用于抑制shp2活性的1-噠嗪-/三嗪-3-基-哌(-嗪)/啶/吡咯烷衍生物及其組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及式I化合物，在式I中，m、p、Y1、Y2、Y3、R1、R2a、R2b、R3a、R3b、R4a、R4b、R5a和R5b如權利要求中所定義。這些化合物能夠抑制SHP2活性。本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明化合物的方法、包含此類化合物的藥物制劑以及使用此類化合物和組合物治療與SHP2活性異常有關的疾病或病癥的方法。
【專利說明】
用于抑制SHP2活性的1-噠嗪-/三嗪-3-基-哌(-嗪)/啶/吡咯 烷衍生物及其組合物
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及能夠抑制SHP2活性的化合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物的制備方 法、含有此類化合物的藥物制劑以及采用此類化合物和組合物治療與SHP2活性異常有關的 疾病或病癥的方法。
【背景技術】
[0002] Src同源域-2磷酸酶(SHP2)是由PTPN11基因編碼的非受體蛋白酪氨酸磷酸酶，其 有助于多種細胞功能，包括增殖、分化、細胞周期維護和迀移。SHP2與通過Ras-有絲分裂原-活化的蛋白激酶、JAK-STAT或磷酸肌醇3-激酶AKT通路的信號有關。
[0003] SHP2具有兩個N-末端Src同源2結構域(N-SH2和C-SH2)、催化結構域(PTP)和C-末 端。這兩個SH2結構域控制SHP2的亞細胞定位和功能調節(jié)。該分子以非活化的、自我抑制的 通過包含N-SH2和PTP結構域殘基的結合網狀結構而穩(wěn)定的構象存在。通過例如細胞因子或 生長因子的刺激使得催化位點暴露，導致SHP2的酶的活化。
[0004] PTPN11基因的突變以及隨后SHP2的突變已經在多種人類疾病中獲得識別，例如努 南綜合征(Noonan Syndrome)、豹皮綜合征(Leopard Syndrome)、幼年性骨髓單核細胞白血 病、成神經細胞瘤、黑素瘤、急性骨髓性白血病以及乳腺癌、肺癌和結腸癌。因此，對于治療 各種疾病的新療法的發(fā)展而言，SHP2代表可具有高吸引力的靶點。本發(fā)明化合物滿足了用 于抑制SHP2活性的小分子的需要。

【發(fā)明內容】

[0005] 發(fā)明概述
[0006] -方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0008] 其中：m選自0、1和2; p選自0和1; Υι選自CH和N; Y2選自CR6和N; Y3選自NH和CR7R8; Ri 選自C6-1Q芳基、C3-8環(huán)烷基、C 3-8環(huán)烯基和含有1 一4個選自N、0和S的雜原子的5 - 9元雜芳基； 其中Ri的芳基或雜芳基被1 一 5個R9基團取代，該基團獨立選自鹵素、氨基、羥基、N3XP4烷 基、羥基_取代的 _Cl-4烷基、鹵素_取代的_Cl-4烷基、氛基_取代的 _Cl-4烷基、_C ( 0 ) ORlQ和-NHC (0)R1Q ;R1Q選自氫、苯基和萘基;其中R1Q的苯基是未取代的或者被甲氧基取代;R2a和R 2b獨立 選自氫、&-4烷基、4烷氧基、氨基、羥基、C3-8環(huán)烷基和&―4烷基-氨基;R3^R3b獨立選自氫、 鹵素、幾基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氣基、羥基、C3-8環(huán)烷基和Cl-4烷基 -氣基;R4a和R4b獨立選自 氫、鹵素、羰基、Ci-4烷基、Ci-4烷氧基、氨基、羥基、C3-8環(huán)烷基和(^-4烷基-氨基;R54PR5b獨立 選自氫、羰基、CP4烷基、CP4烷氧基、氨基、羥基、C3-8環(huán)烷基和(^-4烷基-氨基;其中選自R 2a、 R3a、R44PR7的任意兩個基團可以形成5-6元不飽和的、部分不飽和的環(huán)或飽和的環(huán)，其任選 含有環(huán)氮;R 6選自氫、鹵素、氰基、&-4烷基、&-4烷氧基、氨基-羰基、鹵素-取代的Ci-4烷基、鹵 素-取代的Ci-4烷氧基、羥基-取代的4烷基、氨基-取代的4烷基、-s (0)卜2R6a、-c (S) R6a、-C (Ο) NR6aR6b、-c (NH) NR6aR6b 和 _NR6aC (Ο) R6b;其中 R64PR6b 獨立選自氫和 Ci-4 烷基；R7選自氫、 4烷基、C3-6環(huán)烷基、C6-1Q芳基和含有1 -4個選自N、0和S的雜原子的5 -9元雜芳基;R7和R4a 可以與它們所連接的碳原子一起形成被氨基取代的稠合的吡咯烷基或環(huán)丙基基團（例如下 文中實施例19) ;R8選自氨基、氨基-甲基和甲基-氨基。
[0009]第二方面，本發(fā)明提供了藥用組合物，其含有式I化合物或其N-氧化物衍生物、互 變異構體、單獨的異構體及其異構體混合物;或其藥學上可接受的鹽，以及與之混合的一或 多種適當的賦形劑。
[0010]第三方面，本發(fā)明提供了在動物中治療疾病的方法，其中SHP2活性的調節(jié)可以預 防、抑制或改善該疾病的病理和/或癥候，該方法包括給予所述動物治療有效量的式I化合 物或其N-氧化物衍生物、單獨的異構體及其異構體混合物或其藥學上可接受的鹽。
[0011] 第四方面，本發(fā)明提供了在動物中治療疾病的方法，其中SHP2活性的調節(jié)可以預 防、抑制或改善該疾病的病理和/或癥候，該方法包括同時或順序給予所述動物治療有效量 的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單獨的異構體及其異構體混合物或其藥學上可接受的 鹽和與之組合的抗癌治療藥物。
[0012] 第五方面，本發(fā)明提供了式I化合物在生產藥物中的用途，所述藥物用于在動物中 治療其中SHP2活性有助于疾病的病理和/或癥候的疾病。
[0013] 第六方面，本發(fā)明提供了式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、保護的衍 生物、單獨的異構體及其異構體化合物以及其藥學上可接受的鹽的制備方法。
[0014] 定義
[0015] 除非另有說明，在上下文中使用的通用術語優(yōu)選在本公開內容中具有下列意義， 而更通用的術語無論在何處使用，均可以彼此獨立被更明確的定義替代，或者因此可以更 詳細地定義本發(fā)明的實施方案：
[0016] "烷基"是指具有至多20個碳原子的完全飽和的支鏈或非支鏈烴基。除非另有規(guī) 定，烷基是指具有1 一 7個碳原子的烴基(&-7烷基)或1 一4個碳原子的烴基(&-4烷基）。烷基 的代表性示例包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、異-丙基、正-丁基、仲-丁基、異-丁基、叔_ 丁基、正-戊基、異戊基、新戊基、正-己基、3-甲基己基、2,2_二甲基戊基、2,3_二甲基戊基、 正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。取代的烷基是包含一或多個(例如1、2或3個)取代 基的烷基，所述取代基選自鹵素、羥基或烷氧基。鹵素-取代的-烷基和鹵素-取代的-烷氧基 可以是直鏈的或支鏈的，包括甲氧基、乙氧基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、二氟甲氧基、 三氟甲氧基等。
[0017] "芳基"是指含有6 -10個環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合的雙環(huán)芳族環(huán)集合。例如，芳基可 以是苯基或萘基，優(yōu)選苯基。"亞芳基"是指衍生自芳基的二價基團。
[0018] "雜芳基"如上述芳基所定義，其中一或多個環(huán)成員為雜原子。例如C5-1Q雜芳基最 少含有5個為碳原子的成員，但是這些碳原子可以被雜原子替代。因此，C 5-1Q雜芳基包括吡 啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3] 間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑 基、吡唑基、噻吩基等。
[0019] "環(huán)烷基"是指飽和的或部分不飽和的單環(huán)、稠合雙環(huán)或橋連的多環(huán)環(huán)系，其含有 指定的環(huán)原子數目。例如，C 3-1Q環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)己烯基等。
[0020] "雜環(huán)烷基"是指本申請中定義的環(huán)烷基，前提是一或多個環(huán)碳被選自下列的基團 代替：-0-、4=、_冊-、-(：(0)-、-3-、-3(0)-或-3(0) 2-，其中1?為氫、(：1-4烷基或氮保護基團。 例如，本申請中使用的描述本發(fā)明化合物的C3-8雜環(huán)烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶基酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5 ]癸-8-基、硫代嗎啉代、磺基 (811]^3]10)嗎啉代、磺?；?8111；1^0110)嗎啉代等。
[0021] "鹵素"（或鹵代)優(yōu)選代表氯或氟，但是也可以是溴或碘。
[0022] "SHP2" 是指 Src 同源域-2 磷酸酶，也稱為 SH-PTP2、SH-PTP3、Syp、PTP1D、PTP2C、 SAP-2或PTPN11。
[0023] 癌癥攜帶的 "PTPN11 突變"包括但不限于:N58Y;D61Y、V;E69K;A72V、T、D;E76G、Q、K (ALL);G60A;D61Y;E69V;F71K;A72V;T73I ;E76G、K;R289G;G503V(AML);G60R、D61Y、V、N; Y62D;E69K;A72T、V;T73I;E76K、V、G、A、Q ;E139D;G503A、R;Q506P(JMML);G60V ;D61V;E69K; F71L;A72V;E76A(MDS) ;Y63C(CMML) ;Y62C;E69K;T507K(成神經細胞瘤）；V46L;N58S;E76V (肺癌）；R138Q(黑素瘤）；E76G(結腸癌）。
[0024] 式I化合物可以具有不同的異構體形式。例如，任何不對稱碳原子均可以存在 (R)-、（S)_或(R，S)_構型，優(yōu)選(R)-或（S)-構型。雙鍵上的取代基或者特別是環(huán)上的取代基 可以存在順_(=Z_)或反（=E_)形式。因此化合物可以以異構體的混合物存在，或者優(yōu)選以 純異構體形式存在，優(yōu)選為純非對映異構體或純對映體。
[0025] 當采用復數形式（例如化合物、鹽）時，其包括單數形式（例如單個化合物、單個 鹽）。"一個化合物"不排除（例如在藥物制劑中）存在一個以上的式I化合物（或其鹽），"一 個"僅表示不定冠詞。因此"一個"可以優(yōu)選理解為"一或多個"，或者較少優(yōu)選"一個"。
[0026]無論何時提及式I化合物時，其還應當包括該化合物和/或其互變異構體的N-氧化 物。
[0027] 術語"和/或其N-氧化物、其互變異構體和/或其(優(yōu)選藥學上可接受的）鹽"特別是 指式I化合物可以如此存在，或者以與其N-氧化物的混合物存在，為互變異構體(例如由于 酮-烯醇、內酰胺-內酰亞胺、酰胺-亞胺酸或烯胺-亞胺互變異構現象)或者為(例如等價反 應引起的）與其互變異構體的混合物，或者為式I化合物的鹽和/或任何這些形式或者兩種 或多種此類形式的混合物。
[0028] 對于下列化合物而言，與吡嗪環(huán)連接的NH2基團對于效能而言是非常關鍵的。晶體 結構分析顯示了 NH2基團與SHP2殘基E250的骨架羰基的分子內相互作用：
[0031]本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽的所有適當的同位素變體。本 發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽的同位素變體被定義為其中至少一個原子被具有相同 原子數但是原子質量不同于自然界中常見原子質量的原子所代替的化合物或其鹽?？梢該?入本發(fā)明化合物和其藥學上可接受的鹽的同位素的示例包括但不限于氫、碳、氮和氧的同 位素，例如咕、 3!1、11(：、13(：、14(：、14、 170、180、353、1中、36(：1和 1231。本發(fā)明化合物及其藥學上可接 受的鹽的某些同位素變體(例如，那些其中摻入放射性同位素例如3H或 14C的變體)可以用于 藥物和/或底物組織分布研究。在具體的示例中，可以使用3H和 14C同位素，因其易于制備和 檢測。在其它示例中，由于具有較好的代謝穩(wěn)定性，采用同位素例如2H的取代可以提供某些 治療優(yōu)勢，例如體內半衰期延長或者劑量需求降低。本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽 的同位素變體通?？梢酝ㄟ^常規(guī)工藝采用適當試劑的適當同位素變體而制備。例如，化合 物可以以下面所示的氘化形式存在：
[0033]優(yōu)選實施方案的說明
[0034]本發(fā)明涉及能夠抑制SHP2活性的化合物。在本發(fā)明的一個方面，式I化合物為式la 化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0036] 其中:m選自0和l;n選自1、2、3、4和5;Yi選自CH和Ν;Υ2選自CR 6和N;R4a選自氫、甲基 和羥基;R6選自氫、鹵素、氰基、Ch烷基、Ch烷氧基、氨基-羰基、鹵素-取代的CP4烷基、鹵 素-取代的Ci-4烷氧基、羥基-取代的4烷基、氨基-取代的4烷基、-S (0)卜2R6a、-C (S) R6a、-C (0) NR6aR6b、_C (NH) NR6aR6b和 _NR6aC (0) R6b;其中 R6JPR6b獨立選自氫和4 烷基;R7選自氫、甲 基、苯基、啦嗪基和吡啶基;Rt和R4a可以與它們所連接的碳原子一起形成被氨基取代的環(huán)丙 基;Rs選自氨基和甲基-氨基;R 9選自鹵素、氨基、羥基、N3、Q-4烷基、鹵素-取代的-Q-4烷基、 &一4烷氧基、-C(0)0R 1Q和-NHC(0)R1Q;R1Q選自氫、苯基和萘基;其中所述R1Q的苯基是未取代的 或者被甲氧基取代。
[0037] 本發(fā)明的另一方面為選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0038]

[0040]
[0041] 另一方面，本發(fā)明的化合物為式lb化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0043] 其中：Υ!選自CH和N; Y2選自CR6和N;心選自噻吩-2-基和1H-吲哚-7-基；其中所述噻 吩-2-基可以被選自甲基和氯代的基團取代;R 6選自氫、鹵素和甲基;R8選自氨基和甲基-氨 基。
[0044] 本發(fā)明的另一方面為選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0045]
[0046] 另一方面，本發(fā)明化合物為式Ic化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0048] 其中：η選自1、2、3、4和5; Yi選自CH和N; Y2選自CR6和N; R3a選自4烷基、4烷氧基、 氣基、羥基、C3-8環(huán)烷基和Cl-4烷基-氣基;R4a選自氣、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氣基、羥基、C3-8環(huán) 烷基和Cl-4烷基-氨基;R6選自氫、鹵素、氛基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氨基-幾基、鹵素-取代的 Cl-4烷基、鹵素-取代的Cl-4烷氧基、羥基-取代的Cl-4烷基、氨基-取代的Cl-4烷基、-3(0)1_ 2R 6a、-c (S) R6a、-C (0) NR6aR6b、-c (NH) NR6aR6b 和-NR6aC (0) R6b;其中 R64PR6b 獨立選自氫和Ci-4 烷 基;R1Q選自氫、苯基和萘基;其中所述R13的苯基是未取代的或者被甲氧基取代。
[0049] 本發(fā)明的另一方面為選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0050]
[0051] 本發(fā)明的另一方面為選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0052]
[0053] 本發(fā)明的另一方面為選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0054]
[0055]
[0056] 藥理和用途
[0057] Src同源域-2磷酸酶(SHP2)為PTPN11基因編碼的蛋白酪氨酸磷酸酶，其有助于多 種細胞功能，包括增殖、分化、細胞周期維護和迀移。SHP2與通過Ras-有絲分裂原-活化的蛋 白激酶、JAK-STAT或磷酸肌醇3-激酶AKT通路的信號有關。SHP2通過受體酪氨酸激酶(例如 ErbBl、ErbB2 和 c-Met)介導了 Erkl 和 Erk2(Erkl/2、Erk)MAP 激酶的激活。
[0058] SHP2具有兩個N-末端Src同源2結構域(N-SH2和C-SH2)、催化結構域(PTP)和C-末 端尾部。這兩個SH2結構域控制SHP2的亞細胞定位和功能調節(jié)。該分子以非活化的結像存 在，其通過包含源自N-SH2和PTP結構域的殘基的結合網狀結構而抑制其自身的活性。響應 于生長因子刺激，SHP2通過其SH2結構域與船塢蛋白例如Gabl和Gab2上的特殊的酪氨酸-磷 酸化位點結合。這誘發(fā)了構象的改變，從而導致SHP2激活。
[0059] PTPN11的突變已經在多種人類疾病中獲得識別，例如努南綜合征、豹皮綜合征、幼 年性骨髓單核細胞白血病、成神經細胞瘤、黑素瘤、急性骨髓性白血病以及乳腺癌、肺癌和 結腸癌。SHP2是各種受體酪氨酸激酶的重要的下游信號分子，包括血小板衍生的生長因子 (TOGF-R)、成纖維細胞生長因子(FGF-R)和表皮生長因子(EGF-R)的受體。SHP2也是有絲分 裂原活化蛋白（MAP)激酶通路激活的重要的下游信號分子，該通路可以導致細胞轉化，這是 癌癥發(fā)展的先決條件。SHP2的敲除顯著地抑制具有SHP2突變或EML4/ALK易位的肺癌細胞系 的細胞生長以及EGFR擴增的乳腺癌和食道癌的細胞生長。SHP2還可以激活胃癌、間變性大 細胞淋巴瘤和惡性膠質瘤的下游致癌基因。
[0060] 努南綜合征(NS)和豹皮綜合征（LS)-PTPNll突變導致LS(multiple lentigenes、 心電圖傳導異常、眼增寬、肺動脈狹窄、生殖器異常、生長遲緩、感覺神經性耳聾)和NS(先天 性異常，包括心臟缺陷、顱面異常和身材矮小）。兩種疾病是常染色體顯性綜合征家族的一 部分，該綜合征是正常細胞生長和分化所需要的作為RAS/RAF/ME/ERK絲裂原活化蛋白激酶 通路的組成部分的生殖系突變導致的。該通路的異常調節(jié)具有深刻的影響，特別是對心臟 發(fā)育有深刻影響，從而導致各種異常，包括瓣膜(valvuloseptal)缺陷和/或肥大性心肌病 (HCM)。已經確定MAPK信號通路的變化對這些疾病而言非常關鍵，而且在人類中也已鑒定了 這條通路中的幾個候選基因，其中包括KRAS、NRAS、S0S1、RAF1、BRAF、MEK1、MEK2、SH0C2和 CBL的突變。在NS和LS中最常見的突變基因是PTPN11。在~50%的NS病例和幾乎所有具有NS 某些特征的LS患者中發(fā)現有PTPN11 (SHP2)中的生殖系突變。對于NS而言，蛋白質中的Y62D 和Y63C取代是基本不變的，是最常見的突變。這兩種突變影響了SHP2的催化性非活化構象， 但不影響磷酸酶與其磷酸化信號配對物的結合。
