專利名稱：一種羥基自由基的測定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種羥基自由基的測定方法。具體地說，涉及一種利用萘基二苯甲烷
染料-夜藍作為顯色劑，利用分光光度法測定羥基自由基的新方法。
背景技術：
羥基自由基( OH)對生物體毒性強危害大，并且反應活性大，壽命短，存在濃度低。目前，國內外報道的測定羥基自由基的方法有電子自旋共振法、高效液相色譜法、熒光法、共振散射光譜法和分光光度法等。這些方法或儀器昂貴，或靈敏度不夠。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是克服上述技術弊端，提供一種具有使用設備簡單、檢測成本低、操作簡便、靈敏度高等優(yōu)點的羥基自由基的測定方法。
本發(fā)明的技術原理 在水溶液中，羥基自由基氧化夜藍，夜藍溶液褪色，對波長618nm處的可見光有選
擇性吸收，通過測定溶液的吸光度可以得到溶液中羥基自由基的濃度。 本發(fā)明的技術方案 —種羥基自由基的測定方法，測定步驟如下
(1)標準曲線的繪制 分別往編號為①到⑥的6個50mL容量瓶中都加入2. 0X 10—4mol L—1的夜藍水溶液9. 0mL， pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. 0mL， 1. 0X 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分別往①到⑤號的5個容量瓶中加入現配制的5. OX 10—4mol L—1的雙氧水，其中①號中加入0. 2mL雙氧水，②號中加入0. 4mL雙氧水，③號中加入0. 6mL雙氧水，④號中加入O. 8mL雙氧水，⑤號中加入l.OmL雙氧水；
⑥號中不加雙氧水，作為參比液； 將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻；用lcm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個容量瓶中溶液的吸光
度； 以吸光度為縱坐標，雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
(2)回歸方程的獲得根據步驟(1)的標準曲線獲得回歸方程A = 1. 07C(mg L—"-0. 0038 ;其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；
(3)羥基自由基的測定 往50mL容量瓶中加入2. OX 10—4mol L-1夜藍水溶液9. OmL， pH為3. 1 3. 3的磷酸_磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—卞^04水溶液0. 3mL，加入可產生羥基自由基的物質，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度，根據步驟(2)的回歸方程計算羥基自由基的濃度； 其中加入可產生羥基自由基的物質的量按其最終含羥基自由基濃度為0. 039 0. 379mg/L計算。 本發(fā)明的測定方法當H202濃度為0. 17mg L—、相對誤差小于5%時，以下離子允
許量為(mg L—0 :K+(2000) 、 Ca2+(2000) 、 Sn2+(2000) 、 Al3+(2000) 、 Pb2+(2000) 、 N03—(20 00)、
S042—(2000) 、 NH4+(2000) 、 Br—(2000) 、 HC204—(2000) 、 H2B03—(20 00) 、 H4P301(T (2000)、擰檬酸
根(2000) ， Ni+(100) 、 Cu2+(100) 、 Co2+(100) 、 Mn2+(100) 、 Cr3+(100) ， CI—(5000) ， Fe3+(400)，
F—(30)，硅酸氫根(1000) ， Ag+(0. 05) ， Hg2+(0. 03) ， Cd2+(0. 05) ， Mn7+(0. 2) ， Cr6+(0. 6)。以上
離子濃度上限未做。 本發(fā)明的有益效果 目前國內外報道的測定羥基自由基的方法有電子自旋共振法、高效液相色譜法、熒光法、共振散射光譜法和分光光度法等。這些方法或儀器昂貴，或靈敏度不高，本發(fā)明采用夜藍為顯色劑，分光光度法測定羥基自由基，可檢測濃度范圍為0. 039 0. 379mg/L的羥基自由基，該方法具有儀器簡單、檢測成本低、操作簡便快捷、靈敏度高，摩爾吸光系數以雙氧水濃度計高達3. 6X 104L mo1—1 cm—1等優(yōu)點。
具體實施例方式
下面通過實施例對本發(fā)明進一步闡述，但并不限制本發(fā)明。
本發(fā)明檢測方法所用的儀器 UV757CRT紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)ras-2C型精密酸度計(上海雷磁儀器廠) JA2003型電子天平(上海精科天平廠) 本發(fā)明檢測方法所用的試劑 FeS04、 H202、 H3P04和NaH2P04均為分析純 商品化夜藍(C. I 44085) 實施例1 (1)標準曲線的繪制 分別往編號為①到⑥的6個50mL容量瓶中都加入2. OX 10—4mol L—1的夜藍水溶液9. OmL， pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分別往①到⑤號的5個容量瓶中加入現配制的5. OX 10—4mol L—1的雙氧水，其中①號中加入0. 2mL雙氧水，②號中加入0. 4mL雙氧水，③號中加入0. 6mL雙氧水，④號中加入O. 8mL雙氧水，⑤號中加入l.OmL雙氧水；
⑥號中不加雙氧水，作為參比液； 將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻； 用lcm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個容量瓶中溶液的吸光
