量成比例的方式脫色，并且這種脫色可以通過測量530nm (OD5J的吸光度來監(jiān)測。
[0239] 在試驗化合物的存在濃度為10 5M時將DPPH溫育30分鐘，或者其自身作為陰性 對照。溫育結(jié)束時，通過測定溶液在530nm的吸光度，來評估試驗化合物的自由基清除劑活 性。
[0240] 結(jié)果:
[0241] 結(jié)果以DPPH自由基的％抑制呈現(xiàn)，見表3a)。
[0242] 試驗產(chǎn)品的自由基清除劑活性根據(jù)下式計算為百分比：
[0243] 100-((存在試驗化合物的OD53q/缺少化合物的OD5J X 100)
[0244] 表3a):對于羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅獲得的DPPH自由基抑制百分比
[0247] 實施例B. 3b):通討TBARS試驗的研究
[0248] 原理：通過TBARS試驗研究本發(fā)明式（IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯和 現(xiàn)有技術(shù)的阿魏酸衍生物的自由基清除劑活性。
[0249] 方案:
[0250] 根據(jù)定義的板計劃制備兩個相同的96-孔板。將通過在脂質(zhì)混懸液中稀釋試驗 化合物或陰性對照（沒有試驗化合物的載體介質(zhì)）或陽性對照（D-L-α-生育酚）溶液至 1/10制備50 μ L樣品混合物，并且分配到每個孔中，一式四份。兩個板之一用UBV照射2小 時。另一塊板作為對照，在無光線且環(huán)境溫度溫育2小時。
[0251] 在照射結(jié)束時，每孔添加量為100 μ L的20%三氯乙酸溶液，然后是量為34 μ L的 I %硫代巴比妥酸溶液。然后，將板在105 °C溫育25分鐘。
[0252] 將每孔中的內(nèi)容物在5700rpm離心5分鐘，然后根據(jù)相同的計劃將量為100 μ L的 上清液沉積到新的板中，并且在530nm讀取吸光度。
[0253] 陽性試驗對照為D-L- α -生育酚，濃度為1 %，所得的抑制百分比為80%。
[0254] 結(jié)果:
[0255] 表3b)顯示了所得結(jié)果，為相對于陰性對照的脂質(zhì)過氧化％抑制。
[0256] 表3b):對于羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅獲得的脂質(zhì)討氣化的抑制百分比
[0258] 實施例B. 3a)和實施例B. 3b)的結(jié)論:
[0259] 試驗化合物呈現(xiàn)出顯著的自由基清除劑活性，甚至在低濃度（10 6M)。
[0260] 實施例M :細朐毒件試驗
[0261] 原理：將本發(fā)明式(IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯應(yīng)用到角質(zhì)形成細胞 或黑色素細胞后的細胞活力研究。
[0262] 方案:
[0263] 將細胞（角質(zhì)形成細胞或黑色素細胞）在96-孔板中于37°C的5%C02下培養(yǎng)于 適宜的培養(yǎng)基中直到匯合。取出培養(yǎng)基，然后加入量為200 yL的0.5mg/mL MTT溶液。然 后，將板在37°C溫育3小時，之后從每個孔中取出MTT溶液并且用DMSO代替。將板搖動15 分鐘，并且測定在550nm的光密度。
[0264] 陰性細胞毒對照為PBS。陽性細胞毒對照為0. 25% SDS。使用0. 1 % DMSO作為對 照。
[0265] 結(jié)果:
[0266] 表4a)顯示了由此得到的活細胞的百分比結(jié)果，其中細胞是角質(zhì)形成細胞。
[0267] 表4b)顯示了由此得到的活細胞的百分比結(jié)果，其中細胞是黑色素細胞。
[0268] 表4a):羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅對角質(zhì)細朐獲得的細朐活力百分比
[0272] 實施例B. 4a)和實施例B. 4b)的結(jié)論:
[0273] 濃度數(shù)量級為10 6、10 5和10 4M的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯沒有毒性，換 言之，甚至是試驗濃度較高時，因為所得的活力百分比高于75%活力（耐受閾值）。
[0274] 實施例B5 :抗炎活性試驗：
[0275] 原理：通過測定UVB作用下角質(zhì)形成細胞對前列腺素 E2釋放的抑制，來研究本發(fā) 明式（IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯的抗炎活性。
[0276] 方案:
