專利名稱：：枸櫞酸坦度螺酮及其制備方法、制劑和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及枸櫞酸坦度螺酮，具體地，是涉及高純度的枸櫞酸坦度螺酮，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：坦度螺酮屬螺酮類藥物，為5-HT受體激動(dòng)劑，它高度選擇與5-HT,a受體結(jié)合。5-HI^受體主要集中在海馬、中隔、腳間核、杏仁核等大腦邊緣系統(tǒng)以及縫腺核中。坦度螺酮選擇性激動(dòng)突觸后膜的5-HT。抑制亢進(jìn)的5-羥色胺能神經(jīng)活動(dòng)，使5-HT與突觸后膜的5-HT^和5-HT2a受體的結(jié)合恢復(fù)平衡狀態(tài)，從而發(fā)揮抗焦慮作用，不產(chǎn)生苯二氮卓類抗焦慮藥物的肌肉松弛、抗驚厥等副反應(yīng)。臨床前試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，坦度螺酮的抗焦慮作用與地西泮相近，而神經(jīng)運(yùn)動(dòng)性功能損害以及藥物濫用等毒副作用比地西泮小。坦度螺酮還具有一定的抗抑郁作用，因此對(duì)于混合有焦慮和抑郁的病人可以發(fā)揮更好的作用。臨床前研究顯示，坦度螺酮比其原形藥物氮雜螺酮以及丁螺環(huán)酮的抗焦慮作用選擇性更高，臨床應(yīng)用前景較好。在一項(xiàng)研究中有202例病人(分別具有焦慮或抑郁的精神癥狀)接受了不同劑量坦度螺酮(7.5mg/d、15mg/d、30mg/d和60mg/d)的治療，持續(xù)4周。4個(gè)劑量組病人出現(xiàn)中度或顯著的全面改善，比率依次為29%、19%、33%和46%，此外30mg/d和60mg/d兩組病人接受治療后。有45.8%的病人各種精神癥狀出現(xiàn)中度或顯著改善。病人接受坦度螺酮30mg/d或60mg/d的抗焦慮效果是令人滿意的。坦度螺酮(包括枸櫞酸坦度螺酮)的安全性比較好，不良反應(yīng)發(fā)生率低，程度輕。在1451例病人中有150例(10.3%)出現(xiàn)不良反應(yīng)。主要的不良反應(yīng)有嗜睡43例(3.0%)、步態(tài)蹣跚16例(1.1%)、惡心13例(0.9%)、倦怠感l(wèi)l例(0.8%)、情緒不佳11例(0.8%)、食欲下降10例(0.7%)。造成上述不良反應(yīng)的原因目前尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，因此，為了保護(hù)坦度螺酮的安全性，嚴(yán)格控制枸櫞酸坦度螺酮的質(zhì)量十分必要。4坦度螺酮的合成方法見(jiàn)US4507303，US4818756，JP60087262等均有報(bào)道。但其合成方法與本專利相比，其生產(chǎn)成本高，收率低，不利于大規(guī)模生產(chǎn)。目前尚無(wú)用順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺與季胺鹽進(jìn)行縮合制備坦度螺酮的合成方法，也沒(méi)有使用馬來(lái)酸亞胺與環(huán)戊二烯反應(yīng)再氫化制成順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的合成方法，也無(wú)使用高純度順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺制備高純度坦度螺酮的報(bào)道，更無(wú)采用HPLC法對(duì)順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺中的未轉(zhuǎn)型順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺和未還原順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的分析與質(zhì)量控制的報(bào)道，也無(wú)坦度螺酮的合成工藝中關(guān)于雜質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相關(guān)報(bào)道，也沒(méi)有具體哪種雜質(zhì)對(duì)坦度螺酮的藥效、安全性影響的相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種枸櫞酸坦度螺酮，本發(fā)明還提供了枸櫞酸坦度螺酮的制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明提供了一種枸櫞酸坦度螺酮，它含有化合物I的重量百分含量不得高于0.5%，含有化合物II的重量百分含量不得高于0.5%，化合物I、II的結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>化合物i化合物n?；衔颕I為坦度螺酮的對(duì)映異構(gòu)體，化學(xué)名為(3ea,4p,7p,7ea)-六氫-2-[4-(2-嘧啶基)-1-(哌啶基)-丁基]-4,7-亞甲基-lH-異吲哚-1,3(2H)-二酮枸櫞酸卦進(jìn)一步優(yōu)選地，它含有化合物I的重量百分含量為0%-0.3%，含有化合物n的重量百分含量為o%-o.3%。進(jìn)一步優(yōu)選地，它含有化合物I的重量百分含量為0-0.1%，含有化合物n的重量百分含量為o-o.i%。可進(jìn)一步優(yōu)選地，它含有化合物I的重量百分含量為0.04-0.31%,含有化合物II的重量百分含量為0.05-0.29%。本發(fā)明所述的枸櫞酸坦度螺酮，它的HPLC色譜如圖l所示，由至少一個(gè)特征峰，該特征峰的出峰時(shí)間為9.513-9.857min,高效液相色譜法的色譜條件為用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(60±5:40±5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm，理論板數(shù)按坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。進(jìn)一步地，HPLC色譜圖還含有兩個(gè)特征峰，出峰分別條件為6.342-6.608min，7.835-8.082min。