專利名稱：用于癌癥治療的含有雌四醇衍生物的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過向哺乳動物給藥有效量的特定雌激素成分治療或預(yù)防所述哺乳動物中雌激素敏感性腫瘤的方法。該方法尤其適用于治療或預(yù)防乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌。
背景技術(shù)：
乳腺癌是導(dǎo)致西方婦女癌癥死亡率的最主要原因，并且據(jù)預(yù)測，在不久的將來將成為導(dǎo)致如日本的東方婦女因癌癥死亡的最主要原因。據(jù)美國癌癥學(xué)會估計，九分之一的婦女終生都面臨來自這一疾病的威脅，且對于四分之一的正在遭受其折磨的婦女來說，該疾病是致命的。已知，乳房腫瘤以及其他腫瘤(包括子宮癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮纖維瘤、良性前列腺增生以及黑色素瘤等)均為雌激素敏感性，這表明17β-雌二醇等雌激素刺激上述腫瘤的形成和生長。17β-雌二醇是人體的一種內(nèi)源性雌激素，同時存在于男性和女性身體中。
已知雌激素可以通過誘導(dǎo)雌激素受體介導(dǎo)的乳房和子宮內(nèi)膜細(xì)胞分裂(增殖)頻率增加，從而導(dǎo)致生成例如乳房和子宮內(nèi)膜腫瘤的風(fēng)險增加。由于細(xì)胞分裂本身會增加基因錯誤的風(fēng)險，特別是如腫瘤抑制基因滅活等基因錯誤，因此其是人類腫瘤生成這一復(fù)雜過程的本質(zhì)原因。
治療雌激素敏感性腫瘤的一個重要的因素是抑制或在可能的情況下消除某些雌激素誘導(dǎo)的作用。為此，期望可以阻斷受雌激素刺激的受體部位和/或降低能夠作用于這些部位的雌激素的量。
通常應(yīng)用的阻斷受體部位的治療包括給藥抗雌激素?？勾萍に厥且环N可以抑制雌激素對其靶組織發(fā)揮全部作用的化學(xué)物質(zhì)。他莫西芬是目前用于雌激素敏感性癌癥化療中的一種抗雌激素成分。他莫西芬是所謂的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)，即此物質(zhì)顯示雌激素拮抗劑以及激動劑的性質(zhì)。盡管這種混合激動劑/拮抗劑對此類癌癥的治療中具有有益的作用，但是同樣已知其雌激素副作用對于子宮中的某些癌癥細(xì)胞群體具有刺激作用，因此在某些情況下會起相反作用。在現(xiàn)有技術(shù)中，還已知似乎不對子宮起激動作用的SERM(如雷洛昔芬)，但卻具有能誘導(dǎo)一些更年期疾病的發(fā)生的缺點，如熱潮紅和出汗。此外，這種SERM還與靜脈血栓栓塞風(fēng)險的增加有關(guān)，這是另一激動性雌激素作用。
血清中雌激素濃度的降低可以外科手術(shù)(卵巢切除術(shù)、腎上腺切除術(shù)、垂體切除術(shù))或者以藥物學(xué)方法通過給藥大劑量的孕激素、GnRH類似物或甾體通道抑制劑等實現(xiàn)。然而，長期抑制內(nèi)源性雌激素的生成會導(dǎo)致雌激素不足。此外，發(fā)現(xiàn)即使在性激素完全缺失的情況下，一些受體仍可以被激活。參考Simard and Labrie，“Keoxifene shows pureantiestrogenic activity in pituitary gonadotrophs”，Mol.Cell.Endocrinol.39141-144，(1985)，尤其是第144頁。
US 4937238(Lemon)涉及一種預(yù)防雌性哺乳動物乳腺癌的方法，包括給藥選自以下組中的藥物的步驟(1)4-OH雌二醇；(2)d-馬萘雌酮；以及(3)17α-乙炔基雌三醇。其還提供一個通式來描述包括(1)4-OH雌二醇在內(nèi)的一系列化合物。該式包含大量不同的雌激素類物質(zhì)，包括可含有4個或更多個羥基的物質(zhì)。除了4-OH雌二醇外，沒有討論任何這一大類物質(zhì)的其他代表性物質(zhì)。
US 5,340,584(Spicer等)記載一種用于避孕或治療良性的婦科疾病的方法，包括在第一段時期給藥抑制卵巢雌激素和孕酮生成有效量的GnRH組合物，同時給藥預(yù)防雌激素缺乏癥狀有效量的雌激素組合物，以及同時給藥有效劑量的孕激素，以維持該孕激素的血清水平在降低子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖有效的水平上。該美國專利主要關(guān)注在至少為兩個月的延長的時期內(nèi)有效的緩釋劑型。在列舉的諸多可以被用于所述發(fā)明的雌激素中也提及雌四醇。
WO 02/30355(Kragie)記載一種在患者中緩解芳香化酶抑制劑的不利的副作用和/或增強其有益的功效的方法，其中該方法包括給藥一種或多種芳香化酶抑制劑以及一種或多種具有雌激素功能替代劑的組合(EFR)。在該申請中提及大量EFR劑，包括雌激素。所列舉的雌激素中也提及雌二醇。據(jù)稱，所要求保護的方法對治療遭受所服用的用于治療許多疾病狀況或臨床適應(yīng)癥的包含芳香化酶抑制劑的組合物的副作用折磨或其療效下降的的患者有益。有關(guān)作為疾病狀況的實例而提及的乳腺癌中，據(jù)發(fā)現(xiàn)芳香化酶抑制劑被用于減少癌變的乳房組織中雌激素的生成。據(jù)稱，雷洛昔芬等選擇性EFR劑和雌二醇代謝物作為EFR劑在腫瘤治療中具有有益的作用。關(guān)于雌二醇代謝物可參考Lippert TH等。Steroids2000；65357-69。所述文章報道了對包括雌四醇在內(nèi)的雌二醇的A環(huán)和D環(huán)代謝物對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的研究的結(jié)果。該結(jié)果表明，一些A環(huán)代謝物能夠抑制經(jīng)培養(yǎng)的人體臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。而未觀察到雌四醇對此具有顯著作用。
與僅僅抑制雌激素生成的治療相比而言，雌激素類似物如GnRH類似物、芳香化酶抑制劑和/或孕激素通常能夠產(chǎn)生更好的療效。因此，需要一種藥物，其與抗雌激素和/或目前可用的SERM相比，具有激動劑和拮抗劑(或非激動劑)性質(zhì)的更有利的組合。具體而言，需要一種對乳房和/或子宮內(nèi)膜組織無不利的增殖作用，而同時具有足夠的雌激素活性以防止其給藥后導(dǎo)致雌激素缺乏和/或更年期癥狀。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明出乎意料地發(fā)現(xiàn)，如下式所示的雌激素物質(zhì)能滿足這些要求
其中R1、R2、R3、R4分別獨立地為氫原子、羥基或含有1-5個碳原子的烷氧基。
此類雌激素物質(zhì)已知的代表是1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇，也稱作雌四醇、oestetrol以及15α-羥基雌三醇。雌四醇是在人類妊娠期間由胎兒肝臟產(chǎn)生的一種雌激素。在足月妊娠中，母體血漿中未結(jié)合的雌四醇水平的峰值是1.2ng/ml，而在胎兒血漿中比在母體血漿中約高12倍(Tulchinsky等，1975.J.Clin.Endocrinol.Metab.，40，560-567)。
由于本領(lǐng)域技術(shù)人員預(yù)期雌激素物質(zhì)將促進雌激素敏感腫瘤的形成和生長，因此該雌激素物質(zhì)能方便的用于治療這種腫瘤是令人驚奇的。由于該雌激素物質(zhì)似乎未顯示出雌激素拮抗性質(zhì)，這一發(fā)現(xiàn)實在是出人意料。
