專利名稱：：多環(huán)二唑類和異唑類化合物及其作為s1p受體的配體的用途的制作方法多環(huán)5悉二峻類和異巧悉唑類化合物及其作為SIP受體的配體的用途本發(fā)明涉及多環(huán)"化物、其制備方法、其作為藥物的用途以及含有它們的藥物纟且^。更^^地講，一方面，本發(fā)明提供了式I^^或其生理學(xué)上可7JC解的衍生物、其鹽、水^^和/或溶劑^^其中X為-N-且Y為-O-;或者X為-0-且Y為-N^或者X為CH且Y為O;R!為取代的^^基、^^J^苯基或4K苯基-d4烷^ltJ^苯基，其中至少一個(gè)苯絲團(tuán)是單^l代的；被一個(gè)或多械自下列基團(tuán)的取^J^代的苯基，所述基團(tuán)為鹵素、腈基、C^絲、鹵代Cw絲、C^^J^、鹵代C^8^J^、d-8烷ltj^d.8^^、Cw^^-Cm^J^Cw^^-鹵代Q^^J^、鹵代d-8^^-C^^ltJ^鹵代d-8^^-鹵代Cw^J^、鹵代C^^J^C^錄基、d-8^S-鹵代Cw^1^、鹵代C^8^J^鹵代Cw^J^、Cw^J^-d—8絲、鹵代Cw^J^Cw絲、CM^J^鹵代Cw絲、鹵代Cw錄基-鹵代Cw絲、c^烯^iA^、c^^i^、C^環(huán)絲、C^環(huán)^-d4戰(zhàn)、c"環(huán)^^-Cw^1^、c"環(huán)^^-錄、苯基-d4^IU^雜環(huán)、Cw烷或取代的5或6>元雜芳基R2為^^被鹵素、OH、NH2、C";^lLi^d4^iJ^fti"^代的C"烷基；#^甲^或HN-CO-Cw^或者R2為R3-RrCOOH或RrRpCONRsRe,其中R3為S02-NH、S02-N(Cw^S)、CO-NH、CO-N(Cw)^)、CH2-0、NH-CO或N(Cw^&)CO;R4為4ii^被O、S或C=CH2間隔的Cw亞;^，或者為任選取代的亞苯絲C3^亞環(huán)^;R5和R6各自獨(dú)立為氬或C^烷基，或者R5和R6與它們結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)基，并且環(huán)A可絲被取代，前H當(dāng)Y為O、X為-N-或-CH-且R2為SO2NH-R4-COOH(其中Ri為支鏈的c"亞^i^)時(shí)，則i.R!不為被鹵素、Cm絲、Cm^*^、鹵代C^^j^鹵代C^^j^單取代的苯1^*^皮一或兩*自鹵素、c"^i^c"^lA的取^Rj^^代的苯&或者ii.R！不為單取代的漆吩^p夫喃基。囟素可以是氟、城溴，艦絲氯。作為基團(tuán)本身的;^il者在基團(tuán)中存在的^iU^j^可以^J:i^支鏈的。c"亞^i^可以^jLM^支鏈的。作為基團(tuán)本身的或者在基團(tuán)中存在的卣代CM^i^囟代Cw^ft^可以是被l-5個(gè)卣素取代的C^s;^i^Cw^1^，例如CF3或CF3-CH2-0-。C^烷基-鹵代C";^lL&可以;0夕卜被C"^J^C代的鹵代^iLio例如在1^^皮取代。這同#^可以適用于其它基團(tuán)。當(dāng)&為取代的^^基、4-^J^苯絲4K苯基-Cw^^》苯基時(shí)，其中一個(gè)和/或兩個(gè)苯絲團(tuán)均可以被取代，例^^皮下列基團(tuán)單或^^代卣素、:^、Cr8^|L^、鹵代C"^&、鹵代C"^J^Ufr基。^i^W^基、4^苯-苯基或4-(苯基-C"娛^^)"苯基中至少一個(gè)苯n團(tuán)為岸舉代的，例如，如上所述?；蛘?，fi^基、冬m^-苯^U-(苯基-d4^fe-苯基中^-個(gè)苯絲團(tuán)均為單取代的(例如，如上所述，例:N皮卣代Cu^i^l代)，并iW鏈卣素、d-8^J^d-8^1^、鹵代C"^1^鹵代C"^^作為第二個(gè)苯"的取他。當(dāng)&為:IM、的^^時(shí)，它可以是單或^r^L代的。當(dāng)Ri為^r^c^的^^基時(shí)，一個(gè)取^&可以她為鹵代Cw鹵代c^s^J^，第二個(gè)取^RJ^如上所述。作為R的5或6-元雜芳基的實(shí)例包M'Hn^吩基、呔喃U^fe^。M為瘞吩基。當(dāng)Ri為卑L代的雜芳基時(shí)，它可以為單it^t代的，M為^r^代的。取^J^可以是例如鹵素、鹵代C"^(例如CF3)、C^^J^、鹵代C"^J^Cl8絲、鹵代Cl8絲、C^環(huán)^^-Cw烷錄、C3^環(huán)^^-Cw^l^V或任選被鹵素、C"^i^Cw^ltJ^^代的苯基。由NR5R6形成的雜環(huán)基是指3-8(優(yōu)選5-8)元飽和的、不飽和的或芳香族的雜環(huán)，該雜環(huán)含有選自N、O和S的1或2個(gè)雜原子并任選被取代。當(dāng)R2為任選被鹵素、OH、NH2、C1-4烷氧基或C1-4烷氧羰基氧基取代的C1-6烷基時(shí)，取代基優(yōu)選位于最后一個(gè)碳原子上，即w-位。當(dāng)R4為任選取代的亞苯基或C3-6亞環(huán)烷基時(shí)，它可以是1，4-亞苯基或C3-6亞環(huán)烷基，例如任選被被鹵素取代的亞環(huán)己基。環(huán)A可以任選被取代，例如被鹵素、C1-4烷基、鹵代C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代C1-4烷氧基或睛基取代。獨(dú)立的、共同的或在任何組合或亞組合中的下列含義是優(yōu)選的i)R1為聯(lián)苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C1-4烷氧基)-苯基，其中至少一個(gè)苯基攜有鹵代C1-4烷基或鹵代C1-8烷氧基(例如CF3);ii)R1為被鹵代C1-4烷基或鹵代C1-8烷氧基(例如CF3)取代的苯基，并被另一個(gè)如上所述的取代基取代；iii)R1為被鹵代C1-4烷基或鹵代C1-8烷氧基(例如CF3)二取代的噻吩基和苯基；iv)R2為S02NH2;v)R2為在w-位被NH2取代的C1-6烷基，其中R2為支鏈或直鏈C1-6烷基，例如C1-4烷基；優(yōu)選R2為CH2-NH2;vi)R2為R3-R4-COOH;vii)R2為R3-R4-CONR5R6;viii)R3為SO2-NH;S02-N(C1-4烷基);NH-CO;或N(C1-4烷基)CO;ix)R4為任選被O間隔的支鏈或線線性C1-6亞烷基;優(yōu)選R4為線性C1-6亞烷基；x)R5和R6各自獨(dú)立為H或C1-2;xi)環(huán)A為未取代的。式I化合物可以以游離形式或鹽形式存在，例如，與例如有機(jī)或無機(jī)酸形成的加成鹽，所述酸例如鹽酸或乙酸；或者，當(dāng)R2為COOH或含有COOH時(shí)，與磁形成的鹽，例如堿鹽，例如鈉或鉀鹽，或取代的或未取代的銨鹽。應(yīng)當(dāng)理解，式l化合物可以以旋光異構(gòu)體、外消旋物或非對(duì)映異構(gòu)體形式存在。例如，當(dāng)R4為支toM時(shí)，R4可以含有不對(duì)^原子。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包含所有的對(duì)映異構(gòu)體和構(gòu)象異構(gòu)^L其^^物。這同樣適用于如上所述的具有不對(duì)#^^子的船會(huì)原料。式I化合物的生理學(xué)上可7K解的衍生物是指在生理學(xué)M下可以水,到式I^^物和其為生理學(xué)上可接受的副產(chǎn)物的化合物，例如酯，該酯在所需劑量7K平可以水,到式I^tt^和非毒性醇。本發(fā)明也包^^J備式I化合物的方法，該方法包括a)為了制備其中X為-N-且Y為O以及R2如上i^斤定義的式I^^，使式n其中環(huán)A和R2如Jii^斤定義，與式HH^物或其官能團(tuán)衍生物(例如活化的酯、itt^酸酐)M，其中R如Jii^斤定義；或者b)為了制備式I^^，其中X為-N-且Y為O以及R2為R3-RrCOOH或R3-R4-CONRsR6(其中R3為NH-CO或N(CM^)CO,Rj、Rs和R6如Ji^^斤定義)，其中R和環(huán)A如Jii^斤定義，R，2為NH2或NH(Cw烷基),與酰化試劑^JI，或者進(jìn)行Sandmeyer^I;或c)為了制備其中Y為-N-且X為0的式Ht^，在例如Burgess試劑存在下，使式V4t^進(jìn)行i^ft^Jl:其中Ri、R2和環(huán)A如JiiL^斤定義；或d)為了制備其中Y為O且X為CH的式I化合物，RHVI其中Ri如Jii^斤定義，凡AVII其中R2如Jii^斤定義；或者e)將式H^^轉(zhuǎn)化為另一種式I^^，并回收得到的游離形式或鹽形式的式I化合物，如果需要的話，將以游離形式獲得的式I4t^轉(zhuǎn)化為鹽形式，或者，將以鹽形式獲得的式H^^轉(zhuǎn)化為游離形式。