氯美酮，以下稱為化合物l，其 結(jié)構(gòu)式為
化合物1最初是作為用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或腎炎的潛在性治療而開發(fā) 的，但是現(xiàn)在在這些適應(yīng)癥中已經(jīng)終止了開發(fā)。在臨床前研究中，奴氯美 酮恢復(fù)患有自身免疫性神經(jīng)病的小鼠的腎功能并抑制脂多糖誘導(dǎo)的多克 隆抗體應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個方面是式(I)化合物
二o
在制備用于治療痛覺過敏性疼痛病癥及其癥狀中的用途
其中R為脂環(huán)基；芳基乙基；或被卣素、低級烷基、烷氧基、OH、 NH2、 NH烷基、N(烷基)2、 CN或N02取^f戈的苯基或千基。
本發(fā)明的可替換的表達方式為用于治療有此需要的患者中痛覺過敏性 疼痛的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的式(I)化合物。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在施用式(I)化合物后，沒有觀察到對正常的生理學(xué)傷害感 受有影響，因此，當(dāng)使用這樣的化合物來治療痛覺過敏時，不存在正常感 官知覺的減少。
具體實施例方式
本文使用的術(shù)語"卣素"包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
本文使用的術(shù)語"烷基"指直鏈或支鏈不飽和脂肪族部分，包括例如曱 基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基等。"低級烷基"指 包含1至個6碳原子的烷基。
本文使用的術(shù)語"烷氧基"指通過氧原子連接的如上定義的烷基。其包 括但不限于甲錄、乙氧基、丙狄、異丙猛、丁錄、叔丁錄、戊 狄、己錄等。"低級烷氧基"指包含l至6個^f、子的烷錄。
本文使用的術(shù)語"芳基"指任選取代的芳香環(huán)體系和任選取代的多環(huán)體 系，所述多環(huán)體系具有兩個或多個環(huán)狀環(huán)，其中至少一個為芳香性的。該 術(shù)語包括例如苯基。
本文使用的術(shù)語"芳基乙基"指芳基取代的乙基。
本文使用的術(shù)語"脂環(huán)"指其可包含一個或多個非共軛雙鍵的非芳香飽 和的環(huán)狀部分。該基團可任選地被取代。其包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、
環(huán)戊基、環(huán)庚基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)丙基等。
本發(fā)明中所用的優(yōu)選的化合物為6-(對-氯芐基)-5H-2，3，6，7-四氫-5,7-二 氧代噢唑并[3，2-a嘧啶，即化合物1。<formula>formula see original document page 7</formula>
用于本發(fā)明的化合物可以以如下的兩種互變異構(gòu)形式存在
用于本發(fā)明的化合物可以是手性的。它們可以是單一對映異構(gòu)體形式，
例如基本上不含相反對映異構(gòu)體的(R)對映異構(gòu)體，或者反之亦然，或非對 映體(如果所述R基團為手性的)或外消旋體。
本發(fā)明的化合物可以以外消旋形式制備，或者通過特定的合成或拆分 制備成單一的對映異構(gòu)體形式，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的。所述化合物 可以例如通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)被拆分成它們的對映異構(gòu)體，比如通過用光學(xué)活性 的酸形成鹽，然后分級結(jié)晶和再生游離堿，從而形成非對映體對?；蛘?， 所述新化合物的對映異構(gòu)體可以通過使用手性柱的HPLC進行分離。
為了在本發(fā)明中使用，通式的化合物可以作為前藥給出。本文使用的 術(shù)語"前藥，，指作為藥物前體的化合物，所述化合物在給藥后，在體內(nèi)經(jīng)由 某些化學(xué)或生理過程釋放藥物。此外，用于本發(fā)明的化合物可以是保護的 氨基、保護的羥基或保護的氛基形式。本文使用的術(shù)語"保護的氨基"、"保 護的鞋基，，和"保護的羧基"指以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方式受到保護的氨 基、羥基和羧基。例如，氨基可以通過千lL&羰基、叔丁g羰基、乙酰
