本發(fā)明涉及一類新化合物的制備與應(yīng)用，具體是2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯的制備及其在作為流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

噻唑羧酸及其酯類化合物具有廣泛的生物醫(yī)藥活性，如抗菌、抗癌、抗病毒、治療高尿酸癥等[US20130338201；US20140275189；CN104418822；Chin.Chem.Lett.,2015,26(10):1315-1318]；近年來，噻唑羧酸及其酯在抗病毒、抗流感領(lǐng)域得到一些應(yīng)用。劉瑜等[J.Enzym.Inhib.Med.Chem.,2011,26(4):506-513]描述了一類噻唑乙酸及其酯，篩選發(fā)現(xiàn)該類化合物A對流感病毒神經(jīng)氨酸酶具有一定的抑制活性；劉瑜等[Bioorg.Med.Chem.,2011,19(7):2342-2348]描述了噻唑烷類化合物的制備，其中化合物B具有流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性；袁靜等[中國新藥雜志,2010,9:801-804]描述了一類氨基噻唑類衍生物，其中化合物C對感染流感病毒的小鼠具有一定的死亡保護(hù)作用；Kessler等[WO 2010128163]描述了化合物D的制備，D對不同流感病毒株和RSV病毒均有一定的抑制作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯:

其中，R選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基；R¹選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、三氟甲基；Y¹選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基；Y²、Y⁴選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氟、氯、溴、碘、氨基或硝基；Y³選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氨基、乙酰氨基或硝基。

本發(fā)明的目的在于提供的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯的制備方法，其特征 在于它的制備反應(yīng)如下：

其中，R選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基；R¹選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、三氟甲基；Y¹選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基；Y²、Y⁴選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氟、氯、溴、碘、氨基或硝基；Y³選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氨基、乙酰氨基或硝基。

本發(fā)明的目的在于提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式Ⅱ所示的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯：

其中，R選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基；R¹選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、三氟甲基；R²選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈或C₃～C₄支鏈烷基、苯基或取代苯基。

本發(fā)明的目的在于提供II所示的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

其中，R選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基；R¹選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、三氟甲基；R²選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈或C₃～C₄支鏈烷基、苯基或取代苯基；X選自：氯、溴、碘。

本發(fā)明的目的在于提供的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯選自下列化合物：

4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯、4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸叔丁酯、4-異丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯、4-丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯、4-三氟甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-(5-甲基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙 酯、4-甲基-2-(5-丁基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-(5-苯基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-(5-亞芐基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(2-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(2-羧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-甲基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-甲氧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-氨基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-氟亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-氯亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(4-羧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(4-硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(4-甲氧羰基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(4-乙酰氨基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(4-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(2-羥基-3-甲氧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(3-甲氧基-4-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯、4-甲基-2-[5-(2,4-二羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯或4-甲基-2-[5-(2-羥基-3,5-二硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯。

本發(fā)明的目的在于提供2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯具有流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性，在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：

本發(fā)明的2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯具有流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性。

具體實施方式

以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進(jìn)一步限定。

實施例1

4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯的制備

50mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸甲酯、100mmol無水碳酸鉀、100mL二氯甲烷，常溫攪拌30min，滴加8.0mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇/水重結(jié)晶得白色晶體2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸甲酯，收率87％，m.p.181～183℃。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ:4.30(s，2H，CH₂)，3.87(s，3H，OCH₃)，2.66(s，3H，CH₃)。

30mmol 2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸甲酯用100mL乙醇溶解，加入45mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，干燥得棕黃色固體4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯，收率85％，m.p.215～218℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.28(bs，1H，CONH)，4.03(s，2H，CH₂)，3.78(s，3H，OCH₃)，2.58(s，3H，CH₃)。

實施例2

4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

50mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、100mmol無水碳酸鉀、100mL二氯甲烷，常溫攪拌30min，滴加8.0mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇/水重結(jié)晶得白色晶體2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯，收率90％，m.p.177～178℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ:4.31(s，2H，CH₂Cl)，4.34(d，J＝7.6Hz，2H，OCH₂)，2.65(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.37(t，J＝7.6Hz，3H，CH₃)。