步驟a)至e)可以按^4頁域^^的方法或才NTF面實(shí)施例中Z/Hf的方法進(jìn)行。式I化^轉(zhuǎn)化為另一種式I化合物的實(shí)例可以包括例如i)為了制備其中Ri為取代的聯(lián)苯基、4"苯^J^-苯基或4K苯基-Cw娛絲—苯勤其中至少一個(gè)苯絲團(tuán)為單取代的)的式I^^，將其中&不是取代的絲基、4-^J^苯M^(苯基-C"娛^J^苯勤其中至少一個(gè)苯基基團(tuán)為單取代的)的式I^^;轉(zhuǎn)化為其中&為取代的J^^基、4"^L^-苯絲一(苯基-Cw^fe-苯^(其中至少一個(gè)苯l^團(tuán)為單取代的)的式I化^的。ii)為了制備其中R2為R3-RrCOOH的式I化^的，水解式M^^，其中R2中的COOH以生理學(xué)上可水解的酉旨(例如曱酯)的形i(^在。m)為了制備其中R2為R3-RrCONRsR6的式I^r^，將其中R2為R3-RrCOOH的式I化^轉(zhuǎn)4匕為活4匕的酯，然后將該活化的酯與所需胺^jl，引7^斤需的Rs和R6基團(tuán)。用作原料的式n化合物可以如下獲得使式vnH化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R2和環(huán)A如Jii^斤定義，式IV化合物可以44'J得4吏式rx^^或其官能團(tuán)衍生物(例如活化的酯、ita^酸酐)R廣COOHIX其中R如Jii^斤定義，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R'2如Jii^斤定義。式v化合物可以通過將式m化合物與式xi化r^反應(yīng)制得，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R2和環(huán)A如Jii^斤定義。^f勤會(huì)原料的制備沒有特別說明的情況下，該^^可f^/^p的，或者可以才娥^4頁域^^的方法或下文中^^的方法進(jìn)行制備。下列實(shí)施例用于#^'^兌明>^發(fā)明。EDC1-乙基-3-(3-二曱J^^丙基》碳二亞胺。實(shí)施例1:4^[5-(2-三氟甲基-^4-基HlJ,41噁二哇-3-基-^^<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>a)2-三氟甲基-^i^基4-甲酸在惰性氣^TF，向冬tr3-三氟甲g甲斷l(xiāng)當(dāng)量)的THF溶液中加A^目應(yīng)的硼斷1.5當(dāng)量)、X-Phos(0.05當(dāng)量)、KF(3當(dāng)量)，；^加人Pd(OAc)2(0.05當(dāng)量)，然后將紐^^在卯。C攪拌15小時(shí)。將A^^^r雜至干，^MI悔逸色譜純似尋到才湖t^/。b)N-羥基4-tM^^-苯甲脒在-25。C(》JV甲醇浴)下，向4-#^^千腈(1當(dāng)量)的THF溶液中加入M的7j^^^(20當(dāng)量)。然后將^i^^在室溫下撒泮16小時(shí)。將A^"^的用乙酸乙酯萃取，并用7jC洗滌，有才Avg:經(jīng)Na2S04干燥，過濾并妙濃縮。使用乙酸乙酯/己烷;^^，通ii5^定分離得到N-羥基-4-^ti^^-苯曱脒。c)目標(biāo)4^^制^口下在隋性W下，向步驟a)的^^;(1當(dāng)量)的二氧六環(huán)溶液中加入EDC(1.3當(dāng)量)和HOBt(1.3當(dāng)量)，將M';^^物在室溫下攪拌30分鐘。然后將步驟b)的N-羥基-l^^-苯甲晰1.3當(dāng)量)加^Jl^^中，在室溫下微30^4中，隨后在95°〇^#過夜。然后將M^^棘至干，采用'岐色if^化，得到本[5^2-三氟甲基"^^4^基Hl,2,4巧悉二峻-3-基]-^m^(m/z=446(M+H)"。實(shí)施例2:N-(4-5-(2-三氟甲基-^4"基Hl^,4噁二喳-3-基]-苯基卜彭白酰胺酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>a)2-三氟甲基-^^基_4-曱酸在隋性驢下，向4"tr3-三氟甲絲甲斷l(xiāng)當(dāng)量)的THF溶液中加A^目應(yīng)的硼斷1.5當(dāng)量)、X-Phos(0.05當(dāng)量)、KF(3當(dāng)量)，^加入Pd(OAc)2(0.05當(dāng)量)，然后將^^^在90。C撒泮15小時(shí)。將^J^';^^T，至干，iM'lfel色語純化，得到標(biāo)題^^0b)N4^J^國(guó)N-羥基畫苯曱脒在-25。C(》K/曱醇浴)，向4-tJ^腈(1當(dāng)量)的THF溶液中加入^的水溶液(20當(dāng)量)。將紐^^在室溫下,16小時(shí)。紐^^用乙酸乙酯萃取，并用水洗滌，有才Avir經(jīng)Na2S04干燥，it慮并絲絲。^^I乙酸乙酯/己烷^^物，通it^定分離得到4-^^-N-羥基-苯曱脒。c)4-[5-(2-三氟曱基-^^4-基H1^2,4嗜、二喳-3-基-苯按在惰性U下，向步驟a)的化合的(l當(dāng)量)的二氧六環(huán)溶液中加入EDC(1.3當(dāng)量)和HOBt(1.3當(dāng)量)，將^JI^^在室溫下，30^4中。然后將步驟b)的N-羥基-苯甲晰1.3當(dāng)量)加JA^》'^^中，在室溫下，30^4中，然后在95°(:下過夜。然后將^';^^';^至干，^M)'lfel色i普^/f匕，得到本[5~(2-三氟甲基-^^4-基Hl，2,4噁二峻-3-基〗-絲。g)在惰性驢下，向^[5-(2-三氟甲基-^4-基Hl^,41噁二喳-3-基l-^(1當(dāng)量)的乙胯溶液中加入琥銷酸酐(l.l當(dāng)量)，將^^^^在90。C攪泮16小時(shí)。然后將^J^^^Mt至干，用乙酸乙酯/己烷;^^^Ci定后，it^慮分離得到所需產(chǎn)物。m/z=480(M-H)—。實(shí)施例3:4-[5-(4"^J^3-三氟甲基-苯基HlJ,41噍二峻-3-基-^^W在0匸(*水浴)及惰性1下，向##實(shí)施例1所駄法獲得的4-[5-(4-l3-三氟甲基-苯基Hl，2，4噁二喳-3-基]-^^bfe(1當(dāng)量)的DMF溶液中加^1^(3當(dāng)量)和NaH(3當(dāng)量)。將^';^^物在室溫下攪拌16小時(shí)。將^Jl"^物用2NHC1溶液小心淬滅，用乙酸乙酯萃取，用7jC洗滌，有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并;維絲。用乙酸乙酯萃取己烷:^^J5U^者通it^相制備HPLC分離，得到所需產(chǎn)物(m/z=460(M-H)〕。實(shí)施例4:N-(4-[5-(4-^HJ-3-三氟甲基-苯基Hl,2，4噁二喳-3-基l-苯基卜琥珀鵬酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>重復(fù)實(shí)施例3的方法，但A^M1N-(4-5-(4-llr3-三氟甲基-苯基HlA41噴、二哇-3-基1-苯基}-琥賴鵬^7^臺(tái)原料，得到標(biāo)題^^(m/z=498.4(M+H)、。才實(shí)施例14中所述的方法，iM)適當(dāng)?shù)腲^原料，制得式&4b^其中Ri、R3和Rt如下面表l中所定義。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>其中和R;j如下面表2所定義。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例175:實(shí)施例175化*是通過重復(fù)實(shí)施例1的方法進(jìn)行制備的，但是其采用[4-(N-羥基曱脒基)-爺基"J^甲酸叔丁酯(可如下制得將購(gòu)自商業(yè)的4-氨基甲基-芐腈鹽皿^氧六環(huán)/7jVNaOH中用BOC20進(jìn)行N-保護(hù)后，隨后以THF作為溶劑，與50。/。羥胺水溶^A應(yīng)，形成N-羥勤約為勤會(huì)原料，用TFA/W95/5;5^4中，室溫)除去Boc-保護(hù)基團(tuán)后，得到目標(biāo)^^。實(shí)施例176:根塘實(shí)施例175所公開的方法，但_^4^(1-^^-1-甲1^乙基+爺腈為起始原料，制備該^^物。實(shí)施例177:在0匸(;^/水浴)和隋性^^下，向+娥實(shí)施例1和實(shí)施例175所財(cái)法獲得的H-5-(4-l^3-三氟曱基-苯基H1^2，4]噁二哇-3-基-爺基^^甲酸叔丁酯(l當(dāng)量)的DMF溶液中加入NaH(3當(dāng)量)，30^4中后加入三氟乙斷5當(dāng)量)。