7 基或類似基團保護，或者是鄰苯二甲酰亞JtJ^或類似基團的形式。羧基可 以以易于分解的酯的形式進行保護，比如甲酯、乙酯、芐酯或叔丁酯。羥 基可以通過烷基或類似基團保護。
所述通式的某些化合物可以以溶劑化物的形式存在，比如水合物，其 也落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明所用的化合物可以是藥學(xué)可接受的鹽的形式，例如無機酸或有 機酸的加成鹽。這樣的無機酸加成鹽包括，例如氫溴酸、鹽酸、硝酸、磷 酸和硫酸的鹽。有機酸加成鹽包括，例如醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺
酸、檸檬酸、2-(4-氯苯SJ0-2-甲基丙酸、1，2-乙烷二磺酸、乙磺酸、乙二 胺四乙酸(EDTA)、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、N-羥乙?；鶎Π?苯基砷酸、4-己基間^l酚、馬尿酸、2-(4-羥基苯曱?；?苯甲酸、1-羥基 -2-萘甲酸、3-羥基-2-萘?xí)跛帷?-羥基乙磺酸、乳糖酸、正十二烷基硫酸、 馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、曱磺酸、曱基硫酸、粘酸、2-^酸、雙羥萘 酸、泛酸、對氨基苯膦酸(phosphanilicacid)((4-tJ^苯基)膦酸)、苦味酸、 水楊酸、硬脂酸、丁二酸、鞣酸、酒石酸、對苯二曱酸、對-曱笨璜酸、10-十一碳烯酸等。
鹽也可以是與無機喊形成的。這樣的無機喊鹽包括，例如，鋁、鉍、 鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅等的鹽。有機堿鹽包括，例如，N,N-二千基乙二 胺、膽堿(作為平衡離子)、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、N,N-二(去氬+〉香 基)乙二胺、N-甲基葡糖胺、普魯卡因、三(羥甲基)氨基乙烷("TRIS，，)等的 鹽。
應(yīng)當(dāng)理解，這些鹽可以在治療中使用，前提為它們是藥學(xué)可接受的。制備。
用于本發(fā)明的化合物可以通過本領(lǐng)域任意適宜的方法制備。可提及的 參考為EP-A-0050671,將其內(nèi)容通過引用并入本文。
可以基于組分的物理化學(xué)差異以已知方法將獲得的終產(chǎn)物或中間體的 任意混合物分離成純的終產(chǎn)物或中間體，所述方法例如通過色譜法、蒸餾、 分級結(jié)晶進行或者如果在這種情況下適當(dāng)或可能的話通過形成鹽進行。
所述化合物的活性和選擇性可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法來 測定。
本發(fā)明涉及式(I)的化合物在制備用于預(yù)防、治療或改善痛覺過敏性疼 痛病癥及其癥狀的藥物中的用途。
所述痛覺過敏性疼痛病癥可以是如下神經(jīng)病引起的結(jié)果，所述神經(jīng)病 包括但不限于糖尿病神經(jīng)病變、多神經(jīng)病、癌癥痛、纖維肌痛、肌筋膜痛 綜合征、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺痛、骨盆/會陰痛、皰滲后神經(jīng)痛、復(fù)雜性區(qū)域疼
痛綜合征、坐骨神經(jīng)痛/腰部神經(jīng)根病、推管狹窄、顳頜關(guān)節(jié)紊亂、HIV痛、 三叉神經(jīng)痛、慢性神經(jīng)病理性疼痛、下背部痛、背部手術(shù)失敗疼痛(failed back surgery pain)、術(shù)后痛、身體創(chuàng)傷后疼痛(包括槍擊、RTA、燒傷)、 心痛、胸痛、骨盆痛/pid、關(guān)節(jié)痛(腱炎、滑嚢炎、急性關(guān)節(jié)炎)、頸痛、腸 痛、幻肢痛、產(chǎn)痛(分^/C-切開)、腎絞痛、急性帶狀皰瘆痛、急性胰炎、 爆發(fā)性疼痛(breakthrough pain )(癌癥)、疼痛的膀胱綜合征/間質(zhì)性膀胱 炎、前列腺炎和痛經(jīng)/子宮內(nèi)膜異位。
式(I)的化合物可以與其它治療劑或不與其它治療劑一起施用，所述其 它治療劑例如為鎮(zhèn)痛藥和抗炎藥(比如阿片類物質(zhì)、類固醇、NSAID、 M 素類物質(zhì)、速激肽調(diào)節(jié)劑或緩激肽調(diào)節(jié)劑)或抗痛覺過敏藥(比如加巴噴丁 、 普瑞巴林、M素類物質(zhì)、鈉或鈣離子通道調(diào)節(jié)劑、抗癲癇藥或抗抑郁藥)。
