本發(fā)明涉及有機(jī)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及2-取代-4-甲基-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑類化合物及其制備方法和生物活性。

背景技術(shù)：

海洋生物一直是新穎結(jié)構(gòu)天然產(chǎn)物和活性天然產(chǎn)物的重要來源，尤其是海洋微生物已成為重要的海洋藥物資源，越來越受到重視。在已發(fā)現(xiàn)的海洋天然產(chǎn)物中，噻唑(啉)環(huán)是許多有重要生理活性化合物的基本結(jié)構(gòu)單位，藥理研究結(jié)果表明這些天然產(chǎn)物具有廣泛的抗腫瘤、抗病毒(shen，k.，peng，j.m.，li，w.，yan，x.w.，hu，a.x.，chin.j.struct.chem.2014，6，855)抗菌活性(mislin，g.l.，burger，a.，abdallah，m.a.，tetrohedron.2004，60，12139)，甚至還表現(xiàn)出結(jié)合蛋白質(zhì)、dna、rna(akaji，k.，kiso，y.，totalsynthesisofthiangazole.tetrahedron1999，55，10685)等性質(zhì)，這些獨(dú)特的生理活性與噻唑(啉)環(huán)結(jié)構(gòu)有關(guān)(yingy.c.，taori，k.，kim，h.，j.am.chem.soc.，2008，130.8455.)。

除了從自然界發(fā)現(xiàn)外，人們致力于天然產(chǎn)物及其類似物的全合成和獨(dú)特結(jié)構(gòu)片段衍生物的合成研究(karegoudar，p.，karthikeyan，m.s.，prasad，d.j.，mahalinga，m.，holla，b.s.，kumarin.s.，eur.j.med.chem.2008，43，261)。因此對含噻唑或噻唑啉獨(dú)特片段的化合物的合成具有一定的意義。噻唑或噻唑啉的傳統(tǒng)合成方法是經(jīng)α-鹵代銅為原料與硫化試劑反應(yīng)，其中經(jīng)典的方法是hantzsch法((a)hantzsch，a.，weber，j.h.，ber，dtsch.，chem.ges.1887，20，3118(b)aoyama，t.，murata，s.，arai，i.，araki，n.，takido，t.，suzuki，y.，kodomari，m.，tetrahedron，2006，14，3201(c)han，f.s.，tokuyama，h.，tohru，f.，chemcommun，2007，3444(d)busacca，c.a.，dong，y.，spinelli，e.m.，tetrahedron.lett，1996，17，2935(d)lambert，s.g.，taylor，jo-a.m.，wegener，k.l.，woodhouse，s.l.，lincoln，s.f.，warda.d.，newj.chem.2000，24，541(e)liu，l.，lam，y.w.，wong，w.y.，j.organomet.chem.2006，691，1092(f)nasveschuk，c.g.，ungermannova，d.，liu，x.d.，phillips，a.j.org.lett.2008，16，3595)。文獻(xiàn)(tangl.j.，qianb.h.，mag.z.，liuw.w.，chinesejstrucchem，2015，4，645-647.)合成路線采用酯經(jīng)脫羧、酰氯化后再酰胺化的常規(guī)方法，本發(fā)明改進(jìn)了合成路線直接由酯和胺酰胺化合成目標(biāo)化合物，簡化了反應(yīng)路線，獲得環(huán)保效應(yīng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

綜上，本發(fā)明以天然海洋代謝產(chǎn)物largozole為模板，進(jìn)行了含噻唑-噻唑啉駢合骨架的雜環(huán)化合物的設(shè)計(jì)與合成，并對化合物進(jìn)行了生物活性測試，期望得到結(jié)構(gòu)新穎且具有一定生物活性的化合物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供2-取代-4-甲基-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑類化合物和其制備方法及對脲酶的抑制活性和對大腸桿菌(escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)的抑制作用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

