專利名稱：作為雌激素藥物的取代苯并噁唑和類似物的制作方法
本
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用作雌激素藥物的取代苯并噁唑。
已很好地證明哺乳動(dòng)物組織內(nèi)雌激素的多效作用，現(xiàn)在意識(shí)到雌激素可影響許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas，New EnglandJournal of Medicine 3401801-1811(1999)，Epperson等，PsychosomaticMedicine 61676-697(1999)，Crandall，Journal of Womens Health &Gender Based Medicine 81155-1166(1999)，Monk和Brodaty，Dementia& Geriatric Cognitive Disorders 111-10(2000)，Hurn和Macrae，Journalof Cerebral Blood Flow & Metabolism 20631-652(2000)，Calvin，Maturitas 34195-210(2000)，F(xiàn)inking等，Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000)，Brincat，Maturitas 35107-117(2000)，Al-Azzawi，Postgraduate Medical Journal 77292-304(2001)]。雌激素能夠以幾種方式對(duì)組織發(fā)揮作用，并且最具優(yōu)良特征的作用機(jī)制為它們與導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄變化的雌激素受體相互作用。雌激素受體為配體-激活的轉(zhuǎn)錄因子并且屬于核激素受體超家族。這一家族的其它的成員包括孕酮、雄激素、糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素受體。一旦與配體結(jié)合，這些受體二聚化并且通過直接結(jié)合于DNA的特異性序列(稱作應(yīng)答元素)或者通過與其它的轉(zhuǎn)錄因子(例如AP1)相互作用，然后它直接結(jié)合于特異性DNA序列，可激活基因轉(zhuǎn)錄。[Moggs and Orphanides，EMBO Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal of Biologicalchemistry 27636869-36872(2001)，McDonnell，Principles Of MolecularRegulation.351-361頁(2000)]。一類“共調(diào)節(jié)”蛋白也可以與配體-結(jié)合的受體相互作用并且進(jìn)一步調(diào)節(jié)它的轉(zhuǎn)錄活性[McKenna等，Endocrine Reviews 20321-344(1999)]。它也顯示雌激素受體能夠以配體-依賴的和獨(dú)立的方式抑制NFкB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄。[Quaedackers等，Endocrinology 1421156-1166(2001)，Bhat等，Journal of SteroidBiochemistry & Molecular Biology 67233-240(1998)，Pelzer等，Biochemical & Biophysical Research Communications 2861153-7(2001)]。
通過磷酸化也可激活雌激素受體。通過生長(zhǎng)因子例如EGF介導(dǎo)這種磷酸化并在配體不存在下，引起基因轉(zhuǎn)錄變化[Moggs和Orphanides，EMBO，Reports 2775-781(2001)，Hall等，Journal ofBiological chemistry 27636869-36872(2001)]。
雌激素借以影響細(xì)胞頗具特點(diǎn)的方法是通過所謂的膜受體。這樣受體的存在是有爭(zhēng)論的，但它很好證實(shí)雌激素可非常迅速引起得自細(xì)胞的非基因組應(yīng)答。擔(dān)負(fù)傳導(dǎo)這些作用的分子實(shí)體尚未明確分離，但有證據(jù)提示它至少與雌激素受體的核形成相關(guān)[Levin，Journal ofApplied Physiology 911860-1867(2001)，Levin，Trends inEndocrinology & Metabolism 10374-377(1999)]。
迄今已發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。15年前已克隆第一種雌激素受體且現(xiàn)在稱為ERα[Green等，Nature 320134-9(1986)]。最近才發(fā)現(xiàn)第二種形式的雌激素受體且稱為ERβ[Kuiper等，Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America 935925-5930(1996)]。ERβ的最初研究集中在對(duì)多種配體定義它的親合性，并且確實(shí)觀察到與ERα的某些差異。在嚙齒動(dòng)物上良好繪制ERβ的組織分布且不與ERα相一致。組織例如小鼠和大鼠子宮主要表達(dá)ERα，而小鼠和大鼠肺主要表達(dá)ERβ[Couse等，Endocrinology 1384613-4621(1997)，Kuiper等，Endocrinology 138863-870(1997)]。甚至在相同器官內(nèi)，ERα和ERβ的分布可以被劃分區(qū)域。例如，在小鼠卵巢中，ERβ在顆粒細(xì)胞中高度表達(dá)，并且ERα被限制于卵泡膜和基質(zhì)細(xì)胞[Sar和Welsch，Endocrinology 140963-971(1999)，F(xiàn)itzpatrick等，Endocrinology 1402581-2591(1999)]。然而，存在受體共同表達(dá)的實(shí)例和有來自體外實(shí)驗(yàn)的證據(jù)，表明ERα和ERβ能夠形成雜化二聚體[Cowley等，Journal of Biological chemistry 27219858-19862(1997)]。
已描述大量化合物模擬或者阻斷17β-雌二醇的活性。具有與17β-雌二醇大致相同生物作用的化合物，最有效的內(nèi)源性雌激素，被稱作“雌激素受體激動(dòng)劑”。那些當(dāng)與17β-雌二醇組合給予時(shí)阻斷其作用的化合物被稱作“雌激素受體拮抗劑”。事實(shí)上，存在雌激素受體激動(dòng)劑與雌激素受體拮抗劑活性之間的統(tǒng)一體并且在某些組織中確實(shí)有某些化合物作為雌激素受體激動(dòng)劑起作用而在其它組織中作為雌激素受體拮抗劑起作用。這些具有混合活性的化合物被稱作選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS)并且在治療上是有用的藥物(例如EVISTA)[McDonnell，Journal of the Society for GynecologicInvestigation 7S10-S15(2000)，Goldstein等，Human ReproductionUpdate 6212-224(2000)]。相同化合物可具有細(xì)胞-特異性作用的準(zhǔn)確的原因未被推測(cè)，但受體構(gòu)象和/或共調(diào)節(jié)蛋白的環(huán)境的差異已被提示。
曾經(jīng)一段時(shí)期已知當(dāng)結(jié)合配體時(shí)，雌激素受體采取不同的構(gòu)象。然而，僅在最近才揭示這些變化的連續(xù)性和微細(xì)區(qū)別。通過與各種配體共結(jié)晶已解決ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)并且清晰顯示當(dāng)立體阻礙受體-共調(diào)節(jié)蛋白相互作用所需要的蛋白序列時(shí)，在雌激素受體拮抗劑存在下雙螺旋12的改變[Pike等，Embo 184608-4618(1999)，Shiau等，Cell 95927-937(1998)]。另外，噬菌體展示技術(shù)已用于在不同配體存在下鑒定與雌激素受體相互作用的肽[Paige等，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica 963999-4004(1999)]。例如，肽被鑒定以區(qū)分結(jié)合于全長(zhǎng)雌激素受體激動(dòng)劑17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚的ERα。不同的肽顯示結(jié)合于ERα和ERβ的氯芪酚之間的區(qū)別。這些數(shù)據(jù)指明每一配體潛在地以獨(dú)一無二的和意想不到的可能具有獨(dú)特生物活性的構(gòu)象裝配受體。
如以上所述，雌激素影響全部生物過程。另外，描述性別差異時(shí)(例如發(fā)病率、攻擊應(yīng)答等)，解釋包括男性和女性之間的雌激素水平上的差異是可能的。
本發(fā)明描述
本發(fā)明提供具有下面結(jié)構(gòu)的式I的雌激素化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽，
其中
R1為氫、羥基、鹵素、1-6個(gè)碳原子的烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基、1-6個(gè)碳原子的烷氧基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、1-6個(gè)碳原子的硫烷基、1-6個(gè)碳原子的磺烷基、1-6個(gè)碳原子的磺酰烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基、具有1-4個(gè)選自O(shè)、N或者S的雜原子的5或者6-元雜環(huán)、-NO2、-NR5R6、-N(R5)COR6、-CN、-CHFCN、-CF2CN、2-7個(gè)碳原子的鏈炔基或者2-7個(gè)碳原子的鏈烯基，其中烷基或者鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R2和R2a每個(gè)獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、或者2-7個(gè)碳原子的鏈炔基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、或者1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中烷基或者鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R3、R3a和R4每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、2-7個(gè)碳原子的鏈炔基、鹵素、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基或者1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中烷基或者鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R5、R6每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基；X為O、S或者NR7；
R7為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或者-SO2R5。
當(dāng)本發(fā)明化合物含堿性部分時(shí)，自有機(jī)和無機(jī)酸可形成藥學(xué)上可接受的鹽，例如，所述酸為乙酸、丙酸、乳酸、枸櫞酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、萘甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸，和類似的已知可接受的酸。當(dāng)本發(fā)明的化合物含酸性部分時(shí)，自有機(jī)和無機(jī)堿也可形成鹽，例如堿金屬鹽(例如鈉、鋰或鉀)、堿土金屬鹽、銨鹽、在每一烷基含1-6個(gè)碳原子的烷基銨鹽和在每一烷基含1-6個(gè)碳原子的二烷基銨鹽，和在每一烷基含1-6個(gè)碳原子的三烷基銨鹽。
術(shù)語烷基、鏈烯基和鏈炔基包括分支和直鏈兩者的部分。實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、1-甲基乙烯基等。當(dāng)烷基或者鏈烯基部分被取代時(shí)，它們通常可為單-、二-、三-或者全-取代。鹵素取代基的實(shí)例包括1-溴代乙烯基、1-氟代乙烯基、1，2-二氟乙烯基、2，2-二氟乙烯基、1，2，2-三氟乙烯基、1，2-二溴乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氟-2-溴乙烷、CF2CF3、CF2CF2CF3等。術(shù)語鹵素包括溴、氯、氟和碘。術(shù)語芳基意指苯基、1-萘基或者2-萘基。優(yōu)選的5-6元雜環(huán)包括呋喃、噻吩、吡咯、異吡咯、吡唑、咪唑、三唑、二硫雜環(huán)戊二烯、氧硫雜環(huán)戊二烯、異噁唑、噁唑、噻唑、異噻唑、噁二唑、呋咱、噁三唑、二噁唑、噁噻唑、四唑、吡喃、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、噁嗪、噁噻嗪或者噁二嗪。更優(yōu)選雜環(huán)為呋喃、噻吩或者噻唑。
在本發(fā)明的化合物當(dāng)中，優(yōu)選式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽具有以下結(jié)構(gòu)
其中
R1為2-7個(gè)碳原子的鏈烯基，其中鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R2和R2a每個(gè)獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、2-7個(gè)碳原子的鏈炔基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、或者1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中烷基、鏈烯基或者鏈炔基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R3和R3a每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、2-7個(gè)碳原子的鏈炔基、鹵素、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、或者1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中烷基、鏈烯基或者鏈炔基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代；
R5、R6每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基；
X為O、S或者NR7；
R7為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或者-SO2R5。
更優(yōu)選X為O，且仍然更優(yōu)選X為O，而R1為2-3個(gè)碳原子的鏈烯基，它由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或者N(R5)COR6任選取代。
如在本發(fā)明中使用時(shí)，就提供本發(fā)明覆蓋的化合物或者物質(zhì)而論，術(shù)語“提供”意指直接給予這樣的化合物或者物質(zhì)，或者給予在體內(nèi)形成有效量的化合物或者物質(zhì)的前藥、衍生物或者類似物。
如在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“ERβ選擇性配體”意指在測(cè)量對(duì)ERα和ERβ結(jié)合親合力的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中配體對(duì)ERβ的結(jié)合親合力(如通過IC50測(cè)量的，其中17β-雌二醇的IC50在ERα與ERβ之間相差不大于3倍)比其對(duì)ERα的結(jié)合親和力至少大約10倍。優(yōu)選ERβ選擇性配體對(duì)ERβ具有結(jié)合親和力，它比其對(duì)ERα的結(jié)合親和力至少大約20倍。更優(yōu)選ERβ選擇性配體對(duì)ERβ具有結(jié)合親和力，它比其對(duì)ERα的結(jié)合親和力至少大約50倍。另外優(yōu)選的是ERβ選擇性配體為非-親子宮和非-激乳腺的。
如在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“非-親子宮的”意指在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中產(chǎn)生的濕子宮重量增加小于在相同方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇或17α-乙炔基-17β-雌二醇所觀察到的子宮重量增加的50％。優(yōu)選增加濕子宮重量小于對(duì)雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的25％，并且更優(yōu)選濕子宮重量增加小于對(duì)雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的10％。最優(yōu)選與避免親子宮活性的對(duì)照組(例如媒介組)相比較非-親子宮的ERβ選擇性配體將不顯著(p＞0.05)增加濕子宮重量。
如在本發(fā)明中使用時(shí)，術(shù)語“非-激乳腺的”意指在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中產(chǎn)生的酪蛋白激酶II mRNA增加小于相同方法中對(duì)最大有效劑量下17β-雌二醇或者17α-乙炔基-17β-雌二醇所觀察到的酪蛋白激酶II mRNA增加的50％。優(yōu)選酪蛋白激酶II mRNA增加小于對(duì)雌二醇所觀察到的25％，并且更優(yōu)選酪蛋白激酶II mRNA增加小于對(duì)雌二醇所觀察到的10％。最優(yōu)選與避免激乳腺活性的對(duì)照組(例如媒介組)相比較激乳腺的ERβ選擇性配體將不顯著(p＞0.05)增加酪蛋白激酶II mRNA。
本發(fā)明也提供ERβ選擇性配體在治療或者抑制關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病和子宮內(nèi)膜異位中的用途。更具體地說，ERβ選擇性配體用于治療或者抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或者椎關(guān)節(jié)病，和克郎氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎、感染性結(jié)腸炎或者潰瘍性直腸炎。本發(fā)明另外提供ERβ選擇性配體在治療或者抑制關(guān)節(jié)腫脹或者糜爛，或者在治療或者抑制繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或者外科手術(shù)方法的關(guān)節(jié)損傷中的用途。優(yōu)選ERβ選擇性配體為非-親子宮和非-激乳腺的。
在制備本發(fā)明的化合物中使用的試劑可以為市場(chǎng)上可以得到的或者可通過在文獻(xiàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
在另一方面，本發(fā)明涉及制備本發(fā)明化合物的方法，方法包括下面當(dāng)中的一個(gè)
(a)使下式化合物
其中R1、R2、R2a和X如上定義，與下式化合物反應(yīng)
其中R3和R3a如上定義，并且Y為鹵素、-OH或者1-6個(gè)碳原子的烷氧基；
或者
(b)使如上定義的式II化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌帉W(xué)上可接受的鹽；
或者
(c)拆分式II化合物的異構(gòu)體混合物以分離式II化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體。
例如按照下面的合成流程(I-VIII)，可以制備本發(fā)明的化合物。
流程I
在流程I中，在三乙胺存在下，用市場(chǎng)上可以得到的苯甲酰氯2處理市場(chǎng)上可以得到的二甲氧基苯胺1，產(chǎn)生酰胺3。在亞硫酰氯存在下回流，自市場(chǎng)上可以得到的苯甲酸4也可以制備所需要的苯甲酰氯2。在高溫(200℃)下，用吡啶鹽酸鹽處理，酰胺3轉(zhuǎn)變?yōu)榉踊讲f唑5。
流程II
在流程II中，用在乙酸中的Br2/NaOAc溴化市場(chǎng)上可以得到的硝基-酚6，產(chǎn)生溴代苯酚7。用在EtOAc中的Ra-Ni催化氫化7，得到苯胺8。在吡啶存在下8與苯甲酰氯9(市場(chǎng)上可以得到的，或者自相應(yīng)的苯甲酸和亞硫酰氯制備)偶合，產(chǎn)生酰胺-酯10。在高溫(150℃)下，于酸性條件下(對(duì)-甲苯磺酸)，實(shí)現(xiàn)10至苯并噁唑11的轉(zhuǎn)化。用在二氯甲烷中的三溴化硼使11脫甲基，得到酚基苯并噁唑12。
流程III
在流程III中，在高溫(150℃)下，用在對(duì)-二甲苯中的苯甲酸13和硼酸處理，使苯胺8轉(zhuǎn)變?yōu)楸讲f唑14。用在二氯甲烷中的三溴化硼使14脫甲基，得到酚基苯并噁唑15。
流程IV
在流程IV中，用乙酸中的硝酸使16硝化，產(chǎn)生17，后者在Ra-Ni存在下用氫還原，得到苯胺18。以在流程II中描述的類似的方法，免除在高溫(200℃)下用吡啶鹽酸鹽實(shí)現(xiàn)脫甲基步驟，把苯胺18轉(zhuǎn)變?yōu)楸讲f唑19。
流程V
在流程V中，用在N，N-二甲基甲酰胺中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物/咪唑/4-二甲基氨基吡啶把苯并噁唑20的羥基保護(hù)為甲硅烷基醚21(R3＝Me3C(CH3)2Si)，或者用在二氯甲烷中的乙酸酐/4-二甲基氨基吡啶保護(hù)為酯21(R3＝CH3CO)。在20℃-150℃的溫度范圍內(nèi)，伴隨用于硼酸偶合反應(yīng)的堿(即Na2CO3)存在下，在對(duì)-二甲苯、甲苯、四氫呋喃、二甲氧基甲烷或者1，2-二甲氧基乙烷中，在鈀催化劑[即二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)或者四重(三苯基膦)鈀(O)]存在下，苯并噁唑20和21與各種試劑(即三丁基(乙烯基)錫、三丁基(烯丙基)錫、三丁基(2-呋喃基)錫、硼酸或者氯化鋅)偶合，產(chǎn)生苯并噁唑22和23。
用氫氟酸(48wt.％在水中)或者四丁基氟化銨使22(R3＝Me3C(CH3)2Si)的甲硅烷基醚脫保護(hù)，產(chǎn)生苯并噁唑24。用在二噁烷中的碳酸鉀使22(R3＝CH3CO)皂化，產(chǎn)生苯并噁唑24。在高溫(200℃)下，用二氯甲烷或者吡啶鹽酸鹽中的三溴化硼將苯并噁唑23(R=CH3)脫甲基，得到苯并噁唑24。
流程VI
在流程VI中，在低溫(-78℃)下，用正丁基鋰處理苯并噁唑24，隨后加入親電試劑(即CNCO2Et，Ph(CH3)NCHO，Etl等)，產(chǎn)生化合物25。用三溴化硼(R＝CH3)或者四丁基氟化銨(R＝Me3C(CH3)2Si)將25脫保護(hù)，得到苯并噁唑26[R＝CHO，CO2Et，CH2CH3，C(CH3)2OH]。
在高溫(200℃)下，用吡啶鹽酸鹽處理叔醇25(R＝C(CH3)OH)，產(chǎn)生1-甲基-乙烯基苯并噁唑27。用H2/Pd-C還原27，得到異丙基類似物28。
流程VII
在流程VII中，用在甲醇中的硼氫化鈉還原苯并噁唑29，產(chǎn)生醇30。用三溴化硼在CH2Cl2中處理30一小時(shí)，得到苯并噁唑31，延長(zhǎng)(18小時(shí))處理得到溴化物32。在N，N-二甲基甲酰胺中的氰化鉀和18-冠-6醚處理下，把溴化物32轉(zhuǎn)變成乙腈33。
流程VIII
在流程VIII中，首先用在DMF中的氰化銅(I)處理溴代苯并噁唑35(R＝CH3)，產(chǎn)生相應(yīng)的芳基-腈，后者用三溴化硼處理，得到苯并噁唑36。自第二種合成途徑也可制備苯并噁唑36，其中在鈀催化劑[即四重(三苯基膦)鈀(O)]存在下，用氰化鋅處理苯并噁唑35，得到相應(yīng)的芳基-腈，后者用三溴化硼脫甲基，產(chǎn)生苯并噁唑36。用溴化銅(I)和在DMF中的新鮮制備的甲醇鈉處理苯并噁唑35(R＝H)，產(chǎn)生甲氧基-苯并噁唑37。用乙腈中的N-溴代琥珀酰亞胺將37溴代，得到單溴代苯并噁唑38(主要產(chǎn)物)和二溴代苯并噁唑39(小量產(chǎn)物)。
標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法易于測(cè)定所給出的受試化合物的活性分布。以下簡(jiǎn)短概述幾種有代表性的實(shí)驗(yàn)方法并且可以包括本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)。所有試驗(yàn)，除放射配體結(jié)合試驗(yàn)以外，可用于檢測(cè)化合物的雌激素受體激動(dòng)劑或者拮抗劑活性。通常，通過比較化合物對(duì)參比物雌激素(例如17β-雌二醇、17α-乙炔基，17β-雌二醇、雌酮、二乙基己烯雌酚等)的活性可測(cè)量雌激素受體激動(dòng)劑活性。通常，通過用參比物雌激素共處理受試化合物并比較單獨(dú)用參比物雌激素得到的結(jié)果，可測(cè)量雌激素受體拮抗劑活性。在美國(guó)專利4418068和5998402中也提供SERMs的標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法，其通過引用結(jié)合到本文中。
