專利名稱：4-羥基異亮氨酸的純化方法
技術領域：
本發(fā)明涉及4-羥基異亮氨酸的分離純化方法，更詳細而言，涉 及利用了向縮醛胺體轉化的(2S, 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸的分離 純化方法和分離除去方法。
背景技術：
已知4 -羥基異亮氨酸是非蛋白質性氨基酸的一種，從 Fenugreek (胡,巴)(Trigonella foe皿m-graecum L.)種子等中提取(非專 利文獻1、 2、 3)。關于該4-羥基異亮氨酸，報道了血糖值依賴性的胰島素分泌促 進活性(專利文獻1、非專利文獻4)、胰島素敏感性的增強作用(專利 文獻2、 3、非專利文獻5)、肌肉中的糖原生成促進活性(專利文獻 4、非專利文獻6)、皮膚或頭皮的保護作用(專利文獻5)、脂肪吸收 抑制作用(專利文獻6)、抗肥胖作用(專利文獻7)等，作為利用上述作 用的醫(yī)藥品、健康食品原料、化妝品(香粧品)原料等有用。進而作為 各種醫(yī)藥品的合成中間體也有用。現(xiàn)在，作為得到4-羥基異亮氨酸的方法，已知從Fenugreek種 子中提取(專利文獻8、 9、非專利文獻1、 2、 3)和化學合成(專利文 獻10、 11、非專利文獻7)。在提取法中，為了與皂甙類或其他氨基酸分離，需要用硅膠或 離子交換樹脂進行色譜操作或重結晶等繁瑣的操作。特別是 Fenugreek種子所含的4-羥基異亮氨酸，除含有基于發(fā)揮上述作用 的觀點被認為較重要的立體異構體的(2S， 3R, 4S)-4-羥基異亮氨 酸以外，還以約為9: 1的比例含有其他立體異構體(2R， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸(非專利文獻2)，即使重復使用色譜或重結晶，也不容易分離上述立體異構體。專利文獻8中，雖然通過用離子交換樹脂進行的色譜和重結晶從100g脫脂的Fenugreek種子中得到0.6g純度為99%的(2S, 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸，但是認為該回收率并不高。原因在于特別是 在重結晶時由于其特性而無法避免目標物向濾液中的流失，越進行 重結晶其回收率越降低。合成法中，由于副反應等常常含有立體異構體，為了除去上述 雜質，需要HPLC或重結晶之類繁瑣的操作。上述操作中伴有成本 面或設備面大型化困難、收率降低的問題。如上所述，現(xiàn)有的4-羥基異亮氨酸的純化方法中還存在著問 題，因此期待更有效且簡便的方法。 [專利文獻1〗歐州專利第587476號說明書 [專利文獻2]國際公開第2001/015689號小冊子 [專利文獻3]國際公開第2005/039626號小冊子 [專利文獻4]國際公開第2005/021596號小冊子 [專利文獻5]國際公開第2004/087091號小冊子 [專利文獻6]特開2006-89449號公報 [專利文獻7]美國專利申請第2006/0223884號說明書 [專利文獻8]美國專利第5470879號說明書 [專利文獻9]國際公開第2005/084323號小冊子 [專利文獻10]國際公開第2004/099120號小冊子 [專利文獻11]國際公開第2006/051000號小冊子 [非專利文獻1〗Phytochemistry, vol.12, 1707-1711， 1973 [非專利文獻2] Phytochemistry, vol.15, 325, 1976 [非專利文獻3] Phytochemistry, vol.28， 1835-1841, 1989 [非專利文獻4] Diabetes, Vol. 47, Issue 2 206-210, 1998 [非專利文獻5] American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism,Vol.287, E463-E471, 2004 [非專利文獻6] Amino Acids, vol.28, 71-76, 2005[非專利文獻7〗European Journal of Organic Chemistry, vol.5， 834-839, 2002發(fā)明內容發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的目的在于提供簡便、高純度且高收率地分離純化(2S， 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽(以下有時也稱為 "(2S, 3R, 4S)-HIL")的方法。另外，本發(fā)明的目的還在于提供從混合物中簡便地分離除去 (2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸的方法。解決課題的方法本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過將(2S， 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸轉化為縮 醛胺體后，再進行有機溶劑提取，可以從其立體異構體、或來自于 粗提取物的急戒類或其他氨基酸等其他化合物中簡便且良好地分離 該縮醛胺體等，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明如下所述。〔1〕 (2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽 的純化方法，其中，所述方法包括以下的工序(a)、 (b)和(c)。工序(a):使混合物中的(2S, 3R, 4S) - 4 -羥基異亮氨酸或其化 學上可接受的鹽與式Q-CHO [式中，Q表示可以具有取代基的碳 原子數(shù)為6-14的芳基、碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基、碳原子數(shù)為3 ~ 10的環(huán)烷基或5~10元的雜環(huán)基]表示的醛化合物或其等價體反 應，轉化為式(l)表示的化合物，<formula>formula see original document page 8</formula>[式中，Q如上所定義]; 工序(b):使用有機溶劑提取式(l)表示的化合物；以及 工序(c):將式(1)表示的化合物轉化為(2S, 3R， 4S)-4-羥基異 亮氨酸或其化學上可接受的鹽?！?〕上述〔1〕所述的方法，其中，在工序(a)的反應中使用式 Q - CHO表示的醛化合物?！?〕上述〔1〕所述的方法，其特征在于通過工序(b)的提取 工序，從式(l)表示的化合物中除去雜質。〔4〕上述〔1〕或〔2〕所述的方法，其中，式(l)中，Q為可 以具有取代基的苯基、環(huán)己基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基或 吡咯基?！?〕上述〔4〕所述的方法，其中，式(1)中，Q為可以具有取 代基的苯基?！?〕上迷〔4〕或〔5〕所述的方法，其中，Q具有取代基時 的該取代基選自由下述基團構成的組(i) 碳原子數(shù)為1~6的烷基、(ii) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷氧基、(iii) 碳原子數(shù)為2-7的烷酰基、(iv) 碳原子數(shù)為6 ~ 10的芳基、0) 碳原子數(shù)為6-10的芳基氧基、01) 鹵代基、Cvii)碳原子數(shù)為1 ~ 6的鹵代烷基、(viii) 硝基、(ix) 甲?；⒑?x) 氰基，(其中，上述(i)與(vii)不成為碳原子數(shù)為1~10的烷基的取代基)?！?〕上述〔1〕所述的方法，其中，工序(b)的有機溶劑為至少 一種的乙酸烷基酯?！?〕上述〔1〕所述的方法，其中，在工序(c)中，使用選自由 以下物質構成的組中的至少一種親核試劑，所述物質為水、可以被 碳原子數(shù)為1~4的烷基取代的羥胺、氨、碳原子數(shù)為1~4的烷基 胺、碳原子數(shù)為2~8的二烷基胺、可以被選自碳原子數(shù)為1-4的 烷基、碳原子數(shù)為6-10的芳基與碳原子數(shù)為2~7的烷?；械娜?代基取代的肼、和纟皮碳原子數(shù)為1~6的烷基取代的卣化季銨、以及 它們的化學上可接受的鹽?！?