[0061 ] 幼年性骨髓單核細胞白血病(JMML)-PTPN11(SHP2)中的體細胞突變發(fā)生在約35% 的JMML患者中，一種幼年期骨髓增生性疾病(MPD)。這些功能獲得性突變通常是N-SH2結構 域或磷酸酶結構域中的點突變，其能夠阻止催化結構域和N-SH2結構域之間的自抑制，導致 SHP2活性。
[0062]急性骨髓性白血病-PTPN11突變在下列疾病中已經獲得鑒定：~10 %的小兒急性 白血病，例如骨髓增生異常綜合征(MDS);~7 %的B細胞急性淋巴細胞性白血病(B-ALL);和 ~4%的急性骨髓性白血病(AML)。
[0063] NS和白血病突變導致位于由自抑制SHP2構型中N-SH2和PTP結構域形成的界面處 的氨基酸的改變，破壞了抑制性分子內相互作用，導致了催化結構域的高度活性。
[0064] SHP2作為受體酪氨酸激酶（RTK)信號中的正調節(jié)物。包含RTK改變（EGFRamp、 Her2amp、FGFRamp、Metamp、易位的/激活的RTK，即ALK、BCR/ABL)的癌癥包括食管癌、乳腺癌、肺 癌、結腸癌、胃癌、神經膠質瘤、頭和頸癌。
[0065]食管癌(或食道癌)是食管的惡性腫瘤。有各種亞型，主要是鱗狀細胞癌(〈50%)和 腺癌。RTK表達率在食管腺癌和鱗狀細胞癌中很高。因此，本發(fā)明的SHP2抑制劑可以被用于 創(chuàng)新的治療策略。
[0066]乳腺癌是一種重要的癌癥類型，是女性死亡的主要原因，其中患者對現有藥物出 現抗性。乳腺癌有四種主要亞型，包括luminal A、luminal B、Her2樣和三陰性/Basal-樣。 三陰性乳腺癌(TNBC)為侵襲性乳腺癌，缺乏特異性靶向療法。表皮生長因子受體I (EGFR)成 為TNBC的有希望的靶點。通過SHP2對Her2以及EGFR的抑制可能是乳腺癌的希望療法。
[0067] 肺癌一NSCLC是癌癥相關死亡率的主要原因，約占85%的肺癌(主要是腺癌和鱗狀 細胞癌）。盡管細胞毒藥物化療仍然是治療的一個重要組成部分，基于腫瘤中的基因改變例 如EGFR和ALK的改變的靶向療法更有可能通過靶向治療獲益。
[0068] 結腸癌一已知結腸直腸腫瘤的大約30%至50%是有突變的（異常)KRAS，10%至 15 %的結腸直腸癌中發(fā)現BRAF突變。對于已證明過度表達EGFR的結腸直腸腫瘤患者亞群而 言，這些患者對于抗-EGFR治療表現出良好的臨床響應。
[0069] 胃癌是最普遍的癌癥類型之一。酪氨酸激酶的異常表達(通過在胃癌細胞中的異 常酪氨酸磷酸化反映)在本領域中是公知的。三種受體酪氨酸激酶(c-met (HGF受體）、FGF受 體2和erbB2/neU)在胃癌中經常擴增。因此，不同信號通路的破壞可能有助于不同種類的胃 癌的發(fā)展。
[0070] 成神經細胞瘤為發(fā)育中的交感神經系統(tǒng)的小兒腫瘤，約占兒童癌癥的8%。間變性 淋巴瘤激酶(ALK)基因的基因組改變已被公認為是成神經細胞瘤的發(fā)病機理。
[0071] 頭頸鱗狀細胞癌（SCCHN)。高水平的EGFR表達與各種癌癥的預后不良和放療抗性 有關，主要是頭頸鱗狀細胞癌（SCCHNhEGFR信號的阻斷導致受體刺激、細胞增殖的抑制以 及浸潤和轉移的降低。因此，EGFR是SCCHN新抗癌療法的主要目標。
[0072] 本發(fā)明涉及能夠抑制SHP2活性的化合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物以及包含 此類化合物的藥物制劑的制備方法。本發(fā)明的另一方面涉及治療SHP2-介導的疾病的方法， 該方法包括給予需要的患者治療有效量的本發(fā)明概述中定義的式I化合物。
[0073] 在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述SHP2-介導的疾病為選自下列 的疾病，但不限于:JMML;AML;MDS;B-ALL;成神經細胞瘤;食管癌；乳腺癌;肺癌；結腸癌；胃 癌;頭頸癌。
[0074] 本發(fā)明化合物還可以用于治療與SHP2活性異常相關的其它疾病或病癥。因此，另 一方面，本發(fā)明涉及治療選自下列疾病的方法:NS; LS; JMML; AML; MDS; B-ALL;成神經細胞 瘤;食管癌;乳腺癌、肺癌;結腸癌；胃癌;頭頸癌。
[0075]本發(fā)明的SHP2抑制劑可以與另一種藥理學活性化合物組合使用，或者與兩種或多 種藥理學活性化合物組合使用，特別是用于治療癌癥。例如，如上文所定義的式（I)化合物 或其藥學上可接受的鹽可以與一或多種選自下列的藥物同時、按順序或各自分別組合給 藥:例如，有絲分裂抑制劑，如紫杉烷、長春花生物堿、紫杉醇、多西紫杉醇、長春新堿、長春 堿、長春瑞濱或長春氟寧;其它抗癌劑，例如順鉑、5-氟尿嘧啶或5-氟2-4( 1H，3H)-嘧啶二酮 (5FU)、氟他胺或吉西他濱。
[0076]此類組合可以在治療中提供顯著的優(yōu)勢，包括協(xié)同活性。
[0077]在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述化合物經腸胃外給藥。
[0078]在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述化合物經肌內、靜脈內、皮下、 口服、肺部、鞘內、局部或鼻內給藥。
[0079]在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述化合物全身性給藥。
[0080] 在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述患者為哺乳動物。
[0081] 在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述患者為靈長類。
[0082] 在某些實施方案中，本發(fā)明涉及上述方法，其中所述患者為人類。
[0083] 另一方面，本發(fā)明涉及治療SHP2-介導的疾病的方法，該方法包括給予需要的患者 治療有效量的化療藥物以及與之組合的治療有效量的本發(fā)明概述中定義的式I化合物。 [0084] 藥用組合物
[0085]另一方面，本發(fā)明提供了藥學上可接受的組合物，其含有治療有效量的一或多種 上述化合物，與一或多種藥學上可接受的載體(添加劑)和/或稀釋劑一起配制。如下面所詳 細描述，本發(fā)明的藥用組合物可以特別配制用于以固體形式或液體形式給藥，包括那些適 合于下列的給藥：（1) 口服給藥，例如灌服劑（水性或非水性溶液劑或混懸液劑），片劑，例 如，那些針對口腔、舌下和全身吸收的，大丸劑、散劑、顆粒劑、施用于舌的糊劑；⑵腸胃外 給藥，例如通過皮下、肌內、靜脈內或硬膜外注射給藥，例如無菌溶液或混懸液，或持續(xù)釋放 的制劑；（3)局部給藥，例如施用到皮膚上的乳膏、軟膏或控釋貼劑或噴霧劑；（4)陰道內或 直腸內給藥，例如陰道栓劑、乳劑或泡沫劑；（5)舌下給藥；（6)眼睛給藥；（7)經皮給藥；（8) 經鼻給藥;（9)經肺給藥;或（10)鞘內給藥。
[0086] 本文中使用的短語"治療有效量"是指能夠在哺乳動物細胞的至少一個亞群中有 效地產生某些希望的治療效果的化合物、原料或包含本發(fā)明化合物的組合物的量，其對任 何醫(yī)學治療而言具有合理的利益/風險比。
[0087] 本文中使用的短語"藥學上可接受的"是指在合理的醫(yī)學判斷范圍內適合用于與 人類和動物的組織接觸而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應或其它問題或并發(fā)癥的化合物、 原料、組合物和/或劑型，其具有相應的合理的利益/風險比。
[0088] 本文中使用的短語"藥學上可接受的載體"是指藥學可接受的材料、組合物或介 質，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、生產助劑(例如潤滑劑，滑石粉，硬脂酸鎂、鈣 或鋅或硬脂酸)或溶劑包封材料，其能夠將目標化合物從一個器官或身體的一部分輸送到 另一個器官或身體的另一部分。每種載體必須是"可接受的"，其意義在于與制劑的其它成 分相容并且對于患者無害?？捎米魉帉W上可接受的載體的某些材料的示例包括：（1)糖類， 例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；（2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；（3)纖維素及其衍生物，例 如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；（4)粉末狀黃蓍膠；（5)麥芽；（6)明膠；（7)滑 石粉；（8)賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；（9)油類，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、 玉米油和大豆油；（10)二醇類，例如丙二醇；（11)多元醇類，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙 二醇；（12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；（13)瓊脂；（14)緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化 鋁；（15)海藻酸；（16)無熱原水；（17)等滲鹽水；（18)林格氏溶液；（19)乙醇；（20)pH緩沖溶 液;（21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐;和(22)其他在藥物制劑中使用的無毒的相容物質。
[0089] 如上所述，本發(fā)明化合物的某些實施方案可以含有堿性官能團，如氨基或烷基氨 基，因此能夠與藥學上可接受的酸形成藥學上可接受的鹽。在此情況下，術語"藥學上可接 受的鹽"是指本發(fā)明化合物的相對無毒的無機和有機酸加成鹽。這些鹽可以在施用溶媒或 劑型制備過程中原位制備，或通過使得純化的游離堿形式的本發(fā)明化合物與適宜的有機或 無機酸反應，并在隨后純化過程中分離所形成的鹽制備。代表性的鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸 鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂 酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒 石酸鹽、萘甲酸鹽、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂基磺酸鹽等。（參見，例如Berge 等（1977) "Pharmaceutical Salts(可藥用的鹽)"，J.Pharm. Sci ·66:1 -19) 〇
[0090] 目標化合物的藥學上可接受的鹽包括所述化合物的常規(guī)無毒鹽或季銨鹽，例如源 自無毒的有機或無機酸。例如，此類常規(guī)無毒鹽包括那些衍生自無機酸的鹽，例如鹽酸、氫 溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；制備自有機酸的鹽，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、 硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷 氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草 酸、羥乙基磺酸等。
[0091 ]在其它情況下，本發(fā)明化合物可以含有一或多個酸性官能團，因此能夠與藥學上 可接受的堿形成藥學上可接受的鹽。在此情況下，術語"藥學上可接受的鹽"是指本發(fā)明化 合物的相對無毒的無機和有機堿加成鹽。這些鹽可以在施用溶媒或劑型制備過程中原位制 備，或通過使得純化的游離酸形式的化合物與適宜堿反應制備，所述堿例如藥學上可接受 的金屬離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，氨，藥學上可接受的有機伯、仲或叔胺。代表性 的堿或堿土金屬鹽包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等。用于形成堿加成鹽的代表性有機胺包括 乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。（參見，例如Berge等，同上）。
[0092] 組合物中也可以存在潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以 及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑，還可以存在防腐劑和抗氧化劑。
[0093] 藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括：（1)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、鹽酸半 胱氨酸、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；（2)油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸酯、 丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、掊酸丙酯、α-生育酚等；和（3)金屬螯 合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸，磷酸等。
[0094] 本發(fā)明的制劑包括適合于經口服、鼻、局部(包括口腔和舌下）、直腸、陰道和/或腸 胃外給藥的那些制劑。所述制劑可以方便地以單位劑量形式存在，其可以通過藥學領域公 知的任何方法制備?？梢耘c載體材料組合以產生單一劑型的活性成分的量取決于被治療的 宿主、給藥的特定模式。可以與載體材料組合以產生單一劑型的活性成分的量通常能夠產 生治療效果的化合物的量。通常，以100%計，這個量的范圍為活性成分的約0.1 %至約 99%，優(yōu)選約5 %至約70 %，最優(yōu)選約10 %至約30 %。
[0095] 在某些實施方案中，本發(fā)明的制劑包括選自下列的賦形劑:環(huán)糊精、纖維素、脂質 體、膠束形成劑(例如膽汁酸)和聚合載體(例如聚酯和聚酐）；還包括本發(fā)明的化合物。在某 些實施方案中，上述制劑提高了本發(fā)明化合物的口服生物度。
[0096] 制備這些制劑或組合物的方法包括使得本發(fā)明化合物與載體以及任選的一或多 種輔料混合的步驟。通常，所述制劑通過將本發(fā)明化合物與液體載體或微粉化固體載體或 它們兩者均勻地和緊密地混合而制備，然后，如果需要，將產物塑形。
[0097] 適合于口服給藥的本發(fā)明制劑可以是下列形式:膠囊劑、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑 的形式(使用矯味的基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠）、散劑、顆粒劑;或為水性或非 水性液體中的溶液劑或混懸液劑;或為油包水或水包油型液體乳劑;或為酏劑或糖漿劑;或 為軟錠劑(使用惰性基質，如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或漱口劑等，各自含有預 定量的作為活性成分的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的化合物還可以作為大丸劑、干藥糖劑或糊 劑給藥。
[0098] 在用于口服給藥本發(fā)明的固體劑型中（膠囊劑、片劑、丸劑、糖衣丸、散末、顆粒劑、 錠劑等），將活性成分與一種或多種藥學上可接受的載體混合如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或 任何以下輔料混合：（1)填充劑或增量劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸； (2)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；（3)保 濕劑，例如甘油；（4)崩解劑，例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽 和碳酸鈉；（5)溶液阻滯劑，例如石蠟；（6)吸收促進劑，例如季銨化合物，和表面活性劑，如 泊洛沙姆和月桂基硫酸鈉；（7)濕潤劑，例如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯和非離子表面活性劑； (8)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土粘土；（9)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體 聚乙二醇、月桂基硫酸鈉、硬脂酸鋅、硬脂酸鈉、硬脂酸以及它們的混合物；（10)著色劑，和 (11)控釋劑，例如交聯聚維酮或乙基纖維素。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，該藥物組合物 還可包含緩沖劑。相似類型的固體組合物也可用作軟和硬殼明膠膠囊中的填充劑，使用此 類賦形劑如乳糖以及高分子量聚乙二醇。
[0099] 片劑可以任選與一種或多種輔料一起通過壓制或模制來制備。壓縮片劑可使用粘 合劑(例如明膠或羥丙基甲基纖維素）、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如淀粉羥乙 酸鈉或交聯羧甲基纖維素鈉）、表面活性劑或分散劑來制備。模制片劑可通過在合適的機器 中將使用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混合物模制來制備。
[0100] 本發(fā)明藥物組合物的片劑和其它固體劑型（如糖錠劑、膠囊、丸劑和顆粒劑)可任 選被刻痕或采用包衣和殼制備，如腸溶包衣和藥物制劑領域中公知的其它包衣工藝。它們 也可以配制以提供其中活性成分的緩釋或控釋，采用例如不同比例的羥丙基甲基纖維素以 提供所需的釋放模式，或者采用其它的聚合物基質、脂質體和/或微球。它們可以被配制用 于快速釋放，例如，冷凍干燥。它們可以通過例如細菌截留濾器過濾進行滅菌，或通過加入 無菌固體組合物形式的滅菌劑，其可以溶解在無菌水中，或者使用前立即加入一些其它無 菌可注射介質。這些組合物還可任選包含遮光劑，可以是只在或優(yōu)先在胃腸道的某一部分 釋放活性成分的組合物，任選以延遲的方式釋放。可以使用的植入組合物的示例包含聚合 材料和蠟。所述活性成分也可以是微囊形式，如果適當，含有一種或多種上述賦形劑。
[0101] 用于本發(fā)明化合物口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、微乳劑、溶液 劑、混懸液劑、糖漿劑和酏劑。除了活性成分外，液體劑型可以含有本領域中常用的惰性稀 釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯 甲酸芐酯、丙二醇、1，3_ 丁二醇、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油 和芝麻油）、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯以及它們的混合物。