4-甲基-2-取代-5-(2-噻唑啉基)噻唑類化合物的合成，其特征是有如下通式：

式中

r＝3a：c6h5；3b：3-ch3c6h4；3c：4-fc6h4；3d：4-clc6h4；3e：4-brc6h4；

3f：4-ch3oc6h4；3g：3-ch3oc6h4；3h：furanyl-2-yl；3i：thiophen-2-yl

一類2-取代4-甲基-5-(2-噻唑啉基)-1，3噻唑-類化合物的制備方法，步驟包括：

a、將腈類化合物與17％硫化胺水溶液在有機(jī)溶劑中反應(yīng)，向反應(yīng)液中加入冰水，析晶得到硫代酰胺類化合物

b、上述制得的硫代酰胺類化合物與2-氯乙酰乙酸乙酯在乙醇溶劑中回流，tlc跟蹤，減壓除去溶劑，冰乙酸和水(v/v，1∶3)重結(jié)晶得到2-取代-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯。

c、2-取代-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯與乙醇胺反應(yīng)制備n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-取代噻唑-5-甲酰胺。

d、n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-取代噻唑-5-甲酰胺與五硫化二磷在甲苯溶劑中成環(huán)反應(yīng)，不需柱層析，二氯甲烷和丙酮重結(jié)晶得到目標(biāo)化合物。

所屬步驟b中后處理方法為冰乙酸和水重結(jié)晶，采取簡單方法重結(jié)晶進(jìn)行產(chǎn)品的純化，操作簡單，降低了實(shí)驗(yàn)成本，適合工業(yè)化。

所屬步驟c中2-取代-4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯與過量乙醇胺直接酰胺化反應(yīng)制備n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-取代噻唑-5-甲酰胺，避開酰氯化反應(yīng)，此法環(huán)保、操作簡單、降低生產(chǎn)成本。

所屬步驟d中反應(yīng)的純化步驟由二氯甲烷和丙酮(v/v，4∶1)重結(jié)晶取代柱層析

本發(fā)明有益效果：

1、本發(fā)明提供了由腈類化合物經(jīng)硫化、環(huán)合、酰胺化后再環(huán)合反應(yīng)合成噻唑-噻唑啉化合物的合成方法，避開酰氯化反應(yīng)，且后處理全部以以重結(jié)晶方法純化產(chǎn)物，制備反應(yīng)操作簡便，產(chǎn)率較高，對環(huán)境友好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

2、本發(fā)明對目標(biāo)化合物進(jìn)行了抑制脲酶活性，抑制大腸桿菌(escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)和金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)活性的生物活性評價(jià)，具有一定的生物活性，因而具有較好的醫(yī)藥、農(nóng)藥等行業(yè)應(yīng)用前景。

附圖說明

以下是目標(biāo)化合物譜圖附圖說明

圖1是4-甲基-2-苯基-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖2是4-甲基-2-苯基-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳核磁譜圖

圖3是4-甲基-2-(3-甲基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖4是4-甲基-2-(3-甲基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳核磁譜圖

圖5是4-甲基-2-(4-氟苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑備氫核磁譜圖

圖6是4-甲基-2-(4-氟苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑備碳核磁譜圖

圖7是目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-氯苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖8是目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-氯苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳核磁譜圖

圖9是4-甲基-2-(4-溴苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖10是4-甲基-2-(4-溴苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳核磁譜圖

圖11是4-甲基-2-(4-甲氧基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖12是4-甲基-2-(4-甲氧基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳核磁譜圖

圖13是4-甲基-2-(呋喃-2-基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑氫核磁譜圖

圖14是4-甲基-2-(呋喃-2-基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑碳?xì)浜舜抛V圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一：芳基(雜環(huán)基)硫代酰胺類化合物的制備

室溫?cái)嚢钘l件下，向干燥圓底燒瓶中加入15mmol芳腈、20ml無水甲醇，滴加17％(27.5mmol)的硫化銨溶液，充分混合反應(yīng)液，于55℃反應(yīng)，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液慢慢加入100ml冰水，析出黃色固體，抽濾，用冰水洗滌，干燥。粗產(chǎn)品可用乙醇和水進(jìn)行重結(jié)晶。

實(shí)施例二：4-甲基-2-芳基(雜環(huán)基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯的制備

8mmol取代硫代苯甲酰胺、10mmol2-氯乙酰乙酸乙酯、30ml無水乙醇，攪拌回流反應(yīng)，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。冰水浴析晶或減壓濃縮，殘留物用冰乙酸重結(jié)晶得目標(biāo)產(chǎn)物。將1g粗品溶于20ml冰乙酸，待完全溶解后，慢慢加入50ml冰水，白色晶體析出，抽濾，干燥。

