專利名稱：鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于那曲肝素鈣藥物的生產(chǎn)領(lǐng)域，特別是涉及一種應(yīng)用鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法快速定量測(cè)定那曲肝素鈣溶液濃度的方法。
背景技術(shù)：
肝素(Heparin)是由D-葡糖胺、L-艾杜糖醛酸、N-乙酰葡糖胺及葡糖醛酸交替組成的粘多糖硫酸酯，分子量從5至30kDa，其中硫酸根約占40%。通常，肝素類藥物最初來源于豬、牛腸粘膜和肺臟。在當(dāng)今醫(yī)學(xué)上，肝素主要作為抗凝血?jiǎng)?，?953年正式應(yīng)用于臨床治療，被認(rèn)為是最有效和臨床用量最大的抗凝血藥物。最初使用的是普通肝素，即Unfractionated Heparin。到了上世紀(jì)末，通過化學(xué)裂解或者生物酶解等方法,將普通肝素制備成了平均分子量分布為3500飛500的肝素衍生物，即低分子肝素(Low MolecularWeight Heparin)，其藥效明顯得到了增強(qiáng)，成為被廣泛應(yīng)用的新型肝素類藥物。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全球約有三分之一的肝素原料藥用于制成標(biāo)準(zhǔn)肝素鈉制劑，其余約三分之二作為原料用于生產(chǎn)低分子肝素鈣(低分子肝素鈉)原料藥。進(jìn)一步的數(shù)據(jù)表明，在2008年，全球肝素原料藥銷售額約為8億美元，同時(shí)全球肝素類藥物銷售額則接近60億美元；預(yù)計(jì)2012年，全球肝素類藥物的銷售額將超過90億美元。低分子肝素類藥物的通用生產(chǎn)流程圖如圖1所
/Jn ο其中，那曲肝素I丐(Nadroparin Calcium)是采用亞硝酸裂解法制備得到的低分子肝素藥物，其主要特征包括:平均分子量范圍為3600-5000Da;分子結(jié)構(gòu)的還原末端為6-0-硫酸-2，5-脫水-D-甘露醇，非還原末端為2-0-硫酸-a -L-艾杜糖醛酸；抗Xa效價(jià)為95 130IU/mg，AXa/A II a數(shù)值為2.5 4.0。本公司生產(chǎn)的那曲肝素鈣藥物達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，其簡(jiǎn)單的生產(chǎn)工藝流程如圖2所示。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，需要進(jìn)行超濾、醇沉和干燥等工藝，我們發(fā)現(xiàn)了在超濾工藝以后得到的那曲肝素鈣溶液，需要進(jìn)行迅速的準(zhǔn)確的濃度檢測(cè)，并依據(jù)所得測(cè)試結(jié)果對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐舛日{(diào)控，這樣十分有利于后續(xù)工藝的控制，尤其是醇沉工藝。但是在實(shí)際的生產(chǎn)過程中，超濾工藝以后得到的那曲肝素鈣溶液很難借助溶液稱重法或者高效液相色譜法等分析方法，快速地完成這個(gè)檢測(cè)任務(wù)。另一方面，目前國內(nèi)外肝素類藥物的最初來源主要都是豬小腸粘膜等動(dòng)物原料，存在地域性差異，在氮含量、硫含量以及糖基序列等方面具有較大的變化范圍。同時(shí)，那曲肝素鈣藥物其實(shí)也只是一個(gè)規(guī)定了分子量范圍、并具有其它主要性質(zhì)的高分子混合物，因此針對(duì)那曲肝素鈣的檢測(cè)方法必需具備較強(qiáng)的抗干擾能力，否則在實(shí)際樣品的檢測(cè)過程中，會(huì)產(chǎn)生較大的分析誤差，所得測(cè)試結(jié)果將不能應(yīng)用于工藝中控和指導(dǎo)后續(xù)工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有那曲肝素鈣實(shí)際生產(chǎn)中的上述不足，提供一種鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度，在緩沖溶液的環(huán)境下，通過測(cè)定Zn2+離子、鄰菲羅啉和那曲肝素鈣三者混合溶液的紫外吸光度來定量測(cè)定那曲肝素鈣的濃度。