對(duì)ERα和Erβ結(jié)合親合力的評(píng)價(jià)
在常規(guī)放射配體結(jié)合試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)本發(fā)明的代表性實(shí)施例與17β-雌二醇競(jìng)爭(zhēng)ERα和ERβ兩種受體的能力。這個(gè)實(shí)驗(yàn)方法為技術(shù)人員測(cè)定對(duì)ERα或者ERβ受體的相對(duì)結(jié)合親合力提供方法學(xué)。下面簡(jiǎn)短描述所采用的方法。
結(jié)合選擇性特征的受體提取物的制備。采用作為模板的全長(zhǎng)cDNA和含當(dāng)保持用于表達(dá)的合適的讀框時(shí)亞克隆的合適的限制位點(diǎn)的引物，通過PCR得到配體結(jié)合區(qū)，在此便利定義為DNA結(jié)合區(qū)的全序列的下游。這些模板含人ERα的氨基酸M250-V595[Green等，Nature 320134-9(1986)]和人ERβ的M214-Q530[Ogawa等，Biochemical& Biophysical Research Communications 243122-6(1998)]。把人ERβ克隆到帶有C-末端Flag標(biāo)記物的Nco1-BamH1片段的pET15b(Novagen，Madison WI)中。除加入N-末端His標(biāo)記物以外，按照人ERβ克隆人ERα。通過兩條譜帶的完整序列，檢定采用的所有構(gòu)造的序列。
BL21(DE3)細(xì)胞被用于表達(dá)人蛋白質(zhì)。一般10mL過夜培養(yǎng)基被用于接種1L含100μg/mL阿莫西林的LB媒介物的培養(yǎng)基。在37℃下孵育過夜后，把IPTG加入到最終濃度為1mM并在25℃下孵育2小時(shí)。經(jīng)離心(1500xg)收獲細(xì)胞，沖洗沉淀并重懸浮在100mL的50mM Tris-Cl(pH7.4)、150mM NaCl中。在12000psi下，通過弗氏壓碎器兩次，裂解細(xì)胞。通過在4℃下，于12000xg下離心30分鐘澄清溶胞產(chǎn)物并在-70℃下儲(chǔ)備。
用于特異性[3H]-雌二醇結(jié)合的提取物的評(píng)價(jià)。用1mM EDTA補(bǔ)充的Dulbecco氏磷酸鹽緩沖鹽水(Gibco，1x最終濃度)作為試驗(yàn)緩沖液。為使用于試驗(yàn)中的受體的量最佳化，把[3H]-17β-雌二醇(NewEngland Nuclear，最終濃度＝2nM)±0.6μM二乙基己烯雌酚和100μL大腸桿菌溶胞產(chǎn)物的各種稀釋液加至高親和掩蔽微滴板(EG&GWallac)上的每孔中。最終試驗(yàn)體積為120μL且DMSO的濃度≤1％。室溫下孵育5-18小時(shí)后，吸出未結(jié)合的材料且用約300μL試驗(yàn)緩沖液把板沖洗3次。沖洗后，將135μL液體閃爍混合劑(Optiphase Supermix，EG&G Wallac)加至每孔中，把板密封并且攪拌至少5分鐘以使閃爍物與殘余沖洗緩沖液混合。通過液體閃爍計(jì)數(shù)(EG&G Wallac Microbeta Plus)評(píng)價(jià)結(jié)合的放射活性。
測(cè)定提供最大特異性結(jié)合的每一受體制備液的稀釋液后，采用受體制備液的各種稀釋液，通過估計(jì)未標(biāo)記17β-雌二醇的IC50進(jìn)一步使試驗(yàn)最佳化。對(duì)未標(biāo)記的17β-雌二醇的IC50，選擇每一受體制備液的最終工作稀釋液為2-4nM。
配體結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)方法。最初將受試化合物溶于DMSO中并且DMSO在結(jié)合試驗(yàn)中的最終濃度≤1％。每一受試化合物的8個(gè)稀釋液被用作[3H]-17β-雌二醇的未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)劑。通常，一系列化合物稀釋液應(yīng)在人ERα和ERβ上同時(shí)試驗(yàn)。結(jié)果作為測(cè)量的DPM對(duì)受試化合物的的濃度做圖。對(duì)劑量-應(yīng)答曲線擬合，把轉(zhuǎn)化的、稱重的數(shù)據(jù)的四參數(shù)對(duì)數(shù)模型擬合并且IC50定義為化合物減少最大[3H]-雌二醇結(jié)合達(dá)50％的濃度。
本發(fā)明的代表性實(shí)施例對(duì)ERα和ERβ(通過IC50測(cè)量)的結(jié)合親合力顯示在表(1)中。
表1本發(fā)明代表性化合物的ER結(jié)合親合力實(shí)施例ER-βIC50(nM) ER-αIC50(nM)114072029635110366157042395280559139639843716005000818123539440150010105204011703＞50001249122713251901450902153821664181317421210181646419157276520215521326022147233113246121725222726447427440928251036291558033013430803131352321619633313523414110135154813611390377949838102101039190782740235130041641142959620435925574413537458465546592638471340未測(cè)定48402975
表1本發(fā)明代表性化合物的ER結(jié)合親合力491042523050399＞500051142775528212005316618705413580955313198056971030573661340582614355952266860645596193118062201＞1000063144643376
在以上描述的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中得到的結(jié)果證實(shí)本發(fā)明的化合物結(jié)合雌激素受體的兩種亞型。對(duì)ERβIC50s一般比較低，指明這些化合物優(yōu)選為ERβ選擇性配體，但也被認(rèn)為對(duì)ERα有活性?；?，至少部份基于它們的受體親合力選擇性概況，本發(fā)明的化合物會(huì)呈現(xiàn)一定范圍內(nèi)的活性。因?yàn)楸景l(fā)明的化合物結(jié)合ER-β比結(jié)合ER-α具有更高的親合力，它們用于治療或者抑制可通過ER-β調(diào)節(jié)的疾病。另外，因?yàn)槊恳皇荏w配體復(fù)合物是獨(dú)一無二的，并且因此它與各種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用是獨(dú)一無二的，依細(xì)胞內(nèi)容物而定本發(fā)明的化合物應(yīng)呈現(xiàn)不同的和不可預(yù)見的活性。例如，在某些細(xì)胞類型中，化合物作為雌激素受體激動(dòng)劑起作用，而在其它的組織中作為雌激素受體拮抗劑起作用是可能的。具有這樣活性的化合物有時(shí)被稱為SERMs(選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑)。然而，不像許多雌激素那樣，許多SERMs不引起子宮濕重增加。這些化合物在子宮是抗雌激素的且可在子宮組織中完全拮抗雌激素受體激動(dòng)劑的營(yíng)養(yǎng)作用。然而，這些化合物在骨、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中作為雌激素受體激動(dòng)劑起作用。由于這些化合物的這個(gè)組織選擇性性質(zhì)，它們?cè)谥委熁蛘咭种破湟鸹蛘吲c雌激素缺乏(在某些組織例如骨或者心血管中)或者雌激素過量(在子宮或者乳腺中)有關(guān)的哺乳動(dòng)物疾病癥狀或者綜合征上是有用的。另外，本發(fā)明的化合物也具有對(duì)一種受體類型作為雌激素受體激動(dòng)劑起作用而對(duì)另一種受體類型作為雌激素受體拮抗劑起作用的潛在性。例如，已證實(shí)化合物通過ERβ可拮抗17β-雌二醇的作用而呈現(xiàn)具有ERα的雌激素受體激動(dòng)劑活性[Sun等，Endocrinology 140800-804(1999)]。這樣的ERSAA(雌激素受體選擇性激動(dòng)劑拮抗劑)活性在這一系列化合物中提供藥理學(xué)上獨(dú)特的雌激素活性。
金屬硫蛋白II mRNA的調(diào)節(jié)
按照Harris[Endocrinology 142645-652(2001)]描述，通過ERβ但非ERα起作用的雌激素可向上調(diào)節(jié)在Saos-2細(xì)胞中的金屬硫蛋白II mRNA水平。自這一試驗(yàn)方法得到的結(jié)果可與自下面描述的試驗(yàn)方法(ERE報(bào)道基因試驗(yàn)方法)得到的結(jié)果相結(jié)合，以產(chǎn)生本發(fā)明化合物的選擇性分布(也參見WO 00/37681)。本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)顯示在表(2)中。
表2在Saos-2細(xì)胞中的金屬硫蛋白-II mRNA的調(diào)節(jié)化合物折疊調(diào)節(jié)實(shí)施例129.6實(shí)施例1412.4實(shí)施例139.7
在MCF-7乳腺癌細(xì)胞中采用ERE-報(bào)道基因試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)受試化合物
在DMSO中制備受試化合物的儲(chǔ)備液(通常0.1M)，然后用DMSO稀釋至10-100倍以制備1或者10mM的工作溶液。在4℃(0.1M)或者-20℃(＜0.1M)下儲(chǔ)備DMSO儲(chǔ)備液。每周用生長(zhǎng)培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素和2mM glutaMax-1的D-MEM/F-12培養(yǎng)基]將MCF-7細(xì)胞傳代兩次。在37℃下，在5％CO2/95％濕潤(rùn)的空氣孵育箱中，于通氣燒瓶中維持細(xì)胞。處理前一天，在25000細(xì)胞/孔下，用生長(zhǎng)培養(yǎng)基將細(xì)胞鋪展在96孔板上并在37℃下孵育過夜。
在37℃下，于實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基[含10％(v/v)熱滅活活性炭剝離的胎牛血清、1％(v/v)青霉素-鏈霉素、2mM glutaMax-1和1mM丙酮酸鈉的無酚紅的D-MEM/F-12培養(yǎng)基]中，用50μl/孔的腺病毒5-ERE-tk-熒光素酶的1∶10稀釋液把細(xì)胞轉(zhuǎn)染2小時(shí)。然后，用150μl的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基把孔洗滌一次。最后，在37℃下，以8孔/復(fù)制用150μl/孔的媒介物(≤0.1％v/v DMSO)或者化合物處理所述細(xì)胞24小時(shí)，后者稀釋≥1000倍成為實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基。
單獨(dú)試驗(yàn)(雌激素受體激動(dòng)劑模型)或者與0.1nM 17β-雌二醇(EC80；雌激素受體拮抗劑模型)組合，在單次劑量1μM下初步篩選受試化合物。每個(gè)96孔板也包含媒介物對(duì)照組(0.1％v/v DMSO)和雌激素受體激動(dòng)劑對(duì)照組(0.1或者1nM 17β-雌二醇)。在活性化合物以log自10-14增至10-5M，在雌激素受體激動(dòng)劑和/或雌激素受體拮抗劑模型上進(jìn)行劑量-應(yīng)答實(shí)驗(yàn)。自這些劑量-應(yīng)答曲線，分別生成EC50和IC50值。在每一治療組中最后一孔含作為雌激素受體拮抗劑對(duì)照組的5μl的3×10-5MICI-182780(10-6M最后濃度)。
處理后，用25μl/孔的1X細(xì)胞培養(yǎng)基溶胞試劑(PromegaCorporation)將所述細(xì)胞于搖床上溶胞15分鐘。把細(xì)胞溶胞產(chǎn)物(20μl)轉(zhuǎn)移至96孔發(fā)光計(jì)板，采用100μl/孔的螢光素酶底物(PromegaCorporation)，在MicroLumat LB 96 P發(fā)光計(jì)(EG&G Berthold)中測(cè)量螢光素酶活性。注射底物前，對(duì)每孔進(jìn)行1秒背景測(cè)量。注射底物后，1秒延遲后測(cè)量螢光素酶活性10秒。自發(fā)光計(jì)把數(shù)據(jù)傳遞至Macintosh個(gè)人微機(jī)并采用JMP軟件(SAS研究所)分析；程序自每孔螢光素酶測(cè)量值減去背景讀數(shù)然后測(cè)定每處理組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
通過對(duì)數(shù)換算螢光素酶數(shù)據(jù)，并且Huber M-估算法被用于使外圍轉(zhuǎn)換的觀察重量下降。JMP軟件用于分析單向ANOVA(Dunnett’s試驗(yàn))的轉(zhuǎn)化的和稱重的數(shù)據(jù)。在雌激素受體激動(dòng)劑模型中，化合物處理組與媒介物對(duì)照組結(jié)果相比較，或者在雌激素受體拮抗劑模型中與陽性雌激素受體激動(dòng)劑對(duì)照組結(jié)果(0.1nM 17β-雌二醇)相比較。對(duì)最初的單次劑量實(shí)驗(yàn)，如果化合物處理結(jié)果顯著區(qū)別于合適的對(duì)照組(p＜0.05)，那么結(jié)果以相對(duì)于17β-雌二醇對(duì)照組的百分率報(bào)道[即((化合物-媒介物對(duì)照組)/(17β-雌二醇對(duì)照組-媒介物對(duì)照組))×100]。JMP軟件也用于自非線性劑量-應(yīng)答曲線測(cè)定EC50和/或IC50值。
親子宮活性的評(píng)價(jià)
按下面的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，可測(cè)量受試化合物的親子宮活性。
方法1自Taconic得到性未成熟(18天齡)Sprague-Dawley大鼠并提供未加以禁止的酪蛋白基質(zhì)飲食(Purina Mills 5K96C)和水。在第19、20和21天，用17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)、受試化合物或者媒介物(50％DMSO/50％Dulbecco’s PBS)皮下給予大鼠。為評(píng)價(jià)雌激素受體拮抗劑活性，化合物與17α-乙炔基-17β-雌二醇(0.06μg/大鼠/天)一同給藥。每組6只大鼠并且最后一次注射后約24小時(shí)通過CO2窒息和氣胸使它們安樂死。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪且排出任何內(nèi)流體后稱重。組織樣品也可被速凍用于分析基因表達(dá)(例如補(bǔ)體因子3 mRNA)。自本發(fā)明代表性化合物得到的結(jié)果顯示在表(3)中。
表3所選擇的化合物在大鼠親子宮試驗(yàn)方法中的評(píng)價(jià)化合物平均子宮重量(mg)±SEM媒介物21.4±1.5917α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μ85.5±3.1
g/大鼠)實(shí)施例12(2mg/大鼠)+17α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)60.2±4.0實(shí)施例41(2mg/大鼠)30.3±1.5實(shí)施例41(2mg/大鼠)+17α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)76.6±3.0實(shí)施例24(2mg/大鼠)14.18±1.1實(shí)施例24(2mg/大鼠)+17α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)80.7±5.3媒介物30.5±3.217α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)104.7±5.4實(shí)施例20(2mg/大鼠)39.2±0.7實(shí)施例20(2mg/大鼠)+17α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)95.9±5.5實(shí)施例21(2mg/大鼠)38.8±1.7實(shí)施例21(2mg/大鼠)+17α-乙炔基，17β-雌二醇(0.06μg/大鼠)93.9±5.9
方法2自Taconic得到性未成熟(18天齡)129 SvE小鼠并提供未加以禁止的酪蛋白基質(zhì)飲食(Purina Mills 5K96C)和水。在第22、23、24和25天，用化合物或者媒介物(玉米油)皮下給予小鼠。每組6只小鼠并且最后一次注射后約6小時(shí)通過CO2窒息和氣胸使它們安樂死。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪且排出任何內(nèi)流體后稱重。自本發(fā)明代表性化合物得到以下結(jié)果(表(4))。
表4所選擇的化合物在小鼠親子宮試驗(yàn)方法中的評(píng)價(jià)
化合物平均子宮重量±SEM媒介物10.2±2.117β-雌二醇(50mg/kg)41.7±3.6實(shí)施例21(20mg/kg)12.1±1.7媒介物11.7±0.517β-雌二醇(50mg/kg)41.9±2.9實(shí)施例24(50mg/kg)10.7±0.9媒介物9.6±0.417β-雌二醇(50mg/kg)40.0±2.0實(shí)施例24(50mg/kg)10.3±0.7媒介物9.4±0.417β-雌二醇(50mg/kg)35.6±4.4實(shí)施例25(50mg/kg)9.7±1.0媒介物13.7±2.017β-雌二醇(50mg/kg)40.5±5.84實(shí)施例12(50mg/kg)13.7±0.82實(shí)施例20(50mg/kg)13.1±0.86媒介物9.6±0.3617β-雌二醇(50mg/kg)40.0±2.0實(shí)施例34(50mg/kg)10.3±0.69媒介物9.8±1.217β-雌二醇(50mg/kg)42.9±4.8實(shí)施例26(50mg/kg)9.0±0.3實(shí)施例42(50mg/kg)9.5±0.6實(shí)施例64(50mg/kg)9.8±0.7
骨質(zhì)疏松和類脂調(diào)節(jié)(心臟保護(hù))的評(píng)價(jià)
術(shù)后1天自Taconic Farms得到切除卵巢或者假手術(shù)的雌性Sprague-Dawley大鼠(重量范圍240-275g)。在一個(gè)室中按12/12(白天/晝夜)時(shí)間表將它們按3或者4只大鼠/籠飼養(yǎng)并且任意提供食物(Purina 5K96C大鼠食物(chow))和水。到達(dá)后1天對(duì)所有研究組開始治療并且大鼠每周給藥7天，連續(xù)6周。一組不接受任何治療的年齡相當(dāng)?shù)募偈中g(shù)大鼠用作每項(xiàng)研究的完整的雌激素飽滿對(duì)照組。
在50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco’s磷酸鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)的媒介物中，在定義的以致于治療體積為0.1mL/100g體重的濃度下，制備所有的受試化合物。把17β-雌二醇溶于玉米油(20μg/mL)中并皮下傳遞，0.1mL/大鼠。按照組平均體重測(cè)量值，所有劑量在三周間隔內(nèi)調(diào)整，并且皮下給藥。
開始治療5周后和研究終止1周前，評(píng)價(jià)每只大鼠的骨質(zhì)密度(BMD)。在采用XCT-960M(pQCT，Stratec Medizintechnik，Pforzheim，Germany)麻醉的大鼠上評(píng)價(jià)近端脛骨的總的和小梁的密度。如下進(jìn)行測(cè)量掃描前15分鐘，腹膜內(nèi)注射45mg/kg氯胺酮、8.5mg/kg賽拉嗪、和1.5mg/kg乙酰丙嗪麻醉每只大鼠。
把右后爪通過25mm直徑的聚碳酸酯管并粘貼于丙烯酸框，使踝關(guān)節(jié)在90°角和膝關(guān)節(jié)在180°角。聚碳酸酯管被附著于活動(dòng)的平臺(tái)以保持它垂直于pQCT的孔徑。調(diào)整平臺(tái)以致于股骨的遠(yuǎn)端和脛骨的近端處于掃描區(qū)。運(yùn)行二維搜索圖象10mm長(zhǎng)和0.2mm的線性分辨率。在監(jiān)測(cè)器上展示搜索圖象后，脛骨的近端被固定。自這一點(diǎn)3.4mm遠(yuǎn)開始pQCT掃描。pQCT掃描為1mm厚，具有0.140mm的軸(三維像素)徑，并由145個(gè)貫穿切片的投射物組成。
在pQCT掃描完成后，在監(jiān)測(cè)器上展示圖象。包括脛骨但不包括腓骨的研究區(qū)域被概述。采用迭代算法，數(shù)學(xué)上去除軟組織。以mg/cm3報(bào)道剩余的骨密度(總密度)。以同心螺旋數(shù)學(xué)上揭去骨外部55％。以mg/cm3報(bào)道其余的骨密度(小梁密度)。
BMD評(píng)價(jià)1周后，通過CO2窒息和氣胸使大鼠安樂死并采集血液用于膽固醇測(cè)定。摘除子宮并去除有關(guān)脂肪和排出任何內(nèi)流體后稱重。采用Cholesterol/HP試劑盒，用Boehringer-Mannheim Hitachi 911臨床分析儀測(cè)定總膽固醇。采用Dunnet’s試驗(yàn)的單向方差分析，比較統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
用本發(fā)明的代表性化合物得到下面的結(jié)果(表(5))。
表5給予選擇的本發(fā)明化合物后切除卵巢的大鼠體內(nèi)骨礦物質(zhì)密度的評(píng)價(jià)
化合物總骨礦物質(zhì)密度 (平均值mg/cm3±SEM)小梁骨礦物質(zhì)密度(平均值mg/cm3± SEM) 媒介物 543.49±14.24 353.96±13.46 17β-雌二醇(2μg/大鼠) 639.49±14.47 453.28±24.93 實(shí)施例24(10mg/kg) 517.56±9.67 321.16±9.04 實(shí)施例21(10mg/kg) 501.40±11.97 312.34±19.73 實(shí)施例20(10mg/kg) 525.51±7.93 287.56±17.56 實(shí)施例21(10mg/kg)+ 17β-雌二醇(2μg/大鼠) 682.41±24.01 491.43±36.43 假手術(shù)(非操作) 685.28±15.68 510.96±16.99
抗氧化活性的評(píng)價(jià)
自屠宰場(chǎng)得到豬主動(dòng)脈，沖洗，遷移到冷卻的PBS中，并收獲主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。為收獲細(xì)胞，打結(jié)主動(dòng)脈的肋間血管且把主動(dòng)脈的一端夾緊。將新鮮、滅菌過濾的0.2％膠原酶(Sigma Type I)放入血管中，然后夾緊血管的另一端以形成密閉的系統(tǒng)。把主動(dòng)脈于37℃下孵育15-20分鐘，之后收集膠原酶溶液并于2000xg下離心5分鐘。將每份沉淀懸浮于7mL由用活性炭剝離的FBS(5％)、NuSerum(5％)、L-谷氨酰胺(4mM)、青霉素-鏈霉素(1000U/ml，100μg/ml)和慶大霉素(75μg/ml)補(bǔ)充的無酚紅DMEM/Ham’s F12培養(yǎng)基組成的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中，在100mm培養(yǎng)皿上接種并在5％CO2中于37℃孵育。20分鐘后，用PBS沖洗細(xì)胞并加入新鮮的培養(yǎng)基，24小時(shí)再次重復(fù)這一操作。約1周后，使細(xì)胞匯合。內(nèi)皮細(xì)胞一周定期喂飼兩次，當(dāng)匯合時(shí)，胰蛋白酶消化并以1∶7的比率接種。在待評(píng)價(jià)化合物(5μM)存在下，將細(xì)胞介導(dǎo)的12.5μg/mL LDL氧化于37℃下進(jìn)行4小時(shí)。按照通過分析游離醛的TBARS(硫代巴比妥酸活性物質(zhì))方法[Yagi，Biochemical Medicine 15212-6(1976)]測(cè)量，其結(jié)果表達(dá)成氧化過程的百分比抑制率。
黃體酮受體mRNA調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
這個(gè)實(shí)驗(yàn)方法可用于評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物的雌激素或者抗雌激素活性[Shughrue等，Endocrinology 1385476-5484(1997)]。本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)顯示在表(6)中。
