一種那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，使用肝素鈉為原料，在特定的工藝參數(shù)下通過降解、還原、乙醇沉淀﹑離子交換樹脂轉(zhuǎn)鈣﹑氧化﹑過濾沉淀脫水得到那曲肝素鈣。氧化﹑除菌過濾﹑沉淀脫水實現(xiàn)了“一鍋煮”的工藝，在操作上實現(xiàn)了簡化，此方法相比已公開的方法從肝素鈉制備那曲肝素鈣工藝步驟更短，操作上更簡便，轉(zhuǎn)鈣更徹底，收率更高。
【專利說明】一種那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是一種那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉(Heparin Sodium)是粘多糖硫酸酯類抗凝血藥。肝素鈉是由豬或牛的腸粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質(zhì)。在體內(nèi)外均具有抗凝血作用，是目前主流的抗凝血藥品。但是普通肝素的生物利用度低，副作用大，后來人們發(fā)現(xiàn)肝素鈉裂解獲取的硫酸氨基葡聚糖片段的鈉鹽，平均分子量為4000~6000道爾頓，稱為低分子肝素鈉。低分子肝素鈉注射液和肝素鈉注射液一樣屬于抗凝血酶III (AT III)依賴性凝血酶抑制劑。但與肝素鈉注射液相比，具有半衰期較長、抗血栓效果好、出血傾向較弱、給藥方便，但價格比較貴。普通的肝素產(chǎn)品都是鈉鹽型，與鈣鹽型相比，后者更具有皮下注射時局部血腫現(xiàn)象減少和疼痛狀況明顯改善等優(yōu)點，故目前肝素產(chǎn)品更傾向于制成鈣鹽型。那曲肝素鈣具有預(yù)防和治療靜脈血栓栓塞性疾病，特別是預(yù)防普通外科手術(shù)或骨科手術(shù)的血栓栓塞性疾病，同時在血液透析中預(yù)防體外循環(huán)中的血凝塊形成。
[0003]目前已有4篇專利公開了一種那曲肝素鈣的制備工藝，目前均處在實質(zhì)審查階段。專利CN103204958A公開了一種低乙醇殘留的那曲肝素鈣的生產(chǎn)工藝，此專利著重講述了在制備那曲肝素鈣后，怎樣用乙醇進行沉淀和脫水，得到乙醇含量< 0.5 %的那曲肝素鈣。但是從專利對于怎樣從肝素鈉制備出那曲肝素鈣的過程沒有進行詳細描述。專利CN103275246A以肝素鈉粗品為原料，經(jīng)木瓜蛋白酶、核糖核酸酶II酶解，提純得到肝素鈉精品，將其加入到冰醋酸緩沖溶液中，在一定溫度和酸性條件下與亞硝酸鹽反應(yīng)，再經(jīng)還原、紫外照射、氧化、鈣置換得到那曲肝素鈣粗品，將其經(jīng)納濾、超濾精制后，進行凍干處理，得到那曲肝素鈣精品。專利CN103382232A通過將肝素鈉原料在醋酸的酸性條件下用亞硝酸鈉還原、硼氫化鈉還原、乙醇重結(jié)晶得到低分子肝素鈉、氯化鈣轉(zhuǎn)鈣，乙醇重結(jié)晶、交換柱層析、洗拓液乙醇沉淀、過濾凍干得到那曲肝素鈣。專利CN103408676A通過將肝素鈉原料溶解在純化水中，在一定溫度和PH值條件下，加入亞硝酸鈉進行降解，硼氫化鈉還原，乙醇沉淀得到低分子肝素鈉，此低分子肝素鈉再經(jīng)過雙氧水氧化、過濾器過濾、陰離子交換柱洗拓、洗拓液再用乙醇沉淀，沉淀物再用雙氧水氧化、氧化反應(yīng)液再用乙醇沉淀得到那曲肝素鈣粗品，此那曲肝素鈣粗品依次用1000D超濾膜超濾和除菌過濾后得到那曲肝素鈣精品。專利CN103204958A主要側(cè)重是制備那曲肝素鈣后如何通過乙醇洗脫得到低乙醇參量的那曲肝素鈣，并沒有詳細闡明如何從肝素鈉制備那曲肝素鈣的工藝，和本文所要闡述的工藝過程不相同。專利CN103275246A、專利CN103382232A和專利103408676A均通過傳統(tǒng)的降解還原方法得到低分子肝素鈉，其中專利CN103275246A在得到那曲肝素鈣后需要經(jīng)過納濾、超濾精制、凍干處理得到那曲肝素鈣精品，專利CN103382232A將轉(zhuǎn)鈣和交換柱層析分開進行，增加了操作上的繁瑣，同時那曲肝素鈣也是經(jīng)過凍干得到精品，增加了儀器設(shè)備的需求，專利103408676A經(jīng)過兩次過氧化氫氧化、兩次過濾、陰離子交換柱轉(zhuǎn)鈣、1000D超濾膜超濾、凍干得到那曲肝素鈣精品，同樣工藝復雜，操作上繁復，需要凍干機設(shè)備。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，使用肝素鈉為原料，通過降解、還原、乙醇沉淀、離子交換樹脂轉(zhuǎn)鈣、氧化、過濾沉淀脫水得到那曲肝素鈣。此方法相比已公開的方法從肝素鈉制備那曲肝素鈣工藝步驟更短，操作上更簡便，轉(zhuǎn)鈣更徹底，收率更高，克服了目前生產(chǎn)那曲肝素鈣存在的工藝路線較長，操作繁瑣，依賴凍干機的問題。