具體地，在緩沖溶液的環(huán)境下，將Zn2+離子溶液、鄰菲羅啉溶液和那曲肝素鈣溶液混合，混合溶液中Zn2+離子的濃度范圍在0.05、.3mM,鄰菲羅啉的物質(zhì)的量是Zn2+離子的物質(zhì)的量的2倍以上，測(cè)定混合溶液的紫外吸光度；建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線時(shí)，加入混合溶液的為已知濃度的那曲肝素鈣溶液，那曲肝素隹丐的質(zhì)量相對(duì)于Zn2+離子的物質(zhì)的量為11.84g/mmol 163.3g/mmol ；建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后，加入混合溶液的為未知濃度的那曲肝素鈣溶液，根據(jù)測(cè)定的吸光度及建立的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得出那曲肝素鈣溶液的濃度，當(dāng)加入的那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于Zn2+離子的物質(zhì)的量不在11.84g/mmol 163.3g/mmol的范圍時(shí),在不改變加入體積的情況下通過濃縮或稀釋的方法改變加入混合溶液中那曲肝素鈣溶液的濃度，測(cè)定其吸光度并利用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得出那曲肝素鈣溶液的濃度，使那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于Zn2+離子的物質(zhì)的量在11.84g/mmol 163.3g/mmol的范圍； 需要指出的是，那曲肝素鈣的濃度是指那曲肝素鈣的質(zhì)量體積百分比。具體地，混合溶液的溶劑是水、乙醇、甲醇、異丙醇、正丙醇和正丁醇中的至少一種。具體地，緩沖溶液包括乙酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉和硫酸氫鈉中的至少一種物質(zhì)的水溶液。優(yōu)選地，緩沖溶液為乙酸鈉溶液，乙酸鈉在混合溶液中的濃度為0.05、.6M。優(yōu)選地，乙酸鈉在混合溶液中的濃度為0.3M。具體地，Zn2+離子來自硫酸鋅，Zn2+離子的濃度為0.2mM。優(yōu)選地，鄰菲羅啉的物質(zhì)的量是Zn2+離子的物質(zhì)的量的4倍。優(yōu)選地，測(cè)定混合溶液的吸光度時(shí)紫外波長(zhǎng)為302± lnm。優(yōu)選地，配制混合溶液時(shí)，硫酸鋅水溶液為1.0mL,2.0mM,鄰菲羅啉的乙醇溶液為1.0mL,8.0mM,乙酸鈉水溶液為3.0mL, 1.0M,充分混合后，加入2.0mL那曲肝素鈣溶液和
3.0mL注射用水，充分混合并靜置后，測(cè)定混合溶液在302 ± Inm的吸光度。本發(fā)明公開了鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度，該測(cè)定方法應(yīng)用鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)那曲肝素鈣溶液濃度的快速定量檢測(cè)，其分析方法的線性范圍為1.184% 16.33% ;同時(shí)，該方法對(duì)鈣離子、鈉離子和硫酸根離子有很好的抗干擾能力，可以應(yīng)用于那曲肝素鈣藥物的實(shí)際生產(chǎn)過程中，對(duì)中間產(chǎn)品溶液或者成品溶液進(jìn)行濃度檢測(cè)。


圖1為低分子肝素類藥物通用生產(chǎn)流程圖；圖2為那曲肝素鈣藥物的生產(chǎn)工藝流程圖；圖3為不同批次那曲肝素鈣樣品在鄰菲羅啉-硫酸鋅溶液中的紫外光譜檢測(cè)圖；圖4為不同濃度鈣離子對(duì)檢測(cè)溶液的影響檢測(cè)圖；圖5為不同乙酸鈉溶液用量對(duì)檢測(cè)溶液的影響檢測(cè)圖6為不同鄰菲羅啉溶液用量對(duì)檢測(cè)溶液的影響檢測(cè)圖；圖7為不同亞硝酸鈉溶液用量對(duì)檢測(cè)溶液的影響檢測(cè)圖；圖8為不同濃度那曲肝素鈣樣品在鄰菲羅啉-硫酸鋅溶液中的檢測(cè)圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步清楚、完整地說明。首先需要說明的是，本發(fā)明中生產(chǎn)工藝源頭所用的肝素鈉樣品來自河北常山生化藥業(yè)股份有限公司；那曲肝素鈣樣品，來自深圳賽保爾生物藥業(yè)有限公司。同時(shí)，本發(fā)明中所使用的主要化學(xué)試劑包括:無水乙酸鈉(CH3COONa,分析純，CAS127-09-3);鄰菲羅啉(C12H8N2.H2O,分析純，CAS5144-89-8使用時(shí)，配制成乙醇溶液)；七水硫酸鋅(ZnSO4.7H20，分析純，CAS7446-20-0);氯化鈣(CaCl2，藥用級(jí)，CAS10043-52-4)。