通常，式(I)的化合物可通過任意合適的途徑在任意合適的制劑中通過 已知的方式施用。本發(fā)明的化合物優(yōu)選口服、腸胃外、舌下、經(jīng)皮、鞘內(nèi) 或經(jīng)粘膜施用。其它合適的途徑包,脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、吸入、鼻腔、 直腸、局部和膀胱內(nèi)?？贘IMfe用時施用的藥物量將典型地高于例如靜脈內(nèi) 施用時。
所述組合物可以按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式配制，以便得到控釋的 (例如快速釋放或持續(xù)釋放的)本發(fā)明化合物。適合在這樣的組合物中使 用的藥學(xué)可接受的載體是本領(lǐng)域眾所周知的。本發(fā)明的組合物可包含 0.1-99 wt。/。的活性化合物。本發(fā)明的組合物通常以單位劑型制備。優(yōu)選地， 單位劑量包含0.1至1000 mg量的活性成分。在這些組合物的制劑中使用 的賦形劑是本領(lǐng)域已知的賦形劑。
合適的劑量水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適的方法確 定。然而，應(yīng)當(dāng)理解，任意特定患者的具體劑量水平將取決于多種因素，包括使用的具體化合物的活性、年齡、體重、 一般健康狀況、性別、飲食、 施用時間、施用途徑、排泄速率、藥物組合及痛覺過敏的嚴重程度。優(yōu)選
地，結(jié)構(gòu)(I)的化合物以每日l至4次的頻率施用。
用于口月l拖用的組合物包括用于這樣施用的已知藥物形式，例如片劑、
糖錠、錠劑、含7jC或含油混懸液、可分軟的粉末或顆粒、乳劑、,嚢或 皿嚢、或糖漿或酏劑。意欲用于口服應(yīng)用的組合物可以根據(jù)用于制備藥 物組合物的領(lǐng)域中已知的任意方法制備，這樣的組合物可包含一種或多種 選自甜朱劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑的藥劑，以^更提供藥學(xué)優(yōu)良的和可 口的制劑。片劑包含與適于制備片劑的無毒的藥學(xué)可接受的賦形劑混合的 活性成分。這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑比如碳酸釣、碳酸鈉、
乳糖、磷酸釣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合 劑，例如淀粉明膠、阿拉伯膠、微晶纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；和潤滑劑， 例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。所述片劑可以是未包衣的，或者它們可以 是通過已知的延遲在胃腸道中崩解和吸收的技術(shù)包衣的，從而提供較長時 間的持續(xù)作用。例如，可以使用延時的物質(zhì)比如單硬脂酸甘油酯或二硬脂 酸甘油酯。
用于口服的制劑也可以明膠硬膠嚢的形式存在，其中將活性成分與惰 性固體稀釋劑例如碳酸釣、磷酸釣或高冷土混合，或者以明膠皿嚢的形 式存在，其中將活性成分與水或油介質(zhì)例如花生油、液體石蠟或橄欖油混 合。
含水混懸液包含與適于制^^水混懸液的賦形劑混合的活性物質(zhì)。這 樣的賦形劑為助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖 維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分歉劑或潤濕劑 可以是天然存在的磷脂例如卵磷脂，或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如硬 脂酸聚環(huán)氧乙烷酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物例如十七亞乙基 IL^鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycetanol)，或環(huán)氧乙烷與源自脂肪酸的 偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯。所述含水懸浮液也 可含有 一種或多種防腐劑,例如對羥基苯曱酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯， 一種或多種著色劑， 一種或多種調(diào)味劑和一種或多種甜，未劑,比如蔗糖或糖 精。
含油懸浮液可以通過將活性成分混懸在植物油或礦物油或其它表面活
性劑或清潔劑中而配制，所述植物油例如為花生油、歉脫油、^M由或椰 子油、聚環(huán)氧乙烷氫化蓖麻油，脂肪酸比如油酸，所述礦物油比如液體石 蠟。所述含油懸浮液可包含增稠劑，例如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇?？梢?加入^^未劑(比如上述列出的那些)和調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。這 些組合物可以通#入抗氧化劑比如抗壞血酸來保存。