盡管發(fā)明者們不想被理論所束縛，但相信該雌激素成分(EC)的有利作用是由該成分賴以與其他的雌激素競爭結(jié)合細(xì)胞質(zhì)雌激素受體(ER)的首要機制(primary mechanism)導(dǎo)致的。據(jù)信，所得ER-EC復(fù)合體可抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性雌激素的多種活性。內(nèi)源性雌激素，如17β-雌二醇等，與ER結(jié)合從而促進細(xì)胞的活性如雌激素/ER介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄、DNA合成、癌癥細(xì)胞生長，以及自分泌多肽如轉(zhuǎn)錄生長因子-α、表皮生長因子、類胰島素生長因子-II以及其他可能與細(xì)胞增殖有關(guān)的生長因子的增加。本發(fā)明雌激素成分對內(nèi)源性雌激素與ER結(jié)合的競爭性抑制可以降低或抑制內(nèi)源性雌激素的誘導(dǎo)癌癥生長的細(xì)胞活性。由于對如乳房組織不具有增殖影響，本發(fā)明的雌激素成分可以抑制乳腺癌細(xì)胞從細(xì)胞周期的G1初期向G1中期轉(zhuǎn)變，并且對乳腺癌細(xì)胞顯示細(xì)胞抑制作用。
據(jù)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的雌激素物質(zhì)對ERα受體顯示出相對較高的親和力，或者相反地，對ERβ受體顯示出相對較低的親和力。據(jù)信，這種受體特異性以某種方式與本發(fā)明物質(zhì)在雌激素敏感性腫瘤治療中具有較高的功效有關(guān)。然而，盡管在此領(lǐng)域正在進行大量的科學(xué)研究，但是對控制導(dǎo)致這種功效的ER信號通道的機制仍所知甚少。
已知大多數(shù)的雌激素與在組織特異性輔激活物和/或輔阻抑物存在下結(jié)合至基因調(diào)節(jié)區(qū)域中的雌激素反應(yīng)成分和/或其他轉(zhuǎn)錄因子的兩種ER相結(jié)合。考慮到ER信號的復(fù)雜性，以及ERα和ERβ以及它們的輔因子的組織特異性表達，現(xiàn)在認(rèn)識到ER配體能夠以組織特異性方式起到雌激素激動劑或者甚至雌激素抑制劑的作用。
目前還已知雌激素通過基因表達調(diào)節(jié)細(xì)胞的藥理學(xué)，已知該雌激素作用受雌激素受體介導(dǎo)。雌激素受體對基因調(diào)節(jié)的作用可以通過ER直接與雌激素反應(yīng)成分相結(jié)合、ER與其他轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB、C/EBPβ以及通過包括離子通道受體的非基因組作用加以介導(dǎo)。
近年來的研究進展表明，ER與輔激活物(如SRC-1、CBP和SRA)和輔阻抑物(如SMRT和N-CoR)有關(guān)，它們也可以組織特異性及配體特異性方式調(diào)節(jié)ER的轉(zhuǎn)錄活性。此外，有證據(jù)表明，多數(shù)雌激素調(diào)節(jié)的基因不具有典型的雌激素反應(yīng)成分。在這種情況下，ER與對調(diào)節(jié)這些基因而言關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子進行相互作用。已知的其活性可受ER調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄因子包括例如AP-1、NF-κB、C/EBPβ和Sp-1。
考慮到ER信號的復(fù)雜性以及表達ER及其輔因子的組織的不同類型，一般認(rèn)為ER配體不能再被簡單地分為純粹的抑制劑或激動劑。Paech等(Science 277，1508-1510，1997)的發(fā)現(xiàn)支持這一觀點，他們報道，在ERα存在下，17β雌二醇激活A(yù)P-1位點，但是在ERβ存在下卻抑制該同一位點。相反，ER配體雷洛昔芬(Eli Lilly & Co.)及他莫西芬以及ICI-182,780(Zeneca Pharmaceuticals)通過ERβ刺激AP-1位點，但是在ERα存在的情況下卻抑制此位點。
如主要通過RT-PCR或原位雜交的分析，已知ERα和ERβ具有交疊以及相異的組織分布。通常組織表達ERα和ERβ，但是受體卻存在于不同細(xì)胞類型中。
總之，盡管本發(fā)明的雌激素成分是如何發(fā)揮其有利作用的機制還不清楚，但是顯然所述雌激素成分與諸如17β雌二醇和乙炔基雌二醇的雌激素物質(zhì)不同，它對ERα受體顯示出與對ERβ受體相比而言相對較高的親和力。由以上所述還可知，這種特異性可能會是本發(fā)明雌激素成分在雌激素敏感性腫瘤的治療或預(yù)防中所具有的出人意料的功效的原因。
與SERM如他莫昔芬相似，本發(fā)明雌激素成分顯示出能夠長期給藥而不會發(fā)生更年期癥狀的雌激素作用。然而，他莫西芬對子宮組織具有不良的雌激素作用，并且與子宮內(nèi)膜增生和癌變有關(guān)。長期使用他莫西芬與子宮內(nèi)膜癌變風(fēng)險的增加有關(guān)，比沒有使用他莫西芬治療的婦女的風(fēng)險高出五倍。因此，給藥他莫西芬用于長期預(yù)防乳腺癌和長期治療乳腺癌具有顯著的與之相關(guān)的風(fēng)險。
與他莫西芬有關(guān)的另一個缺點是對于絕經(jīng)前婦女而言具有卵巢過度刺激的危險，其導(dǎo)致雌激素的過多分泌。顯然，所導(dǎo)致的雌激素血清水平的增加對于患有雌激素敏感性腫瘤的患者而言是非常不希望的。因此，對于使用他莫西芬治療的絕經(jīng)前患者一般要施行卵巢切除術(shù)。因為本發(fā)明雌激素成分實際上抑制卵泡生長和排卵，因此其似乎對子宮組織無此不良影響，也不會誘導(dǎo)卵巢的過度刺激。
本發(fā)明的雌激素物質(zhì)的另一個重要的益處來源于它們與其他藥物相互作用(藥物之間的相互作用)的相對不敏感性。眾所周知，某些藥物可能會降低雌激素的作用，而其他藥物可能會增強它們的活性，從而可能導(dǎo)致副作用增加。類似地，雌激素可能干擾其他藥物的代謝。一般而言，其他藥物對雌激素的作用是由于干擾了這些雌激素的吸收、代謝或排泄，而雌激素對其他藥物的作用是由于對代謝途徑的競爭。
當(dāng)藥物可能誘導(dǎo)可能使雌激素血漿水平降低至治療水平之下的肝臟微粒體酶時(例如抗驚厥劑苯妥因、普里米酮、巴比妥酸鹽、卡巴咪嗪、乙琥胺和甲琥胺；抗結(jié)核藥物如利福平；抗真菌藥物如灰黃霉素)，發(fā)生臨床上最顯著的一組雌激素和藥物之間的相互作用。本發(fā)明雌激素物質(zhì)對肝臟微粒體酶(如P450)向上和向下調(diào)節(jié)的依賴性更低，且對其他P450底物的競爭也不太敏感。類似地，它們并不顯著干擾其他藥物的代謝。
如形成于肝臟的大多數(shù)雌激素的結(jié)合物被分泌于膽汁中，且可能被結(jié)腸中的腸道細(xì)菌分解以釋放出活性激素，該激素然后可以被重吸收(腸肝循環(huán))。有臨床報告支持如下觀點，在服用抗生素如阿莫西林和四環(huán)素等的婦女中，雌激素的腸肝循環(huán)會降低。本發(fā)明雌激素物質(zhì)的結(jié)合物形式幾乎不從膽汁中分泌，表明它們對影響其他雌激素的肝腸循環(huán)的藥物幾乎不敏感。
上述陳述用于解釋為何本發(fā)明雌激素物質(zhì)尤其適用于治療或預(yù)防雌激素敏感性腫瘤。
具體實施例方式
因此，本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防哺乳動物中雌激素敏感性腫瘤的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給藥治療有效量的雌激素成分。其中，該雌激素成分選自以下組中如下式所示的物質(zhì)，
其中R1、R2、R3、R4彼此獨立地為氫原子、羥基或含有1-5個碳原子的烷氧基；當(dāng)以本發(fā)明方法應(yīng)用時可以釋放出前述分子式物質(zhì)的前體；一種或多種上述物質(zhì)和/或前體的混合物。