但在具體的檢測(cè)過(guò)程中，因所用的設(shè)備、操作人員、環(huán)境的不同，其出峰時(shí)間可能會(huì)出現(xiàn)提前或推遲lmin左右的情況。本發(fā)明還提供了一種抗焦慮的藥物組合物，它是由所述的有效量的枸櫞酸坦度螺酮為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑為口服制劑。所述的口服制劑為片劑、膠囊劑或顆粒劑等。本發(fā)明還提供了制備所述的枸櫞酸坦度螺酮的方法，它包括如下步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>下面化合物簡(jiǎn)稱季銨鹽其中Xo代表Cl,Br,I,CH3SO3將順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺、季胺鹽摩爾比為1:1、N，N-二甲基甲酰胺、無(wú)水碳酸鉀加入到反應(yīng)器中，保溫113—157t:攪拌反應(yīng)5—10小時(shí)。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液冷卻至室溫?cái)嚢柘戮徛尤胨校俪浞謹(jǐn)嚢?，靜置，抽濾，濾餅用水充分洗滌；將濾餅用乙酸乙酯溶解，加入鹽酸溶液酸化，至pH2-3，分出酸液，于酸液中加活性炭適量，充分?jǐn)嚢?，冷脫色，過(guò)濾；濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至10-11，產(chǎn)生類白色沉淀，攪拌，靜置，抽濾，濾液回收，濾餅用飲用水洗滌，抽干，得坦度螺酮堿，經(jīng)枸櫞酸成鹽，得到枸櫞酸坦度螺酮；其中，所述的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺純度不得小于99.0%。順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺與特定的季胺鹽類縮合得坦度螺酮堿，在無(wú)水乙醇溶液中與枸櫞酸成鹽得枸櫞酸坦度螺酮粗品，用無(wú)水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶得成品。順式_外_二環(huán)[2.2.l廣烷-2.3-二甲酰亞胺也可由下面兩種方法獲得A、由降冰片烯二酸酐在190—21(TC轉(zhuǎn)型得轉(zhuǎn)型物，轉(zhuǎn)型物在鈀碳為催化劑的條件下氫化得氫化物，氫化物經(jīng)氨水氨化制得順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚烷-2.3-二甲酰亞胺。B、將馬來(lái)酰亞胺與環(huán)戊二烯反應(yīng)，通過(guò)結(jié)晶法得所需具有專一構(gòu)型的物品，再經(jīng)氫化即得制備坦度螺酮堿的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺。在嚴(yán)格控制順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺的純度下，可以制備成符合本發(fā)明要求的枸櫞酸坦度螺酮。本發(fā)明提供的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的純度控制方法為純度照《高效液相色譜法操作規(guī)程》測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用10。/。氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.5)-乙腈(80:20)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm。理論板數(shù)按順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。測(cè)定法取本品約O.lg,置10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液各20U1,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。按面積歸一化法計(jì)算，RRT=0.43的雜質(zhì)不得大于0.5%;RRT=0.65的雜質(zhì)(未轉(zhuǎn)型未還原的順式-夕卜二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺)不得大于0.1%;RRT=0.78的雜質(zhì)(未轉(zhuǎn)型已還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺)不得大于0.30%;RRT-0.87(轉(zhuǎn)型未還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺)的雜質(zhì)不得大于0.4%;順式-夕卜二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺純度不得小于99.0%。本發(fā)明還提供了一種控制所述的枸櫞酸坦度螺酮的方法，它是以化合物I、化合物II為指標(biāo)成分，進(jìn)行質(zhì)量控制。本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，它是照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件為用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(體積比為60±5:40±5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm，理論板數(shù)按坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。發(fā)明人在生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)枸櫞酸坦度螺酮的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)中一雜質(zhì)為合成工藝中中間體未轉(zhuǎn)型已還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺而產(chǎn)生的雜質(zhì)，是枸櫞酸坦度螺酮的一個(gè)異構(gòu)體，命名為異構(gòu)體B(化合物n)。