本發(fā)明涉及含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物的制備方法與用途。

背景技術(shù)：

自20世紀(jì)60年代中期，荷蘭philiph-dupher公司開發(fā)出第一個1，2，4-三唑類殺菌劑——威菌靈以來，三唑類化合物的高效殺菌活性引起了國際農(nóng)藥界的高度重視。三唑類化合物因其含有三個n雜原子與生物體內(nèi)的氫鍵的形成息息相關(guān)，并且與生物環(huán)境具有較好的親和性，在生物體內(nèi)與靶蛋白發(fā)生相互作用從而導(dǎo)致活性因子的疊加，故三唑環(huán)基團(tuán)引入到酯基中有可能增強(qiáng)化合物的生物活性。到目前為止，已報(bào)到的三唑類殺菌及數(shù)以萬計(jì)，但目前對該類化合物的研究開發(fā)仍很活躍。

吡唑類化合物因其具有高效廣譜的生物活性被廣泛應(yīng)用在農(nóng)藥與醫(yī)藥領(lǐng)域。在現(xiàn)代新型農(nóng)藥的理念下，對吡唑類化合物的深入研究已成為當(dāng)今藥物設(shè)計(jì)合成研究的熱點(diǎn)之一。將三唑環(huán)骨架，以酯鍵為“橋”和吡唑環(huán)相連可增強(qiáng)化合物的生物活性。

和目前的吡唑酯類化合物相比，本發(fā)明基于三唑環(huán)在作為殺菌劑方面具有高效的殺菌活性和吡唑類化合物在農(nóng)藥及醫(yī)藥領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，創(chuàng)新性的把三唑環(huán)和吡唑環(huán)以酯鍵鏈接合成一系列新型含三唑環(huán)吡唑酯類衍生物，并對其作為殺菌劑方面的應(yīng)用進(jìn)行評價。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類新型含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物以及它們的制備方法與用途。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

1.一類新型含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物，其特征是它有如下通式：

結(jié)構(gòu)式中r1為:4-h、4-f、4-cl、4-ch3中的任意一種；

r2為:4-h、4-f、4-cl、4-ch3中的任意一種。

2.一種制備上述的含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物的方法，它由下列步驟組成：

步驟1：按摩爾比1:30-1:35將取代鹽酸苯肼和適量水混合，用無機(jī)堿調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)ph為7-8，加入同體積乙醇，攪拌使之完全溶解，再滴加乙酰乙酸乙酯，無氧環(huán)境下40-100℃攪拌反應(yīng)，tlc示蹤反應(yīng)，冷卻反應(yīng)液，再用冰浴冷卻，抽濾，干燥得到粗產(chǎn)品，乙醇重結(jié)晶得到固體1；

步驟2：按摩爾比1:3:7將溶于dmf的固體1滴加至預(yù)先冰浴30min的dmf和poc13中，恢復(fù)常溫?cái)嚢枰欢螘r間，至40-100℃攪拌反應(yīng)一段時間，冷卻至常溫后，倒入冰水中，用無機(jī)堿溶液調(diào)ph至7-9，抽濾并水洗3遍，烘干后得固體2；

步驟3：按摩爾比1:30:1.5將固體2與適量水混合，加熱至40-80℃，攪拌下滴加高錳酸鉀溶液，加熱攪拌一段時間，tlc示蹤反應(yīng)，冷卻，無機(jī)堿調(diào)節(jié)ph為堿性，抽濾獲得濾液，在濾液中加入濃鹽酸析出固體，抽濾干燥得到粗產(chǎn)品，使用無水乙醇重結(jié)晶進(jìn)行提純獲得固體3；

步驟4：按摩爾比2:3:30將取代苯肼和尿素溶于水，加入10-30％鹽酸，并在120-150℃回流一段時間后冷卻到60-90℃，加入甲酸和98％濃硫酸反應(yīng)一段時間，冷卻到室溫，過濾并用水洗至中性，烘干得到固體4。

步驟5：將固體3溶于有機(jī)溶劑，加入固體3的1.5-2.5倍量的三乙胺，室溫?cái)嚢瑁偌尤牍腆w3等摩爾量的dcc和dmap，攪拌使溶液澄清，隨后加入與固體3的等摩爾量的固體4，20-60℃下攪拌，tlc示蹤反應(yīng)，用氯仿沖稀，經(jīng)過鹽酸洗、水洗、氫氧化鈉洗、飽和氯化鈉洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，過柱，得到目標(biāo)產(chǎn)物，即含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物。

本發(fā)明的三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物對玉米小斑病菌和小麥赤霉病菌有明顯的抑制作用。因此本發(fā)明的三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物可做潛在的抗真菌藥物。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例一：