30mmol 2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯用100mL乙醇溶解，加入45mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，干燥得棕黃色固體4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯，收率82％，m.p.213～215℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.28(bs，1H，CONH)，4.25(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，4.03(s，2H，SCH₂)，2.58(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

實施例3

4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸叔丁酯的制備

50mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯、100mmol無水碳酸鉀、100mL二氯甲烷，常溫攪拌30min，滴加8.0mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇/水重結(jié)晶得白色晶體2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯，收率80％，m.p.230～231℃。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ:4.30(s，2H，CH₂)，2.63(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.57(s，9H，3×CH₃)。

30mmol 2-(2-氯乙酰氨基)4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯用100mL乙醇溶解，加入45mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，干燥得棕黃色固體4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸叔丁酯，收率84％，m.p.195～198℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:3.91(s，2H，SCH₂)，2.63(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.56(s，9H，3×CH₃)。

實施例4

4-異丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯的制備

20mmol 2-氨基-4-異丙基噻唑-5-羧酸甲酯、40mmol無水碳酸鉀、20mL二氯甲烷，常溫 攪拌30min，滴加1.6mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶得2-(2-氯乙酰氨基)4-異丙基噻唑-5-羧酸甲酯粗品。粗品用20mL乙醇溶解，加入30mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，乙醇重結(jié)晶得棕黃色固體4-異丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯，兩步總收率64％，m.p.205～207℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.26(bs，1H，CONH)，4.02(s，2H，SCH₂)，3.86(七重峰，J＝6.8Hz，1H，CH)，3.78(s，3H，OCH₃)，1.23(d，J＝6.8Hz，6H，2×CH₃)。

實施例5

4-丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯的制備

50mmol 2-氨基-4-丙基噻唑-5-羧酸甲酯、100mmol無水碳酸鉀、100mL二氯甲烷，常溫攪拌30min，滴加8.0mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇/水重結(jié)晶得白色晶體2-(2-氯乙酰氨基)4-丙基噻唑-5-羧酸甲酯，收率85％，m.p.230～231℃。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ:8.08(bs，1H，CONH)，4.33(s，2H，CH₂Cl)，3.88(s，3H，OCH₃)，3.07(t，J＝7.6Hz，2H，噻唑環(huán)-CH₂)，1.81–1.67(m，2H，CH₂)，0.99(t，J＝7.6Hz，3H，CH₃)。

30mmol 2-(2-氯乙酰氨基)4-丙基噻唑-5-羧酸甲酯用100mL乙醇溶解，加入45mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，干燥得棕黃色固體4-丙基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸甲酯，收率82％，m.p.211～212℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.26(bs，1H，CONH)，4.02(s，2H，SCH₂)，3.78(s，3H，OCH₃)，2.99(t，J＝7.4Hz，2H，噻唑環(huán)-CH₂)，1.78–1.66(m，2H，CH₂)，0.92(t，J＝7.4Hz，3H，CH₃)。

實施例6

4-三氟甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

20mmol 2-氨基-4-三氟甲基噻唑-5-羧酸乙酯和40mmol三乙胺溶于20mL二氯甲烷，滴加1.6mL氯乙酰氯，常溫反應(yīng)12.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶得2-(2-氯乙酰氨基)4-三氟甲基噻唑-5-羧酸乙酯粗品。粗品用20mL乙醇溶解，加入30mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，乙醇重結(jié)晶得棕黃色固體4-三氟甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯，兩步總收率26％，m.p.228～229℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.48(bs，1H，CONH)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，4.08(s，2H，SCH₂)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例7

4-甲基-2-(5-甲基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

20mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯和40mmol無水碳酸鉀溶于20mL二氯甲烷，滴加1.6mL 2-氯丙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶得2-(2-氯丙酰氨基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯粗品。粗品用20mL乙醇溶解，加入30mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，乙醇重結(jié)晶得白色固體4-甲基-2-(5-甲基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯，兩步總收率74％，m.p.183～185℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:4.32(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，4.16(q，J＝7.3Hz，1H，CH)，2.67(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.73(d，J＝7.3Hz，3H，CH₃)，1.36(t，J＝7.1Hz，3H，CHCH₃)。