[0005]本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到:一種制備那曲肝素鈣的工藝，其包括如下步驟:
[0006](I)低分子肝素鈉的制備
[0007]取肝素鈉加入純化水溶解，調(diào)節(jié)溶液pH為2.7±0.1，加入亞硝酸鈉，保持溫度在25±2°C攪拌3-4h，得到降解液，再調(diào)節(jié)降解液pH至9.5-10.0，加入硼氫化鈉攪拌≥15h，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至3.5±0.1攪拌20min。氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH為7.3-7.5，254nm紫外燈光照射降解液20-25min，加入乙醇沉淀靜置8h以上棄去上清液，測試樣品分子量及分布。
[0008](2)陰離子樹脂轉(zhuǎn)鈣
[0009]將上述濕固體加入純化水溶解，再加入陰離子交換樹脂吸附,吸附時間蘭6h,配制與樹脂同體積的氯化鈣溶液加入樹脂中洗滌，同條件洗滌2次，每攪拌Ih后排出，30min浙干洗滌液，合并洗拓液在15-20°C下攪拌5-10min，加入乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液，檢測沉淀物鈣離子含量。
[0010]⑶氧化反應(yīng)
[0011]將上述沉淀物用純化水溶解，加入氯化鈣固體，氫氧化鈣溶液調(diào)節(jié)pH至10.8-11.0，30±2°C下加入過氧化氫氧化，維持pH在10.5-11.0氧化4h，用鹽酸調(diào)節(jié)pH為
6.0-6.5。
[0012](4)過濾、沉淀和脫水
[0013]將0.45um及0.2um除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，濾液用2.0倍的乙醇沉淀，靜置8h以上，真空抽去上清液，加入乙醇脫水，攪拌使之松散成細顆粒狀，靜置> Ih,真空抽去上清液，相同的操作重復四次，沉淀物離心脫水，真空干燥箱60-65°C干燥50-56h得到那曲肝素鈣。
[0014]在步驟(1)中肝素鈉和純化水投料比(W/V)為1.0:8.5-10，優(yōu)選為1.0:9.2-9.5。肝素鈉和亞硝酸鈉的投料比(W/W)為100:2.0-3.0，優(yōu)選為100:2.5-3.0。亞硝酸鈉和硼氫化鈉的投料比(W/W)為1.0:0.3-0.5，優(yōu)選為1.0:0.35-0.42。亞硝酸鈉反應(yīng)時體系溫度維持在25±2°C，4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH為2.7±0.1，5mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH至9.0-10.5。254nm紫外燈置于降解后的溶液中進行滅菌，加入溶液體積和乙醇體積(V/V)為
1.0:0.8-1.2，優(yōu)選0.9-1.1來沉淀，測試樣品分子量及分布。
[0015]在步驟(2)中低分子肝素鈉粗品沉淀物和純化水投料比(W/V)為1.0:8.5-10，優(yōu)選為1.0:9.2-9.5。肝素鈉和陰離子交換樹脂投料比(W/V)為1.0:4.5-5.5，優(yōu)選為1.0:
4.5-5.0。氯化鈣的濃度為0.lmol/L吸附，同條件洗滌2次，每攪拌Ih后排出，30min浙干洗滌液，合并洗拓液15-20°C攪拌5-10min，加入乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液。洗拓液和沉淀乙醇的投料比(V/V)為1.0:1.0-2.5，優(yōu)選為1.0:1.5-2.0，檢測沉淀物鈣離子含量。
[0016]在步驟(3)中肝素鈉和純化水投料比(W/V)為1.0:3.5-5.5，優(yōu)選為1.0:
4.0-5.0。溶液體積和氯化鈣的投料比(W/V)為100:0.8-2.0，優(yōu)選為100:1.5-2.0。調(diào)節(jié)溶液PH的氫氧化鈣為飽和溶液。30%的過氧化氫進行氧化，溶液總體積和過氧化氫投料比(V/V)為 100:0.8-1.5，優(yōu)選為 100:1.2-1.5。