適于通過加入水來制^水混懸液制劑的可*粉末和顆粒提供了與 分歉劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。也可存在 適宜的朝，朱劑、調(diào)味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥物組合物也可以為水包油型乳劑的形式。所述油相可以是 植物油，例如橄欖油或花生油，或者礦物油，例如液體石蠟，或其混合物。 適宜的的乳化劑可以是天然存在的膠，如阿拉伯膠或黃蓍膠，天然存在的 磷脂，例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如單 油酸失水山梨醇酯，以及所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙 烷失水山梨醇單油酸酯。所述乳劑也可包^朱劑和調(diào)P未劑。
糖漿劑或酏劑可用甜味劑來配制，所述餘朱劑例如甘油、丙二醇、山 梨醇或蔗糖。這樣的制劑也可包含潤濕劑、防腐劑和調(diào)味劑以及著色劑。 所述藥物組合物可以是無菌可注射的含水或油脂性混懸液的形式。該懸浮
劑來制備。所述無菌可注射制劑也可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑
或溶劑中無菌可注射溶液或懸浮液，例如作為在l,3-丁二醇中的溶液?？?以在可接受的賦形劑和溶劑中使用的為水、^溶液和等滲氯化鈉溶液。 此外，通常使用無菌、不揮發(fā)油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可以使 用任意溫和的非揮發(fā)油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸 比如油酸在可注射制劑中使用。
本發(fā)明中使用的化合物也可以以直腸施用所述藥物的形式施用。這些 組合物可以通過將藥物與適宜的非刺激性賦形劑混合來制備，所述賦形劑 在常溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此，將在直腸中溶化以釋放 所述藥物。這樣的物質(zhì)為可可脂和聚乙二醇類。
用于局部給藥的組合物也適用于本發(fā)明。藥學(xué)活性化合物可以*在 藥學(xué)可接受的乳膏、軟膏或凝膠中。適宜的乳膏可以通過將所述活性化合
物加入局部賦形劑比如輕液狀石蠟中，4吏用表面活性劑^b^7jc介質(zhì)中而
制備。軟骨可以通過混合活性化合物與局部賦形劑比如礦物油或蠟來制 備。凝膠可以通過混合活性化合物與包括劍歐劑的局部賦形劑來制備。局 部給藥的組合物也可包含將本發(fā)明的藥學(xué)活性化合物分散在其中使得所 述化合物與皮膚接觸以便經(jīng)皮施用所述化合物的基質(zhì)。
式(I)化合物可用于治療如下神經(jīng)病或炎性疾病(或兩者組合)引起的疼 痛，所述疾病包括但不限于糖尿病神經(jīng)病變、多神經(jīng)病、癌癥痛、纖維肌 痛、肌筋膜痛綜合征、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺痛、骨盆/會陰痛、皰滲后神經(jīng)痛、 復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征、坐骨神經(jīng)痛/腰部神經(jīng)才艮病、推管狹窄、顳頜關(guān)節(jié)
紊亂、HIV痛、三叉神經(jīng)痛、慢性神經(jīng)病理性疼痛、下背部痛、背部手術(shù) 失敗疼痛(failed back surgery pain)、 術(shù)后痛v身體創(chuàng)傷后疼痛(包括槍 擊、RTA、燒傷)、心痛、胸痛骨盆痛/pid、關(guān)節(jié)痛(腱炎、滑嚢炎、急性 關(guān)節(jié)炎)、頸痛、腸痛、幻肢痛、產(chǎn)痛(^/C-切開)、腎絞痛、急性帶狀皰 滲痛、急性腹腺炎穿透痛(acute pancreatitis breakthrough pain )、癌癥 痛、痛經(jīng)/子宮內(nèi)膜異位、疼痛性膀胱綜合征/間質(zhì)性膀胱炎、前列腺炎、 骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊推炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及其它關(guān)節(jié)炎病癥、癌癥、HIV、 慢性肺部炎性疾病、矽肺、肺部肉瘤病、骨吸收疾病、再灌注損傷(包括由 于再灌注后缺血發(fā)作例如心肌梗死、中風(fēng)引起的器官損傷)、自身免疫損傷 (包括多發(fā)性硬化癥、GuiUam-Barre綜合征、重癥肌無力)、移植體v.宿主 排異反應(yīng)、同種異體移植物排斥、感染引起的發(fā)熱和肌痛、AIDS相關(guān)綜 合征(arc)、瘢痕疙瘩形成、瘢痕組織形成、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎和 pyresis、腸易激綜合征、骨質(zhì)疏爭>癥、腦型瘧和細菌性腦膜炎。