實施例8

4-甲基-2-(5-丁基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

20mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯和30mmol無水碳酸鉀溶于20mL二氯甲烷，滴加30mmol 2-氯己酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶得2-(2-氯己酰氨基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯粗品。粗品用20mL乙醇溶解，加入30mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，乙醇重結(jié)晶得黃色固體4-甲基-2-(5-丁基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯，兩步總收率67％，m.p.145～146℃。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ:11.88(bs，1H，CONH)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，4.14(dd，J＝9.0，4.1Hz，1H，CH)，2.67(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，2.22–2.18和1.99–1.86(m，2H，CHCH₂)，1.60–1.43(m，2H，CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.43–1.38(m，2H，CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.36(t，J＝7.1Hz，3H，OCH₂CH₃)，0.94(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例9

4-甲基-2-(5-苯基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

20mmol 2-氨基-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯和30mmol無水碳酸鉀溶于20mL二氯甲烷，滴 加30mmol 2-溴-2-苯基乙酰氯，常溫反應(yīng)4.0h。反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，依次飽和食鹽水洗、飽和碳酸鈉溶液洗、水洗，無水硫酸鈉干燥，脫溶得2-(2-溴-2-苯基乙酰氨基)-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯粗品。粗品用20mL乙醇溶解，加入30mmol硫氰酸鉀，回流6.0h。旋蒸部分溶劑，自然冷卻，析出固體，抽濾，依次乙醇洗、飽和食鹽水洗、水洗，乙醇重結(jié)晶得亮黃色固體4-甲基-2-(5-苯基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯，兩步總收率58％，m.p.198～199℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.53(bs，1H，CONH)，7.58(d，J＝7.6Hz，2H，C₆H₅2,6-H)，7.34(d，J＝7.6Hz，2H，C₆H₅3,5-H)，7.17–7.14(m，1H，C₆H₅4-H)，5.62(s，1H，CH)，4.48(q，J＝7.0Hz，2H，OCH₂)，2.56(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.41(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)。

實施例10

4-甲基-2-(5-亞芐基-4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率75％，m.p.215～216℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.90(bs，1H，CONH)，7.75(s，1H，＝CH)，7.65(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₅2,6-H)，7.57(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₅3,5-H)，7.54–7.47(m，1H，C₆H₅4-H)，4.25(q，J＝7.0Hz，2H，CH₂)，2.65(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)。

實施例11

4-甲基-2-[5-(2-羧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 2-甲?；郊姿岷?.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率88％，m.p.246～247℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:13.16(bs，1H，CONH)，8.23(s，1H，＝CH)，7.95(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄3-H)，7.75–7.71(m，1H，C₆H₄5-H)，7.69(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄6-H)，7.55–7.52(m，1H，C₆H₄4-H)，4.23(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，2.54(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例12

4-甲基-2-[5-(2-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 2-羥基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率69％，m.p.252～254℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.81(bs，1H，CONH)，10.63(s，1H，OH)，8.08(s，1H，＝CH)，7.75(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄6-H)，7.59(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄4-H)，7.34(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄5-H)，7.02(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄3-H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H，CH₂)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例13

4-甲基-2-[5-(3-甲基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-甲基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率88％，m.p.246～247℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.88(bs，1H，CONH)，7.70(s，1H，＝CH)，7.49–7.39(m，3H，C₆H₄4,5,6-H)，7.32(s，1H，C₆H₄2-H)，4.26(q，J＝7.0Hz，2H，OCH₂)，2.65(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，2.38(s，3H，benzene-CH₃)，1.28(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)。

實施例14

4-甲基-2-[5-(3-甲氧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-甲氧基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率86％，m.p.222～223℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.88(bs，1H，CONH)，7.71(s，1H，＝CH)，7.48(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄5-H)，7.23–7.21(m，2H，C₆H₄2,6-H)，7.07(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄4-H)，4.25(q，J＝7.0Hz，2H，OCH₂)，3.83(s，3H，OCH₃)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)。