實(shí)施例中那曲肝素鈣溶液的濃度是指那曲肝素鈣的質(zhì)量體積百分比。實(shí)施例實(shí)施例公開了鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度，首先通過實(shí)驗(yàn)一至實(shí)驗(yàn)五依次檢驗(yàn)鄰菲羅啉-硫酸鋅體系的適用性、對(duì)鈣離子的抗干擾性、乙酸鈉溶液用量的影響、鄰菲羅啉用量的影響和亞硝酸鈉溶液用量的影響，以說明該檢測(cè)體系的適用性、可變化范圍及檢測(cè)原理；而后通過實(shí)驗(yàn)六建立吸光度與那曲肝素鈣溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，實(shí)驗(yàn)七通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該方法及該標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的可靠性。實(shí)驗(yàn)一、鄰菲羅啉-硫酸鋅體系的適用性取6支15mL離心管，其中5支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液、1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和3.0mLl.0M乙酸鈉溶液，充分混合。接著,往樣品測(cè)試體系中，分別加入2.0mL不同批號(hào)的那曲肝素鈣樣品溶液，以及3.0mL注射用水，搖勻；往空白對(duì)照體系中，加入5.0mL注射用水，充分混合。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描5個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得測(cè)試結(jié)果如圖3所示。從圖3可以發(fā)現(xiàn)，在鄰菲羅啉-硫酸鋅體系中，5個(gè)不同批次的那曲肝素鈣樣品溶液，在302± Inm處都具有明顯的最大紫外吸收峰。這表明，鄰菲羅啉-硫酸鋅體系對(duì)于不同批次那曲肝素鈣樣品溶液的紫外光譜檢測(cè)，有很好的系統(tǒng)適用性。實(shí)驗(yàn)二、鄰菲羅啉-硫酸鋅體系對(duì)鈣離子的抗干擾性取7支15mL離心管，其中6支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液、1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和3.0mLl.0M乙酸鈉溶液，充分混合.接著,往6支樣品測(cè)試體系中，全部加入
2.00mL10%那曲肝素鈣樣品溶液，搖勻。然后，往6支樣品測(cè)試體系中，分別加入0.00,0.05、0.10,0.15,0.20,0.25mL 的 5.0M 氯化鈣溶液，以及 3.00,2.95,2.90,2.85,2.80,2.75mL 的注射用水；往空白對(duì)照體系中，加入5.0mL注射用水，充分混合。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描6個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得測(cè)試結(jié)果如圖4所示。從圖4可以發(fā)現(xiàn)，濃度范圍為2.5%-12.5%的外加鈣離子，對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜體系的測(cè)試結(jié)果沒有明顯的影響。這表明，鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜體系，對(duì)那曲肝素鈣樣品測(cè)試溶液中的鈣離子濃度有很強(qiáng)的抗干擾作用。實(shí)驗(yàn)三、乙酸鈉溶液用量對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系的影響取7支15mL離心管，其中6支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液和1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液，充分混合。