〕上述〔1〕所述的方法，其中，在至少一種的乙酸烷基酯 中進行工序(c)的向(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接 受的鹽的轉化?！?0〕 上述〔9〕所述的方法，其中，至少一種的乙酸烷基酯 為乙酸乙酯?！?1〕 (2S, 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽 的分離除去方法，其中，所述方法包括以下的工序(a)和(b)。工序(a):使混合物中的(2S， 3R, 4S) - 4 -羥基異亮氨酸或其化 學上可接受的鹽與式Q-CHO [式中，Q表示可以具有取代基的碳 原子數(shù)為6 14的芳基、碳原子數(shù)為1~10的烷基、碳原子數(shù)為3 10的環(huán)烷基或5~10元的雜環(huán)基]表示的醛化合物或其等價體反 應，轉化為式(l)表示的化合物，[式中，Q如上所定義]; 工序(b):使用有機溶劑提取式(l)表示的化合物。 〔12〕上述〔11〕所述的方法，其中，在工序(a)的反應中使用 式Q - CHO表示的醛化合物?！?3〕上述〔11〕或〔12〕所述的方法，其中，式(l)中，Q為可以具有取代基的苯基、環(huán)己基、萘基、吡啶基、p塞吩基、呋喃基 或吡咯基?！?4〕上述〔13〕所述的方法，其中，式(1)中，Q為可以具有 取代基的苯基?！?5〕 上述〔13〕或〔14〕所述的方法，其中，Q具有取代基 時的該取代基選自由下述基團構成的組(i) 碳原子數(shù)為1~6的烷基、(ii) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷氧基、(iii) 碳原子數(shù)為2-7的烷?；?、(iv) 碳原子數(shù)為6-10的芳基、(v) 碳原子數(shù)為6-10的芳基氧基、(vi) 鹵代基、(vii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的囟代烷基、(viii) 硝基、(ix) 甲?；⒑?x) 絲，(其中，上述(i)與(vii)不用作碳原子數(shù)為1~10的烷基的取代基)?！?6〕上述〔11〕所述的方法，其中，工序(b)的有機溶劑為至 少一種的乙酸烷基酯。發(fā)明效果本發(fā)明的方法作為(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上 可接受的鹽的分離純化方法有用，可以提供較色譜或重結晶更有效 地、高收率且高純度的(2S, 3R， 4S)-HIL。更具體而言，可以從Fenugreek提取液、來源于培養(yǎng)微生物得到 的發(fā)酵液等含有4-羥基異亮氨酸的混合物中有效地分離(2S， 3R， 4S)-HIL。另外，可以從用化學合成得到的含有4-羥基異亮氨酸的 混合物中有效地分離(2S, 3R, 4S)-HIL。另外，本發(fā)明的方法作為(2S, 3R, 4S)-HIL的分離除去方法也 有用，可以從化合物的混合物中有效地除去(2S， 3R, 4S)-HIL。結 果可以提高混合物中的其他化合物、例如其立體異構體(2R, 3R, 4S) -4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽(以下有時也稱為"(2R， 3R， 4S)-HIL")的純度。
具體實施方式
以下，詳細說明本發(fā)明。本發(fā)明的方法中，(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸可以為化學 上可接受的鹽的形態(tài)。作為該"化學上可接受的鹽"，只要是不給本發(fā) 明的方法帶來不良影響的鹽即可，沒有特別限定，可以舉出例如與 氨；鈉、鉀等堿金屬；鈣、鎂等堿土類金屬；鋁；鋅；三乙胺、乙 醇胺、嗎啉、吡咯烷、哌啶、哌溱、二環(huán)己胺等有機胺；精氨酸、 賴氨酸等堿性氨基酸；鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氬溴酸等無機 酸；乙酸、4寧檬酸、苯曱酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、 鞣酸、丁酸、羥千基苯甲酸、樸酸、庚酸、癸酸、茶氯酸、水楊 酸、乳酸、乙二酸、扁桃酸、蘋果酸等有機羧酸；甲磺酸、苯磺 酸、對甲苯磺酸等有機磺酸等的鹽。本發(fā)明的純化方法或分離方法中，成為其對象的混合物只要是 含有(2S， 3R， 4S)-HIL的化學物質混合物即可，對其含有率或其他 物質的組成沒有任何限定。作為成為本發(fā)明方法的對象的混合物， 可以舉出植物組織提取物、動物組織提取物、培養(yǎng)微生物得到的發(fā) 酵液、來自于化學合成后的反應液的混合物等。另外，本發(fā)明的純化方法也可以適用于除去較純的(2S， 3R, 4S) - HIL粗制物中的少量雜質的情況。本發(fā)明的純化方法中，作為其結果所得的(2S， 3R, 4S)-HIL的 純度只要較純化前的純度提高即可，沒有特別限定，但本方法的優(yōu) 選方式中，提供實質上純的、例如用'H-NMR (300MHz)測定時未 觀測到雜質峰的(2S, 3R， 4S)-HIL。本發(fā)明的式(1)表示的化合物為(2S， 3R， 4S)-HIL的縮醛胺 體，式(l)中，Q表示可以具有取代基的碳原子數(shù)為6-14的芳基、 碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基、碳原子數(shù)為3 ~ 10的環(huán)烷基或5 ~ 10元 的雜環(huán)基。作為上述"可以具有取代基的碳原子數(shù)為6~14的芳基，，之"碳原 子數(shù)為6~14的芳基"，可以舉出例如苯基、萘基、蒽基、菲基、聯(lián) 苯基等，可以優(yōu)選舉出碳原子數(shù)為6-10的芳基(例如苯基、萘基、 聯(lián)苯基等)，更優(yōu)選苯基。作為上述"可以具有取代基的碳原子數(shù)為1-10的烷基"之"碳原 子數(shù)為1 ~ 10的烷基"，可以舉出碳原子數(shù)為1 ~ 10的直鏈或支鏈烷 基，優(yōu)選碳原子數(shù)為1~6的直鏈或支鏈烷基(例如曱基、乙基、正丙 基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等)。作為上述"可以具有取代基的碳原子數(shù)為3~10的環(huán)烷基"之"碳 原子數(shù)為3~10的環(huán)烷基"，可以舉出例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊 基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基等，可以優(yōu)選舉出 碳原子數(shù)為5~8的環(huán)烷基(例如環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基 等)，更優(yōu)選環(huán)己基。作為上述"可以具有取代基5-10元的雜環(huán)基"之"5 10元的雜 環(huán)基"，可以舉出除碳原子以外，還含有1~4個選自氧原子、硫原子 和氮原子中的雜原子的5-10元芳香族雜環(huán)基或非芳香族雜環(huán)、及 其稠環(huán)基。作為該芳香族的雜環(huán)基或其稠環(huán)基，可以舉出2-或3-噻吩 基，2 -或3 -吹喃基，1 - 、 2 -或3 - p比p各基，1 - 、 2 - 、 4 -或5 -咪峻基，2-、 4-或5-嚼唾基，2-、 4_或5-漆峻基，l-、 3 一 、4 -或5 - p比喳基，3 — 、 4 -或5 -異曙、唑基，3-、 4-或5 —異 p塞哇基，1， 2， 4-三"坐-l-、 3-、 4-或5-基，1, 2, 3-三哇 -1-、 2-或4-基，1H-四峻-1 -或5-基，2H-四唾-2-或5 -基，2-、 3-或4- p比咬基，2 - 、 4 -或5 -嗜咬基，1 - 、 2 -、 3-、 4-、 5-、 6-或7 - 口引咮基，2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并呋喃基，2-、3 - 、4-、5-、6-或7 -苯并瘞吩基，1 -、 2-、 4-、 5-、 6-或7-苯并咪唑基，2-、 3-、 4-、 5-、 6- 、7 -或8 - *啉基，l-、 3-、 4-、 5-、 6-、 7-或8-異喹啉基等。