實施例15

4-甲基-2-[5-(3-氟亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-氟苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和 食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率84％，m.p.240～242℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.92(bs，1H，CONH)，7.70(s，1H，＝CH)，7.63–7.58(m，1H，C₆H₄5-H)，7.46(s，1H，C₆H₄6-H)，7.44(s，1H，C₆H₄2-H)，7.33(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄4-H)，4.23(q，J＝6.6Hz，2H，OCH₂)，2.61(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.27(t，J＝6.6Hz，3H，CH₃)。

實施例16

4-甲基-2-[5-(3-氯亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-氯苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率82％，m.p.218～219℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.95(bs，1H，CONH)，7.70(s，1H，＝CH)，7.64–7.46(m，4H，C₆H₄2,4,5,6-H)，4.24(q，J＝6.8Hz，2H，OCH₂)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)。

實施例17

4-甲基-2-[5-(3-硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-硝基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率89％，m.p.279～280℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:13.00(bs，1H，CONH)，8.46(s，1H，C₆H₄2-H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₄4-H)，8.04(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₄6-H)，7.82(s，1H，＝CH)，7.80–7.82(m，1H，C₆H₄5-H)，4.24(q，2H，J＝6.8Hz，OCH₂)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)。

實施例18

4-甲基-2-[5-(3-氨基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

10mL二氯甲烷和10mL乙酸溶解1.0mmol 4-甲基-2-[5-(3-硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯，加入適量鐵粉和1mL水，常溫攪拌反應(yīng)5h。過濾，水洗，二氯甲烷萃取，飽和碳酸鈉水溶液洗滌有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，脫溶得棕黃色固體，收率69.2％，m.p.202～203℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:7.82(s，1H，＝CH)，7.22–7.18(m，1H，C₆H₄5-H)，6.81(s，1H，C₆H₄6-H)，6.79(s，1H，C₆H₄4-H)，6.70(d，J＝7.6Hz， 1H，C₆H₄2-H)，4.26(q，2H，J＝6.8Hz，OCH₂)，2.67(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)。

實施例19

4-甲基-2-[5-(4-羧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 4-甲?；郊姿岷?.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率87％，m.p.320～321℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:8.07(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄3,5-H)，7.75(s，1H，＝CH)，7.73(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄2,6-H)，4.26(d，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例20

4-甲基-2-[5-(4-甲氧羰基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 4-甲?；郊姿峒柞ズ?.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率78％，m.p.222～224℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:13.01(bs，1H，CONH)，8.09(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₄3,5-H)，7.78(s，1H，＝CH)，7.77(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₄2,6-H)，4.26(q，J＝6.8Hz，2H，OCH₂)，3.88(s，3H，OCH₃)，2.66(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)。

實施例21

4-甲基-2-[5-(4-硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 4-硝基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率88％，m.p.279～280℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:13.09(s，1H，NH)，8.40(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄3,5-H)，7.91(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄2,6-H)，7.86(s，1H，＝CH)，4.27(q，2H，J＝6.8Hz，OCH₂)，2.67(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)。

實施例22

4-甲基-2-[5-(4-乙酰氨基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 4-甲?；阴１桨泛?.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率86％，m.p.288～289℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.82(bs，1H，CONH)，10.29(s，1H，NHAc)，7.77(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₄2,6-H)，7.68(s，1H，＝CH)，7.60(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₄3,5-H)，4.26(d，J＝6.9Hz，2H，OCH₂)，2.67(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，2.09(s，3H，COCH₃)，1.29(t，J＝6.9Hz，3H，CH₃)。

實施例23

4-甲基-2-[5-(4-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 4-羥基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得紅色固體，收率67％，m.p.291～293℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.75(bs，1H，CONH)，10.36(s，1H，OH)，7.66(s，1H，＝CH)，7.52(d，J＝8.2Hz，2H，C₆H₄2,6-H)，6.95(d，J＝8.2Hz，2H，C₆H₄3,5-H)，4.25(q，J＝7.0Hz，2H，OCH₂)，2.66(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)。

