3,5?(E)? 二芳亞甲基?N?環(huán)丙基哌啶?4?酮類化合物作為Hsp90抑制劑的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開一種3,5?(E)? 二芳亞甲基?N?環(huán)丙基哌啶?4?酮類化合物作為Hsp90抑制劑的應用。如下所述的3,5?(E)? 二芳亞甲基?N?環(huán)丙基哌啶?4?酮類化合物1?4：及其組合物用于制備治療或預防由Hsp90介導的疾病的藥物的用途。本發(fā)明所述的用途，其中由Hsp90介導的疾病是白血病、結腸癌、肝癌、淋巴瘤、鼻咽癌或乳腺癌。本發(fā)明所述化合物具有強效的Hsp90抑制活性，體外化合物1?4對六類腫瘤細胞的抑制活性比2F強2?20倍。在體內(nèi)也表現(xiàn)出較強的裸鼠移植瘤增殖抑制活性，可用于制備治療白血病、結腸癌、肝癌、淋巴瘤、鼻咽癌、乳腺癌的藥物。
【專利說明】
3，5- (ο -二芳亞甲基-W-環(huán)丙基脈暗-4-酬類化合物作為 Hsp90抑制劑的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及藥物化學領域，具體設及一類具有化P90抑制活性的3,5-巧)-二亞節(jié) 基-N-環(huán)丙基贓晚-4-酬化合物及其在制備治療抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 熱休克蛋白90(hsp90)是ATP依賴性的分子伴侶，在腫瘤細胞中高表達，能穩(wěn)定 和活化許多癌癥相關激酶和轉錄因子。Hsp90參與客戶蛋白（client protein)激活并促進 其成熟，維持細胞多種蛋白的構象和功能，與細胞的增殖、調(diào)亡、癌變和腫瘤發(fā)展密切相 關，已成為抗腫瘤藥物的重要祀點之一。抑制hsp90就能抑制腫瘤生長轉移信號通路中的 多個祀點，使很多不同的促進癌癥生長的客戶蛋白同時失去功能。Hsp90抑制劑單一或和化 療藥聯(lián)用，能降低傳統(tǒng)祀向藥物單一抑制某一通路時腫瘤細胞易產(chǎn)生耐藥性的風險。1999 年W來諾華、輝瑞、Astex等制藥公司分別對12個hsp90抑制劑進行臨床研究，其中間苯二酪 類的5了4-9090/6日1161639化（57111日，虹期）、肥￥-41]￥922(齡￥日的13，11期）、41'-13387^31糾， Π 期)具有活性強（比格爾德霉素強10倍）、耐受性好、可口服的優(yōu)點。但至今抑A還沒有批準 一個hsp90抑制劑上市。開發(fā)安全低毒、結構新穎、容易合成、選擇性好的小分子化p90抑制 劑具有重要的科學意義和應用前景。
[0003] 發(fā)明人于2010年申請了專利3,5-(E)-二亞芐基-N-環(huán)丙基-贓晚-4-酬及其在制備 治療抗腫瘤藥物中的應用，該發(fā)明已于2013年獲授權，專利號：ZL201010299621.6。但是由 于該類化合物體內(nèi)活性不強和祀點不清，限制其臨床應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是W該專利為基礎，對該類化合物進行了進一步的結構優(yōu)化，引入 芳雜環(huán)，得到一類體內(nèi)外活性較該專利中3,5-化)-二（2-氣亞芐基)-N-環(huán)丙基贓晚-4-酬 (原專利中的化合物2,本專利中做為對照化合物，代號為2F)都有明顯提高化合物，結構式 如下，經(jīng)SCIfinder檢索為新化合物。
[0005] 本發(fā)明的目的是運樣實現(xiàn)的，本發(fā)明如下所述的3,5-(0-二芳亞甲基-W-環(huán)丙基 贓晚-4-酬類化合物1-4:
[0006] 本發(fā)明所述的3,5-(0-二芳亞甲基-W-環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物1-4及其組合 物用于制備治療或預防由Hsp90介導的疾病的藥物的用途。
[0007] 本發(fā)明所述的用途，其中由化p90介導的疾病是白血病、結腸癌、肝癌、淋己瘤、鼻 咽癌或乳腺癌。
[0008] 本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明所述化合物具有強效的化p90抑制活性，體外化合物 1-4對六類腫瘤細胞的抑制活性比2F強2-20倍。在體內(nèi)也表現(xiàn)出較強的裸鼠移植瘤增殖抑 制活性，可用于制備治療白血病、結腸癌、肝癌、淋己瘤、鼻咽癌、乳腺癌的藥物。