在合成工藝中始終存在,只有在順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺質(zhì)量中嚴(yán)格控制未轉(zhuǎn)型已還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺限度，雜質(zhì)異構(gòu)體B是可以控制到最低。而另一雜質(zhì)(本雜質(zhì)為合成工藝中中間體既未能轉(zhuǎn)型,又未能被還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺而產(chǎn)生的雜質(zhì)，命名為雜質(zhì)A(化合物I)同樣為合成工藝中產(chǎn)生的雜質(zhì),其含量很低，只有在順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中嚴(yán)格控制未轉(zhuǎn)型未還原的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺限度，才能控制雜質(zhì)A(化合物I)。通過(guò)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)異構(gòu)體B與雜質(zhì)A是合成本品過(guò)程中必定產(chǎn)生的雜質(zhì)，且能影響枸櫞酸坦度嫁、酮的藥效及副作用，而原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只對(duì)雜質(zhì)總量進(jìn)行了限制，并沒(méi)有具體定量限制哪一種雜質(zhì)的量。為更好的控制枸櫞酸坦度螺酮的質(zhì)量，發(fā)明人并對(duì)雜質(zhì)異構(gòu)體B及雜質(zhì)A進(jìn)行了確認(rèn)和限量研究，根據(jù)多批大生產(chǎn)樣品確定了雜質(zhì)異構(gòu)體B及雜質(zhì)A的限量。結(jié)果表明，枸櫞酸坦度螺酮在提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，臨床抗焦慮的效果有顯著提高，而不良反應(yīng)卻有明顯的降低。圖1枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060101)色譜圖2枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060101)自身對(duì)照色譜圖(測(cè)定方法中的對(duì)照溶液及為自身對(duì)照)；圖3枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060102)色譜圖4枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060102)自身對(duì)照色譜圖5枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060103)色譜圖6枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060103)自身對(duì)照色譜圖7枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060401)色譜圖8枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060401)自身對(duì)照色譜圖9枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060402)色譜圖10枸櫞酸坦度螺酮(批號(hào)060402)自身對(duì)照色譜圖。圖11順式-夕卜二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺(批號(hào)060101)純度色譜圖圖12順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺(批號(hào)060102)純度色譜圖圖13順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺(批號(hào)060103)純度色譜圖圖14順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺(批號(hào)060104)純度色譜圖具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺的制備由降冰片烯二酸酐在190—21(TC轉(zhuǎn)型得轉(zhuǎn)型物，轉(zhuǎn)型物在鈀碳為催化劑的條件下氫化得氫化物，氫化物經(jīng)氨水氨化制得順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚烷-2.3-二甲酰亞胺。實(shí)施例2本發(fā)明順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的另一種制備方案將97g馬來(lái)酰亞胺加入反應(yīng)瓶中，加入1000ml乙酸乙酯，攪拌使其溶解，加入93g環(huán)戊二烯，攪拌24小時(shí)，減壓蒸去75%溶劑，過(guò)濾，用適量的乙醚洗滌濾餅，得特定構(gòu)型物163g，收率約86%。將特定構(gòu)型物163g溶于2500mlTHF中，加入163g環(huán)己烯和5g的5%鈀炭，在壓力大于O.OlMPa情況下通入氫氣，反應(yīng)物回流9h，冷卻后，減壓蒸去溶劑，殘留物用甲苯重結(jié)晶得產(chǎn)品161g，收率約98%。由此法制得的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的純度符合本專利所述的高純度順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺的質(zhì)量要求。