三氟甲基吡唑基胍F₁F₀-ATP酶抑制劑及其治療用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供抑制F1F0?ATP酶的三氟甲基吡唑基胍化合物以及使用三氟甲基吡唑基胍化合物作為治療劑以治療醫(yī)學(xué)障礙，比如免疫障礙，炎性病癥，或癌癥的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】三氟甲基吡唑基胍Ffo-ATP酶抑制劑及其治療用途
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2013年12月10日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)序號(hào)61/914,085以及2014 年4月15日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)序號(hào)61 /979，619的利益以及優(yōu)先權(quán);其各自的內(nèi)容通 過(guò)援引并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明提供一酶（例如，線粒酶）的抑制劑和它們的治療用 途。特別地，本發(fā)明提供抑制FiFo-ATP酶的三氟甲基吡唑基胍化合物以及使用三氟甲基吡唑 基胍化合物作為治療劑治療許多醫(yī)學(xué)病癥的方法。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 多細(xì)胞生物體發(fā)揮對(duì)細(xì)胞數(shù)量的精確控制。在細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡之間的平衡實(shí) 現(xiàn)這種內(nèi)穩(wěn)態(tài)。細(xì)胞死亡經(jīng)壞死或通過(guò)自殺形式的細(xì)胞死亡，稱(chēng)為細(xì)胞凋亡，發(fā)生在幾乎每 種類(lèi)型的脊椎動(dòng)物細(xì)胞中。凋亡由引起共同、基因上的程序性死亡機(jī)制的各種胞外或胞內(nèi) 信號(hào)觸發(fā)。
[0006] 多細(xì)胞生物體利用細(xì)胞凋亡來(lái)指導(dǎo)受損的或不必要的細(xì)胞為了生物體的益處而 破壞它們自己。因此，細(xì)胞凋亡過(guò)程的控制對(duì)于正常發(fā)育是非常重要的，例如，手指和腳趾 的胚胎發(fā)育需要通過(guò)細(xì)胞凋亡，受控的去除過(guò)量的互連組織，正如大腦內(nèi)神經(jīng)突觸的形成。 類(lèi)似地，受控的細(xì)胞凋亡負(fù)責(zé)月經(jīng)開(kāi)始時(shí)子宮（子宮內(nèi)膜）內(nèi)襯的脫落。雖然細(xì)胞凋亡在組 織雕刻和正常細(xì)胞維持中起重要作用，它也是防御威脅生物體健康的細(xì)胞和入侵者(例如， 病毒)的初級(jí)防御的組成。
[0007] 許多疾病與細(xì)胞凋亡的細(xì)胞死亡失調(diào)有關(guān)。已經(jīng)建立了在異常細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)和 各種腫瘤、自身免疫和病毒疾病的致病性之間的因果關(guān)系模型。例如，在細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng) 答中，效應(yīng)細(xì)胞(例如，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞("CTLs"））通過(guò)誘導(dǎo)感染的細(xì)胞經(jīng)歷凋亡破壞病 毒感染的細(xì)胞。隨后，當(dāng)不再需要效應(yīng)細(xì)胞時(shí)，該生物體依賴(lài)于細(xì)胞凋亡過(guò)程破壞效應(yīng)細(xì) 胞。通過(guò)CTL在彼此甚至它們本身中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，自身免疫通常被阻止。在該過(guò)程中的缺 陷與各種免疫性疾病，比如紅斑狼瘡和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)。
[0008] 多細(xì)胞生物體還利用細(xì)胞凋亡指導(dǎo)受損的細(xì)胞核酸（例如，DNA)在癌變前破壞其 自身。一些致癌病毒通過(guò)重編程感染的(轉(zhuǎn)化的)細(xì)胞以中止正常的細(xì)胞凋亡過(guò)程來(lái)克服這 種安全措施。例如，幾種人乳頭瘤病毒(HPV)已經(jīng)牽涉通過(guò)產(chǎn)生能使p53細(xì)胞凋亡啟動(dòng)子失 活的蛋白質(zhì)（E6)，抑制轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的去除引起宮頸癌。類(lèi)似地，埃-巴二氏 (Epstein-Barr)病毒(EBV)，單核細(xì)胞增多癥和伯基特淋巴瘤的病原體，重編程感染的細(xì)胞 以產(chǎn)生防止異常細(xì)胞的正常細(xì)胞凋亡去除的蛋白質(zhì)，因此，允許癌變的細(xì)胞增殖并在生物 體中擴(kuò)散。
[0009] 還有其他病毒破壞性地操縱細(xì)胞的細(xì)胞凋亡器而不直接導(dǎo)致癌癥發(fā)展。例如，在 被人免疫缺陷病毒(HIV)感染的個(gè)體中免疫系統(tǒng)的破壞被認(rèn)為是通過(guò)感染的CD4+T細(xì)胞(約 1/100,000)，指導(dǎo)未感染的姐妹細(xì)胞經(jīng)歷細(xì)胞凋亡而發(fā)展的。
[0010] 某些由非病毒方式引起的癌癥也已經(jīng)通過(guò)細(xì)胞凋亡建立起逃避破壞的機(jī)制。黑色 素瘤細(xì)胞，例如，通過(guò)抑制基因編碼Apaf-l的表達(dá)避免細(xì)胞凋亡。其他癌細(xì)胞，尤其是肺和 結(jié)腸癌細(xì)胞，分泌抑制CTL介導(dǎo)的清除異常細(xì)胞的引發(fā)的高水平可溶性誘餌分子。細(xì)胞凋亡 器的錯(cuò)誤調(diào)節(jié)也已經(jīng)牽涉各種變性病癥和血管疾病。
[0011] 細(xì)胞凋亡過(guò)程及其細(xì)胞機(jī)制受控的調(diào)節(jié)對(duì)于多細(xì)胞生物體的存活是重要的。一般 地，發(fā)生在細(xì)胞中的生化變化以有序的隊(duì)列指導(dǎo)經(jīng)歷細(xì)胞凋亡發(fā)生。但是，如上所示，細(xì)胞 凋亡調(diào)節(jié)缺陷可以導(dǎo)致在生物體中的嚴(yán)重有害影響。
[0012] 存在改進(jìn)組合物和方法的需求，所述組合物和方法用于在遭受疾病和病癥折磨的 受試者中調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過(guò)程，所述疾病和病癥的特征在于這些過(guò)程(例如，病毒感染，過(guò)度 增殖性自身免疫性障礙，慢性炎癥病癥，和癌癥）的錯(cuò)誤調(diào)節(jié)。本發(fā)明解決了該需求并提供 了其他相關(guān)的優(yōu)點(diǎn)。
[0013] 發(fā)明概述
[0014]本發(fā)明提供抑酶（例如，線粒酶）的三氟甲基吡唑基胍化合 物，包含三氟甲基吡唑基胍化合物的藥物組合物，以及使用這樣的化合物和藥物組合物治 療許多醫(yī)學(xué)病癥的方法。本發(fā)明部分地涉及發(fā)現(xiàn)具有令人驚奇的優(yōu)異的藥物性質(zhì)的組合 物。例如，令人驚奇的發(fā)現(xiàn)化合物3_氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5_(二氟甲基)-1Η-Ρ比 唑-3-基）氨基）亞甲基）苯甲酰胺（化合物1)與3-氯-N-(( (3-氯苯基）氨基）（（5-(三氟甲 基)-1Η-吡挫-3-基)氨基）亞甲基)苯甲酰胺(化合物2)相比具有減少的脫革巴(off-target) 效應(yīng)。例如，驚奇的發(fā)現(xiàn)化合物1比化合物2針對(duì)細(xì)胞色素 P450 2D6酶效力低約三倍。化合物 1針對(duì)細(xì)胞色素 P450 2D6酶減少的效力改善了化合物在服用額外藥物的患者中的安全特 性，或作為與化合物1的結(jié)合療法的一部分以治療本文所述醫(yī)學(xué)障礙，或用于治療不同的疾 病。該組合物和方法的其他優(yōu)點(diǎn)和益處描述在例如詳細(xì)說(shuō)明和實(shí)施例中。
[0015]因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供了由式I表示的化合物族：
[0017] 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物;其中 R1是位于它所連接的苯基的間位或?qū)ξ簧系穆然鶊F(tuán)。
[0018] 本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了由下式表示的化合物：
[0020]或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的另一個(gè) 方面提供了由下式表示的化合物：
[0022] 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的溶劑化物。
[0023] 本發(fā)明也提供晶體形式的化合物。例如，本發(fā)明的一個(gè)方面提供結(jié)晶化合物3-氯-N-(((3_氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺。在某 些實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺是多晶型I，其顯示出包含以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射線粉末 衍射圖 ：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0±0·2,20·0±0·2,和 25.2 ±0.2。在某些其他實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物3-氯-Ν-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三 氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞甲基)苯甲酰胺是多晶型II，其顯示出包含以下衍射角度 (2Θ)的峰的X-射線粉末衍射圖 ：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2， 19.2±0.2,20.6±0.2,22.2±0.2,25.7±0.2,26.0±0.2，和35.7±0.2。
[0024] 本發(fā)明另一個(gè)方面提供結(jié)晶化合物3_氯-Ν_( ((3_氯_5_氣苯基)氨基）（（5_(二氣 甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物。在某些實(shí)施方式中，結(jié)晶化合 物3-氯-Ν-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰 胺丙酮溶劑化物，顯示出包含在以下衍射角度（2Θ)的峰的X-射線粉末衍射圖：6.2±0.2， 8.3±0.2，14.7±0.2，17.5±0.2，17.9±0.2，18.5±0.2,20.2±0.2,20.9±0.2,23.5土 0.2,和 25.9±0.2。
[0025] 前述化合物可以出現(xiàn)在包含本文所述化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合 物中。
[0026] 本發(fā)明的另一個(gè)方面提供治療遭受醫(yī)學(xué)障礙的受試者的方法。該方法包括向受試 者給藥治療有效量的一種或多種本文所述三氟甲基吡唑基胍化合物，例如，式I的化合物或 一種本文所述晶型，為了改善障礙的癥狀。大量障礙可以用本文所述三氟甲基吡唑基胍化 合物治療。例如，本文所述化合物可以用于治療免疫性障礙或炎性障礙，比如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，銀肩病，慢性移植物抗宿主疾病，急性移植物抗宿主病，克羅恩病，炎性腸病，多發(fā)性硬 化癥，全身性紅斑狼瘡，乳糜瀉，特發(fā)性血小板減少性血栓形成紫癜，重癥肌無(wú)力，斯耶格倫 氏綜合癥，硬皮病，潰瘍性結(jié)腸炎，哮喘，表皮增生，以及本文所述其他醫(yī)學(xué)障礙。本文所述 化合物也可用于治療心血管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤，癌癥或細(xì)菌感染。
[0027]本發(fā)明的另一個(gè)方面提供抑酶，例如，線粒酶的方法。該方 法包括酶暴露于本文所述的化合物，例如，式I的化合物或本文所述的晶型之一， 以抑制所述FiFo-ATP酶。
[0028]附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
[0029]圖1是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物的X-射線粉末衍射圖，進(jìn)一步描述于實(shí)施例2中。
[0030] 圖2是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物的示差掃描量熱法(DSC)曲線，以及3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯 基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物的熱重分 析(TGA)曲線，各自進(jìn)一步描述于實(shí)施例2中。
[0031] 圖3是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型I的X-射線粉末衍射圖，進(jìn)一步描述于實(shí)施例3中。
[0032]圖4是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型I的不差掃描量熱法(DSC)曲線，以及3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基） ((5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺晶型I的熱重分析(TGA)曲線，各自 進(jìn)一步描述于實(shí)施例3中。
[0033]圖5是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型II的X-射線粉末衍射圖，進(jìn)一步描述于實(shí)施例4中。
[0034]圖6是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型II的示差掃描量熱法(DSC)曲線，進(jìn)一步描述于實(shí)施例4中。
[0035]圖7是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型II的X-射線粉末衍射圖，進(jìn)一步描述于實(shí)施例5中。
[0036]圖8是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞 甲基)苯甲酰胺晶型II的示差掃描量熱法曲線，進(jìn)一步描述于實(shí)施例5中。
[0037]發(fā)明詳述
[0038] 本發(fā)明提供抑酶（例如，線粒酶）的三氟甲基吡唑基胍化合 物，包含三氟甲基吡唑基胍化合物的藥物組合物，以及在療法中使用三氟甲基吡唑基胍化 合物和藥物組合物的方法。如上所述，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及發(fā)現(xiàn)具有令人驚奇的優(yōu)異的 藥物性質(zhì)的組合物。例如，驚奇地發(fā)現(xiàn)化合物3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟 甲基）-1Η-吡唑-3-基）氨基）亞甲基）苯甲酰胺（化合物1)與3-氯-N-(((3-氯苯基）氨基） ((5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺(化合物2)相比具有減少的脫靶效 應(yīng)。例如，驚奇地發(fā)現(xiàn)化合物1比化合物2針對(duì)細(xì)胞色素 P450 2D6酶的效力低約三倍。