[0017]在步驟(4)中用純化水沖洗0.45um濾膜和0.2um濾膜至中性，將0.45um及0.2um的除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，用2.0倍濾液體積的乙醇來沉淀濾液，用來脫水的乙醇和沉淀的乙醇投料比(V/V)為0.3-0.5:1.0，優(yōu)選為0.4-0.45:1.0。
[0018]本發(fā)明是針對現(xiàn)有的那曲肝素鈣生產(chǎn)工藝進行優(yōu)化和改進。使用肝素鈉為原料，先通過降解、還原、乙醇沉淀得到低分子肝素鈉粗品，低分子肝素鈉粗品通過陰離子交換樹脂吸附，然后用氯化鈣溶液洗拓，經(jīng)過兩次洗拓，鈣離子含量可以達到10%左右符合要求。乙醇沉淀洗拓液，沉淀物加入純化水溶解，過氧化氫氧化、濾液除菌過濾、沉淀、干燥得到那曲肝素鈣。氧化、除菌過濾、沉淀脫水實現(xiàn)了“一鍋煮”的工藝，在操作上實現(xiàn)了簡化，節(jié)省了時間和人力成本，該工藝在現(xiàn)有的技術(shù)基礎(chǔ)上開發(fā)出了一條新的制備那曲肝素鈣的方法，且在本公司實現(xiàn)了那曲肝素鈣的工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0019]為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0020]實施例1
[0021]加入45L純化水和肝素鈉5kg至降解罐內(nèi)，攪拌使其完全溶解，用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)罐內(nèi)溶液pH為2.7，稱取0.135kg亞硝酸鈉加入燒杯中，向燒杯中加入1350mL純化水，攪拌溶解后，加入降解罐內(nèi)，維持罐內(nèi)溶液pH在2.7±0.1，25±2°C下攪拌反應(yīng)3.6h。用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH值為9.6,加入0.054kg硼氫化鈉至降解罐內(nèi)，攪拌反應(yīng)18h,再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH為3.5，攪拌20min，再用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH至7.3，用254nm的紫外燈照射降解液20min，溶液體積為48L，所以將48L乙醇倒入降解罐內(nèi)，15-20°C攪拌5-10min，停止攪拌靜置10h，棄去上清液，測試樣品分子量及分布:分子量 4295 (應(yīng) 3600-4500)，<2000 部分為 14.9 % (應(yīng)蘭 25.0 % )，2000-8000 部分為 76.5 %(應(yīng) 65.0-85.0% ), 2000-4000 部分為 42.3% (應(yīng) 35.0-55.0 % )。
[0022]加入45L純化水和25L陰離子交換樹脂至上述有沉淀物的罐內(nèi)，攪拌3 6h，使樹脂吸附充分，將0.2775kg氯化鈣溶解在25L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，再將0.2775kg氯化鈣溶解在25L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，合并兩次的排出液并30min浙干洗滌液，洗滌液共30L，15_20°C攪拌5-10min,加入45L乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液，檢測沉淀物鈣離子含量為 10.7% (應(yīng) 9.5% -11.5% )。
[0023]將上述沉淀物用20L純化水溶解，加入0.375kg氯化鈣固體，攪拌使氯化鈣完全溶解，氫氧化鈣飽和溶液調(diào)節(jié)PH至10.8-11.0，溶液總體積為25L，30±2°C下加入0.25L30%過氧化氫氧化，維持體系pH在10.5-11.0,氧化反應(yīng)4h,再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH為6.3。