[0102] 除了惰性稀釋劑，口服組合物還可以包括輔料，例如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜 味劑、矯味劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。
[0103] 除活性化合物外，混懸液劑還可以含有助懸劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯 山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂和黃蓍膠以及它們的 混合物。
[0104] 用于直腸或陰道給藥的本發(fā)明藥物組合物的制劑可以為栓劑形式，其可以通過將 一種或多種本發(fā)明化合物與一種或多種適當的無刺激性的賦形劑或載體混合進行制備，所 述載體包括例如可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸鹽，其在室溫下是固體但在體溫下為液 體，因此，其在直腸或陰道腔中熔化并釋放活性化合物。
[0105]適合于陰道給藥的本發(fā)明的制劑還包括陰道栓劑、棉塞、霜劑、凝膠劑、糊劑、泡沫 劑或噴霧劑，其含有在本領域中已知的適當的載體。
[0106] 用于本發(fā)明化合物的局部或透皮給藥的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、霜劑、 洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑。所述活性化合物可以在無菌條件下與藥學上可接受 的載體進行混合，還可以包含任何可能需要的防腐劑、緩沖劑或拋射劑。
[0107] 除本發(fā)明的活性化合物外，軟膏劑、糊劑、霜劑和凝膠劑可以含有賦形劑，例如動 物和植物脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨潤土、硅酸、滑 石粉和氧化鋅或其混合物。
[0108] 除本發(fā)明的化合物外，散劑和噴霧劑可以含有賦形劑，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氫 氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末或這些物質的混合物。噴霧劑可以另外含有常規(guī)的拋射劑，如 氯氟烴和揮發(fā)性未取代的烴，如丁烷和丙烷。
[0109]透皮貼劑具有提供本發(fā)明化合物向機體受控傳遞的額外優(yōu)點。此類劑型可以通過 將化合物溶解或分散在適當的介質中而制備。也可以采用吸收增強劑以增加通過皮膚的化 合物的流量。這種流量的速率可以通過提供控速膜控制，或者將化合物分散在聚合物基質 或凝膠中來控制。
[0110]眼用制劑、眼膏、散劑、溶液劑等也應當包含在本發(fā)明的范圍內。
[0111]適用于腸胃外給藥的本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明化合物以及與 之組合的一種或多種藥學上可接受的無菌等滲水性或非水性溶液、分散體、混懸液或乳劑， 或者是在使用前可重建成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末，其可以包含糖、醇、抗氧化 劑、緩沖劑、抑菌劑、使制劑與預期接受者的血液等滲的溶質或助懸劑或增稠劑。
[0112] 可以在本發(fā)明的藥物組合物中使用的適當的水性和非水性載體的示例包括水、乙 醇、多元醇（如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適的混合物，還包括植物油（如橄欖油）和 可注射的有機酯(如油酸乙酯）。例如，通過使用包衣材料(如卵磷脂）、通過在分散液的情況 下保持所需的顆粒大小以及通過使用表面活性劑，可以保持適當的流動性。
[0113] 這些組合物還可以含有輔助劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。通過包含 各種抗菌劑和抗真菌劑來確保預防微生物對本發(fā)明化合物的作用，例如對羥基苯甲酸酯、 氯丁醇、酚、山梨酸和類似物。組合物中也可能需要包含等滲劑，如糖、氯化鈉等。此外，通過 包含延遲吸收的物質如單硬脂酸鋁和明膠，可以實現可注射藥物形式的延長吸收。
[0114] 在某些情況下，為了延長藥物的作用，需要通過皮下或肌肉注射以減慢藥物的吸 收。這可以通過使用水溶性差的晶體或無定形物質的液體混懸液來實現。藥物的吸收速率 則取決于其溶解速率，而溶解速率又可能取決于晶體大小和晶型?；蛘?，胃腸外給藥的藥物 形式的延遲吸收可以通過將藥物溶解或懸浮在油性介質中實現。
[0115] 可注射的儲庫形式可以通過將目標化合物在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚 乙交酯中形成微囊束來制備。根據藥物與聚合物的比例以及所采用的特定聚合物的性質， 藥物釋放的速率可以得到控制。其它可生物降解的聚合物的示例包括聚（原酸酯）和聚（酸 酐）。還可以通過將藥物包埋在與身體組織相容的脂質體或微乳中制備貯庫注射制劑。
[0116] 當本發(fā)明的化合物作為藥品給藥于人類和動物時，它們可以自身給藥，或者作為 藥物組合物給藥，該組合物含有例如0.1至99% (更優(yōu)選為10 - 30%)的活性成分以及與之 組合的藥學可接受的載體。
[0117] 本發(fā)明的制劑可以經口服、胃腸外、局部或直腸給藥。它們當然以適于各種給藥途 徑的形式施用。例如，它們可以以片劑或膠囊形式施用，以注射、吸入、眼用洗劑、軟膏、栓劑 等形式通過注射、輸注或吸入施用；通過洗液或軟膏外用；通過栓劑直腸施用。優(yōu)選口服給 藥。
[0118] 本文中使用的短語"胃腸外施用"和"腸胃外給藥"是指除了腸內和局部給藥外的 其它給藥模式，通常通過注射給藥，包括但不限于經靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眼眶 內、心內、皮內、腹膜內、氣管內、皮下、表皮下、關節(jié)內、被膜下、蛛網膜下、脊柱內和胸骨內 注射和輸注。
[0119] 本文中使用的短語"全身給藥"、"全身性施用"、"外周給藥"和"外周施用"是指化 合物、藥物或其它物質不是直接進入中樞神經系統(tǒng)，從而因此經過代謝和其它類似過程使 得它進入患者的身體系統(tǒng)，例如皮下給藥。
[0120]這些化合物可通過任何合適的給藥途徑給藥于人和其它動物用于治療，包括口 月艮、經鼻(通過例如噴霧）、直腸、陰道內、胃腸外、腦池內和局部(如通過散劑、軟膏或滴劑） 途徑，包括頰和舌下途徑。
[0121]無論選擇何種給藥途徑，可以以適宜的水合物形式使用的本發(fā)明化合物和/或本 發(fā)明的藥用組合物可以通過本領域技術人員已知的常規(guī)方法配制成藥學上可接受的劑型。
[0122] 本發(fā)明藥物組合物中活性成分的實際劑量水平可以改變，以便于有效獲得對特定 患者、組合物和給藥模式而言所需要的治療響應的活性成分的量，而對患者是無毒的。
[0123] 選擇的劑量水平取決于多種因素，包括所使用的本發(fā)明特定化合物或其酯、鹽或 酰胺的活性;使用的特定化合物的給藥途徑、給藥時間、排泄或代謝速率;吸收的速率和程 度;治療的持續(xù)時間；與使用的特定化合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料;待治療 患者的年齡、性別、體重、狀況、總體健康情況以及先前的病史；以及醫(yī)學領域眾所周知的因 素。
[0124] 本領域的普通醫(yī)生或獸醫(yī)可以容易地確定和處方需要的有效量的藥物組合物。例 如，醫(yī)師或獸醫(yī)可以以低于必需水平的藥用組合物中使用的本發(fā)明化合物的劑量開始以便 于獲得需要的治療效果，然后逐步增加劑量，直到達到滿意的效果。
[0125] 在一般情況下，本發(fā)明的化合物的合適的日劑量是能夠有效產生治療效果的最低 劑量的化合物的量。這樣的有效劑量一般取決于上述因素。通常，當用于指定的鎮(zhèn)痛效果 時，用于患者的本發(fā)明化合物的口服、靜脈內、腦室內和皮下給藥的劑量范圍為每天每公斤 體重約0.0001至約100mg。
[0126] 如果需要的話，活性化合物的有效日劑量可以全天以適當的間隔以二、三、四、五、 六或更多的亞劑量分開施用，任選以單位劑型施用。優(yōu)選的給藥方案是每天一次給藥。
[0127] 如果可能，本發(fā)明化合物可以單獨給藥，優(yōu)選以藥物制劑(組合物）的形式給予所 述化合物。
[0128] 本發(fā)明化合物可以配制以任何便利地方式給藥于人類或獸醫(yī)，采用類似于其它藥 物的方式。
[0129] 另一方面，本發(fā)明提供了藥學上可接受的組合物，其含有治療有效量的一或多種 上述目標化合物，與一或多種藥學上可接受的載體(添加劑)和/或稀釋劑一起配制。如下面 所詳述，本發(fā)明的藥用組合物可以特別配制用于以固體形式或液體形式給藥，包括那些適 合于下列的給藥：（1) 口服給藥，例如灌服劑(水性或非水性溶液劑或混懸液劑），片劑、大丸 劑、散劑、顆粒劑、施用于舌的糊劑；（2)腸胃外給藥，例如通過皮下、肌內或靜脈內注射給 藥，例如以無菌溶液或混懸液的形式；（3)局部給藥，例如施用到皮膚、肺部或粘膜上的乳 膏、軟膏或噴霧劑;或⑷陰道內或直腸內給藥，例如陰道栓劑、霜劑或泡沫劑；（5)舌下或頰 腔給藥;（6)眼睛給藥;（7)經皮給藥;或(8)經鼻給藥。
[0130] 術語"治療"應當還預防、治療和治愈。
[0131] 接受這種治療的患者是有需要的任何動物，包括靈長類(特別是人類)和其它哺乳 類動物，如馬、牛、豬和羊等;還通常包括家禽和寵物。
[0132] 本發(fā)明的化合物可以自身給藥，或者以與藥學上可接受的載體的混合物給藥，也 可與抗微生物藥物組合給藥，如青霉素類、頭孢菌素類、氨基糖苷類和糖肽類。因此，聯合治 療包括活性化合物按順序、同時和分別的給藥，給藥的方式應當使得給予的第一種藥物的 治療作用在沒有完全消失時給予隨后的藥物。
[0133] 微乳化技術可以提高某些親脂性（水不溶性）藥物的生物利用度。示例包括 Trimetrine(Dordunoo，S.K.等，Drug Development and Industrial Pharmacy,17(12), 1685 -1713,1991 和REV 5901(Sheen,P.C.等，J Pharm Sci 80(7) ,712 -714,1991)。除其 他事項外，微乳化通過優(yōu)先引導吸收到淋巴系統(tǒng)而非循環(huán)系統(tǒng)從而提高了生物利用度，由 此繞過肝臟，防止了化合物在肝膽循環(huán)中的破壞。
[0134] 雖然所有合適的兩性載體均可以被考慮，但目前優(yōu)選的載體通常是那些通常公認 安全(GRAS)狀態(tài)的載體，其既可以溶解本發(fā)明的化合物，又可以在稍后階段將其微乳化，該 階段是指該溶液與復雜的水相(例如人體胃腸道中存在的）接觸時。通常，滿足這些要求的 兩親性成分具有的HLB(親水親油平衡)值為2 - 20,其結構中包含C-6至C-20范圍內的直鏈 脂族基團。示例是聚乙稀-glycol ized脂肪酸甘油酯和聚乙二醇。
[0135] 可以特別考慮市售的兩性載體，其中包括Gelucire系列、Labraf il、Labrasol或 Lauroglycol (以上均由Gattefosse Corporation，Saint Priest，France生產和銷售）、 PEG-單油酸酯、PEG-二油酸酯、PEG-單月桂酸酯和二月桂酸酯、卵磷脂、吐溫80等(在美國和 世界各地由多個公司生產和銷售）。
[0136] 適用于本發(fā)明的親水性聚合物是那些易溶于水的聚合物，可以與囊泡形成脂質體 共價連接，它們在體內是可接受的并且沒有毒性作用（即是生物相容的）。合適的聚合物包 括聚乙二醇(PEG)、聚乳酸(也稱為聚丙交酯）、聚乙醇酸(也稱為聚乙交酯）、聚乳酸-聚乙醇 酸共聚物和聚乙烯醇。優(yōu)選的聚合物是那些分子量為約100或120道爾頓至約5000或10000 道爾頓的聚合物，更優(yōu)選約300道爾頓至約5000道爾頓。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，聚 合物是聚乙二醇，其分子量為約100至約5000道爾頓，更優(yōu)選分子量為約300至約5000道爾 頓。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，聚合物是750道爾頓的聚乙二醇(PEG(750))。聚合物也 可以通過其中的單體數量所定義;本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案使用至少約3個單體的聚合 物，此類PEG聚合物由三個單體(約150道爾頓)組成。
[0137] 其它適合用于本發(fā)明中的親水性聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基噁唑啉 (polymethoxazoline)、聚乙基噁唑啉、聚輕丙基甲基丙稀酰胺、聚甲基丙稀酰胺、聚二甲基 丙烯酰胺和衍生的纖維素如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素。
[0138] 在某些實施方案中，本發(fā)明的制劑包含選自下列的生物相容性聚合物:聚酰胺、聚 碳酸酯、聚烯烴、丙烯酸和甲基丙烯酸酯的聚合物、聚乙烯基聚合物、聚乙交酯、聚硅氧烷、 聚氨酯及其共聚物、纖維素、聚丙烯、聚乙烯、聚苯乙烯、乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酐、聚 (原)酯、聚(丁酸）、聚(戊酸）、聚(丙交酯-共-己內酯）、多糖、蛋白質、聚透明質酸、聚氰基丙 烯酸酯以及它們的共混物、混合物或共聚物。
[0139] 環(huán)糊精是環(huán)狀低聚糖，包含6、7或8個葡萄糖單元，分別用希臘字母α、β或γ命名。 少于六個葡萄糖單元的環(huán)糊精不存在。葡萄糖單元通過α-1,4-糖苷鍵連接。由于糖單位的 椅式構象，所有的仲羥基(位于C-2，C_3)位于該環(huán)的一側，而所有在C-6上的伯羥基都位于 另一側。其結果是，其外表面是親水性的，使得環(huán)糊精具有水溶性。與此相反，環(huán)糊精的空腔 是疏水性的，因為它們是通過原子C-3和C-5的氫與醚樣氧連接。這些矩陣結構使得可以與 各種相對疏水的化合物絡合，包括例如留體化合物如17 . β-雌二醇(參見，例如van Uden等 Plant Cell Tiss · Org. Cult · 38:1-3-113(1994))。該絡合通過范德華相互作用和通過氫鍵 形成而發(fā)生。對環(huán)糊精化學的全面綜述參見Wenz，Agnew. Chem. Int · Ed · Engl ·，33:803 - 822 (1994)〇
[0140] 環(huán)糊精衍生物的物理化學性質主要取決于取代的種類和程度。例如，它們在水中 的溶解度范圍從不溶(例如，三乙酰基-β-環(huán)糊精)至147 %的可溶(w/v) (G-2-β-環(huán)糊精）。此 外，它們可溶于多種有機溶劑。通過增加或減少它們的溶解度，環(huán)糊精的性質能夠控制各種 制劑組分的溶解性。
[0141] 眾多環(huán)糊精和它們的制備方法已有描述。例如Parmeter (I)等（U · S · Pat · No · 3， 453，259)和Gramera等（U · S · Pat · No · 3，459，731)描述了電中性的環(huán)糊精。其它衍生物包括 具有陽離子性質的環(huán)糊精[Parmeter(II)，U. S. Pat.No . 3，453，257]、不溶的交聯環(huán)糊精 (5〇11118，1].3.?31:.1^〇.3,420,788)以及具有陰離子性質環(huán)糊精[?31'1116七61'(111)， U.S.Pat.N0.3,426,011]。在具有陰離子性質的環(huán)糊精衍生物中，羧酸、亞磷酸、單磷酸、膦 酸、磷酸、硫代膦酸、硫代亞磺酸(thiosulphinica cid)和磺酸已添加到母體環(huán)糊精上[參 見Parmeter(III)，同上]。此外，磺烷基醚環(huán)糊精衍生物已由Stella等（U. S.Pat ·Νο · 5,134， 127)描述。
[0142] 脂質體由至少一層包封水性內部隔室脂質雙層膜組成。脂質體可以通過膜類型和 大小進行表征。小單層囊泡(SUVs)只有一層膜，通常直徑范圍在0.02 - 0.05μπι之間；大單層 囊泡(LUVS)通常為大于0.05μπι的單層(Oligolamellar)大囊泡，多層囊泡有多個(通常為同 心的)薄膜層，通常大于Ο.?μπι。具有多個非同心的膜的脂質體，即多個較小的囊泡包含在一 個較大的囊泡內，被稱為多泡囊泡。
[0143] 本發(fā)明的一個方面涉及包含含有本發(fā)明化合物的脂質體的制劑，其中制備的脂質 體膜可以使得脂質體的荷載能力增加?？蛇x擇的或另外，本發(fā)明的化合物可以包含在或吸 附到脂質體的脂質雙層中。本發(fā)明化合物可以與脂質表面活性劑進行聚合，在該脂質體的 內部空間內攜帶;在這些情況下，制備的脂質體膜能夠對抗活性成分-表面活性劑聚集體的 破壞作用。
[0144] 根據本發(fā)明的一個實施方案，脂質體的脂質雙層包含采用聚乙二醇(PEG)衍生的 脂質，這使得PEG鏈從脂質雙層的內表面延伸到由脂質體包封的內部空間，并從脂質雙層的 外部延伸到周圍環(huán)境中。
[0145] 含有在本發(fā)明脂質體中的活性成分為溶解的形式。表面活性劑和活性成分的聚集 體(例如含有相關活性成分的乳劑或膠束)可以包封在本發(fā)明的脂質體的內部空間內。表面 活性劑的作用是分散和溶解活性成分，其可以選自任何合適的脂族、環(huán)脂族或芳族表面活 性劑，包括但不限于不同的鏈長(例如，自約C. sub. 14至約C. sub. 20)的生物相容的溶血磷 脂酰膽堿(LPCs)。聚合物衍生的脂質（例如PEG-脂質）也可用于形成膠束，因為它們的作用 能夠抑制膠束/膜融合，作為聚合物添加到表面活性劑分子可以降低表面活性劑的CMC，有 助于膠束的形成。優(yōu)選表面活性劑的CMCs為微摩爾濃度范圍；較高的CMC表面活性劑可以用 于制備包封在本發(fā)明脂質體中的膠束，然而，膠束表面活性劑單體可能會影響脂質體雙層 的穩(wěn)定性，在設計具有所需穩(wěn)定性的脂質體時是應當考慮的一個因素。
[0146] 本發(fā)明的脂質體可以通過本領域中已知的各種技術制備。參見，例如 U.S.Pat.No.4,235,871;公開的 PCT 申請 WO 96/14057;New RRC,脂質體：實用方法 (Liposomes:A practical approach)，IRL Press，0xford(1990),第33-104頁；Lasic DD, 脂質體：從物理學到應用（Liposomes from physics to applications)Elsevier Science Publishers BV,Amsterdam,1993。
[0147] 例如，本發(fā)明的脂質體可以通過將親水性聚合物衍生的脂質擴散到預制的脂質體 中而制備，例如通過將預制的脂質體暴露于脂質接枝的聚合物組成的膠束中，該聚合物中 脂質的濃度與衍生的脂質的最終摩爾百分濃度一致，這是脂質體所希望的。含有親水性聚 合物的脂質體還可以通過根據本領域中公知的均化、脂質-領域水合或擠出技術形成。