[0039]化合物1針對(duì)細(xì)胞色素 P450 2D6酶減少的效力，改善了化合物在服用額外藥物的 患者中的安全特性，或作為與化合物1的結(jié)合療法的一部分以治療本文所述醫(yī)學(xué)障礙，或用 于治療不同的疾病。細(xì)胞色素 P450 2D6涉及許多治療劑的代謝。抑制細(xì)胞色素 P450 2D6的 作用是不希望的，因?yàn)檫@樣的抑制可以改變治療劑的代謝速率，造成另外的安全劑量或頻 率而對(duì)患者變得不安全。本發(fā)明提供具有在細(xì)胞色素 P450 2D6上降低的效果的組合物，從 而提供在向服用其他藥物的患者給藥時(shí)具有改進(jìn)的安全性質(zhì)的治療。
[0040]本發(fā)明的示例性組合物和方法更加詳細(xì)描述于以下部分：
[0041 ] I .FiFo-ATP酶活性調(diào)節(jié)劑；II.三氟甲基吡唑基胍化合物；III.三氟甲基吡唑基胍 化合物的治療應(yīng)用，和IV.藥物組合物，制劑，以及示例性給藥途徑和劑型考慮。在一個(gè)特定 部分中描述的本發(fā)明的方面不限于任何特定部分中。
[0042] 除非另有指明，本發(fā)明的實(shí)施運(yùn)用有機(jī)化學(xué)，藥理學(xué)，分子生物學(xué)（包括重組技 術(shù)），細(xì)胞生物學(xué)，生物化學(xué)，和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)。這些技術(shù)在 文獻(xiàn)中充分解釋?zhuān)热?"Comprehensive Organic Synthesis"（Β ·Μ· Trost&I ·Fleming， eds ·，1991-1992) ; "Molecular cloning : a laboratory manual'，Second Edition (Sambrook et al·，1989);"Oligonucleotide synthesis"（M.J.Gait，ed.，1984);"Animal cell culture"（R. I .Freshney，ed.，1987); "Methods in enzymology" 系列（Academic Press，Inc·);"Handbook of experimental immunology"（D·Μ.Weir&C.C·Blackwell， eds.)；uGene transfer vectors for mammalian cells"（J.M.Miller&M.P.Calos，eds·， 1987);"Current protocols in molecular biology"（F.M.Ausubel et al·，eds·，1987， and periodic updates); "PCR: the polymerase chain reaction'，（Mullis et al.，eds·， 1994);和"Current protocols in immunology"（J.E.Coligan et al ·，eds·，1991)，各自 通過(guò)援引全部并入本文。
[0043] 為了幫助對(duì)本發(fā)明的理解，以下對(duì)一些術(shù)語(yǔ)和詞組進(jìn)行了定義。
[0044] 如在本文中使用的術(shù)語(yǔ)"胍"，指具有以下核心結(jié)構(gòu)的化合物 包
， 括藥學(xué)上可接受的鹽形式^ 表示連接點(diǎn)。
[0045] 公開(kāi)的化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵，因此，存在幾何異構(gòu)體。除非另有指明， 一般化學(xué)結(jié)構(gòu)和圖形表示的具體化合物包括了所有幾何異構(gòu)體。本發(fā)明包括了由在雙鍵 (例如，碳碳雙鍵，或碳氮雙鍵)周?chē)娜〈帕挟a(chǎn)生的各種幾何異構(gòu)體和其混合物。在雙 鍵周?chē)娜〈恢付?Z"或"E"構(gòu)型，其中術(shù)語(yǔ)"Z"和?"是按照IUPAC標(biāo)準(zhǔn)使用的。除非 另有說(shuō)明，結(jié)構(gòu)描繪的雙鍵包括"E"和"Z"同分異構(gòu)體。在雙鍵周?chē)娜〈蛇x的可以指 示作為"順式"或"反式"，其中"順式"表示取代基在雙鍵同側(cè)，和"反式"表示取代基在雙鍵 對(duì)側(cè)。
[0046]本文中描述的某些化合物可以作為單個(gè)互變異構(gòu)體或作為互變異構(gòu)體的混合物 存在。例如，具有連接到至少一個(gè)胍氮原子上的氫原子的某些胍化合物可以作為單個(gè)互變 異構(gòu)體或互變異構(gòu)體的混合物存在。為了說(shuō)明，取決于連接在R 1，!?2和R3位置上的取代基，胍 化合物可以作為以A，B，或C表示的單個(gè)互變異構(gòu)體存在，或作為兩個(gè)或以上A，B，和C的混合 物存在。
[0048] 本文公開(kāi)的化合物可以與藥學(xué)上可接受的溶劑，比如水，乙醇，丙酮等以溶劑化和 非溶劑化形式存在，其旨在本發(fā)明包含溶劑化和非溶劑化形式。
[0049] 本發(fā)明還包含與本文記載的那些相同的本發(fā)明的同位素標(biāo)記物，除了一個(gè)或多個(gè) 原子被具有原子量或質(zhì)量數(shù)與通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子量或質(zhì)量數(shù)不同的原子取代?？?以被摻入本發(fā)明化合物的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，比如分 別是 2H，3H，13C，14C，15N， 180，170，31P，32P，35S， 18F，和 36C1。
[0050] 某些同位素標(biāo)記的公開(kāi)的化合物(例如，那些用3H和14C標(biāo)記的）在化合物和/或底 物組織分布含量測(cè)定中有用。氚（即， 3H)和碳_14(即，14C)同位素是特別優(yōu)選的易于制備和 檢測(cè)的。進(jìn)一步，用較重的同位素比如氘（即， 2H)可以提供某些來(lái)自更高的代謝穩(wěn)定性的治 療優(yōu)點(diǎn)（例如，增加體內(nèi)半衰期或降低劑量要求)并因此在某些環(huán)境下可以是優(yōu)選的。本發(fā) 明同位素標(biāo)記的化合物通?？梢酝ㄟ^(guò)以下與例如本文實(shí)施例公開(kāi)的類(lèi)似的步驟，通過(guò)用同 位素標(biāo)記的試劑取代非同位素標(biāo)記的試劑制備。
[0051 ] 化學(xué)名稱(chēng)"3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨 基)亞甲基)苯甲酰胺"指以下化合物：
[0053]術(shù)語(yǔ)鄰位，間位和對(duì)位是本領(lǐng)域所公認(rèn)的概念并分別指1，2-，1，3-和1，4_二取代 的苯。例如，名稱(chēng)1，2_二甲苯和鄰-二甲苯是同義詞。
[0054]術(shù)語(yǔ)〃IC5Q〃是本領(lǐng)域所公認(rèn)的概念并指對(duì)其目標(biāo)50 %抑制所要求的化合物的濃 度。
[0055]術(shù)語(yǔ)〃EC5Q〃是本領(lǐng)域所公認(rèn)的概念并指在觀察到50%最大效果的化合物的濃度。
[0056] 術(shù)語(yǔ)"受試者"和"患者"指通過(guò)本發(fā)明的方法待治療的生物體。這樣的生物體優(yōu)選 地包括，但不限于，哺乳動(dòng)物(例如，鼠，猿，馬，牛，豬，犬，貓等），且最優(yōu)選地包括人類(lèi)。在本 發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"受試者"和"患者"通常指?jìng)€(gè)體，其將接受或已經(jīng)接受治療(例如，給 藥本發(fā)明的化合物和任選地一種或多種其他試劑)特征在于細(xì)胞凋亡過(guò)程失調(diào)的病癥。
[0057] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"有效量"指化合物的數(shù)量足以產(chǎn)生有益或所希望的結(jié)果。 有效量可以以一種或多種給藥、應(yīng)用或劑量施用，并不意在限制特定制劑或給藥途徑。如本 文所使用的，術(shù)語(yǔ)"治療"包括任何效果，例如，減輕、減少、調(diào)節(jié)、改善或消除其癥狀，其導(dǎo)致 病癥、疾病、障礙的改進(jìn)等等;或改善其癥狀。
[0058] 詞組"病理性增殖或生長(zhǎng)的細(xì)胞"指動(dòng)物中局部的增殖細(xì)胞群體，其不被正常生長(zhǎng) 的通常限制管控。
[0059] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"未激活的靶向細(xì)胞"指或在G。期或還沒(méi)有應(yīng)用刺激物的細(xì) 胞。
[0060] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"激活的靶淋巴細(xì)胞"指已經(jīng)接觸合適的刺激物以導(dǎo)致信號(hào) 傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的淋巴細(xì)胞，或可選地，未處在G。期的淋巴細(xì)胞。激活的淋巴細(xì)胞可以增殖，經(jīng)歷 激活誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，或產(chǎn)生一種或多種細(xì)胞毒素，細(xì)胞因子，或其他相關(guān)的膜相關(guān)蛋白質(zhì)特 性的細(xì)胞類(lèi)型(例如，CD8+或CD4+)。它們還能識(shí)別并結(jié)合在其表面顯示特定抗原的任何靶細(xì) 胞，并隨后釋放它的效應(yīng)分子。
[0061] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"激活的癌細(xì)胞"指已經(jīng)接觸合適的刺激物以導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo) 的癌細(xì)胞。激活的癌細(xì)胞可能在或可能不在Go期。
[0062] 激活劑是在靶細(xì)胞上相互作用的刺激物，導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)。激活的刺激物的例 子包括，但不限于，小分子，輻射能量，和結(jié)合到細(xì)胞激活細(xì)胞表面受體的分子。由激活刺激 物誘導(dǎo)的響應(yīng)可以通過(guò)改變?cè)诩?xì)胞內(nèi)Ca 2+，超氧化物，或羥自由基水平等;酶，像激酶或磷酸 酶的酶活性;或細(xì)胞能級(jí)來(lái)表征。對(duì)于癌細(xì)胞，激活劑還包括轉(zhuǎn)化的癌基因。
[0063] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞死亡過(guò)程失調(diào)"指細(xì)胞經(jīng)由壞死或細(xì)胞凋亡經(jīng)歷細(xì)胞 死亡的能力(例如，傾向）的任何異常。細(xì)胞死亡的失調(diào)與多種病癥相關(guān)或由多種病癥誘導(dǎo)， 所述病癥包括例如，免疫障礙(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，自體免疫障礙，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，移 植物抗宿主疾病，重癥肌無(wú)力，斯耶格倫氏綜合癥等），慢性炎癥病癥(例如牛皮癬，哮喘和 克羅恩病），過(guò)度增殖性病癥(例如腫瘤，B細(xì)胞淋巴瘤，T細(xì)胞淋巴瘤等），病毒感染(例如皰 疹，乳頭狀瘤，HIV)和其它病癥比如骨關(guān)節(jié)炎和動(dòng)脈粥樣硬化。
[0064] 應(yīng)當(dāng)注意，當(dāng)失調(diào)是由病毒感染誘導(dǎo)或與其相關(guān)時(shí)，在失調(diào)發(fā)生或觀察到的同時(shí) 可能或可能沒(méi)檢測(cè)到病毒感染。即，即使在病毒感染的癥狀消失之后也可以發(fā)生病毒誘導(dǎo) 的失調(diào)。
[0065] 如本文所使用的"過(guò)度增殖性障礙"指任何病癥，其中動(dòng)物中局部的增殖細(xì)胞群體 不由正常生長(zhǎng)的通常限制所管控。過(guò)度增殖性障礙的例子包括瘤，腫瘤，淋巴瘤等。如果它 不經(jīng)歷侵襲或轉(zhuǎn)移則腫瘤被認(rèn)為是良性的，如果經(jīng)歷這些任何一個(gè)則是惡性的。轉(zhuǎn)移的細(xì) 胞或組織意味著細(xì)胞可以侵襲并破壞相鄰身體結(jié)構(gòu)。增生是細(xì)胞增殖的形式，包括在組織 或器官中細(xì)胞數(shù)量的增長(zhǎng)，而沒(méi)有結(jié)構(gòu)或功能上的顯著改變?；鞘芸丶?xì)胞增長(zhǎng)的形式， 其中一種類(lèi)型的完全分化的細(xì)胞代替另一種類(lèi)型的分化的細(xì)胞?；梢园l(fā)生在上皮或結(jié) 締組織細(xì)胞中。典型的化生包括有點(diǎn)無(wú)序地化生的上皮。
[0066]激活的淋巴細(xì)胞的病理性生長(zhǎng)通常導(dǎo)致免疫障礙或慢性炎癥病癥。如本文所使用 的，術(shù)語(yǔ)"免疫障礙"指任何病癥，其中生物體產(chǎn)生識(shí)別生物體本身分子、細(xì)胞或組織的抗體 或免疫細(xì)胞。免疫障礙的非限制性例子包括自身免疫障礙，免疫溶血性貧血，免疫肝炎，巴 爾熱（Berger)病或IgA腎病，乳糜瀉，慢性疲勞綜合征，克羅恩（Crohn)病，皮肌炎，纖維肌 痛，移植物抗宿主疾病，格雷夫(Grave)病，橋本(Hashimoto)甲狀腺炎，特發(fā)性血小板減少 性紫癜，扁平苔癬，多發(fā)性硬化，重癥肌無(wú)力，牛皮癬，風(fēng)濕熱，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，硬皮病，斯耶 格倫綜合征，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，1型糖尿病，潰瘍性結(jié)腸炎，白癜風(fēng)。
[0067]如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"慢性炎癥病癥"指病癥，其中生物體的免疫細(xì)胞是激活的。 這樣的病癥其特征在于對(duì)病理性后遺癥的持續(xù)炎癥反應(yīng)。該狀態(tài)其特征在于單核細(xì)胞的浸 潤(rùn)，成纖維細(xì)胞和小血管的增殖，增加的結(jié)締組織，和組織破壞。慢性炎癥疾病的例子包括， 但不限于，克羅恩病，銀肩病，慢性阻塞性肺部疾病，炎性腸疾病，多發(fā)性硬化癥，和哮喘。免 疫性疾病比如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡也可以導(dǎo)致慢性炎性狀態(tài)。
[0068] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合給藥"指向受試者給藥至少兩種試劑(例如，本發(fā)明的 化合物)或療法。在一些實(shí)施方式中，兩種或更多種試劑/療法的聯(lián)合給藥同時(shí)發(fā)生。在其他 實(shí)施方式中，第一種試劑/療法的施用在第二種試劑/療法之前。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解各種 試劑/療法的制劑和/或給藥途徑的使用可以改變。對(duì)于聯(lián)合給藥合適的劑量可以由本領(lǐng)域 技術(shù)人員容易地確定。在一些實(shí)施方式中，當(dāng)試劑/療法是聯(lián)合給藥時(shí)，試劑/療法各自以比 它們單獨(dú)給藥的合適劑量更低的劑量給藥。因此，聯(lián)合給藥在其中試劑/療法的聯(lián)合給藥降 低已知潛在有害的(例如，毒性)試劑的必需劑量的實(shí)施方式中是特別希望的。