以下實施例提供了本發(fā)明基于的證據(jù)。它們利用了在下述參考中報道 的模型
Bennett, GJ和Xie， YK (1988)., "A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man" , Pain 33:87-107。
Brennan TJ, Vandermeulen EP 和Gebhart GF (1996), "Characterization of rat model of incisional pain" , Pain 64:493-501。
實施例1在大鼠慢性縮窄性損傷(CCI)模型中的單口服劑量研究
外科手術(shù)
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案(Bennett和Xie， 1988 )制備大鼠慢性縮窄性損傷(CCI) 模型。筒言之，用5%異氟烷(isofluorane)/95%氧氣混合物，然后用戊 巴比妥鈉腹腔注射(50 mg/kg)來麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠，到達時稱 重為150-175克。切下左側(cè)后肢的側(cè)面，用75%的乙醇殺菌。切開約lcm 的切口以暴露坐骨神經(jīng)。在所述坐骨神經(jīng)上用4-0縫合線進行四個不牢固 的結(jié)扎。用縫線閉合傷口成層，并且將動物置于溫度控制在30'C的恢復(fù)室 中。然后，在完全意識恢復(fù)和自由活動恢復(fù)后，將動物放回它們的籠中。 在手術(shù)后，常規(guī)蒯度內(nèi)注射一定劑量的阿莫西林(O.l ml， 15mg)以預(yù)防感染。
行為測試(機械性異常性疼痛)
在手術(shù)后14天開始評價CCI大鼠中對機械性刺激響應(yīng)的爪撤回閾值 (PWT)。在施用藥物前的連續(xù)3日和施用藥物后的0.5、 1、 2、 3和4小時 測定基線閾值。使用一組分級的von Frey細絲(hairs)測定PWT。在測定 前至少30分鐘，將所述動物置于在升高的金屬網(wǎng)上的單個的有機玻璃箱 中。從較低力(l g)的細絲開始，將每個細絲垂直地施用于爪墊的中心直到 其稍微彎曲6秒。如果在刺激時所述動物縮回或抬高其爪，然后立即使用 比測定中較低力的細絲。如果沒有觀察到應(yīng)答，然后立即使用較高力的細 絲。記錄誘導(dǎo)可靠的應(yīng)答(在5次試驗中3次陽性)所需的最低量的力作為 PWT的值。
藥物制劑
用在生理鹽水(IO mg/ml)中的5% DMSO制備化合物1的懸浮液。施 用前，超聲處理所述懸浮液至少20分鐘。
結(jié)果
在該研究中的所有數(shù)據(jù)以平均值士S.E.M.給出，并且視情況而定用t檢 驗和單因素ANOVA分析。顯著性水平設(shè)定為p<0.05。
賦形劑對照在口服(p.o.)賦形劑之前和之后0.5、 1、 2、 3和4小時測 定爪撤回閾值(PWT)。在觀察的時間點，在不同的賦形劑對照組中沒有觀 察到顯著性變化。在6小時時間點進行無賦形劑對照的PWT測定。
口服應(yīng)用20 mg/kg劑量的化合物1顯著地增加了給藥后多個時間點、 給藥后第2、 3和4小時的CCI大鼠的PWT。在2、 3和4小時，與在賦
形劑處理組的相同的時間點的PWT相比，PWT為2.6+0.7 g、 3.0±0.7 g 和6.3±0.8 g， p<0.05、 0.01和0.001。所述化合物的效果持續(xù)超過6小時 (4.0+0.5 g，與月良藥前對照相比，P<0.001)。
上述結(jié)果表明化合物l是口服生物可利用的，并且在CCI模型中以20 mg/kg 口服(p.o.)的劑量具有緩解神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的顯著效果。
實施例2在CCI模型中的劑量-反應(yīng)研究
制備CCI動物和使用von Frey細絲評價機械性異常性疼痛的方法如在 實施例l中所描述?？谠铝冀o予四種劑量的化合物l(l、 3、 10、 30mg/kg), 在給藥后30、 60、 120、 180、 240和360分鐘再評價PWT。