作為該非芳香族的雜環(huán)基或其稠環(huán)基，可以舉出2-或3-二氫 蓉吩基，2-或3-二氫呔喃基，l-、 2-或3-p比咯啉基，l-、 2- 、4 -或5 -咪哇啉基，2 - 、 4 -或5 -嚼峻啉基，2 - 、 4 -或5 -p塞p坐啉基，l一、 3 —、 4-或5-p比p坐啉基，3 —、 4 —或5 —異嚼"^啉 基，3-、 4-或5-異噻唑啉基，1, 2， 4-三哇啉-1-、 3-、 4-或5-基，1， 2， 3-三峻啉-1-、 2-或4-基，1H-四峻啉-l-或5-基，2H-四哇啉-2-或5-基，2-、 3-或4-二氬吡啶 基，2-、 4-或5-二氫嘧啶基，1-、 2-、 3-、 4-、 5-、 6-或7 - 二氫口引咮基，2-、 3-、 4 - 、 5-、 6-或7- 二氬苯并p夫喃基，2- 、3 - 、4-、5-、6-或7- 二氫苯并蓉喻基，1 - 、 2 - 、 4 - 、 5-、 6-或7-二氫苯并咪哇基，2-、 3-、 4-、 5-、 6-、 7-或8 - 二氬喹啉基，l-、3-、4 - 、5-、6-、7-或8- 二氬異p奎啉 基，2-或3-四氬漆吩基，2-或3-四氬呔喃基，1-、 2-或3-四氫他喃基，l-、 2-或3-卩比咯烷基，l-、 2-、 4-或5-。米哇 啉基，2-、 4-或5-瞎哇啉基，2-、 4-或5-瘞哇啉基，l-、 3 -、4 _或5 - p比哇啉基，3 - 、 4 -或5 —異嗨唑啉基，3 - 、 4 -或5 -異蓬唑啉基，1, 2, 4-三哇啉-l-、 3-、 4-或5-基，1， 2,3- 三哇啉-l-、 2-或4-基，1H-四哇啉-1-或5-基，2H-四 哇啉-2-或5-基，2-、 3-或4-哌咬基，1-或2-哌嗪基，1- 、2 -或3 -嗎啉基，1 - 、 2 -或3 -硫代嗎啉基，2 - 、 3 - 、 4 -、5 — 、 6-、 7 —或8 —四氫"lr啉基，l-、 3-、 4-、 5-、 6-、 7-或8-四氫異喹啉基等。作為該"雜環(huán)基"，可以優(yōu)選舉出噻吩基、呋喃基、嗯唑基、噻唑 基、異嗯唑基、異噻唑基、吡啶基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩 基、二氫謹:。分基、二氫呋喃基、四氫"塞吩基、四氫呋喃基、四氬吡喃基等，可以更優(yōu)選舉出噻吩基、呋喃基、吡啶基等。其他實施方式中，Q表示可以具有取代基的碳原子數(shù)為6~14 的芳基、碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基或5 ~ 10元的雜環(huán)基。作為上述Q所表示的"可以具有取代基的碳原子數(shù)為6~ 14的芳 基、碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基、碳原子數(shù)為3-10的環(huán)烷基或5 ~ 10 元的雜環(huán)基"之取代基，可以舉出例如下述基團(i) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷基、(ii) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷氧基、(iii) 碳原子數(shù)為2-7的烷酰基、(iv) 碳原子數(shù)為6 ~ 10的芳基、0)碳原子數(shù)為6-10的芳基氧基、(vi) 鹵代基、(vii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的鹵代烷基、(viii) 硝基、(ix) 甲?；?、和(x) 氰基，(其中，上述(i)與(vii)不成為碳原子數(shù)為1~10的烷基的取代基)。其他實施方式中，上述取代基選自下述基團 ①碳原子數(shù)為1~6的烷基、 (ii)碳原子數(shù)為1 ~6的烷氧基、 Ciii)碳原子數(shù)為2-7的烷酰基、(iv) 碳原子數(shù)為6-10的芳基、(v) 碳原子數(shù)為6 ~ 10的芳基氧基、(vi) 卣代基、(vii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的鹵代烷基、(viii) 竭基、和(ix) 甲酰基，(其中，上述(i)與(vii)不成為碳原子數(shù)為1~10的烷基的取代基)。上述"(i)碳原子數(shù)為1 ~6的烷基"是碳原子數(shù)為1 ~6的直鏈或支 鏈烷基，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲 丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等，優(yōu)選為甲基、乙基、正丙 基、異丙基。上述"(ii)碳原子數(shù)為1 ~6的烷氧基"是上述"碳原子數(shù)為1 ~6的 烷基"與氧原子鍵合得到的基團，可以舉出例如曱氧基、乙氧基、正 丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、 戊基氧基、己基氧基等，優(yōu)選為甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基。上述"(iii)碳原子數(shù)為2-7的烷?；?是上述"碳原子數(shù)為1 ~ 6的 烷基，，與羰基鍵合得到的基團，可以舉出例如乙?；⒁一驶?、正 丙基羰基、異丙基羰基、正丁基羰基、仲丁基羰基、異丁基羰基、 叔丁基羰基、戊基羰基、己基羰基等，優(yōu)選為乙?；?、乙基羰基、 正丙基羰基、異丙基羰基。作為上述"(iv)碳原子數(shù)為6~10的芳基"，可以舉出例如苯基、 萘基、聯(lián)苯基等，優(yōu)選為苯基。上述"(v)碳原子數(shù)為6~10的芳基氧基"是上述"碳原子數(shù)為6~ 10的芳基，，與氧原子鍵合得到的基團，可以舉出例如苯氧基、萘氧 基、聯(lián)苯基氧基等，優(yōu)選為苯氧基。作為上述"(vi)卣代基"，可以舉出例如氟原子、氯原子、溴原 子、碘原子等，優(yōu)選為氟原子、氯原子、溴原子。上迷"(vii)碳原子數(shù)為1~6的鹵代烷基"是上述"碳原子數(shù)為1-6 的烷基，，被能取代的數(shù)量的、優(yōu)選為1 ~ 5個的1種或1種以上的上述 "鹵代基，，取代得到的基團，可以舉出例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲 基、單氯曱基、二氯曱基、三氯曱基、氯氟甲基、l-氟乙基、1， 1 -二氟乙基、1, 1， l-三氟乙基、五氟乙基、五氯乙基等，優(yōu)選為 三氟曱基、三氯曱基。上述"碳原子數(shù)為6~14的芳基、碳原子數(shù)為1~10的烷基、碳原子數(shù)為3-10的環(huán)烷基或5 ~ 10元的雜環(huán)基"具有選自上述取代基 (i) (x)中的取代基時，只要沒有特別說明，對該取代基的位置和數(shù) 量沒有限定。上述取代基(i)-(x)的數(shù)量為2個以上時，上述取代基 可以相同也可以不同。但是，上述(i)與(vii)不成為"碳原子數(shù)為1-10 的烷基"的取代基。另外，上述"碳原子數(shù)為6~14的芳基、碳原子數(shù)為1~10的烷 基或5 ~ 10元的雜環(huán)基"具有選自上述取代基(i) ~ (ix)中的取代基時， 只要沒有特別說明，對該取代基的位置和數(shù)量沒有特別限定。上述 取代基(i) (ix)的數(shù)量為2個以上時，上述取代基可以相同也可以不 同。但是，上述(i)與(vii)不成為"碳原子數(shù)為1~10的烷基"的取代 基。作為Q，優(yōu)選具有一定程度的體積和脂溶性的基團，更具體而 言，優(yōu)選可以分別具有取代基的苯基、環(huán)己基、萘基、吡啶基、噻 吩基、呋喃基和吡咯基，更優(yōu)選可以具有取代基的苯基。在上述基 團中，作為具有取代基時的該"取代基，，，可以舉出例如選自上迷(i) (x)中的取代基等。