在三口瓶中，加入15ml水和3.6g(0.025mo1)苯肼鹽酸鹽，在室溫下攪拌均勻，緩慢加入適量的碳酸鈉調(diào)節(jié)體系ph在7-8，然后滴加溶于10ml乙醇的乙酰乙酸乙酯3.3ml(0.026mo1)，氮?dú)饷芊鈼l件下緩慢升溫至65℃攪拌，tlc跟蹤蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻，抽濾得到粗產(chǎn)品固體1。將dmf和poc13混合冰浴30min，然后將固體1溶于dmf滴加入上述混合液中，加熱至70-80℃反應(yīng)5h冷卻至常溫后，倒入冰水中，抽濾并水洗，烘干后得固體2。將固體2溶于水中，加熱到70～80℃，攪拌下滴加高錳酸鉀溶液，滴完后繼續(xù)加熱攪拌，反應(yīng)結(jié)束后冷卻，混合液中加入10％koh溶液，調(diào)節(jié)ph為堿性，抽濾，向?yàn)V液中加入濃鹽酸析出白色沉淀，抽濾干燥得到固體3。

0.2mol苯肼和0.25mol尿素溶于50ml水，加入64.8g30％鹽酸，并在135℃回流4h后冷卻到90℃，加入0.3mol甲酸和4.8g98％濃硫酸反應(yīng)6h，冷卻到室溫，過濾并用水洗至中性，烘干得到固體4。

取1mmo1固體3溶于5mldmf，加入2mmo1三乙胺，室溫?cái)嚢?0min，加入lmmo1dcc和lmmo1dmap，攪拌30min至溶液澄清，隨后加入溶于dmf的固體4(lmmo1)，室溫?cái)嚢?4h。用50ml氯仿沖稀，經(jīng)水洗、0.2mo1/l的鹽酸洗，水洗，2mo1/l的氫氧化鈉洗，水洗，飽和氯化鈉洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，快速柱層析(pe:ea＝8:1)得到白色粉末狀化合物，產(chǎn)率62％；m.p.138-140℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.00(s,1h),7.57–7.45(m,6h),7.07(d,j＝8.0hz,1h),6.97(t,j＝8.6hz,1h),6.92(dd,j＝8.7,4.5hz,1h),6.88(d,j＝8.2hz,1h),2.55(s,3h).ms(esi):380.8(c19h14cln5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h14cln5o2:c,60.09；h,3.72；n,18.44；found:c,60.12；h,3.79；n,18.33.

實(shí)施例二：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氟苯肼鹽酸鹽代替施例一中的苯肼鹽酸鹽。白色粉末,產(chǎn)率54％；m.p.166-168℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.95(s,1h),7.50(dd,j＝8.8,4.7hz,2h),7.28(s,1h),7.25(s,1h),7.22(t,j＝8.4hz,2h),6.94(dd,j＝14.2,7.5hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi):398.7(c19h13clfn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h13clfn5o2:c,57.37；h,3.29；n,17.61；found:c,57.41；h,3.31；n,17.73.

實(shí)施例三：

制備方法同實(shí)施例一。4-氯苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽。白色粉末,產(chǎn)率57％；m.p.1172-173℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.92(s,1h),7.51–7.47(m,4h),7.28(s,1h),7.25(s,1h),6.94(dd,j＝13.3,7.4hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi):415.2(c19h13cl2n5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h13cl2n5o2:c,55.09；h,3.16；n,16.91；found:c,55.13；h,3.24；n,17.05.

實(shí)施例四：

制備方法同實(shí)施例一。以4-甲基苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽。白色粉末,產(chǎn)率52％；m.p.154-156℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.42(s,1h),7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.42(d,j＝8.3hz,2h),7.31(t,j＝8.2hz,5h),2.61(s,3h),2.43(s,3h).ms(esi):394.8(c20h16cln5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc20h16cln5o2:c,61.00；h,4.10；n,17.78；found:c,61.05；h,4.18；n,17.68.

實(shí)施例五：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氟苯肼代替施例一中苯肼。白色粉末,產(chǎn)率47％；m.p.187-189℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ7.97(s,1h),7.53(d,j＝4.2hz,4h),7.28(s,1h),7.25(s,1h),6.98-6.91(m,3h),2.55(s,3h).ms(esi):398.7(c19h13clfn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h13clfn5o2:c,57.37；h,3.29；n,17.61；found:c,57.43；h,3.30；n,17.57.

實(shí)施例六：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氟苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-氟苯肼代替施例施例一苯肼。白色粉末,產(chǎn)率75％；m.p.69-71℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.02(s,1h),7.89(d,j＝8.2hz,2h),7.51(dd,j＝8.8,4.7hz,2h),7.35(d,j＝8.1hz,2h),7.19(t,j＝8.5hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi):416.7(c19h12clf2n5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h12clf2n5o2:c,54.89；h,2.91；n,16.84；found:c,54.96；h,3.10；n,16.77.

