專利名稱：一種紫穗槐螺酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從紫穗槐葉中分離制備紫穗槐螺酮的方法。
背景技術(shù)：
紫穗槐螺酮來源于豆科紫穗槐Ufflor/^a fruticosa Z.)的干燥葉。紫穗槐原產(chǎn)美國。廣布于中國東北、華北、河南、華東、湖北、四川等省(區(qū))，是黃河和長(zhǎng)江流域很好的水土保持植物。紫穗槐葉主要有效成分為黃酮類化合物，以紫穗槐螺酮含量最高。紫穗槐螺酮具有細(xì)胞毒活性，有顯著的選擇性細(xì)胞毒活性，對(duì)KB和RPMI-7951細(xì)胞的ED5tl分別為(μ g/ ml) 0. 58和0. 61。對(duì)TPA誘導(dǎo)的EB病毒早期抗原(EBV-EA)有顯著抑制作用，其活性于VA 酸和甘草次酸相當(dāng)。目前，尚未見高含量紫穗槐螺酮的制備方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種紫穗槐螺酮的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
(1)取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，加入到超臨界CO2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，進(jìn)行萃取，得到萃取物；
(2)萃取物加入乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；
(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集紫穗槐螺酮組分；
(4)將紫穗槐螺酮組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮。所述步驟(1)中的超臨界CO2萃取參數(shù)條件為萃取溫度為35_50°C，萃取壓力為 25-32MPa，萃取時(shí)間為2_4h，分離釜I溫度為30-40°C，壓力為8_10MPa，分離釜II溫度為 ^-35°C，壓力為 5-7MPa，CO2 流量為 3_5ml/g 生藥 /min。所述步驟(1)中夾帶劑的用量為藥材重量的10-20%。所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為 5-8:1-3:4-7:1-3。本方法積極效果是
(1)本方法采用超臨界(X)2萃取，能耗低，萃取劑(X)2清潔無污染；
(2)本方法采用高速逆流色譜法，收率高、制備量大、制備周期短，解決了柱層析效率低而且污染嚴(yán)重的技術(shù)缺陷；
(3)本方法工藝步驟操作較簡(jiǎn)單，易操作，所得產(chǎn)品純度高。
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，加入到超臨界(X)2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，用量為藥材重量的10%，進(jìn)行萃取，萃取溫度為35°C，萃取壓力為25MPa，CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為2h，分離釜I溫度為30°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為^°C，壓力為 5MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 體積比為5: 3:4:2，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm，收集紫穗槐螺酮組分，真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮，含量96. 5%。實(shí)施例2:
取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，稱取1kg，加入到超臨界(X)2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，用量為藥材重量的18%，進(jìn)行萃取，萃取溫度為30°C，萃取壓力為32MPa，CO2流量為％il/g生藥 /min，萃取時(shí)間為3. 5h，分離釜I溫度為30°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為^°C，壓力為 7MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 體積比為6 1 5 1，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm，收集紫穗槐螺酮組分，真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮，含量97. 4%。實(shí)施例3:
取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，稱取^g，加入到超臨界(X)2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，用量為藥材重量的20%，進(jìn)行萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為^MPa，CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為4h，分離釜I溫度為40°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為35°C，壓力為 7MPa,得到萃取物，用乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水， 體積比為8 3 7 3，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm，收集紫穗槐螺酮組分，真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮，含量96. 1。實(shí)施例4:
取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，稱取^g，加入到超臨界(X)2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，用量為藥材重量的10%，進(jìn)行萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為32MPa，CO2流量為5ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為2. 5h，分離釜I溫度為40°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為30°C，壓力為6. 5MPa，得到萃取物，用乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為7 2 7 1，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm，收集紫穗槐螺酮組分，真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮，含量98. 6%。
實(shí)施例5:
取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，稱取10kg，加入到超臨界(X)2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑， 用量為藥材重量的15%，進(jìn)行萃取，萃取溫度為35°C，萃取壓力為^MPa，CO2流量為3. 5ml/ g生藥/min，萃取時(shí)間為3. 5h，分離釜I溫度為35°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為30°C， 壓力為7MPa，得到萃取物，用乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為5 1 7 1，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為209nm，收集紫穗槐螺酮組分，真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮，含量98. 9%。
權(quán)利要求
1.一種紫穗槐螺酮的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，加入到超臨界CO2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，進(jìn)行萃取，得到萃取物；(2)萃取物加入乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集紫穗槐螺酮組分；(4)將紫穗槐螺酮組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得紫穗槐螺酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫穗槐螺酮的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中的超臨界( 萃取參數(shù)條件為萃取溫度為35-50°C，萃取壓力為25-32MPa，萃取時(shí)間為2_4h， 分離釜I溫度為30-40°C，壓力為8-lOMPa，分離釜II溫度為，壓力為5_7MPa，CO2流量為3-5ml/g生藥/min0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫穗槐螺酮的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中夾帶劑的用量為藥材重量的10-20%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫穗槐螺酮的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-8:1-3:4-7:1-3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種操作簡(jiǎn)單、污染少的紫穗槐螺酮的制備方法，工藝步驟為(1)取紫穗槐葉，經(jīng)粉碎處理，加入到超臨界CO2萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，進(jìn)行萃取，得到萃取物；(2)萃取物加入乙酸乙酯攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紫穗槐螺酮，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，收集紫穗槐螺酮組分；(4)將紫穗槐螺酮組分進(jìn)行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入80%甲醇回流溶解，放置重結(jié)晶。本發(fā)明制備紫穗槐螺酮，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
文檔編號(hào)C07D493/20GK102424684SQ20111030372
公開日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司