表6.本發(fā)明代表性化合物對(duì)調(diào)節(jié)大鼠腦的視前區(qū)中黃體酮mRNA的作用化合物(10mg/kg)黃體酮受體mRNA(任意單位；平均值±stdev)媒介物22.0±10.1實(shí)施例21110.5±19.3實(shí)施例20238.6±36.3實(shí)施例12256.2±42.3媒介物189.2±27.2實(shí)施例34511.5±23.7實(shí)施例25447.0±60.7實(shí)施例26467.8±66.7實(shí)施例64431.3±65.6
大鼠熱潮紅實(shí)驗(yàn)方法
以標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法可評(píng)價(jià)受試化合物對(duì)熱潮紅的作用，這個(gè)方法測(cè)量受試化合物減弱尾巴皮膚溫度增加的能力，該溫度當(dāng)采用納洛酮使嗎啡成癮的大鼠毒品急劇戒斷時(shí)發(fā)生[Merehenthaler等，Maturitas 30307-16(1998)]。通過受試化合物與參照雌激素一同給藥，它也用于檢測(cè)雌激素受體拮抗劑活性。自本發(fā)明的代表性化合物得到下面的數(shù)據(jù)(表(7))。
表7所選擇的本發(fā)明化合物在大鼠熱潮紅模型中的作用 化合物注射納洛酮15分鐘溫度變化(平均值±SEM) 媒介物4.63±0.79 17α-乙炔基，17β-雌二醇 (0.3mg/kg)2.12±1.14 實(shí)施例20(15mg/kg)5.28±0.71 實(shí)施例41(15mg/kg)5.25±0.72
在離體大鼠主動(dòng)脈環(huán)上血管舒縮功能的評(píng)價(jià)
Sprague-Dawley大鼠(240-260克)分成4組
1.正常未切除卵巢組(完整)
2.切除卵巢(ovex)媒介物治療組
3.切除卵巢17β-雌二醇治療組(1mg/kg/天)
4.用受試化合物治療切除卵巢動(dòng)物(各種劑量)
治療前約3周把動(dòng)物切除卵巢。每只動(dòng)物通過胃管接受懸浮在含1％吐溫-80的蒸餾后的去離子水中的17β-雌二醇硫酸酯(1mg/kg/天)或者受試化合物。媒介物治療的動(dòng)物接受與在藥物治療組中使用的媒介物體積相當(dāng)?shù)拿浇槲铩?br> 通過吸入CO2使動(dòng)物安樂死并放血。迅速除去胸主動(dòng)脈并放入含有下面組合的37℃的生理溶液中，包括(mM)通入最終pH7.4的CO2-O2(95％/5％)的NaCl(54.7)、KCl(5.0)、NaHCO3(25.0)、MgCl2 2H2O(2.5)、D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)。自外表面除去血管外膜并把血管切成2-3mm寬的環(huán)。將環(huán)懸浮于一端連接于浴的底部且另一端連接于力量傳感器的10mL組織浴中。使1克靜止的張力放置于環(huán)上。把環(huán)平衡1小時(shí)，獲得并分析信號(hào)。
平衡后，把環(huán)暴露于增加濃度的苯基厄福倫(10-8-10-4M)中并且記錄張力。然后用新鮮的緩沖液沖洗浴3次。洗脫后，將200mM L-NAME加入到組織浴中并平衡30分鐘。然后重復(fù)苯基厄福倫濃度應(yīng)答曲線。
心臟保護(hù)活性的評(píng)價(jià)
自Taconic Farms得到載脂蛋白E-缺乏的C57/B1J(apo E KO)小鼠。嚴(yán)格按照IACUC指南下進(jìn)行所有動(dòng)物方法。切除卵巢的雌性apoE KO小鼠，4-7周齡，被飼養(yǎng)在鞋-盒籠子中并允許隨意進(jìn)食和飲水。動(dòng)物根據(jù)重量隨機(jī)分組(每組n＝12-15只小鼠)。使用Precise-dosingProtocol將飲食中的受試化合物或者雌激素(在1mg/kg/天下的17β-雌二醇硫酸酯)給予動(dòng)物，其中每周測(cè)量所消耗的飲食的量，基于動(dòng)物重量相應(yīng)調(diào)整劑量。所采用的飲食為Western-style餐(57U5)，它由Purina制備并包含0.50％膽固醇、20％豬油和25IU/KG維生素E。采用12周一個(gè)療程的這一方案給予/喂飼動(dòng)物。對(duì)照組動(dòng)物喂飼Western-style餐但不接受化合物。研究期間結(jié)束時(shí)，使動(dòng)物安樂死并得到血漿樣品。首先用鹽水，然后用中性緩沖的10％福爾馬林溶液就地灌注心臟。
為測(cè)定血脂和脂蛋白，采用酶促方法，分別用市場(chǎng)上可以得到的來自Boehringer Mannheim和Wako Biochemicals的試劑盒測(cè)定總膽固醇和甘油三酯，并采用Boehringer Mannheim Hitachii 911分析儀分析。采用FPLC體積分級(jí)分離，進(jìn)行血漿脂蛋白的分離和定量。簡(jiǎn)言之，過濾50-100mL血清并把它注射到串連的Superose 12和Superose 6柱中，在恒定流速下，用1mM EDTA鈉和0.15M NaCl洗脫。采用Waters MillenniumTM軟件，對(duì)表示VLDL、LDL和HDL的每條曲線的面積積分，通過每對(duì)應(yīng)的色譜峰的相對(duì)百分比面積，經(jīng)總膽固醇值放大使每一脂蛋白餾分定量。
對(duì)主動(dòng)脈粥樣硬化的定量，小心分離主動(dòng)脈且在操作前于福爾馬林固定劑中放置48-72小時(shí)。采用Oil Red O染色劑，鑒定動(dòng)脈粥樣硬化的損傷。把血管短暫去染色，然后采用配備與作為圖像捕集軟件的IMAQ Configuration Utility(National Instrument)相諧的Sony3CCD視頻攝象系統(tǒng)的Nikon SMU800顯微鏡成像。采用常規(guī)閾值用途軟件包(Coleman Technologies)，沿著主動(dòng)脈弓定量損傷en面。采用程序的閾值功能，在血管上，具體地說，在含主動(dòng)脈弓的區(qū)域，從頭臂干的近邊至左鎖骨下動(dòng)脈的遠(yuǎn)邊，進(jìn)行自動(dòng)化損傷評(píng)估。按照嚴(yán)格地在定義的內(nèi)腔區(qū)域內(nèi)包含的損傷百分率表達(dá)主動(dòng)脈粥樣硬化數(shù)據(jù)。
認(rèn)知增強(qiáng)的評(píng)價(jià)
在每連續(xù)5天中，把摘除卵巢的大鼠(n＝50)置于8-臂的徑臂迷宮中馴化10分鐘。馴化和試驗(yàn)前使動(dòng)物禁水。100μL等分試樣的水放于每臂末端用作補(bǔ)充。通過使動(dòng)物進(jìn)入一個(gè)餌誘的臂，完成在徑臂迷宮中的獲勝-轉(zhuǎn)換任務(wù)得。飲水后，動(dòng)物退出臂并重新進(jìn)入中心室，在那里它可以進(jìn)入先前訪問的臂或者進(jìn)入新的臂。當(dāng)動(dòng)物選擇進(jìn)入新的臂時(shí)，記錄正確的應(yīng)答。每只動(dòng)物每天給出5次試驗(yàn)，連續(xù)3天。最后一次習(xí)得試驗(yàn)后，將動(dòng)物安排下面4組中的一組
1.陰性對(duì)照組注射10％DMSO/芝麻油媒介物，一天一次，連續(xù)6天(1mL/kg，SC)
2.陽性對(duì)照組用17β-雌二醇苯甲酸酯注射2天并且第2次注射后試驗(yàn)4天(每只大鼠注射10μg/0.1mL下的17β-雌二醇苯甲酸酯)
3.雌二醇17β-雌二醇應(yīng)每天注射，連續(xù)6天(20μg/kg，SC)
4.受試化合物每天注射，連續(xù)6天(劑量變化)。
所有注射應(yīng)在習(xí)得實(shí)驗(yàn)的最后一天開始。組1、3和4的最后一次注射應(yīng)在工作記憶試驗(yàn)前2小時(shí)發(fā)生。
工作記憶試驗(yàn)為延遲的與樣品非-匹配的任務(wù)(DNMS)，采用15、30或者60秒的延遲。這個(gè)任務(wù)為習(xí)得實(shí)驗(yàn)的變體，其中大鼠被放置于中心室并且使之進(jìn)入前面的一個(gè)臂。一旦大鼠半途旅行經(jīng)過第一個(gè)臂，第二個(gè)臂就會(huì)開啟，并且大鼠再次需要選擇這個(gè)臂。當(dāng)它半途旅行經(jīng)過第二個(gè)臂時(shí)，兩扇門關(guān)閉并且延遲開始。一旦延遲終止，最初的兩扇門和第三個(gè)新門同時(shí)開啟。當(dāng)動(dòng)物半途旅行經(jīng)過第三個(gè)，新的臂時(shí)，記錄正確的應(yīng)答。當(dāng)動(dòng)物半途旅行經(jīng)過第一個(gè)或者第二個(gè)臂時(shí)，記錄不正確的應(yīng)答。在每三次延遲間隔中的一個(gè)，每只動(dòng)物應(yīng)接受5次試驗(yàn)，每只動(dòng)物總共15次試驗(yàn)。
對(duì)胸膜炎作用的評(píng)價(jià)
按照Cuzzocrea的方法[Endocrinology 1411455-63(2000)]，可評(píng)價(jià)減少實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)大鼠胸膜炎的癥狀的能力。
對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)細(xì)胞毒性(神經(jīng)保護(hù))的保護(hù)作用的評(píng)價(jià)
采用谷氨酸攻擊，在體外標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法中可評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物的神經(jīng)保護(hù)活性[Zaulyanov等，Cellular & MolecularNeurobiology 19705-18(1999)；Prokai等，Journal of MedicinalChemistry 44110-4(2001)]。
在乳房終蕾試驗(yàn)方法中的評(píng)價(jià)
雌激素需要全導(dǎo)管伸長(zhǎng)和乳房導(dǎo)管分支，及在黃體酮影響下接著小葉-蜂窩狀終蕾的發(fā)展。在這個(gè)試驗(yàn)方法中，按照以下標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法，評(píng)價(jià)所選擇的本發(fā)明化合物的促乳激素活性。28天年齡Sprague-Dawley大鼠(Taconic Farms)被卵巢切除并且休息9天。在12-小時(shí)光/暗周期中飼養(yǎng)動(dòng)物，喂飼基于酪蛋白的Purina實(shí)驗(yàn)室嚙齒類動(dòng)物食物5K96(Purina，Richmond，IN)并允許自由飲水。然后皮下給予大鼠媒介物(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/50％1xDulbecco氏磷酸緩沖鹽水(GibcoBRL)、17β-雌二醇(0.1mg/kg)或者受試化合物(20mg/kg)6天。最后3天，也皮下給予大鼠黃體酮(30mg/kg)。第7天，使大鼠安樂死并切除乳房脂墊。分析這一脂肪墊用于酪蛋白激酶II mRNA作為終蕾增殖的標(biāo)記物。通過真-時(shí)間RT-PCR分析酪蛋白激酶II mRNA。簡(jiǎn)言之，按照制造商的說明書，Trizol(GibcoBRL)后分離RNA。采用無DNA-試劑盒(Ambion)，用DNAse I處理樣品，并且采用Taqman Gold方法(PE AppliedBiosystems)，通過真-時(shí)間RT-PCR測(cè)量酪蛋白激酶II mRNA水平。采用酪蛋白激酶II mRNA特異性引物對(duì)(5’引物，CACACGGATGGCGCATACT，3’引物，CTCGGGATGCACCATGAAG)和定做的探針(TAMRA-CGGCACTGGTTTCCCTCACATGCT-FAM)，以三份分析總共50ng的RNA。采用由PE Applied Biosystems供應(yīng)的引物和探針，酪蛋白激酶II mRNA水平被歸一化為包含在每一樣品反應(yīng)中的18s核糖體RNA中。對(duì)本發(fā)明的代表性化合物得到下面的結(jié)果(表(8))。表8化合物在大鼠促乳激素實(shí)驗(yàn)中的評(píng)價(jià)化合物酪蛋白激酶IImRNA/18S rRNA(平均值±SEM)媒介物+黃體酮(30mg/kg)1.61±0.3617β-雌二醇(0.1mg/kg)+黃體酮(30mg/kg)39.0±5.36實(shí)施例24(20mg/kg)+黃體酮(30mg/kg)3.98±0.79
用HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)炎性腸道疾病
以模擬人炎性腸道疾病的HLA大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)本發(fā)明的代表性化合物。下面簡(jiǎn)短描述所采用的方法和得到的結(jié)果。自Taconic得到雄性HLA-B27大鼠并不限制進(jìn)食(PMI Lab餐5001)和水。每天觀察糞質(zhì)量并按照以下標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)腹瀉＝3；軟糞＝2；正常糞＝1。研究結(jié)束時(shí)，收集血清并在-70℃下貯存。制備結(jié)腸切片以用于組織分析并對(duì)另外的部分分析髓過氧化物酶活性。
在研究A中，用下面列出的方案之一皮下給予大鼠(22-26周齡)，每天一次，連續(xù)7天。每組5只大鼠，并且安樂死之前兩小時(shí)給予最后劑量。
·媒介物(50％DMSO/50％Dulbecco氏PBS)
·實(shí)施例24(50mg/kg)
得自研究A的結(jié)果顯示在表(9)中。給予媒介物的大鼠整個(gè)研究過程中繼續(xù)具有腹瀉。用實(shí)施例24治療的大鼠糞質(zhì)量得到改善。表9用化合物皮下治療5天的HLA大鼠的糞便特性的評(píng)價(jià)。報(bào)道的值為組的平均分?jǐn)?shù)。
天媒介物實(shí)施例24(50mg/kg)132.8232331.8431.6531.6631.43＝腹瀉；2＝軟糞；1＝正常糞
在研究B中，如下口服給予大鼠(8-10周齡)，連續(xù)26天。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)
·實(shí)施例25(第1-14天10mg/kg；然后在第15天增至20mg/kg)
·實(shí)施例34(10mg/kg)
得到下面的結(jié)果(表(10))并在用本發(fā)明的代表性化合物治療的所有大鼠中顯示改善的糞便特性。
表10用媒介物或者本發(fā)明的代表性化合物口服治療的HLA大鼠的糞特性的評(píng)價(jià)。所報(bào)道的值為組平均分?jǐn)?shù)。天 媒介物 實(shí)施例25 實(shí)施例341 1112 1113 11.2514 1.251.251.255 2.51.7526 2.751.51.757 2.7521.758 2.7521.59 31.751.510 31.51.2511 2.7521.512 2.751.751.513 2.752.251.2514 2.7521.2515 2.7521.2516 31.5117 2.751.5118 2.751.51.2519 2.751.25120 NDNDND
天 媒介物 實(shí)施例25 實(shí)施例3421NDNDND2231.2512331.2512431.2512531.2512631.251ND未測(cè)定3＝腹瀉；2＝軟便；1＝正常糞便
在研究C中，每天用下面列出的制劑之一口服給予大鼠(8-10周齡)，每天一次，連續(xù)46天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩小時(shí)給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)
·實(shí)施例21(第1-18天10mg/kg；然后在第19天增至20mg/kg)
·實(shí)施例24(第1-24天10mg/kg；然后在第25天增至20mg/kg)
獲得以下結(jié)果(表(11))并顯示給予ERβ選擇性化合物所有的動(dòng)物改善的糞特性。
表11用媒介物或者本發(fā)明的代表性化合物口服治療的HLA大鼠的糞分?jǐn)?shù)。所報(bào)道的值為組平均分?jǐn)?shù)。天 媒介物 實(shí)施例24 實(shí)施例2112.752.752.75232.753332.752.75432.52.755322.75632.52.5732.252.5832.252.75932.252.51032.252.751132.252.51231.752.51332.252.514322.51531.752.51631.752.51731.752.51831.752.51931.752.752031.752.52131.752.752231.752.5
天媒介物實(shí)施例24 實(shí)施例212331.752.2524321.7525322262.752.2522731.7522831.7522931.52302.751.52.253131.52.253231.523331.751.53431.751.753531.51.53631.51.753731.251.53831.751.53931.7524031.51.754131.7524231.524331.524431.524531.2524631.2523＝腹瀉；2＝軟便；1＝正常糞便
組織分析把結(jié)腸組織浸泡在10％中性緩沖的福爾馬林中。每片結(jié)腸分割為4個(gè)樣品用于評(píng)價(jià)。在Tissue Tek真空浸潤(rùn)加工器中將福爾馬林固定的組織加工(Miles公司；West Haven，Connecticut)以用于石蠟埋植。將樣品切成5μm，然后用蘇木精和伊紅(H&E)染色用于采用在Boughton-Smith后改進(jìn)的計(jì)分法的雙盲組織評(píng)價(jià)。完成評(píng)分后，樣品為非盲的，并且數(shù)據(jù)作表且通過帶有多平均比較的ANOVA線性模型分析。結(jié)腸組織的切片被用于評(píng)價(jià)幾種疾病適應(yīng)癥和所給出的相關(guān)分?jǐn)?shù)。如在表(12)(兩種皮下給藥研究的組合，包括研究A)中顯示的，在減少組織損傷的幾種測(cè)量中實(shí)施例24是有效的。表12在HLA-B27大鼠模型中疾病嚴(yán)重性的組織評(píng)分采用皮下給藥5天的兩個(gè)研究的組合。
組 潰瘍 (0-2)炎癥(0-3) 損傷深度 (0-2)纖維樣變性(0-2)總分?jǐn)?shù) 媒介物 1.382.69 1.190.886.13
實(shí)施例24 (50mg/kg)0.25*# 1.05*#0.2#0* 1.5*# 實(shí)施例24 (10mg/kg)a0.81* 1.63*0.69*0.50* 3.6* 實(shí)施例24 (1mg/kg)a1.25 1.63*0.88*0.75 4.4* a得自第二項(xiàng)研究的數(shù)據(jù) *顯著性＜媒介物或EE+ICI #顯著性＜EE
也組織上檢測(cè)得自研究B的腸組織(參見上面)。如下顯示(表(13))，兩個(gè)化合物顯著減少總疾病分?jǐn)?shù)。表13用本發(fā)明代表性化合物口服治療4周的動(dòng)物結(jié)腸的疾病嚴(yán)重性的組織評(píng)分。平均值±SD 組 潰瘍 (0-2) 炎癥 (0-3) 損傷深度 (0-2) 纖維樣變 性(0-2) 總分?jǐn)?shù) 媒介 物 1.44±0.66 2.88±0.14 1.56±0.63 1.06±0.32 6.94±1.51 實(shí)施 例25 0.44±0.24* 1.50±0.35* 0.44±0.24* 0.31±.13* 2.69±0.52* 實(shí)施 例34 0.75±0.46* 1.81±0.13* 0.63±0.32* 0.31±0.32* 3.50±1.10* *顯著性＜媒介物
也組織上檢測(cè)得自研究C的腸組織(參見上面)。如下顯示(表(14))，實(shí)施例24顯著減少總疾病分?jǐn)?shù)。盡管統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著，實(shí)施例21在所有疾病參數(shù)上的分?jǐn)?shù)低于媒介物治療的大鼠的相應(yīng)的分?jǐn)?shù)。表14用本發(fā)明代表性化合物口服治療7周的動(dòng)物結(jié)腸的疾病嚴(yán)重性的組織評(píng)分。平均值±SD
組 潰瘍 (0-2) 炎癥 (0-3) 損傷深度 (0-2) 纖維樣變 性(0-2) 總分?jǐn)?shù)媒介物 1.19±0.69 2.38±0.32 1.0±0.54 0.94±0.75 5.50±2.1實(shí)施例21 0.81±0.47 2.06±0.43 0.75±0.50 0.56±0.32 4.19±1.74實(shí)施例24 0* 0.69±0.24*0* 0* 0.69±0.24**顯著性＜媒介物
兩種模型關(guān)節(jié)炎的評(píng)價(jià)
佐劑誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的Lewis大鼠試驗(yàn)。按照標(biāo)準(zhǔn)便利操作方法，飼養(yǎng)60只雌性，12周齡，Lewis大鼠。它們?nèi)我饨邮軜?biāo)準(zhǔn)方案的食物和水。通過標(biāo)明項(xiàng)目組和動(dòng)物編號(hào)的籠卡區(qū)別每只動(dòng)物。通過不易涂抹的墨水記號(hào)筆在尾巴上標(biāo)記每只動(dòng)物編號(hào)。研究前至少10-21天，使它們麻醉并且通過標(biāo)準(zhǔn)無菌手術(shù)技術(shù)切除卵巢。
弗氏完全佐劑(Sigma Immuno Chemieals，St.Louis，MO)被用于誘發(fā)關(guān)節(jié)炎，每mL含熱殺和干燥的1mg結(jié)核分支桿菌、0.85mL礦物油和0.15mL單油酸甘露糖醇酯(批號(hào)084H8800)。
下面是兩種實(shí)驗(yàn)方法的實(shí)例。抑制實(shí)驗(yàn)方法30只大鼠于尾根部皮內(nèi)注射0.1mL的弗氏完全佐劑。把動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組6只大鼠。每天，各組接受媒介物(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco’s磷酸鹽緩沖鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)或者受試化合物(皮下給予)。所有大鼠第1天開始治療。本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)顯示在表(15)中。
治療實(shí)驗(yàn)方法30只大鼠于尾根部皮內(nèi)注射0.1mL的弗氏完全佐劑。把動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組包括6只大鼠。每天，各組接受媒介物(50％DMSO(JT Baker，Phillipsburg，NJ)/1x Dulbecco’s磷酸緩沖鹽水(GibcoBRL，Grand Island，NY)或者受試化合物(皮下給予)。所有大鼠在佐劑注射后第8天開始治療。本發(fā)明代表性化合物的數(shù)據(jù)顯示在表(16)、(17)和(18)中。
采用Abacus Concepts Super ANOVA(Abacus Concepts公司，Berkeley，CA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究的所有參數(shù)經(jīng)歷組間Duncan’s新的多元回歸試驗(yàn)的方差分析。數(shù)據(jù)被表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，如果p＜0.05，認(rèn)為差異顯著。
按照下面的疾病指數(shù)后足爪紅斑、后足爪腫脹、關(guān)節(jié)觸痛和運(yùn)動(dòng)及體姿，每天監(jiān)測(cè)關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重性的程度。將0-3的整數(shù)分?jǐn)?shù)用于定量紅斑(0＝正常足爪，1＝稍微紅斑，2＝中度紅斑，3＝嚴(yán)重紅斑)和腫脹(0＝正常足爪，1＝稍微腫脹，2＝中度腫脹，3＝嚴(yán)重腫脹的后足爪)的水平。每天最大分?jǐn)?shù)為12。
在研究結(jié)束時(shí)，用CO2使大鼠安樂死，尸體剖檢時(shí)摘除下肢并在10％緩沖的福爾馬林中固定，并且跗關(guān)節(jié)脫鈣并包埋在石蠟中。用蘇木精和伊紅或者番紅O-堅(jiān)牢綠染色液將組織切片染色。
將玻片編碼以致于檢驗(yàn)者對(duì)治療組并不了解。在滑膜增殖、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和血管翳形成的基礎(chǔ)上評(píng)價(jià)得自跗關(guān)節(jié)的滑膜組織[Poole和Coombs，International Archives of Allergy & Applied Immunology 5497-113(1977)]，闡述如下。類目 等級(jí)1.滑膜襯細(xì)胞a.無變化0b.細(xì)胞增大，稍微增厚1c.細(xì)胞增大，數(shù)目增加，中度增厚。無絨毛存在2d.細(xì)胞增大，增厚，絨毛存在32.纖維組織形成a.無變化0b.纖維組織形成存在于襯細(xì)胞下1c.小區(qū)域的疏松結(jié)締組織由纖維組織替代2d.疏松結(jié)締組織由纖維組織替代3