實(shí)施例3本發(fā)明順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的質(zhì)量控制方法將實(shí)施例1、2制備的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定。順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺純度測(cè)定照《高效液相色譜法操作規(guī)程》測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用10。/。氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.5)-乙腈(80:20)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm。理論板數(shù)按順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。測(cè)定法取順式-夕卜二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺約O.lg，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液各20pl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。按面積歸一化法計(jì)算，RRT=0.43的雜質(zhì)不得大于0.5%;RRT=0.65的雜質(zhì)不得大于0.1%;RRT=0.78的雜質(zhì)不得大于0.30%;RRT=0.87的雜質(zhì)不得大于0.4%;順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺不得小于99.0%。取按實(shí)施例1、實(shí)施例2方法制備的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺，批號(hào)為060101、060102、060103、060104，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2，圖11-14。表2順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺純度檢査<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>上述測(cè)定結(jié)果證明，實(shí)施例1、2制備的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的純度均高于99%。實(shí)施例4本發(fā)明枸橡酸坦度螺酮的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>為特定的季胺鹽其中x0代表Cr，Br',r，CH3SCV。順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺與特定的季胺鹽類縮合得坦度螺酮堿，在無(wú)水乙醇溶液中與枸椽酸成鹽得枸櫞酸坦度螺酮粗品，用15倍量無(wú)水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶得成品。具體制備方法為將順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺(純度均大于99%，由實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備)16.5kg(lOOmol)、季胺鹽lOOmol(溴化物、氯化物、碘化物、甲磺酸物均可以)、N，N-二甲基甲酰胺230L、無(wú)水碳酸鉀42kg加入到反應(yīng)器中，保溫113—157"C攪拌反應(yīng)5—10小時(shí)。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液冷卻至室溫?cái)嚢柘戮徛尤?00—900公斤水中，再充分?jǐn)嚢?，靜置，抽濾，濾餅用水充分洗滌二次。將濾餅用乙酸乙酯溶解，加入鹽酸溶液酸化，至pH2-3，分出酸液，于酸液中加活性炭適量，充分?jǐn)嚢?，冷脫色，過(guò)濾。濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至10-11，產(chǎn)生類白色沉淀，攪袢，靜置，抽濾，濾液回收，濾餅用飲用水充分洗滌二次，充分抽干；干燥得白色或類白色坦度螺酮堿34.5士3.9kg。收率范圍90±5%，收率=坦度螺酮堿重量/(順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺重量X2.32)X100%。通過(guò)保溫溫度的篩選結(jié)果見(jiàn)下表，表明保溫溫度在125土2'C最為合適。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例5本發(fā)明枸橡酸坦度螺酮的質(zhì)量控制方法有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄VD)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.5)-乙腈(60:40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm。理論板數(shù)按坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。測(cè)定法取本品約50mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取lml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻,作為對(duì)照溶液(I);另取化合物I對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每lml中約含2.5嗎的溶液，作為對(duì)照品溶液(II);再取化合物II對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每lml中約含2.5嗎的溶液，作為對(duì)照品溶液(m)。