[0148] 在本發(fā)明的一個方面，制備脂質體，使其在選定大小范圍內具有基本上均勻的大 小。一種有效的控制大小的方法包括將脂質體的水性懸浮液擠壓通過一系列具有選定的均 勻孔徑大小的聚碳酸酯膜;該膜的孔徑大小與擠壓通過該膜所獲得的脂質體的最大大小基 本一致。參見例如美國專利號4,737,323(1988年4月12日）。
[0149] 本發(fā)明制劑的釋放特征取決于包封材料、被包封藥物的濃度以及釋放改性劑的存 在。例如，釋放可以被調節(jié)為pH依賴性的，例如采用pH敏感包封材料釋放，其僅在低pH釋放 (如在胃中釋放），或者在較高的pH釋放(如在腸中釋放）。腸溶包衣可用于阻止釋放發(fā)生直 到其通過胃通道之后釋放?？梢允褂枚喾N包衣材料或包封在不同材料的氨腈混合物，獲得 在胃中的初始釋放，隨后獲得在腸中的后期釋放。釋放也可以通過鹽或成孔劑的包封而調 節(jié)，其可以通過從囊中擴散而增加水的吸收或藥物的釋放?？梢愿淖兯幬锶芙舛鹊馁x形劑 也可用于控制釋放速率。也可以加入能夠增加基質降解或自基質釋放的成分。取決于化合 物，它們可以被加入到藥物，作為單獨的相（即，作為微粒)加入，或者可以共同溶解在聚合 物相中。在所有這些情況下，量應在0.1 - 30% (w/w聚合物）。降解增強劑的類型包括無機 鹽，如硫酸銨和氯化銨;有機酸，如檸檬酸、苯甲酸和抗壞血酸;無機堿，如碳酸鈉、碳酸鉀、 碳酸鈣、碳酸鋅和氫氧化鋅;有機堿，如硫酸魚精蛋白、精胺、膽堿、乙醇胺、二乙醇胺和三乙 醇胺;表面活性劑，如Tween?和Pluronic?。能夠增加基質（即水溶性化合物如無機鹽 和糖)微結構的成孔劑可以以微粒的形式加入。其范圍在1 一 30%(w/w聚合物）。
[0150] 攝取也可以通過改變顆粒在腸道中的滯留時間而調節(jié)。這可以通過例如將顆粒包 衣或者選擇粘膜粘附聚合物作為包衣材料而實現。示例包括具有游離羧基的大多數聚合 物，例如脫乙酰殼多糖、纖維素，特別是聚丙烯酰胺(本文所使用的聚丙烯酰胺是指包含丙 烯酸酯基團和改性的丙烯酸酯基團的聚合物，例如氰基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯）。
[0151] 藥用組合產品
[0152] 本發(fā)明特別涉及式I化合物(或包含式I化合物的藥用組合物)在治療本文中所述 的一或多種疾病中的用途;其中對治療的響應是有益的，可以例如通過部分或全部消除所 述疾病的一或多個癥狀直到完全治愈或緩解加以證實。
[0153] 式（I)化合物也可以與下列化合物組合使用：
[0154] B C R - A B L抑制劑：伊馬替尼（Gleevec?):;尼洛替尼鹽酸鹽；尼洛替尼 (Tasigna?);達沙替尼（BMS-345825);伯舒替尼（SKI-606);帕納替尼（AP24534);巴氟替 尼（INN0406);大魯替尼（PHA-739358) ;AT9283(CAS 1133385-83-7);塞卡替尼（AZD0530); 和N-[2-[(lS，4R)-6-[[4-(環(huán)丁基氨基)-5-(三氟甲基)-2-嘧啶基]氨基]-1，2,3,4-四氫 萘-1,4-亞胺-9-基]-2-氧代乙基]-乙酰胺(PF-03814735，CAS 942487-16-3);和LGX818;
[0155] ALK抑制劑:PF-2341066(XALKOFU?;克唑替尼）；5-氯代-N4-(2-(異丙基磺酰 基）苯基）-N2-(2-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基）哌啶-1-基）苯基）嘧啶-2,4-二胺； GSK1838705A;和CH5424802;
[0156] BRAF抑制劑:維羅非尼(PLX40 3 2)和達拉非尼；
[0157] FLT3抑制劑一蘋果酸舒尼替尼（Pfizer以商品名Slltent?銷售）和PKC412(米哚 安林）。
[0158] MEK抑制劑-曲美替尼；
[0159] 血管內皮生長因子（VEGF)受體抑制劑：貝伐單抗（Genentech/Roche以商品名 Avastin.?銷售）、阿西替尼、（N-甲基-2-[[3-[(E)-2-吡啶-2-基乙烯基]-1H-吲哚-6-基] 硫烷基]苯甲酰胺，也稱為AG013736，PCT公開號W0 01/002369中描述）、丙氨酸布立尼布 ((S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2，l-f][l，2,4]三嗪-6-基氧基)丙-2-基)2-氨基丙酸酯，也稱為BMS-582664)、莫特塞尼(N-(2，3-二氫-3，3-二甲 基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，PCT公開號TO 02/066470中 描述）、帕瑞肽（也稱為S0M230，PCT公開號W0 02/010192中描述）、索拉非尼（以商品名 Nexavar? 銷售）；
[0160] HER2受體抑制劑：曲妥單抗(Genentech/Roche以商品名Herceptin?銷售）、來 那替尼(也稱為HKI-272，（2E)-N-[4-[[3-氯代-4-[(吡啶-2-基）甲氧基]苯基]氨基]-3-氰 基-7-乙氧基喹啉-6-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺，PCT公開號W0 05/028443中描述）、 拉帕替尼或二甲苯磺酸拉帕替尼(GlaxoSmithKline以商品名Tykerb?銷售）。
[0161] ⑶ 20 抗體：利妥昔單抗(Genentech/Roche以商品名 Riuxan? 和MabThera? 銷售）、托西莫單抗（GlaxoSmithKline以商品名JBexxar?銷售）、奧法木單抗 (GiaxoSmi thKi ine 以商品名 Arzerra ⑩銷售）；
[0162] 酪氨酸激酶抑制劑：鹽酸埃羅替尼（以Genentech/Roche商品名Tarceva⑩銷 售）、利尼伐尼(Linifanib)(N-[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯基]-N'-(2-氟-5-甲基苯基） 脲，也稱為ABT 869，可獲自Genentech)、蘋果酸舒尼替尼（Pf izer以商品名Sutent?銷 售）、伯舒替尼(4-[(2,4_二氯代-5-甲氧基苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙氧基]喹啉-3-甲腈，也稱為SKI-606，美國專利號6,780,996公開）、達沙替尼 (Bristol-Myers Squi bb以商品名Sprycel?銷售）、armala(也稱為帕唑帕尼， GlaxoSmithKline以商品名Votrient?銷售）、伊馬替尼和甲磺酸伊馬替尼(Novartis以商 品名 Gilvec? 和 Gleevec? 銷售）；
[0163] DNA合成抑制劑：卡培他濱(Roche以商品名Xelodg?銷售）、鹽酸吉西他濱(El i Li 1 ly和Company以商品名Gemzar⑩銷售）、奈拉濱（（2R，3S，4R，5R)-2-(2-氨基-6-甲氧 基-嘌呤-9-基）-5-(羥基甲基）四氫呋喃-3，4_二醇，GlaxoSmithKline以商品名 Arranon?和 Atriaiice? 銷售）；
[0164] 抗腫瘤藥:奧沙利鉑（Sanof i-Aventi s以商品名EMXatin?銷售，美國專利號4， 169,846 公開）；
[0165] 表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑:吉非替尼（以商品名丨ressa?銷售），N-[4_[(3- 氯代-4-氟苯基)氨基]-7-[[ (3〃 S〃）-四氫-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4 (二甲基氨基)-2_丁酰胺，Boehringer Ingelheim以商品名T<JV〇:k?銷售）、西妥昔單抗(Bristol-Myers Squ ibb以商品名Er Mtux?銷售）、帕尼單抗(Amgen以商品名Vectibix?銷售）；
[0166] HER二聚化抑制劑：帕妥珠單抗(Genentech以商品名Omnitarg?銷售）；
[0167] 人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)調節(jié)劑:非格司亭(Amgen以商品名NeupOgeil? 銷售）；
[0168] 免疫調節(jié)劑：阿夫土珠（可獲自Ro.che? )、乙二醇化非格司亭（Amgen以商品名 Neulasta?銷售）、來那度胺（也稱為cc-5〇 13，商品名Hevlimid?)、沙利度胺（商品名 Thalomid?);
[0169] CD40抑制劑:達西珠單抗(Dacetuzumab)(也稱為SGN-40或huS2C6，可獲自Seattle Genetics, Inc)；
[0170] 促凋亡受體激動劑（PARAs):杜拉樂明（Dulanermin)(也稱為AMG-951，可獲自 Amgen/Genentech)；
[0171] Hedgehog拮抗劑:2-氯代-N- [ 4-氯代-3- (2-吡啶基)苯基]-4-(甲基磺酰基)_苯甲 酰胺（也稱為⑶C-0449，PCT公開號W0 06/028958公開）；
[0172] PI3K抑制劑:4-[2-(1Η-吲唑-4-基)-6-[[4_(甲基磺?；┻哙?1-基]甲基]噻吩 并[3,2-d]嘧啶-4-基]嗎啉（也稱為⑶C 0941，PCT公開號W0 09/036082和W0 09/055730公 開），2_甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基] 苯基]丙腈(也稱為BEZ 235或NVP-BEZ 235,于PCT公開號W0 06/122806中描述）；
[0173] 磷脂酶A2抑制劑:阿那格雷(商品名Agrylin?);
[0174] BCL-2抑制劑:4-[4-[[2-(4-氯代苯基)-5,5-二甲基-1-環(huán)己烯-1-基]甲基]-1-哌 嗪基]-N-[[4-[[(lR)-3-(4-嗎啉基)-1-[(苯硫基）甲基]丙基]氨基]-3-[(三氟甲基)磺酰 基]苯基]磺酰基]苯甲酰胺(也稱為ABT-263，公開于PCT公開號W0 09/155386);
[0175] 絲裂原激活的蛋白激酶(MEK)抑制劑:XL-518(Cas No. 1029872-29-4,可獲自ACC Corp.)；
[0176] 芳香酶抑制劑:依西美坦(Pf izer以商品名Aromasin?銷售）、來曲挫(Novartis 以商品名Femar a?銷售）、阿那曲唑(商品名Ari mide x?);
[0177] 拓撲異構酶i抑制劑:伊立替康(Pfizer以商品名Camptosar?銷售）、鹽酸拓撲 替康(GlaxoSmithKline以商品名Hycamtin⑧銷售）；
[0178] 拓撲異構酶11抑制劑：依托泊苷（也稱為VP- 1 6和磷酸依托泊苷，商品名 Toposar?、VePesid? 和 Etopophos? )、替尼泊苷（也稱為 v Μ - 2 6，商品名 Vumon?)；
[0179] m T 0 R抑制劑：替西羅莫司（P f i z e r以商品名Torisel?銷售）、地磷莫斯 (Ridaforolimus)(正式名稱 deferolimus，（lR，2R，4S)-4-[(2R)-2[(lR，9S，12S，15R，16E， 18R，19R，21R，23S，24E，26E，28Z，30S，32S，35R)-l，18-二羥基-19,30-二甲氧基-15，17,21， 23，29，35-六甲基-2，3，10，14，20-五氧-11，36-二氧雜-4-氮雜雙環(huán)[30 · 3丄04'9]三十六 烷-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基環(huán)己基二甲基膦酯，也稱為AP23573和 MK8669,公開于PCT公開號WO 03/064383)、依維莫司（Novartis以商品名AfillitOri)銷 售)；
[0180]破骨細胞再吸收抑制劑：1 -羥基-2-咪唑-1 -基-膦酰基乙基）磷酸單水合物 (NovartiS以商品名Zometa?銷售）；
[0181 ] 0)33抗體藥物偶聯物：吉托珠單抗奧唑米星（Gemtuzumab ozogamicin) (Pfizer/ Wyeth以商品名Mylotarg?銷售）；
[0182] CD22抗體藥物偶聯物：Inotuzumab ozogamicin(也稱為CMC-544和WAY-207294,可 獲自Hangzhou Sage Chemical Co. ,Ltd.)；
[οι 83]⑶20抗體藥物偶聯物:替伊莫單抗(商品名Zevalin?)。
[0184]生長抑素類似物：奧曲肽（也稱為醋酸奧曲肽，商品名Sandostatiii?和 SandostatinLAR?);
[0185] 合成白介素 -11 (IL-11):奧普瑞白介素 (Pfizer/Wyeth以商品名Neumega?銷 售)；
[0186] 合成促紅素:達依泊汀a(Amgen以商品名Aranesp?銷售）；
[0187] 核因子KB的受體活化因子(RANK)的抑制劑:地諾單抗(Amgen以商品名ProHa?銷 售)；
[0188] 促血小板生成素模擬物肽體:羅米司亭(Amgen以商品名Nplate⑧銷售）；
[0189] 細胞生長因子刺激物：帕利夫明（Palif ermin) (Amgen以商品名Kepivance?銷 售)；
[0190] 抗胰島素樣生長因子-1受體（IGF-1R)的抗體:Figitumumab(也稱為CP-751，871， 可獲自 ACC Corp)、robatumumab(CAS No .934235-44-6);
[0191] 抗-〇51抗體41〇忉21111^13(!1111^。63^5吣.915296-00-3);
[0192] CD52抗體:阿倫單抗(商品名Campath?);
[0193] CTLA-4抑制劑：替西木單抗(Tremelimumab) (IgG2單克隆抗體，可獲自Pf izer，曾 經稱為 t i c i 1 imumab，CP-675、206 )、伊匹單抗（CTLA-4抗體，也稱為MDX-010，CAS No.477202-00-9)；
[0194] 組蛋白脫乙酰酶抑制劑(HDI) :Voninostat(Merck以商品名Zolmza?銷售）；
[0195] 燒化劑：替莫唑胺（Schering-Plough/Merck以商品名Temodar?和 Temod:a膽銷售）、更生霉素(也稱為放線菌素-D，商品名Cosmegen⑩)、美法侖(也稱為 l-pam、l-苯丙氨酸氮芥和苯丙氨酸氮芥，商品名Alkeran?)、六甲蜜胺(也稱為六甲基蜜 胺（HMM)，商品名Hexalen?)、卡莫司汀（商品名BiGNU?)、苯達莫司?。ㄉ唐访?Treanda?)、白消安（商品名Busulfex? 和Myleran?)、卡鉑（商品名 ParapMtin? )、洛莫司?。ㄒ卜Q為ccnu，商品名CeeNU?)、順鉑（也稱為cddp，商品名Platinol?和 Platinol?-AQ)、苯丁酸氮芥（商品名Leukeran?)、環(huán)磷酰胺（商品名Cytoxan?和 Neosar?)、達卡巴嗪（也稱為dtic、dic和咪唑甲酰胺，商品名DTIC-Dome?)、六甲蜜 胺(也稱為六甲基蜜胺(hmm)，商品名Hexaten?)、異環(huán)磷酰胺(商品名Ifex逸）、丙卡巴肼 (商品名Matulane?)、雙（氯乙基）甲胺（也稱為氮芥、鹽酸氮介和雙（氯乙基）甲胺鹽酸 鹽，商品名Mustargen? )、鏈脲霉素（商品名Zanosar? )、塞替派（也稱為 thiophosphoamide、TESPA和TSPA，商品名 Thiop丨e~X?);
[0196] 生物響應調節(jié)劑：卡介苗（bacillus calmette-guerin)(商品名theraCyS?和 TICE.⑩BCG)、地尼白介素 (denileukin diftitox)(商品名Onta.k?);
[0197] 抗腫瘤抗生素 :阿霉素（商品名Adriamycin?和：Rubex?)、博來霉素(商品名 lenoxane?)、柔紅霉素（稱為鹽酸道諾霉素、道諾霉素和鹽酸紅必霉素，商品名 Ceru bidine⑧）、柔紅霉素脂質體(梓檬酸柔紅霉素脂質體，商品名DaunoXome?)、米 托蒽醌(也稱為DHAD，商品名]N0Vantr〇ne? :)、表柔比星(商品名E11 ence?)、伊達比星(商 品名Idaraycin? vidamycinPFS?)、絲裂霉素 c(商品名Mutamyein⑧）；
[0198]抗微管藥物:雌莫司汀(商品名Emc》丨⑧）；
[0199] 組織蛋白酶K抑制劑：奧當卡替（Odanacatib)(也稱為MK-0822，N-(1-氰基環(huán)丙 基)-4-氟-N 2- {(1S) -2，2，2-三氟-1 - [ 4 ' -(甲基磺?；?聯苯-4-基]乙基} -L-亮氨酰胺，可 獲自Lanzhou Chon Chemicals，ACC Corp.和ChemieTek，公開于PCT公開號W0 03/075836);
[0200] 埃博霉素 B類似物：伊沙匹?。˙r i s tο 1 -Myer s Squ i bb以商品名Lxempra?銷 售)；
[0201] 熱休克蛋白（HSP)抑制劑:坦螺旋霉素(TaneSpimycin)(17-烯丙基氨基-17-脫甲 氧基格爾德霉素，也稱為K0S-953和17-AAG，可獲自SIGMA，公開于美國專利號4，261，989);
[0202] 了口〇1?激動劑：艾曲波帕（6]^〇51]1；[1:111(1;[116以商品名卩獷0.111.3€^#和1^辨0:13(16? 銷售）；
[0203] 抗有絲分裂藥物:多西他賽(Sanof i-Aventis以商品名TaXOtere?銷售）；
[0204] 腎上腺皮質類固醇抑制劑:魯米特(商品名Cytadreni));
[0205] 抗雄激素:尼魯米特(商品名為Nilandron?和Anandron?.)、比卡魯胺(商品 名為Casodex?)，氟他胺(商品名Fulexin?);
[0206] 雄激素：甲睪酮(商品名Halotestin?);
[0207] 蛋白酶體抑制劑:硼替佐米(商品名Vekade?);
[0208] CDK1 抑制劑：Alvocidib(也稱為 flovopirdol 或 HMR-1275,2-(2-氯代苯基）-5,7-二羥基_8_[ (3S，4R)-3_羥基-1-甲基_4_哌啶基]-4-chromenone，公開于美國專利號5,621， 002)；
[0209]促性腺激素釋放激素(GnRH)受體激動劑:亮丙瑞林或醋酸亮丙瑞林(Bayer AG以 商品名Viadure⑧銷售，Sanofi-Aventor以商品名..Eligard?銷售，Abbott Lab以商品名 lupron?銷售）；
[0210]紫杉烷抗腫瘤劑：卡巴他賽（1-羥基-7β，10β-二甲氧基-9-氧代-5β，20-環(huán)氧紫杉 (tax)-ll-烯-2α，4，13α-三基-4-乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-[(2R，3S)-3_{[(叔-丁氧基)羰 基]氨基}-2-羥基-3-苯基丙酸酯）、larotaxel ((2α，3ξ，4α，5β，7α，1〇β，13α)-4，10-二（乙酰 基氧基)_13-( {(2R, 3S)-3_[(叔-丁氧基幾基)氨基]-2_羥基-3_苯基丙?；鶀氧基)-1_輕 基-9-氧代-5，20-環(huán)氧基-7，19-環(huán)紫杉-11-烯-2-基苯甲酸酯）；
[0211] 5HTla 受體激動劑:Xaliproden(也稱為 SR57746，l-[2-(2-萘基）乙基]-4-[3-(三 氟甲基)苯基]-1，2,3,6-四氫吡啶，公開于美國專利號5,266,573);
