選以本發(fā)明組合物 形式，優(yōu)選應(yīng)用于手部皮膚，和/或臉部皮膚和/或領(lǐng)口皮膚，和/或頭顱皮膚，更特別的是 男性頭顱皮膚，和/或用于指甲和/或毛發(fā)。
[0139] 本發(fā)明化合物、更特別的是式（IIa)和/或式（IIb)化合物，任選以本發(fā)明組合物 形式，優(yōu)選應(yīng)用濃度為IX 10 6至IX 10 1M,優(yōu)選IX 10 5至IX 10 2M,更特別的是IX 10 4m。
[0140] 本發(fā)明還提供了用于合成本發(fā)明的式（I)化合物，更特別的是式（IIa)和/或式 (IIb)化合物或其鹽；及其異構(gòu)體的方法。
[0141] 有利地，用于合成本發(fā)明的式（I)化合物，更特別的是式（IIa)和/或式（IIb)化 合物的方法包括將酸與醇偶聯(lián)的步驟，有利地通過酸催化。
[0142] 因此，對于合成本發(fā)明的式（I)化合物，酸優(yōu)選式IIIa
[0153] 其中，n、R2和R3具有與式⑴相同的含義。
[0154] 對于合成式IIa)化合物，酸優(yōu)選式Va
[0155]
[0162] 因此，用于偶聯(lián)的酸優(yōu)選選自芥子酸，特別是用于合成式⑴化合物，其中
表示CH = CH基團(tuán)，更特別的是式（IIb)化合物，和/或二氫芥子酸，特別用于合 成式⑴化合物，其中
表示CH2-CH2基團(tuán)，更特別的是用于合成式（IIa)化合物。
[0163] 芥子酸在商業(yè)上容易購買，但是也可以從含有芥子酸的植物中提取，例如葵花 (Helianthus annuus)，小麥（Triticum vulgare)，完菁（Brassica rapa)或遠(yuǎn)志（Polygala tenuifollia)〇
[0164] 為了合成二氫芥子酸，優(yōu)選選擇芥子酸作為起始化合物。在這種情況下，二氫芥子 酸將原位合成，換言之，在相同的反應(yīng)器中通過進(jìn)行連續(xù)反應(yīng)合成。該合成優(yōu)選通過氫化芥 子酸的雙鍵進(jìn)行，優(yōu)選存在Pd-C(鈀炭），優(yōu)選5% Pd-C。該實施方案對于合成式（IIa)化 合物特別有利。
[0165] 因此，本發(fā)明同樣提供了用于合成式（I)化合物的方法，其中η = 2。在該情況下， 用于偶聯(lián)的醇優(yōu)選羥基對羥苯基乙醇。
[0166] 羥基對羥苯基乙醇在商業(yè)上容易獲得，或者可以從植物中提取，例如油橄欖（Olea europea)。但是，由于羥基對輕苯基乙醇的不穩(wěn)定性，其優(yōu)選由二羥基苯基乙酸原位合成， 二羥基苯基乙酸同樣可以商購獲得。
[0167] 因此，用于合成本發(fā)明的式（I)化合物、優(yōu)選式（II)化合物，更特別的是式（IIa) 和/或式（IIb)化合物的方法，優(yōu)選包括原位合成羥基對羥苯基乙醇的步驟，優(yōu)選由二羥 基苯基乙酸開始，優(yōu)選從二羥基苯基乙酸轉(zhuǎn)化為甲酯，優(yōu)選通過酸催化，優(yōu)選使用對甲苯磺 酸。
[0168] 由此獲得的甲酯優(yōu)選隨后還原成醇形成羥基對羥苯基乙醇。
[0169] 當(dāng)用于偶聯(lián)反應(yīng)的酸是二氫芥子酸時，該原位合成羥基對羥苯基乙醇的步驟有利 地與原位合成二氫芥子酸平行進(jìn)行。
[0170] 為了合成本發(fā)明的式⑴化合物，其中η不為2,羥基對羥苯基乙醇將被其它 用于偶聯(lián)反應(yīng)的化合物代替。例如且優(yōu)選的是，當(dāng)η = 1時其可能選擇4_(羥基甲基） 苯-1，2-二醇（UICPA名稱）作為醇用于偶聯(lián)，并且當(dāng)η = 3時例如4-(3-羥基丙基） 苯-1，2-二醇（UICPA 名稱）。
[0171] 這些類型的起始化合物在商業(yè)上容易獲得。
[0172] 根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明提供了合成式（IIb)化合物或其鹽的方法，包括至 少以下步驟：
[0173] a)由二羥基苯基乙酸合成羥基對羥苯基乙醇，優(yōu)選原位合成；
[0174] b)將步驟a)得到的羥基對羥苯基乙醇與芥子酸偶聯(lián)。
[0175] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，合成式（IIa)化合物或其鹽的方法包括至少以下步 驟：
[0176] a)由二羥基苯基乙酸合成羥基對羥苯基乙醇，優(yōu)選原位合成；
[0177] b)由芥子酸合成二氫芥子酸，優(yōu)選原位合成；
[0178] c)將步驟a)得到的羥基對羥苯基乙醇與步驟b)得到的二氫芥子酸偶聯(lián)。
[0179] 步驟a)和b)有利地平行進(jìn)行。