本文所用術(shù)語“腫瘤”是指其中細(xì)胞增殖失控并呈進行性的組織新的生長。術(shù)語腫瘤包括惡性和良性腫瘤。
術(shù)語“雌激素敏感性腫瘤”是指其形成和生長受雌激素刺激的腫瘤，除本發(fā)明雌激素成分外，尤其是選自以下組中17β-雌二醇、乙炔基雌二醇，以及其前體和代謝物。
術(shù)語“癌癥”是指經(jīng)過惡性轉(zhuǎn)變進而對宿主器官呈病理性的細(xì)胞。
本發(fā)明雌激素物質(zhì)與通常應(yīng)用于藥物制劑中的生物源以及合成雌激素不同，其甾體骨架中的5元環(huán)含有3個羥基取代基而不是0-2個。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，R1、R2、R3、R4中至少一個為羥基，即此雌激素物質(zhì)至少包含4個羥基。優(yōu)選地，在本發(fā)明組合物中用作活性成分的雌激素成分是所謂的生物源雌激素，即自然存在于人體內(nèi)的雌激素，生物源雌激素的前體或它們的混合物。由于生物源雌激素自然存在于胎兒和女性體內(nèi)，因此，特別是在外源性給藥這種雌激素所造成的血清水平并非大幅超出自然存在的濃度時，預(yù)期不會產(chǎn)生副作用。
在一個本發(fā)明優(yōu)選實施方案中，該雌激素物質(zhì)含有4個羥基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2、R3、R4中不超過3個為氫原子。同樣，在上述式中，R1優(yōu)選為氫原子。在所述分子式中，基團R1、R2、R3和R4中優(yōu)選至少2個、更優(yōu)選至少3個是氫原子。
因為攜帶羥基取代基的碳原子具有手性活性，所以符合該式的雌激素物質(zhì)包含各種對映異構(gòu)體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明雌激素物質(zhì)是15α-羥基取代的。在另一個優(yōu)選的實施方案中，該物質(zhì)是16α-羥基取代的。在另一個優(yōu)選的實施方案中，該物質(zhì)是17β-羥基取代的。最優(yōu)選的雌激素物質(zhì)是15α，16α，17β-三羥基取代的。在本發(fā)明雌激素成分甾體骨架中的其他手性碳原子優(yōu)選為具有與17β-雌二醇和其他生物源雌激素相應(yīng)的碳原子相同的構(gòu)型。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，R3為羥基或烷氧基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2和R4為氫原子，在這種情況下該物質(zhì)為1，3，5(10)-雌三烯-3，15，16，17-四醇。后一物質(zhì)優(yōu)選的異構(gòu)體是1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇(雌四醇)。
本發(fā)明還包括構(gòu)成本發(fā)明方法中的活性成分的雌激素物質(zhì)的前體的應(yīng)用。例如，作為代謝轉(zhuǎn)化的結(jié)果，這些前體物質(zhì)在用于本發(fā)明方法時能夠釋放出上述的雌激素物質(zhì)。這些前體優(yōu)選地選自本發(fā)明雌激素物質(zhì)的衍生物組中，其中，至少一個羥基上的氫原子被以下基團取代含有1-25個碳原子的烴基羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；?；四氫呋喃基；四氫吡喃基；或每個殘基含有1-20個糖苷單元的直鏈或支鏈糖苷殘基。適用于本發(fā)明的前體的典型的實例是酯類，其可通過將雌激素物質(zhì)的羥基與含有一個或多個羧基(M+-OOC-)的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)獲得，其中M+為氫原子或(堿)金屬陽離子。因此，在一個特別優(yōu)選的實施方案中，該前體是其中在所述式中至少一個羥基上的氫原子被-CO-R所取代的雌激素物質(zhì)衍生物，其中R是含有1-25個碳原子的烴基。優(yōu)選地，R是氫或含有1-20個碳原子的烷基、烯基或芳香基。
本發(fā)明方法可適用于治療哺乳動物如牛、寵物以及尤其是人。該方法可用于治療雌性和雄性(例如前列腺增生)，但在治療雌性中獲得最佳結(jié)果。該方法可有利地應(yīng)用于絕經(jīng)期前、圍絕經(jīng)期或絕經(jīng)后的雌性。因為本方法不同于他莫西芬等SERM，與卵巢過度刺激的危險無關(guān)，因此其特別適用于絕經(jīng)期前和圍絕經(jīng)期雌性的治療。本發(fā)明方法可有利地用于治療雌激素敏感性腫瘤以及同時預(yù)防此類腫瘤的形成。
當(dāng)長期持續(xù)給藥時，本方法尤其有效。一般來說，該方法包括在為期至少5天期間內(nèi)不間斷地給藥雌激素成分。優(yōu)選地，不間斷給藥持續(xù)至少30天，更優(yōu)選至少90天。
本發(fā)明方法適于采用雌激素成分的經(jīng)腸或非胃腸道給藥。所用術(shù)語“非胃腸道給藥”在本文中包括透皮給藥、靜脈給藥、鼻內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、口腔給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥以及子宮內(nèi)給藥。術(shù)語“經(jīng)腸給藥”包括口服給藥以及直腸給藥。
優(yōu)選地，給藥方式選自以下組中口服給藥、透皮給藥、靜脈給藥、鼻內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、直腸給藥、口腔給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥或子宮內(nèi)給藥。更優(yōu)選地，給藥方式選自以下組中口服給藥、透皮給藥、靜脈給藥、皮下給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥以及陰道給藥。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明方法采用口服給藥、透皮給藥、鼻內(nèi)給藥或皮下給藥。更優(yōu)選地，本發(fā)明方法采用口服給藥和透皮給藥。
口服給藥、靜脈給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥、鼻內(nèi)給藥、直腸給藥、口腔給藥、以及肺內(nèi)給藥理論上適用于每日(至少)一次給藥。透皮給藥有利地以每日一次至每月一次的頻率應(yīng)用。陰道內(nèi)給藥和子宮內(nèi)給藥有利地以每周一次至每月一次的頻率操作。皮下給藥和肌內(nèi)給藥也適用于采用儲庫型注射劑的形式，以一周到6個月的間隔、優(yōu)選為4周到3個月的間隔給藥。
處于方便的原因，本發(fā)明方法優(yōu)選地采用1天、1周或1個月的給藥間隔。特別優(yōu)選的給藥方案是每日一次口服給藥、皮下給藥、靜脈給藥或鼻內(nèi)給藥，每周一次透皮給藥或每月一次陰道內(nèi)或皮下給藥。
盡管本方法可以用于如US 5340584中所述的緩釋劑型，但是并不優(yōu)選在至少約一個月的長期內(nèi)有效的緩釋劑型。
不考慮給藥方式，該雌激素成分優(yōu)選以能夠使血清濃度達到至少1納克/升，更優(yōu)選為10納克/升，最優(yōu)選為100納克/升。通常，所導(dǎo)致的雌激素成分的血清濃度不會超過100微克/升，優(yōu)選為不超過50微克/升，更優(yōu)選為不超過25微克/升。