[0212] hpc 疫苗:GlaxoSmithKline 以 Cervarix? 銷售，Merck 以 Gardasi 勵銷售；
[0213]鐵螯合劑:Deferasinox(Novartis 以商品名 Exjade? 銷售）；
[0214] 抗代謝物:Claribine (2-氯代脫氧腺苷，商品名leilStatin?)、5-氟尿嘧啶（商品 名Adrucfl?)、6-硫鳥嘌呤（商品名PURINETHOL?)、培美曲塞（商品名Alimta? )、阿糖胞苷(也稱為阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(Ara-c)，商品名Cytosar-U?)、阿糖胞苷脂 質體(也被稱為脂質體Ara-C，商品名DepoCyt?)、地西他濱（商品名Dacogell?)、羥基脲 (商品名Hydrea?、Dr〇xia?和My loce 1?)、氟達拉濱(商品名F'ludara⑧）、氟尿苷(商品 名FUDR?)、克拉屈濱(稱為2-氯代脫氧腺苷(2-CdA)，商品名Leustatin?)、甲氨蝶呤(也 稱為氨甲蝶呤、甲氨蝶呤鈉(mtx)，商品名Rheumatrex?和Trexai 1?)、噴司他?。ㄉ唐?名 Nipen應)）；
[0215] 雙膦酸鹽:帕米膦酸(商品名Aredi祕)）、唑來膦酸(商品SZometa?);
[0216]脫甲基化藥物：5-氮雜胞苷（商品名Vidaza?)、地西他濱（以商品名 Dacogen?)；
[0217]植物生物堿:紫杉醇蛋白結合物(商品名Abraxane?)、長春堿(也稱為硫酸長春 堿、長春花堿和vlb，商品名A:lkal>an_AC3?和Velban?)、長春新堿(也稱為硫酸長春新 堿，lcr和vcr，商品名為Oncovin?和Vincasar Pfs?)、長春瑞濱（商品名N ave丨bine? )、紫杉醇、（商品名Taxol和Onxal?);
[0218] 維甲酸類：阿利維甲酸（商品名Panretin?)、維甲酸（全反式視黃酸酸，也稱為 A τ R A，商品名Ve.sa_n.oid? )、異維甲酸（1 3 -順式-視黃酸，商品名 Accutane?、 /Vmnesteem⑧、Claravis?、 Clarus?、 Decuta"?、 Isotane?、Izotech?、Oratane?、Isotret? 和 Sotret?)、貝沙羅?。ㄉ唐访?Targretin?);
[0219] 糖皮質類固醇:氫化可的松(也稱為可的松、氫化可的松琥珀酸鈉、氫化可的松磷 酸鈉，商品名 Ala-Cort?,氫化可的松磷酸鹽，S:〇lu-Oortef?、Hydr〇c〇rt Acetate? 和 Lanacort?)、地塞米松（（8S，9R，10S，llS，13S，14S，16R，17R)-9-氟-ll，17-二羥基-17-(2-羥基乙?；?-10,13,16-三甲基-6,7，8,9,10,11，12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環(huán)戊 二烯并[a]菲-3-酮）、潑尼松龍(商品名 Delta-Cortel?、Orapred⑧、Pediapred? 和.Prelone?)、潑尼松（商品名 Deltasone.?、L i q u i d Red?.、. Meticorten? 和 Orasone?)、甲潑尼龍(也稱為6-甲基潑尼松龍、潑尼松龍乙酸甲酯、甲潑尼松龍琥珀酸 鈉，商品名 Duralone?、Medralone?、Medrol:?、M-Prednfcol? 和 Solu-Medrol?)；
[0220] 細胞因子：白介素 -2 (也稱為阿地白介素和il-2，商品名ProleuMn?)、白介素- 11(也稱為oprevelkin，以商品名Neumega? )、α -干擾素（也稱為IFN-α，商品名 Intron? A和 R〇feron-A?);
[0221 ]雌激素受體下調劑:氟維司群(商品名Faslodex?);
[0222] 抗雌激素:他莫昔芬(商品名Novaldex?)、托瑞米芬(商品名Fareston?);
[0223] 選擇性雌激素受體調節(jié)劑(SERMs):雷洛昔芬(商品名Evista?);
[0224] 促黃體生成激素釋放激素 (LHRH)激動劑:戈舍瑞林(商品名Zoladex⑧)；
[0225] 孕酮：甲地孕酮(也稱為醋酸甲地孕酮，商品名Megace?);
[0226] 混雜的細胞毒類藥物:三氧化二砷（商品名Trisenox?)、天冬酰胺酶(也稱為L-門冬酰胺酶，歐文氏菌屬L-門冬酰胺酶，商品名Elspar?和Kidro丨ase?);
[0227] 式（I)化合物也可以與下列聯合療法組合使用：
[0228] 抗惡心藥物:NK-1受體詰抗劑:卡索匹坦(GlaxoSmithKline以商品名Rezonk'? 和Zunrisa?銷售）；和
[0229] 細胞保護劑:氨磷汀(商品名Ethyol?)、亞葉酸(也稱為甲酰四氫葉酸鈣，嗜橙菌 因子和亞葉酸）。
[0230]在本公開中引用的參考文獻條目不應當理解為承認引用的文獻是能夠對本發(fā)明 專利性有負面影響的現有技術。
[0231 ]本發(fā)明化合物的制備方法
[0232] 本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的制備方法。在所述反應中，有必要對需要最終產物 中存在的反應性官能團加以保護，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基，以避免其不必要地 參與反應。常規(guī)的保護基團可以根據標準實踐使用，例如參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts， "有機化學中的保護基團"，John Wiley and Sons,1991。
[0233] 式I化合物可以根據下面的反應流程I制備：
[0234] 反應流程I:
[0236] 111、？、￥1、￥2、￥3、1? 1、1^、1^、1^、1^、1^、1^、1^和1^如本發(fā)明概述中式1所定義，0為 鹵素（如溴)或硫醇、硼酸酯或錫酸酯，使其與化合物5中的鹵素反應，X為反應性基團，使其 與Q(例如硼酸酯、錫烷、醇、硫醇、鹵素等)反應。于室溫下，或者在加熱或微波條件下，在有 或無過渡金屬存在下，在適當的酸或堿條件下，通過使得化合物2與化合物3反應，可以制備 化合物4?；蛘撸衔?的鹵素可以被其它鹵素或適當的活化基團代替，所述活化基團例如 三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、全氟丁基磺酸酯基(nonaflates)、硼酸酯基 (boronates)、有機金屬錫燒、有機金屬甲娃烷基、有機金屬鋅、鋰、鎂等。
[0237] 式I化合物可以通過使得化合物4與適當的偶合配對物（例如化合物5)根據X的性 質反應制備。例如，如反應流程I所示，化合物5顯示為通過X連接的取代的苯基。或者，化合 物5可以是芳基醇、芳基硫代、芳基硼酸酯、芳基錫酸酯、雜芳基醇、芳基硫醇、雜芳基硫醇、 芳基硼酸酯、芳基-錫烷、烯烴或其它芳基-金屬或雜芳基金屬等。偶合配對物也可以被取 代。該反應可以在適當的酸或堿性條件下、在有或無過渡金屬如鈀存在下、于室溫下或者在 加熱或微波條件下進行。也可以采用其它鹵素或適當的活化基團（例如三氟甲磺酸酯基、甲 磺酸酯基、甲苯磺酸酯基和全氟丁基磺酸酯基)代替Br進行這些轉化。
[0238] 或者，偶合配對物可以是相反的，可以將化合物2衍生為錫烷、硼酸酯、有機鋅、有 機鋰、有機鎂、有機硅、有機酮酸鹽，與適當的芳基-鹵化物、雜芳基-鹵化物、烯烴或適當的 反應性官能團（例如三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基和全氟丁基磺酸酯基)等 偶合。
[0239] 這些反應可以按所述順序進行，或者以相反順序進行，在各種溶劑、溫度、壓力和 適當的環(huán)境中進行。該反應可以在酸、堿和/或過渡金屬條件下進行。
[0240]式I化合物的合成的詳細示例可以參考下面的實施例。
[0241 ]制備本發(fā)明化合物的其它方法
[0242] 通過使得游離堿形式的化合物與藥學上可接受的無機或有機酸反應，可以將本發(fā) 明化合物制備為藥學上可接受的酸加成鹽。或者，通過使得游離酸形式的化合物與藥學上 可接受的無機或有機堿反應，可以制備本發(fā)明化合物的藥學上可接受的堿加成鹽。
[0243] 式I化合物也可以通過附加適當的官能團而修飾以提高選擇性的生物學性質。此 類修飾在本領域中是已知的，包括增加進入給定生物系統(tǒng)（如血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經系 統(tǒng)、睪丸）的滲透、增加生物利用度、增加溶解度以使得可以腸胃外給藥(如注射、輸注）、改 變代謝和/或改變分泌速率。此類修飾的示例包括但不限于:例如采用聚乙二醇的酯化，采 用新戊酰氧基或脂肪酸取代基的衍生化，轉化為氨基甲酸酯、芳環(huán)的羥基化和芳環(huán)中雜原 子的取代。無論何時提及式I化合物和/或其N-氧化物、其互變異構體和/或(優(yōu)選藥學上可 接受的）鹽時，均應當包括該修飾的結構式，并且優(yōu)選式I分子、其N-氧化物、其互變異構體 和/或其鹽。
[0244]或者，鹽形式的本發(fā)明化合物可以采用原料或中間體的鹽制備。考慮到新的式I化 合物的游離形式與其鹽形式(包括那些可以用作中間體的鹽，例如在新化合物純化或鑒別 中使用的）的密切聯系，如果適當和便利的話，在上下文中對無論何時提及I化合物均應當 理解為既是指該化合物的游離形式和/或也是指其一或多種鹽以及一或多種溶劑化物，例 如水合物。
[0245]優(yōu)選采用無機或有機酸與具有堿性氮原子的I化合物形成鹽，例如酸加成鹽，特別 是藥學上可接受的鹽。適當的無機酸為例如鹵酸如鹽酸、硫酸或磷酸。適當的有機酸為例如 羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富馬酸、 琥珀酸、丙二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、氨基酸(如谷氨 酸或天冬氨酸）、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、環(huán)己烷羧酸、金剛烷羧酸、苯甲酸、水楊 酸、4-氨基水楊酸、鄰苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲-或乙-磺酸、2-羥基乙磺酸、乙 烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、4-甲苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-或3-甲基苯磺酸、甲基硫 酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-環(huán)己基氨基磺酸，N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸，或 者其它有機質子酸，如抗壞血酸。
[0246] 為了分離或純化的目的，也可以采用藥學上不接受的鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸 鹽。為了治療的用途，只能使用藥學上可接受的鹽或游離化合物（當以藥物制劑的形式應用 時），因此，優(yōu)選上述鹽。
[0247] 游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可以分別制備自相應的堿加成鹽或酸加成 鹽形式。例如，酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物可以通過用適當的堿(如氫氧化銨溶液、氫氧 化鈉等)處理轉化為相應的游離堿。堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物可以通過采用適當的酸 (例如鹽酸等)處理而轉化為相應的游離酸。
[0248] 在適當的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、二氧六環(huán)水溶液等）中、于0 - 80 °C，通過 采用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理， 可以自本發(fā)明化合物的N-氧化物制備未氧化形式的本發(fā)明化合物。
[0249] 本發(fā)明化合物的前藥衍生物可以根據本領域技術人員已知的方法制備(例如，詳 細方法可以參考Saulnier等（1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,第4 卷，第1985頁）。例如，通過使得非衍生化的本發(fā)明化合物與適當的氨甲?；瘎?例如1，1-酰 氧基烷基甲酰氯、對-硝基苯基碳酸酯等)反應，可以制備適當的前藥。
[0250] 本發(fā)明化合物的被保護的衍生物可以根據本領域技術人員公知的方法制備。用于 保護基團的引入和脫除的技術的詳細描述可參見T.W.Greene的"有機化學中的保護基團 (Protecting Groups In Organic Chemistry )''，第3版，John Wiley And Sons , Inc ., 1999〇
[0251] 本發(fā)明化合物可以作為溶劑化物(例如水合物)在本發(fā)明工藝過程中方便地制備 或形成。本發(fā)明的水合物可以通過在水/有機溶劑混合物中重結晶而方便地制備，采用的有 機溶劑例如二噁英、四氫呋喃或甲醇。
[0252] 本發(fā)明化合物可以通過如下方法制備為其單一立體異構體:使得化合物的外消旋 混合物與光學活性的拆分劑反應，形成一對非對映異構體化合物，分離該非對映異構體，回 收光學純的對映體。盡管對映體的拆分可以采用本發(fā)明化合物的共價非對映異構體衍生物 進行，但是優(yōu)選可解離的復合物(例如結晶的非對映異構體鹽）。非對映體具有不同的物理 性質(例如熔點、沸點、溶解度、反應性等），通過利用這些不同可以容易地分離。非對映體可 以通過色譜法來分離，或者優(yōu)選通過基于溶解度的差異的分離/拆分技術。然后，旋光純的 對映體以及拆分劑可以通過不會導致外消旋化的任何實用方法而回收。適用于化合物的立 體異構體與其外消旋混合物的拆分技術的更詳細說明可以參見J e a n J a c q u e s，A n d r e Collet，Samuel H.Wilen，"對映體、外消旋體和拆分（Enantiomers，Racemates and Resolutions)''，John Wiley and Sons，Inc ·，1981 〇
[0253] 總之，式I化合物可以通過包括下列步驟的方法制備：
[0254] (a)反應流程I的方法;和
[0255] (b)任選將本發(fā)明化合物轉化為藥學上可接受的鹽；
[0256] (c)任選將鹽形式的本發(fā)明化合物轉化為非鹽形式；
[0257] (d)任選將未氧化形式的本發(fā)明化合物轉化為藥學上可接受的N-氧化物；
[0258] (e)任選將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉化為未氧化形式；
[0259] (f)任選自異構體混合物拆分本發(fā)明化合物的單獨的異構體；
[0260] (g)任選將非衍生化的本發(fā)明化合物轉化為藥學上可接受的前藥衍生物;和
[0261 ] (h)任選將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉化為其非衍生化形式。
[0262] 如果原料的生產沒有特別描述，則該化合物為已知的，或者可以根據類似于本領 域已知的方法或下文實施例中公開的方法制備。
[0263] 本領域技術人員應當理解，上述轉化僅僅是本發(fā)明化合物制備方法的代表，同樣 可以采用其它眾所周知的方法。 實施例
[0264] 下面的實施例和中間體用于闡述本發(fā)明而非對其范圍加以限定。在實施例中使用 的某些縮寫如下：乙酸(AcOH);三乙胺(TEA);四氫呋喃(THF);水的(aq.);大氣壓(atm.);2， 2'-聯-二苯基磷基-[1，Γ ]聯萘(BINAP) ;4_二甲基氨基吡啶(DMAP);叔-丁氧基羰基(Boc); 1，1-羰基二咪唑(⑶I);二碳酸二-叔-丁基酯(B0C20);苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨 基）_膦鑰六氟磷酸鹽(Β0Ρ);二氯甲烷(DCM);乙醚(Et 20);對-甲苯磺酸（PTSA);乙酸乙酯 (EtOAc);乙醇（EtOH);二（三甲基甲硅烷基）氨化鋰（LHMDS);偶氮二甲酸二異丙基酯 (DIAD) ;N，N-二異丙基-乙基胺（DIEA或DIPEA) ;N，N-二甲基甲酰胺（DMF);二甲基亞砜 (DMS0);二苯基磷?；B氮化物(DPPA);小時(h); 2-( 1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鑰六氟磷酸鹽（HATU);高效液相色譜（HPLC);氫化鋁鋰（LAH);液相色譜-質譜 (LCMS);二異丙基氨化鋰(LDA);甲醇(MeOH);毫升(mL);分鐘(min);微波(MW);正-丁基鋰 (n-BuLi); 1，1-二（二苯基膦基）-二茂鐵二氯化鈀（II) (PdCl2(dppf));三（二亞芐基丙酮） 二鈀(0)(Pd2(dba) 3);二氯代二(三苯膦)鈀（II)(PdCl2(PPh3)2);室溫(RT);三氟乙酸（TFA); 四氫呋喃(THF);薄層色譜(TLC);保留時間（t R);和4，5-二(二苯基膦基)-9，9-二甲基咕噸 (Xantophos)〇
[0265] 中間體1
[0266] 2-( 2，3-二氯代-5-甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜環(huán)戊硼烷
[0268] 步驟a:將1-溴-3-氯代-5-甲氧基苯(835mg，3.77mmol)和1，3，5-三氯代-1，3，5-三 嗪-2，4，6-三酮（299mg，1.29_〇1)的DMF( 18mL)溶液于N2和50°C攪拌16h。冷卻至室溫后，將 反應混合物用NH4C1水溶液稀釋，用Et 20萃取。合并的有機相經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，獲得 的殘留物通過硅膠色譜純化(0 - 25%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得1-溴-2,3-二氯代-5-甲氧基苯（72〇11^，2.81111111〇1)。1!1匪1?(4001抱，氯仿-(1)3 ??1117.14((1，了 = 2.76!^，1!〇,7.01 (d ,J = 3.01Hz,lH),3.81(s,3H)〇
[0269] 步驟b:將卜溴-2,3-二氯代-5-甲氧基苯（710mg，2.77mmol)、4,4,4'，4'，5,5,5'， 5'-八甲基-2,2'_二（1，3,2_二氧雜環(huán)戊硼烷）（775mg，3.05mmol)、乙酸鉀（817mg， 8.32mmol)和PdCl2(dppf) (lOlmg，0.139mmol)在二氧六環(huán)(5.5mL)中的混懸液在微波反應 器中于100°C攪拌lh，獲得目標化合物，為二氧六環(huán)的溶液，其可以直接用于Suzuki-Miyaura偶合反應。
[0270] 中間體2