在其他實施方式中，作為Q，優(yōu)選可以分別具有取代基的苯 基、萘基、吡咬基、噻吩基、呋喃基和吡咯基。作為Q,特別優(yōu)選硝基苯基、苯基、環(huán)己基。在其他實施方式中，作為Q,特別優(yōu)選硝基苯基、苯基。下面，更詳細〗也i兌明本發(fā)明的方法。本發(fā)明的方法是基于下述認識完成的，即(2S， 3R， 4S)-HIL通 過縮醛胺化反應良好地轉化為式(l)表示的化合物、即(2S, 3R, 4S) -HIL的縮醛胺體(l)(以下，有時也簡稱為"式(l)表示的化合物"或 "縮醛胺體(l)，，)，并且式(l)的化合物被良好地提取到有機溶劑中。例如，在含有(2S， 3R， 4S)-HIL的溶液中加入酪化合物或其等 價體時，生成(2S, 3R， 4S)-HIL的縮醛胺體(l)。雖然(2S， 3R, 4S) -HIL難以直接提取到有機溶劑中，但生成的縮醛胺體(l)脂溶性提 高，容易提取到有機溶劑中。由此，能通過提取、分液操作純化縮醛胺體C1)。另一方面，作為(2S， 3R， 4S)-HIL的立體異構體的(2R, 3R， 4S)-HIL在上述反應中幾乎不形成對應的縮醛胺體。即，使用(2S, 3R， 4S)-HIL和(2R, 3R， 4S) - HIL的混合物，在通常的條件下進 行縮醛胺化時，〗又(2S, 3R, 4S)-fflL選擇性地縮醛胺化。由此，本 發(fā)明的純化方法甚至也能除去與(2S， 3R, 4S)-HIL結構上極其類似 的化合物(2R, 3R， 4S)-HIL。以下，詳細說明本發(fā)明的方法的各工序。 工序(a)本發(fā)明的方法中，首先，在工序(a)中，將含有(2S， 3R， 4S)-HIL的混合物供給到縮醛胺化反應中。縮醛胺化反應通過使混合物中的(2S， 3R, 4S)-HIL與式Q-CHO (Q如上所定義)表示的醛化合物或其等價體反應來進行。此 時，不使用其等價體，而優(yōu)選使用醛化合物其本身。此處，所謂醛化合物的等價體，是指在本縮醛胺化反應中與醛 化合物Q-CHO (Q如上所定義)同樣發(fā)揮作用的合成等價體。作為 上述醛化合物的等價體，有對應于式Q-CHO表示的化合物(Q如上 所定義)的縮醛體、半縮醛體、縮醛胺體、二面代甲基體等，特別優(yōu) 選縮醛體和半縮醛體。更具體而言，可以舉出式Q-CH(OR，)OR" [Q 如上所定義，R，表示氫原子、曱基或乙基，R"表示甲基或乙基，或 者R，與R，，可以鍵合形成亞乙基]表示的縮醛或半縮醛化合物。式Q-CHO表示的醛化合物或其等價體優(yōu)選相對于混合物中的 4-輕基異亮氨酸含量添加1-5當量。此處，所謂"混合物中的4-羥基異亮氨酸含量"，表示混合物中的(2S， 3R, 4S)-fflL的含量， 混合物中含有(2S， 3R， 4S)-fflL和其立體異構體(2S, 3R, 4S)-HIL時，表示它們的總含量。上述反應根據(jù)需要可以在堿存在下進行。該堿可以為無機堿或 有機堿中的任一種，優(yōu)選例如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鋰、碳 酸鈉、碳酸氫鈉等無機堿，三乙胺、二異丙基乙胺、嗎啉、吡咯烷、哌啶、哌嗪、二環(huán)己胺、乙醇胺、氨水等有機堿等。反應液中的堿濃度優(yōu)選約0.1mol/L~2mol/L，相對于混合物 中的4-羥基異亮氨酸含量優(yōu)選約1-10當量左右。上述反應根據(jù)需要可以在溶劑中進行。作為該反應溶劑，優(yōu)選 水、乙腈、丙酮、四氫呋喃、甲醇、乙醇、異丙醇或1, 4-二哪 烷、或由上述溶劑以任意比率混合而得到的混合溶劑。上述反應的反應溫度優(yōu)選0°C ~ 50°C。 工序(b)下面，在工序(b)中，使用適當?shù)挠袡C溶劑提取所得的縮醛胺體(1)。作為提取縮醛胺體(l)的有機溶劑，可以舉出例如乙酸烷基酯、 己烷、庚烷、二乙醚、叔丁基甲基醚、二氯曱烷、氯仿等不與水任 意混合的溶劑及其2種以上的混合物，優(yōu)選至少一種乙酸烷基酯。 作為該"乙酸烷基酯"，可以舉出例如乙酸的碳原子數(shù)為1~10的烷基 酯，更優(yōu)選乙酸的碳原子數(shù)為1 ~4的烷基酯(例如乙酸曱酯、乙酸乙 酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸^又 丁酯等)。此時，優(yōu)選可以在有機溶劑提取縮醛胺體(l)之前，將反應后的 混合物根據(jù)需要加入水或堿，制成堿性的水性溶液，進行有機溶劑 洗滌。未反應而殘留的醛或其等價體等可以通過將其提取在有機溶 劑(例如上迷說明的乙酸烷基酯等)中來除去。如果在洗滌后的水層中加入酸性溶液，制成弱酸性，則可以抑 制縮醛胺體(l)的羧基解離，并可以用適當?shù)挠袡C溶劑提取。需要說 明的是，由于此時未反應的(2R, 3R， 4S)-HIL殘留在水層中，所 以僅(2S， 3R， 4S)-HIL的縮醛胺體(l)高純度地提取到有機溶劑 中，因此可以有效地分離兩者。作為可以適應的酸性溶液，優(yōu)選鹽酸、石克酸、磷酸、硝酸、氫 溴酸、乙酸、檸#~酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、丁酸、 乳酸、乙二酸、蘋果酸、甲磺酸等脂溶性低的酸的水溶液。通過如上所述的操作，可以從縮醛胺體(l)中除去未反應的醛或其等價體、(2R, 3R， 4S)-HIL等雜質。被有機溶劑提取的縮醛胺體(l)在進行到下述工序(c)的脫縮醛胺 反應前，可以通過晶析、漿料洗滌、干燥等通常所用的純化方法進 一步純化。 工序(c)下面，在工序(c)中，通過將縮醛胺體(l)供給到脫縮醛胺反應 中，回復到(2S， 3R, 4S)-HIL。對縮醛胺體(l)的脫縮醛胺反應的方法沒有特別限定，例如即使 僅將縮醛胺體(l)靜置在由上述工序(b)得到的含水的提取溶劑中，脫 縮醛胺化也進行，轉化為(2S, 3R, 4S)-HIL。優(yōu)選使用親核試劑來進行該脫縮醛胺反應。作為可以適合的親核試劑，優(yōu)選水、可以纟皮碳原子數(shù)為1~4的 烷基取代的羥胺(例如羥胺)、氨、碳原子數(shù)為1~4的烷基胺(例如甲 胺)、碳原子數(shù)為2~8的二烷基胺(例如二甲胺)、可以被選自碳原子 數(shù)為1~4的烷基、碳原子數(shù)為6~10的芳基和碳原子數(shù)為2~7的 烷?；械娜〈〈碾?例如肼、甲肼、苯肼、乙酰肼)、被碳原 子數(shù)為1 ~6的烷基取代的卣化季銨(例如四丁基氟化銨、四丁基氯化 銨、四丁基溴化銨、四丁基碘化銨)等，特別優(yōu)選羥胺、甲胺和肼。根據(jù)需要在溶劑中進行脫縮醛胺反應。作為該溶劑，只要不給 反應帶來不良影響即可，可以使用任意溶劑，優(yōu)選例如酯系溶劑(例 如與上述工序(b)的說明中列舉的溶劑相同的乙酸烷基酯)、烴系溶劑 (例如己烷、庚烷)、醚系溶劑(例如二乙醚、叔丁基甲基醚)、卣代烴 系溶劑(例如二氯曱烷、氯仿)、醇系溶劑(例如甲醇、乙醇、異丙 醇)、或上述溶劑的混合溶劑，更優(yōu)選至少一種乙酸的碳原子數(shù)為 1~4的烷基酯，最優(yōu)選乙酸乙酯。(2S, 3R, 4S)-HIL在乙酸乙酯 中的溶解度低，如果適當設定濃度等，則可以在反應后作為析出物 容易得到其結晶。需要說明的是，特別是式(l)中的Q表示可以具有取代基的碳原子數(shù)為6~14的芳基或5~10元的雜環(huán)基時，優(yōu)選通過催化加氫來 進行脫縮醛胺反應。作為可以適應該催化加氫的金屬催化劑，優(yōu)選鈀、銠、鉑等。作為可以適應該催化加氫的反應溶劑，優(yōu)選水、甲醇、乙醇或 乙酸乙酯、或者它們的混合溶劑。如上所述回復的(2S， 3R, 4S)-HIL可以通過重晶析、漿料洗 滌、干燥等通常所用的純化方法進一步純化。如上所述分離純化的(2S， 3R， 4S)-HIL作為醫(yī)藥品(糖尿病治 療劑等)、健康食品原料、化妝品原料等有用，以及作為各種醫(yī)藥品 的合成中間體也有用。例如，將(2S, 3R, 4S)-HIL用作糖尿病預防和/或治療劑時， 可以直接或根據(jù)其本身公知的方法，制成與藥學上可接受的載體一 起混合而得到的藥物組合物，通過口服或非口服(例如靜脈內、皮 下、肌肉內、栓劑、直腸注射、軟膏、貼布、舌下、滴眼、吸入等 途徑)來給藥。