3.炎性細(xì)胞a.偶爾可以觀察到，散落在貫穿所選擇的區(qū)域0b.細(xì)胞以小數(shù)目存在或者存在于襯細(xì)胞層中或者恰好處于襯細(xì)胞層下和/或在血管周圍。1c.小量粘著采集的細(xì)胞可以存在2d.大量的細(xì)胞存在于囊中并且存在于襯細(xì)胞層中或者恰好處于襯細(xì)胞層下。34.血管翳a.不可檢測(cè)0b.可檢測(cè)1
另外，采用下面顯示的Mankin氏組織學(xué)分級(jí)系統(tǒng)[Mankin等，Journal of Bone & Joint Surgery-American Volume 53523-37(1971)]評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)軟骨和骨。類目 等級(jí)1.結(jié)構(gòu)a.正常0b.表面不規(guī)則1c.血管翳和表面不規(guī)則2d.裂開到過渡帶3e.裂開到邊緣帶4f.裂開到鈣化帶5g.完全結(jié)構(gòu)破壞62.細(xì)胞a.正常0b.彌散性細(xì)胞過多1c.細(xì)胞集落2d.細(xì)胞過多3
3.番紅-O染色法 a.正常0 b.稍微減少1 c.中度減少2 d.嚴(yán)重減少3 e.未見到染色4 4.潮標(biāo)完整性 a.接觸0 b.經(jīng)血管穿透1表15Lewis大鼠關(guān)節(jié)炎的評(píng)價(jià)抑制方法天 媒介物實(shí)施例241 0.000.002 0.001.003 4.504.504 5.504.835 9.335.836 10.506.167 10.606.168 11.005.339 11.505.6610 11.334.3311 10.833.1612 10.833.1613 11.002.1614 11.003.3315 11.003.0016 11.001.6617 10.501.50
表16Lewis大鼠關(guān)節(jié)炎的評(píng)價(jià)抑制方法天 媒介物實(shí)施例24 實(shí)施例27實(shí)施例321 10.8311.3311.3311.332 11.0011.1511.1510.833 10.8311.3311.339.334 11.339.509.838.005 11.508.008.835.836 11.507.007.833.337 11.505.836.163.008 11.504.835.002.509 11.003.504.332.5010 11.003.832.662.5011 10.663.831.832.5012 10.663.831.832.5013 10.503.162.662.5014 9.833.162.662.5015 8.102.832.002.0016 7.352.832.001.3317 6.502.001.501.00表17Lewis大鼠跗關(guān)節(jié)滑膜炎的組織評(píng)分(平均值±SD)治療方法組滑膜結(jié)構(gòu)(0-3)纖維組織形成(0-3)炎性細(xì)胞(0-3)血管翳(0-1)總滑膜炎 分?jǐn)?shù)(0-10)媒介物2.58±0.381.75±0.422.92±0.201.00±0.898.25±1.57實(shí)施例2450mg/kg1.42±0.49*0.42±0.80*1.33±0.41*0.08±0.20*3.25±1.54**顯著性＜媒介物表18Lewis大鼠跗關(guān)節(jié)中軟骨變化(Mankin評(píng)價(jià))的組織評(píng)分(平均值±SD)治療方法組軟骨結(jié)構(gòu)(0-6)軟骨細(xì)胞(0-3)番紅-O/堅(jiān)牢綠染色液潮標(biāo)完整性總Mankin 分?jǐn)?shù)
(0-4)(0-1) (0-14)媒介物2.83±0.262.58±0.382.50±0.320 7.92±0.74實(shí)施例2450mg/kg1.58±0.49*0.83±0.75*1.25±0.69*0 3.67±1.86**顯著性＜媒介物
對(duì)HLA-B27大鼠關(guān)節(jié)炎模型的評(píng)價(jià)。在模擬人關(guān)節(jié)炎的HLA-B27大鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法中評(píng)價(jià)本發(fā)明的代表性化合物。下面簡(jiǎn)短描述所采用的方法和得到的結(jié)果。雄性HLA-B27大鼠得自Taconic并提供未加以禁止食物(PMI實(shí)驗(yàn)室飲食5001)和水。如以上對(duì)佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的Lewis大鼠模型描述，評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)分?jǐn)?shù)和組織學(xué)。
研究1每天用下面列出的制劑之一口服給予大鼠(8-10周齡)一次，連續(xù)46天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩小時(shí)給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)
·實(shí)施例21(第1-18天10mg/kg；然后在第19天增至20mg/kg)
·實(shí)施例24(第1-24天10mg/kg；然后在第25天增至20mg/kg)
對(duì)本發(fā)明的代表性化合物得到下面的結(jié)果(表(19)和(20))。
表19來自研究1的關(guān)節(jié)炎的評(píng)價(jià)天媒介物 實(shí)施例24 實(shí)施例21292.51.50.753060.51.753150.51.25326.751.250.75338213482.251.2535822.253662.251377.524386.52.751.5397.52.251.5407.51.752.25416.522.25426.52.51.54364.751.25446.7531455.52.752.54663.252 表20得自研究1的關(guān)節(jié)組織學(xué)的評(píng)價(jià) 化合物滑膜炎分?jǐn)?shù)(平均值±SD)Mankin分?jǐn)?shù)(平均值±SD) 媒介物7.75±2.66.75±1.0 實(shí)施例243.17±0.3*3.5±1.8** 實(shí)施例256.1±0.754.6±0.9 *顯著性＜媒介物，p＜0.07 **顯著性＜媒介物，p＞0.05
研究2給大鼠(8-10周齡)口服下面列出的制劑之一，連續(xù)26天。每組4只大鼠，并且安樂死之前兩小時(shí)給予最后劑量。
·媒介物(2％吐溫-80/0.5％甲基纖維素)
·實(shí)施例25(第1-14天10mg/kg；然后在第15天增至20mg/kg)
·實(shí)施例34(10mg/kg)
對(duì)本發(fā)明的代表性化合物得到下面的結(jié)果(表(21))。
表21來自研究2的HLA大鼠關(guān)節(jié)炎的評(píng)價(jià)天媒介物 實(shí)施例25 實(shí)施例34100020003000400050006000700082.510.2593.7520.75102.752.250.5113.52.250.5121.2520.25131.2520.5141.2520155.253.750.5164.530.5173.52.750.25183.7520.75195.51.51223.251.251236.52.51.75246.521.75256.25222671.753
致癌體內(nèi)模型的評(píng)價(jià)
以文獻(xiàn)中易于得到的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，所述方法包括下面的兩個(gè)方法可評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物治療和抑制各種惡性腫瘤或者過度增殖疾病的能力。
乳腺癌。自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)得到切除卵巢的無胸腺nu/nu(裸)小鼠。腫瘤細(xì)胞注射前一天，用含0.36-1.7mg17β-雌二醇(60或者90天釋放，Innovative Research of America，Sarasota，F(xiàn)L)的時(shí)辰釋放小丸或者安慰劑植入動(dòng)物。采用10-刻度精確轉(zhuǎn)子，把小丸經(jīng)皮下導(dǎo)入內(nèi)雕紋區(qū)。接著，用1×107 MCF-7細(xì)胞或者1×107BG-1細(xì)胞皮下注射到小鼠乳腺組織中。將細(xì)胞與等體積的基底膠(matrigel)混合，后者為一種基底膜基質(zhì)制備液以增強(qiáng)腫瘤建立。在腫瘤細(xì)胞植入(抑制方案)后一天或者腫瘤已達(dá)到某一體積(治療方案)后通過給藥可評(píng)價(jià)受試化合物。每天腹膜內(nèi)或者口服給予在鹽水中的1％吐溫-80媒介物中的化合物。每3或7天評(píng)價(jià)腫瘤體積。
結(jié)腸癌。以Smirnoff[Oncology Research 11255-64(1999)]的實(shí)驗(yàn)方法可評(píng)價(jià)治療或者抑制結(jié)腸癌的能力。
以兩種體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)作用
蒙古沙土鼠的瞬時(shí)總體缺血。采用下面的實(shí)驗(yàn)方法，可測(cè)量受試化合物預(yù)防或者治療應(yīng)答于氧剝奪/再灌注的腦損傷作用。
雌性蒙古沙土鼠(60-80g；Charles River Laboratories，Kingston，NY)在Wyeth-Ayerst動(dòng)物護(hù)理中心(AAALAC認(rèn)證)飼養(yǎng)，伴隨12小時(shí)光照，12小時(shí)黑暗光周期并且自由進(jìn)食自來水和低雌激素酪蛋白食物(Purina；Richmond，IN)。順應(yīng)后(3-5天)，用異氟烷(2-3％與O2的混合物)麻醉沙土鼠，摘除卵巢(第0天)。第二天(第1天)早晨開始，每天用媒介物(10％ETOH/玉米油)、17β-雌二醇(1mg/kg，sc)或者實(shí)驗(yàn)化合物皮下治療沙土鼠。第6天，用異氟烷麻醉沙土鼠(n＝4-5/組)，通過中線頸切口使常見頸動(dòng)脈主動(dòng)脈肉眼可視并用非-創(chuàng)傷顯微動(dòng)脈瘤夾鉗同時(shí)閉合兩條主動(dòng)脈5分鐘。閉合后，移去夾鉗以使腦再灌注并且用創(chuàng)傷夾鉗封閉頸切口。沙土鼠局部缺血手術(shù)之前，所有動(dòng)物禁食過夜，這個(gè)步驟便利于始終如一的局部缺血損傷。第12天，沙土鼠暴露于致死劑量的CO2中，并在干冰上冷凍腦且在-80℃下貯存。用于這些研究的動(dòng)物方法被綜述并且得到Radnor/Collegeville AnimalCare和Wyeth-Ayerst Research的Use Committee(RACUC/CACUC)批準(zhǔn)。
通過neurogranin mRNA的就地雜交分析，評(píng)價(jià)神經(jīng)元保護(hù)的程度。簡(jiǎn)言之，在凝膠包衣的載玻片上收集20μm冠狀恒冷箱切片，干燥并在-80℃下貯存。加工時(shí)，把干燥的載玻片箱溫?zé)嶂潦覝?，將載玻片后固定在4％低聚甲醛中，用乙酸酐處理，然后用氯仿和乙醇脫脂和脫水。之后用200μl(6×106DPM/載玻片)在50％甲酰胺雜交混合液中的用于Neurogranin(35S-UTP標(biāo)記的NG-241，基質(zhì)99-340)的反義或者意義(對(duì)照組)核糖探針把所加工的切片-計(jì)數(shù)載玻片雜交，并且在55℃下于濕潤(rùn)的載玻片室中孵育過夜而不必蓋玻片。第二天上午，收集支架上的載玻片，把它們浸泡在2x SSC(0.3M NaCl，0.03M枸櫞酸鈉，pH7.0)/10mM DTT中，用RNase A(20μg/ml)處理并在67℃下于0.1x SSC中沖洗(2×30min)以除去非特異性標(biāo)記物。脫水后，將載玻片暴露于BioMax(BMR-1，Kodak)X-射線膠片中過夜。
neurogranin雜交信號(hào)水平被用于定量評(píng)價(jià)損傷后在CA1區(qū)神經(jīng)元缺失的程度并評(píng)價(jià)17β-雌二醇和實(shí)驗(yàn)化合物的效力。選擇neurogranin mRNA用于這些研究，因?yàn)樗诎–A1的海馬神經(jīng)元中高度表達(dá)，但是在存在于這個(gè)腦區(qū)的神經(jīng)膠質(zhì)和其它細(xì)胞類型中缺乏。因此，存在的neurogranin mRNA的量的測(cè)量值表示存活的神經(jīng)元。neurogranin雜交信號(hào)的相對(duì)光密度測(cè)量值得自帶有基于圖象分析系統(tǒng)(C-Imaging公司，Pittsburgh，PA)的計(jì)算機(jī)的膠片放射自顯影圖。使得自每只動(dòng)物的6個(gè)切片(相隔40μm)的結(jié)果平均化并做統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。各種數(shù)值作為平均值±SEM被報(bào)道。單向方差分析被用于檢驗(yàn)neurogranin mRNA的水平差異并且在結(jié)果部分中的非-差異的所有陳述暗示p＞0.05。
自本發(fā)明的代表性化合物得到下面的結(jié)果(表(22))。表22本發(fā)明代表性化合物保護(hù)沙土鼠海馬神經(jīng)元的作用化合物Neurogranin mRNA(任意單位，平均值±stdev)媒介物0化合物240化合物4143.0±21.8
小鼠中腦主動(dòng)脈閉合
按照由Dubal[參見Dubal等，Proceedings of the National Academyof Sciences of the United States of America 981952-1957(2001)，Dubal等，Journal of Neuroscience 196385-6393(1999)]描述的實(shí)驗(yàn)方法，可評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)作用。
排卵抑制標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法
本實(shí)驗(yàn)方法用于測(cè)定受試化合物是否能夠抑制或者改變排卵的時(shí)間。它也可用于測(cè)定排卵的卵母細(xì)胞數(shù)目[Lundeen等，J SteroidBiochem Mol Biol 78137-143(2001)]。自本發(fā)明的代表性化合物得到下面的數(shù)據(jù)(表(23))。表23本發(fā)明代表性化合物抑制排卵的作用化合物 卵母細(xì)胞的數(shù)目(平均值±SEM)媒介物13.00±0.72化合物20(50mg/kg)14.13±0.79化合物24(50mg/kg)13.86±0.77
子宮內(nèi)膜異位標(biāo)準(zhǔn)藥理實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)
自出版的方法[Bruner-Tran等，Journal of Clinical Investigation 992851-2857(1997)]對(duì)這個(gè)方法稍加改進(jìn)。簡(jiǎn)言之，體外用10nM的17β-雌二醇處理正常人子宮內(nèi)膜組織(周期天數(shù)～12)過夜，然后植入切除卵巢的無胸腺裸小鼠。為這些研究的目的，如在本文中描述的，小鼠不接受雌激素/安慰劑植入劑。使損傷建立至少10天，然后開始每天口服給藥并持續(xù)至少15天。值得一提的是所有小鼠在給藥開始時(shí)具有肉眼可見的損傷。在尸體剖檢下，測(cè)定帶有損傷的小鼠的數(shù)目以及每只小鼠的損傷。
在10mg/kg劑量下，以這個(gè)方法將實(shí)施例24的化合物評(píng)價(jià)三次。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)方法中，在尸體剖檢下，給予實(shí)施例24化合物的小鼠比那些給予媒介物的小鼠具有更少的損傷。例如，在研究1中，媒介物組中的4只小鼠中每一只具有至少1處損傷并且在這一組中總共有10處損傷。相反，實(shí)施例24治療的6只小鼠中僅有2只具有任何損傷并且每只動(dòng)物僅發(fā)現(xiàn)1處損傷。因此，由于所有的小鼠在治療開始時(shí)具有損傷，實(shí)施例24的化合物在6只小鼠中有4只引起損傷。
基于在標(biāo)準(zhǔn)藥理試驗(yàn)方法中得到的結(jié)果，本發(fā)明的化合物為雌激素受體調(diào)節(jié)劑用于治療或者抑制至少部分由雌激素缺乏或者過量介導(dǎo)的，或者可通過采用雌激素藥物治療或者抑制的癥狀、紊亂或者疾病狀態(tài)。本發(fā)明的化合物特別用于治療其中所產(chǎn)生的內(nèi)源性雌激素水平被大大減少的絕經(jīng)前后(peri-menopausal)、絕經(jīng)或經(jīng)絕后的患者。經(jīng)絕一般定義為最后的天然月經(jīng)期且特征為卵巢功能的停止，導(dǎo)致在血流中循環(huán)的雌激素顯著減少。當(dāng)在此所使用時(shí)，經(jīng)絕也包括可以是由手術(shù)的、化學(xué)的、或者導(dǎo)致過早減少或者卵巢功能停止的疾病癥狀引起的雌激素產(chǎn)生減少的情況。
本發(fā)明的化合物也用于抑制或者治療雌激素缺乏的其它結(jié)果，包括熱潮紅、陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、交媾困難、排尿困難、尿繁、尿失禁、尿道感染。其它的生殖道用途包括治療或者抑制功能性子宮出血。所述化合物也用于治療或者抑制子宮內(nèi)膜異位癥。
本發(fā)明的化合物在腦中也是有活性的并且因此用于抑制或者治療阿爾滋海默氏病、認(rèn)知衰退、減少的性欲、老年性癡呆、神經(jīng)退化性疾病、抑郁癥、焦慮癥、失眠癥、精神分裂癥和不育癥。本發(fā)明的化合物也用于治療或者抑制良性或者惡性異常組織生長(zhǎng)，包括腎小球硬化癥、前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、硬皮病、纖維瘤病、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳房疾病、子宮內(nèi)膜異位、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、CNS癌癥，例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或者星母細(xì)胞瘤(astioblastomia)。
本發(fā)明的化合物具有心血管保護(hù)作用且為抗氧化劑，并用于降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)和LDL水平；抑制或者治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄和血管痙攣，并且抑制由于導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細(xì)胞過程引起的血管壁損傷。本發(fā)明的化合物也用于治療與炎癥或者自動(dòng)免疫疾病有關(guān)的疾病，包括炎性腸疾病(克郎氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎)、關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、椎關(guān)節(jié)病、骨關(guān)節(jié)炎)、胸膜炎、局部缺血/再灌注損傷(例如中風(fēng)、移植性排斥、心肌缺血等)、哮喘、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、前列腺炎、葡萄膜炎、牛皮癬、多發(fā)硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和膿毒癥。
本發(fā)明的化合物也用于治療或者抑制眼疾病，包括白內(nèi)障、葡萄膜炎和黃斑變性并用于治療皮膚疾病例如衰老、脫發(fā)和痤瘡。
本發(fā)明的化合物也用于治療或者抑制代謝疾病例如II型糖尿病、脂質(zhì)代謝、食欲(例如神經(jīng)性厭食癥和貪食癥)。
本發(fā)明的化合物也用于治療或者抑制出血性疾病例如遺傳出血性毛細(xì)管擴(kuò)張、功能性子宮出血和格斗出血性休克。
本發(fā)明的化合物用于其中閉經(jīng)是有利的疾病狀態(tài)，例如白血病、子宮內(nèi)膜切除、慢性腎病或肝病或者血凝固疾病或紊亂。
本發(fā)明的化合物可用作避孕藥物，特別是當(dāng)與孕激素聯(lián)合使用時(shí)。
當(dāng)給藥用于治療或者抑制具體的疾病狀態(tài)或者紊亂時(shí)，應(yīng)理解有效劑量可依使用的具體化合物、給藥模式、所治療的疾病和疾病的嚴(yán)重性以及與所治療的個(gè)體相關(guān)的多種身體因素而定。可在約0.1mg/天-1000mg/天的口服劑量下有效給予本發(fā)明的化合物。優(yōu)選以單劑量或以兩次或更多次分開的計(jì)量給予約10mg/天-600mg/天，更優(yōu)選給予約50mg/天-600mg/天。預(yù)期設(shè)想的每天劑量隨著給藥途徑而變化。
這樣的劑量可以任何用于使在此的活性化合物向著接受者的血流的方式給藥，包括口服、借助植入、非腸道(包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)和皮下注射)、直腸、鼻內(nèi)、局部、眼(借助眼滴劑)、陰道和經(jīng)皮。
含有本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可包含任何常規(guī)使用的口服形式，包括片劑、膠囊、頰下含片制劑、錠劑、糖錠劑和口服液體、懸浮液或溶液劑。膠囊可含有活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑的混合物，例如藥學(xué)上可接受的淀粉(例如玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)、蔗糖、人工甜味劑、粉末纖維素、例如結(jié)晶和微晶纖維素、矯味劑、明膠、樹膠等。通過常規(guī)壓制、濕法制粒或干法制粒方法并使用藥學(xué)上可接受的稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、表面修飾劑(包括表面活性劑)、懸浮劑或者穩(wěn)定劑，包括(但不限于)硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、枸櫞酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露醇、氯化鈉、滑石粉、干燥淀粉和粉末化蔗糖可制備有用的片劑。優(yōu)選的表面修飾劑包括非離子和陰離子表面修飾劑。表面修飾劑的代表性實(shí)例包括(但不限于)羥聚體188、苯扎氯銨、硬脂酸鈣、十六醇十八醇混合物、聚西托醇乳化蠟、山梨糖醇酯、膠體二氧化硅、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、硅酸鋁鎂和三乙醇胺。在此的口服制劑可使用標(biāo)準(zhǔn)延遲或定時(shí)釋放制劑，以改變活性化合物的吸收?？诜苿┮部砂ńo予在水或果汁中的活性組分，如果需要，包含合適的穩(wěn)定劑或者乳化劑。
在某些情況中，將所述化合物以氣溶膠的形式直接給予氣道是合乎需要的。
本發(fā)明的化合物也可以非腸道或腹膜內(nèi)給藥。也可以在水中與適宜的表面活性劑如羥基丙基纖維素混合制備作為游離堿或藥理學(xué)上可接受的鹽的這些活性化合物的溶液劑或懸浮劑。也可以用甘油、液體聚乙二醇和它們?cè)谟椭械幕旌衔镏苽浞稚?。在常?guī)的貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以抑制微生物的生長(zhǎng)。
適合于注射使用的藥用形式包括滅菌水溶液劑或分散劑和用于臨時(shí)制備滅菌可注射水溶液劑或分散劑的滅菌粉末。在所有情況中，所述制劑必須是滅菌的和必須是流體以達(dá)到易于注射的程度。在制備和貯存的條件下它必須是穩(wěn)定的并且必須在抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用下保存。載體可以為溶劑或分散介質(zhì)，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、它們合適的混合物和植物油。
為了本公開的目的，經(jīng)皮給藥被理解為包括所有的穿過身體表面和身體通道的內(nèi)襯包括上皮和粘膜組織的給藥。使用本化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以洗劑、霜?jiǎng)?、泡沫劑、貼劑、懸浮劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)，可實(shí)施這樣的給藥。
通過使用含有所述活性化合物和對(duì)所述活性化合物惰性的載體的經(jīng)皮貼劑可實(shí)現(xiàn)經(jīng)皮給藥，該載體對(duì)皮膚無毒，并使得藥物經(jīng)皮膚傳遞全身吸收進(jìn)入血流。所述載體可采取任何數(shù)目的形式，例如霜?jiǎng)┖蛙浉鄤⒑齽?、凝膠劑和封閉裝置(occlusive devices)。霜?jiǎng)┖蛙浉鄤┛蔀樗突蛴桶偷恼吵硪后w或半固體乳劑。由分散于含有活性組分的石油或親水石油中的可吸收粉末組成的糊劑也可以是合適的。多種封閉裝置可用于把活性組分釋放進(jìn)入血流，例如包含貯庫的半透膜，后者含有含或不含載體的活性成分，或者含有活性成分的基質(zhì)。在文獻(xiàn)中已知其它的封閉裝置。