[0271] (1-(4-氨基-5-溴嘧啶-2-基)-4_甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0273] 將5-溴-2-氯代嘧啶-4-胺(65〇11^，3.12111111〇1)、（4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁 基酯（835mg，3.90mmol)和4-甲基嗎啉（411yL，3.74mmol)的NMP(6.25mL)溶液在微波反應器 中于130°C攪拌90min。將獲得的殘留物倒入水（100mL)，于室溫下攪拌5min。過濾形成的固 體，高真空干燥16h，獲得（1-(4-氨基-5-溴嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁 基酯（88〇1^，2.28臟〇1)。]\^111/2 387.3(]\1+!〇 +。
[0274] 中間體3
[0275] (3-溴-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-丨-基)吡嗪-2-基）（叔-丁氧基 羰基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0277] 步驟a:將3-溴-6-氯代吡嗪-2-胺（10 · Og，48 · Ommol)、DMAP(2 · 99g，24 · 47mmol)和 二碳酸二-叔-丁基酯（26.2g, 120mmol)的DCM(96mL)溶液于室溫下攪拌16h。將反應混合物 用鹽水稀釋，用EtOAc萃取。合并的有機相經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，獲得的殘留物通過硅 膠色譜純化(0 - 30 %的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得(3-溴-6-氯代吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯（18.778,45.9臟〇1)。 1!1匪1?(4001抱，氯仿-(1)3??1118.36(8，1!〇，1.45(8，18!〇。
[0278] 步驟b:將(3-溴-6-氯代吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯（11 · 9g，29 · lmmol)、（4-甲 基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯（12.48g，58.2mmol)和4-甲基嗎啉(3.84mL，34.9mmol)的 NMP (58mL)溶液于90 °C攪拌16h。冷卻至室溫后，將反應混合物倒入H20 (300mL)中，過濾形成 的固體。將該固體進一步通過硅膠色譜純化（〇 - 30 %的EtOAc/庚烷（含有0.25 % v/v的 Et3N)梯度洗脫），獲得(3-溴-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基）吡嗪-2-基）（叔-丁氧基羰基)氨基甲酸叔-丁基酯（80%的純度）。將該化合物進一步通過硅膠色譜 純化(0 - 7%的EtOAc/DCM(含有0.25%v/v的Et3N)梯度洗脫），獲得(3-溴-6-(4-((叔-丁氧 基羰基）氨基）-4_甲基哌啶-1-基）吡嗪-2-基）（叔-丁氧基羰基）氨基甲酸叔-丁基酯 (7.02g,11.97mmol)〇MS m/z 586.5(M+H)+〇
[0279] 中間體4
[0280] (1-(6-氨基-5-溴吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0282] 將(3-溴-6-氯代吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯(8.1848,20.03臟〇1)、（4-甲基哌 啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯(8.58g，40. lmmo 1)和4-甲基嗎啉(2.64mL，24.03mmo 1)的NMP (50mL)溶液于150°C攪拌16h。冷卻至室溫后，將反應混合物采用NaHC03水溶液稀釋，用Et20 萃取。合并的有機相經硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(4 一 40 % 的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得（1-(6-氨基-5-溴吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸 叔-丁基酯（1.629 8,4.01臟〇1)。]\^111/2 388.0(]\1+!〇 +。
[0283] 中間體5
[0284] 3-溴-6-( (3S，5R)-3，5-二甲基哌嗪-卜基)吡嗪-2-胺
[0286] 將 3-溴-6-氯代吡嗪-2-胺（250mg，l. 199mmol)和（23,61〇-2,6-二甲基哌嗪 (151mg，1 · 319mmol)的DIPEA( 1 · 5mL,8· 59mmol)懸浮液于130°C攬摔16h。冷卻至室溫后，減 壓除去揮發(fā)物，將獲得的固體懸浮于H20中，過濾，固體進一步通過HPLC純化(35 -60%的乙 腈水溶液梯度洗脫，5mMNH4〇H改性），獲得3-溴-6-( (3S，5R)-3，5-二甲基哌嗪-1-基）吡嗪- 2- 胺（40 · Omg，0 · 140mmo 1) JS m/z (M+H) +287 · 0。
[0287] 中間體6
[0288] 6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2，3-二氯代苯基)吡嗪-2-胺
[0290] 將 3-溴-6-氯代吡嗪-2-胺（1.28,5.76111111〇1)、（2,3-二氯苯基）硼酸（1.1 8， 5 · 76mmo 1)、磷酸鉀（3 · 67g，17 · 27mmo 1)和PdCl2 (dppf) · DCM加合物（235mg，0 · 288mmo 1)的 MeCN: H20 (9:1，15mL，脫氣的）懸浮液在微波反應器中于120 °C攪拌4h。冷卻至室溫后，反應 物通過硅藻土墊過濾，隨后通過EtOAc (25mL)洗滌。濃縮合并的濾液，獲得的殘留物通過硅 膠色譜純化(0 - 30%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2， 3- 二氯代苯基）吡嗪-2-胺（6331^，2.306_〇1)。]\^111/2 276.4(]\1+!〇 +。
[0291] 中間體7
[0292] (丨-(5-氨基-6-溴-丨，2，4-三嗪-3-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0293]
[0294] 步驟a:將6-氮雜尿嘧啶（1 · Og，8 · 84mmol)、P0C13(lOmL，107mmol)和N，N-二甲基苯 胺(2mL，1.784mmo 1)的溶液在微波反應器中于90°C攪拌25min。冷卻至室溫后，將反應物倒 入含有庚烷(200mL)的燒瓶中，于室溫下攪拌5min，分離相。將該過程重復二次(每次200mL 庚烷）。將庚烷通過硅藻土和MgS04墊過濾，減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物采用于0°C預冷 的NH 3(7N的MeOH溶液，5mL溶于10mL的MeOH中）處理。將混合物于室溫下攪拌5min，除去揮發(fā) 物，獲得氯代，2，4_二嗪_5_胺(200mg，17.3%的收率）。該化合物無需進一步純化可以 直接用于下一步驟。
[0295] 步驟b:將3-氯代-1，2，4-三嗪-5-胺（165mg，1 · 264mmol)、（4-甲基哌啶-4-基)氨基 甲酸叔-丁基酯（271mg，1 · 264mmol)和4-甲基嗎啉（208yL，1 · 896mmol)的NMP(5mL)溶液在微 波反應器中于130°C攪拌3h。冷卻至室溫后，獲得的殘留物通過HPLC純化（15 - 40%的乙腈 水溶液梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得（1-(5-氨基-1，2，4-三嗪-3-基）-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯（71.〇1^，0.23臟〇1)。]\^111/2 308.4(]\1+!〇 +。
[0296] 步驟c :將0-(5-氨基-^,4-三嗪-3-基)-4_甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯 (71mg，0.230mmol)和 NBS(41mg，0.230mmol)的 CHCl3(2mL)溶液于室溫下攪拌 16h。減壓除去 揮發(fā)物，獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(〇 - 5 %的MeOH(含有1 % NH3) /DCM梯度洗脫），獲 得（1_(5-氨基-6-溴-1，2，4-三嗪-3-基）-4-甲基哌啶-4-基）氨基甲酸叔-丁基酯（87mg， 0.23mmol)〇MS m/z 387.3(M+H)+〇
[0297] 中間體8
[0298] ((4-丙基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0300]步驟a:向N，N-二異丙基胺（14.〇11^，97.5111111〇1)的1'冊（10〇11^)溶液中滴加（于-78 °C、N2環(huán)境中）正-丁基鋰（1.6M的己烷溶液;59. OmL，94.25mmol)。將獲得的混合物于室溫下 攪拌30min。于-78°C加入1-芐基哌啶-4-甲腈(6.58,32.5臟〇1)的1'冊(5〇1^)溶液。于此溫度 下攪拌30min后，加入正-丙基碘(20.5mL，211.3mmol)。獲得的混合物于_78°C攪拌lh。混合 物通過加入飽和的氯化銨水溶液驟冷，將其用EtOAc萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，經硫 酸鈉干燥，過濾并濃縮，獲得1-芐基-4-丙基哌啶-4-甲腈(6.0g，24.8mmol)。該化合物無需 進一步純化可以直接使用。MS m/z 243(M+H) +。
[0301 ]步驟b :于0°C 向 1-芐基-4-丙基哌啶-4-甲腈（1 · 0g，4 · lmmol)、B〇C2〇(2 · 84mL， 12.4111111〇1)和附(：12.6!120(0.1958,0.82111111〇1)的]\^0!1(2011^)懸浮液中分次加入硼氫化鈉 (1. Og，28.9mmol)。將獲得的混合物于室溫下攪拌12h。減壓除去揮發(fā)物。將獲得的殘留物溶 于DCM，通過硅藻土過濾，減壓除去揮發(fā)物。獲得的殘留物通過硅膠色譜純化（0 - 15%的 EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得（（1-芐基-4-丙基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(0.8g， 2.3mmol)〇MS m/z 347(M+H)+〇
[0302] 步驟c:將（（1-芐基-4-丙基哌啶-4-基）甲基）氨基甲酸叔-丁基酯（5.0g， 14.4mmol)和10%Pd/C(2g)的MeOH(lOOmL)懸浮液在H 2(采用氣囊)環(huán)境下、于室溫下劇烈攪 拌4h。將混合物通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌。減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物在戊烷中研 磨，獲得（（4-丙基哌啶-4-基）甲基）氨基甲酸叔-丁基酯（2.7g，10.5mmol)，為白色粉末。4 Mffi(400MHz，DMS0-d6)S6.68(m，lH)，2.87(d，J=6.4Hz，2H)，2.69-2.53(m，4H)，1.38(s， 9H),1.18(m,8H),0.84(q,J = 5.9Hz,3H)〇MS m/z 257(M+H) + 〇
[0303] 中間體9
[0304] 2-( (4-(吡啶-3-基）哌啶-4-基）甲基）異吲哚啉-1,3-二酮
[0305]
[0306] 步驟a:于0°C，10分鐘內向氫化鈉(60%的礦物油分散液，1.487gmg，37.2mmol)的 DMF(25mL)懸浮液中滴加2-(吡啶-3-基）乙腈（1.5378，13.01臟〇1)的01^(51^)溶液。將獲得 的混合物于〇°C攪拌30min。于0°C加入二（2-氯代乙基）氨基甲酸叔-丁基酯（3.0g， 12.39mmo 1)的DMF (5mL)溶液，將獲得的混合物于0 °C攪拌15min，于75 °C攪拌16h。冷卻至室 溫后，將反應混合物用NaHC03aq.稀釋，用Et20萃取。合并的有機相經硫酸鎂干燥，過濾，濃 縮，將獲得的殘留物通過硅膠色譜純化（10 - 80 %的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得4-氰基-4-(吡啶-3-基）哌啶-1-甲酸叔-丁基酯（2.588,8.98!11111〇1)。 1!1匪1?(40(^他，氯仿-(1)3??111 8.69(d，J = 2.02Hz，lH)，8.55(dd，J = 4.80，1.52Hz，lH)，7.68-7.81(m，lH)，7.30(ddd，J = 8.08,4.80,0.76Hz,lH),4.25(br.s.,2H),3.15(br.s.,2H),2.06(d,J=11.87Hz,2H), 1.81-1.98(m,2H),1.42(s,9H)〇
[0307] 步驟b:于室溫下，向4-氰基-4-(吡啶-3-基）哌啶-1-甲酸叔-丁基酯（l.Og， 3 · 48mmol)的Me0H(30mL)溶液中加入C0CI2 · 6H2〇(828mg，2 · 38mmol)和硼氫化鈉（658mg， 17.40_〇1)。將獲得的混合物于室溫下攪拌lh。減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過硅膠色 譜純化(0 -15%的MeOH/DCM梯度洗脫），獲得4-(氨基甲基)-4-(吡啶-3-基）哌啶-1-甲酸 叔-丁基酯（6831^，2.344臟〇1)。]\^111/2 292.2(]\1+!〇 +。
[0308] 步驟c:將4-(氨基甲基）-4-(吡啶-3-基）哌啶-1-甲酸叔-丁基酯（683mg， 2 · 344mmo 1)、鄰苯二甲酸酉干（434mg，2 · 93mmol)、活化的分子篩（3埃，500mg)和DIPEA (1 · 23mL，7 · 03mmo 1)的甲苯（12mL)懸浮液于105 °C攪拌16h。冷卻至室溫后，將混合物通過娃 藻土墊過濾，用EtOAc(lOmL)洗滌。減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(0 - 10%的MeOH/DCM梯度洗脫），獲得4-(α，3-二氧代異吲哚啉-2-基）甲基)-4-(吡啶-3-基)哌 啶-1-甲酸叔-丁基酯（640mg，1.518mmol)〇MS m/z 422·3(Μ+Η) +〇
[0309] 步驟d:將4-((1,3-二氧代異吲哚啉-2-基）甲基)-4-(吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯（640mg, 1.518mmol)和 HC1 (4M 的二氧六環(huán)溶液，1.9mL, 7.59mmol)的二氧六環(huán)(20mL) 溶液于室溫下攪拌16h。減壓除去揮發(fā)物，獲得目標化合物的HC1鹽(543mg，1.518mmol) JS m/z 322.2(M+H)+〇
[0310] 中間體10
[0311] ((4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯 「03121
[0313] 步驟a:于0°C，10分鐘內向氫化鈉(60 %的礦物油分散液，1 · 90g，47 · 7mmol)的DMF (30mL)懸浮液中滴加2-(吡嗪-2-基）乙腈（1.90g，15.90mmo 1)的DMF (5mL)溶液。將獲得的混 合物于0 °C攪拌30min。于0 °C加入N-芐基-2-氯代-N- (2-氯代乙基）乙胺(4.7g，17.5mmo 1)的 DMF (5mL)溶液，將獲得的混合物于0 °C攪拌15min，于90 °C攪拌16h。冷卻至室溫后，反應混合 物用NaHC03aq.稀釋，用EtOAc萃取(3 X 25mL)。合并的有機相經硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，獲 得的殘留物通過用己燒研磨，獲得1-芐基-4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-甲腈(1.60g，5.76mmol)。
[0314] 步驟b:于室溫下，向1-芐基-4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-甲腈（1 · 50g，5.39mmol)的服3 (7N的MeOH溶液，50mL)溶液中加入雷氏鎳(750mg)。將獲得的懸浮液于室溫下、H2 (60psi)環(huán) 境中攪拌直到原料消失（16h)。將反應混合物通過硅藻土墊過濾，隨后用MeOH( 50mL)洗滌。 減壓除去揮發(fā)物，獲得(1-芐基-4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-基）甲胺(1.20g，4.25mmol)，其無需 進一步純化可以直接用于下一步驟。MS m/z 319(M+H) +。
[0315] 步驟c:將（卜芐基-4-(吡嗪-2-基）哌啶-4-基）甲胺（1.20g，4.25mmol)、Et3N (1 · 17mL，8 · 5 lmmo 1)和B0C2O (1 · 95mL，8 · 5 lmmo 1)的DCM( 50mL)溶液于室溫下攪拌2h。將反應 物用水稀釋，將其用DCM萃取(3X25mL)。合并的有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥，過濾，減 壓除去揮發(fā)物。獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(〇 -100%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得 ((1-芐基-4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯（1 · 30g，3 · 40mmol) JS m/z 383(M+H)+〇
[0316] 步驟d:將（（1-芐基-4-(吡嗪-2-基)哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯（1.50g， 3.93mmo 1)和Pd(0H) 2 (20 %在碳上，600mg，50 %的濕度）的Me0H( 20mL)懸浮液于室溫下、H2 (50psi)環(huán)境中劇烈攪拌3h。將反應混合物通過硅藻土墊過濾，隨后用Me0H(50mL)洗滌。減 壓除去揮發(fā)物，獲得（（4-(吡嗪-2-基）哌啶-4-基）甲基）氨基甲酸叔-丁基酯（1.10g， 3.76mmol)，其無需進一步純化可以直接使用。MS m/z 283(M+H) +。
[0317] 下列中間體可以根據上述方法或上述方法的改良方法采用可獲自商業(yè)的雜芳族 臆制備。
[0318] 表1
[0320] 中間體13
[0321 ] 外消旋反式-4-氨基-4-甲基哌啶-3-醇.