【附圖說明】
[0009] 圖1為STA9090，2F，化合物1，2，3，4對人乳腺癌細胞MDA-MB-453中的Hsp70及其客 戶蛋白化r2，AKT表達的影響圖。在圖1中，顯示化合物作用MDA-MB-453 24h后相關蛋白表達 的western blot分析結果。圖1表明化合物1，2,3,4在扣Μ濃度下，Hsp90的客戶蛋白化r2 和AKT在24h的作用時間下，呈現(xiàn)明顯降解趨勢，而化p70的表達量明顯上調(diào)，即該類化合物 對化p90的客戶蛋白有降解抑制作用，而且明顯比同一濃度的對照化合物2F強。運一方式與 陽性對照的Hsp90抑制劑STA9090(STA，0.05μΜ)-致。DMS0(C)為陰性對照。
[0010]圖2是化合物1對小鼠 Η22腹水型肝癌移植瘤的抑制作用圖?；衔?對小鼠 Η22腹 水型皮下移植瘤的抑制作用明顯，50mg/kg/d灌胃的抑制率為67.5%，50mg/kg/d腹腔注射 的抑制率為59.5%，lOOmg/kg/d灌胃的抑制率為58.4%，與環(huán)憐酷胺的抑制率69.9%很接 近。
【具體實施方式】
[0011]下面結合附圖和實施例對本發(fā)明的進行詳細的描述。實施例5,6和表一中的化合 物5,6的合成和IC50值僅為說明本發(fā)明的創(chuàng)新性，不包含在專利保護范圍內(nèi)。
[001^ 實施例1 3，5-(0-二(2-化晚)亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬的制備(化合物1) jV-環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol),氨氧化鋼20 mg(0.5 mmol),無水乙醇20血， 混合后室溫攬拌，待澄清后加入2-化晚甲醒535mg(5 mmol )，室溫下反應化~24h，固體析出。 抽濾，濾餅用無水乙醇洗涂，過硅膠柱，洗脫劑石油酸：乙酸乙醋（3:1)梯度洗脫，得淡黃色 固體348mg，產(chǎn)率 47%，烙點 137-138°C。
[OOU] 1h NMR (400 MHz, Chloroform-c/) δ 8.76 (d, / = 1.8 Hz, 2H), 7.75-7.70 (m, 2H), 7.61 (s, 2H), 7.47 (d, /= 7.8 Hz, 2H), 7.24-7.21 (m, 2H), 4.38 (s, 4H), 2.06-2.00 (m, IH), 0.56-0.53(m, 2H), 0.48-0.46 (m, 2H). MS[M+扣+318.2 實施例2 3，5-(0-二(3-化晚)亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬的制備(化合物2)
本品由前述的環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol)和3-化晚甲醒535mg巧mmol)按 照實施例1的方法合成，得淡黃色固體79mg，產(chǎn)率9%，烙點158-160° C。
[0014] 1h 醒R (400 MHz, Chloroform-c/) δ 8.70 (S, 2H), 8.60 (d, / =1.6 Hz, 2H), 7.74-7.71(m, 4H), 7.39 (d, /= 8.0, 2H), 3.98 (s, 4H), 1.97-1.93 (m, IH), 0.53-0.48 (m, 2H), 0.40 - 0.36 (m, 2H). MS[M+扣+318.2 實施例3 3，5-(0-二(4-化晚)亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬的制備(化合物3)
本品由前述的環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol)和4-化晚甲醒535mg巧mmol)按 照實施例1的方法合成，得淡黃色固體74mg，產(chǎn)率8%，烙點139-140° C。
[001 引 1h 醒R (400 MHz, Chloroform-c/) δ 8.76 - 8.63 (m, 2H)，7.65 (d, / = 2.0 Hz, IH), 7.32 (d, /= 5.6 Hz, OH), 7.30 - 7.25 (m, 2H), 3.96 (s, 4H), 1.95 -1.93(m, IH), 0.54-0.50 (m, 2H), 0.41 - 0.37(m, 2H). MS[M+H]+318.2 實施例4 3,5-(0-二(3,4,5-Ξ甲氧基)苯亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬的制備(化合物4)