從傳統(tǒng)材料，包括可可脂，伴隨加入或不加入蠟以改變栓劑的熔點(diǎn)，和甘油，可制備栓劑。也可使用水溶性栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇。
以下描述本發(fā)明代表性實(shí)施例的制備。
實(shí)施例1
2-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，4-二醇
步驟a)N-(2，5-二甲氧基苯基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺。
將2，5-二甲氧基苯甲酸(5.0g，27.5mmol)和亞硫酰氯(15mL)的混合物回流1小時(shí)。真空除去揮發(fā)物。把殘余物溶于THF(20mL)中并加入到2，5-二甲氧基苯胺(4.6g，30.2mmol)、三乙胺(5mL，35.9mmol)和THF(40mL)的冷的(0℃)溶液中。將混合物攪拌30分鐘，傾入到水中，用HCl(2N)酸化并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 2/1)純化，得到白色固體(8.1g，93％收率，m.p.121-123℃)；MS m/e 318(M+H)+。
對(duì)C17H19NO5分析
理論值C，64.34；H，6.03；N，4.41
實(shí)測(cè)值C，64.29；H，5.95；N，4.44
步驟b)2-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，4-二醇。
在200℃下，將N-(2，5-二甲氧基苯基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺(1.0g，3.1mmol)和吡啶鹽酸鹽(2.0g，17.3mmol)的混合物攪拌1小時(shí)。把混合物冷卻至室溫并加入HCl(10mL，2N)。然后用EtOAc提取混合物并經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 2/1)純化，得到白色固體(0.8g，76％收率，m.p.309-311℃)；MS m/e 242(M-H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.98；H，3.71；N，5.62
實(shí)施例2
3-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2，3-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物。得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.239-241℃；MS m/e 244(M+H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.86；H，3.90；N，5.74
實(shí)施例3
2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.262-268℃；MS m/e 244(M-H)+。
對(duì)C13H8FNO3分析
理論值C，63.68；H，3.29；N，5.71
實(shí)測(cè)值C，64.01；H，3.25；N，5.63
實(shí)施例4
2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和3-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 260(M-H)+。
對(duì)C13H8ClNO3分析
理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35
實(shí)測(cè)值C，59.59；H，3.02；N，5.25
實(shí)施例5
2-(2-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.253-255℃；MS m/e 262(M+H)+。
對(duì)C13H8ClNO3分析
理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35
實(shí)測(cè)值C，59.79；H，2.87；N，5.36
實(shí)施例6
2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.269-271℃；MS m/e 244(M-H)+。
對(duì)C17H17NO3分析
理論值C，63.68；H，3.29；N，5.71
實(shí)測(cè)值C，63.53；H，3.71；N，5.38
實(shí)施例7
2-(3-叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-叔丁基-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.220-222℃；MS m/e 284(M+H)+。
對(duì)C17H17NO3分析
理論值C，72.07；H，6.05；N，4.94
實(shí)測(cè)值C，72.03；H，6.43；N，4.72
實(shí)施例8
2-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，4-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，5-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.278-280℃；MS m/e 244(M+H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20; H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，64.09；H，3.14；N，5.65
實(shí)施例9
3-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，3-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為褐色固體的產(chǎn)物，m.p.256-258℃；MS m/e 244(M+H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.91；H，3.98；N，5.72
實(shí)施例10
4-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.282-284℃；MS m/e 242(M-H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.57；H，3.68；N，5.63
實(shí)施例11
2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和3-氯-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 262(M+H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.57；H，3.68；N，5.63
實(shí)施例12
2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到為淺黃色固體的產(chǎn)物，m.p.264-267℃；MS m/e 228(M+H)+。
對(duì)C13H9NO3分析
理論值C，68.72；H，3.99；N，6.16
實(shí)測(cè)值C，67.87；H，4.05；N，6.23
實(shí)施例13
4-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，3-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，5-二甲氧基苯胺和2，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.大于300℃；MS m/e 242(M-H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，63.92；H，3.74；N，5.56
實(shí)施例14
2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.大于300℃；MS m/e 226(M-H)+。
對(duì)C13H9NO3分析
理論值C，68.72；H，3.99；N，6.16
實(shí)測(cè)值C，68.09；H，4.01；N，6.05
實(shí)施例15
4-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，3-二醇
以與在實(shí)施例1中描述的基本相同的方法，從2，4-二甲氧基苯胺和2，4-二甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.293-296℃；MS m/e 242(M-H)+。
對(duì)C13H9NO4分析
理論值C，64.20；H，3.73；N，5.76
實(shí)測(cè)值C，64.43；H，3.77；N，5.74
實(shí)施例16
6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)N-(4-氯-2，5-二甲氧基苯基)-3-氟-4-甲氧基苯甲酰胺。
以與在實(shí)施例1步驟a中描述的基本相同的方法，從4-氯-2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.197-199℃；MS m/e 340(M+H)+。
對(duì)C16H15ClFNO4分析
理論值C，56.56；H，4.45；N，4.12
實(shí)測(cè)值C，56.33；H，4.35；N，4.05
步驟b)N-(4-氯-2，5-二羥基苯基)-3-氟-4-羥基苯甲酰胺。
將三氟化硼二甲硫復(fù)合物(70mL)加入到N-(4-氯-2，5-二甲氧基苯基)-3-氟-4-甲氧基苯甲酰胺(1.75g，5.15mmol)和CH2Cl2(35mL)的混合物中。攪拌20小時(shí)后，在氮?dú)饬飨?，在防護(hù)罩中蒸發(fā)溶劑和過量的試劑。用冰和HCl(1N)的混合物吸收殘余物并用EtOAc提取。用HCl(1N)洗滌有機(jī)層，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/己烷/EtOAc 5/3/2，和AcOH 10mL每1升的洗脫溶劑)純化，得到白色固體(1.4g，91％收率，m.p.254-256℃)；MS m/e 296(M-H)+。
對(duì)C13H9ClFNO4分析
理論值C，52.46；H，3.05；N，4.71
實(shí)測(cè)值C，51.98；H，2.98；N，4.56
步驟c)6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例1步驟b中描述的基本相同的方法，從N-(4-氯-2，5-二羥基苯基)-3-氟-4-羥基苯甲酰胺和吡啶鹽酸鹽制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.258-260℃；MS m/e 278(M-H)+。
對(duì)C13H17ClFNO3分析
理論值C，55.83；H，2.52；N，5.01
實(shí)測(cè)值C，55.35；H，2.59；N，4.91
實(shí)施例17
6-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從4-溴-2，5-二甲氧基苯胺和3-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.224-226℃；MS m/e 322(M-H)+。
對(duì)C13H17BrFNO3分析
理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32
實(shí)測(cè)值C，48.69；H，2.36；N，4.59
實(shí)施例18
6-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從4-氯-2，5-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.260-262℃；MS m/e 260(M-H)+。
對(duì)C13H8ClNO3分析
理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35
實(shí)測(cè)值C，59.09；H，3.06；N，5.11
實(shí)施例19
5-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇
以與在實(shí)施例16中描述的基本相同的方法，從5-氯-2，4-二甲氧基苯胺和4-甲氧基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物并得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.254-256℃；MS m/e 262(M+H)+。
對(duì)C13H8ClNO3分析
理論值C，59.67；H，3.08；N，5.35
實(shí)測(cè)值C，59.40；H，2.97；N，5.22
實(shí)施例20
7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2-溴-4-甲氧基-6-硝基苯酚。
將在乙酸(20mL)中的溴(16.0g，100mmol)加入到4-甲氧基-2-硝基苯酚(16.9g，100mmol)、乙酸鈉(16.4g，200mmol)和乙酸(100mL)的混合物中。把混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后在70℃下攪拌2小時(shí)，傾入到含有濃硫酸(10mL)的水(1.51)中。過濾沉淀的固體并結(jié)晶(從氯仿/己烷中)，得到棕色固體，m.p.116-118℃；MS m/e 246(M-H)+。
對(duì)C7H6BrNO4分析
理論值C，33.90；H，2.44；N，5.65
實(shí)測(cè)值C，34.64；H，2.16；N，5.43
步驟b)2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚。
將阮內(nèi)鎳(2.5g)加入到2-溴-4-甲氧基-6-硝基苯酚(8.8g，35.5mmol)的EtOAc(100mL)溶液中。在帕爾裝置中，于25磅/平方英寸的氫氣壓下，把混合物振搖2.5小時(shí)。通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物并真空濃縮，得到灰色固體(7.4g，96％收率，95-97℃)；MS m/e 218(M+H)+。
對(duì)C7H8BrNO2分析
理論值C，38.56；H，3.70；N，6.42
實(shí)測(cè)值C，38.32；H，3.77；N，6.24
步驟c)2-溴-4-甲氧基-6-[(4-甲氧基苯甲?；?氨基]苯基-4-甲氧基苯甲酸酯
將無水吡啶(37.0mL，468.5mmol)滴加入到2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚(20.0g，91.7mmol)、4-甲氧基苯甲酰氯(38.9g，229.0mmol)和CH2Cl2(250mL)的冷的(0℃)混合物中(機(jī)械攪拌的)。在加入吡啶期間形成沉淀。把混合物攪拌30分鐘，然后加入乙醚(250mL)。濾出沉淀的固體并用乙醚洗滌。用水吸收固體并攪拌20分鐘。然后濾出固體并干燥，得到灰白色固體(42.5g，95％收率，m.p.73-75℃)；MS m/e484(M-H)+。
對(duì)C23H20BrNO6分析
理論值C，56.80；H，4.15；N，2.88
實(shí)測(cè)值C，56.50；H，3.78；N，2.83
步驟d)7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑。
途徑a)
伴隨連續(xù)除去水(迪安-斯達(dá)克榻分水器)，將2-溴-4-甲氧基-6-[(4-甲氧基苯甲?；?氨基]苯基4-甲氧基苯甲酸酯(42.0g，86.4mmol)、對(duì)甲苯磺酸單水合物(32.8g，172.8mmol)和無水對(duì)二甲苯(800mL)的懸浮液回流1小時(shí)。在回流溫度下，最初的懸浮液變?yōu)樽厣芤?。把混合物冷卻至室溫并用NaOH(2N)洗滌。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)層。蒸發(fā)并從丙酮/乙醚中結(jié)晶，得到灰白色固體(23.5g，82％收率，m.p.139-141℃)；MS m/e 334(M+H)+。
對(duì)C15H12BrNO3分析
理論值C，53.91；H，3.62；N，4.19
實(shí)測(cè)值C，53.83；H，3.37；N，4.01
途徑b)
使用迪安-斯達(dá)克榻分水器，將2-氨基-6-溴-甲氧基苯酚(100mg，0.46mmol)、4-甲氧基苯甲酸(77mg，0.50mmol)和硼酸(31mg，0.5mmol)在對(duì)二甲苯(9mL)中的混合物回流24小時(shí)。把混合物冷卻至室溫并真空濃縮。經(jīng)快速層析法(30％EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到淺桃紅色固體(99mg，65％收率，m.p.136-138℃)；MS m/e 334(M+H)+。
對(duì)C15H12BrNO3分析
理論值C，53.91；H，3.62；N，4.19
實(shí)測(cè)值C，53.78；H，3.55；N，4.01
步驟e)7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇。
途徑a)
將三溴化硼(1M，89.9mL，89.8mmol)滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(10.0g，29.94mmol)和CH2Cl2(50mL)的冷的(-70℃)懸浮液中。使混合物溫?zé)嶂潦覝?。在溫?zé)崞陂g，懸浮液變?yōu)樯钌芤?。把混合物在室溫下攪?天，然后緩慢傾入到冷的(0℃)乙醚(1000mL)中。于20分鐘內(nèi)，向新的混合物中緩慢加入甲醇(200mL)。然后把混合物傾入到水(1.51)中。用水把有機(jī)層洗滌三次，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并從丙酮/乙醚/己烷中結(jié)晶，得到灰白色固體(8.4g，92％收率，m.p.298-299℃)；MS m/e 306(M+H)+。
對(duì)C13H8BrNO3分析
理論值C，51.01；H，2.63；N，4.58
實(shí)測(cè)值C，50.96；H，2.30；N，4.42
途徑b)
將三溴化硼(0.25mL，2.7mmol)滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(130mg，0.39mmol)和二氯甲烷(1.5mL)的冷的(-78℃)混合物中。使反應(yīng)混合物逐漸恢復(fù)到室溫并攪拌1小時(shí)。將混合物傾入到冰中并用EtOAc提取。用鹽水洗滌有機(jī)提取液并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并快速層析化(30-40％EtOAc/石油醚)，得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物(102mg，86％收率)，m.p.295-298℃；MS m/e 304(M-H)+。
對(duì)C13H8BrNO3分析
理論值C，51.01；H，2.63；N，4.58
實(shí)測(cè)值C，51.06；H，2.77；N，4.36
實(shí)施例21
7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2-溴-6-[(3-氟-4-甲氧基苯甲?；?氨基]-4-甲氧基苯基3-氟-4-甲氧基苯甲酸酯。
將3-氟-4-甲氧基苯甲酸(39.0g，229mmol)、亞硫酰氯(100mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)的混合物回流1小時(shí)。真空除去揮發(fā)物。用苯吸收固體(兩次)并真空除去揮發(fā)物。把殘余物溶于CH2Cl2(100mL)中并加入到2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚(20.0g，91.7mmol)和CH2Cl2(150mL)的冷的(0℃)混合物中(機(jī)械攪拌的)。將無水吡啶(37.0mL，468.5mmol)滴加入到新的混合物中。在加入吡啶期間形成沉淀。把混合物攪拌30分鐘，然后加入乙醚(250mL)。濾出沉淀的固體并用乙醚洗滌。用水吸收固體并攪拌20分鐘。然后濾出固體并干燥，得到灰白色固體(46.5g，97％收率，m.p.184-186℃)；MS m/e 520(M-H)+。
對(duì)C23H18BrF2NO6分析
理論值C，52.89；H，3.47；N，2.68
實(shí)測(cè)值C，52.79；H，3.23；N，2.63
步驟b)7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑。
伴隨連續(xù)除去水(迪安-斯達(dá)克榻分水器)，將2-溴-6-[(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)氨基]-4-甲氧基苯基3-氟-4-甲氧基苯甲酸酯(46.0g，88.1mmol)、對(duì)-甲苯磺酸單水合物(33.5g，177.2mmol)和無水對(duì)-二甲苯(11)的懸浮液回流3小時(shí)。在回流溫度下，最初的懸浮液變?yōu)樽厣芤骸V出固體并用乙醚洗滌。把固體懸浮于乙醚(200mL)中，攪拌10分鐘，濾出并干燥，得到褐色固體(25.1g，m.p.175-177℃)。將乙醚層濃縮至20mL，得到2.5g另外的產(chǎn)物(90％總收率)。MS m/e 352(M+H)+。
對(duì)C15H11BrFNO3分析
理論值C，51.16；H，3.15；N，3.98
實(shí)測(cè)值C，51.10；H，2.92；N，3.89
步驟c)7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例20步驟e中描述的基本相同的方法，制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.265-267℃；MS m/e 332(M-H)+。
對(duì)C13H7BrFNO3分析
理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32
實(shí)測(cè)值C，48.19；H，2.29；N，4.19
實(shí)施例22
7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2-氟-4-甲氧基苯甲酸。
向Ag2O(13.5g，58.4mmol)、NaOH(19.5g，487mmol)和水(200mL)的溫?zé)?55℃)混合物中加入2-氟-4-甲氧基苯甲醛(15g，97.4mmol)。把混合物攪拌1小時(shí)，濾出并用熱水(10mL)洗滌沉淀的固體。伴隨劇烈攪拌下，把濾液緩慢加入到冷的(0℃)HCl(5N)中。過濾沉淀的固體，用水洗滌并干燥，得到白色固體(13.6g，82％收率，m.p.194-196℃)；MS m/e 169(M-H)+。
對(duì)C8H7FO3分析
理論值C，56.48；H，4.15
實(shí)測(cè)值C，56.12；H，4.12
步驟b)7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從2-氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物，并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.248-250℃；MS m/e 324(M+H)+。
對(duì)C13H7BrFNO3分析
理論值C，48.18；H，2.18；N，4.32
實(shí)測(cè)值C，47.89；H，1.95；N，4.18
實(shí)施例23
7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸甲酯。
將碘甲烷(10.7mL，172.5mmol)加入到2，3-二氟-4-羥基苯甲酸(10.0g，57.5mmol)、碳酸鋰(12.7g，172.5mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(100mL)的混合物中。把混合物在40℃下攪拌12小時(shí)，然后傾入到水中并用EtOAc提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 5/1)純化，得到白色固體(10.2g，88％收率，m.p.66-68℃)；MS m/e 203(M+H)+。
對(duì)C9H8F2O3分析
理論值C，53.47；H，3.99
實(shí)測(cè)值C，53.15；H，3.83
步驟b)2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸。
將氫氧化鈉(2N，50mL)加入到2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸甲酯(10.0g，49.5mmol)、THF(100mL)和MeOH(100mL)的混合物中。把混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，用HCl(2N)酸化。濾出沉淀的固體，用水洗滌并干燥，得到白色固體(8.9g，96％收率，m.p.194-196℃)；MSm/e 187(M-H)+。