[0323] 步驟a:根據Grishina等，Russian Journal of Organic Chemistry,第41 卷，第2 期，2005中所述方法，將得自商業(yè)的1-芐基-4-甲基-1，2，3，6-四氫吡啶轉化為外消旋的3-芐基-6-甲基_7_氧雜_3_氣雜雙環(huán)[4.1.0]庚燒。
[0324] 步驟b:向0°C的外消旋3-芐基-6-甲基-7-氧雜-3-氮雜雙環(huán)[4.1.0]庚烷(4.5g， 22.153111111〇1)的水（451^)和乙酸（221^)溶液中加入疊氮化鈉（7.28，110.766111111〇1)。將反應 物溫熱至室溫，攪拌16h。反應物通過加入飽和的碳酸氫鈉水溶液(60mL)驟冷。將混合物用 DCM( 3 X 200mL)和EtOAc (2 X 150mL)萃取，合并的有機萃取液用鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥，過 濾并濃縮。粗品產物通過硅膠色譜純化(25 - 30%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得外消旋反 式-4-疊氮基-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇（3 · 3g，16 · 23mmol) </H NMR(400MHz，CDC13): · ppm 7.34-7.24(m,5H),3.53(s,2H),3.35(s,lH),2.70-2.57(m,3H),3.32-2.26(m,lH),1.89-1.81(m,lH),1.59-1.55(m,lH),1.37(s,3H)〇MS m/z 247.4(M+H)+〇
[°325] 步驟c:向外消旋反式-4-疊氮基-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇(474mg, 1.926mmol)的 MeOH溶液中加入催化量的Pd/C。將溶液脫氣，再充入H2 2X。將反應物攪拌lh，LCMS顯示SM 已消耗。將反應物通過硅藻土/沙過濾(MeOH)。這分離獲得444mg(黃色油/半固體）。咕NMR 顯示還原不完全(檢測到芳族峰），于是重復上述過程。將反應物通過硅藻土 /沙過濾，濃縮 。咕NMR確認芳族峰不存在。獲得247mg粘性油狀物，其無需進一步純化可以直接使用。
[0326] 中間體14
[0327] 外消旋順式-4-疊氮基-4-甲基哌啶-3-基苯甲酸酯
[0329] 步驟a:向外消旋反式-4-疊氮基-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇（500mg，2.03mmol)的 DCM(20mL)溶液中加入苯甲酸（27311^，2.233111111〇1)、偶氮二甲酸二-叔-丁基酯（51411^， 2.233111111〇1)和三苯膦（58611^，2.233111111〇1)。將反應物于室溫下攪拌1611。反應物用0〇1 (1 OOmL)稀釋，用飽和的碳酸氫鈉水溶液（1 OOmL)洗滌。有機層經硫酸鎂干燥，過濾并濃縮， 獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(0 - 20%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得外消旋順式-4-疊 氮基-1-芐基-4-甲基哌啶-3-基苯甲酸酯（92mg，0.263mmol)，為黃色油狀物，將其固化，獲 得灰白色結晶固體。4 匪R(DMS0-d6)Sppip:8J7(d，J = 9.0Hz，2H) ,8.19(d，J = 8.9Hz, 2H),7.31-7.18(m,6H),4.44-4.32(m,2H),4.08(d,J=13.3Hz,1H),3.60(d,J=13.3Hz, lH),3.0(dd,J=4.4,6.4Hz,lH),2.79-2.73(m,lH),2.49-2.42(m,lH),1.92-1.85(m,2H), 1.49(s,3H)〇MS m/z 351.1(M+H)+〇
[0330] 步驟b:向外消旋順式-4-疊氮基-1-芐基-4-甲基哌啶-3-基苯甲酸酯（90mg， 0.257111111〇1)的]\^0!1(5011^)溶液中加入10%?(1/(：(5011^)。將反應物脫氣，再充入3\!1 2(氣 囊）。將反應物攪拌16h。粗品反應混合物通過硅藻土過濾(MeOH)，濃縮收集的溶液，獲得外 消旋順式-4-疊氮基-4-甲基哌啶-3-基4-硝基苯甲酸酯(48mg，0.184mmol)。該粗品產物無 需進一步純化可以直接使用。MS m/z 235.2(M+H)。
[0331] 中間體15
[0332] 外消旋反式-((3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0333]
[0334] 步驟a:于0 °C向氫化鋰（0.118g，14.8mmo 1)的THF (20mL)溶液中加入丙酮氰醇 (1.41^，14.8111111 〇1)。將獲得的反應混合物于室溫下攪拌211。減壓除去揮發(fā)物，獲得白色固 體。于室溫下向該固體的THF(60mL)溶液中滴加3-芐基-6-甲基-7-氧雜-3-氮雜雙環(huán) [4.1.0]庚燒(2.(^，9.851111]1〇1)。加入完成后，將溶液于回流下攪拌1411。冷卻至室溫后，加入 水（1 OmL)，獲得的混合物用EtOAc萃取(3 X 1 OOmL)。合并的有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉干 燥，過濾并濃縮。獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(0 - 20%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得 外消旋反式-1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-甲腈(0.7(^，3.0111111〇1)。 1!1匪1?(4001!^，0150-d6)57.36-7.22(m,5H) ,5.25(d,J = 6.0Hz, 1H) ,3.70-3.67(m,lH) ,3.49(dd, J=13.2, 10.4Hz,2H),2.37(m,3H),1.88-1.74(m,2H),1.25(s,3H)〇MS m/z 231.2(M+H)+〇 [0335] 步驟b:將外消旋反式-1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-甲腈（1.3g, 5.6mmol)和雷 氏鎳(50 %的水溶液，600mg)在氨(7N的EtOH溶液;80mL)中的懸浮液于室溫下、氫(氣囊)環(huán) 境中攪拌6h。將混合物在氮氣環(huán)境下通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌。減壓除去揮發(fā)物，獲得 反式-4-(氨基甲基)-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇（1.6g，4.79mmol)。該化合物無需進一步純 化可以直接用于下一步驟。MS m/z 235.2(M+H) +。
[0336] 步驟c:將反式-4-(氨基甲基)-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇（1.6g，4.79mmol)、B〇C2〇 (2.8411^，12.4111111〇1)和恥!10)3(0.9358，11.1111111〇1)的01(：13(7〇11^)溶液于室溫下攪拌1411。將 混合物用DCM形式，用冰水、鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。獲得的殘留物通過硅膠 色譜純化(0 - 5%的MeOH/DCM梯度洗脫），獲得外消旋反式-(1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶- 4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯（1.68,4.79臟〇1)。]\^ m/z 335·3(Μ+Η) +。
[0337] 步驟d:將外消旋反式_((1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁 基酯（1. lg，3.3mmol)和Pd(0H)2(20%在碳上;0.250g)的Me0H(60mL)懸浮液于室溫下、在氫 氣（氣囊)環(huán)境中劇烈攪拌6h。獲得的混合物通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌。濃縮，然后用己 烷（10mL)和乙醚(2mL)研磨，獲得外消旋反式-((3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸 叔-丁基酯（〇.70g，2.87mmol)，為白色粉末。4 MMR(400MHz，甲醇-d4)S3.42(dd，J = 9.9， 4·4Ηζ，1Η)，3.12((1, J= 13.9Hz，1H)，2.94-2.84(m，2H) ,2.82-2.68(m，2H)，2.62(dd，J = 12.5,10.0Hz,1H),1.44(s,9H),1.41-1.30(m,2H),0.91(s,3H)〇MS m/z 245.1(M+H)+〇
[0338] 中間體16
[0339] 外消旋順式-((3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
[0340]
[0341] 步驟a:將外消旋反式-1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-甲腈(2.0g，8.70mmol)、三 苯膦(3.41g，13.0mmol)和偶氮二甲酸二異丙基酯（2.638，13.〇1111]1〇1)的1'冊(3〇1]11^)溶液于0 °C攪拌10min。分次加入4-硝基苯甲酸（2.18g，13.Ommo 1)，將獲得的混合物于室溫下攪拌 16h。將混合物用水稀釋，用EtOAc萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥，過濾并濃 縮。獲得的殘留物用MeOH研磨，獲得外消旋順式-1-芐基-4-氰基-4-甲基哌啶-3-基4-硝基 苯甲酸酯（1.5 8,3.96臟〇1)。13 111/2 380(1+!〇 +。該產物無需進一步純化可以直接使用。
[0342] 步驟b:將外消旋順式-1-芐基-4-氰基-4-甲基哌啶-3-基4-硝基苯甲酸酯（1.5g， 3.961111]1〇1)和碳酸鉀（1.078,7.92_31)的]\16〇!1(2〇111]^)溶液于0°(^劇烈攪拌1〇111；[11，于室溫下 攪拌lh。減壓除去揮發(fā)物。獲得的殘留物用水稀釋，用EtOAc萃取(3X)。合并的有機相用鹽 水洗滌，經硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(0 -15 %的EtOAc/庚 烷梯度洗脫），獲得外消旋順式-1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-甲腈(0.8g，3.5mmol)。咕 匪R(400MHz，CDC1 3)δ7· 36-7.26(m，5H)，3.99((1, J= 12.4Hz，1H)，3.67((1, J= 12.8,1H)， 3.60-3.51(m，2H),3.11-3.07(m，2H)，2.76-2.69(m，2H)，2.24(dd，J=12.8,6.0Hz，lH)， 1.87-1.80(m,lH),1.54(s,3H)0MS m/z 231(M+H)+0
[0343] 步驟c :將順式-1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-甲腈（800mg, 3 · 5mmol)和雷氏鎳 (50 %的水溶液，700mg)在氨(7N的EtOH溶液;20mL)懸浮液中在氫氣（氣囊)環(huán)境中、于室溫 下劇烈攪拌16h。將混合物在氮氣環(huán)境下通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌。減壓除去揮發(fā)物，獲 得外消旋順式 -4-(氨基甲基)-1-芐基-4-甲基哌啶-3-醇(700mg，3.0mmol)。該化合物無需 進一步純化可以直接用于下一步驟。MS m/z 235.2(M+H) +。
[0344] 步驟d:將順式-4-(氨基甲基）-卜芐基-4-甲基哌啶-3-醇（700mg，3 · Ommo 1)、Boc20 (1 · lmL，2·99mmol)和Et3N(860yL，5·98mmol)的DCM(lOmL)溶液于室溫下攪拌2h。將混合物 用DCM稀釋，用冰水、鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。獲得的殘留物通過硅膠色譜純 化(0 - 50%的EtOAc/庚烷梯度洗脫），獲得外消旋順式-(1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯（700mg，2. lOmmol)。該化合物無需進一步純化可以直接用于 下一步驟。MS m/z 335(M+H) +。
[0345] 步驟e:將外消旋順式-(1-芐基-3-羥基-4-甲基哌啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁 基酯（700mg，2 · lmmo 1)和Pd/C(10 %在碳上；300mg)的Me0H( 20mL)懸浮液在氫氣(氣囊)環(huán)境 中、于室溫下劇烈攪拌5h。獲得的混合物通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌，濃縮。獲得的殘留物 通過硅膠色譜純化(0 -10%的MeOH/DCM梯度洗脫），獲得外消旋順式-((3-羥基-4-甲基哌 啶-4-基）甲基)氨基甲酸叔-丁基酯（200mg，0.8mmo 1)，為白色固體。4 NMR(400MHz，甲醇-d4)53.73-3.67(m,lH),3.59(dd,J=11.1,7.7Hz,1H),3.15-2.99(m,4H),1.90(m,lH),1.62 (m,lH),1.47(m,lH),1.44(s,9H),0.96(s,3H)〇MS m/z 245(M+H)+〇
[0346] 實施例1
[0347] 2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯代苯基)嘧啶-4-胺
[0348]
[0349] 步驟a:將（1-(4-氨基-5-溴嘧啶-2-基）-4_甲基哌啶-4-基）氨基甲酸叔-丁基酯 (966mg,2.50mmol)、（2,3-二氣苯基）棚酸（596mg,3 · 13mmol)、憐酸鐘（1 · 59g,7 · 50mmol)和 PdCl2 (dppf) · DCM加合物（204mg，0 · 25mmo 1)的MeCN: H20 (9:1，1 OmL，脫氣）懸浮液在微波反 應器中于ll〇°C攪拌3h。冷卻至室溫后，反應物通過硅藻土墊過濾，隨后用Et0Ac(50mL)洗 滌。濃縮合并的濾液，獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(〇 - 5 %的MeOH/DCM梯度洗脫），獲得 (1-(4-氨基-5-(2，3-二氯代苯基）嘧啶-2-基）-4-甲基哌啶-4-基）氨基甲酸叔-丁基酯 (1.07g,2.37mmol)〇MS m/z 452.4(M+H)+〇
[0350] 步驟b:向（1-(4-氨基-5-(2,3-二氯代苯基)嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基 甲酸叔-丁基酯（2 · 14g，4 · 73mmo 1)的DCM(50mL)溶液中加入TFA(31 · 7mL)。于0°C攪拌直到沒 有原料剩余（30min，通過LCMS監(jiān)測），減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過HPLC純化（10 - 30 %的乙腈水溶液梯度洗脫，0.1 % TFA改性），獲得目標化合物(657mg，1.69mmo 1; HC1鹽）。 咕 MMR(400MHz，甲醇-cUWppm 7.49-7.63(m，2H) ,7.34(t，J = 7.71Hz，lH)，7.26((1, J = 7.33Hz,1H),4.18(d,J=12.13Hz,2H),3.38-3.61(m,2H),1.88(br.s.,4H),1.45(s,3H)〇 HRMS: Ci6H2〇Cl2N5(M+H)+計算值352 · 1096，實測值352 · 1086。IC5Q為0 · 258μΜ。
[0351] 下列化合物可以根據上述方法或上述方法的變通方法采用相應的硼酸制備。
[0352] 表 2
[0353]
[0354]
[0355] 實施例6
[0356] 3-(4-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-4,5-二氯代苯酚
[0358] 于-78°C、氮氣環(huán)境下，向2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2,3-二氯代-5-甲氧 基苯基）嘧啶-4-胺（77mg，0 · 155mmol)的DCM( 5mL)溶液中加入BBr3 (1M的DCM溶液，465yL， 0.465mmo 1)。于室溫下攪拌16h后，減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過HPLC純化（10 - 30% 的乙腈水溶液梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得目標化合物（29 · 2mg，0 · 079mmo 1)。咕匪R (400MHz，甲醇-cUWppm 7.51 (s，lH)，6.83((1, J = 3.01Hz，lH)，6.53((1, J = 2.76Hz，lH)， 3·84-4·02(m，2H)，3·40-3·62(m，2H)，1·40-1·63(m，4H)，1·19(s，3H)〇HRMS Ci6H2〇Cl2N50(M+ H)+的計算值368 · 1104，實測值368 · 1086 · IC5Q為0 · 225μΜ。
[0359] 實施例7
[0360] 6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯代苯基)吡嗪-2-胺
[0362] 將6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基）-3-( 2，3_二氯代苯基）吡嗪-2-胺（950mg， 3.46111111〇1)、（4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯（1.488,6.92111111〇1)和1甲基嗎啉(7614 1^，6.92111111〇1)的匪？(91^)溶液在微波反應器中于250°(：攪拌211。注意 ：在此反應條件下，8〇〇 保護基團被除去。冷卻至室溫后，將反應物通過HPLC純化（15 - 40 %的乙腈水溶液梯度洗 脫，0.1 % TFA改性），獲得目標化合物(750mg，01.885mmo 1，HC1 鹽）。咕 NMR(400MHz，甲醇-cU) 5ppm 7.81(dd,J=6.69,2.91Hz,lH),7.62(s,lH),7.45-7.59(m,2H),4.25(br.s.,2H), 3.44-3.61(m,2H) , 1.81-2.04(m，4H) , 1.55(s,3H) <Χι6Η2()(：?2Ν(Μ+Η) +的HRMS計算值 352 · 1096，實測值352 · 1099。IC5q為0 · 071μΜ。
[0363] 下列化合物可以根據上述方法或上述方法的變通方法采用相應的胺制備。盡管在 大多數情況下，Boc保護基團在反應條件下可以被除去，但是必要時可以采用HC1或TFA。
[0364] 表 3
[0365]




[0370]
[0371] 實施例22
[0372] 6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-溴-3-(2,3-二氯代苯基)吡嗪-2-胺
[0374] 于〇°C、N2環(huán)境下，向6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3_二氯代苯基)吡嗪-2_ 胺（275mg，0 · 590mmo 1)的CH3C1 (7mL)溶液中加入Br2(32yL，0 · 619mmo 1)。于0°C攪拌2h后，減 壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過HPLC純化(35 - 60 %的乙腈水溶液梯度洗脫，5mM NH40H 改性），獲得目標化合物（128 · 8mg，0 · 298mmo 1)。咕 NMR(400MHz，甲醇-ck) δρρπι 7 · 63 (dd，J = 7.96,1.64Hz,lH) ,7.42(t,J = 7.83Hz,lH),7.36(dd,J = 7.58,1.77Hz, 1H),3.52-3.62(m, 2H), 3 · 35-3 · 40 (m, 2H), 1 · 76 (t, J = 5 · 56Hz , 4H), 1 · 28(s, 3H)。Ci6Hi9BrCl2N5 (M+H)+的HRMS計 算值432 · 0155，實測值432 · 0157 · IC5Q為0 · 169μΜ。