[0069] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥物組合物"指活性劑與惰性或活性載體的組合物，使得 組合物特別適合體內(nèi)或體外診斷或治療用途。
[0070] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載體"指任何標(biāo)準(zhǔn)藥物載體，比如磷酸鹽 緩沖鹽溶液、水、乳劑(例如，比如油/水或水/油乳劑），和各種類(lèi)型的濕潤(rùn)劑。組合物還可以 包括穩(wěn)定劑和防腐劑。載體、穩(wěn)定劑和助劑的例子，參見(jiàn)例如，Mart in，Remington ' S Pharmaceutical Sciences，15th Ed.，Mack Publ·Co·，Easton，PA[1975]〇
[0071] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"指本發(fā)明的化合物的任何藥學(xué)上可接 受的鹽(例如，酸或堿），其向受試者給藥，能夠提供本發(fā)明的化合物或其活性代謝物或殘余 物。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，本發(fā)明的化合物的"鹽"可以衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或堿。酸的 例子包括，但不限于，鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，高氯酸，富馬酸，馬來(lái)酸，磷酸，乙醇酸，乳 酸，水楊酸，琥珀酸，對(duì)甲苯磺酸，酒石酸，乙酸，檸檬酸，甲磺酸，乙磺酸，甲酸，苯甲酸，丙二 酸，萘-2-磺酸，苯磺酸等。其它的酸，比如草酸，雖然其本身并非藥學(xué)上可接受的，可以用于 制備用作中間體的鹽，以獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
[0072] 堿的例子包括，但不限于，堿金屬(例如，鈉)氫氧化物，堿土金屬(例如鎂），氫氧化 物，氨和式NW4+的化合物，其中1是&-4烷基，等等。
[0073] 鹽的例子包括，但不限于，乙酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺 酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環(huán)戊烷丙酸鹽，二葡糖酸鹽，十 二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，富馬酸鹽，F(xiàn)lucoheptanoate，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己 酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來(lái)酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺 酸鹽，煙酸鹽，草酸鹽，棕櫚酸鹽，果膠酸鹽，過(guò)硫酸鹽，苯丙酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，丙酸 鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，甲苯磺酸鹽，十一酸鹽等。鹽的其它例子包括本發(fā)明的 化合物陰離子與合適的陽(yáng)離子，比如Na+，NH4+，和NW4+ (其中1是&-4烷基)混合，等等。
[0074] 對(duì)于治療用途，本發(fā)明的化合物的鹽考慮為是藥學(xué)上可接受的。但是，非藥學(xué)上可 接受的酸和堿的鹽也可以發(fā)現(xiàn)在例如藥學(xué)上可接受的化合物的制備或純化中使用。
[0075] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)"指化合物的活性（例如，本發(fā)明的化合物)影響（例 如，促進(jìn)或阻滯)細(xì)胞功能的方面，包括但不限于，細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、細(xì)胞凋亡等。
[0076] 在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中，組合物被描述為具有、包括、或包含特定組分，或過(guò)程和方法被 描述具有、包括、或包含特定步驟，另外，也意圖有:本發(fā)明的組合物基本上由或由所記載的 組分組成，以及根據(jù)本發(fā)明的過(guò)程和方法基本上由或由所記載的處理步驟組成。
[0077] -般情況下，除非另有說(shuō)明，組合物指定百分比是按重量計(jì)。進(jìn)一步，如果變量沒(méi) 有伴隨定義，則先前的變量定義控制。
[0078] I.FiFo-ATP酶活性調(diào)節(jié)劑
[0079] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明通過(guò)將細(xì)胞暴露于本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)FiFo-ATP酶活 性(例如，線粒酶活性）。在一些實(shí)施方式中，化合物抑制ATP合成和ATP水解?？梢?通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞變化的任何數(shù)字測(cè)量化合物的效果。例如，線粒酶活性和/或細(xì)胞 死亡可以如本文所述和現(xiàn)有技術(shù)測(cè)定。在一些實(shí)施方式中，細(xì)胞系維持在適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng) 條件下（例如，氣體(C0 2)、溫度和培養(yǎng)基)一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)期，以獲得不依賴(lài)于密度限制的指 數(shù)式增殖。利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，比如錐蟲(chóng)藍(lán)排除/血細(xì)胞計(jì)數(shù)法，或阿拉瑪藍(lán)或MTT染料轉(zhuǎn)換測(cè) 定，測(cè)量細(xì)胞數(shù)量和或活力。可選地，可以分析細(xì)胞用于與細(xì)胞凋亡或壞死反常有關(guān)的基因 或基因產(chǎn)物表達(dá)。
[0080]在一些實(shí)施方式中，向細(xì)胞暴露本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在某些其他的實(shí) 施方式中，本發(fā)明的化合物通過(guò)與線粒體FiFo-ATP酶相互作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增 殖。在又其他的實(shí)施方式中，當(dāng)向受試者給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物引起細(xì)胞R0S水平(例如， 0〇最初的增加。
[0081 ] II.三氟甲基吡唑基胍化合物
[0082]本發(fā)明的一個(gè)方面提供了由式I表示的化合物族：
[0084] 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物;其中 R1是位于它所連接的苯基的間位或?qū)ξ簧系穆然鶊F(tuán)?？梢岳斫?，術(shù)語(yǔ)"鄰"和"對(duì)"分別指1-位是羰基連接點(diǎn)的苯基的3-位和4-位。
[0085] 在某些實(shí)施方式中，化合物是式I的化合物或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，或前述任 何的藥學(xué)上可接受的鹽。在某些其他的實(shí)施方式中，化合物是式I的化合物或幾何異構(gòu)體或 互變異構(gòu)體，或前述任何的藥學(xué)上可接受的溶劑化物。在某些實(shí)施方式中，化合物是丙酮溶 劑化物的形式。
[0086] 在某些實(shí)施方式中，化合物由下式表示：
[0088]或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽。在某些其他的實(shí) 施方式中，化合物由下式表示：
[0090] 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的溶劑化物。在某些實(shí)施方式中，化合物 是丙酮溶劑化物形式。
[0091] 在又其他的實(shí)施方式中，化合物由下式表示：
[0092]
或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體。在又其他的實(shí)施方式 中，化合物由下式表示：
[0094]本發(fā)明的另一個(gè)方面提供由下式表示的化合物：
[0096]或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。在某 些實(shí)施方式中，化合物是
[0097]幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽。在某些其他的實(shí)施
[ 方式中，化合物是 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的
溶劑化物。在又其他的實(shí)施方式中，化合物是 或幾何異構(gòu)體或 互變異構(gòu)體。在又其他的實(shí)施方式中，化合物是
[0098] 化合物的結(jié)晶形式
[0099] 本發(fā)明的另一個(gè)方面提供晶型的化合物。例如，本發(fā)明的另一個(gè)方面提供結(jié)晶化 合物3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲 酰胺。該結(jié)晶化合物可以是不同的聚合形式。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多晶型I和多晶型II。
[0100] A. 3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞甲 基)苯甲酰胺的晶型I
[0101] 3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基） 苯甲酰胺晶型I的制備過(guò)程描述在例如本文的實(shí)施例3中。型I的X-射線粉末衍射圖在圖3中 提供。型I的示差掃描量熱法曲線與型I的熱重量分析曲線在圖4中提供。3-氯4-(((3-氯_ 5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺的型I可以根據(jù)它 的X-射線粉末衍射圖和由它的示差掃描量熱法確定的熔點(diǎn)開(kāi)始來(lái)表征。
[0102] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供結(jié)晶3-氯-N_(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-1H-吡唑-3-基)氨基）亞甲基）苯甲酰胺，其顯示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射線粉末衍射圖 ：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0±0·2,20·0 ±0.2,和25.2±0.2。在某些實(shí)施方式中，在所述衍射角度（2Θ)的峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少 20%。在某些實(shí)施方式中，在所述衍射角度(2Θ)的峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少30%。
[0103] 結(jié)晶化合物可以進(jìn)一步通過(guò)以衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì) 于最強(qiáng)峰的百分比)表示的以下X-射線粉末衍射圖表征：
[0106] 在又進(jìn)一步的實(shí)施方式中，晶型I可以進(jìn)一步表征為具有X-射線粉末衍射圖，基本 上如圖3中顯示。
[0107] 可以使用CuKa輻射獲得X-射線粉末衍射圖。獲得X-射線粉末衍射圖的溫度可以是 在例如25 ±2攝氏度。
[0108] 晶型I可以通過(guò)由示差掃描量熱法確定的熔點(diǎn)開(kāi)始的溫度進(jìn)一步表征。在某些實(shí) 施方式中，結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱法確定的范圍從約149攝氏度至約164攝氏度的 熔點(diǎn)開(kāi)始。在某些其他的實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱法確定的范圍從約 157攝氏度至約161攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。在又其他的實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物具有由示差掃 描量熱法確定的在約159攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。又進(jìn)一步，晶型I可以進(jìn)一步通過(guò)具有基本上 與圖4顯示相同的示差掃描量熱法曲線來(lái)表征。
[0109] B. 3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞甲 基)苯甲酰胺的晶型II
[0110] 3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基） 苯甲酰胺的晶型Π 的制備過(guò)程描述在例如本文實(shí)施例4和實(shí)施例5中。晶型II的示例性X-射 線粉末衍射圖提供在圖5和7中。晶型II的不差掃描量熱法曲線提供在圖6和8中。3-氯-Να (3_ 氯 _5_ 氟苯基) 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 )-1Η_ 吡唑 _3_ 基) 氨基) 亞甲基) 苯甲酰胺的晶型 II可以根據(jù)它的X-射線粉末衍射圖和由示差掃描量熱法確定的它的熔點(diǎn)開(kāi)始來(lái)表征。
[0111] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供結(jié)晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-m-吡唑-3-基)氨基）亞甲基）苯甲酰胺，其顯示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射線粉末衍射圖：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2，19·2±0·2,20·6 ±0.2，22.2±0.2,25.7±0.2,26.0±0.2,和35.7±0.2。在某些實(shí)施方式中，在所述衍射角 度(2Θ)的峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少15%。在某些其他的實(shí)施方式中，在所述衍射角度(2Θ)的峰 的相對(duì)強(qiáng)度是至少18 %。
[0112] 在某些實(shí)施方式中，晶型II可以進(jìn)一步表征為在X-射線粉末衍射圖中包含以下 (以衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比）表示））特征：
[0115]晶型II可以進(jìn)一步通過(guò)以衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最 強(qiáng)峰的百分比)表示的以下X-射線粉末衍射圖表征：
[0119]在又進(jìn)一步的實(shí)施方式中，晶型11可以進(jìn)一步表征為具有基本上如圖5中顯不的 X-射線粉末衍射圖。在其他實(shí)施方式中，晶型II可以進(jìn)一步表征為具有基本上如圖7中顯示 的X-射線粉末衍射圖。
[0120] 可以使用CuKa輻射獲得X-射線粉末衍射圖。獲得X-射線粉末衍射圖的溫度可以是 在例如25 ±2攝氏度.