本品由前述的環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol)和3,4,5-Ξ甲氧基苯甲醒981mg (5 mmol)按照實施例1的方法合成，得淡黃色固體177mg，產(chǎn)率13%，烙點145-147° C。
[0016] 1h 醒R (400 MHz, Chloroform-c/) δ 7.73 (S, 2H), 6.67 (s，4H), 4.02 (S, 4H),3.91(s, 1細），1.98-1.96 0.52 - 0.50 (m, 2H), 0.44-0.43 (m, 2H).MS
[]?+扣+496.3 實施例5
本品由前述的環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol)和2-R比咯甲醒475mg巧mmol)按 照實施例1的方法合成，得淡黃色固體350mg，產(chǎn)率43%，烙點大于250°C。
[0017] iHNMR(400 MHz，DMS0-c/6)5ll.60 - 11.30 (m，2H)，7.54(s，2H)，7.11- 7.10 (m, 2H), 6.44-6.42 (m, 2H), 6.31-6.29 (m, 2H), 3.83 (s, 4H), 2.04-2.01 (m, IH), 0.56-0.52 (m, 2H), 0.38 - 0.34 (m, 2H). MS[M+扣+294.1 實施例6
本品由前述的環(huán)丙基-4-贓晚酬348 mg(2.5 mmol)和2-咪挫甲醒480mg巧mmol)按 照實施例1的方法合成，得淡黃色固體160mg，產(chǎn)率19%，烙點大于250° C。
[001 引 1h NMR (400 MHz, DMSO-油）δ 12.65 (S, 2H), 7.39-7.36(m，4H), 7.28 (S, IH), 4.25 (s, 4H), 1.98-1.95(m, 2H), 0.56-0.52 (m, 2H), 0.39 - 0.33 (m, 2H) .MS[]\Wl]+296.2 實施例7 MTT法檢測3,5-(0-二芳亞甲基-W-環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物對細胞增殖的抑制作 用實驗 人原髓細胞白血病細胞化60，人結腸癌細胞SW620，人肝癌細胞化pG2，急性B系淋己瘤 細胞Ra j i，鼻咽癌細胞C肥2、MDA-MB-453將腫瘤細胞（HL60、SW620、H邱G2、C肥2、MDA-MB- 453均為8000個/孔，Raji為20000個/孔)接入96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)過夜，實驗組分別加入不同濃 度的化合物，見表2(DMS0為空白對照)和對照化合物，對照組不加藥。另設空白組（只加培養(yǎng) 基，無細胞），每組設Ξ個平行孔，37化培養(yǎng)4她，加入5mg/ml的MTT溶液2化1/孔，繼續(xù)培養(yǎng) 地后，離屯、棄上清，加入DMS0 15化1，振蕩lOmin，充分裂解后，用全自動酶標儀（美國BI0- RAD公司生產(chǎn))檢巧化70nm處的吸光度(0D570)值。根據(jù)吸光度計算細胞生長抑制率。
[0019] 細胞生長抑制率=[0D對照一0D實驗]/[ 0D對照一0D空白]X100〇/〇 W同一藥物的不同濃度對腫瘤細胞生長抑制率作圖，可得到劑量反應曲線，根據(jù)線性 回歸方程求出該藥物的半數(shù)抑制濃度IC50,即細胞存活率減少50%時的藥物濃度。
[0020] MTT法結果表明（見表1，表1中的1 -4分別指化合物1 -4)，本發(fā)明的3，5-(0-二芳 亞甲基-W-環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物體外均能顯著抑制腫瘤細胞的增殖，化合物1-4對六 類腫瘤細胞的抑制活性比對照化合物強2-20倍。而化合物5和6活性很差，說明本發(fā)明保護 的化合物1-4不是本領域技術人員通過簡單的基團替換能得到，并可W預期其效果的。