如US 5340584中所教導(dǎo)，在一個特別優(yōu)選的實施方案中，該雌激素成分以明顯超過維持所述雌激素成分血清水平于可以有效的預(yù)防雌激素缺乏癥狀的水平所需的劑量給藥。更優(yōu)選地，該雌激素成分以足夠維持所述雌激素成分血清水平處于與超過50pg/ml、最優(yōu)選為超過140pg/ml雌二醇血清水平等效的水平的量給藥。
根據(jù)本發(fā)明方法，該雌激素成分通常以每日每千克體重不超過1mg、優(yōu)選為每日每千克體重不超過0.4mg的量給藥。為了使給藥雌激素成分起到顯著的效果，建議以每日每千克體重至少1μg的量給藥。優(yōu)選地，所給藥的量為每日每千克體重至少5μg。
優(yōu)選地，活性成分口服給藥的量優(yōu)選為每日每千克體重不超過400μg，優(yōu)選為每日每千克體重不超過200μg。為了使給藥活性成分起到顯著的效果，建議以每日每千克體重至少2μg的量口服給藥。優(yōu)選地，所口服給藥的量為每日每千克體重至少5μg。在本發(fā)明方法中，尤其是用于人時，雌激素成分通常以每日至少0.05mg、優(yōu)選為每日至少0.1mg的平均劑量給藥。最大劑量通常需低于每日40mg，優(yōu)選為低于每日20mg。
本發(fā)明的治療方法包括向需要這種治療的哺乳動物給藥有效量的雌激素成分。有效所需的劑量在個體之間具有差異，并由各種因素所決定，如個體的性別、體重、給藥途徑以及所使用的特定雌激素成分的效力。
本發(fā)明方法中，尤其是用于人時，該雌激素成分通常以每日0.01到20mg、優(yōu)選為每日0.05到10mg的劑量口服給藥。類似地，非胃腸道給藥優(yōu)選的劑量為每日至少0.05mg，優(yōu)選為每日至少0.1mg。非胃腸道給藥的平均最大劑量通常需低于每日40mg，優(yōu)選為低于每日20mg。
在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，該方法采用活性雌激素成分的口服給藥。所用術(shù)語“口服給藥”在本文也包括經(jīng)口管飼給藥。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，盡管雌四醇以及相關(guān)的雌激素物質(zhì)的效力較低，但仍然可有利地口服給藥。盡管發(fā)明人不希望被理論所束縛，但據(jù)信口服雌四醇類物質(zhì)的效力源于這些物質(zhì)特殊的藥代動力學(xué)(ADME)和藥效學(xué)性質(zhì)的聯(lián)合。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，雌四醇類物質(zhì)的口服生物利用度出乎意料地高，其在體內(nèi)的半衰期比通常使用的生物源雌激素長很多。從而，盡管雌四醇和雌四醇類物質(zhì)具有相對較低的雌激素效力，它們?nèi)匀豢梢杂行У赜糜诳诜o藥，這是因為要達到期望效果所需的口服劑量與那些已經(jīng)用于例如17β-雌二醇的口服劑量相近。
雌四醇和雌四醇類物質(zhì)的另一個重要的優(yōu)點在于，由于這類物質(zhì)在所謂的“首過”中幾乎不代謝，因此事實上這類物質(zhì)的肝臟作用被認(rèn)為很小?？诜o藥的首過效應(yīng)指的是在藥物從起始攝入轉(zhuǎn)運至血流循環(huán)中時藥物被肝臟降解的過程。在從腸腔內(nèi)再吸收后，口服給藥的活性成分通過肝臟進入機體。該事實對雌激素藥物尤為重要，因為肝臟是雌激素的靶器官。雌激素的口服攝入在肝臟中導(dǎo)致強烈的雌激素效應(yīng)。治療上等效劑量的通常應(yīng)用的生物源雌激素在口服給藥時導(dǎo)致明顯的肝臟參數(shù)反應(yīng)，如SHBG、CBG和血管緊張素原的增加。在應(yīng)用馬雌激素劑型(也稱作結(jié)合雌激素)時也觀察到雌激素的這些肝臟效應(yīng)。
本發(fā)明方法可適用于各種雌激素敏感性腫瘤的(預(yù)防性)治療，包括乳腺癌、子宮癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維瘤、良性前列腺增生癥和黑色素瘤。術(shù)語“子宮癌”包括子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌。本發(fā)明方法被認(rèn)為特別適用于乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的治療或預(yù)防。本發(fā)明方法最有利地用于乳腺癌的治療或預(yù)防。
為了進一步增強本發(fā)明方法的有效性，建議可聯(lián)合給藥一種能夠抑制內(nèi)源性雌激素血清水平的藥物成分。優(yōu)選地，以能夠有效抑制17β-雌二醇水平至10pg/ml以下、更優(yōu)選為5pg/ml以下、最優(yōu)選為1pg/ml以下的量聯(lián)合給藥一種或多種該雌激素抑制劑。
可有利地與本發(fā)明雌激素成分一同聯(lián)合給藥的雌激素抑制劑的實例包括孕激素、GnRH類似物、芳香化酶抑制劑、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑和1型17β-羥基甾體脫氫酶(1型17β-HSD)抑制劑。優(yōu)選地，本發(fā)明方法包括聯(lián)合給藥一種選自前述組中的酶抑制劑的雌激素抑制劑。這些酶抑制劑能提供具有以下優(yōu)勢，其能夠選擇性地抑制內(nèi)源性雌激素生成而不直接影響其他甾體和/或促性腺激素的生成。
原則上，如US 5,340,584和US 5,340,585所述的GnRH組合物也在本發(fā)明方法中用作雌激素抑制劑。然而優(yōu)選地，本發(fā)明方法不采用這種GnRH組合物，特別是在本發(fā)明方法被用于預(yù)防雌激素敏感性腫瘤的發(fā)生時。
如芳香化酶抑制劑、COX-2抑制劑和1型17β-HSD抑制劑等酶抑制劑能夠阻斷涉及最重要的內(nèi)源性雌激素17β-雌二醇的內(nèi)源性生成的生物合成途徑。這些途徑如下所示
由上圖可知，芳香化酶和17β-羥基甾體脫氫酶1是17β-雌二醇內(nèi)源性生成的關(guān)鍵酶。因此，對芳香化酶和17β-羥基甾體脫氫酶1的抑制將自動減少17β-雌二醇的內(nèi)源性生成，其再減弱雌激素誘導(dǎo)的增殖。
上圖還表明，前列腺素PGE2能夠刺激芳香化酶活性。因此，導(dǎo)致由花生四烯酸生成PGE2的環(huán)加氧酶2(COX-2)的抑制將自動降低芳香化酶活性，從而相應(yīng)地減少雌激素誘導(dǎo)的增殖。
因此可以推斷，芳香化酶抑制劑、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑以及1型17β-羥基甾體脫氫酶抑制劑適用于減弱雌激素的內(nèi)源性生成，尤其是17β-雌二醇的內(nèi)源性生成。
芳香化酶是P-450酶中的一種。在始于膽固醇側(cè)鏈的斷裂的甾體生物合成途徑中，芳香化酶催化甾體骨架A環(huán)的芳構(gòu)化。更準(zhǔn)確地說芳香化酶催化雄烯二酮轉(zhuǎn)化為雌酮，以及睪酮轉(zhuǎn)化為雌二醇。因此，芳香化酶是其后雌激素生物合成的限速酶。
芳香化酶抑制劑是能夠抑制芳香化酶催化活性的物質(zhì)。就本發(fā)明而言，芳香化酶抑制劑是可以非毒性劑量用于動物尤其是人，從而抑制雌激素的生物合成。目前，許多芳香化酶抑制劑可以使用，包括氨魯米特、阿那曲唑、依西美坦、伏氯唑、來曲唑、法倔唑、羅谷亞胺、阿他美坦、福美坦、利阿唑、YM511、TZA-2237、CGS 16949A以及MEN 11066。芳香化酶抑制劑主要應(yīng)用于治療乳腺癌的方法中。芳香化酶抑制劑還被建議用于子宮內(nèi)膜異位的治療。Takayama等(Fertility Sterility 1998；69(4)；709-13)成功地使用芳香化酶抑制劑對一例罕見的侵襲性(aggressive)絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜異位復(fù)發(fā)進行治療。所有使用芳香化酶抑制劑的現(xiàn)有治療都建立在口服或肌內(nèi)給藥的基礎(chǔ)上。