用于上述目的的給藥量根據(jù)作為目標的治療效果、給 藥方法、治療時間、年齡、體重等確定，但通過口服或非口服的途 徑，作為通常成人每天的給藥量，在口服給藥的情況下用lA/g~ 10g,在非口服給藥的情況下用0.01/^-lg,給藥1天1次~數(shù)次。 另外，上述藥物組合物中的(2S， 3R， 4S)-HIL的含量為組合物整體 的約0.01%(重量)~ 100%(重量)。作為藥物組合物中的藥學上可接受的載體，作為制劑原料，可 以舉出慣用的各種有機或無機載體物質，可以舉出例如固形制劑中 的賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、水溶性高分子、堿性無機 鹽；液狀制劑中的溶劑、助溶劑、混懸劑、等滲劑、緩沖劑、無痛 化劑等。另外，根據(jù)需要，也可以使用通常的防腐劑、抗氧化劑、 著色劑、甜味劑、酸味劑、發(fā)泡劑、香料等添加物。作為上述藥物組合物的劑形，可以舉出例如片劑、散劑、九 劑、顆粒劑、膠嚢劑、栓劑、液體制劑、糖衣劑、長效制劑、糖漿 劑、混懸劑、乳劑、糖片劑、舌下劑、粘貼劑、口腔內崩解劑(片)、滴眼劑，可以使 用普通的制劑助劑根據(jù)常規(guī)方法來制造。上述藥物組合物可以根據(jù)制劑技術領域中慣用的方法、例如日 本藥典記載的方法等來制造。以下，詳細說明制劑的具體制造方 法。例如，將(2S, 3R， 4S)-HIL調制成口服用制劑時，加入賦形 劑、以及根據(jù)需要的粘合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、矯味矯臭 劑等后，通過常規(guī)方法制成例如片劑、散劑、丸劑、顆粒劑、膠嚢 劑、栓劑、溶液劑、糖衣劑、長效制劑或糖漿劑等。作為賦形劑， 可以舉出例如乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、結晶纖 維素等，作為粘合劑，可以舉出例如聚乙烯醇、聚乙烯基醚、乙基 纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、西黃蓍膠、明膠、蟲膠、羥丙基 纖維素、羥丙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮等，作為崩解劑，可以舉出 例如淀粉、瓊脂、明膠粉末、結晶纖維素、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸 檬酸釣、糊精、果膠等，作為潤滑劑，可以舉出例如硬脂酸鎂、滑 石、聚乙二醇、二氧化硅、氫化植物油等，作為著色劑，可以使用 允許添加到醫(yī)藥品中的著色劑，作為矯味矯臭劑，可以使用可可 粉、薄荷腦、芳香酸、薄荷油、龍腦、桂皮粉等。當然可以對上述 片劑或顆粒劑包裹糖衣、明膠衣以及根據(jù)需要進行適當其他的包 衣。調制注射劑時，根據(jù)需要添加pH調節(jié)劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、保 存劑等，根據(jù)常規(guī)方法制成皮下、肌肉內、靜脈內注射劑。另外，如上所述，(2S, 3R， 4S)-HIL可以用作糖尿病的預防和 /或治療劑，也可以與通常使用的其他糖尿病治療劑、糖尿病并發(fā)癥 的預防和/或治療劑聯(lián)合使用。所謂通常所用的糖尿病治療劑、糖尿 病并發(fā)癥的預防和/或治療劑，可以舉出例如胰島素制劑、胰島素書亍 生物、胰島素樣作用劑、胰島素分泌促進劑、胰島素抵抗性改善 劑、雙胍類制劑、糖異生抑制劑、糖吸收抑制劑、腎糖再吸收抑制 劑、(33腎上腺素受體激動劑、胰高血糖素樣肽-1 (7-37)、胰高血糖素樣肽-1 (7-37)類似物、胰高血糖素樣肽-1受體激動劑、二肽 基肽酶IV抑制劑、醛糖還原酶抑制劑、糖化終產(chǎn)物生成抑制劑、糖 原合成酶激酶-3抑制藥、糖原磷酸化酶抑制藥、抗高脂血癥藥、食 欲抑制劑、脂肪酶抑制藥、降血壓劑、外周循環(huán)改善藥、抗氧化 劑、糖尿病性神經(jīng)障礙治療藥等的1種或2種以上的組合或混合 物。與(2S, 3R, 4S)-HIL組合使用的藥劑可以混合制成單一制劑，或者用另外的方法將其分別制劑化，或在一個容器中將用另外方法 將其分別制劑化得到的物質進行捆包的組合制劑(組、盒、包等)。對聯(lián)合用藥時的給藥形態(tài)沒有特別限定，可以舉出例如(l)作為 單一制劑的給藥、(2)不同制劑在同一給藥途徑下的同時給藥、(3)各 制劑在同 一 給藥途徑下的有時間差的給藥、(4)不同制劑在不同給藥 途徑下的同時給藥、(5)各制劑在不同給藥途徑下的有時間差的給藥等。關于組合使用的藥劑的具體化合物或應處置的優(yōu)選疾病，列舉 如下，但本發(fā)明的內容不限定于此。作為胰島素制劑，可以舉出NPH、 Lente、 Ultralente、能經(jīng)肺吸 收的胰島素等。所謂胰島素衍生物，是指由胰島素衍生的蛋白質或肽，保持胰 島素作用的物質，可以舉出例如賴脯(Lispro) 、 B10Asp 、 glargine等。所謂胰島素樣作用劑，是指一定程度上不依賴于胰島素地發(fā)揮 促進細胞攝取糖的作用等胰島素的生理作用，由此發(fā)揮降血糖作用 的胰島素衍生物以外的制劑，可以舉出例如胰島素受體激酶刺激藥 (例如L- 783281、 TER-17411、 CLX - 0901 、 KRX-613等)、釩等。所謂胰島素分泌促進劑，是指作用于胰臟P細胞，增加向血液 中的胰島素分泌，由此發(fā)揮降血糖作用的制劑，可以舉出例如磺酰 脲劑(例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、乙?；黔h(huán)己脲、格列所謂胰島素抵抗性改善劑，是指通過增強胰島素的目標組織中 的胰島素作用來發(fā)揮降血糖作用的制劑，可以舉出例如過氧物酶體 增殖藥活化受體(PPAR)y激動劑(例如吡格列酮、羅格列酮、曲格列 酮、環(huán)格列酮等漆唑烷二酮系化合物、或GI- 262570、 GW-1929、 JTT-501、 YM-440等非蓉唑烷二酮系化合物等)、PPARy 拮抗劑(例如bisphenol A diglycidyl ether、 LG- 100641等)、PPARa 激動劑(氯貝特、苯扎貝特、克利貝特等Fibmte系化合物、或非 Fibmte系化合物等)、PPARa / y激動劑(例如KRP - 297等)、類視色 素X受體激動劑(例如LG - 100268等)、類視色素X受體拮抗劑(例 如HX531等)、蛋白酪氨酸磷酸酶-IB抑制劑(例如PTP-112等) 等。所謂雙胍劑，是指通過肝臟中的糖異生抑制作用或組織中厭氧 的解糖促進作用或外周中的胰島素抵抗性改善作用等，發(fā)揮降血糖 作用的制劑，可以舉出例如二甲雙胍、苯乙雙胍、丁雙胍等。所謂糖異生抑制劑，是指主要通過抑制糖異生發(fā)揮降血糖作用 的制劑，可以舉出例如胰高血糖素分泌抑制劑(例如M&B 3兆90A 等)、胰高血糖素受體拮抗劑(例如CP-99711、 NNC-92 - 1687、 L -168049、 BAY27 - 9955等)、葡萄糖-6-磷酸酶抑制劑等。所謂糖吸收抑制劑，是指通過抑制食物中所含的碳水化物在消 化道中的酶消化來抑制或延遲糖吸收到體內，由此發(fā)揮降血糖作用 的制劑，可以舉出例如a-葡萄糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖、伏格 列波糖、米格列醇等)、a-淀粉酶抑制劑(例如AZM-127等)等。所謂腎糖再吸收抑制劑，是指抑制腎小管中糖的再吸收，由此 發(fā)揮降血糖作用的制劑，可以舉出例如鈉依賴性葡萄糖轉運體抑制 劑(例如T - 1095、根皮苷等)等。所謂|33腎上腺素受體激動劑，是指刺激脂肪細胞中的卩3腎上腺素受體使脂肪酸氣化亢進，消耗能量，由此發(fā)揮肥胖癥、高胰島素血癥的改善作用的制劑，可以舉出例如CL- 316243、 TAK-677等。作為胰高血糖素樣肽-1 (7-37)類似物，可以舉出例如醋酸艾塞 那肽(exendin-4)、 NN-2211等，作為胰高血糖素樣肽-1受體激動 劑，可以舉出例如AZM-134等，作為二肽基肽酶IV抑制劑，可以 舉出例如NVP-DPP-728等。胰高血糖素樣肽-1類似體、胰高血 糖素樣肽-1受體激動劑、二肽基肽酶IV抑制劑和胰高血糖素樣肽 -1是通過^f莫擬或增強細胞中的胰高血糖素樣肽-1的作用，發(fā)揮糖 尿病改善作用的制劑。