度； 以吸光度為縱坐標，雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
(2)回歸方程的獲得 根據步驟(1)的標準曲線獲得回歸方程A = 1. 07C(mg L—O-O. 0038 ;其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；
(3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. 0 X 10—4mol *L—1夜藍水溶液9. OmL， pH為3. 1
3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，現配制的
濃度為5.0X10-W L-1的雙氧水O. lmL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，
用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 038，根據步驟
(2)的回歸方程計算羥基自由基的濃度為0. 039mg/L ; 實施例2 (D標準曲線的繪制 同實施例1 ; (2)回歸方程的獲得 同實施例1 (3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. 0 X 10—4mol *L—1夜藍水溶液9. OmL， pH為3. 1
3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，現配制的
濃度為5.0X10-W L-1的雙氧水O. 7mL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，
用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 252，根據步驟
(2)的回歸方程計算羥基自由基的濃度為0. 119mg/L ; 實施例3 (1)標準曲線的繪制 同實施例1 ; (2)回歸方程的獲得 同實施例1 (3)羥基自由基的測定 往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. OX 10—4mol *L—"夜藍(C. I 44085)水溶液9. OmL，pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol *L—卞eS04水溶液0. 3mL，現配制的濃度為5.0X10—4mol L—1的雙氧水1. lmL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 401，根據步驟(2)的回歸方程計算羥基自由基的濃度為0.379mg/L。 以上所述內容僅為本發(fā)明構思下的基本說明，而依據本發(fā)明的技術方案所作的任何等效變換，均應屬于本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
一種羥基自由基的測定方法，其特征在于測定步驟如下(1)標準曲線的繪制分別往編號為①到⑥的6個50mL容量瓶中都加入2.0×10-4mol·L-1的夜藍水溶液9.0mL，pH為3.1～3.3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5.0mL，1.0×10-3mol·L-1FeSO4水溶液0.3mL；再分別往①到⑤號的5個容量瓶中加入現配制的5.0×10-4mol·L-1的雙氧水，其中①號中加入0.2mL雙氧水，②號中加入0.4mL雙氧水，③號中加入0.6mL雙氧水，④號中加入0.8mL雙氧水，⑤號中加入1.0mL雙氧水；⑥號中不加雙氧水，作為參比液；將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻；用1cm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個容量瓶中溶液的吸光度；以吸光度為縱坐標，雙氧水濃度為橫坐標，繪制標準曲線；(2)回歸方程的獲得根據步驟(1)的標準曲線獲得回歸方程A＝1.07C(mg·L-1)-0.0038；其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；(3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入2.0×10-4mol·L-1夜藍水溶液9.0mL，pH為3.1～3.3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5.0mL，1.0×10-3mol·L-1FeSO4水溶液0.3mL，加入可產生羥基自由基的物質，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用1cm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度，根據步驟(2)的回歸方程計算羥基自由基的濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供一種測定羥基自由基的測定方法。即在水溶液中，羥基自由基氧化夜藍，夜藍溶液褪色，對波長618nm處的可見光有選擇性吸收，通過測定溶液的吸光度可以得到溶液中羥基自由基的濃度。本發(fā)明的檢測方法可檢測濃度范圍為0.039～0.379mg/L的羥基自由基，具有儀器簡單、檢測成本低、操作簡便快捷、靈敏度高，摩爾吸光系數以雙氧水濃度計高達3.6×104L·mol-1·cm-1等優(yōu)點。
文檔編號G01N21/77GK101718705SQ20091019871
公開日2010年6月2日 申請日期2009年11月13日 優(yōu)先權日2009年11月13日
發(fā)明者周艷, 施文健, 楊琴淋, 秦琴, 路榮春, 聞海峰 申請人:上海理工大學