接著，往6支樣品測(cè)試體系中，全部加入2.00mL10%那曲肝素鈣樣品溶液，搖勻。然后，往6支樣品測(cè)試體系中，分別加入1.0、1.5,2.0,3.0,3.5,4.0mL的1.0M乙酸鈉溶液，以及5.0,4.5,4.0,3.0,2.5,2.0mL的注射用水；往空白對(duì)照體系中，加入3.0mL乙酸鈉溶液和5.0mL注射用水，充分混合。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描6個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得測(cè)試結(jié)果如圖5所示。從圖5可以發(fā)現(xiàn)，不同的乙酸鈉溶液用量，對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜體系的測(cè)試結(jié)果，只會(huì)產(chǎn)生比較輕微的改變。這表明，乙酸鈉溶液用量對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系的影響很小。不過，為了增強(qiáng)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜體系，對(duì)測(cè)試樣品溶液酸度和鹽含量的抗干擾性，在試驗(yàn)方案中，保持乙酸鈉溶液的添加量為3.0mL。實(shí)驗(yàn)四、鄰菲羅啉溶液用量對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系的影響取7支15mL離心管，其中6支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液和3.0mL乙酸鈉溶液，充分混合。接著，往6支樣品測(cè)試體系中，全部加入2.00mL10%那曲肝素鈣樣品溶液，搖勻。然后，往1-6號(hào)樣品測(cè)試體系中，分別加入0、0.5,0.8、1.0、1.2、1.5mL的8.0mM鄰菲羅啉溶液，以及4.0,3.5,3.2,3.0,2.8,2.5mL的注射用水；往空白對(duì)照體系中，加入1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和5.0mL注射用水，充分混合。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描6個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得結(jié)果如圖6所示。從圖6可以發(fā)現(xiàn)，不同的鄰菲羅啉溶液用量，對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外測(cè)試體系有非常顯著的影響。當(dāng)鄰菲羅啉溶液的用量小于空白對(duì)照體系中的鄰菲羅啉溶液用量時(shí)，所得紫外光譜落在吸光度的負(fù)區(qū)；而當(dāng)鄰菲羅啉溶液的用量等于或大于空白對(duì)照體系中的鄰菲羅啉溶液用量時(shí)，所得紫外光譜的吸光度在正區(qū)，且成倍數(shù)增加。這說明了，那曲肝素鈣測(cè)試樣品在302nm處的最大紫外吸收峰，來源于鄰菲羅啉與那曲肝素鈣分子、鋅離子的同時(shí)結(jié)合，而不只是鋅離子與那曲肝素鈣分子的結(jié)合.
實(shí)驗(yàn)五、亞硝酸鈉溶液用量對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系的影響取7支15mL離心管，其中6支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液、1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和3.0mLl.0M乙酸鈉溶液，充分混合。接著,往6支樣品測(cè)試體系中，全部加入2.00mL10%那曲肝素鈣樣品溶液，搖勻。然后，往1-6號(hào)樣品測(cè)試體系中，分別加入0.00、
0.05,0.10,0.15,0.20,0.25mL 的 2.0M 亞硝酸鈉溶液，以及 3.00,2.95,2.90,2.85,2.80、
2.75mL的注射用水；往空白對(duì)照體系中，加入5.0mL注射用水，充分混合.靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描6個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得測(cè)試結(jié)果如圖7所示.