[0024] 用純化水沖洗0.45um濾膜和0.2um濾膜至中性，將0.45um及0.2um的除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，濾液總體積25L，加入50L乙醇攪拌10-15min沉淀靜置10h，真空抽去上清液，加入20L乙醇脫水，攪拌使之松散成細顆粒狀靜置> lh，真空抽去上清液，相同的操作重復四次，沉淀物離心脫水，真空干燥箱60-65°C干燥50-56h得到那曲肝素鈣3.918kg。
[0025]實施例2
[0026]加入42.5L純化水和肝素鈉5kg至降解罐內(nèi)，攪拌使其完全溶解,用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)罐內(nèi)溶液pH為2.6，稱取0.1Okg亞硝酸鈉加入燒杯中，向燒杯中加入100mL純化水，攪拌溶解后，加入降解罐內(nèi)，維持罐內(nèi)溶液pH在2.7±0.1，25±2°C下攪拌反應(yīng)3.4h。用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH為9.5，加入0.03kg硼氫化鈉至降解罐內(nèi)，攪拌反應(yīng)17h，再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH為3.4，攪拌20min，再用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH至7.4，用254nm的紫外燈照射降解液20min，溶液體積為44.8L，所以將44.8L乙醇倒入降解罐內(nèi)，15-20°C攪拌5-10min，停止攪拌靜置10h，棄去上清液，測試樣品分子量及分布:分子量 4312(應(yīng) 3600-4500)，〈2000 部分為 14.4% (應(yīng)蘭 25.0% )，2000-8000 部分為 76.4%(應(yīng) 65.0-85.0% ), 2000-4000 部分為 42.5% (應(yīng) 35.0-55.0 % )。
[0027]加入42.5L純化水和22.5L陰離子交換樹脂至上述有沉淀物的罐內(nèi)，攪拌3 6h，使樹脂吸附充分，將0.2498kg氯化鈣溶解在22.5L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，再將0.2498kg氯化鈣溶解在22.5L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，合并兩次的排出液并30min浙干洗滌液，洗滌液共27L，15_20°C攪拌5-10min，加入27L乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液，檢測沉淀物鈣離子含量為 10.5% (應(yīng) 9.5% -11.5% )。
[0028]將上述沉淀物用17.5L純化水溶解，加入0.216kg氯化鈣固體，攪拌使氯化鈣完全溶解，氫氧化鈣飽和溶液調(diào)節(jié)PH至10.8-11.0,溶液總體積為21.85L，30±2°C下加入
0.175L30%過氧化氫氧化，維持pH在10.5-11.0，氧化反應(yīng)4h，再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH為
6.0。
[0029]用純化水沖洗0.45um濾膜和0.2um濾膜至中性，將0.45um及0.2um的除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，濾液總體積21.85L，加入43.7L乙醇攪拌10-15min沉淀靜置12h，真空抽去上清液，加入13.1lL乙醇脫水，攪拌使之松散成細顆粒狀靜置> Ih,真空抽去上清液，相同的操作重復四次，沉淀物離心脫水，真空干燥箱60-65°C干燥50-56h得到那曲肝素鈣3.901kg。
[0030]實施例3
[0031]加入50L純化水和肝素鈉5kg至降解罐內(nèi)，攪拌使其完全溶解，用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)罐內(nèi)溶液pH為2.8，稱取0.15kg亞硝酸鈉加入燒杯中，向燒杯中加入1500mL純化水，攪拌溶解后，加入降解罐內(nèi)，維持罐內(nèi)溶液pH在2.7 ± 0.1，25 ± 2°C下攪拌反應(yīng)3_4h。用5moI/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH值為10.5，加入0.075kg硼氫化鈉至降解罐內(nèi)，攪拌反應(yīng)16h，再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH為3.6，攪拌20min，再用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH為
