專利名稱：一種羥基自由基的測定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種羥基自由基的測定方法，特別涉及一種利用萘基二苯甲烷
染料一維多利亞艷藍BO(C. I 42595)作為顯色劑的分光光度法測定羥基自由基 的方法。
背景技術：
羥基自由基(*OH)對生物體毒性強危害大，但它的反應活性大，壽命短，
存在濃度低。目前，國內外報道的測定羥基自由基的方法有分光光度法、電 子自旋共振法、高效液相色譜法、熒光法、共振散射光譜法等。這些方法或儀 器昂貴，或靈敏度不夠。
目前尚未見利用萘基二苯甲烷染料一維多利亞艷藍BO(C. I 42595)作為顯
色劑的分光光度法測定羥基自由基的方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種能夠克服上述現有技術的弊端，具有操作簡便， 靈敏度高、結果準確等優(yōu)點的羥基自由基的測定方法。 本方法的測定原理
在水溶液中，羥基自由基氧化碘離子形成12， 12與過量的r反應生成v陰離 子，13—與維多利亞艷藍BO締合生成艷藍色化合物。維多利亞艷藍在酸性溶液中 顯黃綠色，締合物水溶液則呈艷藍色，對波長571nm處的可見光有選擇性吸收， 通過測定溶液的吸光度可以得到溶液中羥基自由基的濃度。本發(fā)明的技術方案 本發(fā)明所選用的試劑均為分析純。 標準工作曲線的繪制
移l.Oxl(T2 mol.L-1碘化鉀水溶液8.0mL、 1.0xl0-3 mol'L-1 FeSo40.1mL于 50mL容量瓶中，取現配制的S.OxlO^mol.L-1的雙氧水0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL 分別注入容量瓶中，再依次加入pH為2.0的磷酸一磷酸二氫鈉緩沖溶液8.0mL、 含乳化劑OP 0.5g L"的2.0X lO-Vol'L"維多利亞艷藍BO水溶液lO.OmL，用
蒸餾水定容，搖勻，靜置15min后，用lcm比色皿，試劑空白作參比，在571nm 處測定溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，以雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準 曲線。
根據標準曲線獲得回歸方程A=0.06C(mol *L-1) + 0.002 (r =0.9994， 0.0 mg 'L" 0.0082mol，L");其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度，根據反應原理 知，羥基自由基的摩爾濃度與雙氧水摩爾濃度成l: l的關系，為方便研究，可 用雙氧水摩爾濃度C代替羥基自由基摩爾濃度。
羥基自由基的測定50mL容量瓶中，依次移入1.0xl0—211101，1/1碘化鉀水 溶液8.0mL、 l.OxlO-3 mol七"FeSo40.1mL 、可產生羥基自由基的被測物、pH為 2.0的磷酸—磷酸二氫鈉緩沖溶液8.0mL、含乳化劑OP濃度為0.5g I/1的2.0 X 10"mol丄"維多利亞艷藍BO水溶液10.0mL，用蒸餾水定容，搖勻，靜置15min 后，用lcm比色皿，試劑空白作參比，在571nm處，測定溶液的吸光度，查標準 曲線或根據標準曲線獲得的回歸方程計算羥基自由基濃度。本方法測試的羥基 自由基濃度范圍為0.0 mg L/1 0.008211101 U1。
測定體系中共存離子對測定結果會產生影響，以下離子允許量為(mg*!/1):K十(2000)、 Caz+(2000)、 Sn2+(2000)、 Al卄(2000)、Pb2十(2000)、N(y-(2000)、 SO/(2000)、 NH4+(2000)、 Br隱(2000)、 HC2O4X2000)、 H2BO3—(2000)、 H4P3O1()-(2000)、擰檬酸 根(2000)， Ni十(lOO)、 Cu2+(100)、 Co2+(100)、 Mn2+(100)、 Cr3+(100)、 Cl-(5000)、 Fe3+(400)、 F(30)、硅酸氫根(IOOO)、 Ag+(0.05)、 Hg2+(0.03)、 Cd2+(0.05)。
本發(fā)明的技術效果
運用本發(fā)明提供的維多利亞艷藍BO為顯色劑、分光光度法測定羥基自由基 的方法，具有結果準確、操作簡便、靈敏度高等優(yōu)點。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發(fā)明進一步闡述。 實施例
所用試劑均為分析純。
標準工作曲線的繪制
移l.Oxl(V2 mol丄"碘化鉀水溶液8.0mL、 l.Oxl(y3 mol'L" FeSo40.1mL于 50mL容量瓶中，取現配制的5.0x10 4 mol'L-1的雙氧水0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL 分別注入容量瓶中，再依次加入pH為2.0的磷酸一磷酸二氫鹽鈉緩沖溶液 8.0mL、含乳化劑OP 0.5g 'I/12.0 X lO^mol'I/1維多利亞艷藍BO水溶液lO.OmL，