從圖7可以發(fā)現(xiàn)，隨著亞硝酸鈉溶液用量的增加，所得紫外光譜在302nm處的最大吸收峰逐漸消失，同時(shí)在354nm處出現(xiàn)一個(gè)新的最大吸收峰。這說明了，亞硝酸鈉溶液對(duì)鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外測(cè)試體系的影響很大，可以令其最大吸收峰產(chǎn)生顯著的紅移現(xiàn)象。根據(jù)那曲肝素鈣的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征，其原因很可能是在測(cè)試體系中，外加的大量亞硝酸根離子具有氧化作用，將那曲肝素鈣分子中的羥基轉(zhuǎn)變?yōu)槿┗蛘唪然?，從而增大了顯色基團(tuán)的共軛效應(yīng)，進(jìn)而令其最大紫外吸收峰產(chǎn)生了紅移現(xiàn)象。同時(shí)，這也說明了，那曲肝素鈣分子中的羥基參與了整個(gè)顯色體系的形成。通過上述實(shí)驗(yàn)一至實(shí)驗(yàn)五，可以證明鄰菲羅啉-硫酸鋅體系可以被用作測(cè)定那曲肝素鈣溶液的濃度。下面的兩組實(shí)驗(yàn)將首先建立鄰菲羅啉-硫酸鋅體系紫外光譜測(cè)定那曲肝素鈣溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，然后通過實(shí)驗(yàn)來證實(shí)該工作曲線的可靠性。實(shí)驗(yàn)六、鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系對(duì)那曲肝素鈣的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線取7支15mL離心管，其中6支為樣品測(cè)試體系，I支為空白對(duì)照體系(不加那曲肝素鈣樣品)。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液、1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和3.0mLl.0M乙酸鈉溶液，充分混合(在其它實(shí)施例中Zn2+離子的濃度范圍，在加入那曲肝素鈣和注射用水后的整個(gè)混合體系中，為0.05、.3mM ;在其它實(shí)施例中，鄰菲羅啉的物質(zhì)的量是Zn2+離子的物質(zhì)的量的2倍以上)。接著，往樣品測(cè)試體系中，分別加入2.0mL不同濃度的那曲肝素鈣樣品溶液，濃度依次5.69%,7.86%,9.61%、11.84%、14.14%、16.33%，以及3.0mL注射用水，搖勻；往空白對(duì)照體系中，加入5.0mL注射用水，充分混合。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，分別掃描6個(gè)樣品測(cè)試體系的紫外光譜。所得測(cè)試結(jié)果如圖8所示，圖8中從下到上所示曲線的加入的那曲肝素鈣溶液的濃度依次為:5.69%,7.86%,9.61%、11.84%、14.14% 和 16.33%。從圖8可以發(fā)現(xiàn)，鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外測(cè)試體系對(duì)那曲肝素鈣樣品，在濃度范圍5.699Γ16.33%之內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，即那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于Zn2+離子的物質(zhì)的量在56.9g/mmofl63.3g/mmol的范圍時(shí),可以準(zhǔn)確地進(jìn)行定量檢測(cè)，計(jì)算得到的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程為:y=2.6362x+0.0644，R2=0.9987，其中y代表302nm處的吸光度，x代表加入的那曲肝素鈣的濃度。依照該方法進(jìn)一步的研究結(jié)果表明，鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外測(cè)試體系對(duì)那曲肝素鈣樣品濃度總的線性范圍為:1.1849Γ16.33%，即當(dāng)那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于Zn2+離子的物質(zhì)的量在11.84g/mmofl63.3g/mmol的范圍時(shí),適用于生產(chǎn)過程中那曲肝素鈣實(shí)際樣品的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)七、鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系對(duì)那曲肝素鈣實(shí)際樣品的檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)六的基礎(chǔ)上，另取3支15mL離心管，作為實(shí)際樣品測(cè)試體系，即重復(fù)測(cè)試三次，然后取平均值。首先，往所有離心管中，分別加入1.0mL2.0mM硫酸鋅溶液、1.0mL8.0mM鄰菲羅啉溶液和3.0mLl.0M乙酸鈉溶液，充分混合。接著，往實(shí)際樣品測(cè)試體系中，分別加入2.0mL在實(shí)際生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的經(jīng)過2倍稀釋的那曲肝素鈣溶液(如圖2所示，這里的實(shí)際產(chǎn)品為超濾工藝與醇沉工藝之間的中間產(chǎn)品溶液)，以及3.0mL注射用水，搖勻。靜置15分鐘后，以空白對(duì)照體系作為空白對(duì)照溶液，在20(T400nm范圍內(nèi)，掃描其紫外光譜，記錄302nm處的吸光度。將所得吸光度值代入在實(shí)驗(yàn)六中的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程，計(jì)算其濃度，測(cè)試結(jié)果列于表I。表I鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜 測(cè)試體系對(duì)那曲肝素鈣實(shí)際樣品的檢測(cè)