[0180] 當(dāng)本發(fā)明合成的化合物的R1、私和/或R3基團(tuán)不是氫原子時，使用相同的醇或酸 作為起始反應(yīng)物，在烷基化、硫酸化和/或磷酸化和/或酯化后，取決于各基團(tuán)R的性質(zhì)，并 且根據(jù)常規(guī)技術(shù)?；蛘?，對于這種烷基化、硫酸化、磷酸化和/或酯化反應(yīng)，有可能在偶聯(lián)反 應(yīng)后以相同的方式進(jìn)行。有利地，當(dāng)化合物的&、私和/或1?3位置包含烷基時，烷基化反應(yīng) 將在偶聯(lián)反應(yīng)前進(jìn)行。由此獲得的化合物優(yōu)選是式（IIa)和/或式（IIb)化合物。
[0181] 本發(fā)明同樣提供了由本發(fā)明的合成方法得到的化合物。
[0182] 下文的實施例形成本發(fā)明的組成部分，并且其用于說明但不構(gòu)成任何限制。與任 何現(xiàn)有技術(shù)比似乎具有新穎性的任意特征，包括實施例，作為一個整體描述形成與其功能 及其通用性相關(guān)的本發(fā)明的整體部分。
[0183] 另外，在實施例中，所有的百分比都以重量計，除非另有說明，并且溫度用攝氏度 表示，除非另有說明，并且壓力為大氣壓，除非另有說明。 實施例
[0184] A.本發(fā)明化合物的合成
[0185] 實施例A. 1.:本發(fā)明式（IIb)的羥基對羥苯基乙醇芥子酸醅的合成
[0186] 步驟a):由二羥基苯基乙酸原位合成羥基對羥苯基乙醇
[0187] 將二羥基苯基乙酸溶于甲醇中，并且歷經(jīng)3小時，在無光和回流下，用對甲苯磺酸 催化酯化。將甲醇蒸發(fā)，并且加入甲基四氫呋喃（甲基THF)。將所得溶液用碳酸氫鈉和鹽 水洗滌。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物用四氫呋喃溶解，并且向混合物中添加氫化鋰鋁。將整個混 合物回流2小時。向混合物中加入5N HCl溶液，隨后用甲基THF萃取。
[0188] 步驟b):步驟a)得到的羥基對羥苯基乙醇與芥子酸的偶聯(lián)。
[0189] 將步驟a)中獲得的羥基對羥苯基乙醇的甲苯溶液，和4%的對-甲苯磺酸加入到 芥子酸中。將反應(yīng)混合物回流12小時。過濾以除去鹽，并且洗滌有機(jī)相后，將反應(yīng)混合物 在真空下濃縮至干。
[0190] 實施例A. 2.:本發(fā)_式（IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅的合成
[0191] 步驟a):由二羥基苯基乙酸原位合成羥基對羥苯基乙醇
[0192] 通過上述實施例A. 1.步驟a)中描述的方案合成羥基對輕苯基乙醇。
[0193] 步驟b):由芥子酸原位合成二氫芥子酸。
[0194] 與步驟a)所定義的原位合成羥基對羥苯基乙醇平行的是，芥子酸的雙鍵歷經(jīng)4小 時在含Pd-C(5% )的甲基THF的存在下，于環(huán)境溫度5巴的氫氣還原。在經(jīng)Clarcel過濾 后，將溶液直接引入到步驟c)中。
[0195] 步驟c):步驟a)得到的羥基對羥苯基乙醇和步驟b)得到的二氫芥子酸的偶聯(lián)。
[0196] 偶聯(lián)反應(yīng)根據(jù)上述實施例A. 1.的步驟b)定義的方案進(jìn)行。
[0197] B.試驗測試結(jié)果
[0198] 在下面的實施例中，參考對應(yīng)于專利FR2892923的表11中實施例1的現(xiàn)有技術(shù)阿 魏酸衍生物。該化合物是下式的N-反式-阿魏?；喟桶罚?br>[0199]
[0200] 實施例B. 1 :抑制黑色素牛成的試驗
[0201] 原理：通過定量分析將化合物用于試驗后,鼠系B16黑色素細(xì)胞合成的總的黑色 素，來測定本發(fā)明式（IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯或現(xiàn)有技術(shù)中的阿魏酸衍生 物對黑色素生成的抑制百分比，
[0202] 方案:
[0203] 將黑色素細(xì)胞（B16細(xì)胞）在96孔板中用適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時。取出培養(yǎng) 基，然后用補(bǔ)充或未補(bǔ)充含任一試驗化合物或陰性對照（培養(yǎng)基和溶劑）或陽性對照（曲 酸）的a-MSH衍生物的培養(yǎng)基代替。培養(yǎng)72小時后，將培養(yǎng)基取出，并且通過測定相對于 0. 78至100 μ g/mL的合成黑色素標(biāo)準(zhǔn)范圍的405nm處的吸光度定量總的黑色素。
[0204] 陽性試驗對照是濃度為0. 025mg/mL的曲酸，其黑色素生成的抑制百分比為50%。