將a';^^在室溫下撒伴16小時(shí)。用乙斷95。/。)小心地淬3^jL';^^并濃縮。然后，將殘留物溶于二氯甲烷，用水洗滌，有M經(jīng)Na2S04干燥，過濾并、棘。^^純4b(環(huán)己船乙酸乙酯4/1為流動(dòng)相)，!t^i"^(條實(shí)施例175)，獲得所需產(chǎn)物。實(shí)施例179:4-5-(2-三氟曱基^i^基HlA4r惡二峻-2-基]-^i^4-肼基絲-^i^。在隋性1下，向4^M^曱斷l(xiāng)當(dāng)量)的THF溶液中加入Et3N(1.3當(dāng)量)和^ti(1.1當(dāng)量)。將^Jl^^物于室溫下攪拌30分鐘。將溫度l^f氐至0。C0^/7jc浴)，向紐^^中緩tt^口A^的甲醇溶^(30當(dāng)量)，將得到的^^自0。C至室溫?cái)囥?小時(shí)。用7JO淬3l^^^7，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2S(Xt干燥，過濾并;維濃縮。用乙酸乙酯/己烷^^進(jìn)4t^淀，分離得到所需產(chǎn)物。在惰性U下，向各苯基-3-三氟曱M甲斷如前面描述的)(1當(dāng)量)的THF溶液中加入Et3N(1.3當(dāng)量)和^t^(1.1當(dāng)量)。將紐^^在室溫下攪泮5小時(shí)。用水淬3^A^^^,用乙酸乙酯萃取。有才;tvg:經(jīng)Na2S04干燥，it^慮并減壓濃縮。用十;fe泉色if^離得到4-[N，-(2-三氟曱基-^^基"4"m&)-肼基mft-^,。在惰性驢下，向各[N'-(2-三氟曱基-^^基-4-^)-肼基aft-^^(1當(dāng)量)的乙!^溶液中加入Et3N(1.3當(dāng)量)和Burgess試劑(1.5當(dāng)量)。然后將紐混^4勿在回流下餅10小時(shí)。將紐"^^雑至干，輛|鏈色#^化(乙酸乙酯/己烷)，得到所需的本5-(2-三氟甲基^^4-基HM，4鳴二喳-2-基]-^i^(m/z=444(M-H)")0才娥實(shí)施例179所述的方法，采用適當(dāng)?shù)脑?，獲得式X"^^其中R和R2如下面表3所定義。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例183:本[5"(2-三氟甲基^^基H13，4^i二喳-2-基-^^2-三氟甲基-W^基斗甲酸將4-tr3-(三氟甲基)^苯甲斷l(xiāng)當(dāng)量)、苯基硼斷1,8當(dāng)量)、Pd(OAc)2和J^f、己U^基-2，4,6-三異丙^^^于THF中并回流90分鐘。^HP后，將^J^給物通過HyfloSuperCefi^慮并絲。采用乙敏環(huán)己烷為流動(dòng)相，#品殘留物桑^^純化。5-(4-硝基-苯基)"3-(2-三氟甲基"^4~基)-[1，2，4噁二哇將2-三氟曱基^:基"4-曱斷l(xiāng)當(dāng)量)溶于POCl3中，加入本硝^iWKl當(dāng)量)?；亓?小時(shí)后，加入另一份等量的4-硝^^肼，再回流3小時(shí)。減壓除去POCl3后，將殘留物溶于乙酸乙酯，用飽和的NaHC03溶液萃取。有M經(jīng)Na2S04干燥，目標(biāo)產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化可直接用于下一步驟。4-[5-(2-三氟曱基-^^4-基Hlr3，4]惡二哇-2-基]-，將5-(4-硝基-苯基>3-(2-三氟甲基-^^4"基)-[1，2,4鳴二#于甲醇/乙酸乙酯(1/1)中，在常壓和室溫下，^JJPd/Cu)。/。作為催化劑氬化16小時(shí)。通過HyfloSuperCePi^慮后，絲^^'a^,^^/(^(二氯甲烷+二氯曱像甲醇95/5為流動(dòng)相)。ESI-MS(ESr):380(M-1H)實(shí)施例184:N-(4-[5-(2-三氟曱基-^^基Hlj3，4]喁二喳-2-基-苯基V琥珀將4-[5-(2-三氟甲基-^4-基H13，4噁二哇-2-基]-^(1當(dāng)量)溶于二氯甲烷中，力口入4-甲基嗎晰2當(dāng)量)和^J白酸酐(2當(dāng)量)。在室溫下^16小時(shí)后，經(jīng)^^M柱色iK二氯曱烷9二氯甲像甲醇90/10為流動(dòng)相)純化，得到純的目標(biāo)產(chǎn)物。ESI國(guó)MS(ESr):(M曙1H):480(M-1H)實(shí)施例185:{本[5-(2-三氟甲基"^4-基)-異嚅喳-3-基1-苯基}-曱醇在隋性^A50'C糾下，向各溴-2-三H^(1當(dāng)量)的^^液中加AJE^酸正戊酯(l當(dāng)量)?；亓?小時(shí)后，加入另U:的亞硝酸正戊酯。再回流2小時(shí)后，將^;K^冷卻至室溫并^濃縮。采用環(huán)己烷》環(huán)己船乙酸乙酯9/1為流動(dòng)相，將深色的殘留物經(jīng)^R^化，得到本溴-2-三氟甲基-^(刻登色油狀4-乙:fe^-2-三氟甲1^^物)。在氬氣U下，將各溴-2-三氟曱基-^(1當(dāng)量)溶于甲^/三乙^(4/1)，加入Cul(033當(dāng)量)和Pd(Ph3P)2Cl2(0.42當(dāng)量)，在60。C下紅20^#。然后，向反應(yīng)^^中滴加三甲^i^^4乙樹11.6當(dāng)量)。在60。C下紐18小時(shí)后，將紐^^^Hp至室溫，通過HyfloSuperCel⑧過濾，用飽和的NBLjCl水溶液萃取3次。有才^經(jīng)Na2S04干燥，棘，并輛環(huán)己烷作為'艦劑^^純化，得到淺棕色液體，三甲基-(2-三氟甲基-^4-基乙燭基)-法院。將三甲基-(2-三氟甲基-^^4-基乙;^i^^^于甲醇/lNNaOH(4/l)中，在室溫下##1小時(shí)。；雖除去甲醇后，將殘留物溶于二氯甲烷，用稀HC1水溶液萃取。有才M目經(jīng)Na2S04干燥，過濾并濃縮，獲得為淺棕色液體的本乙炔基-2-三氟曱基-^。4-溴-苯甲醛將<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>在室溫下，向4^溴苯甲斷1當(dāng)量)的乙醇溶液中加入K2C03(1.1當(dāng)量)和,鹽酸鹽(l當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)后，將A^;^^i^慮并^H濃縮。將晶狀殘留物溶于二氯甲烷，用稀HCl7jC溶液稀釋。7jC溶液用乙酸乙酯萃取，^f有才M目，經(jīng)Na2S04干燥，近慮并棘。晶狀淺棕色殘留物(4~溴-苯甲醛肝)無需進(jìn)一步純化用于形成異巧I哇。3-(4-溴-苯基)-5-(2-三氟甲基~^4-基)-異鳴唑<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>在0。C下，向4>乙炔^-2-三氟甲基"^(1當(dāng)量)的二氯甲娛溶液中加入10%的NaOCl水溶l然后，加入冬溴-苯曱醛將(l.l當(dāng)量)(b)，隨后在室溫下微l小時(shí)。用二氯曱烷稀釋^;^^物，用水萃取3次。有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并絲。自甲醇中重結(jié)晶后獲得純的3-(4~溴-苯基)>5~(2-三氟甲基^^4-基)-異嗜、，^#色晶體)。{4-[5-(2-三氟曱基-^4-基>異鳴哇-3-基-苯基}-甲醇##^備3-(4-溴-苯基>5-(2-三氟甲基>^4-基>異鳴唑的方法，用冬羥基曱基-苯甲醛將代替4"溴-苯甲醛將，制備目#^^0ESI-MS(ESI^:396(M+1H)+實(shí)施例186:冬[5-(2-三氟甲基^^^基)-異噁喳-3-基-節(jié)胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>向?qū)嵤├?85的終產(chǎn)物{4-[5~(2-三氟曱基-^4-基>異嗜、唾-3-基]-苯基}-甲醇(1當(dāng)量)的二氯甲敏CCl4l/4溶液中加入疊氮/f&納(1.2當(dāng)量)和三^K2.1當(dāng)量)?；亓?小時(shí)后，將^i';^^冷卻至室溫，用水淬滅，用二氯甲M取3次。用二氯曱烷為流動(dòng)相，4^EL品(疊氮^^)^^純化。將純化的中間^K疊氮^^)溶于甲醇，在常壓下用Pd/do。/。作為催化劑氬化直到船會(huì)原料^P消失。然后，將紐^^;通過HyfloSuperCefiti慮，棘，并^Ml二氯甲給甲醇/乙酸鄰。/。9/1/0.125為洗脫劑，^R純化，得到為淺黃色凍干^Oyophilisate)的目標(biāo)^^物(乙^Ul)。ESI-MSCESI4):395(M+1H)十實(shí)施例187:^[5-(2-三氟甲基^^基)-異噍哇-3-基]-^i^^-llJ4-丙酸4-乙^>2-三氟甲1^在隋性鏡下及50。