精密量取對(duì)照溶液(I)20^1，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的2025%;再精密量取供試品溶液、對(duì)照溶液(I)、對(duì)照品溶液(11)、對(duì)照品溶液(III)各20pl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如顯示雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰面積的和，不得過(guò)對(duì)照溶液(I)的主峰面積(1.0%)，其供試品溶液中如出現(xiàn)化合物I，其峰面積不得過(guò)對(duì)照溶液(II)的主峰面積(0.5%),其供試品溶液中如出現(xiàn)化合物II，其峰面積不得過(guò)對(duì)照溶液(III)的主峰面積(0.5%)。見(jiàn)圖1-圖10取實(shí)施例4制備的樣品，批號(hào)為060101、060102、060103、060401、060402、060501、060502，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表l。_表l有關(guān)物質(zhì)檢査_機(jī)口有關(guān)物質(zhì)(％)化合物I(%)化合物II(%)總量(％)0601010.050.060.110601020.040.050.09060103_—0.070.070604010.150.290.440604020.060.050.110605010.310.280.590605020.090.100.19結(jié)果表明以上多批樣品的有關(guān)物質(zhì)均符合質(zhì)量:標(biāo)準(zhǔn)草案的要求。結(jié)果表明以上多批樣品的純度均符合順式-外-.二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3.酰亞胺質(zhì)量控制的要求。實(shí)施例6采用純度低于99%的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺制備坦度螺酮堿的試驗(yàn)采用純度低于99%的順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚垸-2.3-二甲酰亞胺，按實(shí)施例4的方法制備將順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚烷-2.3-二甲酰亞胺165g(純度98%)、季胺鹽386g(溴化物)、N，N-二甲基甲酰胺230ml、無(wú)水碳酸鉀420g加入到反應(yīng)器中，保溫113—157"C攪拌反應(yīng)5—10小時(shí)。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液冷卻至室溫?cái)嚢柘戮徛尤?公斤水中，再充分?jǐn)嚢?，靜置，抽濾，濾餅用水充分洗滌二次。將濾餅用乙酸乙酯溶解，加入鹽酸溶液酸化，至pH2-3，分出酸液，于酸液中加活性炭適量，充分?jǐn)嚢瑁涿撋?，過(guò)濾。濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至10-11，產(chǎn)生類白色沉淀，攪拌，靜置，抽濾，濾液回收，濾餅用飲用水充分洗滌二次，充分抽干。干燥得白色或類白色坦度螺酮堿300g。將坦度螺酮堿300g，一水合枸櫞酸164g，無(wú)水乙醇3600ml加入反應(yīng)釜內(nèi)，升溫到8CTC，回流30分鐘，放冷至室溫，靜置，抽濾，用無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得枸櫞酸坦度螺酮430g。經(jīng)按實(shí)施例5提供的方法檢驗(yàn)，有關(guān)物質(zhì)為:_<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>上述試驗(yàn)證明，本發(fā)明順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的純度是決定能否制備成符合本發(fā)明要求的枸櫞酸坦度螺酮的因素，通過(guò)限定順式_外_二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺的純度，可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。實(shí)施例7本發(fā)明藥物組合物的制備坦度螺酮0.157mol(約相當(dāng)于60g坦度螺酮)羥丙基甲基纖維素(HPMCK4M)64.8g75%乙醇適量乳糖110g硬酯酸鎂3g滑石粉6g制備工藝將實(shí)施例4制備的坦度螺酮原料藥與羥丙基甲基纖維素、乳糖、混合均勻，過(guò)篩，加入75%乙醇溶液制軟材，過(guò)20目篩制濕顆粒，于5(TC左右烘干，20目篩整粒，加入硬脂酸鎂和滑石粉，混合均勻后壓片。共制1000片。實(shí)施例8本發(fā)明藥物組合物的制備坦度螺酮0.313mol(約相當(dāng)于120g坦度螺酮)淀粉200g微晶纖維素5g制備工藝將實(shí)施例4制備的坦度螺酮與淀粉通過(guò)等量遞增法混勻后，再與微晶纖維素混勻，制粒，壓片，即得片劑；或裝膠囊，即得膠囊劑。實(shí)施例9本發(fā)明藥物組合物的制備枸櫞酸坦度螺酮0.052mol(約相當(dāng)于20g坦度螺酮)淀粉230g微晶纖維素25g將實(shí)施例4制備的枸櫞酸坦度螺酮與淀粉通過(guò)等量遞增法混勻后，再與微晶纖維素混勻，制粒，裝膠囊，即得膠囊劑。實(shí)施例10本發(fā)明藥物組合物的制備坦度螺酮0.157mol(約相當(dāng)于60g坦度螺酮)生理鹽水2000ml制法以適量的生理鹽水溶解，溶液濾至澄明，在濾器上加注射用水至2000ml,罐封,滅菌,即得注射劑IOOO支。實(shí)施例11本發(fā)明藥物組合物的制備枸櫞酸坦度螺酮0.052mol(約相當(dāng)于20g坦度螺酮)注射用水2000ml制法以適量的注射用水溶解，溶液濾至澄明，在濾器上加注射用水至2000ml,罐封,滅菌,即得注射劑IOOO支。實(shí)施例12本發(fā)明藥物組合物的制備枸櫞酸坦度螺酮0.078mol(約30g坦度螺酮)糖粉400g糊精200g可溶性淀粉400g矯味劑lg將實(shí)施例4制備的枸櫞酸坦度螺酮與糊精通過(guò)等量遞增法混勻，再與其他輔料混勻，制粒即得IOOO袋顆粒。