環(huán)加氧酶(COX)，也稱作前列腺素G/H合酶，是一種膜結(jié)合酶，負(fù)責(zé)把花生四烯酸氧化為前列腺素，其在20年前首次得到證實。然而，在過去的10年里，對環(huán)加氧酶在不同的病理生理學(xué)條件下所起的作用得以更多地了解。經(jīng)鑒定環(huán)加氧酶具有兩種同工型，稱為COX-1和COX-2。COX-1為組成型表達并且調(diào)節(jié)許多管家功能，如血管止血和胃保護，而COX-2可以被許多介質(zhì)如生長因子、細(xì)胞活素和內(nèi)毒素誘導(dǎo)(例如，在炎癥部位)。
1型17β-羥基甾體脫氫酶抑制劑(1型17β-HSD抑制劑)的實例包括N-丁基、N-甲基、9-[3’，17’β-(二羥基)-1’，3’，5’(10’)-雌三烯-16α基]-7-溴壬酰胺；N-丁基、N-甲基、7-[3’，17’β-二羥基-1’，3’，5’(10’)-雌三烯-6’β基]-7-硫代庚酰胺。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法包括以能夠有效抑制內(nèi)源性雌激素生成的量聯(lián)合給藥芳香化酶抑制劑。芳香化酶抑制劑適用于顯著降低內(nèi)源性雌激素的生成而不產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常與芳香化酶抑制劑以及其他內(nèi)源性雌激素生成抑制劑有關(guān)的一種嚴(yán)重的副作用為低雌激素癥(hypoestrogenism)，其可通過聯(lián)合給藥本發(fā)明的雌激素成分而得以有效地消除。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明方法包括以能夠抑制內(nèi)源性雌激素生成的量聯(lián)合給藥孕激素。孕激素聯(lián)合給藥具有已知孕激素能夠抑制雌激素對子宮內(nèi)膜的增殖作用。與某些SERM不同，盡管本發(fā)明雌激素成分似乎對子宮內(nèi)膜無顯著增殖作用，但仍建議聯(lián)合給藥孕激素以排出任何潛在的風(fēng)險。
可根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的孕激素的實例包括孕酮、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔孕酮、地屈孕酮、屈螺酮、3β-羥基去氧孕烯、3-酮去氧孕烯(依托孕烯)、17-去乙酰諾孕酯、19-去甲孕酮、乙酰氧基孕烯諾龍、烯丙基雌烯三醇、阿那孕酮、氯地孕酮、環(huán)丙孕酮、地美孕酮、去氧孕烯、地諾孕素、dihydrogesterone、地美孕酮、炔孕酮、雙醋炔諾醇、醋酸氟孕酮、gastrinon、孕二烯酮、孕三烯酮、羥甲基孕酮、羥基孕酮、利奈孕酮(＝lynoestrenol)、美屈孕酮、甲羥孕酮、甲地孕酮、美侖孕酮、諾美孕酮、炔諾酮(＝norethisterone)、異炔諾酮、炔諾孕酮(包括d-炔諾孕酮和dl-炔諾孕酮)、諾孕烯酮、normethisterone、孕酮、奎孕醇、(17α)-17-羥基-11-亞甲基-19-去甲孕-4，15-二烯-20-炔-3-酮、替勃龍、曲美孕酮、醋苯阿爾孕酮、nestorone、普美孕酮、17-羥基孕酮酯、19-去甲-17羥基孕酮、17α-乙炔基-睪酮、17α-乙炔基-19-去甲-睪酮、d-17β-乙酰氧基-13β-乙基-17α-乙炔基-gon-4-烯-3-酮肟以及這些化合物的能夠在用于本發(fā)明的方法時在體內(nèi)釋放出這些孕激素的前體。優(yōu)選地，用于本發(fā)明方法中的孕激素選自以下組中孕酮、去氧孕烯、依托孕烯、孕二烯酮、地諾孕素、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔諾酮、屈螺酮、曲美孕酮、地屈孕酮、這些孕激素的前體以及其混合物。
本發(fā)明的另一方面涉及包括以下成分的藥物組合物至少0.01mg選自芳香化酶抑制劑、GnRH類似物、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑、1型17β-羥基甾體脫氫酶(HSD)抑制劑以及它們的組合的雌激素抑制劑；至少0.05mg的如本文前述的雌激素成分；以及藥物學(xué)可接受的賦型劑。在一個優(yōu)選的實施方案中，該雌激素抑制劑選自以下組中芳香化酶抑制劑、COX-2抑制劑、1型17β-羥基甾體脫氫酶(HSD)抑制劑以及它們的組合。最優(yōu)選的雌激素抑制劑誒芳香化酶抑制劑。
在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含與至少0.05mg阿那曲唑口服劑量等效的量的芳香化酶抑制劑。
本發(fā)明還包括含有如上定義的藥物組合物的藥物傳遞系統(tǒng)，所述藥物傳遞系統(tǒng)選自以下組中口服劑量單位、注射液、栓劑、陰道栓、凝膠以及乳膏。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述藥物傳遞系統(tǒng)選自以下組中口服劑量單位、栓劑、陰道栓、凝膠以及乳劑。最優(yōu)選地，該藥物傳遞系統(tǒng)為口服劑量單位。
本發(fā)明的另一方面涉及由一個或多個含有至少0.05g本發(fā)明雌激素成分以及藥物學(xué)可接受的賦型劑的劑量單位、以及一個或多個含有至少0.01mg選自GnRH類似物、芳香化酶抑制劑、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑、1型17β-羥基甾體脫氫酶抑制劑以及其組合的雌激素抑制劑以及藥物學(xué)可接受的賦型劑的劑量單位組成的藥盒。
雌激素成分和雌激素抑制劑可以單獨的劑量單位形式并入本發(fā)明藥盒。然而，有可能并且實際上可以非常方便地將這兩種成分結(jié)合為單一劑量單位。
該藥盒優(yōu)選地包含用于口服給藥、透皮給藥、靜脈給藥、鼻內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、直腸給藥、口腔給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥和/或子宮內(nèi)給藥的劑量單位。更優(yōu)選的劑量單位設(shè)計成用于口服給藥、透皮給藥、靜脈給藥、皮下給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥和/或陰道給藥。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，該藥盒包含可以用于口服給藥、透皮給藥、鼻內(nèi)給藥和/或皮下給藥。最優(yōu)選地，該劑量單位為口服劑量單位。
本發(fā)明的雌激素成分可適用于以任何本領(lǐng)域已知的藥物劑型的形式給藥。該藥物劑型可為固體或半固體劑量形式如片劑、膠囊劑、扁囊劑、小丸劑、丸劑、散劑及顆粒劑，以及液體劑型如溶液劑、乳劑、混懸劑、軟膏、糊劑、乳膏、凝膠、膠凍、泡沫劑。
可用于本發(fā)明的口服劑量單位的實例包括固體或半固體劑量形式，如片劑、膠囊劑、扁囊劑、小丸劑、丸劑、散劑及顆粒劑。術(shù)語“固體或半固體劑量形式”也包括含有液體如油的膠囊，所述雌激素成分溶于或分散于其中。片劑及等效的固體和半固體劑量形式可合適地包含如粘合劑(例如羥基丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、其他纖維素材料以及淀粉)、稀釋劑(例如乳糖和其他糖類、淀粉、磷酸二鈣及纖維素材料)、崩解劑(例如淀粉聚合物劑纖維素材料)以及潤滑劑(例如硬脂酸鹽及滑石粉)。