C糾下，向本溴-2-三lL^(1當(dāng)量)的^^液中加M硝^戊酯(1當(dāng)量)。回流l小時(shí)后，加入另^J:的il^^M戊酯。再回流2小時(shí)后，將M^^冷卻至室溫并;^濃縮。深色殘留物^a純^(采用環(huán)己烷+環(huán)己銜乙酸乙酯9/1為流動(dòng)相)，得到^溴-2-三氟甲基-^(^^色油狀物)。在氬氣U下，將4~溴-2-三氟甲基-^(1當(dāng)量)溶于甲^/三乙銜4/l)中，加入CuI(0.33當(dāng)量)和Pd(Ph3P)2Cl2(0.42當(dāng)量)，在60。C儲(chǔ)20^4中。然后，向反應(yīng)混合物中滴加三曱^^基乙炔(11.6當(dāng)量)。在60。C反應(yīng)18小時(shí)后，將反應(yīng)混^^勿冷卻至室溫，通過HyfloSuperCef過濾，用飽和的NH4Cl7jc溶液萃取3次。有扭層經(jīng)碌逾鈉千燥，濃縮，并iM)環(huán)己烷為'3y^劑用^純化，得到淺棕色液^(三甲基-(2-三氟甲基-^4-基乙炔基Hife^)。將三甲基-(2-三氟甲基-^4-基乙炔基)-^^^于甲醇/lNNaOH(4/1),在室溫下##1小時(shí)。；扭除去甲醇后，將殘留物溶于二氯曱烷，用稀HC1水溶液萃取。有4W目經(jīng)石i^鈉干燥，過濾并濃縮。得到淺棕色液體。3-[4-(^iJi#J>甲基)-^ti^i^]-丙酸曱酯在室溫下，向4-譽(yù)J^^^btj(1當(dāng)量)的無7JCp比^^液中加入H-fi-Ala-OMe(1當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)1小時(shí)后，將A^^^^^濃縮，將殘留物溶于乙酸乙酯，用稀HC17K溶液萃取。有樹目經(jīng)為^i^鈉干燥，過濾并濃縮。蜜樣淺棕色殘留物(3-(4>^^-^i^liJ^丙酸曱酯)無需^r進(jìn)一步純化可以用于步驟b)。將3-(4-^&-^^^1^)-丙酸甲斷1當(dāng)量)溶于曱斷75%),加入Ra隱Ni(FLUKA83440;4當(dāng)量)。在100匸>^3小時(shí)后，將紐〉'^^通過HyfloSuperCefit^慮，^ft化劑/HyfloSuperCeP用乙醇洗滌2次(小心">易燃)。將得到的溶;^i^，無需^"f可進(jìn)一步純化可以用于步驟3)。將羥胺鹽酸鹽(1.25當(dāng)量)溶于水，加入NaHC03(1，9當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)30^4中后，加Aiil于甲醇的步驟2)的終產(chǎn)物。在室溫下反應(yīng)2小時(shí)后，將^J^給物濃縮，殘留物用乙酸乙酯萃取3次。合并的有糾目經(jīng)A誠(chéng)鈉干燥，過濾并濃縮。純化(寸鏈色i普；艦；二氯甲銜曱醇95/5為流動(dòng)相)后，分離得到目標(biāo)^^。3_{4-[5-(2-三氟甲基^^4-基)-異噴、峻-3-基-^1^#^}-丙酸在(TC,向4-乙^&-2-三氟曱基-^(1當(dāng)量)的二氯曱娛溶液中加入10%的NaOCl7JC溶液。然后加入3-[4-(羥絲#^-曱基>^^#^-丙酸曱酯(1.1當(dāng)量)，在室溫下微l小時(shí)。用二氯甲)^#釋紐>'^^，并用7傳取3次。M有才;ivg:，經(jīng)A^^鈉干燥，iti慮并員。^!f才尋到的酯:^下it^亍皂4匕將LiOH(1.6當(dāng)量)溶于甲醇/7K(1/1)，力口入酯(l當(dāng)量)。在50。C^I4小時(shí)后，;扭除去甲醇，用1NHC1將pH調(diào)節(jié)至3，將紐^^用乙酸乙酯萃取3次。合并的有^vi:經(jīng)A爐鈉干燥，過濾，濃縮并^a純^(二氯甲船甲醇95/5為流動(dòng)相)。ESI國(guó)MS(ESI):515(M-1H)實(shí)施例188:4^[5-(2-三氟曱基^^基>異哺、哇-3-基-，3-(4-硝基-苯基)-5-(2-三氟曱基^^基>異喁唑才N^'J備3-(4"溴-苯基)-5-(2-三氟甲基-^4-基)"異鳴唑的方法，用本硝基-苯甲醛將代替4"溴-苯曱醛將，制備目標(biāo)^^。ESI-MS(ESf):411(M+1H)十4-[5-(2-三氟甲基-^4-基>異鳴哇-3-基-*將3-(4-硝基-苯基)-5-(2-三氟曱基-^4^基)-異嗜^膽于曱醇/乙酸乙酯1/1，在室溫常壓下用Pd/C，。作為催化劑氫化16小時(shí)。通過HyfloSuperCefi^慮后，將紐';^^絲，^M純^ft(二氯甲烷+二氯甲^/曱醇95/5為流動(dòng)相)。分離得到為棕色油狀物的^[5-(2-三氟甲基-^4-基)-異噍喳-3-基-^。ESI-MS(ESI"):381(M+1H)十實(shí)施例189:1\-{4-5-(2-三氟甲基-^4-基)-異噁喳-3-基1-苯基}-琥銷,酸將4>[5-(2-三氟曱基-^4-基)-異噁哇-3-基-^^溶于二氯曱烷中，加入本甲基嗎#(2當(dāng)量)和自白酸酐(2當(dāng)量)。在室溫下紐16小時(shí)后，^^柱色i粉離(二氯曱烷+二氯曱像曱醇90/10為流動(dòng)相)，獲得純的目標(biāo)產(chǎn)物。ESI掘(ESD:(M-1H):47攀-1H)實(shí)施例190:(及)-2-{4-[5-(2-三氟甲基^^4-基》異噴、哇-3-基]-^^^1^&}-丙酸4-[5-(2-三氟甲基-^4-基>異嗜喳-3-基-^^將[5-(2-三氟甲基-^4-基)-異噍哇-3-基-^<1當(dāng)量)溶于乙腈中，力口入HCl(狄37。/。)和NaN02水溶測(cè)1.5當(dāng)量)后，將紐^^在8。C下寸橫30分鐘。向該反應(yīng)物中加入飽和的S02的冰乙酸溶^(lml)，船加入CuCl27jc^液(0.5當(dāng)量)。在室溫下AJI3小時(shí)后，濾出^Ut物，溶于二氯甲烷中并經(jīng)石jf^鈉干燥。除去溶劑后，得到為灰色晶躲的目標(biāo)Wt^。ESI-MS(ESI^):364(M+1H)十將4-[5-(2-三氟甲基-^4-基>異噁哇-3-基-^^(1當(dāng)量)溶于THF中，加入H-DAla-OH(3當(dāng)量)、三乙銜l當(dāng)量)和1NNaOH(2當(dāng)量)。在室溫下^jl18小時(shí)后，將反應(yīng)物用7jc稀釋，用1NHCl將pH調(diào)節(jié)至3。用二氯甲烷萃取3次后，有才;ivg"經(jīng)^M鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物^^純^(二氯甲激甲醇/乙酸so。/。9/1/0.125為流動(dòng)相)。ESI掘(ESf):517(M+1H)+實(shí)施例191:("-2-{4-[5^2-三氟甲基^^4-基>異噁哇-3-基1-^^1^^}國(guó)丙酸將4-[5-(2-三氟甲基-^4-基)"異噴、喳-3-基]-^M^(1當(dāng)量)溶于THF中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>加入H-Ala-OH(3當(dāng)量)、三乙銜l當(dāng)量)和1NNaOH(2當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)后，將^物用71<#釋，用1NHCl將pH調(diào)節(jié)至-3。用二氯甲絲取3次后，有M^^l^鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)^^^ft(二氯甲銜曱醇/乙酸50%9/1/0.125為流動(dòng)相)。ESI-MS(ESf):517(M+1H)十實(shí)施例192:4~{5-[4-(2，2，2-三|^乙*^>3-三氟甲基-苯基1-異噍哇-3-基}-輛(4-^3-三氟甲基-苯基乙炔基)-三甲基-皿才娥文獻(xiàn)中所^法合成該4^物有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)46(11);1981，第2283頁。4-乙炔基-l-Sr2-三氟曱基-苯步驟1)的終產(chǎn)物#^有機(jī)化學(xué)雜志46(11);1981，第2283頁的方法進(jìn)行M。4-[5-(4-|^3-三氟甲基-苯基>異鳴哇-3-基]-^^目標(biāo)^^^才鵬實(shí)施例183c)的方'^^成。4-{5-[4-(2，2，2-三1乙|^^)-3-三氟甲基-苯基-異喝哇-3-基}-^^將4-[5K4-IU3-三氟甲基-苯基)"異噍峻-3-基]-^i^(1當(dāng)量)溶于DMF中，加入NaH(2當(dāng)量；FLUKA62863)后，在室溫下反應(yīng)30分鐘，加入2，2^2-三Hr乙醇。