[0375] 實施例23
[0376] 6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-氯代-3-(2,3-二氯代苯基)吡嗪-2-胺
[0378] 于〇°C、N2環(huán)境下，向6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3_二氯代苯基)吡嗪-2-胺（HC1 鹽）（15mg，0 · 043mmo 1)的CH3C1 (250yL)溶液中加入NBS(7 · 58mg，0 · 043mmo 1)的CH3C1 (250yL)溶液。于室溫下攪拌2h后，減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過HPLC純化（15 - 40 % 的乙腈水溶液梯度洗脫，0.1 %的TFA改性），獲得目標化合物（1.7mg，3.23μπι〇 1，TFA鹽）。咕 NMR(400MHz，甲醇-cUWppm 7.53(dd，J = 8.03,1·51Ηz，1Η)，7.31 (t，J = 7.91Hz，1Η)，7.24 (dd，J = 7 · 65，1 · 63Hz，1Η)，3 · 74(dt，J= 13 · 87，3 · 86Hz，2Η)，3 · 10-3 · 18(m，2Η)，1 · 84-1 · 97 (m，2H)，1 · 72-1 · 84(m，2H)，1 · 39(s，3H) <Xi6Hi9Cl3N5(M+H)+的HRMS計算值386 · 0706，實測值 386.06911050為0·392μΜ。
[0379] 實施例24
[0380] 6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2，3-二氯代苯基)-5-甲基吡嗪-2-胺
[0382] 將6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-溴-3-(2,3-二氯代苯基）吡嗪-2-胺（20mg， 0 · 046mmol)、憐酸鐘（29 · 5mg，0 · 139mmol)、PdCl2(dppf) · DCM 加合物（1 · 9mg，0 · 002mmol)和 2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環(huán)己烷（7.8yL，0.056mmol)的MeCN:H 20(9:l， 500yL，脫氣)懸浮液在微波反應器中于110°C攪拌lh。冷卻至室溫后，減壓除去揮發(fā)物，獲得 的殘留物通過HPLC純化(25 - 50%的乙腈水溶液梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得目標化合 物（7.7mg，0 .(^ΙημιοΙ)。1!! NMR(400MHz,甲醇-cUWppm 7.52(dd，J = 8.03,1·76Ηζ，1Η) ,7.31 (t，J = 7.78Hz，lH)，7.23(dd，J = 7.65,1.63Hz，1H) ,3.25-3.15(m，2H) ,3.01-3.13(m，2H), 2.25(s ,3H), 1.51-1.74(m,4H), 1 · 14(s ,3H) <Xi7H22Cl2N5(M+H)+的HRMS計算值366 · 1252,實測 值366 · 1248。IC5〇為0 · 222μΜ。
[0383] 實施例25
[0384] 5-氨基-3-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯代苯基)吡嗪-2-甲腈
[0386] 將6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-溴-3-(2，3_二氯代苯基）吡嗪-2-胺（50mg， 0.116臟〇1)和氰化銅（1)(20.811^，0.232111111〇1)的01^(50(^1^溶液在微波反應器中于180 1€ 攪拌2h。冷卻至室溫后，過濾反應混合物，將獲得的溶液通過HPLC純化(25 - 50 %的乙腈水 溶液梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得目標化合物(22. Omg，0.053mmol)。4 NMR(400MHz，甲 醇-cUWppm 7.64(dd，J = 7.96，1.64Hz，lH)，7.42(t，J = 7.83Hz，lH)，7.35(dd，J = 7.58， 1·77Ηζ，1H),3.83-4.04(m，2H),3.62-3.83(m，2H)，1.58-1.79(m，4H)，1.25(s，3H)。 Ci7Hi9Cl2N6(M+H)+的 HRMS 計算值377 · 1048，實測值377 · 1039。IC5Q為0 · 315μΜ。
[0387] 實施例26
[0388] 5-氨基-3-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,3-二氯代苯基)吡嗪-2-甲酰胺
[0390] 將5-氨基-3-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基）-6-(2，3_二氯代苯基）吡嗪-2-甲腈 (38mg,0.1 01 mmol)、Na0H(6M的H2O溶液，168yL, 1 ·OOmmol)和過氧化氛（103yL, 1 ·OOmmol)的 DMF(2mL)溶液在微波反應器中于100°C攪拌lh。冷卻至室溫后，過濾反應混合物，將獲得的 溶液通過HPLC純化（15 - 40 %的乙腈水溶液梯度洗脫，0.1 % TFA改性），獲得目標化合物 NMR(400MHz，DMS0-d6)Sppm 7.65(dd，J = 7.53,2.26Hz，lH) ,7.36- 7.46(m，2H)，7.32(br.s.，1H),6.91(br.s.，1H)，6.23(s，2H),3.37-3.52(m，4H),1.50-1.75 (br · s，2H)，1 · 36-1 · 53(m, 4H)，1 · 08(s，3H) <Xi7H2iCl2N6〇(M+H)+的HRMS計算值395 · 1154，實 測值395.1140。比5〇為0.2714]\1。
[0391] 實施例27
[0392] 3-(2，3-二氯代苯基)-6-( (3S，5R)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)吡嗪-2-胺
[0394] 將3-溴-6-( (3S，5R)-3，5-二甲基哌嗪-1-基）吡嗪-2-胺(55mg，0 · 228mmol)、（2，3-二氣苯基)棚酸(52· lmg，0· 273mmol)、憐酸鐘（145mg，0 ·683mmol)和PdCl2(dppf) · DCM加合 物（18.6mg，0.023mmo 1)的MeCN: H20 (9:1，2.3mL，脫氣)懸浮液在微波反應器中于110 °C攪拌 lh。冷卻至室溫后，減壓除去揮發(fā)物，獲得的殘留物通過HPLC純化(25 - 50%的乙腈水溶液 梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得目標化合物（17 · Omg，0 · 048mmo 1)。咕NMR(400MHz，甲醇-cUMppm 7.74(s，lH)，7.59(dd，J = 7.78,1.51Hz，lH)，7.45(dd，J = 7.78,1·51Ηz，1Η)，7· 38 (t ,J = 7.78Hz,lH), 3.56(d,J = 11.29Hz, 2H), 3.03-3.21 (m,2H), 2.44(t,J= 11.54Hz, 2H), 1 · 17(d, J = 6.53Hz ,6H) <Xi6H2〇Cl2N5(M+H)+的HRMS計算值352.1096,實測值352.1093. IC5〇為 0·570μΜ〇
[0395] 下列化合物可以根據上述方法或上述方法的變通方法采用相應的中間體和硼酸 制備。盡管在大多數情況下，Boc保護基團在反應條件下可以被除去，但是必要時可以采用 HC1或TFA。
[0396] 表 4
[0398]
[0399] 實施例30
[0400] 3-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-(2，3-二氯代苯基)-1，2，4-三嗪-5-胺
[0402] 步驟a:將（1-(5-氨基-6-溴_1，2，4_三嗪-3-基）-4_甲基哌啶-4-基）氨基甲酸酯 (250mg，0 ·646mmol)、2，3_二氣代苯基棚酸（154mg，0 ·807mmol)、憐酸鐘（411mg, 1 ·937mmol) 和Xphos第二代預催化劑(25.4mg，0.032mmo 1)的MeCN: H20( 9:1，5mL，脫氣)懸浮液在微波反 應器中于120°C攪拌2h。冷卻至室溫后，將反應物通過硅藻土墊過濾，隨后用Et0Ac(20mL)洗 滌。濃縮合并的濾液，獲得的殘留物通過硅膠色譜純化(〇 - 5 %的MeOH(含有1 %的NH3) /DCM 梯度洗脫），獲得(1 - (5-氨基-6- (2，3-二氯代苯基)-1，2，4-三嗪-3-基)-4-甲基哌啶-4-基） 氨基甲酸叔-丁基酯(78%的純度）。將該混合物進一步通過HPLC純化(35 - 60 %的乙腈水溶 液梯度洗脫，5mM NH40H改性），獲得（1-(5-氨基-6-(2，3-二氯代苯基)-1，2，4-三嗪-3-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔-丁基酯（1551^，0.646臟〇1)。]\^111/2 453.0(]\1+!〇 +。
[0403] 步驟b:向（1-(5-氨基-6-(2，3_二氯代苯基)-1，2,4_三嗪-3-基)-4-甲基哌啶-4-基）氨基甲酸叔-丁基酯（15511^，0.3421]11]1〇1)的二氧六環(huán)（21]^)溶液中加入!1(：1(41的二氧六 環(huán)溶液，4mL)。于室溫下攪拌直到沒有原料剩余(通過LCMS監(jiān)測）。減壓除去揮發(fā)物，獲得的 殘留物通過硅膠色譜純化(0 - 5 %的MeOH(含有1 %的NH3) /DCM梯度洗脫），獲得目標化合物 (13〇1^，0.342臟〇1，!1(：1鹽）。1!1匪1?(4001抱，甲醇-(14)3 ??1117.80((1(1，了 = 7.78,2.01!^，1!〇， 7.42-7.58(m,2H),4.29(m.,2H),3.64(ddd,J=14.24,9.47,4.64Hz,2H),1.92-2.06(m, 4H), 1 · 57(s, 3H) JRMS C15H19CI2N6(M+H)+的計算值353 · 1048，實測值353 · 1042。IC5Q為0 · 194 μΜ〇
[0404] 實驗
[0405] 評價本發(fā)明化合物選擇性抑制SHP2活性的能力。本文中描述的本發(fā)明化合物的抑 制性能可以通過在任意一個下列實驗中的測試證明。
[0406] SHP2變構抑制實驗
[0407] SHP2通過二-酪氨酰-磷酸化肽與其Src同源2(SH2)結構域的結合而變構激活。后 者的激活步驟導致SHP2的自抑制界面釋放，隨后使得SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活化，可 用于底物識別和反應催化。SHP2的催化活性可以通過提示熒光實驗(prompt fluorescence assay)方式采用替代底物DiFMUP監(jiān)測。
[0408] 更具體地講，該磷酸酶反應于室溫下在384孔黑色聚苯乙烯板、平底、低側邊、無結 合表面(Corning，Cat#3575)上進行，最終的反應體積為25yL，采用下列實驗緩沖液條件： 60mM HEPES，pH 7.2,75mM NaCl，75mM KCl，lmM EDTA，0.05%P-20,5mM DTT。
[0409] 本發(fā)明化合物(濃度范圍0.003_10(^]\〇對3即2的抑制采用其中0.511]\1的3即2與0.5 μΜ 的肽 IRSl_pY1172(dPEG8)pY1222(序列：H2N-LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-酰 胺)一起溫育的實驗進行監(jiān)測。于25°C溫育30 - 60分鐘后，將替代底物DiFMUP(InVitr〇gen， cat#D6567)加至反應物中，于25°C溫育30分鐘。然后反應通過加入5μ1的160μΜ的bpV溶液 (Phen)(Enzo Life Sciences cat#ALX-270-204)驟冷。熒光信號采用微量板讀數儀 (Envision，Perki_Elmer)監(jiān)測，激發(fā)和發(fā)射波長分別為340nm和450nm。抑制劑劑量響應曲 線采用對照歸一化擬合的歸一化的IC 5Q回歸曲線分析。本發(fā)明化合物的IC5Q結果如上面實 施例和表1 一7中所不。
[0410] p-ERK細胞試驗
[0411]米用.Alp丨丨aScreeil⑧SureFire? Phospho-ERK I/2試劑盒（PerkinElmer)的p-ERK細胞試驗:將KYSE-520細胞(30，000個細胞/孔)在96-孔板中培養(yǎng)過夜，采用濃度為20、 6.6、2.2、0.74、0.24、0.08、0.027以]?的51^2抑制劑于37°(：處理21^8。通過加入3(^1^的裂解緩 沖液(PerkinElmer)終止培養(yǎng)，所述緩沖液與SureFire磷-細胞外信號-調節(jié)的激酶(pERK) 試驗試劑盒一起提供(PerkinElmer)。根據生產商說明書處理樣品。采用2101多標記讀數儀 (Perkin Elmer Envision)測定源自pERK的熒光信號，一式二份。抑制百分率通過總ERK信 號歸一化，與DMS0載體對照進行比較。
[0412] 集落形成試驗和細胞增殖試驗
[0413] 將300yL介質（RPMI-1640,含有 10% 的FBS，Lonza)中的KYSE-520細胞（1500個細 胞/孔)涂布于24孔板上。為了進行藥物處理，在細胞涂布后24小時和5天加入各種濃度的本 發(fā)明化合物（20、1 0、5、2 . 5、1 . 25μΜ)。在第11天，將集落采用0.2 %的結晶紫（MP Biomedicals)染色，隨后將其溶于20%的乙酸中，采用Spectramax讀數儀（Thermo Scientific)定量測定。在細胞增殖試驗中，將100yL介質（RPMI-1640,含有10%的FBS， Lonza)中的細胞（1500個細胞/孔)涂布于96孔板上。在第6天，加入50yL Celltiter-Glo試 劑(Promega)，根據供應商說明(Promega)，測定焚光信號。
[0414] 應當理解，本文中描述的實施例和實施方案僅是為了說明的目的，建議本領域技 術人員對其進行各種修改或變化，并且這些修改或變化應當包括在本申請的精神和范圍內 以及權利要求的范圍中。
【主權項】
1. 式I化合物或其藥學上可接受的鹽： Λ.其中： m選自0、1和2; P選自〇和1; Yi選自CH和N; Y2選自CR6和N; Y3 選自 NH 和 CR7R8; Ri選自C6-1Q芳基、C3-8環(huán)烷基、C 3-8環(huán)烯基和含有1 一 4個選自N、0和S的雜原子的5 - 9元雜 芳基;其中所述心的芳基或雜芳基被1 一5個獨立選自下列的R9基團取代：鹵素、氨基、羥基、 N3、Cl-4烷基、羥基-取代的-Cl-4烷基、鹵素-取代的-Cl-4烷基、氨基-取代的 -Cl-4烷基、-C ( O ) ORio 和-NHC(O)Rio; R10選自氫、苯基和萘基;其中所述R1Q的苯基是未取代的或者被甲氧基取代； R2JPR2b獨立選自氫、&-4烷基、&-4烷氧基、氨基、羥基、C 3-8環(huán)烷基和&-4烷基-氨基； R3a和R3b獨立選自氣、鹵素、幾基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氣基、羥基、C3-8環(huán)烷基和Cl-4燒 基_氨基； R4a和R4b獨立選自氣、鹵素、幾基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氣基、羥基、C3-8環(huán)烷基和Cl-4燒 基_氨基； RsjPR5b獨立選自氫、羰基、Ch烷基、烷氧基、氨基、羥基、C3-S環(huán)烷基和(^-4烷基-氨 基； 其中選自1^、1^、1^和辦的任意兩個基團可以形成5 - 6元不飽和的、部分不飽和的環(huán)或 飽和的環(huán)，其任選含有環(huán)氮； R6選自氫、鹵素、氰基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氨基-羰基、鹵素-取代的Cl-4烷基、鹵素-取 代的C1-4烷氧基、羥基-取代的C1-4烷基、氨基-取代的C1-4烷基、-S (0) 2R6a、-C (S) R6a、-C (0) NR6aR6b、-C (NH) NR6aR6b和-NR6aC (0) R6b;其中 R6JPR6b獨立選自氫和Ch 烷基； R7選自氫、&-4烷基、C3-6環(huán)烷基、C6-1Q芳基和含有1 一 4個選自N、0和S的雜原子的5 - 9元 雜芳基;R7和R4a可以與它們所連接的碳原子一起形成吡咯烷基或環(huán)丙基，其任選被氨基取 代； R8選自氨基、氨基-甲基和甲基-氨基。2. 式Ia的權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽： 其中：m選自O和I; η 選自 1、2、3、4和 5; Yi選自CH和N; Y2選自CR6和N; R4a選自氫、甲基和羥基； R6選自氫、鹵素、氰基、Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、氨基-羰基、鹵素-取代的Cl-4烷基、鹵素-取 代的C1-4烷氧基、羥基-取代的C1-4烷基、氨基-取代的C1-4烷基、-S (O) 2R6a、-C (S) R6a、-C (O) NR6aR6b、-C (NH) NR6aR6b和-NR6aC (O) R6b;其中 R6JPR6b獨立選自氫和Ch 烷基； 辦選自氫、甲基、苯基、吡嗪基和吡啶基;R7和R4a可以與它們所連接的碳原子一起形成被 氨基取代的環(huán)丙基； R8選自氨基和甲基-氨基； R9選自鹵素、氨基、羥基、N3、C1-4烷基、鹵素-取代的-C1-4烷基、C 1-4烷氧基、-C(O) ORiq和-NHC(O)Rio; R10選自氫、苯基和萘基;其中所述R1Q的苯基是未取代的或者被甲氧基取代。3.權利要求2的化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自：4. 權利要求1的化合_5&甘坊$|^7?1_達5?>|%±卜目右' :^1^·其中： Yi選自CH和N; Y2選自CR6和N; 心選自噻吩-2-基和IH-B引噪-7-基；其中所述噻吩-2-基可以被選自甲基和氯代的基團 取代； R6選自氫、鹵素和甲基； R8選自氨基和甲基-氨基。5. 權利要求4的化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物選自：:β·6. 權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，具有式Ic: 其中：η 選自 1、2、3、4和 5; Yi選自CH和N; Y2選自CR6和N; R3a選自Cu烷基、Cu烷氧基、氨基、羥基、C3-S環(huán)烷基和&-4烷基-氨基； R4a選自氫、Cu烷基、Cu烷氧基、氨基、羥基、C3-S環(huán)烷基和&-4烷基-氨基； R6選自氫、鹵素和甲基； R9選自鹵素、氛基、羥基、Ν3、Cl-4烷基、鹵素_取代的_Cl-4烷基、Cl-4烷氧基、 -C ( O ) ORlQ和-NHC(O)Rio; R10選自氫、苯基和萘基;其中所述R13的苯基是未取代的或者被甲氧基取代。7. 權利要求6的化合物或其藥學上可接受的鹽，該化合物為：O10. 藥用組合物，該藥用組合物含有權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽和至少 一種藥學上可接受的載體。11. 治療方法，該方法包括以有效量給予需要此類治療的個體權利要求1的化合物或其 藥學上可接受的鹽，用于預防或治療由SHP2活性介導的疾病或病癥。12. 權利要求11的方法，其中所述由SHP2活性介導的疾病或病癥選自努南綜合征、豹皮 綜合征、幼年性骨髓單核細胞白血病、成神經細胞瘤、黑素瘤、急性骨髓性白血病、乳腺癌、 食管癌、肺癌、結腸癌、腦癌、成神經細胞瘤、頭頸鱗狀細胞癌、胃癌、間變性大細胞淋巴瘤和 惡性膠質瘤。
【文檔編號】A61K31/505GK105899491SQ201580004216
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年1月16日
【發(fā)明人】C·H-T·陳, 陳卓亮, J·G·弗塔內, D·格魯寧菲德爾, R·卡爾基, 加藤充典, M·J·拉馬爾切, L·B·佩雷斯, T·M·施塔姆斯, S·威廉姆斯
【申請人】諾華股份有限公司