適宜的透皮傳遞系統(tǒng)包括貼劑、凝膠、膠帶和乳膏，可以含有賦形劑如增溶劑、滲透促進劑(如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇和氨基酸)、親水性聚合物(如聚卡波非和聚乙烯吡咯烷)以及粘合劑和增粘劑(如聚異丁烯、硅氧烷基粘合劑、丙烯酸鹽和聚丁烯)。
透粘膜(特別是直腸和陰道內(nèi)的)傳遞系統(tǒng)包括貼劑、片劑、栓劑、陰道栓劑、凝膠劑和乳膏，也可以含有增溶劑和促進劑(如丙二醇、膽汁鹽和氨基酸)以及其他載體(如聚乙二醇、脂肪酸酯及衍生物、以及親水性聚合物如羥基丙基甲基纖維素和透明質(zhì)酸)。
可注射和可移植的儲庫制劑可以是注射液和移植片的形式。合適的液體載體成分為活性藥物可溶于、混懸于其中生理相容性的稀釋劑。合適的稀釋劑是水，可以加或不加電解質(zhì)鹽或增稠劑。因此，鈣儲庫制劑可以例如是含水的微晶懸浮液。油尤其適宜用作稀釋劑，可以加或不加增溶劑、表面活性劑、助懸劑或乳化劑。適宜的油的實例包括落花生油、橄欖油、花生油、棉籽油、大豆油、蓖麻油和芝麻油。增溶劑的實例包括苯甲醇和苯甲酸鹽。儲庫制劑的優(yōu)點是單次注射或植入能夠滿足一個或數(shù)個月的需求。儲庫作用的持續(xù)時間依賴于雌激素成分的性質(zhì)(優(yōu)選酯前體，因為它們釋放緩慢)、雌激素成分的量以及釋放活性藥物的載體物質(zhì)的類型。通常，該持續(xù)時間在10-30天之間，但是也可為更長或更短的時間。
可用于給藥本發(fā)明雌激素成分的其他藥物傳遞系統(tǒng)包括鼻內(nèi)和肺內(nèi)傳遞系統(tǒng)如噴霧劑和微粒。
通過以下實施例對本發(fā)明做進一步說明實施例實施例1使用已確立的競爭性甾體結(jié)合試驗測定雌四醇(E4)與17α-乙炔基雌二醇(EE)和17β-雌二醇(E2)相比對人體α-和β-型雌激素受體(ER)的相對親和力。
所采用的方法根據(jù)科學(xué)文獻修改而成，Osbourn等(1993，Biochemistry，32，6229-6236)對此有詳細(xì)記載。自轉(zhuǎn)染的Sf9細(xì)胞純化重組人ERα和ERβ蛋白質(zhì)。體外試驗包括ERα或ERβ蛋白以及作為標(biāo)記配體的0.5nM固定濃度的[3H]E2。將重組人ERα和ERβ蛋白溶于結(jié)合緩沖液(10mM Tris-HCL，pH7.5，10％甘油、1mM DTT、1mg/ml BSA)，然后，將完全相同的等分試樣與最終濃度為0.5nM的[3H]E2以及甾體對照(0.4％DMSO)一同溫育，或與含有濃度增加的作為競爭劑的未標(biāo)記甾體配體的等量甾體溫育。在25℃溫育2小時后，去除未結(jié)合配體并測定結(jié)合至ERα或ERβ蛋白的[3H]E2的量。用每一競爭劑濃度下結(jié)合至ERα或ERβ蛋白[3H]E2的量的平均值做抑制曲線。然后用非線性、最小乘方回歸分析確定IC50值。用Cheng和Prusoff方程(Cheng等，1973，Biochem.Pharmacol.，22，3099-3108)，以受試化合物所測得的IC50、試驗中所采用放射配體的濃度、以及放射配體的Kd的歷史值計算抑制常數(shù)(Ki)，經(jīng)確定其對于ERα和ERβ分別為0.2nM和0.13nM。對E4的生物化學(xué)試驗所得的結(jié)果顯示為在三個獨立的試驗中特異性結(jié)合的百分抑制率(表1)。經(jīng)試驗測得的Ki值如在表2中所示，用以對E4、EE以及E2與ERα和ERβ蛋白的結(jié)合親和力進行比較。在與EE和E2、E4進行對比時，證明E4具有獨特的強烈的優(yōu)先(400％)與ERα蛋白結(jié)合的功能(表2)。對比而言，EE和E2甾體配體對ERβ蛋白的Ki值更為顯著(表2)。
表1以E4作為未標(biāo)記的甾體配體、以0.5nM[3H]E2作為標(biāo)記的競爭劑時，與ERα和ERβ蛋白特異性結(jié)合的百分抑制率。下表表示三個獨立試驗的結(jié)果。

nd未檢出表2試驗測定的雌四醇(E4)、17α-乙炔基雌二醇(EE)和17β-雌二醇(E2)與人ERα和ERβ蛋白結(jié)合的抑制常數(shù)(Ki)，以及與ERα蛋白結(jié)合的相對優(yōu)先性。

實施例2對健康絕經(jīng)后志愿者進行單一遞加劑量試驗，以測定口服劑量給藥雌四醇后的生物利用度和消除半衰期。向志愿者(n＝6)隨機分配0.1、1或10mg雌四醇，并在72小時內(nèi)采集血液樣品(每個志愿者18個)。
融化血漿樣品后，用液—液萃取(己烷和二乙醚)制備含有雌四醇的血漿樣品以進行HPLC分析(Perkin Elmer 200)，并用PE Sciex 4000級聯(lián)質(zhì)譜分光計和APCI接口進行串聯(lián)質(zhì)譜光譜測定。對于每一樣品批次，使用6個校準(zhǔn)點記錄校準(zhǔn)曲線。利用線性回歸(相關(guān)系數(shù)＞0.98)計算校準(zhǔn)曲線，并可以之對血漿濃度定量。
當(dāng)將口服雌四醇的劑量從0.1增加至1進而10mg時發(fā)現(xiàn)具有良好的耐受性。AUC值據(jù)證明具有良好的劑量線性，這意味著即使在整個劑量范圍內(nèi)經(jīng)口給藥雌四醇可以較好地被吸收。令人感興趣的是，雌四醇經(jīng)證實具有超過20小時的較長的消除半衰期，即在絕經(jīng)后對象內(nèi)20-50小時。
實施例3在7，12-二甲基-苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)的大鼠腫瘤模型中檢測雌四醇，以評價本發(fā)明雌激素物質(zhì)的抗腫瘤功效。此腫瘤模型最初由Huggins等人在1961年(Nature，19，204-207)開發(fā)并得到廣泛的應(yīng)用，且為被普遍接受的人體內(nèi)抗腫瘤藥物的預(yù)期值模型。DMBA誘導(dǎo)的腫瘤的生長取決于內(nèi)源性生成的雌二醇或外源性給藥的雌激素和促乳素(Sylvester等，1982，Cancer Research，42，4943-4947)。據(jù)顯示，在DMBA模型中，卵巢切除術(shù)(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)、雄性激素(Dauvois等，1989，Breast Cancer Treatment，14，299-306)、他莫西芬(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research andTreatment，47，63-70)、孕激素(Kelly等，1979，Eur.J.Cancer，15，1243-1251；Ruso等，1987，Lab.Invest.57，112-137)以及GnRH類似物(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)都是有效的抗腫瘤治療。
將Sprague-Dawley雌性大鼠(Harlan，荷蘭)84只群居喂養(yǎng)，維持在12小時光/暗環(huán)境中，自由進食Soya Free Diet(SDS英國)以及水。每周對動物進行稱重。在誘導(dǎo)乳腺癌的前一周，對12只動物(43天齡)進行卵巢切除術(shù)以外科手術(shù)去勢。在50天齡時，所有動物給藥單一口服劑量16mg的DMBA以誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。然后，將動物分為7組(n＝12)，并如下給藥安慰劑或治療藥物■第一組 動物口服安慰劑3.0ml/kg/天的載體(20％wt/vol的羥基丙基-β-環(huán)糊精水溶液)進行治療；■第二組 以外科手術(shù)去勢的動物接受安慰劑3.0ml/kg/天的載體進行治療；■第三組 動物以3mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受抗雌激素他莫西芬；■第四組 動物以0.025mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受乙炔基雌二醇(EE)；■第五組 動物以0.125mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受乙炔基雌二醇(EE)；■第六組 動物以0.5mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇(E4)；■第七組 動物以2.5mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇(E4)。