在室溫下反應(yīng)3小時(shí)后，將^Jl^^濃縮，用乙,理后分離得到為淺黃色固體的目標(biāo)^^物。ESI-MS(ESr):465(M曙1H)實(shí)施例193:2-乙基4-[5-(2-三氟曱基-^^4-基Hl,2，4]鳴二哇-3-基-^i^胺向4_溴-2-乙基-^ti^(4.4g,0.015摩爾)的二氧六環(huán)(60ml)溶液中加7sjlNH4OH(6ml)溶液。將A^^^7在室溫下,2小時(shí)。；iU^除去溶劑，將得到的油狀物溶于乙酸乙酯。用7jC洗涂有機(jī)蜃，萃取，經(jīng)石i^鈉干燥并濃縮。用乙酸乙酯和己烷的^^結(jié)晶，分離得到所需產(chǎn)物(4g)。向4-溴-2畫乙基-^^(1.0g，0.004摩爾)的NMP(30ml)溶液中加入CuCN(3.6g,0.04摩爾)，將^Jl;^^在140。C下餅3天。^^^^^H卩后，加入乙酸乙酯和水，有城用水洗滌，萃取，經(jīng)石1^鈉干燥并棘。用'tfet柱色譜純化后結(jié)晶得到所需產(chǎn)物(160mg)。3-乙基-N-^i^kt^^-苯甲脒向4>^J^-2-乙基-^i^fe(160mg,0.0007摩爾)的THF(6ml)溶液中加入^^(50。/。的7jc溶液)溶測(cè)6ml)。將^JI^^物在室溫下攪伴16小時(shí)。用乙酸乙酯萃取紐^^物，用水洗滌，萃取，經(jīng)石爐鈉干燥并濃縮。用乙酸乙酯和己烷混合物結(jié)晶，分離得到所需產(chǎn)物(140mg)。2-三氟甲基-^^基4-甲酸在隋性M下，向4"tr3-三氟甲絲曱斷5g,0.02摩爾)的THF(200ml)溶液中加yV^基硼斷5.3g,0.04摩爾)、X-Phos(lg，0.002mo1)、KF(4g，0.06摩爾)和Pd(OAc)2(240mg，0.001)，然后將紐^^在90。C下微15小時(shí)。將紐〉'^^物、舞至千，用'^^色i普純4娥到目標(biāo)^^(5g)。2-乙基-4-[5-(2-三氟甲基-^^4-基Hl，2，4噁二峻-3-基]-^ti^在惰性W下，向2-三氟甲基-^:基"4-甲^(50mg，0.0002摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入EDC(40mg,0.0002摩爾)、HOBt(30mg，0.0002mo1)，將紐〉'^^在室溫下攪拌15分鐘，然后加入3-乙基-N-羥基4^^^-苯甲晰50mg，0.0002摩爾)的DMF(lml)溶液。將^L';^^物在90。C下攪拌15小時(shí)。將^';^^;濃縮至干，用小狄色if^/R^f到目標(biāo)v^^(60mg)。ESI-MS(ES^):474(M+1H)+實(shí)施例194:2-乙基-4-[5-(2，-IU2-三氟曱基-^^基Hl，2，4惡二哇-3-基-苯才娥實(shí)施例193所用的方法，iM)2'-tr2-三氟曱基^^基4甲酸代替2-三氟曱基_^^基-4-曱酸，制得該^^。ESI-MS(ESI):478(M畫1H)實(shí)施例195:2-乙基4-[5-(4-苯基-5-三氟曱基-瘞吩-2-基>[1，2,4]噁二喳-3-基-才,實(shí)施例193所用的方法，采用4-苯基-5-三氟甲基-瘞吩-2-甲酸代替2-三氟甲基-"基-4-甲酸，制得該^^。ESI-MS(ESr):478(M-1H)實(shí)施例196:4-5-(4-環(huán)己基-3-三氟甲基-苯基)-[1^2，4喁二峻-3-基l-2-乙基-苯根椐實(shí)施例193所用的方法,采用4-環(huán)己基-3-三氟曱基-苯甲酸代替2-三氟曱基_^^基_4-甲酸，制得該^^。ESIMSCESI4):480(M+1H)+實(shí)施例197:3-{4-[5^(2-三氟甲基-^4"基)-異嗜哇-3-基]-^^1>#^}-丙<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>l討,實(shí)施例187所述的方法，用冬乙^^-2-三氟甲基-^^為原料，制備{4-[5-(2-三氟甲基-^4-基)-異噴、哇-3-基]-^^4~#^}-丙酸。2)將3-{4-[5-(2-三氟甲基-^4-基)>異噁喳-3-基-^^^#^}-丙斷1當(dāng)量)溶于DMF中，1^加入N-(3-二甲J^J^丙基)-N，-乙^^二亞胺鹽,(EDC.HC1;1.5當(dāng)量)、羥J^:并三頓OBt;13當(dāng)量)、,01125%水^^樹1.2當(dāng)量)和二異丙基乙銜1.5當(dāng)量)。在室溫下紐16小時(shí)后，將AJI^^^it并^a純化(二氯曱銜甲醇95/5^二氯甲銜甲醇/乙酸so。/n卯/10/0.125為流動(dòng)相)，4尋到純的目#^^。ESI掘(ESr):514(M-1H)ESI隱MS(ESf):516(M+1H)+實(shí)施例198:^{4-[5~(2-三氟甲基-^^基)-[1，3，4嘌、二哇-2-基-苯基}-琥賴<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>1)5-(4-硝基-苯基)-3-(2-三氟曱基-^4-基Hi;2,4]噁二喳根據(jù)實(shí)施例183所述的方法，用2-三氟甲基-^^基4-甲酸為原料，制備該化N勿。2)4-[5"(2-三氟甲基"^^U基H13,45悉二峻-2-基-^^才M居實(shí)施例184所述的方法，^MI步驟1)的化合物為原料，制備該^^物。3)N書-[5-(2-三氟甲基-^^4-基)-[13，4噁二喳-2-基-苯基)-船白鵬酸將步驟2)的終產(chǎn)物(1當(dāng)量)溶于二氯甲烷中，加入本甲基嗎浙2當(dāng)量)和彭白酸酐(2當(dāng)量)。在室溫下^16小時(shí)后，^^柱色i普層析純^(二氯曱烷4二氯甲像甲醇90/10為流動(dòng)相)，得到純的目標(biāo)產(chǎn)物。ESI-MS(ESr):(M國(guó)1H):480(M-1H)4)N-(4-[5-(2-三氟曱基^^4-基H13，4噴、二哇-2-基-苯基卜fe自鵬采用實(shí)施例197中f^步鄉(xiāng)2))相同的方法，制得目標(biāo)4^物。ESI曙MS(ESr):479(M-1H)ESI-MS(ESI"):48攀+1H)十實(shí)施例199:N-(4-[5-(2-三氟曱基-^^基Hl,2，4「惡二哇-3-基]-苯基卜^5白a)2-三氟甲1^^^^4-甲酸##實(shí)施例la)所i^'^^'J備。b)N-4^J^-N-羥基-苯曱脒才娥實(shí)施例lb)所i^r法制備。c)4-[5-(2-三氟甲基-^^4-基HlJ,4嗜、二喳-3-基]-絲才鵬實(shí)施例2f)所述方法制備。d)]\-{4-[5-(2-三氟曱基-^4-基)-1,2,4噁二峻-3-基]-苯基}-自自鵬酸根據(jù)實(shí)施例2g)所i^T法制備。e)N-《4-[5-(2-三氟甲基-^4-基Hl，2，4],、二哇-3-基-苯基)-fe白鵬在惰性1下，向N-(4-[5-(2-三氟甲基-^4-基HlJ,4]噁二喳-3-基-苯基卜琥銷,斷l(xiāng)當(dāng)量)的THF溶液中加入EDC(1.3當(dāng)量)和HOBt(1.3當(dāng)量)，將反應(yīng)混^在室溫下攪拌30分鐘。然后將iljL化銨溶測(cè)lO當(dāng)量)加JA^^^中，在室溫下餅4小時(shí)。然后將紐^^絲至干，用'岐色鐠純4t^到N畫《4-[5-(2-三氟甲基-^^4-基Hl,2，4I、二喳-3-基-苯基)-琥銷酰胺。m/z=479(M-H)-。實(shí)^fe例200:N-甲基-NH4-[5"(2-三氟甲基-^^4-基Hl，2，4鳴二哇-3-基]-苯基}畫翻麟##實(shí)施例199e)中/zHf"的相似方法，在絲步驟中^！甲胺的甲醇溶液代替錄化銨，合成該目樹t^。m/z=493(M-H)-。實(shí)施例201:]^,1\-二曱基-1^-{4-5-(2-三氟曱基-^^4-基)41,2，41噴、二哇-3-基1-苯基}-輛驗(yàn)才財(cái)居上面實(shí)施例199e)中公開的相似方法，在^步驟中采用二甲胺的甲醇溶液代替氬氧化銨，合成該目標(biāo)^^。m/z=507(M-H)_。實(shí)施例202:3-^[5"(2-三氟甲基-^M"基)-13，4r惡二喳-2-基-^^i^將4-[5-(2-三氟曱基^M-基H13,4n惡二峻-2-基]-^(1當(dāng)量)溶于乙腈中，然后加入11(:1(0.551111;就37。/o)和NaN02水溶樹1.5當(dāng)量)，將紐〉'^r^在8。C保持30分鐘。