[0121] 晶型II可以進(jìn)一步通過(guò)由示差掃描量熱法確定的它的熔點(diǎn)開(kāi)始的溫度表征。在某 些實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱法確定的熔點(diǎn)開(kāi)始，所述熔點(diǎn)范圍從約158 攝氏度至約165攝氏度。在某些其他的實(shí)施方式中，結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱法確定 的如下范圍的熔點(diǎn)開(kāi)始，所述范圍從約159攝氏度至約164攝氏度。在又其他的實(shí)施方式中， 結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱法確定的如下的熔點(diǎn)開(kāi)始:在約158攝氏度，約159攝氏度， 約160攝氏度，約163攝氏度，約164攝氏度，或約165攝氏度。在又其他的實(shí)施方式中，結(jié)晶化 合物具有由示差掃描量熱法確定的在約159攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。又進(jìn)一步，晶型II可以進(jìn)一 步通過(guò)具有基本上與圖6顯示相同的示差掃描量熱法曲線來(lái)表征。在又其他的實(shí)施方式中， 晶型II可以進(jìn)一步通過(guò)具有基本上與圖8顯示相同的示差掃描量熱法曲線來(lái)表征。
[0122] C.結(jié)晶3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑- 3-基)氨基） 亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物
[0123] 結(jié)晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑- 3-基)氨基）亞 甲基）苯甲酰胺丙酮溶劑化物的制備過(guò)程描述在例如本文實(shí)施例2中。結(jié)晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物 的x-射線粉末衍射圖在圖1中提供。它的示差掃描量熱法曲線與熱重量分析曲線一起在圖2 中提供。3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞甲基） 苯甲酰胺丙酮溶劑化物可以根據(jù)它的X-射線粉末衍射圖和由示差掃描量熱法確定的它的 熔點(diǎn)開(kāi)始表征。
[0124] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供結(jié)晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-m-吡唑-3-基)氨基)亞甲基）苯甲酰胺丙酮溶劑化物，其顯示出包含在以下衍射角度 (2Θ)的峰的X-射線粉末衍射圖 ：6·2±0·2,8·3±0·2，14·7±0·2，17·5±0·2，17·9±0·2， 18.5±0.2,20.2±0.2,20.9±0.2,23.5±0.2，和25.9±0.2。在某些實(shí)施方式中，其中在所 述衍射角度(2Θ)的相對(duì)強(qiáng)度是至少10%。在某些其他的實(shí)施方式中，其中在所述衍射角度 (2Θ)的相對(duì)強(qiáng)度是至少15%。
[0125] 結(jié)晶化合物可以進(jìn)一步通過(guò)以衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì) 于最強(qiáng)峰的百分比)表示的以下X-射線粉末衍射圖表征：
[0128] 在又進(jìn)一步的實(shí)施方式中，結(jié)晶3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-1H-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物可以進(jìn)一步表征為具有基本上如 圖1顯示的X-射線粉末衍射圖。
[0129] 可以使用CuKa輻射獲得X-射線粉末衍射圖。獲得X-射線粉末衍射圖的溫度可以是 在，例如，25 ±2攝氏度。
[0130] 結(jié)晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亞 甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物可以進(jìn)一步通過(guò)具有熔點(diǎn)開(kāi)始在約159攝氏度來(lái)表征。又進(jìn)一 步，結(jié)晶化合物可以進(jìn)一步通過(guò)基本上與圖2顯示相同的示差掃描量熱法曲線來(lái)表征。
[0131] 在某些其他的實(shí)施方式中，化合物是在實(shí)施例1-7中所列的化合物之一，或所述化 合物藥學(xué)上可接受的鹽。在某些其他的實(shí)施方式中，化合物是在實(shí)施例1-8中所列的化合物 之一，或所述化合物藥學(xué)上可接受的鹽?？梢岳斫馇笆龌衔锟梢耘c藥學(xué)上可接受的載體 結(jié)合以產(chǎn)生藥物組合物。
[0132] 制備本文所述化合物的示例性方法在實(shí)施例中提供。
[0133] III.三氟甲基吡唑基胍化合物的治療應(yīng)用
[0134] 可以預(yù)期，本文所述的胍化合物，比如式I的胍化合物和本文所述特定的結(jié)晶化合 物，對(duì)遭受任何一種或多種許多病癥的患者提供治療的益處，例如，特征在于Ffo-ΑΤΡ酶活 性失調(diào)的疾病，特征在于細(xì)胞或組織中壞死和/或細(xì)胞凋亡過(guò)程失調(diào)的疾病，和特征在于異 常細(xì)胞生長(zhǎng)和/或過(guò)度增殖的疾病。本文所述化合物還可以用于治療各種與如本文其他地 方所述的細(xì)胞死亡相關(guān)的失調(diào)障礙。另外地，本文所述化合物可以用于抑制ATP合成。
[0135] 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供了治療遭受醫(yī)學(xué)障礙的受試者的方法。所述方法包 括向受試者給藥治療有效量的一種或多種本文所述胍化合物，例如，式I的化合物或特定的 結(jié)晶化合物，如在上面部分II中所述，目的是改善障礙的癥狀。
[0136] 可以使用本文所述的胍化合物治療許多醫(yī)學(xué)障礙。例如，可以使用如本文所述化 合物治療特征在于在細(xì)胞或組織中壞死和/或細(xì)胞凋亡過(guò)程失調(diào)的醫(yī)學(xué)病癥，特征在于異 常細(xì)胞生長(zhǎng)和/或過(guò)度增殖的疾病等，或狼瘡，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀肩病，移植物抗宿主疾 病，克羅恩病，炎性腸病，多發(fā)性硬化癥，心血管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤，癌癥和細(xì)菌感染。在 某些實(shí)施方式中，癌癥是實(shí)體腫瘤，白血病，結(jié)腸癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，鱗 狀上皮細(xì)胞癌，基底細(xì)胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，肺癌，小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌，膀 胱癌，胃癌，宮頸癌，睪丸腫瘤，皮膚癌，直腸癌，甲狀腺癌，腎癌，子宮癌，食道(espophagus) 癌，肝癌，聽(tīng)神經(jīng)瘤，膠質(zhì)細(xì)胞瘤，腦膜瘤，黑素瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，或視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。
[0137] 雖然不希望受到特定理論的限制，但是可以相信化合物通過(guò)在受影響的細(xì)胞或組 織中調(diào)節(jié)(例如，抑制或促進(jìn)^iFo-ATP酶復(fù)合物(例如，線粒酶復(fù)合物)的活性給 予治療益處。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物用于治療免疫/慢性炎性病癥(例如牛皮 癬，自體免疫障礙，器官移植排斥，和表皮增生）。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物 與狹窄療法聯(lián)合用于治療受損(例如閉塞的)血管。
[0138] 在某些實(shí)施方式中，包含胍化合物的組合物在最大化指向FiFo-ATP酶的期望的效 果的條件下(例如，定時(shí)，劑量，與其他試劑聯(lián)合給藥，給藥模式，受試者選擇，靶向試劑的使 用等)給藥。
[0139] 在某些實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是免疫障礙。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是 炎性障礙。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是自身免疫障礙。在某些其他的實(shí)施方式 中，醫(yī)學(xué)障礙類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀肩病，慢性移植物抗宿主疾病，急性移植物抗宿主病，克羅 恩病，炎性腸疾病，多發(fā)性硬化，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，乳糜瀉，特發(fā)性血小板減少性血栓形成紫 癜，重癥肌無(wú)力，斯耶格倫氏綜合癥，硬皮病，潰瘍性結(jié)腸炎，哮喘，葡萄膜炎，或表皮增生。
[0140] 在某些實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。
[0141 ]在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是軟骨炎癥，骨退化，關(guān)節(jié)炎，少年關(guān)節(jié)炎，幼 年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，少關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，全身 發(fā)作幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，青少年型強(qiáng)直性脊椎炎，青少年腸病性關(guān)節(jié)炎，青少年反應(yīng)性 關(guān)節(jié)炎，青少年Reter氏綜合征，SEA綜合癥，青少年型皮肌炎，青少年銀肩病性關(guān)節(jié)炎，青少 年硬皮病，青少年全身性紅斑狼瘡，青少年脈管炎，少關(guān)節(jié)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多關(guān)節(jié)炎類(lèi)風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎，全身性發(fā)作類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，強(qiáng)直性脊柱炎，腸病性關(guān)節(jié)炎，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎， Reter氏綜合癥，皮肌炎，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，脈管炎，脊髓炎（myol itis )，多發(fā)性肌炎 (口〇171117〇1；[1^8)，皮肌炎（(161'1]^1：01117〇1；[1^8)，骨關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎，韋格納肉芽腫 病，動(dòng)脈炎，風(fēng)濕性多肌痛，結(jié)節(jié)病，硬化癥，原發(fā)性膽管纖維硬化，硬化性膽管炎，皮炎，特 應(yīng)性皮炎，動(dòng)脈粥樣硬化，斯蒂爾（Still)疾病，慢性阻塞性肺病，吉蘭-巴爾（Guillain-Barre)疾病，I型糖尿病，格雷夫斯疾病，艾迪生氏(Addison)疾病，雷諾氏（Raynaud)現(xiàn)象， 或自身免疫性肝炎。在某些實(shí)施例中，銀肩病是斑塊型銀肩病，點(diǎn)滴狀銀肩病，皮褶牛皮鮮， 膿皰性銀肩病，或紅皮病型銀肩病。
[0142] 在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是克羅恩病，炎性腸病，多發(fā)性硬化癥，移植 物抗宿主病，狼瘡，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或牛皮癬。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是心血 管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤或癌癥。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是狼瘡，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，牛皮癬，移植物抗宿主病，骨髓瘤或淋巴瘤。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是心血 管疾病或癌癥。在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是克羅恩病，炎性腸病，多發(fā)性硬化癥。 在某些其他的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙是移植物抗宿主病。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，醫(yī)學(xué)障礙 時(shí)細(xì)菌感染。在某些實(shí)施方式中，患者(或受試者)是人類(lèi)。
[0143] 如上所示，本文所述胍化合物可以用于治療細(xì)菌感染。多種細(xì)菌被認(rèn)為對(duì)胍化合 物敏感。代表性細(xì)菌包括葡萄球菌屬（Staphylococci)種，例如，金黃色葡萄球菌 (S . aureus);腸球菌屬（Enterococci )種，例如，奠腸球菌（E . faecal is )和屎腸球菌 (E· faecium);鏈球菌屬（Streptococci)種，例如，肺炎鏈球菌（S·pyogenes)和釀膿鏈球菌 (S.pneumoniae);大腸桿菌屬(Escherichia)種，例如，大腸桿菌(E.coli)，包括腸毒性的， 腸病源的，腸侵襲性的，腸出血性的和腸凝集性大腸桿菌（E.coli)菌株；嗜血桿菌屬 (Haemophilus)種，例如，流感嗜血桿菌(H. inf luenza);和黏膜炎莫拉氏菌屬(Moraxe 11a) 種，例如，卡他摩拉克菌(M. catarrhal is)。其他例子包括分歧桿菌屬(Mycobacteria)種，例 如，結(jié)核分歧桿菌(M. tuberculosis)，鳥(niǎo)胞內(nèi)分歧桿菌(M.avian-intracellulare)，堪薩斯 分歧桿菌（M.kansasii)，牛分歧桿菌（M.bovis)，非洲分歧桿菌（M.africanum)， M.genavense，麻風(fēng)分歧桿菌（Μ· leprae)，蟾蜍分歧桿菌（M.xenopi)，猿分歧桿菌 (M. simiae)，瘰疬分歧桿菌(M. scrofulaceum)，海魚(yú)分歧桿菌(M.malmoense)，M. celatum， 膿腫分歧桿菌(M.abscessus)，龜分歧桿菌(M. chelonae)，蘇爾加分歧桿菌(M. szulgai)，戈 登分歧桿菌(Μ· gordonae)，M.haemophilum，M. fortuni和海氏分歧桿菌(M.marinum);棒狀 桿菌(Corynebacteria)種，例如，白喉?xiàng)U菌(C.diphtheriae);弧菌屬(Vibrio)種，例如，霍 亂弧菌(V. cho 1 erae);彎曲桿菌屬(Campy 1 obacter)種，例如，空腸彎曲菌(C. je juni);螺桿 菌屬(Helicobacter)種，例如，幽門(mén)螺桿菌(H.pylori);假單胞菌屬(Pseudomonas)種，例 如，銅綠假單胞菌（P.aeruginosa);軍團(tuán)病桿菌屬（Legionella)種，例如，嗜肺軍團(tuán)菌 (L · pneumophi la);梅毒種（Treponema)，例如，蒼白球梅毒（T · pal 1 idum);疏螺旋體 (Borrelia)種，例如，布氏疏螺旋體(B.burgdorferi);李斯特式菌屬(Listeria)種，例如， 單增李斯特菌（L monocytogenes);芽孢桿菌屬（Bacillus)種，例如，錯(cuò)狀芽孢桿菌 (B. cereus);敗血波氏桿菌屬(Bordatella)種，例如，百日咳桿菌(B.pertussis);梭菌屬 (Clostridium)種，例如，產(chǎn)氣莢膜梭菌（C.perfringens)，破傷風(fēng)梭菌(C. tetani)，艱難梭 菌(C.difficile)和肉毒梭菌(C.botulinum);奈瑟式菌屬(Neisseria)種，例如，腦膜炎奈 瑟式球菌(N.meningitidis)和淋病奈瑟式菌(N.gonorrhoeae);衣原體菌屬(Chlamydia) 種，例如，鶴鵡熱衣原體（C . psi ttaci )，肺炎衣原體（C . pneumoniae )和沙眼衣原體 (C. trachomatis);立克次氏體菌屬(Rickettsia)種，例如，立氏立克次體(R. rickettsii) 和普氏立克次體(R.prowazekii);志賀菌屬（Shigella)種，例如，宋氏志賀菌（S. sonnei); 沙門(mén)氏菌屬（Salmonella)種，例如，鼠傷寒沙門(mén)氏菌（S . typhimurium);耶爾森氏菌屬 (Yersinia)種，例如，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Y. enterocolitica)和假結(jié)核耶爾森氏菌 (Y.pseu dot uberculosis);克雷伯氏菌屬（Klebsiella)種，例如，肺炎克雷伯氏菌 (K. pneumoniae);支原體菌屬(Mycoplasma)種，例如，肺炎支原體(M. pneumoniae);和布氏 錐蟲(chóng)(Trypanosoma brucei)。在某些實(shí)施方式中，本文所述的胍化合物是用于治療遭受選 自以下細(xì)菌感染的受試者，所述細(xì)菌是金黃色葡萄球菌（S.aureus)，奠腸球菌 (E.faecalis)，屎腸球菌（E.faecium)，釀膿葡萄球菌（S.pyogenes)，肺炎葡萄球菌 (S.pneumonia)，和銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)。在某些實(shí)施方式中，本文所述胍化合物 用于治療遭受布氏錐蟲(chóng)感染的受試者。