EE和E4的劑量基于先前的研究，這些結(jié)果表明，0.025mg/kg/天的EE和0.5mg/kg/天的E4在抑制骨重吸收的激動性模型中、在對熱潮紅和陰道角質(zhì)化的抑制中等效。類似地，0.125mg/kg/天的EE和2.5mg/kg/天的E4在抑制骨重吸收、熱潮紅和陰道角質(zhì)化的抑制中的體內(nèi)雌激素效力等效。
在8周的治療期內(nèi)，每周測定觸摸得到的腫瘤的形成以及腫瘤的數(shù)目。第八周尸檢時進行最后的測量。

圖1表示尸檢時的腫瘤數(shù)目。
圖1.每一治療組中乳腺腫瘤的數(shù)目(n＝12)第一組 以3.0ml/kg/天的載體進行口服治療；第二組 卵巢切除后的動物，使用3.0ml/kg/天載體的安慰劑進行治療；第三組 口服他莫西芬3mg/kg/天；第四組 口服乙炔基雌二醇(EE)0.025mg/kg/天；第五組 口服EE 0.125mg/kg/天；第六組 口服雌四醇(E4)0.5mg/kg/天；第七組 口服E4 2.5mg/kg/天。
在卵巢切除的動物(第二組)中無腫瘤已經(jīng)清楚地證明，DMBA誘導(dǎo)的乳腺腫瘤的發(fā)生是雌激素依賴性的。正如所預(yù)期，他莫西芬通過抑制該模型中乳腺腫瘤的發(fā)生而表現(xiàn)出抗腫瘤性質(zhì)。令人驚訝的是，與0.125mg/kg/天劑量的EE的作用相比，E4在2.5mg/kg/天的等效激動劑量顯著地抑制乳腺腫瘤的形成。此外，該特定劑量的E4與他莫西芬同樣有效地抑制DMBA誘導(dǎo)的腫瘤的生長。
實施例4在第二次大鼠DMBA試驗中相繼測定雌四醇和他莫西芬以評價其抑制大鼠乳腺腫瘤形成的劑量—反應(yīng)關(guān)系。采用如前述實施例三建立的試驗過程作為預(yù)防試驗，用口服劑量的雌四醇或他莫西芬在腫瘤誘導(dǎo)后的連續(xù)8周中對動物(每組12只動物)進行治療。暴露于DMBA的大鼠隨機分入各治療組，并如下所述接受口服治療■第一組 動物以3.0ml/kg載體的單一每日劑量形式接受安慰劑口服治療(20％wt/vol的羥基丙基-β-環(huán)糊精水溶液)；■第二組 動物以1mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受他莫西芬；■第三組 動物以2mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受他莫西芬；■第四組 動物以3mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受他莫西芬；■第五組 動物以0.5mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇；■第六組 動物以1.0mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇；■第七組 動物以1.5mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇；■第八組 動物以2.0mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇；■第九組 動物以2.5mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇；■第十組 動物以3.0mg/kg的單一每日劑量經(jīng)口接受雌四醇。
在8周的治療期內(nèi)，每周測定可觸摸得到的腫瘤的發(fā)展以及腫瘤的數(shù)目。圖2所示為尸檢時乳腺腫瘤的數(shù)目。如所預(yù)期，他莫昔芬在該預(yù)防試驗中對乳腺腫瘤的發(fā)展顯示出抗增殖作用。在無他莫昔芬組(1，2和3mg/kg/天)中，發(fā)展出可觸摸得到的腫瘤?？诜扑拇贾委?0.5-3.0mg/kg/天)也對乳腺腫瘤的生成顯示出劑量依賴性抑制，進一步證明了其對腫瘤生長的抗增殖作用。并且，如以他莫昔芬所觀察到的，以2.5和3.0mg/kg/天的雌四醇進行治療可以完全保護大鼠不發(fā)展出腫瘤。
圖2.每個治療組中乳腺腫瘤的數(shù)目(n＝12)第一組 以3.0ml/kg/天載體口服治療；第二組 口服1mg/kg/天的他莫西芬；第三組 口服2mg/kg/天的他莫西芬；第四組 口服3mg/kg/天的他莫西芬；第五組 口服0.5mg/kg/天的雌四醇；第六組 口服1.0mg/kg/天的雌四醇；第七組 口服1.5mg/kg/天的雌四醇；第八組 口服2.0mg/kg/天的雌四醇；第九組 口服2.5mg/kg/天的雌四醇；第十組 口服3.0mg/kg/天的雌四醇。
實施例5在改進型(治療設(shè)計)7，12-二甲基-苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)的大鼠腫瘤模型中測定雌四醇，以評價雌四醇較少業(yè)已存在的乳腺腫瘤的數(shù)目和大小的效力。如在實施例3中所述，雌性Sprague-Dawley大鼠在50天齡時被給予16mg的DMBA。允許乳腺腫瘤發(fā)展，直到以DMBA處理8周后。然后將動物分為6組，如下所述每日口服安慰劑、他莫西芬或雌四醇進行治療4周■第一組 動物口服安慰劑3.0ml/kg/天的載體(20％wt/vol的羥基丙基-β-環(huán)糊精水溶液)進行治療；■第二組 將動物以外科手術(shù)去勢并接受3.0ml/kg/天載體進行安慰劑治療；■第三組 動物接受1mg/kg/天的他莫西芬；■第四組 動物接受1.0mg/kg/天的雌四醇；■第五組 動物接受3.0mg/kg/天的雌四醇；■第六組 動物接受10.0mg/kg/天的雌四醇。
先前的發(fā)現(xiàn)顯示雌四醇以及他莫昔芬在預(yù)防型DMBA模型中能夠部分或完全抑制乳腺腫瘤的發(fā)展(見實施例3和實施例4)，在此基礎(chǔ)上對雌四醇和他莫昔芬的口服劑量進行選擇。
在治療期間，每周對可觸摸得到的乳腺腫瘤的發(fā)展或消失以及腫瘤的大小進行測定。尸檢時，計數(shù)、測量腫瘤并計算相對于治療開始時的基線的變化。
在載體治療動物(n＝9)中，腫瘤數(shù)目從治療開始時為16陡增至治療4周后的35。切除卵巢的大鼠(n＝8)顯示，腫瘤數(shù)目從治療開始的15減少到尸檢時的7，減少了53％。盡管其對DMBA誘導(dǎo)腫瘤后馬上對乳腺腫瘤顯示出抑制效力，但在1mg/kg/天劑量下，他莫昔芬在DMBA誘導(dǎo)8周后給藥而未能抑制腫瘤數(shù)目的進一步增加。在他莫昔芬治療的大鼠(n＝8)中，腫瘤數(shù)目從治療開始時的15進一步增加至尸檢時的19。令人感興趣的是，在4周的治療期間，雌四醇劑量依賴性地減少了業(yè)已存在的乳腺腫瘤的數(shù)目。在以1mg/kg/天劑量的雌四醇處理的大鼠中(n＝9)，從治療開始時的16個腫瘤上升至尸檢時的23個，顯示雌四醇或多或少為有效。在以3mg/kg/天雌四醇治療的大鼠中(n＝9)，腫瘤數(shù)目從開始時的16略減少為尸檢時的15.并且，在以10mg/kg/天雌四醇治療的大鼠中(n＝9)，腫瘤數(shù)目從治療開始時的18下降到尸檢時的7。
因此，由對乳腺腫瘤凈消失的分析可知，雌四醇的效力顯然與卵巢切除術(shù)相當(dāng)。在抑制乳腺腫瘤生成有效劑量下，他莫昔芬卻在后期中無力抵抗模型中乳腺腫瘤的進一步發(fā)展和侵蝕。通過將腫瘤數(shù)目表示為從治療開始時的基線的變化百分比(圖3)，可清楚看出雌四醇的強大的治療效力。