向該反應(yīng)物中加入S02的冰乙斷1ml)4^溶液，歸加入CuCl27&溶樹0.5當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)3小時(shí)后，濾出沉淀，溶于二氯甲烷，經(jīng)石;SL^鈉干燥。除去溶劑后，目標(biāo)^^物無需任何進(jìn)一步純化可以直接用于下一步驟。ESI德(ES1^:465(M+1H)十將4"[5-(2-三氟甲基-WM-基H13，4噁二哇-2-基l-^i^tj(1當(dāng)量)溶于THF中，加入H-fiAla-NH2(3當(dāng)量)、三乙銜l當(dāng)量)和lNNaOH(2當(dāng)量)。在室溫下反應(yīng)18小時(shí)后，將反應(yīng)物用7J^^釋，用1NHCl將pH調(diào)節(jié)至3。用二氯甲烷萃^(3次)后，有M經(jīng)石jlt^鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)>^^^純^<二氯甲銜曱醇8/2為流動(dòng)相)。ESI-MS(ESr"):517(M+1H)+游離形式或藥學(xué)上可被的鹽形式的式I^f^^具有有價(jià)值的藥理爭(zhēng)I":lt，例如為S1P1受體激動(dòng)劑，例如在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中所表明的，因此可以用于治療。A.體外實(shí)驗(yàn)下列實(shí)驗(yàn)ii明式14給物對(duì)單獨(dú)的人類S1P受^"有結(jié)合親和力A.體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定與制備自表i^A類EDG受體的CHO細(xì)胞的膜結(jié)合的GTP『7-35^的GPCR活化實(shí)驗(yàn)SlPi(EDG"l)GTP[Y-35S]結(jié)合實(shí)^:自穩(wěn)^JJiA類EDCMN畫端c曙myc#1己的CHO細(xì)胞克I^，J備均化的膜。細(xì)胞在兩個(gè)850cm2轉(zhuǎn)瓶中的懸浮液中生長(zhǎng)3或4天，然后收集。將細(xì)胞離心，用冷的PBS洗滌1次，再懸浮于《0ml的緩沖液A(20mMHEPES，pH7.4，0mMEDTA,不含EDTA的完4^白酶抑制劑^/^(cocktai1)[1片劑/25ml)中。將細(xì)胞懸浮'^^上均化，Polytron勻漿機(jī)，掩逸30000rpm，勻化三次，每次15秒。首先在桌面低速離心機(jī)中將勻漿以2000rpm離心10分鐘。通過細(xì)l^慮過器后，將上清液在4。C下以50000xg再離心25分鐘。將^j定(pellet傳懸浮于緩沖液B(15Vo甘油,20mMHEPES,pH7.4,0.1mMEDTA,不含EDTA的完4^白酶抑制劑濕^斷1片劑/10ml)中。采用BCA蛋白分析試劑盒(Pierce)以BSA為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定制絲的蛋白質(zhì)狄。將膜等分并置于-80'C冷凍。在DMSO中制備M范圍為10mM-0.01nM的實(shí)驗(yàn)^^溶液。將S1P在4%BSA溶液中稀辨為陽'I"樹照。將需要量的膜制品輛》傳的實(shí)微沖i^(20mMHEPES,pH7.4，100mMNaCl,10mMMgCl2，0.1%不含脂肪酸的BSA,5pMGDP)稀釋并充分源旋。將2Ml或更少的化^分布于圓底9&孔聚苯乙烯分析板的^—個(gè)孔中，^加入100nl稀，膜制品(3陽10fxg/孔)，將其置于冰上直到加入熱GTPyS。用冷的實(shí)!^沖液將[35s-GTPyS稀釋l:1000(v/v)，將100^1加至^—個(gè)孔中。反應(yīng)在室溫下進(jìn)行90分鐘，然后用PackardFiltermateHarvester將膜收集在Perkin國(guó)ElmerIMfflterGF/B>96濾Rh。用洗'械沖樹20mMHEPES,pH7.4，100mMNaCl,10mMMgCl2)洗滌數(shù)^，用95%乙醇沖洗，將濾膜在37"C下烘箱中干燥30分鐘。加入MicroScint-20,將膜密封用于在TopCount上閃爍計(jì)數(shù)。通itlIGraphPadPrism的劑J^應(yīng)曲線擬合工^^以合GTP[y35S]結(jié)合曲線(原始數(shù)據(jù))可以獲得ECso值。用6或12個(gè)不同的^Ml產(chǎn)生、;^1響應(yīng)曲線(每個(gè);^^用三個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn))。S1P1GTP[Y-35S結(jié)合實(shí)斜目似的方法進(jìn)行S1P3、-5、-6和-8GTPfy-35S結(jié)合實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中^^J由穩(wěn)^JJic-端c-myc#^試未#^己的受體的CHO細(xì)胞制備的膜。對(duì)于^""個(gè)膜制品，首先采用S1P對(duì)照進(jìn)行滴定實(shí)驗(yàn)，以確^&口到每一個(gè)分析孔中的膜的最佳量。才娥上述實(shí)^^對(duì)式I化^進(jìn)行測(cè)定，顯示其對(duì)S1P受W例如S1P1受體)具有結(jié)合親和力，其EC5o〈lpM。M而言，式I^^對(duì)S1P1受^^r有選擇性。例如，在上述S1P1受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，實(shí)施例45、54、145、194和196化合物的ECso<1nM，并財(cái)S1P1受體的選棒性至少是S1P3受體的20倍，對(duì)S1P1受體的選棒性至少是S1P8受體的20倍。B.體外實(shí)驗(yàn)FLIPR鈣通量實(shí)驗(yàn)用FLIPR4丐通量實(shí)騶鄰J試式I化絲對(duì)S1P1、S1P3、S1P5和S1P6的激動(dòng)活性。簡(jiǎn)而言之，將表達(dá)S1P受體的CHO細(xì)胞置于含有5%FBS以及500ng/mlG418的F-12K培養(yǎng)^(ATCC)中。在實(shí)騶^i行前，將細(xì)胞以10000細(xì)必孑L/25卞1培養(yǎng)基的^^布于384黑色透明底的板中，所鵬養(yǎng)基為含有1%FBS的F-12K培養(yǎng)基。第二天，將細(xì)胞用洗滌緩沖液洗滌3次(25nl/每次)。每孔中力口入約25jil染色劑，在37。C、5%<:02糾下培養(yǎng)1小時(shí)。然后將細(xì)胞用洗滌緩沖液洗滌4次(25pl/每次)。向每孔的細(xì)胞中加入25fil的SEW2871溶^(Rosen等公開的，用作對(duì)照)后，分析4丐通量。對(duì)分別4^樹不同SlP受體的細(xì)^^t4目同分析。每間隔3分鐘記錄一次FLIPR4丐通量實(shí)驗(yàn)中的滴定，以與S1P-1活4t4目t腺的最大峰高響應(yīng)百分it^量。在該實(shí)驗(yàn)中，式I>^^在10-12至3.10-5nM的紋范圍內(nèi)具有活性。C.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)測(cè)定jk^巴細(xì)胞消減的篩選實(shí)驗(yàn)循環(huán)中淋巴細(xì)胞的測(cè)定將待實(shí)驗(yàn)4b^溶于DMSO/PEG200中，再用去離子水稀釋。將待實(shí)驗(yàn)^^物以1mg/kg的劑量給藥至大鼠(Lewis品系，雄I"生，642周齡)，溶媒的劑量為4ml/kg(最高2"/。的DMSO，最高2%的PEG200/7K)，并經(jīng)口給藥。DMSO/PEG200/水和FTY720(0.3mg/kg)分別作為陰'I"^t照和P日'l":iJ葉昭給藥后2、6、24和48小時(shí)，在短效異^^下，自舌下靜樂Wj6r。#部jfc^羊進(jìn)行血液學(xué)分析。用自動(dòng)分析儀測(cè)定外周淋巴細(xì)皿。用熒光染料-^輒的特異l"生M染色外周血淋巴細(xì)^i1^,用熒光激活的細(xì)胞分類H(Facscalibur)進(jìn)行分析。用兩個(gè)大鼠測(cè)定篩選的^"^f^物的淋巴細(xì)胞消減活性。結(jié)果以ED鄰表示，其定義為血中淋巴細(xì)胞消減50%所需要的有效劑量。##上述實(shí)驗(yàn)對(duì)式1^^進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示其EDso小于10mg/kg。