實(shí)施例13本發(fā)明藥物組合物的制備枸櫞酸坦度螺酮0.131mol(約50g枸櫞酸坦度螺酮)矯味劑1.5g蒸餾水適量淀粉80g糊精20g將實(shí)施例4制備的枸櫞酸坦度螺酮與淀粉通過(guò)等量遞增法混勻后，再與糊精、矯味劑混勻，乏丸，干燥即得，1000粒丸劑。以下通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。為探索限定了化合物i和化合物n的枸櫞酸坦度螺酮與現(xiàn)有的枸櫞酸坦度螺酮區(qū)別。進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高前后的對(duì)比研究，獲得了大量有效可靠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)論如下試驗(yàn)例1臨床上多中心的開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)提高質(zhì)量組其中化合物I(0.05%)、化合物II(0.06%);原質(zhì)量組其中化合物I(0.6%)，化合物II(0.7%)。本發(fā)明藥物在全國(guó)進(jìn)行了多中心開(kāi)放性的臨床觀察實(shí)驗(yàn)，采用漢密爾頓焦慮量表(HAMA)和臨床總體印象量表(CGI)作為療效判定工具，以藥物不良反應(yīng)量表(TESS)評(píng)價(jià)藥物的安全性。以HAMA作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，并以HAMA減分率判定療效。在高質(zhì)量組1107例隨訪病例中，總有效率為76.54%，不良反應(yīng)發(fā)生率為6.8%，均為輕度。主要為胃腸反應(yīng)，少見(jiàn)頭暈、嗜睡、心慌和皮疹。在未提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)組的1205例隨訪病例中，總有效率為65.4%，不良反應(yīng)發(fā)生率為11.4%，多為輕度，個(gè)別為中度。最多見(jiàn)的不良反應(yīng)為頭昏、嗜睡和胃腸反應(yīng)。臨床觀察結(jié)果表明，通過(guò)將化合物I和化合物II作為藥效和不良反應(yīng)的參考指標(biāo)，枸櫞酸坦度螺酮在提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，臨床抗焦慮的效果有顯著提高，而不良反應(yīng)卻有明顯的降低。試驗(yàn)例2抗焦慮動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)1、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)將50只健康小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，各給藥組按表l所示藥物連續(xù)灌胃給藥5d，l次/d，末次給藥60min后，將小鼠置于高架十字迷宮中央開(kāi)闊部，頭朝閉臂(高架十字迷宮包括兩個(gè)開(kāi)臂(長(zhǎng)30cm，寬6cm)與兩個(gè)閉臂(長(zhǎng)30cm，寬6cm，高10cm)，閉臂上部敞開(kāi)，中央有一5x5cm的開(kāi)闊部，迷宮距地面高50cm)。通過(guò)DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)2.0自動(dòng)記錄5min內(nèi)動(dòng)物進(jìn)入開(kāi)臂與閉臂的次數(shù)及在開(kāi)臂與閉臂內(nèi)及迷宮中央?yún)^(qū)內(nèi)的運(yùn)動(dòng)時(shí)間及運(yùn)動(dòng)距離。以進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)與總?cè)氡鄞螖?shù)的百分比及在開(kāi)臂內(nèi)運(yùn)動(dòng)時(shí)間與開(kāi)臂閉臂內(nèi)的總時(shí)間的百分比代表抗焦慮作用指標(biāo)。(見(jiàn)表2)結(jié)果顯示，地西泮組和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高組可明顯或顯著增加小鼠進(jìn)入開(kāi)臂的次數(shù)、開(kāi)臂滯留時(shí)間及其百分比(P<0.05或PO.01)，抗焦慮作用的提高是顯著的。2、對(duì)小鼠爬梯(thestaircasetest)行為的影響當(dāng)小鼠被引入一個(gè)新環(huán)境時(shí)會(huì)出現(xiàn)焦慮反應(yīng)，如警覺(jué)性行為增加。爬梯行為評(píng)價(jià)探究行為或活動(dòng)性的指標(biāo)，直立則作為焦慮狀態(tài)的參數(shù)，抗焦慮劑在不減少爬梯數(shù)的劑量下使站立數(shù)減少。小鼠50只，雌雄各半，按體質(zhì)量、性別均衡隨機(jī)分為5組，按表2所示藥物灌胃給藥，給藥后30min將小鼠置于箱的底部，背朝樓梯，用數(shù)碼攝像機(jī)拍攝小鼠行為，實(shí)驗(yàn)者離開(kāi)以減少干擾。記錄3min內(nèi)小鼠爬梯數(shù)(以四肢都爬上樓梯為準(zhǔn))和站立數(shù)。每天18:0021:00點(diǎn)紅燈下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每只動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后迅速清潔實(shí)驗(yàn)箱，以排除嗅覺(jué)暗示對(duì)下一只動(dòng)物的干擾。結(jié)果顯示，各給藥組爬梯數(shù)雖然減少但無(wú)顯著差異，而可明顯、顯著減少站立數(shù)(P<0.Ol和PO.05)，而又以高質(zhì)量組效果最顯著，提示其抗焦慮作用較強(qiáng)。