實(shí)施例三：n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-芳基(雜環(huán)基)-1，3-噻唑-5-甲酰胺的制備

4-甲基-2-芳基(雜環(huán)基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯2mmol，乙醇胺15ml于一定溫度下反應(yīng)，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后加30ml(15ml×2)乙酸乙酯，20ml水萃取兩次，有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥減壓濃縮既得產(chǎn)品。

[0019]方法中用各種溫度嘗試，所試驗(yàn)的溫度包括25℃、45℃、65℃、85℃、105℃，tlc監(jiān)測進(jìn)程如表1。

表1以n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-(3-甲苯基)-1，3-噻唑-5-甲酰胺為例在不同溫度下的制備時(shí)間和收率

實(shí)施例四：目標(biāo)產(chǎn)物2-取代-4-甲基-5-(2-噻唑啉基)-1，3-噻唑的制備

用15ml甲苯溶解[0019]中的酰胺產(chǎn)物，加入三乙胺9.6mmol、p2s54mmol，回流反應(yīng)，tlc跟蹤，待反應(yīng)結(jié)束，冷卻到室溫，傾倒出甲苯層，水洗滌2-3次，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后濃縮，粗產(chǎn)物用二氯甲烷和丙酮重結(jié)晶。

實(shí)施例五：4-甲基-2-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯的制備

結(jié)構(gòu)式

8mmol2-呋喃硫代苯甲酰胺、10mmol2-氯乙酰乙酸乙酯、30ml無水乙醇，攪拌回流反應(yīng)，tlc監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)體系置于冰水浴析晶，抽濾、干燥。將1g粗品溶于20ml冰乙酸，待完全溶解后，慢慢加入60ml冰水，白色晶體析出，抽濾，得白色針狀晶體，收率95.8％，m.p.66～67℃。ir(kbr，cm^-1)v：3072.63，2025.91，1709.6，1618.32，1490.04，1318.07.¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.58～6.58(m，3h，呋喃氫)，4.38(q，2h，j＝5.0hz，酯亞甲基-cooch2)，2.79(s，3h，thiazole-ch3)，1.41(t，3h，j＝5.0hz，methyl，-o-ch2-ch3)

實(shí)施例六：4-甲基-2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例五，以2-噻吩硫代苯甲酰胺代替2-呋喃硫代苯甲酰胺，得化合物4-甲基-2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯。白色固體，m.p.57～59℃。ir(kbr，cm^-1)v：3072.63，2025.98，1709.85，1618.32，1541.13，1277.51.¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.60～7.11(m，3h，噻吩氫)，4.37(q，2h，j＝5.0hz，酯亞甲基-cooch2)，2.77(s，3h，thiazole-ch3)，1.40(t，3h，j＝5.0hz，methyl，-o-ch2-ch3).

實(shí)施例七：4-甲基-2-(4-甲氧苯基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例五，以4-甲氧基硫代苯甲酰胺代替2-呋喃硫代苯甲酰胺，白色針狀晶體，收率82.6％，m.p.45～47℃。ir(kbr，cm^-1)v：2922.59，1716.00，1618.12，1490.04，1101.26.¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.85～7.31(m，4h，苯環(huán)氫)，4.40(q，2h，j＝5.0hz，酯亞甲基-cooch2)，2.83(s，3h，ch3o-phenyl)，2.46(s，3h，thiazole-ch3)，1.43(t，3h，j＝5.0hz，methyl，-o-ch2-ch3).

實(shí)施例八：4-甲基-2-(4-溴苯基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例五，以4-溴苯硫代苯甲酰胺代替2-呋喃硫代苯甲酰胺，白色固體，收率80.5％，m.p.74～75℃.ir(kbr，cm^-1)v：2922.59，1716.00，1618.12，1396.74，1101.26.¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：8.15～7.39(m，4h，苯環(huán)氫)，4.48(q，2h，j＝5.0hz，酯亞甲基-cooch2)，2.89(s，3h，thiazole-ch3)，1.51(t，3h，j＝5.0hz，methyl，-o-ch2-ch3).