因此，式I^^可用于治療和/或預(yù)防由、淋巴細(xì)船目互作用^h導(dǎo)的疾病或病癥，例如^^多植中，例如急'f錄慢性細(xì)胞、組織或器官的同種-或異種移植排斥反應(yīng)或移植物功f^^恢復(fù)、移植物抗宿主??；自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼疾、橋本氏曱炎、多發(fā)'I^更化、重癥肌無力、i或n型糖尿病及其有關(guān)疾病、脈管炎、惡性貧血、Sjoegren綜合征、葡萄膜炎、#^病、Graves目艮病、斑殼等；過敏性疾病，例如過敏性哮喘、攤性皮炎、過敏性鼻炎/結(jié)膜炎、過敏性接觸性皮炎；任選與潛在異常反應(yīng)有關(guān)的炎性疾病，例如炎'l"操病，克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎、內(nèi)源性哞喘、炎'1^N員傷、炎'l^t損傷、炎性腎小主擬員傷、動(dòng)脈粥樣硬化、骨關(guān)節(jié)炎、刺激性接觸性皮炎，另夕卜還包括濕務(wù)I"生皮炎、脂溢性皮炎、免疫誘導(dǎo)疾病的;W^象、炎性眼病、角膜結(jié)膜炎、心肌炎或肝炎(例如急'I"線慢'f餅炎)、局部^j6zy再灌注損傷(例如心M^、中風(fēng)、胃腸缺血、腎衰竭、出血性休克或創(chuàng)傷性休克)；癌癥，例如乳腺癌、T細(xì)艦巴瘤或T細(xì)胞白血病、腎病綜合征；感染性疾病，例如中毒性休克(例力v^^^^引起的)、膿毒〖生休克、從呼錢賴合減病絲染，例如AIDS，病毒斷炎(例如肝炎B或C),慢性細(xì)菌感染；或神經(jīng)變性疾病，例如阿爾茨海默氏病、喊縮側(cè)索硬化M老年癡呆。細(xì)胞、組織或?qū)嶓w器官移植物的實(shí)例包^r^如胰島、干細(xì)胞、骨髓、角膜組織、神經(jīng)iti且織、心臟、肺、心和肺、腎、肝臟、腸、胰腺、氣管或食管。對(duì)于上^途而言，所需劑量當(dāng)斜^^給藥方式、#"治療的特定病癥以^S^斤期療效而變化。通常，日劑量約為0.03-5.0mg/kg體重時(shí)可以得到系統(tǒng)性令A(yù))藹意的結(jié)果。對(duì)大型哺乳動(dòng)物(例如人類)而言，推薦的日劑量約為0.5mg至約500mg,該劑量可以方^t^藥，例如以至多每日4次的分劑量或者以緩#^*藥。適當(dāng)?shù)挠糜诳谠路逅幍臄倓┬桶s0.1-50mg活性成分。式n^^可以通過^f可常^it:^^藥，特別，內(nèi)給藥，例如口月M^藥，例如以片劑皿嚢形式；或腸胃外給藥，例如以可注射溶液或懸浮液的形i^藥；局部給藥，例如以洗劑、皿、膏劑或乳膏劑的形式；或者以鼻內(nèi)或栓劑的形式給藥?？梢杂贸^r法通過與藥學(xué)上可接受的載M稀釋劑^^而生產(chǎn)藥物組合物，該藥物組^包含游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的式I化合物以及至少一種藥學(xué)上可接受的載M稀釋劑。式I化合物可以以如上所述的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式給藥。此類鹽可以用常財(cái)法制備，并具有與游離4^^相同船iJ的活性。##前面所述，本發(fā)明還提供1.1預(yù)防或治療需要此治療的患者中的淋巴細(xì)l^h導(dǎo)的疾病或病癥(例如上述的)的方法，該方法包括將有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥至所述患者;1.2預(yù)防或治療需要此治療的患者中的急性或慢性移植排斥反應(yīng)或T-細(xì)旨導(dǎo)的炎'l"生或自身免疫性疾病(例如上述的)的方法，該方法包括將有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥至所述患者；2.以游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形^^在的式I化^，其例如在上面1.1或1.2項(xiàng)下所述的4封可方法中用作藥物。3.藥物組*，例如在上面l.l或1.2項(xiàng)下所述的j^f可方法中使用的藥物組合物，該藥物組^包括游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的式I化合物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。4.用于制備上面1.1或1.2中任4可方法中使用的藥用組^的的式I化^的或其藥學(xué)上可接受的鹽。式I化合物可以單獨(dú)作為活性成條藥或者例如作為佐劑與其它藥物聯(lián)合給藥，所述其它藥物為例如免疫抑制劑或其它免疫調(diào)節(jié)劑或其它抗炎藥物，它們用于例如治療或預(yù)防同種-或異種移植的急'^^慢性排斥M或炎'賦自身免疫性疾病，或者為^m療藥物，例如惡性細(xì)皿增殖藥物。例如，式n^物可以與下列藥物紐/^f吏用釣^Jl^H抑制劑，例如環(huán)^菌素A或FK506;mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、40-O-(2-^i^乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573、bio!imus-7或biolimus-9;具有免疫抑制性能的子嚢霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷,；硫哇噤呤；甲邀;^呤；來H^特;咪#賓；霉S^^或鹽；嗎替麥考酺旨；15-去l^",素(15^deoxyspergualine)或其免疫抑制同系物、類似物或f汴生物；PKC抑制劑，例如WO02/38561或WO03/82859中公開的，例如實(shí)施例56或70化合物；JAK3激酶抑制劑，例如N-節(jié)基-3,4畫^^基-亞千基-絲乙鵬a-^JK3，4-^^基)-N-千基肉桂iW(TyrphostinAG490)、靈菌紅素25-C(PNU156804)、[4-(4'-羥1^:基>#^畫6,7畫二甲I^Jj^^啉(WHI-P131)、[4-(3'-溴4'-羥^^基>#^-6,7-二甲|1^#"主啉](WHI-P154)、[4-(3'，5'-二溴-4'-羥_&^基)"#^-6，7-二曱|1^#^啉]WHI-P97、KRX畫211、3-{(3IMR>4-甲基畫3-[甲基-(711-處咯并253畫(1]11^^4-基>-^]-派咬-1-基}_3_氧^^丙猜(游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽的形式，例如^t^jL(楊為CP-690，550))或WO04/052359或WO05/066156中公開的化合物；免疫抑制單克隆抗體，例如，白細(xì)胞受體的單克隆抗體，例如，MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD52、CD58、CD80、CD86或它們的目沐；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如至少具有CTLA4J^卜域的一^分的重組結(jié)^"^或其突變體，例如與非-CTLA4蛋白序列結(jié)合的CTLA4的至少^卜域部分或其突變體，例如CTLA4Ig(例如ATCC68629)或其突變體，例如LEA29Y;粘附襯抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-l或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑；或化療藥物，例如紫杉醇、吉西他濱、順鉑、多柔比星或5^ft^pf^:;或M染藥物。當(dāng)式I化合物與其它免疫抑制劑/免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、化療藥物或抗感染治療聯(lián)合給藥時(shí)，共同給藥的免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎、化療或M染化^4勿的劑量當(dāng)然可才娥共同給藥的藥物的類型(例如是類固醇iU^i5^^^酶抑制劑)、給藥的M藥物、幹治療的病癥等而變化。才鵬前述，另一方面，本發(fā)明提供5.如Jii^斤定義的方法，該方法包括將治療有效的iL^量的式n^^和至少另一種藥物共同給藥(例如同時(shí)或^:)，所述另一種藥物例如為上面所述的免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物或化療藥物。