表3對(duì)小鼠爬梯行為的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>3、大鼠社會(huì)應(yīng)激動(dòng)物模型與行為影響雄性Sprague-Dawley大鼠，體重200—300g,按照Miscek的方法,雄性大鼠長(zhǎng)期單獨(dú)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),將實(shí)驗(yàn)組大鼠放入單獨(dú)飼養(yǎng)大鼠籠中,單獨(dú)詞養(yǎng)鼠會(huì)攻擊實(shí)驗(yàn)鼠,撒咬侵入者的頸部與背部。在第一次攻擊發(fā)生后實(shí)驗(yàn)持續(xù)8分鐘，允許IO分鐘作為攻擊潛伏期。實(shí)驗(yàn)大鼠至少受到一次攻擊，并且表現(xiàn)出馴服的姿勢(shì)，如防御性直立，仰臥，靜止不動(dòng)等為社會(huì)失敗(socialdefeat)。社會(huì)失敗(socialdefeat)具有明顯的產(chǎn)生應(yīng)激后焦慮行為的作用。采用反映焦慮情緒的高架十字迷宮(plusmaze)法和空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)進(jìn)行行為測(cè)驗(yàn)。高架十字迷宮包括兩條開(kāi)放臂(50xl0cm)和兩條閉合臂(50xl0x40cm),由中央?yún)^(qū)(10xl0cm)聯(lián)結(jié),室內(nèi)為暗光(801ux)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程伴白噪聲。單盲，觀察者分別觀察每組50%的動(dòng)物。大鼠從中央格面向閉合臂放入迷宮,記錄5分鐘內(nèi)活動(dòng)的情況,觀察指標(biāo):(1)閉合臂進(jìn)入次數(shù)(必須有兩只前爪進(jìn)入臂內(nèi));(2)開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù);(3)閉合臂停留時(shí)間;(4)開(kāi)放臂停留時(shí)間。b.反映探究活動(dòng)及情緒反應(yīng)的空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn)(openfieldmethod):木制箱100xl00x50cm，地板用筆劃成25方格20x20cm，沿墻格稱外周格，其余為中央格。將動(dòng)物放在正中央格，觀察12分鐘內(nèi)活動(dòng)情況。觀察指標(biāo)(1)方格間穿行次數(shù):三爪以上跨入鄰格的次數(shù);(2)豎起或修飾次數(shù):兩前肢離地lcm以上的次數(shù);(3)中央格停留時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析，均用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(士SD)表示。多個(gè)樣本均數(shù)比較用單因素方差分析，兩組間均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，顯著性水平p0.05。結(jié)果顯示，各組有抗社會(huì)失敗(socialdefeat)所產(chǎn)生應(yīng)激后焦慮行為的作用。其中高質(zhì)量組的抗應(yīng)激焦慮的作用強(qiáng)于其它組。表4大鼠社會(huì)應(yīng)激動(dòng)物模型與行為影響(高架十字迷宮)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表5大鼠社會(huì)應(yīng)激動(dòng)物模型與行為影響(空?qǐng)鰧?shí)驗(yàn))組別鼠數(shù)(只)穿行次數(shù)站立數(shù)中央格內(nèi)停留時(shí)間應(yīng)激組1023.53±12.7425.58±16.458.33±5.67正常對(duì)照組104U1土27.0517.15±9.7913.17±4.68地西泮組1039.37士18.24*18.64±23.32*12.25±3.8710mg原質(zhì)量組[化合物I(0.6%)化合物II(0.7%)]1038.61±17.57**17,73±14.48**12.74±15.25*10mg提高質(zhì)量組[化合物I(0.15%)化合物II(0.29%)]1041.34±14.25*A16.35±15.77**12.35±13.576*10mg提高質(zhì)量組[化合物I(0.05%)化合物II(0.06%)]1045.29±15.73**A15.34±15.63**A14.92±14.665*A注上表為各給藥組與應(yīng)激組比較*P<0.05**P<0.01提高質(zhì)量組與原質(zhì)量組比較AP0.05AAO.01根據(jù)10mg提高質(zhì)量組[化合物I(0.05%)化合物II(0.06%)]的藥效試驗(yàn)，發(fā)明人根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量控制限定的規(guī)則，進(jìn)一步地將化合物I和化合物II限定為不高于0.1%。通過(guò)上述藥理對(duì)比研究可知，在限定了"化合物I的重量百分含量不得高于0.5%，含有化合物II的重量百分含量不得高于0.5%"的范圍內(nèi)的提高質(zhì)量組枸櫞酸坦度螺酮在抗焦慮的作用明顯高于原質(zhì)量組，且隨著化合物I、化合物II的含量的減少，藥效明顯提高，其中，"化合物I的重量百分含量為0%-0.3%，含有化合物11的重量百分含量為0%-0.3%。"為進(jìn)一步優(yōu)選的范圍，"含有化合物I的重量百分含量為0-0.1%,含有化合物II的重量百分含量為0-0.1%"為更進(jìn)一步優(yōu)選的范圍；臨床上多中心的開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明枸櫞酸坦度螺酮的臨床抗焦慮的效果有顯著提高、不良反應(yīng)降低。說(shuō)明通過(guò)將化合物i、化合物n作為指標(biāo)成分控制，在本發(fā)明限定的范圍內(nèi)，可有效的提高枸櫞酸坦度螺酮的藥效，降低不良反應(yīng)。