所謂醛糖還原酶抑制劑，是指優(yōu)選用于處理糖尿病性并發(fā)癥的 物質中、通過抑制醛糖還原酶來降低發(fā)生糖尿病性并發(fā)癥的組織中 所確認的起因于持續(xù)高血糖狀態(tài)的多元醇代謝途徑亢進而過量蓄積 的細胞內山梨糖醇，可以舉出例如依帕司他、托瑞司他、非達司 他、折那司他等。所謂糖化終產(chǎn)物生成抑制劑，是指優(yōu)選用于處置糖尿病性并發(fā) 癥的物質中、通過抑制糖尿病狀態(tài)中的因持續(xù)高血糖狀態(tài)而大量生 成的糖化終產(chǎn)物來減輕細胞障礙的物質，上述糖尿病并發(fā)癥預防和/ 或治療劑也包括在該范疇內，與上述糖尿病并發(fā)癥預防和/或治療劑 聯(lián)合使用時，除上述糖尿病并發(fā)癥預防和/或治療劑以外，可以舉出 例如麗C-39-0028、 OPB-9195等。作為糖原合成酶激酶-3抑制藥，可以舉出例如SB-216763、 CHIR-98014等，作為糖原磷酸化酶抑制藥，可以舉出例如CP-91149等。作為抗高脂血癥藥，可以舉出例如羥基曱基戊二酰輔酶A還原 酶抑制劑(例如普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀等)、 Fibmte系藥劑(例如氯貝特、苯扎貝特、安妥明丙二醇酯等)、膽汁酸 排泄促進藥等。作為食欲抑制藥，可以舉出例如西布曲明、馬吲哚等，作為脂肪酶抑制藥，可以舉出奧利司他等。作為降血壓劑，可以舉出例如血管緊張素轉化酶抑制藥(例如卡 托普利、阿拉普利等)、血管緊張素II受體拮抗藥(例如坎地沙坦西 酯、纈沙坦等)、鈣拮抗藥(例如西尼地平、氨氯地平、尼卡地平 等)、利尿藥(例如三氯瘞溱、安體舒通等)、交感神經(jīng)阻斷藥(例如可 樂定、利血平等)等。作為外周循環(huán)改善藥，可以舉出例如二十碳五烯酸乙酯等。 作為抗氧化劑，可以舉出多元酸、丙丁酚等。作為糖尿病性神經(jīng)障礙治療藥，可以舉出例如曱鈷胺、鹽酸美 西律等。另外，(2S， 3R， 4S)-HIL作為食品添加物也是有用的。含有(2S， 3R， 4S)-HIL的食品組合物作為糖尿病的預防和/或 治療用食品有用。本說明書中所用的"食品，，是指所有食品，除包括所謂的健康食品 之外，也包括厚生勞動省的保健功能食品制度所規(guī)定的特定保健用 食品或營養(yǎng)功能食品，還包括膳食補充劑。對本說明書中所記載的食品組合物的形態(tài)沒有特別限定，只要 是能口服攝取的形態(tài)，可以為任一種形態(tài)。例如，可以舉出粉末、顆粒、片劑、硬膠嚢、軟膠嚢、液體(飲 料、膠狀飲料等)、糖果、巧克力等，均可以在該技術領域中通過自 體公知的方法來制造。食品組合物中的(2S， 3R, 4S)-HIL的含量適當確定為所指示范 圍的適當用量。上述食品組合物可以根據(jù)需要使用其他食品添加劑。作為上述 食品添加劑，可以舉出調整改良味道的果汁、糊精、環(huán)狀寡糖、糖 類(果糖、葡萄糖等單糖類和多糖類)、酸味料、香料、抹茶粉末等， 以及改善質地的乳化劑、膠原、奶粉、增稠多糖類或瓊脂等，以及 維生素類、蛋殼鈣、泛酸鈣、其他礦物類、王漿、蜂膠、蜂蜜、食 物纖維、落葉松蕈、殼多糖、殼聚糖、黃酮類、類胡蘿卜素類、葉黃素、中草藥、軟骨素、各種氨基酸等用作通常健康食品等的成分 的物質。[實施例]以下，通過實施例進一步詳細地說明本發(fā)明，^旦本發(fā)明并不限 定于這些實施例。 (試驗例) [分析條件](1) H - NMR:用Varian Mercury 300VX (300MHz)進行測定。(2) LCMS:(HPLC): Hewlett Packard series 1100 柱Symmetry (注冊商標)CI8 3.5〃m 4.6x50mm 流動相含有0.05 % TFA的水和含有0.04 % TFA的乙腈 梯度含有0.04%TFA的乙腈以5分鐘從5%直線增加到98% 的條件流速2ml/分鐘 柱溫30°C檢測UV檢測器(21 Onm ~ 300nm)(質譜)使用Waters公司Micromass platform檢測ESI與PDA。實施例1:從Fenugreek種子中純化f2S， 3R， 4S) - HIL (工序1) 4 -羥基異亮氨酸粗制物(HIL粗制物)的提取用研磨將5g Fenugreek種子磨碎，用50ml己烷脫脂。然后，用 50ml 70%乙醇水溶液浸漬一夜后，濾出殘渣，用60ml 70%乙醇洗 滌。減壓餾去濾液，得到HIL粗制物。 (工序2)用對硝基苯曱醛進行的縮醛胺化和有機溶劑提取將上述得到的HIL粗制物和10ml 5%碳酸氫鈉水溶液混合，加 入0.2g對硝基苯甲醛的3ml乙腈溶液，在25。C下攪拌一夜。減壓餾 去乙腈后，用50ml乙酸乙酯(關東化學林式會社1級99%以上)洗滌過量的醛。將所得的水層用1M檸檬酸水溶液中和，用乙酸乙酯提 取。將乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌后，用無水硫酸鎂干燥，濾出該干燥劑，得到縮醛胺體、(2R， 4S, 5R, 6S)-5， 6-二甲基-2-(4 - 硝基苯基) - 四氫 - 2H - 1 ， 3-嗨溱-4-甲酸的乙酸乙酯溶液。MS(ESI)m/z 281 [M + H] + (工序3)脫縮醛胺化在上述工序得到的(2R， 4S, 5R， 6S)-5， 6-二甲基-2-(4-硝基苯基)-四氫-2H-1, 3-嗯嗓-4-曱酸的乙酸乙酯溶液中加入 O.lml 50%羥胺水溶液，靜置3天，濾取析出的結晶，得到30mg (2S, 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸。本結晶中，用LCMS確認為單 峰，進而即使用H-NMR也未看到雜質峰，確認為高純度的(2S， 3R, 4S)-HIL。H-NMR (300MHz， D20) 5 = 0.83 (3H, d, J-7.2Hz), 1.12 (3H， d, J-6.3 Hz), 1.75 - 1.83 (m， m), 3.70 (1H, m), 3.76 (1H, d, J = 7.8Hz)MS(ESI)m/z 148 [M + H] +實施例2: 4-羥基異亮氨酸立體異構體混合物的用對硝基苯曱醛進 行的縮醛胺化(T2R, 4S， 5R， 6S)-5, 6 - 二甲基-2 - (4 -硝基苯基) —四氫-2H-l， 3 —嚼"秦—4一曱酸的合成)<formula>formula see original document page 28</formula>
將0.4g (2S， 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸與(2R， 3R, 4S) - 4-羥基異亮氨酸的約1: 1混合物和10ml 5%碳酸氫鈉水溶液混合，加 入0.41g對硝基苯甲醛的20ml乙腈溶液，攪拌一夜。減壓餾去乙腈 后，用乙酸乙酯洗滌過量的醛。將所得的水層用1M鹽酸水溶液中和，用乙酸乙酯提取。將乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌后，用無水硫酸鎂千燥。濾出該干燥劑后，迅速減壓餾去溶劑，得到0.3g(2R, 4S, 5R， 6S)-5， 6-二甲基-2-(4-硝基苯基)-四氬-2H-l， 3 -嗨溱-4-甲酸(對應于(2S， 3R, 4S)-HIL的立體異構體)。所得的 固體中，用LCMS確認為單峰，進而即使用！H-NMR也未看到來 自對應于(2R, 3R, 4S)-HIL的立體異構體的峰。另外，所得的化 合物的絕對構型也由其NOESY光譜支持。iH-NMR (300MHz, CD3OD) 5 = 1.00 (3H, d， J = 6.6Hz), 1.34 (3H， d, J = 6.0Hz), 1.45 - 1.58 (1H, m), 3.47 (1H, d, J = 10.5Hz), 3.60 - 3.70 (1H， m), 5.39 (1H， s), 7.76 (2H, d， J = 8.7Hz)， 8.23 (2H, d， J - 8.7Hz) MS(ESI)m/z 281 [M + H] +測定NOESY光譜的結果，觀測到下述交叉峰。即，確認所得的化合物是具有以下立體構型的(2R, 4S， 5R, 6S) -5， 6-二甲基-2-(4 —,肖基苯基)-四氪—2H-1， 3-瞎。秦一4 — 甲酸。