6.藥物組合產(chǎn)品，例如藥盒(kit),該藥物組合產(chǎn)品包含a)第一種藥物，其為本文公開的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的式I化合物，和b)至少一種共同給藥的藥物，例如免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、化療藥物或抗感染藥物。所述藥盒可以包含其給藥說明書。本i^斤輛的術(shù)語"共同給藥"或"組合給藥"或類似術(shù)語是指包括^^:的治療藥物給藥至單個(gè)患者，并包"^治療方案，其中藥物并非必須通ii^目同的給藥途徑或者在同時(shí)給藥。本i^斤用術(shù)語"藥物組合產(chǎn)品"是指通it^^或組合多種活性成分而得到的產(chǎn)品，且其包含活性成分的固定和非固^i且合。術(shù)語"固^^且^"是指將活性成納例如式I^^和共同給藥的藥物)以單一的實(shí)絲劑型同時(shí)給藥于患者。術(shù)語"非固^i且^"是指將活性成^(例如式I^/^和共同給藥的藥物)以獨(dú)立的實(shí)體同時(shí)、并存M^^(沒有特定的時(shí)間P艮制地)給藥至患者，其中此類給藥向患者體內(nèi)提供治療有效水平的兩種^^物。后者也用于雞尾酒(cocktail)療法，例如給予3種或更多種活性成分。權(quán)利要求1.式I化合物或其生理學(xué)上可水解的衍生物、鹽、水合物和/或溶劑合物id="icf0001"file="S2006800186926C00011.gif"wi="59"he="17"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中X為-N＝且Y為-O-；或X為-O-且Y為-N＝；或X為CH且Y為O；R1為取代的聯(lián)苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C1-4烷氧基)-苯基，其中至少一個(gè)苯基基團(tuán)是單取代的；被一個(gè)或多個(gè)選自下列基團(tuán)的取代基取代的苯基，所述基團(tuán)為鹵素、腈基、C1-8烷基、鹵代C1-8烷基、C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-鹵代C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷基-C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷基-鹵代C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷氧基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-鹵代C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷氧基-鹵代C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、鹵代C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-鹵代C1-8烷基、鹵代C1-8烷氧基-鹵代C1-8烷基、C2-6烯基氧基、C2-6炔基氧基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷氧基、C3-6環(huán)烷基-氧基、苯基-C1-4烷氧基和雜環(huán)-C1-4烷氧基；或取代的5或6-元雜芳基；R2為任選被鹵素、OH、NH2、C1-4烷氧基或C1-4烷基羰基氧基取代的C1-6烷基；氨基；羧基；氨磺?；?；氨基甲?；?；或HN-CO-C1-4烷基；或者R2為R3-R4-COOH或R3-R4-CONR5R6，其中R3為SO2-NH、SO2-N(C1-4烷基)、CO-NH、CO-N(C1-4烷基)、CH2-O、NH-CO或N(C1-4烷基)CO；并且R4為任選被O、S或C＝CH2間隔的C1-6亞烷基，或者為任選取代的亞苯基或C3-6亞環(huán)烷基；R5和R6各自獨(dú)立地為氫或C1-6烷基，或者R5和R6與它們結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)基，并且環(huán)A可任選被取代，前提是當(dāng)Y為O、X為-N＝或-CH＝且R2為其中R4為支鏈C1-6亞烷基的SO2NH-R4-COO時(shí)，則i.R1不為被鹵素、C1-8烷基、C1-8烷氧基、鹵代C1-8烷基或鹵代C1-8烷氧基單取代的苯基或者被一個(gè)或二個(gè)選自鹵素、C1-8烷基和C1-8烷氧基的取代基二取代的苯基；或者ii.R1不為單取代的噻吩基或呋喃基。2.##權(quán)利要求1的化^，其中Ri為取代的聯(lián)苯基、4"薦^L^-苯M4"(苯基-C"^fe"苯基，其中至少一個(gè)苯狄團(tuán)為單取代的。3.才娥權(quán)利要求1或2的化合物，其中R2為任選被卣素、OH、NH2、Cw^^Cw^^ttltJ^L代的Cw錄錄錄^^itt;絲甲酰絲HN-CO誦Cw;^。4.制備^^權(quán)利要求1的式I化洽物的方法，該方法包括a)為了制備其中X為-N-、Y為0且R2如上所定義的式I化合物，其中Ri如上所定義；或b)為了制備其中X為-N-、Y為O且Rz為R3-RrCOOH或R3-RrCONRsR6,其中R3為NH-CO或N(Cw^i-)CO并且Rt、Rs和R6:N5^'J^求1中所定義的式I^^,其中Ri和環(huán)A:N5Uf'J^求1中所定義，R，2為NH2或NH(Cw娛^l-)，與?；噭┓磻?yīng)，或者進(jìn)行S肌dmeyer反應(yīng)；或其中環(huán)A和R2如權(quán)利要求1中所定義，與式m化合物或其官能團(tuán)衍生物^！c)為了制備其中Y為-N-且X為0的式I化^，在Burgess試劑存在下，4吏式V訐^^J^(匕，其中RpR2和環(huán)A如權(quán)利要求1中所定義；或d)為了制備其中Y為O且X為CH的式I化合物，vi其中Ri如權(quán)利要求1中所定義，vii其中R2如權(quán)利要求1中所定義；或者e)#-種式1^^轉(zhuǎn)化為另一種式1>^,并回收得到的游離形式或鹽形式的式I化合物，如果需要的話，將獲得的游離形式的式I化^/轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，或者，將獲得的鹽形式的式I化^1^f匕為所需的游離形式。5.才,權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用作藥物。6.藥物組合物，該藥物組^;包含^^權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)的式I化^或其藥學(xué)上可接受的鹽以及其藥學(xué)上可接受的稀^^或載體。7.才娥權(quán)矛虔求1-3中任何一項(xiàng)的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于制備預(yù)防或治療由淋巴細(xì)斷導(dǎo)的疾病或病癥的藥物組合物。8.藥物的組合產(chǎn)品，該藥物組合產(chǎn)品包含a)第一種藥物，其為才娥權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽的形式的式I化合物，和b)至少一種^^給藥的藥物，其為免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、化療藥物或抗感染藥物。9.預(yù)防或治療需要此類治療的患者中的由、淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，該方法包括將有效量的根據(jù)權(quán)利要求i-3中任何一項(xiàng)的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥至所述患者。全文摘要本發(fā)明公開了式I多環(huán)化合物，它們可用作鞘胺醇-1-磷酸(S1P)受體的配體，特別是可用作免疫抑制劑。文檔編號(hào)C07D271/06GK101184739SQ200680018692公開日2008年5月21日申請(qǐng)日期2006年6月7日優(yōu)先權(quán)日2005年6月8日發(fā)明者F·澤克里,R·阿爾貝特,S·韋勒申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司