[0277] 將來自A431系的角質(zhì)形成細胞在適宜的培養(yǎng)基中于37°C、5% C02下培養(yǎng)72小 時。然后，取出培養(yǎng)基，并且用含試驗產(chǎn)品以及陽性和陰性對照的培養(yǎng)基代替。隨后將細胞 用UV B以30mJ/cm2照射。將細胞在37°C、5% C02下另外溫育24小時。隨后回收細胞上 清液，并且通過ELISA測定法定量釋放的前列腺素 E2 (PGE2)。
[0278] 將量為100 μ L的每份樣品、對照或PGE2標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移到96-孔板的孔中，所述板涂 布有針對大鼠免疫球蛋白G(IgG)的抗體。然后，向每個孔中添加量為25 μ L的PGE 2-過 氧化物酶綴合物，然后是量為25 μ L的抗-PGE2單克隆抗體。將板在4°C溫育過夜。然后， 將孔沖洗并且加入量為100 μ L的過氧化物酶底物。在環(huán)境溫度溫育15分鐘后，讀取450nm 的光密度。輻射后釋放的前列腺素 E2的量由0至400pg/mL PGE2的商購PGE2標(biāo)準(zhǔn)范圍推 導(dǎo)出。
[0279] 陰性對照通過未用樣品處理并且被UV B照射的細胞代表，得到100 %的PGE2釋 放。
[0280] 陽性試驗對照是阿司匹林，其在0. 03%得到5% +/-2%的PGE2釋放。
[0281] 結(jié)果:
[0282] 由羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯（IIa)得到的結(jié)果如下：
[0283]
[0284] 結(jié)論:
[0285] 式（I Ia)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯在30 μ M時極大地抑制了被UVB照射 后的角質(zhì)形成細胞的前列腺素 Ε2釋放。因此，本發(fā)明化合物確實具有抗炎作用。
[0286] Α.組合物實施例
[0287] 使用技術(shù)人員已知的方法，將不同部分A、B、C、D、E或F混合在一起來制備本發(fā)明 的組合物。
[0288] 術(shù)語"本發(fā)明的產(chǎn)品"是指符合通式（I)的化合物，優(yōu)選式（II)化合物，特別優(yōu)選 的化合物符合通式（IIa)或（IIb)，以及其混合物，并且其量可以調(diào)整使其在最終組合物中 的濃度接近IX 10 4m。
[0289] 實施例Cl :本發(fā)明的產(chǎn)品在水包油乳劑銦美容化妝或藥物制劑中的用涂
[0290] 制劑 la:
[0291]
[0298] 實施例C2 :本發(fā)明產(chǎn)品在油包水制劑中的用涂
[0299]
[0300] 實施例C3 :本發(fā)明產(chǎn)品在洗發(fā)水或汰洛露凝膠制劑中的用涂
[0301]
【主權(quán)項】
1. 以下通式（I)化合物：其中： 札、私和1?3彼此獨立地表示氫原子；(：1-12烷基；02-12鏈烯基 ；02-12炔基；03-12環(huán)烷 基；C1-12?；?；磺?；蜢⑺狨セ?； .x_ _ _Y表示CH2-CH2基團或CH=CH基團；n是1至3的整數(shù)； 或其鹽； 除了下式（a)化合物：2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其中n是2。3. 如權(quán)利要求1和2之一所述的化合物，其中1、1?2和1?3彼此獨立地表示氫原子；(：1-02 烷基，優(yōu)選甲基；磺?；?；或膦酸酯基團；或其鹽。4.如前面權(quán)利要求的任一項所述的化合物，其中Ri、私和R3是相同的并且各自表示氫 原子。5. 下式（Ila)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯：或其鹽。6. 下式（lib)的羥基對羥苯基乙醇芥子酸酯： 諛兵鹽。7. 至少一種如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物或式（a)化合物作為脫色劑和/或 作為自由基清除劑的美容化妝用途。8. 至少一種如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物或式（a)化合物的美容化妝用途， 所述的用途是用于預(yù)防和/或?qū)狗遣±硇陨匕吆?或用于預(yù)防和/或?qū)估匣嚓P(guān)的 色素斑和/或暴露于陽光誘導(dǎo)的色素斑，和/或雀斑，和/或炎癥后斑點和/或響應(yīng)侵襲影 響而出現(xiàn)的斑點，和/或激素來源的斑點，和/或藥物來源的斑點，和/或用于預(yù)防和/或 對抗病理不美觀表現(xiàn)的色素斑，和/或用于美白皮膚和/或提亮皮膚和/或賦予皮膚光澤 和/或亮度，和/或調(diào)理皮膚外觀，和/或用于預(yù)防和/或?qū)寡趸瘧?yīng)激，和/或氧化應(yīng)激 引起的良性表現(xiàn)，優(yōu)選在皮膚、粘膜和/或角質(zhì)附屬物上，和/或用于預(yù)防和/或?qū)蛊つw 老化，特別是光誘導(dǎo)的皮膚老化，和/或侵襲物和/或侵襲條件引起的、更特別的是太陽輻 射引起的不美觀和/或不舒適的皮膚和/或粘膜表現(xiàn)。