實施例3:用羥胺進行的脫縮醛胺反應(0.18mmol) (2R， 4S， 5R， 6S)-5， 6-二甲基一2-(4-硝'基苯基)一四氬-2H-l， 3-嗯 溱-4-曱酸溶解在2ml乙酸乙酯中，加入0.01ml 50%羥胺水溶液， 攪拌2小時。濾取析出的結晶，得到7mg(2S, 3R, 4S) - 4 -羥基異 亮氨酸。所得的結晶中，用LCMS確認為單峰，進而即使用H-NMR也未看到雜質峰，確認為高純度的(2S， 3R, 4S)-4-羥基異 亮氨酸。!H-NMR (300固z， D20) 5 = 0.83 (3H, d， J = 7.2Hz)， 1.12 (3H, d, J = 6.3Hz)， 1.75 - 1.83 (1H， m)， 3.70 (1H， m)， 3.76 (1H， d, J =7.8Hz)MS(ESI)m/z 148 [M + H] +實施例4:用甲胺甲醇溶液進行的脫縮醛胺反應使用0.014ml 40%甲胺甲醇溶液代替50%羥胺水溶液，基于實 施例3進行操作，由此可以得到4mg(2S, 3R， 4S)-HIL。所得的結 晶用LCMS確認為單峰，進而即使用^-NMR也未看到雜質峰， 確認為高純度的(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸。實施例5:用肼一水合物進4亍的脫縮醛胺反應使用O.Olml肼一水合物代替50%羥胺水溶液，基于實施例3進 行操作，可以得到20mg (2S, 3R， 4S)-HIL。所得的結晶中，用 LCMS確認為單峰，進而即使用'H-NMR也未看到雜質峰，確認為 高純度的(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸。實施例6: 4-羥基異亮氨酸立體異構體混合物的用環(huán)己基醛進行的 縮醛胺化(T2R, 4S， 5R， 6S)-2-環(huán)己基-5， 6-二曱基-四氬-2H—1， 3 —嚼。秦-4—曱酸的合成)<formula>formula see original document page 31</formula>將O.lg (0.68mmo1) (2S, 3R， 4S) - HIL和(2R, 3R, 4S)-HIL 的約3: 2混合物溶解在2.3ml 5%碳酸氬鈉水溶液中，加入0.076g (0.68mmol)環(huán)己基醛的2.3ml乙腈溶液，攪拌一夜。減壓餾去乙腈 后，用乙酸乙酯洗滌過量的醛。將所得的水層用2M檸檬酸水溶液中 和，用乙酸乙酯提取。將乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌后，用無水 硫酸鎂干燥。濾出干燥劑后，迅速減壓餾去溶劑，得到0.067g(2R， 4S, 5R， 6S) —2-環(huán)己基—5， 6 — 二甲基-四氬—2H - 1 ， 3 -嗯口秦 -4-甲酸。H —NMR (300MHz， D20) S=1.06 (3H， d， J = 6.6Hz), 1.07—1.40 (6H， m)， 1.60 - 2.00 (9H， m), 3.34 (1H， d, J=11.4Hz), 3.42-3.50 (1H, m), 4.24 (1H, d， J = 6.6Hz) MS (ESI) m / z 242 [ M + H ] +實施例7:用羥胺進行的(2R, 4S， 5R， 6S)-2-環(huán)己基-5, 6-二 曱基-四氫-2H-l， 3 -嗯嗪-4 -曱酸的脫縮醛胺反應將實施例6所得的0.067g(0.42mmol)(2R, 4S, 5R， 6S) — 2 —環(huán) 己基一5， 6-二甲基-四氬一2H—1, 3 —嗨"秦-4一甲酸;容解在3ml 曱醇中，加入0.017ml 50%羥胺水溶液，攪拌2小時。減壓餾去溶劑 后，在所得的殘渣中加入乙酸乙酯，濾取不溶的結晶，得到28mg (2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸。所得的結晶中，用LCMS確認為的縮醛胺化 (T2R, 4S, 5R， 6S、-5， 6 — 二曱基—2 —苯基—四氬-2H - 1, 3-噁溱-4 -甲酸的合成)(工序1)用苯甲醛進行的縮醛胺化和有機溶劑提取將0.1g(2S, 3R, 4S)-HIL和(2R, 3R， 4S)-HIL的約1: l混 合物溶解在2.7ml 5%碳酸氬鈉水溶液中，加入0.084g苯甲醛的 2.7ml乙腈溶液，攪拌一夜。減壓餾去乙腈后，用乙酸乙酯(關東化學 抹式會社1級99%以上)洗滌過量的醛。將所得的水層用1M檸檬酸 水溶液中和，用乙酸乙酯提取。將乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌 后，用無水硫酸鎂干燥。濾出千燥劑，得到(2R, 4S, 5R， 6S)-5， 6-二曱基-2-苯基-四氫-2H-1, 3-嗨。秦-4-甲酸的乙酸乙酯 溶液。(工序2)用催化加氫進行的脫縮醛胺反應將乙酸乙酯層靜置在室溫下、開放體系中，以析出結晶的形式 得到12mg高純度(^-NMR和LCMS)的(2S, 3R, 4S)-HIL。進 而，通過濾取除去該結晶后，將濾液中的縮醛胺體按照以下所示的 操作，轉化為(2S， 3R, 4S)-HIL。減壓餾去濾液中的溶劑，在殘渣中加入水和甲醇的1: 2混合溶 劑、催化劑量的10%鈀碳，用氫置換體系，攪拌一夜。濾出鈀碳 后，通過減壓濃縮和凍干，得到40mg (2S， 3R, 4S)-HIL。本凍干 品用LCMS確認為單峰。實施例9:用各種醛進行的縮醛胺化按照與實施例6所記載相同的方法得到以下的化合物。(2R， 4S， 5R, 6S)-5， 6 - 二曱基-2 -苯基 - 四氬-2H - 1, 3—嗯溱一4—甲酸'H —NMR (300MHz, CD3OD) 5 = 1.09 (3H， d， J-6.6Hz), 1.35 (3H, d, J = 6.3Hz) ， 1.63 - 1.78 (1H ， m), 3.53 (1H ， d， J = 10.8Hz)， 3.68 - 3.74 (1H, m), 5.47 (1H, s), 7.40-7.44 (3H, m)， 7.54-7.60 (2H， m) MS (ESI) m / z 236 [ M + H ] +(2R, 4S， 5R， 6S)-5， 6 - 二曱基-2 - (4 - p比口定基)-四氬-2H-1， 3-嗯喚-4-甲酸!H-NMR (300MHz, CD3OD) 5 = 0.98 (3H， d, J = 6.6Hz)， 1.34 (3H, d, J = 6.3Hz), 1.42 - 1.58 (1H, m) ， 3.45 (IH， d， J = 10.8Hz) ， 3.60 — 3.68 (1H, m)， 5.31 (1H， s)， 7.59 (2H, d， J = 4.8Hz), 8.54 (2H, d, J = 4.8Hz) MS(ESI)m/z 237 [M + H] +(2R， 4S， 5R， 6S) —2-(4-氯苯基)-5， 6-二曱基-四氳-2H- 1， 3 -嗯喚-4-甲酸 MS(ESI)m/z 270 [M + H] +(2R, 4S， 5R， 6S) —5, 6 - 二甲基—2 - (4 —甲氧基苯基)—四氫 -2H-1， 3-嗯漆-4-甲酸 MS (ESI) m / z 266 [ M + H ] +(2R， 4S, 5R, 6S) —5， 6 - 二甲基—2 - (4 -甲基苯基)-四氬— 2H-1， 3-嗯溱-4-甲酸 MS (ESI) m / z 250 [ M + H ] +(2R， 4S, 5R, 6S)-5， 6 - 二甲基-2 — (4 -三氟甲基苯基) 一 四 氬-2H-1， 3-噁嗪-4-甲酸 MS (ESI) m / z 304 [ M + H ] +(2R， 4S, 5R， 6S)-5， 6 - 二甲基-2 - (4 -氟苯基)-四氫_ 2H-1， 3-嗯口秦-4-甲酸 MS(ESI)m/z 254 [M + H] +(2R， 4S， 5R, 6S)-2-(4-氰基苯基)—5, 6-二曱基-四氫一 2H - 1， 3-嗯漆-4-曱酸MS(ESI)m/z 261 [M + H] +(2R, 4S， 5R, 6S)-2-(2-氯苯基)-5， 6-二甲基-四氫-2H-1， 3-嗨嗪-4-甲酸 MS(ESI)m/z 270 [M + H] +(2R, 4S, 5R， 6S)-5， 6 - 二曱基-2 - (2 -硝'基苯基) 一 四氫— 2H-1， 3-嗨。