實施例24

4-甲基-2-[5-(2-羥基-3-甲氧基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 2-羥基-3-甲氧基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率76％，m.p.242～244℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.80(bs，1H，CONH)，9.75(s，1H，OH)，8.02(s，1H，＝CH)，7.10(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃6-H)，7.06(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃4-H)，6.97(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃5-H)，4.25(q，J＝6.6Hz，2H，OCH₂)，3.85(s，3H，OCH₃)，2.64(s，2H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝6.6Hz，3H，CH₃)。

實施例25

4-甲基-2-[5-(3-甲氧基-4-羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 3-甲氧基-4-羥基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得黃色固體，收率78％，m.p.237～239℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.81(bs，1H，CONH)，9.75(s，1H，OH)，8.03(s，1H，＝CH)，7.11–7.05(m，2H，C₆H₃2,6-H)，6.98(d，J＝7.8Hz，1H，C₆H₃5-H)，4.26(q，J＝6.9Hz，2H，OCH₂)，3.85(s，3H，OCH₃)，2.64(s，2H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(t，J＝6.9Hz，3H，CH₃)。

實施例26

4-甲基-2-[5-(2，4-二羥基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 2，4-二羥基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得紅色固體，收率53％，m.p.>300℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.57(bs，1H，CONH)，11.06(s，1H，OH)，10.36(s，1H，OH)，8.43(s，1H，＝CH)，7.65(m，1H，C₆H₃6-H)，7.10(s，1H，C₆H₃5-H)，6.43(s，1H，C₆H₃3-H)，4.24(s，2H，OCH₂)，2.62(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.28(s，3H，CH₃)。

實施例27

4-甲基-2-[5-(2-羥基-3,5-二硝基亞芐基)-4-噻唑啉酮-2-亞氨基]噻唑-5-羧酸乙酯的制備

1.0mmol 4-甲基-2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸乙酯、2.0mmol 2-羥基-3，5-二硝基苯甲醛和6.0mmol無水乙酸鈉，加入15mL乙酸攪拌溶解，回流10h。冷卻，抽濾，依次乙醇洗，飽和食鹽水洗，水洗，干燥得紅色固體，收率45％，m.p.258～260℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:12.74(bs，1H，CONH)，8.60(d，J＝2.9Hz，1H，C₆H₂5-H)，8.28(s，1H，C₆H₂6-H)，7.93(s，1H，＝CH)，4.27(q，J＝7.1Hz，2H，OCH₂)，2.63(s，3H，噻唑環(huán)-CH₃)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H，CH₃)。

實施例28

2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性

1.實驗原理

化合物MUNANA是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在 360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強(qiáng)度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活性。酶均來自A/PR/8/34(H1N1)病毒毒株。

2.實驗方法

在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶NA懸浮于反應(yīng)緩沖液中(pH6.5)，加入熒光底物MUNANA啟動反應(yīng)體系，37℃孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長為450nm的參數(shù)條件下，測定熒光強(qiáng)度值。根據(jù)熒光強(qiáng)度的減少量可以計算化合物對NA活性的抑制率。

3.檢測樣品：2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯：

其中，R選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基；R¹選自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、三氟甲基；Y¹選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基；Y²、Y⁴選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氟、氯、溴、碘、氨基或硝基；Y³選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈烷基或C₃～C₄支鏈烷基、羧基、C₁～C₂烷氧羰基、羥基、C₁～C₂烷氧基、氨基、乙酰氨基或硝基；R²選自：氫、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直鏈或C₃～C₄支鏈烷基、苯基或取代苯基。

4.活性結(jié)果

優(yōu)選化合物在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測濃度40.0μg/mL時對神經(jīng)氨酸酶的抑制率及其IC₅₀值列入下表1和2：

表1 2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯對神經(jīng)氨酸酶的抑制活性

表2 2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯對神經(jīng)氨酸酶的抑制活性

2-(4-噻唑啉酮-2-亞氨基)噻唑-5-羧酸酯具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。