發(fā)現(xiàn)化合物1劑量依賴性地增加CCI大鼠中的PWT。單因素ANOVA 分析表明在120 (P<0.05)、 180、 240和360分鐘(PO.001)不同劑量組之間 存在顯著性差異。事后分析表明口服給藥化合物1后在180、 240和360 分鐘在不同劑量組之間存在顯著性差異。
結(jié)果表明化合物1以劑量依賴的方式逆轉(zhuǎn)了在CCI大鼠中產(chǎn)生的異常 性疼痛。結(jié)果表明該化合物可用于治療神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛狀 態(tài)。
實施例3A快速給藥對CCI大鼠中異位放電(Ect叩ic discharge)的影響
在周圍神經(jīng)中的自發(fā)性異位放電是神經(jīng)病理性疼痛動物模型的特征性 現(xiàn)象。認為其是產(chǎn)生和保持脊柱致敏作用和神經(jīng)病理性狀態(tài)的原因。因此， 如果化合物具有抑制異位放電的作用，則其可用于治療神經(jīng)病理性疼痛病 癥。
CCI模型大鼠的制備和神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的評價如實施例1所描述。 在具有通過如前所述的von Frey細絲測定證實的神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的 CCI大鼠上進行電生理學(xué)試驗。在包含l。/。的DMSO、 66。/。的PEG200和 33%的鹽水的賦形劑中制備5 mg/ml的化合物1的混懸液。
用仲丁硫巴比妥鈉(inactin，120 mg/kg,i.p.用于謙導(dǎo)，和隨后60 mg/kg， i.p.用于保持，如有必要)麻醉具有神經(jīng)病理性疼痛的大鼠。常規(guī)監(jiān)測動脈 血壓和心率，并使用熱毯系統(tǒng)(thermo-blanket system)連續(xù)監(jiān)測直腸溫度并 保持在生理范圍內(nèi)。 切開左后肢皮膚，縫合到不銹鋼"o"環(huán)上以形成油池。仔細地暴露腓
腸神經(jīng)，重復(fù)地梳理成包含僅僅一個或幾個纖維的小維管束，檢查自發(fā)性
活動。在急性實驗中，當(dāng)發(fā)現(xiàn)活性纖維時，獲得至少20分鐘的對照記錄。 隨后，監(jiān)測賦形劑和化合物1(5 mg/kg， i.v)的作用。在施用所述藥物后監(jiān) 測至少40分鐘的活性。聯(lián)機監(jiān)測自發(fā)性活動的頻率，并在試驗后脫機分析。
為靜脈內(nèi)(i.v.)注射，使用由1%的DMSO、 66。/o的聚乙二醇(PEG 200) 和33%的生理鹽水制備的化合物1的懸浮液(5 mg/ml)。然后，在施用前 30分鐘超聲處理所述懸浮液。
在兩個單獨的CCI制劑中測定賦形劑和化合物1 (5 mg/kg i.v)的作用。 在第一制劑中，所述賦形劑將異位放電從682imps/分鐘降低至591,同時 化合物1 (5 mg/kg i.v)將異位放電從682 imps/分—降低至426。在第二制劑 中，在分別iv注射賦形劑和15mg/kg的化合物后，異位放電從298 imps/ 分4中降^f氐至215和104。
在四個纖維中，在藥物應(yīng)用前的平均異常放電發(fā)出率為489.7±125.8 imps/分鐘(從248至730 imps/分鐘)。在注射賦形劑后，其稍微但不統(tǒng)計學(xué) 上地降低至440士129.0imps/分鐘(對照的87.6±5.8%， P>0.05);在施藥后， 異位放電的發(fā)出率顯著地降低至307.6+113.4 imps/分鐘(對照的 57.1±9.00/0， PO.Ol)。
從這兩個試驗中，看出化合物1(5 mg/kg i.v)在降低自發(fā)異位放電中有 效，所述異位放電為在確定CCI誘導(dǎo)的神經(jīng)病后在大鼠周圍神經(jīng)中測定 的。
實施例3B長期服藥對CCI大鼠中產(chǎn)生異位放電的作用
在手術(shù)后16天證實神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)后，給予動物(賦形劑組4只， 藥物處理組4只)賦形劑(在生理鹽水中的5% DMSO)或者化合物1 (30 mg/kgp.o.),每天兩次，共8天。在給藥方案結(jié)束時，在電生理學(xué)試驗前 再評價PWT。
將腓腸神經(jīng)重復(fù)梳理成用于檢查的細束。對于自發(fā)性活動的纖維，記
錄持續(xù)至少i分鐘；對于沒有明顯的自發(fā)性活動的纖維，記錄持續(xù)至少30 秒。在每個腓腸神經(jīng)中，梳理并記錄盡可能多的纖維(在每只動物中平均超
過150束)。
4只CCI大鼠在用化合物1處理8天后，PWT明顯高于賦形劑處理的 那些。