[0021] 表1 3,5-(幻-二芳亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物抑制腫瘤細胞增殖結果
*空白處為該化合物的IC50值大于100μΜ 實施例8 化合物1，2，3，4對Hsp90及其客戶蛋白的影響(Western-blot實驗） 用扣Μ的化合物1，2,3,4處理人乳腺癌MDA-MB-453細胞24h，0.05yM的STA9090為陽性 對照，等量的DMSO作為陰性對照。吸去培養(yǎng)液，收集MDA-MB-453細胞，PBS漂洗2次，吸干水 分，加入適量細胞裂解液，4°C冰上裂解30min，期間反復震蕩3-4次，4°C 12000巧m離屯、 15min。取少量上清，用Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific, USA)測定 蛋白質(zhì)濃度，其余上清加入4XSDS Loading buffer,煮沸5min，置于-20°C保存。調(diào)整蛋白 量一致，進行SDS-PAGE電泳。再轉膜到PVDF膜上。一抗室溫封閉Ih，TBST洗涂3次，每次 5min，二抗室溫解育化，TBST洗涂后用SuperSignal Wes巧ico (Thermo Scientific, USA) 顯影劑顯影觀察。圖1表明化合物1，2，3，4，在扣M濃度下，Hsp90的客戶蛋白化r2在24h的作 用時間下，呈現(xiàn)明顯降解趨勢，而化p70的表達量明顯上調(diào)，即該類化合物對化p90的客戶蛋 白有降解抑制作用，而且明顯比同一濃度的化合物強。運一方式與陽性對照的化p90抑制劑 STA9090(STA，0.05μΜ)-致。DMS0(D)為陰性對照。
[0022] 實施例9 化合物1對小鼠 Η22腹水型肝癌移植瘤的增殖抑制活性測試實驗 按常規(guī)方法接種腫瘤細胞:取腹腔傳代6~8 d生長良好的乳白色腹水，用PBS洗1-2次， 再用PBS稀釋至1.5 X 107個/mL，W0.2血接種于小鼠右蔽皮下，接種后動物隨機分組。實驗 分為5組，每組8只，陰性對照組（給予等量溶劑）、環(huán)憐酷胺30mg/kg腹腔注射組、化合物1 50mg/kg灌胃組、化合物1 50mg/kg腹腔注射組、化合物1 lOOmg/kg灌胃組。于接種24 h后灌 胃給藥，每天一次(環(huán)憐酷胺隔日一次），連續(xù)7d。于第8d稱體重，頸椎脫白處死動物。剝離腫 瘤組織，用濾紙吸干后稱重。計算腫瘤抑制率。
[0023] 抑瘤率=(陰性對照組瘤重-實驗組瘤重/陰性對照組瘤重）X 100% 化合物1對小鼠 H22腹水型皮下移植瘤的抑制作用明顯，50mg/kg/d灌胃的抑制率為 67.5 %，50mg/kg/d腹腔注射的抑制率為59.5 %，lOOmg/kg/d灌胃的抑制率為58.4%，差別 具有顯著性(P<0.01)(結果見表2、圖2)。
[0024] 表2化合物2對小鼠肥2腹水型肝癌移植瘤的抑制作用
[0025] W上所述僅為本發(fā)明的典型實施例而已，并不用W限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)所作的任何修改，等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權項】
1. 一種如下所述的3,5-(0-二芳亞甲基-Λ^環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物1-4:2. 權利要求1所述的3,5-(0-二芳亞甲基-W-環(huán)丙基贓晚-4-酬類化合物1-4及含有有 效量的權利要求1所述的組合物用于制備治療或預防由Hsp90介導的疾病的藥物的用途。3. 根據(jù)權利要求2所述的用途，其特征在于：其中由Hsp90介導的疾病是白血病、結腸 癌、肝癌、淋己瘤、鼻咽癌或乳腺癌。
【文檔編號】C07D213/68GK106083704SQ201610395418
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月6日 公開號201610395418.6, CN 106083704 A, CN 106083704A, CN 201610395418, CN-A-106083704, CN106083704 A, CN106083704A, CN201610395418, CN201610395418.6
【發(fā)明人】劉洋, 許建華, 葉敏, 吳麗賢, 高劍濱, 林巧發(fā), 朱麗萍, 何佳敏
【申請人】福建醫(yī)科大學