圖3.業(yè)已存在的乳腺腫瘤對卵巢切除術(shù)或以他莫昔芬或雌四醇口服治療4周的反應(yīng)■第一組 口服3.0ml/kg/天的載體進行治療；■第二組 以外科手術(shù)去勢的動物以3.0ml/kg/天載體接受安慰劑治療；■第三組 口服1mg/kg/天的他莫西芬；■第四組 口服1mg/kg/天的雌四醇；■第五組 口服3mg/kg/天的雌四醇；
■第六組 口服10mg/kg/天的雌四醇。
類似地，通過將腫瘤大小表示為相對基線的變化百分比，顯示雌四醇治療(如腫瘤切除術(shù))對導(dǎo)致作為凈群體效應(yīng)(net group effect)的腫瘤大小的劑量依賴性顯著減少有效。盡管腫瘤大小的減少見于個別受治療的大鼠，但以他莫昔芬治療動物的凈差額較不利，顯示出腫瘤大小增加的凈群體效應(yīng)。
圖4.每只動物(白條)以及每組動物(黑條)的乳腺腫瘤負(fù)載對卵巢切除術(shù)或口服他莫昔芬或雌四醇治療4周的反應(yīng)■第一組 以3.0ml/kg/天的載體進行口服治療；■第二組 以外科手術(shù)去勢的動物以3.0ml/kg/天載體進行安慰劑治療；■第三組 口服1mg/kg/天的他莫西芬；■第四組 口服1mg/kg/天的雌四醇；■第五組 口服3mg/kg/天的雌四醇；■第六組 口服10.0mg/kg/天的雌四醇；
權(quán)利要求
1.選自以下組中的雌激素成分在制備藥物組合物中的應(yīng)用以下式代表的物質(zhì)， 其中R1、R2、R3、R4分別獨立地為氫原子、羥基或含有1-5個碳原子的烷氧基；在用于本發(fā)明方法中時能夠釋放出前式物質(zhì)的前體；以及一種或多種前述物質(zhì)和/或前體的混合物；該藥物組合物用于治療或預(yù)防哺乳動物中雌激素敏感性腫瘤的方法中，所述方法包括向所述哺乳動物給藥治療有效量的所述雌激素成分。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中R1、R2、R3、R4中不超過3個為氫原子。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中R3為羥基或烷氧基。
4.如權(quán)利要求1-3之一所述的應(yīng)用，其中R1、R2、R3、R4中至少3個為氫原子。
5.如權(quán)利要求1-4之一所述的應(yīng)用，其中可以釋放出所述雌激素物質(zhì)的前體是本發(fā)明雌激素物質(zhì)的衍生物，其中至少一個羥基上的氫原子被以下基團取代含有1-25個碳原子的烴基羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；凰臍溥秽?；四氫吡喃基；或每個殘基含有1-20個糖苷單元的直鏈或支鏈糖苷殘基。
6.如權(quán)利要求1-5之一所述的應(yīng)用，其中該方法包括在為期至少5天、優(yōu)選為30天的期間內(nèi)不間斷地給藥雌激素成分。
7.如權(quán)利要求1-6之一所述的應(yīng)用，其中該方法包括雌激素成分的口服給藥、透皮給藥、靜脈內(nèi)給藥或皮下給藥。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中該方法包括口服給藥。
9.如權(quán)利要求1-8之一所述的應(yīng)用，其中該雌激素成分以每日每千克體重至少1μg、優(yōu)選為每日每千克體重至少5μg的量給藥。
10.如權(quán)利要求1-9之一所述的應(yīng)用，其中該雌激素敏感性腫瘤選自以下組中乳腺癌、子宮癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維瘤、良性前列腺增生以及黑色素瘤。
11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中該雌激素敏感性腫瘤選自乳腺癌和子宮癌。
12.如權(quán)利要求1-11之一所述的應(yīng)用，其中該方法包括以能夠有效地抑制內(nèi)源性雌激素生成的量聯(lián)合給藥一種雌激素抑制劑，所述的雌激素抑制劑選自以下組中孕激素、GnRH類似物、芳香化酶抑制劑、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑、1型17β-羥基甾體脫氫酶抑制劑及其組合。
13.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其中該雌激素抑制劑以能夠有效地將17β-雌二醇血清水平抑制至低于10pg/ml、更優(yōu)選為低于5pg/ml、最優(yōu)選為低于1pg/ml的量聯(lián)合給藥。
14.如權(quán)利要求11或12所述的應(yīng)用，其中該方法包括聯(lián)合給藥孕激素。
15.如權(quán)利要求11或12所述的應(yīng)用，其中該方法包括聯(lián)合給藥芳香化酶抑制劑。
16.一種藥物組合物，其包括a.至少0.01mg選自以下組中的雌激素抑制劑芳香化酶抑制劑、GnRH類似物以及其組合；b.至少0.05mg的選自以下組中的雌激素成分下式所示的物質(zhì) 其中R1、R2、R3、R4分別獨立地為氫原子、羥基或含有1-5個碳原子的烷氧基；在用于本發(fā)明方法中時能夠釋放出前式物質(zhì)的前體；以及一種或多種前述物質(zhì)和/或前體的混合物；以及c.藥學(xué)可接受的賦形劑。
17.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中R1、R2、R3、R4中不超過3個為氫原子。
18.如權(quán)利要求16或17所述的藥物組合物，其中R3為羥基或烷氧基。
19.如權(quán)利要求16-18之一所述的藥物組合物，其中的R1、R2、R3、R4中至少3個為氫原子。
20.如權(quán)利要求16-19之一所述的藥物組合物，其中所述可以釋放出雌激素物質(zhì)的前體是本發(fā)明雌激素物質(zhì)的衍生物，其中至少一個羥基上的氫原子被以下基團取代含有1-25個碳原子的烴基羧酸、磺酸或氨基磺酸的酰基；四氫呋喃基；四氫吡喃基；或每個殘基含有1-20個糖苷單元的直鏈或支鏈糖苷殘基。
21.如權(quán)利要求16-20之一所述的藥物組合物，其中該組合物包括與至少0.05mg口服劑量的阿那曲唑等效的量的芳香化酶抑制劑。
22.含有如權(quán)利要求16-21之一所述的藥物組合物的藥物傳遞系統(tǒng)，所述的藥物傳遞系統(tǒng)選自以下組中口服劑量單位、注射液、栓劑、陰道栓、凝膠劑以及乳膏。
23.一種藥盒，其由一個或多個含有至少0.05g如權(quán)利要求1所述的雌激素成分以及藥物學(xué)可接受的賦型劑的劑量單位、以及一個或多個含有至少0.01mg選自GnRH類似物、芳香化酶抑制劑、環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑、1型17β-羥基甾體脫氫酶抑制劑以及其組合的雌激素抑制劑以及藥物學(xué)可接受的賦型劑的劑量單位組成。
24.如權(quán)利要求23所述的藥盒，其中該劑量單位為口服劑量單位。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防哺乳動物的雌激素敏感性腫瘤的方法，所述的方法包括向所述哺乳動物給藥治療有效量的雌激素成分，其中該雌激素成分選自以下組中下文中式(I)所示的物質(zhì)，其中R
文檔編號A61K45/06GK1681513SQ03821744
公開日2005年10月12日 申請日期2003年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月12日
發(fā)明者赫爾曼·揚·蒂扎曼·科林格本寧克, 埃弗特·約翰內(nèi)斯·本恩舍滕 申請人:潘塔希生物科學(xué)股份有限公司