專利名稱：一種空柄牛肝素a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種空柄牛肝素A的制備方法。
背景技術(shù)：
空柄牛肝素A (Cavipetin A)，分子式C3(1H4208，分子量530. 66，是二萜類化合物， mp. 137-138 ?，F(xiàn)代藥理研究表明，空柄牛肝素A具有較強的抗真菌活性。空柄牛肝素A 來源于空柄假牛肝菌?？毡倥８尉?，又名雜蘑，為真菌類擔(dān)子菌綱傘菌目牛肝菌科空柄假牛肝 Boletinus cavipes (Opat. ) Kalchbr.，以子實體入藥，微咸，性溫，具有祛風(fēng)散寒；舒筋活絡(luò)的功效，主治風(fēng)寒濕痹、腰腿疼痛、手足麻木等，主要活性成分為二萜酯類化合物?，F(xiàn)有文獻中，尚無大量空柄牛肝素A的制備方法報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種大量制備高純度空柄牛肝素A的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案
以空柄假牛肝為原料，粉碎至20-60目，置于萃取釜中，加入夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為2-5%，進行超臨界(X)2萃取，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解， 過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，收集流分減壓濃縮，冷凍干燥即得空柄牛肝素A。所述夾帶劑為95%乙醇溶液。所述超臨界(X)2萃取條件為萃取溫度為40-60°C，萃取壓力為^_40MPa，分離釜溫度為30-45°C，壓力為4-8MPa，CO2流量為2-%il/g生藥/min，萃取時間為50_100min。所述溶劑系統(tǒng)體積比為(10-13):(22-25) :(25-27) (8-10)。下面將結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。
具體實施例方式實施例1
以空柄假牛肝為原料，粉碎至60目，取Ikg置于萃取釜中，加入95%乙醇溶液作為夾帶劑，進行超臨界(X)2萃取，萃取溫度為60°C，萃取壓力為40MPa，分離釜溫度為45°C，壓
力為8MPa，CO2流量為％il/g生藥/min，萃取時間為50min，收集萃取物，加入乙酸乙酯， 攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以體積比(12) :(25) :(26) (9)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，色譜儀轉(zhuǎn)速為850rpm， 流速2ml/min，收集空柄牛肝素A流分，減壓濃縮，冷凍干燥得空柄牛肝素A128mg，經(jīng)HPLC 檢測，其含量為98. 8%。實施例2
3以空柄假牛肝為原料，粉碎至60目，取Ikg置于萃取釜中，加入95%乙醇溶液作為夾帶劑，進行超臨界CO2萃取，萃取溫度為40°C，萃取壓力為^MPa,分離釜溫度為30°C，壓力為 4MPa, CO2流量為2ml/g生藥/min，萃取時間為lOOmin，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以體積比(11) :( ) :(25) (9)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，色譜儀轉(zhuǎn)速為750rpm，流速 2. 5ml/min,收集空柄牛肝素A流分，減壓濃縮，冷凍干燥得空柄牛肝素A149mg，經(jīng)HPLC檢測，其含量為98. 1%。實施例3
以空柄假牛肝為原料，粉碎至20目，取3kg置于萃取釜中，加入95%乙醇溶液作為夾帶劑，進行超臨界CO2萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為30MPa，分離釜溫度為35°C，壓力為 6MPa, CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時間為80min，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以體積比(13) :(25) :(27) :(10)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，色譜儀轉(zhuǎn)速為850rpm，流速 2ml/min,收集空柄牛肝素A流分，減壓濃縮，冷凍干燥得空柄牛肝素A445mg，經(jīng)HPLC檢測， 其含量為98. 3%。實施例4
以空柄假牛肝為原料，粉碎至40目，取5kg置于萃取釜中，加入95%乙醇溶液作為夾帶劑，進行超臨界(X)2萃取，萃取溫度為45°C，萃取壓力為30MPa，分離釜溫度為35°C，壓力為5MPa，CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時間為70min，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以體積比(10) :(22) :(25): (8)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，色譜儀轉(zhuǎn)速為800rpm，流速 2. 5ml/min,收集空柄牛肝素A流分，減壓濃縮，冷凍干燥得空柄牛肝素A631mg，經(jīng)HPLC檢測，其含量為98. 5%。實施例5
以空柄假牛肝為原料，粉碎至20目，取IOkg置于萃取釜中，加入95%乙醇溶液作為夾帶劑，進行超臨界CO2萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為35MPa，分離釜溫度為35°C，壓力為6MPa，CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時間為60min，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以體積比(13) :(25) :(27): (8)正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，色譜儀轉(zhuǎn)速為800rpm，流速 2ml/min,收集空柄牛肝素A流分，減壓濃縮，冷凍干燥得空柄牛肝素Al. 62g，經(jīng)HPLC檢測， 其含量為98. 0%。
權(quán)利要求
1.一種空柄牛肝素A的制備方法，其特征在于以空柄假牛肝為原料，粉碎至20-60 目，置于萃取釜中，加入夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為2-5%，進行超臨界CO2 萃取，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動相，收集流分減壓濃縮， 冷凍干燥即得空柄牛肝素A。
2.如權(quán)利要求1所述一種空柄牛肝素A的制備方法，其特征在于所述夾帶劑為95%乙醇溶液。
3.如權(quán)利要求1所述一種空柄牛肝素A的制備方法，其特征在于所述超臨界(X)2萃取條件為萃取溫度為40-60°C，萃取壓力為^_40MPa，分離釜溫度為30_45°C，壓力為4_8MPa， CO2流量為2-%il/g生藥/min，萃取時間為50_100min。
4.如權(quán)利要求1所述一種空柄牛肝素A的制備方法，其特征在于所述溶劑系統(tǒng)體積比為(10-13):(22-25):(25-27):(8_10)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種空柄牛肝素A的制備方法，方法是采用超臨界CO2萃取和高速逆流色譜分離技術(shù)相結(jié)合，從空柄假牛肝中提取分離高純度空柄牛肝素A。其制備方法為將干燥空柄假牛肝粉碎，置于萃取釜中，加入夾帶劑，進行超臨界CO2萃取，收集萃取物，加入乙酸乙酯，攪拌使溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，收集流分減壓濃縮，冷凍干燥即得空柄牛肝素A。本發(fā)明方法是一種環(huán)保、低耗能、快速有效的制備方法。
文檔編號C07C69/732GK102503827SQ20111030371
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司