[0144] 本文所述化合物的抗菌活性可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法評(píng)價(jià)，比如微量肉 湯稀釋最小抑制濃度(MIC)測(cè)定，如進(jìn)一步描述在國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(National Committee for Clinical Laboratory Standards)，抗菌藥物藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) (Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing);第十四次信息 補(bǔ)充（Fourteenth Informational Supplement)中的NCCLS文件M100_S14{ISBN 1-56238-516-X}。該測(cè)定可以用于確定防止溶液中可見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的化合物必需的最小濃度。通常，待 試驗(yàn)藥物在孔板中連續(xù)稀釋?zhuān)⒓尤胍后w細(xì)菌培養(yǎng)物的等分部分。該混合物在適當(dāng)?shù)臈l件 下培養(yǎng)，然后檢驗(yàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。具有低或無(wú)抗菌活性(高M(jìn)IC)的化合物將允許細(xì)菌在高化合物 濃度生長(zhǎng)，而具有高抗菌活性的化合物將允許細(xì)菌僅在更低的濃度(低MIC)生長(zhǎng)。
[0145] 測(cè)定使用儲(chǔ)備用細(xì)菌培養(yǎng)物條件適合于所選菌株。從永久儲(chǔ)備用培養(yǎng)物采集的儲(chǔ) 備用培養(yǎng)物可以在_70°C作為冷凍混懸液儲(chǔ)存。培養(yǎng)物在于干冰/乙醇中快速冷凍前可以懸 浮在10 %脫脂乳(BD)中，然后放置于-70°C冰箱中。培養(yǎng)物可以于室溫(20 °C)維持在含5 % 綿羊血的胰蛋白酶大豆瓊脂中，在MIC試驗(yàn)之前的另外時(shí)間，每份培養(yǎng)物可以從冷凍形式復(fù) 原并轉(zhuǎn)移。試驗(yàn)前一天進(jìn)行新鮮平板接種，培養(yǎng)過(guò)夜，并檢查確認(rèn)純度和鑒定。
[0146] 可以確認(rèn)從儲(chǔ)備用培養(yǎng)物復(fù)原的培養(yǎng)物的鑒定和純度，以排除污染的可能性?？?以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)方法（參見(jiàn)，例如，Murray et al.，Manual of Clinical Microbiology，Eighth Edition.ASM Press{ISBN 1-55581-255-4})確認(rèn)菌株的鑒定。通 常，將培養(yǎng)物劃線到適當(dāng)?shù)沫傊迳线M(jìn)行純度、期望菌落形態(tài)和溶血性圖案的可視化。也可 以利用革蘭氏染色。使用MicroScan WalkAway 40SI Instrument(Dade Behring，West Sacramento，California)確認(rèn)鑒定。該設(shè)備利用用于識(shí)別目的的自動(dòng)培養(yǎng)器，讀取器和計(jì) 算機(jī)評(píng)價(jià)由各自生物體進(jìn)行的生化反應(yīng)。MicroScan WalkAway也可以用于確定初步MIC，其 可以使用以下描述的方法驗(yàn)證。
[0147] 冷凍的儲(chǔ)備用培養(yǎng)物可以用作進(jìn)行微量肉湯稀釋的最小抑制濃度(MIC)試驗(yàn)的生 物體起始源。儲(chǔ)備用培養(yǎng)物在使用之前遞送到它們的標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)培養(yǎng)基至少1個(gè)生長(zhǎng)周期 (18-24小時(shí)）。大多數(shù)細(xì)菌可以直接從瓊脂板于10mL等分量的適當(dāng)?shù)娜鉁囵B(yǎng)基中制備。調(diào) 節(jié)細(xì)菌培養(yǎng)物至0.5馬克法蘭式標(biāo)準(zhǔn)（在Perkin-Elmer Lambda EZ150分光光度計(jì)0.28-0.33光密度值，Wellesley，Massachusetts，設(shè)定在波長(zhǎng)600nm處）的不透明度。然后將調(diào)整 后的培養(yǎng)物在生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中稀釋400倍(0.25mL接種+100mL肉湯）以產(chǎn)生起始懸浮液約5x 105個(gè)菌落形成單位(CFU)/mL。大多數(shù)菌株可以在陽(yáng)離子調(diào)節(jié)的Mueller Hinton Broth (CAMHB)中檢測(cè)。
[0148] 受試化合物（"藥物"）可溶于適用于測(cè)定的溶劑，比如DMS0。藥物儲(chǔ)備用溶液可以 在試驗(yàn)當(dāng)天制備。微量肉湯稀釋儲(chǔ)備用板可以在兩種稀釋系列中制備，64至0.06yg藥物/mL 和0.25至0.00025yg藥物/mL。對(duì)于高濃度系列，向96孔微量滴定板的二重行中加入200yL儲(chǔ) 備用溶液(2mg/mL)。這用作稀釋系列中的第一孔。使用BioMek FX機(jī)器人(Beckman Coulter Inc.，F(xiàn)ullerton，CA)用剩余11個(gè)孔中的10個(gè)，其中每個(gè)將包含100yL適當(dāng)?shù)娜軇?稀釋劑， 制備連續(xù)兩倍遞減的稀釋液。第12行僅包含溶劑/稀釋劑并充當(dāng)對(duì)照組。對(duì)于低濃度系列的 第一孔，向96孔板的二重行加入200yL的8yg/mL的儲(chǔ)備液。如上述制備連續(xù)兩倍稀釋液。
[0149] 子96-孔板使用BioMek FX機(jī)器人可以從以上所列儲(chǔ)備用板點(diǎn)注（3.2yL/well)并 馬上使用或在使用之前于_70°C冷凍。需氧生物體使用BioMek FX機(jī)器人接種到（100yL體 積)解凍板上。將接種板放置于架子上并用空板覆蓋。然后在根據(jù)CLSI指南（國(guó)家委員會(huì)臨 床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，稀釋方法，對(duì)于需氧生長(zhǎng)的細(xì)菌的抗微生物試驗(yàn)；批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)-第六版。 NCCLS文件M7_A6{ISBN 1-56238-486-4} (National Committee for Clinical Laboratory Standards ,Methods for Dilution，Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically；Approved Standard-Sixth Edition.NCCLS document M7-A6{ISBN 1-56238-486-4}))的環(huán)境大氣中培養(yǎng)這些板16至24小時(shí)。
[0150] 在接種和培養(yǎng)之后，可以在黑暗的房間用單一光直接照射通過(guò)微量肉湯托盤(pán)的頂 部，借助試驗(yàn)讀數(shù)鏡(Dynex Technologies 220 16)視覺(jué)估計(jì)細(xì)菌生長(zhǎng)程度。MIC是在試驗(yàn) 條件下防止肉眼可見(jiàn)的生長(zhǎng)的最低藥物濃度。
[0151] 另外地，本文所述任何一種或多種吡唑基胍化合物可以用于治療受試者中與FiFo-ATP水解酶有關(guān)的障礙(例如，心肌梗死，心室的肥大，冠狀動(dòng)脈疾病，非Q波MI，充血性心力 衰竭，心律失常，不穩(wěn)定型心絞痛，慢性穩(wěn)定型心絞痛，變異型的心絞痛，高血壓，間歇性跛 行，末梢閉塞性動(dòng)脈疾病，血栓或血栓栓塞性病癥的血栓栓塞中風(fēng)，靜脈血栓形成，動(dòng)脈血 栓形成，腦血栓，肺栓塞，腦栓塞，血栓形成傾向，彌散性血管內(nèi)凝血，再狹窄，心房顫動(dòng)，心 室擴(kuò)大，動(dòng)脈粥樣硬化的血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬化斑破裂，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，移植動(dòng) 脈粥樣硬化，血管重塑動(dòng)脈粥樣硬化，癌癥，外科手術(shù)，炎癥，全身感染，人工表面，介入性心 臟學(xué)，牛的慢性腦積水病，藥療法，妊娠和流產(chǎn)，和包括視網(wǎng)膜病，腎病和神經(jīng)病的糖尿病并 發(fā)癥）。
[0152] 組合療法
[0153] 另外地，本文所述胍化合物可以與至少一種其他的治療劑組合使用，比如Bz-423 (如描述在U· S ·專(zhuān)利Nos · 7，144，880和7，125，866U· S ·專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)Nos · 111/586，097， 11/585,492,11/445,010,11/324,419,11/176,719,11/110,228,10/935,333,10/886,450， 10/795,535,10/634,114,10/427,211，10/217,878,和09/767,283,和U.S.臨時(shí)專(zhuān)利 Nos·60/878，519，60/812，270，60/802，394，60/732，045，60/730，711，60/704，102，60/686， 348，60/641，040，60/607，599，和60/565，788中的苯二氮雜革.化合物），鉀通道開(kāi)放劑，鈣 通道阻滯劑，鈉一氫離子交換器抑制劑，抗心律失常劑，抗動(dòng)脈粥樣硬化劑，抗凝血藥，抗血 栓形成劑，凝血酶原劑，纖維蛋白原拮抗劑，利尿劑，抗高血壓劑，ATP酶抑制劑，鹽皮質(zhì)激素 受體詰抗劑，磷酸二酯酶(Phospodiesterase)抑制劑，抗糖尿病劑，抗炎劑，抗氧化劑，血管 生成調(diào)節(jié)劑，抗骨質(zhì)疏松劑，激素替代療法，激素受體調(diào)節(jié)劑，口服避孕藥，減肥藥，抗抑郁 藥，抗焦慮劑，抗精神病劑，抗增殖劑，抗腫瘤劑，抗?jié)兒臀甘彻芊戳骷膊?，生長(zhǎng)激素劑 和/或生長(zhǎng)激素促分泌素，甲狀腺模擬物，抗感染劑，抗病毒劑，抗菌劑，抗真菌劑，膽固醇/ 脂質(zhì)降低劑和脂質(zhì)分布療法，模擬缺血預(yù)治療和/或心肌暈眩劑，抗動(dòng)脈粥樣硬化劑，抗凝 血藥，抗血栓劑，抗高血壓劑，抗糖尿病劑和選自以下的抗高血壓劑，所述抗高血壓劑包括： ACE抑制劑，AT-1受體拮抗劑，ET受體拮抗劑，雙重ET/AII受體拮抗劑，血管肽 (vasopeps idase)抑制劑，選自以下的抗血小板劑，所述抗血小板劑包括:GPIIb/II la受體 阻斷劑，P2YdPP2Y12拮抗劑，血栓烷受體拮抗劑，或阿司匹林，以及在藥物組合物中與藥學(xué) 上可接受的載體或稀釋劑一起使用。
[0154] IV.藥物組合物，制劑，和示例性給藥途徑和劑量考量
[0155] 各種意圖的藥物和藥物組合物的示例性實(shí)施方式在以下提供。
[0156] A.制備藥物
[0157] 本發(fā)明的化合物在制備治療各種病癥，比如與細(xì)胞死亡失調(diào)、異常細(xì)胞生長(zhǎng)和增 殖有關(guān)的病癥的藥物中有用。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解本文所述的任何一種或多種化合物， 包括許多【具體實(shí)施方式】，是通過(guò)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)藥物生產(chǎn)過(guò)程制備的。這樣的藥物可以通過(guò)使用 藥物領(lǐng)域已知的遞送方法遞送入受試者體內(nèi)。
[0158] B.示例性藥物組合物和制劑
[0159] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，組合物單獨(dú)給藥，但在一些其他的實(shí)施方式中，組合 物優(yōu)選地存在于包含如上所述至少一種活性成分/試劑的藥物制劑中，與固體載體一起或 可選地，與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和任選地其他治療劑(例如，那些描述在上述部 分III中的那些)一起。每種載體應(yīng)當(dāng)是與制劑的其他成分相容的意義上"可接受的，且不對(duì) 受試者有害。
[0160]意圖的制劑包括那些適合于口服，直腸，鼻，局部(包括透皮，口腔含化和舌下），陰 道，非腸道(包括皮下，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)和皮內(nèi)）和肺部給藥。在一些實(shí)施方式中，制劑可方便地 以單位計(jì)量形式出現(xiàn)并通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域已知的任何方法制備。這樣的方法包括以下步驟:使 活性成分與構(gòu)成一種或多種附加成分的載體聯(lián)合。通常，通過(guò)使活性成分和液體載體或精 細(xì)分割的固體載體或二者均勻地和緊密地聯(lián)合(例如，混合），且然后如果需要使產(chǎn)品成形 而制備制劑。
[0161]適合于口服給藥的本發(fā)明的制劑可以作為離散的單位存在比如膠囊，扁囊劑或片 劑，其中每種優(yōu)選地包含預(yù)定量的活性成分;作為粉末或顆粒;在水溶液或非水溶液液體中 作為溶液或混懸液;或作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。在其他實(shí)施方式中，活性成 分是作為大丸劑，藥糖劑，或糊劑等出現(xiàn)。
[0162] 在一些實(shí)施方式中，片劑包含至少一種活性成分和任選地一種或多種附加試劑/ 載體，是通過(guò)壓制或模制制備各自試劑。在一些實(shí)施方式中，通過(guò)在合適的機(jī)器中以自由流 動(dòng)的形式比如粉末或顆粒任選地與粘合劑(例如，聚乙烯吡咯烷酮，明膠，羥丙基甲基纖維 素），潤(rùn)滑劑，惰性稀釋劑，防腐劑，崩解劑(例如，羥基乙酸淀粉鈉，交聯(lián)聚維酮，交聯(lián)羧甲基 纖維素鈉)表面活性劑或分散劑混合，壓制活性成分制備壓制片劑。通過(guò)在合適的機(jī)器中壓 膜用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉末的化合物(例如，活性成分）的混合物制備模壓片劑。片劑 可以任選地包衣或刻痕并可以被配制以提供在緩釋或控制釋放的其中的活性成分，使用例 如不同比例的羥丙基甲基纖維素以提供所希望的釋放曲線。片劑和膠囊劑可以任選地有腸 溶衣，以提供在腸部分而非胃中的釋放。
[0163] 適合在口中局部給藥的制劑包括錠劑，其包含活性成分在調(diào)味基質(zhì)中，通常是蔗 糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠;軟錠劑，其包含活性成分在惰性基質(zhì)上，比如明膠和甘油，或蔗 糖和阿拉伯樹(shù)膠;和漱口劑，其包含活性成分在合適的液體載體中。