[0205] 結(jié)果:
[0206] 結(jié)果表示為相對于陰性對照的黑色素生成抑制百分比，并且在表1中顯示。
[0207] 被試驗產(chǎn)品對黑色素生成的抑制活性是根據(jù)下式計算的百分比：
[0208] %抑制=[(平均刺激的對照-平均基礎(chǔ)的對照）-(樣品值-平均基礎(chǔ)的對照）]/ (平均刺激的對照-平均基礎(chǔ)的對照）X 100
[0209] 其中：
[0210] -平均刺激的對照：用a -MSH衍生物補(bǔ)充的基質(zhì)得到的平均值
[0211] -樣品值：由試驗化合物得到的值
[0212] -平均基礎(chǔ)的對照：用未補(bǔ)充a -MSH衍生物的基質(zhì)得到的平均值
[0213] 表1 :應(yīng)用本發(fā)明的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅或現(xiàn)有摶術(shù)的阿魏酸衍牛物 后Β16細(xì)朐中黑色素的抑制百分比。
[0215] 結(jié)論:
[0216] 這些結(jié)果顯示，羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯（IIa)對黑色素的生成有很強(qiáng)的 抑制作用，甚至在低濃度。事實上，最小試驗濃度（10 μΜ)獲得75%的顯著抑制作用。
[0217] 這些結(jié)果有效證明了本發(fā)明化合物的優(yōu)點，以及它們相對于現(xiàn)有技術(shù)化合物的更 好的效果。
[0218] 實施例Β. 2 :抗人酪氨酸酶活件試驗
[0219] 原理：通過定量分析作為單層培養(yǎng)的黑色素細(xì)胞在應(yīng)用試驗化合物后的人酪氨酸 酶活性，研究本發(fā)明式（IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯與現(xiàn)有技術(shù)阿魏酸衍生物 相比對酪氨酸酶的抑制。
[0220] 方案:
[0221] 將正常人黑色素細(xì)胞（由腹部整形術(shù)獲得）以80000個細(xì)胞/孔接種在24-孔 板中。將它們培養(yǎng)直至匯合，并且將試驗化合物應(yīng)用于培養(yǎng)基中24小時。24小時后，去除 培養(yǎng)基，并且通過機(jī)械作用分離黑色素細(xì)胞。通過熱沖擊進(jìn)行提取，然后回收上清液，并且 用ΜΒΤΗ(甲基苯并噻唑啉酮腙）（Sigma)和L-多巴（Sigma)溫育。溫育30分鐘后，測定在 490nm(OD4J的光密度，并且根據(jù)下式計算酪氨酸酶的抑制：
[0222] %抑制=100- [ 100 X (OD49。樣品/樣品中蛋白質(zhì)的水平）AOD 49。陰性對照/陰性 對照中蛋白質(zhì)的水平）]
[0223] 因此，OD49。與蛋白質(zhì)的水平相關(guān)，其是在每個培養(yǎng)孔中的測定值。因此，計算相對 于陰性對照的抗-酪氨酸酶活性百分比，陰性對照是未處理的對照。
[0224] 陽性試驗對照是ImM的曲酸和熊果苷，并且預(yù)期的抑制為約35%，從而使得試驗 得以驗證。
[0225] 結(jié)果:
[0226] 結(jié)果以酪氨酸酶活性的％抑制呈現(xiàn)，見表2。
[0227] 表2 :應(yīng)用本發(fā)明的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸醅或現(xiàn)有摶術(shù)的阿魏酸衍牛物 后對人酪氨酸酶的抑制。
[0229] 結(jié)論:
[0230] 這些結(jié)果表明，與現(xiàn)有技術(shù)中阿魏酸衍生物已觀察到的相比，本發(fā)明的羥基對羥 苯基乙醇二氫芥子酸酯（IIa)沒有抑制黑色素細(xì)胞中人酪氨酸酶的活性。
[0231] 這表明本發(fā)明化合物對黑色素的生成有抑制作用，特別是在上述實施例B. 1.中 觀察到，該抑制作用通過與已知化合物不同的途徑發(fā)揮。
[0232] 實施例B. 3 :自由基清除劑活件試驗
[0233] 實施例B. 3a):用DPPH試驗（I, 1-二苯基-2-苦基苯肼）的研究
[0234] 原理：本發(fā)明式(IIa)的羥基對羥苯基乙醇二氫芥子酸酯和現(xiàn)有技術(shù)的阿魏酸衍 生物的自由基清除劑活性研究，在非細(xì)胞體外模型中使用DPPH進(jìn)行。
[0235] 方案:
[0236] 1，1-二苯基-2-苦基苯肼由于其順磁性結(jié)構(gòu)，能夠接受電子或氫自由基，以成為 穩(wěn)定的抗磁性分子。
[0237] 該自由基在乙醇中具有紫色，表現(xiàn)出強(qiáng)的530nm處的吸收帶。
[0238] 加入提供電子的化合物會引起1，1-二苯基-2-苦基苯肼以與自由基接受電子的 數(shù)