對(duì)C8H6F2O3分析
理論值C，51.08；H，3.21
實(shí)測(cè)值C，50.83；H，2.92
步驟c)7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從2，3-二氟-4-甲氧基苯甲酸制備標(biāo)題化合物，并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.258-260℃；MS m/e 342(M+H)+。
對(duì)C13H6BrF2NO3分析
理論值C，45.64；H，1.77；N，4.09
實(shí)測(cè)值C，45.33；H，1.62；N，4.02
實(shí)施例24
2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇
途徑a)
步驟a)7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-1，3-苯并噁唑。
將叔丁基(氯代)二甲基硅烷(23.2g，154mmol)分批加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(16.6g，51.4mmol)、咪唑(17.5g，257mmol)、N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.0g，8.1mmol)和DMF(300mL)的混合物中。把混合物攪拌3小時(shí)，傾入到水中并用乙醚提取。有機(jī)提取液經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 50/1)純化，得到白色固體(27.5g，97％收率，m.p.98-99℃)；MS m/e 552(M+H)+。
對(duì)C25H35BrFNO3Si2分析
理論值C，54.34；H，6.38；N，2.53
實(shí)測(cè)值C，54.06；H，6.52；N，2.24
步驟b)5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑。
將二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(0.63g，0.79mmol)加入到7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-1，3-苯并噁唑(14.7g，26.6mmol)、三丁基(乙烯基)錫(10.5g，33.25mmol)和對(duì)-二甲苯(85mL)的混合物中。把反應(yīng)混合物在90℃下攪拌24小時(shí)，冷卻至室溫，用乙醚(100mL)稀釋并用活性炭處理。通過MgSO4過濾混合物并濃縮。經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc50/1)純化，得到白色固體(11.8g，89％收率，m.p.93-95℃)；MS m/e 500(M+H)+。
對(duì)C27H38FNO3Si2分析
理論值C，64.89；H，7.66；N，2.80
實(shí)測(cè)值C，64.59；H，7.70；N，2.73
步驟c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
將氫氟酸(48wt.％在水中，1mL)加入到5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氟苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑(1.5g，3.0mmol)、THF(6mL)和乙腈(3mL)的溶液中。把反應(yīng)混合物在65℃下攪拌8小時(shí)，然后傾入到水中。濾出沉淀的固體并干燥。從丙酮/乙醚中結(jié)晶該產(chǎn)物，得到白色固體(0.72g，81％收率，m.p.249-251℃)；MS m/e 272(M+H)+。
對(duì)C15H10FNO3分析
理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16
實(shí)測(cè)值C，66.31；H，3.85；N，4.96
途徑b)
2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
將二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(0.87g，1.1mmol)加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(7.16g，22.1mmol)、三丁基(乙烯基)錫(10.5g，33.25mmol)和乙二醇二乙醚(65mL)的混合物中。將該反應(yīng)混合物在115℃下攪拌48小時(shí)，冷卻至室溫并用活性炭處理。通過MgSO4過濾混合物并濃縮。經(jīng)酸性硅膠上的快速層析法(己烷/EtOAc/CH2Cl2/1/1/1)純化，得到白色固體(4.35g，72％收率，m.p.250-252℃)；MS m/e 272(M+H)+。
對(duì)C15H10FNO3分析
理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16
實(shí)測(cè)值C，66.03；H，3.68；N，5.09
途徑c)
步驟a)4-[5-(乙酰氧基)-7-溴-1，3-苯并噁唑-2-基]-2-氟苯基乙酸酯。
將乙酸酐(1.0mL，9.95mmol)加入到7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(1.24g，3.8mmol)、N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.1g，9.18mmol)和1，4-二噁烷(13mL)的冷的(0℃)溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?0小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中加入水(50mL)，用EtOAc提取并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并從EtOAc/己烷中結(jié)晶，得到灰白色固體(0.87g，56％收率)；MS m/e 408(M+H)+。
對(duì)C17H11BrFNO5分析
理論值C，50.02；H，2.72；N，3.43
實(shí)測(cè)值C，49.58；H，2.59；N，3.37
步驟b)2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-基乙酸酯。
將二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(46mg，0.06mmol)加入到4-[5-(乙酰氧基)-7-溴-1，3-苯并噁唑-2-基]-2-氟苯基乙酸酯(0.8g，1.98mmol)、三丁基(乙烯基)錫(0.9g，2.8mmol)和對(duì)-二甲苯(9mL)的混合物中。將所述反應(yīng)混合物在130℃下攪拌5小時(shí)，冷卻至室溫，用乙醚(10mL)稀釋并用活性炭處理。通過MgSO4過濾混合物并濃縮。經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 5/1)純化，得到白色固體(0.4g，56％收率，m.p.154-156℃)；MS m/e 356 (M+H)+。
對(duì)C19H14FNO5分析
理論值C，64.23；H，3.97；N，3.94
實(shí)測(cè)值C，63.94；H，3.78；N，3.76
步驟c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
將碳酸鉀(55mg)加入到2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-基乙酸酯(0.14g，0.39mmol)和1，4-二噁烷(3mL)的溶液中。將所述混合物在90℃下攪拌1小時(shí)，傾入到水中，用HCl(2N)酸化并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并從EtOAc/己烷中結(jié)晶，得到白色固體(0.06g，46％收率，m.p.250-252℃)；MS m/e272(M+H)+。
對(duì)C15H10FO3分析
理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16
實(shí)測(cè)值C，66.32；H，3.47；N，5.18
實(shí)施例25
2-(2-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
以與在實(shí)施例24途徑a)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.274-275℃；MS m/e 272(M+H)+。
對(duì)C15H10FNO3分析
理論值C，66.42；H，3.72；N，5.16
實(shí)測(cè)值C，66.18；H，3.47；N，4.97
實(shí)施例26
2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
以與在實(shí)施例24途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇制備標(biāo)題化合物并得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.276-278℃；MS m/e 290(M+H)+。
對(duì)C15H9F2NO3分析
理論值C，62.29；H，3.14；N，4.84
實(shí)測(cè)值C，61.90；H，3.05；N，4.52
實(shí)施例27
2-(4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇。
以與在實(shí)施例24途徑b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.249-250℃；MS m/e 254(M+H)+。
對(duì)C15H11NO3分析
理論值C，70.99；H，4.39；N，5.52
實(shí)測(cè)值C，70.75；H，4.34；N，5.46
實(shí)施例28和29
4-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇(實(shí)施例28)和4，6-二溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇(實(shí)施例29)。
將N-溴代琥珀酰亞胺(0.49g，2.77mmol)加入到2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇(0.75g，2.77mmol)和乙腈(30mL)的混合物中。將所述反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，傾入到水中并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc/CH2Cl2 2/1/1)純化，得到(a)為白色固體的產(chǎn)物(0.45g，m.p.226-228℃)；MS m/e 349(M+H)+。
對(duì)C15H9BrNO3分析
理論值C，51.45；H，2.59；N，4.00
實(shí)測(cè)值C，51.08；H，2.40；N，3.90
和(b)為白色固體的產(chǎn)物(0.18 g，m.p.272-274℃)；MS m/e 428(M+H)+。
對(duì)C15H8Br2NO3分析
理論值C，41.99；H，1.88；N，3.26
實(shí)測(cè)值C，42.25；H，1.90；N，3.14
實(shí)施例30
7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑。
以與在實(shí)施例24途徑c)步驟b)中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物并得到為白色固體的產(chǎn)物，MS m/e 282(M+H)+。
對(duì)C17H15NO3分析
理論值C，72.58；H，5.37；N，4.98
實(shí)測(cè)值C，72.33；H，5.26；N，4.72
步驟b)7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇。
將三溴化硼(0.85mL，8.95mmol)滴加入到5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑(0.31g，1.12mmol)和CH2Cl2(4mL)的冷的(-78℃)混合物中。使混合物溫?zé)嶂潦覝?。于室溫下攪?8小時(shí)后，將所述混合物緩慢傾入到冷的(0℃)乙醚(20mL)中。然后向該混合物中緩慢加入甲醇(10mL)。把新的混合物用水洗滌(三次)并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 3/1)純化，得到淺黃色固體(0.27g，59％收率，m.p.175-177℃)；MS m/e 412(M+H)+。
對(duì)C15H11Br2NO3分析
理論值C，43.62；H，2.68；N，3.39
實(shí)測(cè)值C，43.85；H，2.44；N，3.33
實(shí)施例31
7-(1-溴代乙烯基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
將1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.25g，1.65mmol)加入到7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(0.4g，0.96mmol)和乙腈(4mL)的溶液中。將該反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，傾入到冷的(0℃)HCl(1N，10mL)中并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/己烷/異丙醇15/5/1)純化，得到白色固體(185mg，58％收率，m.p.228-230℃)；MS m/e 332(M+H)+。
對(duì)C15H10BrNO3分析
理論值C，54.24；H，3.03；N，4.22
實(shí)測(cè)值C，54.27；H，2.94；N，4.20
實(shí)施例32
7-(1-溴代乙烯基)-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例29-30中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物并得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.235-237℃；MS m/e 350(M+H)+。
對(duì)C15H9BrFNO3分析
理論值C，51.45；H，2.59；N，4.00
實(shí)測(cè)值C，51.63；H，2.38；N，3.98
實(shí)施例33
7-(1-溴代乙烯基)-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例29-30中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(2，3-二氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.240-242℃；MS m/e 366(M-H)+。
對(duì)C15H8BrF2NO3分析
理論值C，48.94；H，2.19；N，3.80
實(shí)測(cè)值C，49.63；H，2.33；N，3.61
實(shí)施例34
7-烯丙基-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例24途徑c步驟b中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑、烯丙基三丁基錫和二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀，隨后按照實(shí)施例20步驟e)脫甲基化，制備標(biāo)題化合物。得到為淺桃紅色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.169-171℃；MS m/e 284(M-H)+。
對(duì)C16H12FNO3分析
理論值C，67.37；H，4.24；N，4.91
實(shí)測(cè)值C，67.37；H，4.16；N，4.66
實(shí)施例35
7-乙炔基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
將四重(三苯基膦)鈀(O)(52mg，0.045mmol)加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(0.3g，0.9mmol)、碘化銅(I)(17.1mg，0.09mmol)、乙炔基(三甲基)硅烷(0.2g mg，2mmol)和三乙胺(12mL)的混合物中。將所述混合物在110℃下攪拌4小時(shí)，傾入到氯化銨水溶液中并用EtOAc/THF(1/1)提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 6/1)純化，得到灰白色固體(0.27g，85％收率)。將該產(chǎn)物溶于CH2Cl2(2mL)中，冷卻至-78℃并滴加三溴化硼(0.6mL)。使該混合物溫?zé)嶂潦覝亍Ｓ谑覝叵聰嚢?8小時(shí)后，將所述混合物緩慢傾入到冷的(0℃)乙醚(10mL)中。然后向該混合物中緩慢地加入甲醇(3mL)。將新的混合物用水洗滌(三次)并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 3/1)純化，得到黃色固體(86mg，38％收率，m.p.229-231℃)；MS m/e 252(M+H)+。
對(duì)C15H9NO3分析
理論值C，71.71；H，3.61；N，5.58
實(shí)測(cè)值C，71.39；H，3.49；N，5.32
實(shí)施例36
2-(4-羥基苯基)-7-丙基-1，3-苯并噁唑-5-醇
將四重(三苯基膦)鈀(O)(70mg，0.06mmol)加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(0.4g，1.2mmol)、溴代(丙基)鋅(0.5M在THF中，3.6mL，1.8mmol)和THF(4mL)的混合物中。將所述混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，傾入到HCl(1N)中并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 6/1)純化，得到灰白色固體(0.14g)。將該產(chǎn)物溶于CH2Cl2(2mL)中，冷卻至-78℃并滴加三溴化硼(0.35mL)。使該混合物溫?zé)嶂潦覝?。于室溫下攪?8小時(shí)后，把混合物緩慢傾入到冷的(0℃)乙醚(10mL)中。然后向混合物中緩慢加入甲醇(3mL)。將新的混合物用水洗滌(三次)并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/EtOAc 4/1)純化，得到白色固體(90mg，27％收率，m.p.110-112℃)；MS m/e 270(M+H)+。
對(duì)C16H15NO3分析
理論值C，71.36；H，5.61；N，5.20
實(shí)測(cè)值C，71.02；H，5.58；N，4.94
實(shí)施例37
7-丁基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例35中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑和溴代(丁基)鋅制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.125-127℃；MS m/e 282(M-H)+。
對(duì)C17H17NO3分析
理論值C，72.07；H，6.05；N，4.94
實(shí)測(cè)值C，72.78；H，5.87；N，4.69
實(shí)施例38
7-環(huán)戊基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例35中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑和溴代(環(huán)戊基)鋅制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.220-222℃；MS m/e 296(M+H)+。
對(duì)C18H17NO3分析
理論值C，73.20；H，5.80；N，4.74
實(shí)測(cè)值C，73.05；H，5.74；N，4.59
實(shí)施例39
5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲酸乙酯
步驟a)7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)-1，3-苯并噁唑。
以與在實(shí)施例24途徑a步驟a中描述的基本相同的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑和叔丁基(氯代)二甲基硅烷制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的要求的產(chǎn)物，m.p.90-91℃；MS m/e 534(M+H)+。
對(duì)C25H36BrNO3Si2分析
理論值C，56.16；H，6.79；N，2.62
實(shí)測(cè)值C，55.66；H，6.86；N，2.68
步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲酸乙酯
將正丁基鋰(2.5M，0.3mL，0.75mmol)滴加入到7-溴-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(4-{{叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}苯基)-1，3-苯并噁唑(0.4g，0.75mmol)和THF(4mL)的冷的(0℃)溶液中。使該混合物溫?zé)嶂?0℃，然后攪拌2小時(shí)。然后向所述反應(yīng)混合物中加入在THF(1mL)中的[(氰基羰基)氧基]乙烷(84mg)并使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃，攪拌1小時(shí)。用氯化銨水溶液猝滅該反應(yīng)，用EtOAc提取，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/CH2Cl2/異丙醇18/2/1)純化，得到無色的油(340mg)。將產(chǎn)物溶于THF(3.5mL)中并用四丁基氟化銨(1M在THF中，1.4mL)處理。將所述混合物攪拌30分鐘，傾入到HCl(1N)中并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(己烷/CH2Cl2/異丙醇5/2/1)純化，得到白色固體(119mg，53％收率，m.p.305-307℃)；MS m/e 300(M+H)+。
對(duì)C16H13NO5分析
理論值C，64.21；H，4.38；N，4.68
實(shí)測(cè)值C，64.04；H，4.43；N，4.40
實(shí)施例40
2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-苯基-1，3-苯并噁唑
將7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(200mg，0.60mmol)和四重(三苯基膦)鈀(O)(63mg，0.03mmol)溶于甲苯(5mL)中并在氮?dú)夥障?，于室溫?cái)嚢?0分鐘。加入苯硼酸(110mg，0.90mmol)，隨后加入碳酸鈉水溶液(2M，1.5mL)和乙醇(2mL)。將所述混合物回流12小時(shí)，用水稀釋并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(20-40％EtOAc/石油醚)純化，得到為淺桃紅色固體的標(biāo)題化合物，mp 92℃；MS m/e 332(M+H)+。
對(duì)C21H17NO3分析
理論值C，76.12；H，5.17；N，4.23
實(shí)測(cè)值C，75.86；H，5.08；N，4.07
步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法制備標(biāo)題化合物，并得到為紫色固體的產(chǎn)物，m.p.255-258℃；MS m/e 302(M-H)+。對(duì)C19H13NO3x0.25H2O分析
理論值C，74.14；H，4.42；N，4.55
實(shí)測(cè)值C，73.81；H，4.40；N，4.35
實(shí)施例41
5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-腈
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-腈。