[0164] 根據(jù)本發(fā)明用于局部給藥的藥物組合物是任選地配制成軟膏，乳膏，混懸液，洗 液，粉劑，溶液，糊劑，凝膠劑，噴霧劑，氣霧劑或油。在可選的實(shí)施方式中，局部制劑包含貼 劑或敷料，比如繃帶或用活性成分浸漬的膠布，和任選的一種或多種賦形劑或稀釋劑。在一 些實(shí)施方式中，局部制劑包括增強(qiáng)活性成分通過(guò)皮膚或其他受影響的區(qū)域的吸收或滲透的 化合物。這樣的皮膚滲透增強(qiáng)劑的實(shí)施例包括二甲基亞砜(DMS0)和相關(guān)的類(lèi)似物。
[0165] 如果需要，膏基質(zhì)的水相包括，例如，至少約30%w/w的多羥基醇，即，具有兩個(gè)或 多個(gè)羥基基團(tuán)的醇，比如丙二醇，丁烷-1，3_二醇，甘露糖醇，山梨糖醇，甘油和聚乙二醇和 其混合物。
[0166] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的油相乳劑是由已知方式已知的成分組成。該相一般 包含單獨(dú)的乳化劑(或者稱(chēng)為乳化劑(emulgent))，在一些實(shí)施方式中也是期望該相進(jìn)一步 包括至少一種乳化劑與脂肪或油、或與脂肪和油兩者的混合物。
[0167] 優(yōu)選地，親水性乳化劑與親脂性乳化劑包括在一起，以便作為穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施 方式中，還優(yōu)選包括油和脂肪。同時(shí)，有或沒(méi)有穩(wěn)定劑的乳劑組成所謂的乳化蠟，且該蠟與 油和/或脂肪一起組成所謂的乳化軟膏基質(zhì)，其形成乳膏制劑的油性分散相。
[0168] 適合于眼部局部給藥的制劑還包括滴眼劑，其中活性成分溶解或混懸于適合的載 體，尤其是對(duì)于試劑的水性溶劑。
[0169] 用于直腸給藥的制劑可以作為有包含例如，可可脂或水楊酸鹽的合適的基質(zhì)的栓 劑出現(xiàn)。
[0170]適用于陰道給藥的制劑可以作為包含除試劑之外的陰道栓劑，乳膏，凝膠，糊劑， 泡沫或噴霧制劑出現(xiàn)，本領(lǐng)域已知這樣的載體是適當(dāng)?shù)摹?br>[0171]適用于鼻給藥的制劑，其中載體是固體，包括具有顆粒尺寸的粗顆粒，例如，在約 20至約500微米，其中采用鼻煙的方式給藥，即，從保持在靠近鼻子處的粉末的容器快速吸 入(例如，用力的）通過(guò)鼻通道。其中載體是液體給藥的其他適合的制劑，包括但不限于，鼻 噴霧劑，滴劑或氣霧劑噴霧器，并包括試劑的水性溶液或油性溶液。
[0172]適用于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性的等滲無(wú)菌注射液，其可以包含抗氧 化劑，緩沖劑，抗菌劑和使制劑與意圖接受者的血液等滲的溶質(zhì);且可以包括混懸劑和增稠 劑的水性的和非水性的無(wú)菌混懸液，和脂質(zhì)體或其他微粒體系，其被設(shè)計(jì)成使化合物靶向 至血液組分或一種或多種器官。在一些實(shí)施方式中，制劑在單位劑量或多劑量密閉容器中 出現(xiàn)/配制，例如，安瓿和小瓶，并可以?xún)?chǔ)存在冷凍-干燥(凍干)條件，僅需要在使用之前立 即加入無(wú)菌液體載體，例如注射用水。臨時(shí)注射溶液和懸浮液可以從前述種類(lèi)的無(wú)菌粉末， 顆粒和片劑制備。
[0173] 優(yōu)選的單位劑量制劑是那些包含藥劑的日劑量或單位，日亞劑量，如本文以上記 載的，或其合適的分?jǐn)?shù)試劑。
[0174] 應(yīng)當(dāng)理解除了上述特別提到的成分之外，本發(fā)明的制劑可以包括與討論中的制劑 類(lèi)型有關(guān)的本領(lǐng)域常規(guī)的其他試劑，例如，適用于口服給藥的那些可以包括這樣的作為甜 味劑，增稠劑和調(diào)味劑的進(jìn)一步的試劑。還認(rèn)為本發(fā)明的試劑，組合物和方法是與其他合適 的組合物和療法結(jié)合的。另外其他的制劑任選地包括食品添加劑(合適的甜味劑，調(diào)味劑， 著色劑等），植物營(yíng)養(yǎng)素(例如，亞麻籽油），礦物質(zhì)(例如，Ca，F(xiàn)e，K等），維生素和其它可接受 的組合物(例如，共輒亞油酸），增量劑，和穩(wěn)定劑等。
[0175] C.示例性給藥途徑和劑量考量
[0176] 已知各種遞送系統(tǒng)并可用于給藥本發(fā)明的治療劑(例如，如上所述的示例性化合 物），例如，脂質(zhì)體膠囊，微粒，微膠囊，受體介導(dǎo)的胞吞作用等。遞送的方法包括，但不限于， 動(dòng)脈，肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)，鼻內(nèi)，和口服途徑。在【具體實(shí)施方式】中，可能需要局部給藥本發(fā)明的 藥物組合物到需要治療的區(qū)域;這可以通過(guò)，例如，并不以限制的方式在手術(shù)期間局部灌 輸，注射，或借助導(dǎo)管實(shí)現(xiàn)。
[0177] 所鑒定的試劑可以向易于或處于發(fā)展中的靶細(xì)胞病理性生長(zhǎng)危險(xiǎn)和相關(guān)病癥的 受試者或個(gè)體給藥。當(dāng)試劑給藥至受試者，比如小鼠，大鼠或人類(lèi)患者，可以向藥學(xué)上可接 受的載體中加入試劑并全身或局部給藥至受試者。為了鑒別可以有益地治療的患者，從患 者中除去組織樣本并測(cè)定細(xì)胞對(duì)于試劑的靈敏度。
[0178] 治療量是經(jīng)驗(yàn)確定的并隨被治療的病理，被治療的受試者和試劑的有效性和毒性 改變。當(dāng)遞送至動(dòng)物時(shí)，該方法可用于進(jìn)一步確認(rèn)試劑的有效性。動(dòng)物模型的一個(gè)例子是 MLR/MpJ-lpr/lpr( "MLR-lpr"）（從Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine可得）qMLR-lpr小鼠建立系統(tǒng)性自身免疫性疾病?？蛇x地，通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)可以建立其他動(dòng)物模型， 例如，通過(guò)對(duì)裸小鼠皮下接種約1〇 5至約1〇9過(guò)度增殖的，腫瘤或如本文所述的靶細(xì)胞。當(dāng)腫 瘤被建立，給藥本文所述化合物，例如，通過(guò)在腫瘤周?chē)M(jìn)行皮下注射。測(cè)量腫瘤以確定腫 瘤尺寸的減少是在兩個(gè)維度上利用游標(biāo)卡尺(venier caliper)每周兩次進(jìn)行。其他動(dòng)物模 型也可以適當(dāng)使用。對(duì)于上述疾病和病癥的這樣的動(dòng)物模型是本領(lǐng)域熟知的。
[0179] 在一些實(shí)施方式中，體內(nèi)給藥是以一次劑量，連續(xù)地或間歇地在整個(gè)治療過(guò)程中 實(shí)現(xiàn)的。確定最有效的方式和給藥劑量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并隨療法使用的組 合物，療法的目的，被治療的靶細(xì)胞，和被治療的受試者而改變。單次或多次給藥隨治療醫(yī) 生選擇的劑量水平和模式進(jìn)行，
[0180]合適的劑量制劑和給藥試劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員容易確定的。優(yōu)選地，化合 物在在約0.01mg/kg至約200mg/kg給藥，更優(yōu)選地在約0. lmg/kg至約100mg/kg，甚至優(yōu)選地 在約0.5mg/kg至約50mg/kg。當(dāng)本文所述化合物是與另一種試劑(例如，作為敏化劑)聯(lián)合給 藥時(shí)，有效量可以小于當(dāng)試劑單獨(dú)使用時(shí)的量。
[0181]藥物組合物可以口服，鼻內(nèi)，非腸道或通過(guò)吸入療法給藥，并可以采用片劑，錠劑， 顆粒劑，膠囊劑，丸劑，安瓿，栓劑或氣溶膠形式。它們還可以采用活性成分在水性或非水性 稀釋劑，糖漿，顆?；蚍勰┲械幕鞈乙海芤汉腿閯?。除了本發(fā)明的試劑之外，藥物組合物還 可以包含其他藥學(xué)上的活性化合物或多種本發(fā)明的化合物。
[0182] 更特別地，本發(fā)明的試劑也指這里的活性成分，可以通過(guò)任何合適的途徑用于療 法給藥，但不限于，口服，直腸，鼻，局部(包括但不限于，透皮，氣霧，口腔和舌下），陰道，胃 腸外(包括但不限于皮下，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)和皮內(nèi)）和肺。也可以理解優(yōu)選地途徑隨接受者病癥 和年齡以及被治療的疾病改變。
[0183] 理想地，試劑應(yīng)被給藥以實(shí)現(xiàn)在疾病部位活性化合物的濃度峰值。這可以通過(guò)如 下方式實(shí)現(xiàn)，例如，通過(guò)試劑的靜脈內(nèi)注射，任選地在鹽水中，或通過(guò)口服給藥，例如，作為 包含活性成分的片劑，膠囊劑或糖漿。
[0184] 可以通過(guò)持續(xù)的灌注維持試劑所希望的血液水平，以提供在疾病組織中治療量的 活性成分。有效組合的使用是意圖提供治療組合，其需要比當(dāng)單獨(dú)使用每一單個(gè)治療化合 物或藥物時(shí)所需要的更低的每個(gè)組分總劑量，其由此降低不利影響。
[0185] D.示例性聯(lián)合給藥途徑和劑量考量
[0186] 本發(fā)明還包括涉及本文所述的化合物與一種或多種額外的活性試劑聯(lián)合給藥的 方法。確實(shí)，本發(fā)明進(jìn)一步的方面提供通過(guò)聯(lián)合給藥本發(fā)明的化合物用于增強(qiáng)現(xiàn)有技術(shù)療 法和/或藥物組合物的方法。在聯(lián)合給藥過(guò)程中，可以同時(shí)或順序給藥藥劑。在一個(gè)實(shí)施方 式中，本文所述化合物是在其他活性試劑之前給藥。給藥的藥物制劑和模型可以是上述那 些的任何一種。此外，兩種或多種聯(lián)合給藥的化學(xué)藥劑，生物藥劑或輻射可以使用不同模型 或不同制劑分別給藥。
[0187] 待聯(lián)合給藥的一種或多種藥劑取決于待治療病癥的類(lèi)型。例如，當(dāng)被治療的病癥 是癌癥，額外的藥劑可以是化療劑或輻射。當(dāng)被治療的病癥是免疫障礙，額外的藥劑可以是 免疫抑制劑或抗炎劑。當(dāng)被治療的病癥是慢性炎癥，額外的藥劑可以是抗炎劑。待聯(lián)合給藥 的額外的藥劑，比如抗癌，免疫抑制，抗炎，可以是本領(lǐng)域已知的任何一種藥劑，包括但不限 于目前在臨床使用的那些。確定輻射治療合適的類(lèi)型和劑量也在本領(lǐng)域技術(shù)范圍之內(nèi)或可 以相對(duì)容易地確定。
[0188] 各種與異常細(xì)胞凋亡相關(guān)的病癥的治療通常受限于以下兩個(gè)主要因素：（1)耐藥 性的發(fā)展(2)已知治療劑的毒性。在某些癌癥中，例如，已經(jīng)顯示出抵抗化學(xué)和輻射治療與 抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)。一些治療劑具有有害的副作用，包括非特異性淋巴毒性，腎臟和骨髓毒 性。
[0189] 本文所述方法解決了這兩個(gè)問(wèn)題。需要增加劑量以達(dá)到治療效果的耐藥性，通過(guò) 聯(lián)合給藥本文所述化合物與已知試劑得以克服。本文所述化合物使靶細(xì)胞對(duì)已知藥劑(反 之亦然)敏感，并因此達(dá)到治療效果需要更少的這些藥劑。
[0190] 要求保護(hù)的化合物的致敏功能還解決了與已知治療劑的毒性作用相關(guān)的問(wèn)題。在 已知藥劑有毒性的例子中，希望在所有情況下限制給藥劑量，并特別是在那些耐藥性已經(jīng) 增加了必需劑量的情況中。當(dāng)要求保護(hù)的化合物是與已知藥劑聯(lián)合給藥時(shí)，它們降低了所 需劑量，這又減小了有害作用。 實(shí)施例
[0191] 現(xiàn)在一般性地描述本發(fā)明，通過(guò)參考以下實(shí)施例會(huì)更容易理解，其僅包括本發(fā)明 實(shí)施方式某些方面的解釋的用途，并不意圖限制本發(fā)明。除非另有指明，所使用的HPLC方法 如下：Waters Symmetry C-18柱，4.6x 150mm，3.5微米，25°C，1.0mL/min，25分鐘梯度5% MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中至95 %MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中，然后95 % MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中 10分鐘，并然后平衡至5 %MeCN于H20(0.1 % TFA)中超過(guò)5.0分鐘。詞組"H20(0.1 %TFA)"是本 領(lǐng)域所公認(rèn)的概念并指包含0.1 % v/v三氟乙酸的水。
[0192] 實(shí)施例1-3-氯-N-((3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲?；╟arbamothioy 1))苯甲酰胺的 制備
[0194]在乙腈(4.5L)中溶解3-氯苯甲酰氯(200g，1.14mol)并將含有該混合物的反應(yīng)器 于冰/水浴中冷卻。向反應(yīng)混合物中加入硫氰酸鉀（122g，1.26mo 1，1.10當(dāng)量）。15分鐘后，將 反應(yīng)器從冷卻浴中取出并將得到的漿液在室溫?cái)嚢杓s1小時(shí)。然后，在5分鐘內(nèi)于乙腈 (138mL)中加入作為溶液的3-氯-5-氟苯胺（138mL，1.37mol，1.2當(dāng)量）。然后反應(yīng)混合物于 室溫?cái)嚢柽^(guò)夜并接著用水(4.30L)淬滅，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集得到的固體 并用乙腈/水（1/1體積混合物，780mL)漂洗。在60 °C真空下干燥固體以提供390g (99 %產(chǎn)率） 標(biāo)題化合物，作為固體。4 Mffi(DMS0-d6)12.5(s，lH)，11.9(s，lH)，8.01(t，lH，J = 1.8)， 7.89((1，1!1，了 = 7.8)，7.69(111，3!〇,7.56(七，1!1，了 = 7.8)，7.34(扣，1!1，了 = 8.7，1.8)。冊(cè)1^：:在 23.73分鐘純度>99 %。
[0195] 實(shí)施例2-結(jié)晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基） 氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物的制備
[0197] 于叔丁基甲基醚（TBME) (1. 1L)中的3-氯-N-((3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲酰基 (〇&1^3111〇1:11；[071))苯甲酰胺（758,2191]11]1〇1)混懸液加熱至50<€。然后，加入5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-胺（39.6 8,262111111〇1，1.20當(dāng)量）和1(3-二甲基氨基丙基）-^-乙基碳二亞胺 (EDC)(64·2g，328mmol，l·50當(dāng)量）。得到的反應(yīng)混合物在50°C攪拌l小時(shí)并用Et0Ac(l·0L) 和水(1.0L)稀釋。有機(jī)提取物用飽和的氯化鈉水溶液(0.5L)洗滌，干燥(Na2S〇4)，過(guò)濾，并濃 縮。得到的殘?jiān)肊t0Ac(300mL)稀釋并將該混合物升溫至50°C，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾。然 后，濾液濃縮至約75mL并用己烷(750mL)緩慢稀釋。得到的混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)并過(guò)濾。 得到的固體在丙酮（l〇〇mL)中加入，過(guò)濾，用己烷(lOOmL)稀釋?zhuān)壹訜岬玫降幕旌衔镏钡疆a(chǎn) 生澄清的溶液。然后，進(jìn)一步用己烷(300mL)稀釋混合物并于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集 得到的固體，用己烷（lOOmL)漂洗并于室溫在真空下干燥以得到（25. lg，25%產(chǎn)率)結(jié)晶3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙 酮溶劑化物。4 NMR分析表明3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3_基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺對(duì)丙酮的摩爾比為3比2。標(biāo)題化合物的咕NMR(DMS0-d 6):13.3 (s，lH)，10.7(s，lH)，10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.82(d，lH，J = 7.6)，7.69(d，lH，J = 8.4)， 7.58(111，2!〇,7.07((1，1!1，了 = 8.4)，6.03(8，1!〇,2.05(8,4!1，丙酮）。冊(cè)1^：:在26.08分鐘純度 97.6%〇