表2對(duì)高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注上表為各給藥組與正常對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01提高質(zhì)量組與原質(zhì)量組比較AP0.05AAO.Ol權(quán)利要求1、枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于含有化合物I的重量百分含量不得高于0.5％，含有化合物II的重量百分含量不得高于0.5％，化合物I、II的結(jié)構(gòu)式為2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于含有化合物I的重量百分含量為0%-0.31%，含有化合物11的重量百分含量為0%-0.3%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于含有化合物I的重量百分含量為0.04-0.31%,含有化合物II的重量百分含量為0.05-0.29%。4、根據(jù)權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述的枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于它的HPLC色譜如圖1所示，含有至少一個(gè)特征峰；高效液相色譜法的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈，體積比為(60±5):(40±5)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm，理論板數(shù)按坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于HPLC色譜圖還含有兩個(gè)特征峰。6、一種抗焦慮的藥物組合物，它是由權(quán)利要求l-5任一項(xiàng)所述的有效量的枸櫞酸坦度螺酮為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗焦慮的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑為口服制劑。8、一種制備權(quán)利要求1所述的枸櫞酸坦度螺酮的方法，它包括如下步驟將順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺、季胺鹽、N，N-二甲基甲酰胺、無(wú)水碳酸鉀加入到反應(yīng)器中，保溫113—157"C攪拌反應(yīng)5—10小時(shí)；反應(yīng)完畢，反應(yīng)液冷卻至室溫?cái)嚢柘戮徛尤胨?，再充分?jǐn)嚢瑁o置，抽濾，濾餅用水充分洗滌；將濾餅用乙酸乙酯溶解，加入鹽酸溶液酸化，至pH2-3，分出酸液，于酸液中加活性炭適量，充分?jǐn)嚢?，冷脫色，過(guò)濾；濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至10-11，產(chǎn)生類白色沉淀，攪拌，靜置，抽濾，濾液回收，濾餅用飲用水洗滌，抽干，得坦度螺酮堿，經(jīng)枸櫞酸成鹽，得到枸櫞酸坦度螺酮；其中，所述的順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚垸-2.3-二甲酰亞胺的純度不得小于99.0%。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的枸櫞酸坦度螺酮的方法，其特征在于其中順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺由以下兩種方法實(shí)現(xiàn)A、由降冰片烯二酸酐在190—210'C下轉(zhuǎn)型，轉(zhuǎn)型物在有鈀碳催化劑的情況下氫化為氫化物，氫化物在氨水環(huán)境下氨化為順式-外-二環(huán)[2.2.l]庚烷-2.3-二甲酰亞胺；B、由馬來(lái)酰亞胺與環(huán)戊二烯反應(yīng)所得物，再經(jīng)氫化即得順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺，具體步驟為將馬來(lái)酰亞胺加入反應(yīng)瓶中，加入乙酸乙酯，攪拌使其溶解，加入環(huán)戊二烯，其中環(huán)戊二烯與馬來(lái)酰亞胺的重量配比為1:1-2，攪拌，減壓蒸去75%溶劑，過(guò)濾，用乙醚洗滌濾餅，得特定構(gòu)型物；將特定構(gòu)型物溶于THF中，加入環(huán)已烯和5%鈀炭，在壓力大于O.OlMPa情況下通入氫氣，反應(yīng)物回流9h，冷卻后，減壓蒸去溶劑，殘留物用甲苯重結(jié)晶得順式-外-二環(huán)[2.2.1]庚烷-2.3-二甲酰亞胺。10、一種控制權(quán)利要求1所述的枸櫞酸坦度螺酮質(zhì)量的方法，它是以化合物I、化合物II為指標(biāo)成分，進(jìn)行質(zhì)量控制，它是照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件為用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈，體積比60±5:40±5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm，理論板數(shù)按坦度螺酮峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。全文摘要本發(fā)明提供了一種枸櫞酸坦度螺酮，其特征在于含有化合物I的重量百分含量不得高于0.5％，含有化合物II的重量百分含量不得高于0.5％，化合物I、II的結(jié)構(gòu)式為右式。本發(fā)明還提供了該枸櫞酸坦度螺酮的制備方法和質(zhì)量控制方法。通過(guò)藥效試驗(yàn)及臨床觀察結(jié)果表明，枸櫞酸坦度螺酮在提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，臨床抗焦慮的效果有顯著提高，而不良反應(yīng)卻有明顯的降低。文檔編號(hào)C07D403/00GK101362751SQ200810135089公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2008年7月25日優(yōu)先權(quán)日2007年8月10日發(fā)明者王永朝,胡和平,剛陳,陳功政申請(qǐng)人:成都市律凱醫(yī)藥科技有限公司