實(shí)施例九n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酰胺的制備

結(jié)構(gòu)式

4-甲基-2-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯2mmol，乙醇胺15ml于85℃反應(yīng)50min，加水20ml稀釋，用乙酸乙酯(15ml×2)萃取兩次，有機(jī)相反復(fù)用水洗滌后加無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮得產(chǎn)品。淡黃色固體，收率72.8％，m.p.106～108℃.ir(kbr，cm^-1)v：3416.58，3131.75，2940.59，1647.2，1541.29，1492.90，1369.75，1303.75，1283.85，1223.25。¹hnmr(cd3od，300mhz)δ：7.79～6.72(m，3h，呋喃氫)，2.73(s，3h，thiazole-ch3)，3.80～3.39(m，2個(gè)亞甲基4h，-nh--ch2-ch2-oh)

實(shí)施例十n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酰胺的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例九，以4-甲基-2-(噻吩-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯代替4-甲基-2-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯。產(chǎn)品為淡黃色固體，收率89.4％，m.p.67-68℃.ir(kbr，cm^-1)v：3423.69，3131.75，2940.59，1647.2，1541.29，1492.90，1369.75，1303.75，1283.85，1223.25。¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.54～7.09(m，3h，噻吩氫)，3.62～3.42(dd，2個(gè)亞甲基4h，-nh-ch2-ch2-oh)，2.72(s，3h，thiazole-ch3)，2.03(s，1h，-oh)

實(shí)施例十一n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-(3-甲苯基)-1，3-噻唑-5-甲酰胺的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例九，以4-甲基-2-(4-甲苯基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯代替4-甲基-2-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑-5-甲酸乙酯。產(chǎn)品為淡黃色固體，收率75％，m.p.141-142℃.ir(kbr，cm^-1)v：3431.43，3300.70，2928.23，2880.92，1632.41，1555.36，1413.66，1312.38。¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：8.26(s，1h，-nh-)，7.8～7.10(m，4h，苯環(huán)氫)，3.66～3.46(dd，2個(gè)亞甲基4h，-nh-ch2-ch2-oh)，2.71(s，3h，thiazole-ch3)，2.40(s，3h，ch3-phenyl)1.75(s，1h，-oh)

實(shí)施例十二目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-苯基-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3a)的制備(3a)

結(jié)構(gòu)式

n-(2-羥乙基)-4-甲基-2-苯基-1，3-噻唑-5-甲酰胺2mmol，溶于15ml甲苯中，加入三乙胺5ml和p2s55mmol，回流反應(yīng)，tlc監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束冷卻至室溫，將上層甲苯層傾出，水洗2次，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，用二氯甲烷和丙酮(v/v，5∶1)重結(jié)晶，收率62.8％。白色晶體，m.p.62-63℃。ir(kbr，cm^-1)v：2842.81，1620.29，1576.69，1430.45，1332.14。。¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.95～7.43(m，5h，phh)，4.39(t，2h，j＝6.0hz，thiazolineringn-ch2)，3.47(t，2h，j＝6.0hz，thiazolinerings-ch2)，2.76(s，3h，thiazole-ch3)。¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：168.19(s，thiazolec，s-c＝n)，159.66(s，thiazolinec，s-c＝n)，154.80(s，thiazolec，n-c)，133.10～126.45(m，phenylc+thiazole5)，64.17(s，thiazoline4，n-c)，35.06(s，thiazoline5)，21.49(s，c6h5-ch3)。(es+)m/z：338(m+h⁺，100)

實(shí)施例十三目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(3-甲基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3b)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率48.8％，白色晶體，m.p.68-69℃。ir(kbr，cm^-1)v：2848.28，1600.14，1578.61，1458.74，1332.64。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：7.96～6.96(m，4h，苯環(huán)h)，4.41(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.48(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.78(s，3h，噻唑ch3)，2.43(s，3h，ch3ph).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：168.44(s，噻唑，s-c＝n)，159.63(s，噻唑啉，s-c＝n)，154.71(s，噻唑，n-c)，138.83～114.35(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.21(s，噻唑啉n-c)，35.08(s，噻唑啉c-c-s)，21.35(s，ch3ph)，17.82(s，噻唑ch3).(es+)m/z：291(m+h⁺，100).(es+)m/z：275(m+h⁺，100)