9. 至少一種如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物或式（a)化合物的美容化妝用途， 所述的用途是用于預(yù)防和/或?qū)蛊つw老化，用于預(yù)防和/或?qū)怪辽僖环N選自下列的病 癥：暗淡和/或斑塊膚色，和/或光澤的損失，和/或皮膚透明度，和/或柔軟度的損失，和 /或柔韌性的損失，和/或彈性的損失，和/或皺紋和/或細紋的過早形成，和/或色素斑的 出現(xiàn)。10. 如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物，其用作藥物。11. 如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物或式（a)化合物，其用作用于預(yù)防和/或治 療病理性色素沉著過度和/或炎癥的藥物。12. 美容化妝和/或藥物、更特別的是皮膚病學(xué)組合物，其包含至少一種如權(quán)利要求1 至6任一項所述的化合物。13. 如權(quán)利要求12所述的組合物，其特征在于化合物以1X10 6至1X10 優(yōu)選 1X10 5至1X10 2M、更優(yōu)選1X10 4M的濃度存在。14. 如權(quán)利要求11和12之一所述的組合物，其特征在于其用于局部應(yīng)用。15. 如權(quán)利要求13所述的組合物，其特征在于其被用于手部皮膚，和/或臉部皮膚和/ 或領(lǐng)口皮膚，和/或頭顱皮膚，更特別的是男性頭顱皮膚，和/或用于指甲和/或毛發(fā)。16. 如權(quán)利要求11至14任一項所述的美容化妝組合物，其特征在于其包含至少一種 美容化妝關(guān)注的其它成分，選自：脫色成分和/或增強膚色光澤的成分，優(yōu)選酪氨酸酶抑制 劑，和/或自由基清除劑成分。17. 用于以下的美容化妝護理方法：預(yù)防和/或?qū)狗遣±硇陨匕吆?或用于預(yù)防 和/或?qū)估匣嚓P(guān)的色素斑和/或暴露于陽光誘導(dǎo)的色素斑，和/或雀斑，和/或炎癥后 斑點和/或響應(yīng)侵襲影響而出現(xiàn)的斑點，和/或激素來源的斑點，和/或藥物來源的斑點， 和/或用于預(yù)防和/或?qū)共±聿幻烙^表現(xiàn)的色素斑，和/或用于美白皮膚和/或提亮皮 膚和/或賦予皮膚光澤和/或亮度，和/或調(diào)理皮膚外觀，和/或用于預(yù)防和/或?qū)寡趸?應(yīng)激，和/或氧化應(yīng)激引起的良性表現(xiàn)，優(yōu)選在皮膚、粘膜和/或角質(zhì)附屬物上，和/或用于 預(yù)防和/或?qū)蛊つw和/或粘膜老化，特別是光誘導(dǎo)的皮膚和/或粘膜老化，和/或侵襲物 和/或侵襲條件引起的、更特別的是太陽輻射引起的不美觀和/或不舒適的皮膚和/或粘 膜表現(xiàn)，該方法包括局部應(yīng)用至少一種如權(quán)利要求1至6任一項所述的化合物或式（a)化 合物或至少一種如權(quán)利要求12至16任一項所述的美容化妝組合物。18. 用于合成如權(quán)利要求1至6任一項所述化合物的方法，該方法包括將醇與酸偶聯(lián)的 步驟，酸選自以下：芥子酸和/或二氫芥子酸。19. 如權(quán)利要求18所述的合成方法，其中二氫芥子酸由芥子酸原位合成。20. 如權(quán)利要求18和19之一所述的合成方法，其中醇是羥基對羥苯基乙醇，并且化合 物是式⑴化合物，其中n是2。
【專利摘要】本發(fā)明涉及通式(I)化合物，其中R1、R2和R3獨立地表示氫原子；C1-12烷基；C2-12鏈烯基；C2-12炔基；C3-12環(huán)烷基；C1-12?；?；磺酰基或膦酸酯基；表示CH2-CH2基團或CH＝CH基團；并且n是1至3的整數(shù)；或其鹽之一。本發(fā)明還涉及所述化合物的合成方法，包含所述化合物的組合物，其美容化妝用途，特別是作為脫色劑和/或作為抗自由基劑，美容化妝護理方法，以及其作為藥物的用途，有利的是用于預(yù)防和/或治療病理性色素沉著過度和/或炎癥。
【IPC分類】A61Q5/02, A61K8/37, A61Q1/06, A61K8/73, A61Q19/04, C07C69/734, A61Q19/08, A61Q17/00
【公開號】CN105026358
【申請?zhí)枴緾N201380073772
【發(fā)明人】A·丹尼斯, S·萊歐緹-歐卡姆畢, D·里瓦爾
【申請人】巴斯夫美容護理法國公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2013年12月24日
【公告號】US20150342847, WO2014102504A1