在賦形劑處理組中，檢查了來自4只大鼠的602個纖維。在這些纖維 中，197個纖維具有自發(fā)性活動。相反，在用化合物1處理的4只大鼠中 記錄的633個纖維中，僅存在48個具有自發(fā)性活動的纖維。在DRP處理 組中的"活性纖維，，的比例顯著地低于在賦形劑處理組中的那些(P〈0.001，x2 檢驗)。
在賦形劑處理的大鼠中，自發(fā)性活動為從15至3卯5/分鐘，平均頻率 為1123.5±69.4。在化合物1處理組中，自發(fā)性活動的頻率從13至3532/ 分鐘(平均頻率為888.9±148.5/分鐘)。然而，自發(fā)性活動的平均頻率的比較 不能揭示賦形劑和化合物1組之間的顯著性差異。
用化合物1長期處理CCI大鼠顯著地降低了具有自發(fā)性活動的纖維的 比例。結(jié)果表明化合物1可防止CCI大鼠中異位放電的產(chǎn)生和保持，從而 導(dǎo)致神經(jīng)病理性疼痛病癥的緩解。
實施例4在CCI模型中的耐受性傾向
CCI模型大鼠的制備和使用von Frey細絲的神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的評 價如實施例1中所描述。在手術(shù)前連續(xù)3天的早晨和在手術(shù)后第6、 14、 15和16天評價PWT。從第16天開始，給予所述動物賦形劑(在生理鹽水 中的5。/。DMSO， lml/kg)或化合物l (30 mg/kg p.o.)，每天兩次，共7 天。從第16天開始，在每個早晨和在給藥后4小時評價PWT ，直至手 術(shù)后第23天。
在手術(shù)后第16天，基線PWT顯著地降低至手術(shù)前測定的水平(賦形劑 組手術(shù)前11.86±0.43 g， n=7，化合物1組手術(shù)前10.75±0.35， 11=8)至16 天手術(shù)后的1.23±0.03 g(賦形劑組)和在1.15±0.07 g。在第一天處理后的基 線PWT比在賦形劑組中觀察的高，并且在整個7天試驗服給期間保持在 較高水平上。有趣的是，在7天處理期間，化合物l組的基線提高了。因 此，與基線相比，PWT的值增加了，與在第一天的處理中看到的相比， 在化合物l組中降低了。
在整個7天的處理中，化合物1在逆轉(zhuǎn)降低的PWT中的功效沒有明 顯的損失。而且，在該試驗過程中，在給予第一次每日劑量前每天早上的
基線測量值提高了。
W明，在整個該長期服藥研究過程中非但不損失功
效，而且在重復(fù)服藥時，化合物1還能緩解CCI誘導(dǎo)的機械性異常性疼痛 長ii^藥后12小時。
實施例5在患有糖尿病神經(jīng)病變的大鼠中對PWT的作用
在異氟烷麻醉后，給予成年雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200 g)^^ 內(nèi)注射鏈脲霉素(75mg/kg,Calbiochem)。注射后，A取特別護理以保證水 和食物可隨時獲得，并經(jīng)常更換草墊(bedding)。注射鏈佐霉素后一周，使 用Advantage II與Accutech strips (Roche)檢查血糖含量。僅選擇血糖高于 12 mM/L (216 mg/DL)的大鼠用于行為研究。
使用von Frey細絲對神經(jīng)病理性疼痛狀態(tài)的評價如實施例1所描述。 使用具有較低PWT(<4 g)的大鼠給予賦形劑(l ml/kg, p.o.)或化合物1 (1、 3、 10和30mg/kgp.0)。在口月良給藥后1、 2、 3、 4和6小時再評價PWT。
在PWT中，賦形劑或1 mg/kg的化合物1均未產(chǎn)生顯著的變化。然而， 在高于3 mg/kg p.o.的劑量下，化合物1顯著地增加了患有糖尿病神經(jīng)病變 的大鼠中的PWT。該效果是劑量依賴性的。所述結(jié)果表明化合物1在治 療糖尿病神經(jīng)病變中可具有潛在的治療效果。
實施例6對手術(shù)痛的大鼠Brennan模型中PWT的作用
按照Brennan等人(1996)的描述制備手術(shù)痛模型。簡言之，在手術(shù)前， 用在氧氣(2 L/分鐘)中的5%異氟烷誘導(dǎo)，然后通過靜脈注射戊巴比妥鈉 (50 mg/kg)來麻醉大鼠。在無菌途徑下進行手術(shù)。用75。/。的乙醇溶液滅菌 左后爪。用解剖刀從朝著腳趾的踵緣約0.5 cm處切開1.5 cm的縱切口。 提高并縱向切開跖肌和筋膜，但保持這些組織的結(jié)構(gòu)完整。在用壓力完成 止血后，用5-0縫合線縫合來閉合皮膚。在手術(shù)后，常規(guī)給予所述動物腹 腔內(nèi)注射阿莫西林15 mg/kg以預(yù)防手術(shù)后感染。手術(shù)后在返回其家籠之 前，將所述動物置于溫度控制的恢復(fù)室中，直至意識和自主運動完全恢復(fù)。