7.5，用254nm的紫外燈照射降解液20min，溶液體積為53.6L，所以將53.6L乙醇倒入降解罐內(nèi)，15-20°C下攪拌5-10min，停止攪拌靜置10h，棄去上清液，測試樣品分子量及分布:分子量 4378(應(yīng) 3600-4500)，〈2000 部分為 14.2% (應(yīng)蘭 25.0% )，2000-8000 部分為 76.4%(應(yīng) 65.0-85.0% )，2000-4000 部分為 42.4% (應(yīng) 35.0-55.0% )。
[0032]加入55L純化水和27.5L陰離子交換樹脂至上述有沉淀物的罐內(nèi)，攪拌3 6h，使樹脂吸附充分，將0.3053kg氯化鈣溶解在27.5L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，再將0.3053kg氯化鈣溶解在27.5L純化水中得到0.1 %氯化鈣溶液加入樹脂中攪拌Ih后排出，合并兩次的排出液并30min浙干洗滌液，洗滌液共33L，15_20°C攪拌5-10min，加入49.5L乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液，檢測沉淀物鈣離子含量為10.8% (應(yīng)9.5% -11.5% )。
[0033]將上述沉淀物用27.5L純化水溶解，加入0.66kg氯化鈣固體，攪拌使氯化鈣完全溶解，氫氧化鈣飽和溶液調(diào)節(jié)PH為10.8-11.0，30 ±2 °C，溶液總體積為34.38L，30±2°C下加入0.52L30%過氧化氫氧化，維持pH在10.5-11.0，氧化反應(yīng)4h，再用4mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH 在 6.5。
[0034]用純化水沖洗0.45um濾膜和0.2um濾膜至中性，將0.45um及0.2um的除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，濾液總體積34.38L，加入68.76L乙醇攪拌10-15min沉淀靜置10h，真空抽去上清液，加入34.38L乙醇脫水，攪拌使之松散成細顆粒狀靜置> lh，真空抽去上清液，相同的操作重復四次，沉淀物離心脫水，真空干燥箱60-65°C干燥50-56h得到那曲肝素鈣3.873kg。
[0035]對比例I
[0036]按專利CN103408676A中實施例1中的技術(shù)方案制備那曲肝素鈣，即:將3Kg肝素鈉加入15L~24L純凈水攪拌溶解后，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH = 2~3，再加入60g亞硝酸鈉后，在10~30°C下攪拌反應(yīng)2~5h后在2~10°C下靜置20~24h ;在制得的降解液中用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH = 9~11后,加入18g硼氫化鈉還原10~16h,反應(yīng)完畢后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的pH = 6.5~7.0后得到還原液；在還原液中加入95%體積濃度的乙醇進行沉淀后收集沉淀物；在收集的沉淀物中加入純凈水攪拌溶解后，加入0.2%~1.0%質(zhì)量濃度的雙氧水在25~35°C下氧化10~24h后加入95%體積濃度的乙醇沉淀，收集沉底物；在收集的沉淀物中加入純凈水攪拌溶解后用0.45um的過濾器過濾，再將濾液用離子交換柱進行吸附后用洗脫液洗脫，再將收集的洗脫液加入95%體積濃度的乙醇沉淀后，收集沉淀物；在收集的沉淀物中加入純凈水攪拌溶解后，加入0.2%~1.0%質(zhì)量濃度的雙氧水在25~35°C下氧化，氧化10~24h后加入95%體積濃度的乙醇進行沉淀，收集沉淀物得到達肝素鈉粗品；將收集的那曲肝素鈣粗品依次用1000D的超濾膜超濾和除菌處理后得到那曲肝素鈣精品；將那曲肝素鈣精品在_45°C下凍干后得到那曲肝素鈣精品2250克。
[0037]試驗例I
[0038]按歐洲藥典EP7.0對實施例1-3提供的那曲肝素鈣成品進行質(zhì)量標準檢測，將各指標檢測結(jié)果記錄在表1，同時為了與現(xiàn)有技術(shù)進行更好比對，也一并測試了對比例I中指的那曲肝素鈣的相關(guān)指標。