用蒸餾水定容，搖勻，靜置15min后，用lcm比色皿，試劑空白作參比，在571nm 處測定溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，以雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準 曲線。
根據標準曲線獲得回歸方程A = 0.06C (mol 'L") +0.002 (r =0.9994， 0.0mg *1^ 0.0082mol'L");其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度即羥基自由基摩 爾濃度。羥基自由基的測定
在50mL容量瓶中，依次移入l.OxlO^mol-L-1碘化鉀水溶液8.0mL、 1.0x1 (T3 mol'L" FeSo40.1mL 、可產生羥基自由基的被測物、pH為2.0的磷酸一磷酸二氫 鹽緩沖溶液8.0mL、含乳化劑OP濃度為0.5g'L"的2.0Xl(TVioll"維多利亞 艷藍BO水溶液10.0mL，用蒸餾水定容，搖勻，靜置15min后，用lcm比色皿， 試劑空白作參比，在571nm處,測定溶液的吸光度，查標準曲線或根據標準曲線 獲得的回歸方程計算羥基自由基濃度。
權利要求
1. 一種測定羥基自由基的測定方法，其特征在于測定步驟如下(1)標準曲線的繪制移1. 0×10-2mol·L-1碘化鉀水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL于50mL容量瓶中，取現配制的5.0×10-4mol·L-1的雙氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分別注入容量瓶中，再依次加入pH為2.0的磷酸—磷酸二氫鈉緩沖溶液8.0mL、含乳化劑OP0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1維多利亞艷藍BO(C.I42595)水溶液10.0mL，用蒸餾水定容，搖勻，靜置15min后，用1cm比色皿，試劑空白作參比，在571nm處測定溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，以雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準曲線；(2)根據步驟(1)的標準曲線獲得回歸方程A＝0.06C(mol·L-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1)；其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；(3)羥基自由基的測定在50mL容量瓶中，依次移入1.0×10-2mol·L-1碘化鉀水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL、可產生羥基自由基的被測物、pH為2.0的磷酸—磷酸二氫鈉緩沖溶液8.0mL、含乳化劑OP為0.5g·L-1的2.0×1.0-4mol·L-1維多利亞艷藍BO水溶液10.0mL，用蒸餾水定容至50mL；搖勻，靜置15min后，用1cm比色皿，試劑空白作參比，在571nm處，測定溶液的吸光度，根據步驟(2)中的回歸方程計算羥基自由基濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種羥基自由基的測定方法，特別涉及一種利用萘基二苯甲烷染料—維多利亞艷藍BO(C.I 42595)作為顯色劑的分光光度法測定羥基自由基。在50ml容量瓶中，依次移入1.0×10^-2mol·L^-1碘化鉀水溶液8.0ml、1.0×10^-3mol·L^-1 FeSO₄0.1ml、可產生羥基自由基的被測物、pH為2.0的磷酸-磷酸二氫鹽緩沖溶液8.0ml、含乳化劑OP為0.5g·L^-1的2.0×10^-4mol·L^-1維多利亞艷藍BO水溶液10.0ml，用蒸餾水定容，搖勻，靜置15min后，用1cm比色皿，試劑作參比，在571nm處，測定溶液的吸光度，根據標準曲線獲得的回歸方程A＝0.06C(mol·L^-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L^-1～0.0082mol·L^-1A為吸光度；C為羥基自由基摩爾濃度即雙氧水摩爾濃度)計算羥基自由基濃度。本方法具有儀器簡單、操作簡便快捷、靈敏度高、分析結果準確。
文檔編號G01N21/77GK101413896SQ20081020381
公開日2009年4月22日 申請日期2008年12月2日 優(yōu)先權日2008年12月2日
發(fā)明者張元璋, 施文健, 楊琴淋, 王亞偉, 琴 秦, 鐘曉永, 聞海峰, 陳樹薇, 陳肖云, 高雋臣 申請人:上海理工大學