實(shí)施例十四目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-氟苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3c)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率53.5％。白色晶體，m.p.130-131℃。ir(kbr，cm^-1)v：2800，1618.84，1596.42，1405.63，1213.7。¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.94～7.10(m，4h，苯環(huán)h)，4.39(t，2h，j＝6.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.46(t，2h，j＝6.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.75(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：166.92(s，噻唑，s-c＝n)，165.48(s，噻唑啉，s-c＝n)，162.98(s，苯環(huán)c-f)，159.57(s，噻唑，n-c)，129.70～116.03(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.16(s，噻唑啉n-c)，35.10(s，噻唑啉c-c-s)，17.75(s，噻唑ch3).¹⁹fnmr(cdcl3，300mhz)：-109.33.(es+)m/z：279(m+h⁺，100)

實(shí)施例十五目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-氯苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3d)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率51.2％，白色晶體，m.p.139-140℃。ir(kbr，cm^-1)v：2850.24，1617.94，1593.30，1398.36，1230.95。¹hnmr(cdcl3，300mhz)δ：7.88～7.40(m，4h，苯環(huán)h)，4.39(t，2h，j＝6.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.48(t，2h，j＝6.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.76(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：166.72(s，噻唑，s-c＝n)，159.53(s，噻唑啉，s-c＝n)，154.89(s，噻唑，n-c)，136.64～126.78(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.18(s，噻唑啉n-c)，35.12(s，噻唑啉c-c-s)，17.77(s，噻唑ch3).(es+)m/z：295(m+h⁺，100)

實(shí)施例十六目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-溴苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3e)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率40.5％，淡黃色晶體，m.p.136-137℃。ir(kbr，cm^-1)v：2849.36，1617.94，1586.36，1497.79，1231.67。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：7.84～7.31(m，4h，苯環(huán)h)，4.42(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.51(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.80(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：166.80(s，噻唑，s-c＝n)，159.00(s，噻唑啉，s-c＝n)，154.94(s，噻唑，n-c)，133.23～125.01(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.18(s，噻唑啉n-c)，35.13(s，噻唑啉c-c-s)，17.77(s，噻唑ch3).(es+)m/z：338(m+h⁺，100)

實(shí)施例十七目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(4-甲氧基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3f)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率42.6％，白色晶體，m.p.133-134℃。ir(kbr，cm^-1)v：2849.24，1617.94，1586.36，1497.79，1231.67。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：8.06～7.72(m，4h，苯環(huán)h)，4.34(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.66(s，3h，ch3oph)，3.46(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.75(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：168.11(s，噻唑，s-c＝n)，159.63(s，噻唑啉，s-c＝n)，154.65(s，噻唑，n-c)，128.23～114.35(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.12(s，噻唑啉n-c)，55.44(s，ch3oph)，35.05(s，噻唑啉c-c-s)，17.81(s，噻唑ch3).(es+)m/z：291(m+h⁺，100).

實(shí)施例十八目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(3-甲氧基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3g)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率64.6％，白色晶體，m.p.80-81℃。ir(kbr，cm^-1)v：2850.62，1677.32，1581.36，1437.81，1255.17。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：7.89～6.84(m，4h，苯環(huán)h)，4.41(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.90(s，3h，ch3oph)3.49(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.78(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：168.01(s，噻唑，s-c＝n)，159.62(s，噻唑啉，s-c＝n)，154.72(s，噻唑，n-c)，134.33～111.15(m，苯環(huán)+噻唑c＝c-s)，64.17(s，噻唑啉n-c)，55.45(s，ch3oph)，35.09(s，噻唑啉c-c-s)，17.82(s，噻唑ch3).(es+)m/z：291(m+h⁺，100).