[0039]

【權(quán)利要求】
1.一種那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟: (1)肝素鈉溶解在純化水中調(diào)節(jié)溶液PH至2.7±0.1，加入亞硝酸鈉25±2°C條件下攪拌3-4h，得到降解液，再調(diào)節(jié)降解液pH至9.5-10.0加入硼氫化鈉攪拌> 15h，調(diào)節(jié)溶液pH至3.5±0.1攪拌20min，然后調(diào)節(jié)溶液pH至7.3-7.5，紫外燈照射溶液20_25min，乙醇沉淀，測試沉淀物分子量及分布； (2)將上述沉淀物加入純化水溶解、再加入陰離子交換樹脂吸附，配制與樹脂同體積的氯化鈣溶液加入樹脂中洗滌，同條件洗滌2次，30min浙干洗滌液，合并洗拓液在15-20°C下攪拌5-10min，加入乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置> 8h，檢測沉淀物鈣離子含量; (3)將上述沉淀物用純化水溶解，加入氯化鈣固體，氫氧化鈣溶液調(diào)節(jié)pH至10.8-11.0，30±2°C下加入過氧化氫氧化，維持pH在10.5-11.0氧化4h，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0-6.5 ； (4)將0.45um及0.2um除菌過濾膜串聯(lián)，將反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，濾液用2.0倍的乙醇沉淀，靜置> 8h，真空抽去上清液，加入乙醇脫水攪拌使之松散成細顆粒狀靜置> lh，真空抽去上清液，相同的操作重復四次，離心脫水真空干燥得到那曲肝素鈣。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)中肝素鈉和純化水投料比(W/V)為1.0:8.5-10，肝素鈉和亞硝酸鈉的投料比(W/W)為100:2.0-3.0，亞硝酸鈉和硼氫化鈉的投料比(W/W)為1.0:0.3-0.5，亞硝酸鈉反應(yīng)時體系溫度維持在25 ± 2°C，4mol/L 鹽酸調(diào)節(jié) ρΗ2.7 ± 0.1，5mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液 pH 至 9.0-10.5，254nm 紫外燈置于降解后的溶液中 進行滅菌，乙醇沉淀時，加入溶液體積和乙醇體積(V/V)為1.0:0.8_1.2 ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(2)中肝素鈉和純化水投料比(W/ν)為1.0:8.5-10，肝素鈉和陰離子交換樹脂投料比(W/V)為1.0:4.5-5.5，氯化鈣的濃度為0.lmol/L,同條件洗滌2次，每攪拌Ih后排出，30min浙干洗滌液，合并洗拓液15-20°C攪拌5-10min，加入乙醇再攪拌5_10min，沉淀靜置8h以上棄去上清液，洗拓液和沉淀乙醇的投料比(V/V)為1.0:1.0-2.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(3)中肝素鈉和純化水投料比(W/V)為1.0:3.5-5.5，溶液體積和氯化鈣的投料比(W/V)為100:0.8-2.0，調(diào)節(jié)溶液PH的氫氧化鈣為飽和溶液，溶液總體積和過氧化氫投料比(V/V)為100:0.8-1.5，所用的過氧化氫濃度為30 %。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的那曲肝素鈣的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(4)中用純化水沖洗0.45um濾膜和0.2um濾膜至中性，將0.45um及0.2um的除菌過濾膜串聯(lián)，將上述反應(yīng)液通過該串聯(lián)的過濾膜過濾，用濾液體積2.0倍體積的乙醇來沉淀濾液，用來脫水的乙醇和沉淀的乙醇投料比(V/V)為0.3-0.5:1.0。
【文檔編號】C08B37/10GK104072639SQ201410340558
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月16日
【發(fā)明者】唐詠群, 黃錫偉, 段艷冰, 婁媛媛, 劉玉輝 申請人:南京健友生化制藥股份有限公司