在干燥氮?dú)庀?，?-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(200mg，0.60mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液與氰化銅(I)(80mg，0.90mmol)攪拌并加熱至回流4小時(shí)。將所述混合物冷卻并傾入到過量的乙二胺四乙酸水溶液中。分離粗品產(chǎn)物，從(30％EtOAc/石油醚)中得到為褐色針晶的腈(164mg，98％收率)；m.p.180-183℃；MS m/e 281(M+H)+。
對(duì)C16H12N2O3x0.2H2O分析
理論值C，66.84；H，4.48；N，9.74
實(shí)測(cè)值C，66.63；H，4.33；N，9.60
步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-腈
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法制備標(biāo)題化合物，并得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物，mp 297-303℃；MS m/e 253(M+H)+。
對(duì)C14H8N2O3x0.5H2O分析
理論值C，64.37；H，3.47；N，10.72
實(shí)測(cè)值C，64.44；H，3.49；N，9.92
實(shí)施例42
5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲酰胺
從實(shí)施例40步驟b的反應(yīng)物分離為作為淺褐色固體的小量產(chǎn)物的標(biāo)題化合物，m.p.325℃；MS m/e 271(M+H)+。
對(duì)C14H10N2O4x0.5H2O分析
理論值C，60.22；H，3.97；N，10.03
實(shí)測(cè)值C，59.71；H，3.91；N，9.84
實(shí)施例43
2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇
將7-溴-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(100mg，0.33mmol)和溴化銅(I)(56mg，0.39mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的混合物與新鮮制備的甲醇鈉(15wt％在甲醇中，1ml)攪拌并加熱至120℃4小時(shí)。將所述混合物冷卻并用HCl(1N，5ml)稀釋。用乙酸乙酯分離粗品產(chǎn)物，隨后快速層析化(40％-50％EtOAc/石油醚)，得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(50mg，60％收率，mp 225-228℃)；MS m/e258(M+H)+。
對(duì)C14H11NO4x0.75H2O分析
理論值C，62.11；H，4.65；N，5.17
實(shí)測(cè)值C，62.53；H，4.73；N，5.02
實(shí)施例44
7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)7-乙基-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑。
將正丁基鋰(2.5N，0.43mL，1.08mmol)滴加入到7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(300mg，0.90mmol)和THF(2mL)的冷的(-78℃)混合物中。將該混合物攪拌0.5小時(shí)。把碘乙烷(0.14mL，1.8mmol)滴加入到混合物中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)。用氯化銨水溶液猝滅該反應(yīng)，傾入到水中并用EtOAc提取。用鹽水洗滌有機(jī)提取液并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并快速層析化(20％EtOAc/石油醚)，得到為淺棕色固體的產(chǎn)物(231mg，91％收率)m.p.85℃；MSm/e 284(M+H)+。
對(duì)C17H17NO3x0.2H2O分析
理論值C，70.28；H，6.17；N，4.94
實(shí)測(cè)值C，70.12；H，5.74；N，4.82
步驟b)7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法制備標(biāo)題化合物并得到為淺棕色固體的產(chǎn)物(98％收率)，m.p.110-115℃；MS m/e 256(M+H)+。
實(shí)施例45
7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)7-乙基-5-甲氧基-2-(2-乙基-4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑。
按照實(shí)施例43步驟a的方法，使用兩當(dāng)量的正丁基鋰制備標(biāo)題化合物，并且將粗品產(chǎn)物直接用于下一步驟。
步驟b)7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從7-乙基-5-甲氧基-2-(2-乙基-4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為灰色固體的產(chǎn)物(87％收率)；MS m/e 284(M+H)+。
實(shí)施例46
5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛。
按照實(shí)施例43步驟a的方法，使用N-甲基N-甲酰苯胺作為親電試劑制備標(biāo)題化合物，得到淺橙色固體(94％，m.p.153-155℃)；MSm/e 284(M+H)+。
對(duì)C16H13NO4分析
理論值C，67.84；H，4.63；N，4.94
實(shí)測(cè)值C，67.58；H，4.53；N，4.75
步驟b)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛制備標(biāo)題化合物，并得到為深黃色固體的產(chǎn)物(99％收率，m.p.273-275℃)；MS m/e 256(M+H)+。
對(duì)C14H9NO4x0.25H2O分析
理論值C，64.74；H，3.69；N，5.39
實(shí)測(cè)值C，64.32；H，3.59；N，5.18
實(shí)施例47
7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑
在0℃下，將硼氫化鈉(66.8mg，1.76mmol)加入到5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛(250mg，0.88mmol)的無水MeOH(8mL)溶液中。將該反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。把殘余物溶于乙醚中并用水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥并過濾。蒸發(fā)并快速層析化(50％EtOAc/石油醚)，得到產(chǎn)物(210mg，83％收率)，將其直接用于下一步反應(yīng)。
步驟b)7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇。
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物并得到為淺棕色固體的產(chǎn)物，m.p.282℃(分解)；MS m/e 258(M+H)+。
對(duì)C14H11NO4x0.5H2O分析
理論值C，63.16；H，4.54；N，5.26
實(shí)測(cè)值C，63.33；H，4.36；N，5.04
實(shí)施例48
7-(溴代甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從5-甲氧基-7-(羥基甲基)-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑，同時(shí)在三溴化硼存在下延長(zhǎng)攪拌，制備標(biāo)題化合物，并得到為淺棕色固體的產(chǎn)物，m.p.250-260℃(分解)；MS m/e 321(M+H)+。
對(duì)C14H10BrNO3分析
理論值C，52.52；H，3.15；N，4.38
實(shí)測(cè)值C，52.26；H，3.17；N，4.07
實(shí)施例49乙腈
向7-(溴代甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(122mg，0.40mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中加入18-冠-6-醚(202mg，0.80mmol)和氰化鉀(131mg，2mmol)。攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，然后傾入到水中并用EtOAc提取。用鹽水洗滌有機(jī)提取液并經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并快速層析化(50％-60％EtOAc/石油醚)，得到為灰色固體的產(chǎn)物(80mg，75％收率)，m.p.170-180℃；MS m/e 265(M-H)+。
對(duì)C15H10N2O3x1.5H2O分析
理論值C，61.43；H，4.47；N，9.55
實(shí)測(cè)值C，61.41；H，4.21；N，9.19
實(shí)施例50
7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇]
步驟a)2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-基]丙烷-2-醇
按照實(shí)施例43步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑，使用丙酮作為親電試劑制備標(biāo)題化合物，得到白色固體(78％收率，m.p.149℃)；MS m/e 314(M+H)+。
對(duì)C18H19NO4分析
理論值C，68.99；H，6.11；N，4.47
實(shí)測(cè)值C，68.78；H，6.13；N，4.35
步驟b)7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇]
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-基]丙烷-2-醇制備標(biāo)題化合物，并得到為深棕色固體的產(chǎn)物(90％收率，m.p.180-185℃)；MS m/e 286(M+H)+。
對(duì)C16H15NO4x0.5H2O分析
理論值C，65.30；H，5.48；N，4.76
實(shí)測(cè)值C，65.03；H，5.20；N，4.72
實(shí)施例51
2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇
將吡啶鹽酸鹽加熱至(400mg)加熱至190℃。向該融化物中加入2-[5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-基]丙烷-2-醇(114mg，0.36mmol)并攪拌反應(yīng)物2小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，溶于水中并用EtOAc提取。合并有機(jī)層并先后用HCl(1N)、水和鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(50％-60％EtOAc/石油醚)純化，得到為淺棕紅色固體的產(chǎn)物(40mg，41％收率)，m.p.225-228℃；MSm/e 268(M+H)+。
對(duì)C16H13NO3x0.5H2O分析
理論值C，69.56；H，5.11；N，5.06
實(shí)測(cè)值C，69.46；H，5.22；N，4.56
實(shí)施例52
2-(4-羥基苯基)-7-異丙基-1，3-苯并噁唑-5-醇]
將2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇(64mg，0.24mmol)溶于EtOAc(5mL)和無水乙醇(5mL)的混合物中并在含有氬氣的惰性氣氛下放置。向該混合物中加入10％Pd-C(25mg)。將溶液在帕爾裝置中于25磅/平方英寸下氫化3小時(shí)。將所述溶液通過硅藻土過濾并用乙醇沖洗。濃縮濾液并經(jīng)快速層析法(50％EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到為褐色固體的產(chǎn)物(58mg，90％收率)，m.p.200℃；MSm/e 270(M+H)+。
實(shí)施例53
7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2-溴-4-甲氧基-6-{[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲?；鵠氨基}苯基4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸酯。
以與在實(shí)施例20步驟c中描述的基本相同的方法，從2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚和4-甲氧基-3-三氟甲基苯甲酰氯制備標(biāo)題化合物。得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.205-208℃；MS m/e 622(M+H)+。
對(duì)C25H18BrF6NO6分析
理論值C，48.25；H，2.92；N，2.25
實(shí)測(cè)值C，48.47；H，2.76；N，2.16
步驟b)7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑。
以與在實(shí)施例20步驟d(途徑a)中描述的基本相同的方法，從2-溴-4-甲氧基-6-{[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基}苯基4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯甲酸酯和對(duì)甲苯磺酸單水合物制備標(biāo)題化合物。得到為灰白色固體的產(chǎn)物，m.p.183-185℃；MS m/e 402(M+H)+。
對(duì)C16H11BrF3NO3分析
理論值C，47.79；H，2.76；N，3.48
實(shí)測(cè)值C，47.60；H，2.50；N，3.37
步驟c)7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例20步驟e(途徑b)的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為淺黃色固體的產(chǎn)物(50％收率，m.p.200-210℃)；MS m/e 372(M-H)+。
對(duì)C14H7BrF3NO3x0.5H2O分析
理論值C，43.89；H，2.10；N，3.65
實(shí)測(cè)值C，43.59；H，2.04；N，3.6
實(shí)施例54
7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑
將7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑(300mg，0.90mmol)和二氯雙(三-鄰-甲苯基膦)鈀(II)(71mg，0.09mmol)溶于對(duì)二甲苯(3mL)中并在氮?dú)夥障?，于室溫?cái)嚢?0分鐘。加入2-(三丁基甲錫烷基)呋喃(449mg，1.26mmol)并將該混合物回流4小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用飽和氯化銨溶液稀釋并用EtOAc提取。先后用水和鹽水洗滌有機(jī)提取液并經(jīng)MgSO4干燥，濃縮。經(jīng)快速層析法(20％-30％EtOAc/石油醚)純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(99％收率，m.p.120-121℃)；MS m/e 322(M+H)+。
對(duì)C19H15NO4分析
理論值C，71.02；H，4.71；N，4.36
實(shí)測(cè)值C，70.23；H，4.7；N，4.19
步驟b)7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例50的方法制備標(biāo)題化合物并得到為淺桃紅色固體的產(chǎn)物(64％收率，m.p.283-287℃)；MS m/e 294(M+H+)。
對(duì)C17H11NO4分析
理論值C，69.62；H，3.78；N，4.78
實(shí)測(cè)值C，69.11；H，3.6；N，4.64
實(shí)施例55
2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑
按照實(shí)施例53步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為琥珀色結(jié)晶的產(chǎn)物(73％收率，m.p.155℃)；MS m/e 340(M+H)+。
對(duì)C19H14FNO4分析
理論值C，67.25；H，4.16；N，4.13
實(shí)測(cè)值C，66.88；H，3.97；N，4.04
步驟b)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例50的方法，從2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-7-(2-呋喃基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為灰色固體的產(chǎn)物(81％收率，m.p.245-250℃)；MS m/e 312(M+H)+。
對(duì)C17H10FNO4x0.7C3H6O分析
理論值C，65.04；H，4.37；N，3.79
實(shí)測(cè)值C，64.84；H，4.29；N，3.70
實(shí)施例56
2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-噻吩-2-基)-1，3-苯并噁唑
按照實(shí)施例53步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑和2-(三丁基甲錫烷基)噻吩制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的產(chǎn)物(95％收率)，m.p.95-100℃)；MS m/e 338(M+H)。
步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并噁唑-5-醇
按照實(shí)施例50的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-噻吩-2-基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為灰色固體的產(chǎn)物(80％收率，m.p.278-280℃)；MS m/e 310(M+H)+。
對(duì)C17H11NO3Sx0.25H2O分析
理論值C，65.06；H，3.69；N，4.46
實(shí)測(cè)值C，64.93；H，3.84；N，4.21
實(shí)施例57
2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
步驟a)5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并噁唑。
按照實(shí)施例53步驟a的方法，從7-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1，3-苯并噁唑和2-(三丁基甲錫烷基)噻唑制備標(biāo)題化合物。得到為灰白色固體的產(chǎn)物(93％收率，m.p.132-136℃)；MS m/e 339(M+H)+。
對(duì)C18H14N2O3S分析
理論值C，63.89；H，4.17；N，8.28
實(shí)測(cè)值C，63.53；H，3.94；N，8.15
步驟b)2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并噁唑-5-醇。
按照實(shí)施例50的方法，從5-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并噁唑制備標(biāo)題化合物，并得到為黃色固體的產(chǎn)物(55％收率，m.p.245-255℃)；MS m/e 311(M+H)+
對(duì)C16H10N2O3Sx1.5H2O分析
理論值C，56.97；H，3.88；N，8.30
實(shí)測(cè)值C，57.24；H，3.95；N，7.50
實(shí)施例58
2-(3-氟-4-羥基苯基)-5-羥基-1，3-苯并噁唑-7-腈
按照實(shí)施例35的方法，從7-溴-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-1，3-苯并噁唑和氰化鋅制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.308-310℃，MS m/e 269(M-H)+。
對(duì)C14H7FN2O3x1.5H2O分析
理論值C，61.01；H，2.77；N，10.16
實(shí)測(cè)值C，60.68；H，2.46；N，9.77
實(shí)施例59和60
4-溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇(實(shí)施例59)
4，6-二溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇(實(shí)施例60)
按照實(shí)施例28的方法，從2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇和N-溴代琥珀酰亞胺制備標(biāo)題化合物。得到為白色固體的產(chǎn)物(a)，m.p.246-248℃，MS m/e 336(M+H)+。
對(duì)C14H10BrNO4x.1H2O分析
理論值C，49.49；H，3.08；N，4.12
實(shí)測(cè)值C，49.28；H，2.89；N，3.87
得到為白色固體的產(chǎn)物(b)，m.p.260-262℃，MS m/e 414(M+H)+。
對(duì)C14H9Br2NO4分析
理論值C，40.52；H，2.19；N，3.37
實(shí)測(cè)值C，40.21；H，2.00；N，3.3
實(shí)施例61
7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從3，5-二氟-4-甲氧基苯甲酸和2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚制備標(biāo)題化合物，并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.270-272℃；MS m/e 340(M-H)+。
對(duì)C13H6BrF2NO3分析
理論值C，45.64；H，1.77；N，4.09
實(shí)測(cè)值C，45.81；H，1.73；N，3.89
實(shí)施例62
2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例24途徑b中描述的基本相同的方法，從7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇制備標(biāo)題化合物，并得到為白色固體的產(chǎn)物，m.p.160-262℃；MS m/e 288(M-H)+。
對(duì)C15H9F2NO3x0.1H2O分析
理論值C，61.52；H，3.23；N，4.78
實(shí)測(cè)值C，61.53；H，3.10；N，4.72
實(shí)施例63
7-溴-2-(4-羥基-2-甲基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
以與在實(shí)施例21中描述的基本相同的方法，從4-甲氧基-2-甲基苯甲酸和2-氨基-6-溴-4-甲氧基苯酚制備標(biāo)題化合物，并得到為淺紫色固體的產(chǎn)物，m.p.120-135℃；MS m/e 320(M+H)+。
對(duì)C14H10BrNO3分析
理論值C，52.52；H，3.15；N，4.38
實(shí)測(cè)值C，52.24；H，2.97；N，4.15
實(shí)施例64
2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(1-氟乙烯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇
將氟化氫吡啶(1.14mL)滴加入到2-[4-(乙酰氧基)-3-氟苯基]-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-基乙酸酯(0.25g，0.7mmol)在環(huán)丁砜(3mL)中的冷的(0℃)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，然后一批加入1，3-二溴-5，5-二甲基咪唑烷-2，4-二酮(120mg)。將混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，用HCl(1N)稀釋并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)層。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(CH2Cl2/異丙醇0.3％)純化，得到為白色固體的7-(2-溴-1-氟乙基)-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇(0.25g，m.p.185-186℃)。用乙腈(2mL)吸收該產(chǎn)物并加入1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(150mg)。將所述反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，傾入到冷的(0℃)HCl(1N，10mL)中并用EtOAc提取。經(jīng)MgSO4干燥有機(jī)提取液。蒸發(fā)并經(jīng)快速層析法(20％EtOAc/己烷)純化，得到白色固體(160mg，m.p.213-214℃)；MS m/e 290(M+H)+。
對(duì)C15H9BrF2NO3x0.3H2O分析
理論值C，61.15；H，3.28；N，4.75
實(shí)測(cè)值C，60.84；H，3.41；N，4.5權(quán)利要求
1.一種具有以下結(jié)構(gòu)的式II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中
R1為2-7個(gè)碳原子的鏈烯基，其中所述鏈烯基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；
R2和R2a每個(gè)獨(dú)立為氫、羥基、鹵素、1-6個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、2-7個(gè)碳原子的炔基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、或1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中所述烷基、鏈烯基或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；
R3和R3a每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、2-7個(gè)碳原子的鏈烯基、2-7個(gè)碳原子的炔基、鹵素、1-4個(gè)碳原子的烷氧基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、或1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基，其中所述烷基、鏈烯基或炔基部分由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代；
R5、R6每個(gè)獨(dú)立為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基或6-10個(gè)碳原子的芳基；
X為O、S或NR7；
R7為氫、1-6個(gè)碳原子的烷基、6-10個(gè)碳原子的芳基、-COR5、-CO2R5或-SO2R5。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X為O。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1為2-3個(gè)碳原子的鏈烯基，它由羥基、-CN、鹵素、1-6個(gè)碳原子的三氟烷基、1-6個(gè)碳原子的三氟烷氧基、-COR5、-CO2R5、-NO2、CONR5R6、NR5R6或N(R5)COR6任選取代。
4.權(quán)利要求1的化合物，其為2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
5.權(quán)利要求1的化合物，其為2-(2-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.權(quán)利要求1的化合物，其為2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.權(quán)利要求1的化合物，其為4-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8.權(quán)利要求1的化合物，其為4，6-二溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9.權(quán)利要求1的化合物，其為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
10.權(quán)利要求1的化合物，其為7-(1-溴代乙烯基)-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
11.權(quán)利要求1的化合物，其為7-烯丙基-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
12.權(quán)利要求1的化合物，其為2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
13.權(quán)利要求1的化合物，其為2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(1-氟乙烯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
14.一種化合物，它為
a)2-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，4-二醇；
b)3-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇；
c)2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
d)2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
e)2-(2-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
f)2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇；
g)2-(3-叔丁基-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇；
h)2-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，4-二醇；
i)3-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇；
j)4-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，2-二醇；
k)2-(3-氯-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇；
l)4-(5-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，3-二醇；
m)4-(6-羥基-1，3-苯并噁唑-2-基)苯-1，3-二醇；
n)6-氯-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
o)6-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
p)6-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
q)5-氯-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-6-醇；
r)7-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
s)7-溴-2-(2-氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
t)7-溴-2-(2，3-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
u)2-(4-羥基苯基)-7-乙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
v)7-(1，2-二溴乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
w)7-(1-溴代乙烯基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
x)7-乙炔基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
y)2-(4-羥基苯基)-7-丙基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
z)7-丁基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
aa)7-環(huán)戊基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
bb)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲酸乙酯；
cc)2-(4-羥基苯基)-7-苯基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
dd)2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
ee)7-乙基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
ff)7-乙基-2-(2-乙基-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
gg)5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-甲醛；
hh)7-(羥基甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
ii)7-(溴代甲基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
jj)[5-羥基-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-7-基]乙腈；
kk)7-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇]；
ll)2-(4-羥基苯基)-7-異丙烯基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
mm)2-(4-羥基苯基)-7-異丙基-1，3-苯并噁唑-5-醇]；
nn)7-溴-2-(4-羥基-3-(三氟甲基)苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
oo)7-(2-呋喃基)-2-(4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
pp)2-(3-氟-4-羥基苯基)-7-(2-呋喃基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
qq)2-(4-羥基苯基)-7-噻吩-2-基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
rr)2-(4-羥基苯基)-7-(1，3-噻唑-2-基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
ss)2-(3-氟-4-羥基苯基)-5-羥基-1，3-苯并噁唑-7-腈；
tt4-溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
uu)4，6-二溴-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噁唑-5-醇；
vv)7-溴-2-(3，5-二氟-4-羥基苯基)-1，3-苯并噁唑-5-醇；
或其藥學(xué)上可接收的鹽。
15.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制前列腺炎或間質(zhì)性膀胱炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
16.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制炎性腸疾病、克郎氏病、潰瘍性直腸炎或結(jié)腸炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
17.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制前列腺肥大、子宮平滑肌瘤、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜息肉、良性乳房疾病、子宮內(nèi)膜異位、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或星母細(xì)胞瘤的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
18.一種在需要的哺乳動(dòng)物中降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平；抑制或治療高膽固醇血癥、高脂血癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣；或抑制因?qū)е旅庖呓閷?dǎo)的血管損傷的細(xì)胞過程引起的血管壁損傷的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
19.一種在需要的哺乳動(dòng)物中提供認(rèn)知增強(qiáng)或神經(jīng)保護(hù)；或治療或抑制老年性癡呆、阿爾滋海默氏病、認(rèn)知衰退、中風(fēng)、焦慮癥或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
20.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制自由基誘導(dǎo)的疾病狀態(tài)的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
21.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制陰道或陰門萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、交媾困難、排尿困難、頻繁排尿、尿失禁、尿道感染的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
22.一種在需要的哺乳動(dòng)物中治療或抑制血管舒縮癥的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
23.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中抑制妊娠的方法，該方法包括提供所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
24.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括提供所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述關(guān)節(jié)炎為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或椎關(guān)節(jié)病。
26.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制關(guān)節(jié)腫脹或糜爛，或治療或抑制繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或外科手術(shù)的關(guān)節(jié)損傷的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
27.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制牛皮癬或皮炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
28.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制局部缺血、再灌注損傷、哮喘、胸膜炎、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、膿毒癥、出血性休克或II型糖尿病的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
29.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制子宮內(nèi)膜異位的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物。
30.一種藥用組合物，其包含如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物和藥用載體。
31.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制炎性腸道疾病的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的ER-β選擇性配體，其中所述ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約20倍。
32.權(quán)利要求31的方法，其中所述炎性腸道疾病為克郎氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎、感染性結(jié)腸炎或潰瘍性直腸炎。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約50倍。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述ERβ選擇性配體引起濕子宮重量增加，其引起的重量增加比在測(cè)量親子宮活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加少大約10％，并且所述ERβ選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA增加，該增加少于在測(cè)量激乳腺活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的酪蛋白激酶II mRNA增加的大約10％。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述ER-β選擇性配體與避免親子宮活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加濕子宮重量，并且與避免激乳腺活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加酪蛋白激酶IImRNA。
36.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的非-親子宮的、非-激乳腺的ERβ選擇性配體，其中ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約20倍。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述關(guān)節(jié)炎為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或椎關(guān)節(jié)病。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述ERβ選擇性配體對(duì)ERβ的結(jié)合親和力比其對(duì)ERα的結(jié)合親和力大至少約50倍。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述ERβ選擇性配體引起濕子宮重量增加，該增加少于在測(cè)量親子宮活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的大約10％，并且所述ERβ選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA增加，該增加少于在測(cè)量激乳腺活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的酪蛋白激酶II mRNA增加的大約10％。
40.權(quán)利要求39的方法，其中所述ERβ選擇性配體與避免親子宮活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加濕子宮重量，并且與避免激乳腺活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加酪蛋白激酶IImRNA。
41.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制關(guān)節(jié)腫脹或糜爛，或治療或抑制繼發(fā)于關(guān)節(jié)鏡或外科手術(shù)的關(guān)節(jié)損傷的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的非-親子宮的、非-激乳腺的ERβ選擇性配體，其中所述ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約20倍。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述ERβ選擇性配體對(duì)ERβ的結(jié)合親和力比其對(duì)ERα的結(jié)合親和力大至少約50倍。
43.一種在需要它的哺乳動(dòng)物中治療或抑制子宮內(nèi)膜異位的方法，該方法包括提供給所述哺乳動(dòng)物有效量的ER-β選擇性配體，其中所述ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約20倍。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所述ER-β選擇性配體對(duì)ER-β的結(jié)合親和力比其對(duì)ER-α的結(jié)合親和力大至少約50倍。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述ERβ選擇性配體引起濕子宮重量增加，該增加少于在測(cè)量親子宮活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的濕子宮重量增加的大約10％，并且所述ERβ選擇性配體引起酪蛋白激酶II mRNA增加，該增加少于在測(cè)量激乳腺活性的標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法中對(duì)最大有效劑量的17β-雌二醇所觀察到的酪蛋白激酶II mRNA增加的大約10％。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述ER-β選擇性配體與避免親子宮活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加濕子宮重量，并且與避免激乳腺活性的對(duì)照組比較不顯著地(p＞0.05)增加酪蛋白激酶IImRNA。
47.一種用于制備如在權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)要求的化合物的方法，所述方法包括下面之一
(a)使下式化合物
其中R1、R2、R2a和X如在權(quán)利要求1中定義，與下式化合物反應(yīng)
其中R3和R3a如在權(quán)利要求1中定義，并且Y為鹵素、-OH或1-6個(gè)碳原子的烷氧基；或
(b)使如在權(quán)利要求1中定義的式II化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌帉W(xué)上可接受的鹽；或
(c)拆分式II化合物的異構(gòu)體混合物，以分離式II化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的對(duì)映體。
全文摘要
本發(fā)明提供具有式(I)結(jié)構(gòu)的式(I)的雌激素受體調(diào)節(jié)劑或者其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1、R2、R2a、R3、R3a和R4以及X如在說明書中定義。
文檔編號(hào)A61P5/32GK1646504SQ02827818
公開日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2002年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月5日
發(fā)明者M·S·馬拉馬斯, R·E·麥克德維特, I·古納萬, E·S·馬納斯, M·D·科利尼, H·A·哈里斯, J·C·小凱思, L·M·阿爾伯特, C·R·利特爾 申請(qǐng)人:惠氏公司