權(quán)利要求
1.鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度，其特征在于:在緩沖溶液的環(huán)境下，通過測(cè)定Zn2+離子、鄰菲羅啉和那曲肝素鈣三者混合溶液的紫外吸光度來定量測(cè)定那曲肝素鈣的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于:在緩沖溶液的環(huán)境下，將Zn2+離子溶液、鄰菲羅啉溶液和那曲肝素鈣溶液混合，混合溶液中所述Zn2+離子的濃度范圍在.0.05、.3mM，所述鄰菲羅啉的物質(zhì)的量是Zn2+離子的物質(zhì)的量的2倍以上，測(cè)定所述混合溶液的紫外吸光度； 建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線時(shí)，加入混合溶液的為已知濃度的那曲肝素鈣溶液，且所述那曲肝素隹丐的質(zhì)量相對(duì)于所述Zn2+離子的物質(zhì)的量為11.84g/mmofl63.3g/mmol ； 建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后，加入混合溶液的為未知濃度的那曲肝素鈣溶液，根據(jù)測(cè)定的吸光度及建立的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得出所述那曲肝素鈣溶液的濃度，當(dāng)加入的那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于所述Zn2+離子的物質(zhì)的量不在11.84g/mmofl63.3g/mmol的范圍時(shí),在不改變加入體積的情況下通過濃縮或稀釋的方法改變加入混合溶液中那曲肝素鈣溶液的濃度，測(cè)定其吸光度并利用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得出所述那曲肝素鈣溶液的濃度，使那曲肝素鈣的質(zhì)量相對(duì)于所述Zn2+離子的物質(zhì)的量在11.84g/mmol 163.3g/mmol的范圍； 所述那曲肝素鈣的濃度是指那曲肝素鈣的質(zhì)量體積百分比。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述混合溶液的溶劑是水、乙醇、甲醇、異丙醇、正丙醇和正丁醇中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述緩沖溶液包括乙酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉和硫酸氫鈉中的至少一種物質(zhì)的水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述緩沖溶液為乙酸鈉溶液，乙酸鈉在所述混合溶液中的濃度為0.05、.6M。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述乙酸鈉在所述混合溶液中的濃度為0.3M。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述Zn2+離子來自硫酸鋅，所述Zn2+離子的濃度為0.2mM。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述鄰菲羅啉的物質(zhì)的量是所述Zn2+離子的物質(zhì)的量的4倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定方法，其特征在于:測(cè)定所述混合溶液的吸光度時(shí)紫外波長(zhǎng)為302±lnm。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的測(cè)定方法，其特征在于:配制混合溶液時(shí)，所述硫酸鋅水溶液為1.0mL,2.0mM，所述鄰菲羅啉的乙醇溶液為1.0mL,8.0mM，所述乙酸鈉水溶液為3.0mL,.1.0M，充分混合后，加入2.0mL那曲肝素鈣溶液和3.0mL注射用水，充分混合并靜置后，測(cè)定所述混合溶液在302 ± Inm的吸光度。
全文摘要
本發(fā)明公開了鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜法測(cè)定那曲肝素鈣的溶液濃度。在緩沖溶液的環(huán)境下，通過測(cè)定Zn2+離子、鄰菲羅啉和那曲肝素鈣三者混合溶液的紫外吸光度來定量測(cè)定那曲肝素鈣的濃度。該方法應(yīng)用鄰菲羅啉-硫酸鋅紫外光譜測(cè)試體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)那曲肝素鈣溶液濃度的快速定量檢測(cè)，其分析方法的線性范圍為1.184%～16.33%；同時(shí)，該方法對(duì)鈣離子、鈉離子和硫酸根離子有很好的抗干擾能力，可以應(yīng)用于那曲肝素鈣藥物的實(shí)際生產(chǎn)過程中，對(duì)中間產(chǎn)品溶液或者成品溶液進(jìn)行濃度檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N21/33GK103149170SQ201310036199
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月30日
發(fā)明者陳賢光, 鄭華淦, 張滌平, 吳園園, 曲和之, 盛光陽 申請(qǐng)人:深圳賽保爾生物藥業(yè)有限公司