實(shí)施例七：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氯苯肼鹽酸鹽代替例一中苯肼鹽酸鹽，4-氟苯肼代替例一中苯肼,產(chǎn)率66％；m.p.253-254℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.65(dd,j＝8.2,4.0hz,2h),7.54–7.48(m,4h),7.21(t,j＝8.2hz,2h),2.61(s,3h).ms(esi):433.2(c19h12cl2fn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h12cl2fn5o2:c,52.80；h,2.80；n,16.20；found:c,52.87；h,2.77；n,16.28.

實(shí)施例八：

制備方法同實(shí)施例一。以以4-甲基苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-氟苯肼代替施例一中苯肼，白色粉末,產(chǎn)率71％；m.p.99-101℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.41(s,1h),7.65(dd,j＝8.1,4.5hz,2h),7.42(d,j＝7.6hz,2h),7.31(d,j＝7.9hz,2h),7.21(t,j＝8.0hz,2h),2.60(s,3h),2.43(s,3h).ms(esi):412.8(c20h15clfn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc20h15clfn5o2:c,58.33；h,3.67；n,17.01；found:c,58.41；h,3.59；n,17.09.

實(shí)施例九：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氟苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-氯苯肼代替施例一中苯肼,產(chǎn)率51％；m.p.84-86℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.46(s,1h),7.63(d,j＝8.6hz,2h),7.54(dd,j＝8.8,4.7hz,2h),7.50(d,j＝8.6hz,2h),7.24–7.20(m,2h),2.61(s,3h).ms(esi):433.2(c19h12cl2fn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h12cl2fn5o2:c,52.80；h,2.80；n,16.20；found:c,52.86；h,2.74；n,16.11.

實(shí)施例十：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氯苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-氯苯肼代替施例一中苯肼。白色粉末,產(chǎn)率56％；m.p.72-74℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.97(s,1h),7.50(d,j＝3.1hz,4h),7.46(dd,j＝8.9,4.7hz,2h),7.18(t,j＝8.4hz,2h),2.53(s,3h).ms(esi):449.6(c19h12cl3n5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc19h12cl3n5o2:c,50.86；h,2.70；n,15.61；found:c,50.91；h,2.64；n,15.58.實(shí)施例十一：

制備方法同實(shí)施例一。以4-甲基苯肼代替施例一中苯肼。白色粉末,產(chǎn)率72％；m.p.135-138℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.59–7.51(m,6h),7.49(t,j＝7.0hz,1h),7.31(d,j＝8.2hz,2h),2.62(s,3h),2.42(s,3h).ms(esi):394.8(c20h16cln5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc20h16cln5o2:c,61.00；h,4.10；n,17.78；found:c,61.08；h,4.15；n,17.84.

實(shí)施例十二：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氟苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-甲基苯肼代替施例一苯肼。白色粉末,產(chǎn)率46％；m.p.141-143℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.54(dd,j＝8.5,5.3hz,4h),7.31(d,j＝8.2hz,2h),7.22(t,j＝8.5hz,2h),2.61(s,3h),2.42(s,3h).ms(esi):412.8(c20h15clfn5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc20h15clfn5o2:c,58.33；h,3.67；n,17.01；found:c,58.42；h,3.74；n,17.07.

實(shí)施例十三：

制備方法同實(shí)施例一。以4-氯苯肼鹽酸鹽代替施例一中苯肼鹽酸鹽，4-甲基苯肼代替施例一中苯肼。白色粉末,產(chǎn)率49％；m.p.174-176℃；¹hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.42(s,1h),7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.51(d,j＝6.1hz,3h),7.49(s,1h),7.31(d,j＝8.2hz,2h),2.61(s,3h),2.42(s,3h).ms(esi):429.2(c20h15cl2n5o2,[m+h]⁺).anal.calcdforc20h15cl2n5o2:c,56.09；h,3.53；n,16.35；found:c,56.13；h,3.61；n,16.44.

實(shí)施例十四:含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物離體抗真菌活性研究

實(shí)驗(yàn)采用菌絲生長法對合成的含三唑環(huán)骨架的吡唑酯類衍生物進(jìn)行抗植物病原真菌活性的測定。

在無菌條件下，將合成的目標(biāo)化合物溶于dmso中，稀釋為100mg/ml作為儲備液，取配置的供試液1ml于滅菌的10ml試管中，加入9ml50℃左右的pda培養(yǎng)基，混勻后倒入到培養(yǎng)皿中。另用1mldmso作為空白對照，以啶菌酰胺作為陽性對照。

選取處于同一生長勢的菌落圈，用打孔器制得菌餅，將菌餅倒置于上述加藥培養(yǎng)基的培養(yǎng)基上，每個重復(fù)3次。在25±l℃條件下于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3天后用十字交叉法測量菌落直徑，取平均值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算抑制率。

抑制率＝[(對照菌落直徑處理菌落直徑)/對照菌落直徑]×100％

表1本發(fā)明所列吡唑三唑類衍生物對植物病原真茵:玉米小斑病菌的抑制ec50值(mg/l)