[0198] 標(biāo)題組合物的X-射線粉末衍射圖提供于圖1。標(biāo)題組合物的示差掃描量熱法曲線 與熱重量分析曲線提供于圖2。圖1中的X-射線粉末衍射圖的表格化特征提供于下表1，其列 出衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比）。
[0199] 表1-X-射線粉末衍射圖數(shù)據(jù)。
[0202] 實(shí)施例3-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亞甲基)苯甲酰胺的晶型I的制備
[0203] 干燥(60°C/10托)3_氯- N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基）氨基）亞甲基）苯甲酰胺，丙酮溶劑化物（16g)得到3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基） ((5-(二氟甲基)-1H-P比唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺，為結(jié)晶固體，在本文中被指定為 型I。分析性分析沒(méi)有鑒定結(jié)晶固體中溶劑化物分子。標(biāo)題化合物的 1H NMR(DMS〇-d6): δ13.3 (s，lH)，10.7(s，lH)，10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.82(d，lH，J = 7.6)，7.69(d，lH，J = 8.4)， 7.58(111，2!〇,7.07((1，1!1，了 = 8.4)，6.03(8，1!〇。冊(cè)1^：:在26.08分鐘純度97.6%。
[0204] 標(biāo)題組合物的X-射線粉末衍射圖提供在圖3中。標(biāo)題組合物的示差掃描量熱法曲 線與熱重量分析曲線提供在圖4中。圖3中的X-射線粉末衍射圖的表格化特征在下表2中提 供，其列出衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比）。
[0205]表2-X-射線粉末衍射圖數(shù)據(jù)
[0208] 實(shí)施例4-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亞甲基)苯甲酰胺的晶型II的制備
[0209] 在Et0H(5mL)中溶解3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3_基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺，丙酮溶劑化物(0.500g)并升溫至40°C?；旌衔锿ㄟ^(guò)硅藻土過(guò) 濾澄清并然后用EtOH/水（1 /1體積，1.25mL)在40 °C稀釋?；鞈乙哼M(jìn)一步用EtOH/水（1/1體 積，5mL)在40°C稀釋?zhuān)⑷缓笤试S混合物冷卻至室溫并連續(xù)攪拌4天。過(guò)濾得到的混懸液，用 EtOH/水（1/1體積，5mL)漂洗，并干燥(60°C/10托）以得到3-氯-N_( ((3-氯_5_氣苯基)氨基） ((5-(二氟甲基)-1H-P比唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺，為結(jié)晶固體，在本文中被指定為 型II。分析性的分析沒(méi)有鑒定結(jié)晶固體中溶劑化物分子。
[0210]標(biāo)題組合物的X-射線粉末衍射圖提供在圖5中。標(biāo)題組合物的示差掃描量熱法曲 線提供在圖6中。圖5的X-射線粉末衍射圖的表格化特征在以下表3中提供，其列出衍射角度 2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比）。
[0211]表3-X-射線粉末衍射圖數(shù)據(jù)
[0215] 實(shí)施例5-制備3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基） 氨基)亞甲基)苯甲酰胺的晶型II可選的步驟
[0216] 在Et0H(875mL)中溶解3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1Η-吡 唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物（176g)并升溫至40°C。將混合物通過(guò)硅藻土 過(guò)濾澄清并然后用EtOH/水（1/1體積混合物，175mL)在40 °C稀釋。向混合物中加入3-氯-Να (3-氯-5-氟苯基) 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 )-1Η-吡唑-3-基) 氨基） 亞甲基) 苯甲酰胺的型 II 結(jié)晶(437mg)。然后，混懸液進(jìn)一步用EtOH/水（1/1體積混合物，700mL)在40°C于40分鐘內(nèi)稀 釋?zhuān)⑷缓笤试S混合物冷卻至室溫并連續(xù)攪拌過(guò)夜。最后，過(guò)濾得到的混懸液，分離的殘?jiān)?用EtOH/水（1 /1體積混合物，500mL)漂洗并干燥(60 °C /10托）以得到130g (74 %回收率）3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺為 結(jié)晶固體型II。分析性的分析沒(méi)有鑒定結(jié)晶固體中溶劑化物分子。
[0217]標(biāo)題組合物的X-射線粉末衍射圖提供在圖7中。標(biāo)題組合物的示差掃描量熱法曲 線提供在圖8中。圖7的X-射線粉末衍射圖的表格化特征在以下表4中提供，其列出衍射角度 2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度(表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比）。
[0218]表4-X-射線粉末衍射圖數(shù)據(jù)
[0221 ] 實(shí)施例6-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)氨 基)亞甲基-13C)苯甲酰胺-1，2,3,4,5,6-13C6的制備。
[0222] 根據(jù)以下步驟制備標(biāo)題化合物。
[0223] 部分1:3-氯苯甲-1，2，3，4，5，6-13C6酸的制備
[0225] 在-78°C在氮?dú)夥障拢蛴跓o(wú)水四氫呋喃（12mL)中的1-氯-3-碘苯-1，2,3,4,5,6_ 13C6(1 g，4. lmmo 1)溶液中在5分鐘內(nèi)滴加2.0M于四氫呋喃中的氯化異丙基鎂溶液（2.3mL， 4.5mmol)。得到的混合物在-78°C攪拌10分鐘，然后將二氧化碳?xì)怏w鼓泡通入溶液中，在整 個(gè)反應(yīng)中保持二氧化碳?xì)馀莘€(wěn)定的氣流。然后，反應(yīng)混合物在-78°C攪拌15分鐘，然后從冷 卻浴除去反應(yīng)器。一旦反應(yīng)混合物升溫至室溫，用二乙基醚(40mL)稀釋反應(yīng)溶液且產(chǎn)物萃 取到2M氫氧化鈉(3x 20mL)中。合并水性提取物并通過(guò)將容器放置于冰浴中冷卻，然后將在 冷卻器中的水性提取物用6M鹽酸酸化。用二乙基醚(3x 20mL)從水性提取物中萃取產(chǎn)物。合 并有機(jī)提取物并用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并濃縮以提供標(biāo)題化合物（600mg， 90%)』51 m/z 161·07，163·04(Μ-Η) -。
[0226] 部分II:制備3-氯-Ν_((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲酰基(carbam〇thi 〇yl)-13C)苯甲 酰胺-1，2,3,4,5,6-13C 6
[0228] 于0<€在氮?dú)夥障?，?-氯苯甲-1，2,3,4,5,6_13〇6酸(0.448,2.71111]1〇1)于無(wú)水二氯 甲燒（1 OmL)的混懸液中加入草酰氯(0.34mL，4. lmmo 1)，隨后加入無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺 (30yL)。注意到一些氣體逸出。從冷卻浴除去反應(yīng)器，且允許反應(yīng)混合物升溫至室溫。在反 應(yīng)混合物中懸浮的固體緩慢溶解。然后，將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后，在真空中除 去揮發(fā)物。得到的殘?jiān)眉妆?3x)共沸，然后用氯仿(3x)共沸。在乙腈(8mL)中溶解得到的 油狀物以提供用冰水浴冷卻的混合物。向冷卻的溶液中一次性加入硫氰酸鉀_ 13C(0.28g， 2.SmmolhlS分鐘后，從冷卻浴中除去反應(yīng)器且反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。向得到的混 懸液中加入3-氯-5-氟苯胺(0.39g，2.7mmol)。在加入苯胺之后，反應(yīng)混合物變得非常粘稠 并用乙腈(5mL)稀釋。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后，加入水（10mL)，其導(dǎo)致固體形成。 過(guò)濾固體，并然后用水洗滌固體并在真空的烘箱中于50°C干燥過(guò)夜以提供標(biāo)題化合物 (820mg，86% 產(chǎn)率）。
[0229] 部分m :3_氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑- 3-基）氨 基)亞甲基-13C)苯甲酰胺-1，2，3，4，5，6-13C 6的制備
[0231] 于35°C，向3-氯-N_((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲?；鵦arbam〇thi 〇yl-13C)苯甲酰 胺-1，2,3,4,5,6」3〇5(0.77 8,2.2!11111〇1)于甲基叔丁基醚(51^)的混懸液中加入5-(三氟甲 基)_1H_吡唑_3_胺(0·4g，2·6mmol)，隨后加入N_(3_二甲基氛基丙基)-乙基碳二亞胺鹽 酸鹽(0.65g，3.3mmol)。得到的混懸液在35 °C攪拌3小時(shí)，在此期間固體從反應(yīng)器側(cè)面周期 性地被刮落。然后，將反應(yīng)混合物在甲基叔丁基醚和鹽水中分配，分離有機(jī)層并用硫酸鈉干 燥，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后在粗二氧化硅上濃縮?；旌衔锿ㄟ^(guò)柱色譜法純化，用0 %至10 % v/ v梯度的在己烷中的乙酸乙酯洗脫以提供標(biāo)題化合物(320mg，30%產(chǎn)率）。
[0232] 實(shí)施例7-4-氯-N-((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲?；?CARBAM0THI0YL))苯甲酰胺的 制備
[0234] 在乙腈(230mL)中溶解4-氯苯甲酰氯（10.2g，58.5mmol)并將含有該混合物的反應(yīng) 器在冰/水浴中冷卻。向該混合物中加入硫氰酸鉀(6.25g，64.4mo 1，1.10當(dāng)量）。15分鐘后， 將反應(yīng)器從冷卻浴中取出并將得到的反應(yīng)漿液在室溫?cái)嚢杓s1小時(shí)。將3-氯-5-氟苯胺 (7.0511^，70.2111 〇1，1.2當(dāng)量）于乙腈（71^)中作為溶液在5分鐘內(nèi)加入至反應(yīng)混合物中。然 后，反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，并然后用水(230mL)淬滅，且得到的混合物在室溫?cái)嚢?小 時(shí)。過(guò)濾混合物以收集固體，分離的固體用乙腈/水（1/1體積混合物，50mL)漂洗，且得到的 固體于60°C在真空中干燥以提供20.5g標(biāo)題化合物，為固體。標(biāo)題化合物的 1H ^R(DMS〇-d6):Sl2.5(s，lH)，11.8(s，lH)，8.01(t，lH，J=1.8)，7.96(d，2H，J = 8.6)，7.67(m，2H)， 7.59((1，2!1，了 = 8.6)，7.33((1，1!1，了 = 8.4)。冊(cè)1^：:在23.52分鐘純度>99%。
[0235] 實(shí)施例8-4-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亞甲基)苯甲酰胺的制備
[0237] 加熱于TBME( 500mL)中4-氯-N-( (3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲?；?(〇&1^111〇1:11；[071))苯甲酰胺(20.5區(qū)，59.7_31)的混懸液至50°0。加入5-(三氟甲基)-1!1-[1比 唑-3-胺（10.8 8,71.711111101，1.20當(dāng)量）和^(3-二甲基氨基丙基）4/-乙基碳二亞胺化00 (17.6g，89.6mmol，1.50當(dāng)量）。得到的反應(yīng)混合物于40°C攪拌3小時(shí)，然后用飽和氯化鈉水 溶液(0.5L)稀釋。分離得到的混合物的有機(jī)層，干燥(Na 2S04)，過(guò)濾，并濃縮。得到的殘?jiān)?Et0Ac(20mL)稀釋?zhuān)⒃摶旌衔锷郎刂?0°C，然后用己烷(20mL)稀釋。然后，去除熱源并允 許混合物冷卻至室溫，然后向反應(yīng)器應(yīng)用冰/水浴以產(chǎn)生沉淀。通過(guò)過(guò)濾收集得到的固體， 用E tOAc/己烷（1 /1體積混合物，20mL)漂洗并于室溫在空氣中干燥。然后，固體溶解在EtOH (80mL)中，且得到的混合物升溫至40 °C。在40分鐘內(nèi)向混合物中緩慢加入EtOH/水（1 /1體積 混合物，80mL)。然后，從反應(yīng)器除去熱源且反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?天。然后，過(guò)濾反應(yīng)混合 物，收集到的固體用EtOH/水（1/1體積混合物，15mL)漂洗，并干燥(60°C/10托）以得到標(biāo)題 化合物（15.2.g，57%產(chǎn)率）。標(biāo)題化合物的咕 Mffi(DMS0-d6)Jl3.3(s，lH)，10.7(s，lH)， 10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.90(d，2H，J = 8.4)，7.72(d，lH，J=11.5)，7.63(m，3H)，7.07(d， 1!1，了 = 8.5)，6.00(8，1!0。冊(cè)1^：:在26.02分鐘純度98.6%。
[0238] 實(shí)施例9-對(duì)于ATP酶和RAMOS細(xì)胞的生物活性
[0239] 測(cè)試示例性化合物對(duì)于抗Ffo-ΑΤΡ酶和Ramos細(xì)胞的活性。實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果如下所 述。
[0240] 部分 I
[0241] 通過(guò)測(cè)量化合物抑制ATP合成的能力，測(cè)試在下表5中的化合物對(duì)于抗FiFo-ATP酶 的活性。此外，評(píng)價(jià)化合物在Ramos細(xì)胞中的細(xì)胞毒性。生物活性的試驗(yàn)結(jié)果顯示在下表5 中。根據(jù)描述在K.M. Johnson et al.Chemistry&Biology 2005,12,485_496的步驟測(cè)量在 合成ATPmFiFo-ATP酶活性的抑制和在Ramos細(xì)胞中的細(xì)胞毒性。
[0242] 表 5
[0243]
[0244]
[0245] 部分 II
[0246] 通過(guò)多次進(jìn)行描述于部分I中的測(cè)定步驟，評(píng)價(jià)化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯 基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺對(duì)于FiFo-ATP酶和Ramos 細(xì)胞的活性。特別地，通過(guò)在12個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中測(cè)量化合物抑制ATP合成的能力評(píng)價(jià)抗FiFo-ATP酶活性。在13個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中測(cè)量對(duì)于Ramos細(xì)胞的細(xì)胞毒性。與部分I中的步驟一致， 在二甲基亞砜中溶解化合物以形成應(yīng)用于FiFo-ATP酶或Ramos細(xì)胞的溶液，并根據(jù)描述于 K.M.Johnson et al.Chemistry&Biology 2005，12,485_496中的步驟進(jìn)行測(cè)定。