賦形劑(n-8)或以3 mg/kg的化合物1(11=7)在PWT中產(chǎn)生了顯著的變 化(PX).05)。然而，在高于3mg/kgp.o.的劑量下，化合物l顯著地增加了 在那些已經(jīng)受過手術(shù)痛誘導(dǎo)的大鼠中的PWT。該作用為劑量依賴性的。 在手術(shù)后4小時，以10 mg/kg和30mg/kg的化合物1分別將PWT從對照 7K平(分別為1.50±0.36 g和1.82±3.8 g)顯著地提高至2.60+0.48 g和
3.80±0.44 g (分別為PO.05和0.001)。 10 mg/kg劑量的鎮(zhèn)痛效果在6小時 后結(jié)束。然而，30 mg/kg劑量的作用在給藥后8小時仍然明顯(6小時， 5.28±0.66 g， 8小時，4.16±0.79 g，與同一時間點的賦形劑組相比，pO.OOl)。
在該手術(shù)痛模型研究中觀察到的特征性現(xiàn)象為化合物1在增加PWT 中的效果，其似乎比在CCI模型或在糖尿病模型中的那些更遲。直到服藥 后4小時才能觀察到所述效果，并持續(xù)至給藥后8小時。
因此，化合物1劑量依賴性地增加了在手術(shù)痛的Brennan模型中的 PWT。所述結(jié)果表明化合物1可在治療臨床手術(shù)痛中具有潛在的治療效 果。在該模型中觀察到的延遲鎮(zhèn)痛作用的原因是未知的。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物在制備用于治療痛覺過敏性疼痛病癥及其癥狀中的用途，其中R為脂環(huán)基；芳基乙基；或被鹵素、低級烷基、烷氧基、OH、NH2、NH烷基、N(烷基)2、CN或NO2取代的苯基或芐基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述病癥為神經(jīng)病理性疼痛。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述神經(jīng)病理性疼痛由糖尿病神經(jīng)病 變引起。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述神經(jīng)病理性疼痛為背痛。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為纖維肌痛。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為HIV痛。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為三叉神經(jīng)痛或顳頜關(guān)節(jié)紊亂。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為皰滲后神經(jīng)痛。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛為疼痛性膀胱綜合征/間質(zhì) 性膀胱炎、前列腺炎或痛經(jīng)/子宮內(nèi)膜異位。
11. 根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述疼痛選自腸痛、癌癥痛、幻肢 痛、術(shù)后痛、多神經(jīng)病、肌筋膜痛綜合征、骨關(guān)節(jié)炎、胰腺痛、骨盆/會陰 痛、坐骨神經(jīng)痛/腰部神經(jīng)根病、推管狹窄、慢性神經(jīng)病理性疼痛、背部手 術(shù)失敗疼痛、身體創(chuàng)傷后疼痛(包括槍擊、rta、燒傷)、術(shù)后痛、心痛、胸痛、骨盆痛/pid、關(guān)節(jié)痛(腱炎、滑嚢炎、急性關(guān)節(jié)炎)、頸痛、產(chǎn)痛(^/c-切開)、腎絞痛、急性帶狀皰滲痛、急性胰腺炎和^^發(fā)性疼痛。
12. 根據(jù)任一前述權(quán)利要求的用途，其中R為脂環(huán)、芳基乙基、或被 卣素、烷基或烷lL^取代的苯基或節(jié)基。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述化合物為6-(對-氯代千 基)-5H-2,3，6，7-四氫-5，7-二氧代噢唑并[3，2-a]嘧啶。
全文摘要
式(I)化合物在制備用于治療痛覺過敏性疼痛病癥及其癥狀中的用途，其中R為脂環(huán)基；芳基乙基；被鹵素、低級烷基、烷氧基、OH、NH₂、NH烷基、N(烷基)₂、CN或NO₂取代的苯基或芐基。
文檔編號A61P29/00GK101355947SQ200680021999
公開日2009年1月28日 申請日期2006年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月20日
發(fā)明者喬納森·馬克·特里赫恩, 古關(guān)千壽子, 趙飛躍, 阿利斯泰爾·凱爾·狄克遜 申請人:索塞有限公司;尼若瑟魯有限公司