實(shí)施例十九目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(呋喃-2-基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3h)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率48.5％，褐色晶體，m.p.99-100℃。ir(kbr，cm^-1)v：3100.31，2848.28，1618.15，1582.27，1496.02，1258.62。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：7.75～6.37(m，3h，呋喃環(huán)h)，4.42(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.48(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.72(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：159.40(s，噻唑啉，s-c＝n)，157.90(s，噻唑，n-c)，154.67(s，噻唑，s-c＝n)，148.48(s，呋喃2位碳)，144.30(s，呋喃5位碳)，125.72(s，噻唑c＝c-s)，112.41(s，呋喃3位碳)，110.36(s，呋喃4位碳)，64.15(s，噻唑啉n-c)，35.10(s，噻唑啉c-c-s)，17.72(s，噻唑ch3).(es+)m/z：291(m+h⁺，100).(es+)m/z：251(m+h⁺，100)

實(shí)施例二十目標(biāo)產(chǎn)物4-甲基-2-(噻吩-2-基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3i)的制備

結(jié)構(gòu)式

制備方法同實(shí)施例十二，收率48.5％，黃褐色晶體，m.p.112-113℃。ir(kbr，cm^-1)v：3100.31，2848.28，1620.30，1587.59，1461.93，131.16。¹hnmr(cdcl3，500mhz)δ：7.72～6.93(m，3h，呋喃環(huán)h)，4.40(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉n-ch2)，3.49(t，2h，j＝5.0hz，噻唑啉s-ch2)，2.75(s，3h，噻唑ch3).¹³cnmr(cdcl3，300mhz)δ：161.88(s，噻唑啉，s-c＝n)，159.44(s，噻唑，s-c＝n)，154.50(s，噻唑，n-c)，136.81(s，噻吩2位碳)，128.68～125.73(m，呋喃3，4，5位碳+噻唑c＝c-s)，64.04(s，噻唑啉n-c)，35.12(s，噻唑啉c-c-s)，17.68(s，噻唑ch3).(es+)m/z：267(m+h⁺，100).

目標(biāo)產(chǎn)物對脲酶活性的抑制作用的測定

采用sunrise全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物對脲酶活性(1500，20ku)的初步篩選和ic50值的測定.

酶液

將稱取好的24.000mg尿素酶放入經(jīng)高錳酸鉀溶液洗過的棕色瓶中，用移液槍加入6mlph6.8的磷酸鹽緩沖液，均勻搖蕩使尿素酶充分溶解以備用。

底物溶液

稱取尿素3.000g、苯酚紅2.000mg于容量瓶中，用ph為6.8的緩沖液將其定容至100ml，配成含0.002％苯酚紅的底物液及500mm的尿素以備用。

樣品溶液

用分析天平稱取0.025g樣品，將其加入到25ml的容量瓶中，用dmso定容。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

每一個(gè)樣品做三組平行實(shí)驗(yàn)，dmso做空白。樣品都加入后，進(jìn)行孵化半小時(shí)。

尿素酶抑制劑的初選

孵化半小時(shí)后，將孔酶標(biāo)板放入全自動(dòng)酶標(biāo)儀中，開始用計(jì)算機(jī)檢測。其中設(shè)置測試循環(huán)次數(shù)為八次以減小誤差。結(jié)果見表2：

表2目標(biāo)產(chǎn)物對尿素酶的抑制結(jié)果

對抑制率在50％以上的求其ic50。

將4-甲基-2-(3-甲基苯基)-5-(4，5-二氫噻唑-2-基)-1，3-噻唑(3b)繼續(xù)稀釋至濃度為1000ug/ml、800ug/ml、600ug/ml、400ug/ml、200ug/ml，測定ic50。

根據(jù)樣品濃度和抑制率的曲線，求其ic50為729.93ug/ml。

抑菌活性的測定

菌種選用大腸桿菌(escherichiacoli)，枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)和金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)

平板培養(yǎng)基用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨不加瓊脂培養(yǎng)基。

樣品溶液配制[0074]

菌種分別經(jīng)平板活化、液體培養(yǎng)基活化后涂布法接種。

抑菌活性測試采用牛津杯，樣品量為200μl。

濃度為1mg/ml的鏈霉素為陽性對照，溶劑dmso為空白對照。

每個(gè)平板重復(fù)三次，放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中于35℃培養(yǎng)20小時(shí)。以抑菌圈直接考察活性大小，結(jié)果見表3。

表3目標(biāo)產(chǎn)物對的體外抑菌活性