[0247] 從多次重復(fù)的實(shí)驗(yàn)步驟平均IC5Q值(在合成ATP中抑制Ffo-ΑΤΡ酶活性）。用于在合 成ATP中抑制FiFo-ATP酶活性的3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡 唑-3-基)氨基)亞甲基)苯甲酰胺的平均IC5Q值確定為27 ± 1.7nM。
[0248] 類(lèi)似地，從多次重復(fù)的實(shí)驗(yàn)步驟平均EC5Q值(對(duì)于Ramos細(xì)胞的細(xì)胞毒性）。3_氯-Να (3-氯-5-氟苯基 ） 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 ）-1Η-吡唑-3-基） 氨基） 亞甲基 ） 苯甲酰胺對(duì)于 Ramos細(xì)胞的細(xì)胞毒性的平均EC5Q值確定為59±6nM。
[0249] 實(shí)施例10-細(xì)胞色素 P450 2D6的抑制
[0250]測(cè)試以下表6中的化合物對(duì)于抗細(xì)胞色素 P450 2D6(以下"CYP2D6"）的活性。步驟 和結(jié)果如下所述。
[0251] 部分I-試驗(yàn)步驟：
[0252] 于磷酸鉀緩沖液（10mM)中制備含有人肝微粒體(Gibco,0.2mg/mL)和MgCl2(5mM) 的主溶液。向微粒體溶液的等分部分（169yL)中加入于乙腈（lyL)和DMS0 (lyL)中的試驗(yàn)化 合物以提供〇，〇. 005，0.05，0.25，1，5，10，和25μΜ的最終試驗(yàn)化合物濃度。
[0253] 加入于超純水(20yL)中的NADPH(lOmM)，且于37°C培養(yǎng)該混合物30分鐘。然后通過(guò) 加入溶解在lyL乙腈和9yL超純水中的酶底物(右美沙芬)開(kāi)始酶反應(yīng)。最終底物濃度為10μ Μ〇
[0254] 20分鐘后，用3體積含有丙咪嗪(200nM)，拉貝洛爾（200nM)，和酮洛芬(2μΜ)的冷甲 醇作為內(nèi)標(biāo)物稀釋培養(yǎng)混合物。樣品在16,000g離心10分鐘，然后除去等分部分的上清液 (200μυ并通過(guò)LC/MS/MS分析。
[0255] 使用Shimadzu HPLC和API 4000質(zhì)譜儀進(jìn)行LC/MS/MS分析兩次。液相色譜利用裝 有保護(hù)柱的Phenomenex C18，5μηι，50x 2mm柱。試劑A是含有0· 1 %v/v甲酸的乙腈。溶劑B是 含有0.1 % v/v甲酸的水。以每分鐘0.5mL進(jìn)行洗脫:0-2分鐘，梯度5 %溶劑A/95 %溶劑B至 100 %溶劑A; 2.0-2.2分鐘，100 %溶劑A; 2.2-2.4分鐘，梯度100 %溶劑A至5 %溶劑A/95 %溶 劑B; 2 · 4-3 · 0分鐘，溶劑5 % A/溶劑B 95 %。
[0256] 通過(guò)峰面積評(píng)價(jià)代謝產(chǎn)物的形成，并使用Pri sm 5.0軟件(GraphPad)分析數(shù)據(jù)。將 形成的代謝產(chǎn)物的量對(duì)比不含試驗(yàn)化合物的對(duì)照組樣品繪圖作為試驗(yàn)化合物濃度的函數(shù)。
[0257] 試驗(yàn)化合物的IC5Q值從繪圖中確定，作為在試驗(yàn)化合物賦予50 %抑制代謝產(chǎn)物形 成的濃度。
[0258] 部分II-結(jié)果：
[0259] 化合物1和化合物2的IC5Q抑制值在表6中提供。在實(shí)驗(yàn)中，化合物1抑制CYP2D6的效 力低于化合物2約3倍。
[0260]表6-在試驗(yàn)化合物給藥后三十分鐘CYP2D6的抑制
[0262] 援引加入
[0263] 本文提到的每個(gè)專(zhuān)利文獻(xiàn)和科技文章的全部公開(kāi)的內(nèi)容援引加入本文用于所有 目的。
[0264] 等價(jià)物
[0265] 本發(fā)明可以以其他特定形式體現(xiàn)而不脫離其中的精神和基本特征。因此，前述實(shí) 施方式在各方面認(rèn)為是示例性的，而非限制本文所述的發(fā)明。因此，本發(fā)明的范圍通過(guò)附屬 的權(quán)利要求而非前述說(shuō)明書(shū)指示，且來(lái)自在權(quán)利要求等價(jià)的含義和范圍之內(nèi)的所有變化均 意圖包含在其中之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 由式I表示的化合物：或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物;其中R1是位 于它所連接的苯基的間位或?qū)ξ簧系穆然鶊F(tuán)。2. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式I的化合物或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體， 或前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽。3. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是溶劑化物形式。4. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;前述任何的藥學(xué)上可接受的鹽。5. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體;或前述任何的溶劑化物。6. 權(quán)利要求5的化合物，其中所述化合物是丙酮溶劑化物形式。7. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示： 或幾何異構(gòu)體或互變異構(gòu)體。8. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：9. 結(jié)晶化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5_(二氟甲基比唑-3-基)氨 基)亞甲基)苯甲酰胺。10. 權(quán)利要求9的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物顯示出包含在以下衍射角度(2Θ)的 峰的X-射線粉末衍射圖：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0土 0.2,20.0±0.2,和 25.2±0.2。11. 權(quán)利要求10的結(jié)晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少 30% 〇12. 權(quán)利要求10的結(jié)晶化合物，其特征在于根據(jù)衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度 (表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比)表示的以下的X-射線粉末衍射圖：13. 權(quán)利要求10的結(jié)晶化合物，其中所述X-射線粉末衍射圖是基本上如圖3顯示。14. 權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱 法確定的范圍從約157攝氏度至約161攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。15. 權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱 法確定的在約159攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。16. 權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有基本上與圖4顯示 相同的示差掃描量熱法曲線。17. 權(quán)利要求9的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物顯示出包含在以下衍射角度(2Θ)的 峰的X-射線粉末衍射圖：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2，19·2± 0·2,20·6±0·2,22·2±0·2,25·7±0·2,26·0±0·2,和 35.7±0.2。18. 權(quán)利要求17的結(jié)晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少 15%〇19. 權(quán)利要求17的結(jié)晶化合物，其特征在于根據(jù)衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度 (表示為對(duì)于最強(qiáng)峰的百分比)表示的以下X-射線粉末衍射圖：20. 權(quán)利要求17的結(jié)晶化合物，其中所述X-射線粉末衍射圖是基本上如圖5顯示的。21. 權(quán)利要求17-20中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱 法確定的范圍從約158攝氏度至約165攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。22. 權(quán)利要求17-20中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有基本上與圖6顯 示相同的示差掃描量熱法曲線。23. 結(jié)晶化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(二氟甲基)-IH-R比唑-3-基)氨 基)亞甲基)苯甲酰胺丙酮溶劑化物，顯示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射線粉末衍 射圖：6·2±0·2,8·3±0·2，14·7±0·2，17·5±0·2，17·9±0·2，18·5±0·2,20·2±0·2,20·9 ±0.2,23.5±0.2，和25.9±0.2。24. 權(quán)利要求23的結(jié)晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相對(duì)強(qiáng)度是至少 15%〇25. 權(quán)利要求23的結(jié)晶化合物，其特征在于根據(jù)衍射角度2Θ，平面間距離d，和相對(duì)強(qiáng)度 (表示為相對(duì)最強(qiáng)峰的百分比)表示的以下X-射線粉末衍射圖：26. 權(quán)利要求23的結(jié)晶化合物，其中所述X-射線粉末衍射圖是基本上如圖1顯示的。27. 權(quán)利要求23-26中的任一項(xiàng)結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有由示差掃描量熱 法確定的在約159攝氏度的熔點(diǎn)開(kāi)始。28. 權(quán)利要求23-26中的任一項(xiàng)結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物具有與圖2顯示基本 相同的示差掃描量熱法曲線。29. 藥物組合物，包含權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。30. 藥物組合物，包含權(quán)利要求4的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。31. 藥物組合物，包含權(quán)利要求5或6的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。32. 藥物組合物，包含權(quán)利要求7或8的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。33. 藥物組合物，包含權(quán)利要求9的結(jié)晶化合物和藥學(xué)上可接受的載體。34. 藥物組合物，包含權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物和藥學(xué)上可接受的載體。35. 藥物組合物，包含權(quán)利要求17的結(jié)晶化合物和藥學(xué)上可接受的載體。36. 藥物組合物，包含權(quán)利要求18-22中任一項(xiàng)的結(jié)晶化合物和藥學(xué)上可接受的載體。37. 治療障礙的方法，所述障礙選自：免疫障礙，炎性障礙，心血管疾病，骨髓瘤，淋巴 瘤，癌癥，和細(xì)菌感染，包括向有需要其的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)的 化合物，以改善障礙的癥狀。38. 權(quán)利要求37的方法，其中所述障礙是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀肩病，慢性移植物抗宿主 疾病，急性移植物抗宿主病，克羅恩病，炎性腸病，多發(fā)性硬化癥，全身性紅斑狼瘡，乳糜瀉， 特發(fā)性血小板減少性血栓形成紫癜，重癥肌無(wú)力，斯耶格倫氏綜合癥，硬皮病，潰瘍性結(jié)腸 炎，哮喘，葡萄膜炎或表皮增生。39. 權(quán)利要求37的方法，其中所述障礙是克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。40. 權(quán)利要求37的方法，其中所述障礙是軟骨炎癥，骨退化，關(guān)節(jié)炎，少年關(guān)節(jié)炎，幼年 型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，少關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多關(guān)節(jié)幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，全身發(fā) 作幼年型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，青少年型強(qiáng)直性脊椎炎，青少年腸病性關(guān)節(jié)炎，青少年反應(yīng)性關(guān) 節(jié)炎，青少年Reter氏綜合征，SEA綜合癥，青少年型皮肌炎，青少年銀肩病性關(guān)節(jié)炎，青少年 硬皮病，青少年全身性紅斑狼瘡，青少年脈管炎，少關(guān)節(jié)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多關(guān)節(jié)炎類(lèi)風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎，全身性發(fā)作類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，強(qiáng)直性脊柱炎，腸病性關(guān)節(jié)炎，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎， Reter氏綜合癥，皮肌炎，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，脈管炎，脊髓炎（myol itis )，多發(fā)性肌炎 (口〇171117〇1；[1^8)，皮肌炎（(161'1]^1：01117〇1；[1^8)，骨關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎，韋格納肉芽腫 病，動(dòng)脈炎，風(fēng)濕性多肌痛，結(jié)節(jié)病，硬化癥，原發(fā)性膽管纖維硬化，硬化性膽管炎，皮炎，特 應(yīng)性皮炎，動(dòng)脈粥樣硬化，斯蒂爾（Still)疾病，慢性阻塞性肺病，吉蘭-巴爾（Guillain-Barre)疾病，I型糖尿病，格雷夫斯疾病，艾迪生氏(Addison)疾病，雷諾氏（Raynaud)現(xiàn)象， 或自身免疫性肝炎。41. 權(quán)利要求37-40中任一項(xiàng)的方法，其中所述患者是人類(lèi)。42. 抑制F1Fo-ATP酶的方法，包含暴露所酶于權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)的化合 物以抑制所述F1Fo-ATP酶。43. 權(quán)利要求42的方法，其中所述F1Fo-ATP酶是線粒體F1Fo-ATP酶。44. 權(quán)利要求37-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求4的化合物。45. 權(quán)利要求37-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求7的化合物。46. 權(quán)利要求37-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求9的化合物。47. 權(quán)利要求37-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求10的化合物。48. 權(quán)利要求37-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是權(quán)利要求17的化合物。
【文檔編號(hào)】C07D231/38GK105899489SQ201480072404
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年12月10日
【發(fā)明人】A·R·赫德, C·B·泰勒, J·王, P·周
【申請(qǐng)人】萊斯拉公司