秦-4-甲酸 MS(ESI)m/z 281 [M + H] +(2R, 4S， 5R, 6S) —5, 6 - 二甲基一 2 - (3 -;肖基苯基)—四氫— 2H-1， 3-嗯嗪-4-甲酸 MS(ESI)m/z 281 [M + H〗+(2R, 4S, 5R， 6S)-5， 6 - 二甲基-2 - (2 -遂吩基) - 四氬-2H-1， 3-嚼口秦-4-甲酸 MS (ESI) m / z 242 [ M + H ] +(2R， 4S， 5R， 6S)-5， 6 - 二甲基—2 — (2 -呔喃基)-四氫— 2H-1， 3-嗨溱-4-甲酸 MS(ESI)m/z 226 [M + H] +產(chǎn)業(yè)上的可利用性根據(jù)本發(fā)明的方法，可以有效且高收率地得到高純度的(2S ， 3R， 4S)-4-HIL。所得的(2S， 3R， 4S) - 4 - HIL作為例如醫(yī)藥品 (糖尿病治療劑等)、健康食品原料、化妝品原料等有用，進而作為各 種醫(yī)藥品的合成中間體也有用。另外，本發(fā)明的方法作為(2S， 3R， 4S)-HIL的分離除去方法也 有用，可以從化合物的混合物中有效地除去(2S， 3R, 4S)-HIL。本申請以在日本提出的日本專利申請2007 -042711和日本專利 申請2007- 144578為基礎，其內容全部包含在本說明書中。另外， 本說明書中引用的專利文獻和非專利文獻通過引用的方式公開其全 部內容，并同程度地加入到本說明書中。
權利要求
1.(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽的純化方法，其中，所述方法包括以下的工序(a)、(b)和(c)，工序(a)使混合物中的(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽與式Q-CHO表示的醛化合物或其等價體反應，轉化為式(1)表示的化合物，式中，Q表示可以具有取代基的碳原子數(shù)為6～14的芳基、碳原子數(shù)為1～10的烷基、碳原子數(shù)為3～10的環(huán)烷基或5元雜環(huán)基～10元雜環(huán)基，式中，Q如上所定義；工序(b)使用有機溶劑提取式(1)表示的化合物；以及工序(c)將式(1)表示的化合物轉化為(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽。
2. 權利要求1所述的方法，其中，在工序(a)的反應中使用式Q -CHO表示的醛化合物。
3. 權利要求1所述的方法，其特征在于通過工序(b)的提取工 序，從式(l)表示的化合物中除去雜質。
4. 權利要求1或2所述的方法，其中，式(1)中，Q為可以具有 取代基的苯基、環(huán)己基、萘基、吡啶基、瘙吩基、呋喃基或吡咯 基。
5. 權利要求4所述的方法，其中，式(1)中，Q為可以具有取代 基的苯基。
6. 權利要求4或5所述的方法，其中，Q具有取代基時的該取 代基選自由下述基團構成的組(i) 碳原子數(shù)為1~6的烷基、(ii) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷緣、(iii) 碳原子數(shù)為2-7的烷?；?、(iv) 碳原子數(shù)為6 ~ 10的芳基、(v) 碳原子數(shù)為6 ~ 10的芳基氧基、(vi) 鹵代基、(vii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的卣代烷基、(viii) 硝基、(ix) 曱?；?、和(x) 氰基，其中，上述(i)和(vii)不成為碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基的取代基。
7. 權利要求1所述的方法，其中，工序(b)的有機溶劑為至少一 種的乙酸烷基酯。
8. 權利要求1所述的方法，其中，在工序(c)中，使用選自由以 下物質構成的組中的至少一種親核試劑，所述物質為水、可以被碳 原子數(shù)為1-4的烷基取代的羥胺、氨、碳原子數(shù)為1~4的烷基 胺、碳原子數(shù)為2-8的二烷基胺、可以纟皮選自碳原子數(shù)為1~4的 烷基、碳原子數(shù)為6~10的芳基和碳原子數(shù)為2-7的烷?；械娜?代基取代的肼、和纟皮碳原子數(shù)為1-6的烷基取代的卣化季銨、以及 它們的化學上可接受的鹽。
9. 權利要求1所述的方法，其中，在至少一種的乙酸烷基酯中 進行工序(c)的向(2S， 3R， 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受 的鹽的轉化。
10. 權利要求9所述的方法，其中，至少一種的乙酸烷基酯為 乙酸乙酯。
11. (2S， 3R, 4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽的 分離除去方法，其中，所述方法包括以下的工序(a)和(b)，工序(a):使混合物中的(2S， 3R， 4S) - 4 -羥基異亮氨酸或其化 學上可接受的鹽與式Q-CHO表示的醛化合物或其等價體反應，轉化為式(l)表示的化合物，式中，Q表示可以具有取代基的碳原子數(shù) 為6~14的芳基、碳原子數(shù)為1-10的烷基、碳原子數(shù)為3~10的 環(huán)烷基或5元雜環(huán)基~ 10元雜環(huán)基，<formula>formula see original document page 4</formula>式中，Q如上所定義；工序(b):使用有機溶劑提取式(l)表示的化合物。
12. 權利要求11所述的方法，其中，在工序(a)的反應中使用式 Q - CHO表示的醛化合物。
13. 權利要求11或12所述的方法，其中，式(l)中，Q為可以 具有取代基的苯基、環(huán)己基、萘基、吡啶基、噻吩基、呋喃基或吡 咯基。
14. 權利要求13所述的方法，其中，式(1)中，Q為可以具有取 代基的苯基。
15. 權利要求13或14所述的方法，其中，Q具有取代基時的 該取代基選自由下述基團構成的組(i) 碳原子數(shù)為1 ~6的烷基、(ii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的烷氧基、(iii) 碳原子數(shù)為2-7的烷酰基、(iv) 碳原子數(shù)為6-10的芳基、(v) 碳原子數(shù)為6-10的芳基氧基、(vi) 鹵代基、(vii) 碳原子數(shù)為1 ~ 6的鹵代烷基、(viii) 硝基、(ix) 甲酰基、和(x) 氰基，其中，上述(i)與(vii)不用作碳原子數(shù)為1 ~ 10的烷基的取代基。
16.權利要求11所述的方法，其中，工序(b)的有機溶劑為至少 一種的乙酸烷基酯。
全文摘要
本發(fā)明的課題在于提供簡便、高純度、高收率分離純化和分離除去(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸的方法。具體而言，本發(fā)明公開包括以下的工序(a)、(b)和(c)的(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽的純化方法。工序(a)使混合物中的(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽與式Q-CHO[式中，Q表示可以分別具有取代基的碳原子數(shù)為6～14的芳基、碳原子數(shù)為1～10的烷基、碳原子數(shù)為3～10的環(huán)烷基或5～10元的雜環(huán)基]表示的醛化合物或其等價體反應，轉化為式(1)表示的化合物[式中，Q如上所定義]；工序(b)使用有機溶劑提取式(1)表示的化合物；以及工序(c)將式(1)表示的化合物轉化為(2S，3R，4S)-4-羥基異亮氨酸或其化學上可接受的鹽。
文檔編號C07C227/34GK101616888SQ200880005870
公開日2009年12月30日 申請日期2008年2月13日 優(yōu)先權日2007年2月22日
發(fā)明者德增宗孝 申請人:味之素株式會社