2?硫代喹唑啉二酮衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領域，具體而言是涉及2?硫代喹唑啉二酮衍生物和它們用于藥物的用途。確切而言，本發(fā)明涉及的化合物具有抑制聚(ADP?核糖)聚合酶活性的用途，該酶也稱聚(ADP?核糖)合成酶和聚ADP?核糖基轉(zhuǎn)移酶，普遍被稱為PARP。本發(fā)明化合物具有如下特征：式(1)化合物，A和D一起表示可被取代的稠合芳族環(huán)；X可以是NRX或CRXRY；如果X是NRX，則n是1或2；如果X是CRXRY，則n是1；RX可選自H、可被取代的C1?20烴基、C5?20芳基、C3?20雜環(huán)基、酰胺基、硫代酰胺基、酯、?；约盎酋；籖Y取自H，羥基，氨基等；或者RX和RY可以一起構(gòu)成螺?C3?7環(huán)烴基或雜環(huán)基；R2和R3都是H，或是當X＝CRXRY時，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可以構(gòu)成可被取代的稠和芳香環(huán)；R1選自H或鹵素。
【專利說明】
2-硫代喧性嘟二酬衍生物
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領域，具體而言是設及2-硫代哇挫嘟二酬衍生物和它們用于 藥物的用途。
【背景技術】
[0002] 本發(fā)明設及的化合物有抑制聚(ADP-核糖)聚合酶活性的用途，該酶也稱聚(ADP- 核糖)合成酶和聚ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶，普遍被稱為PARP。
[0003] 該酶是存在于多數(shù)真核細胞內(nèi)、具有多聚腺巧酸二憐酸核糖基(PAR)催化活性的 蛋白酶，參與單鏈DNA損傷的感知與修復。該酶家族約有18種亞型，根據(jù)同源性程度的不同， 將其分為 3 大組:PARP-1 組，包括 PARP-1 ~PARP-4，PARP-6，PARP-8 和 PARP-16; tankyrase 組， 包括PARP-fe~PARP-5C;第III組，包括PARP-7，PARP-9~PARP-15(Nguewa PA，Riertes MA， 化lladares B，et al.Prog Bio地ys Mol Biol ,2005,88(1):143-172)。
[0004] PARP-1是最先被發(fā)現(xiàn)的，在所有亞型中所占比例最大，發(fā)揮著90% W上的功能，包 括介導DNA修復、通過消耗細胞能量池導致細胞機能障礙與壞死、促進炎癥基因轉(zhuǎn)錄等，設 及到多種疾病的治療，包括中風、神經(jīng)退行性疾病、屯、肌缺血、癌癥、炎癥和糖尿病等 (Peralta-Leal A，Rodriguez-Vargas JM，Aguilar-Quesada R，et al.Free Radic Biol Med，2009,47(l):13-26)。
[0005] PARP-1主要由Ξ個區(qū)域組成：（1)約46kDa的N端DNA結(jié)合區(qū)，包括細胞調(diào)亡蛋白酶 切割位點（caspase-3cleavage site)、3個鋒指結(jié)構(gòu)W及核定位信號區(qū)（nuclear localization si即al)，運個區(qū)域通過化I、Zn II結(jié)構(gòu)參與識別DNA的損傷W及介導PARP- 1與DNA的結(jié)合，Zn III則調(diào)節(jié)該區(qū)的活性；（2)-個2化化的中屯、自修飾區(qū)域，包含15個高度 保守的谷氨酸殘基，被認為是自身聚腺巧二憐酸核糖化的祀位；（3)54kDa的C端催化區(qū)，包 括形成煙酷胺腺嚷嶺二核巧酸(NAD+)的結(jié)合位點和合成聚腺巧二憐酸核糖(PAR)的催化位 點（Langelier MF'Servent KM'Rogers EE，et al.J BioQiem，2008,283(7):4105-4114)。
[0006] PARP之所W成為腫瘤治療中的熱口位點之一，其理論依據(jù)是"合成致死"機制，即 兩個基因之間若存在"合成致死"作用，當其中任何一個基因單獨受到抑制或發(fā)生突變時， 細胞的生存不受影響，但同時抑制兩個基因?qū)е录毎a(chǎn)生致死效應。乳腺癌、卵巢癌等患 者的PARP與抑癌基因 BRCA-1/2就是一對合成致死基因。抑制PARP的活性，可導致BRCA1/2突 變的腫瘤細胞產(chǎn)生"合成致死"的效應。已有研究表明在DNA損傷后的同源重組修復中，缺乏 一些較為關鍵的基因蛋白（包括BRCA1、BRCA2、XRCC1、XRCC2、RAD51、NBS1、FANCA、FANCC、 CHK1、MRE11、RAD50、ATM、ATR等）的細胞對PARP抑制劑高度敏感，在PARP抑制劑的存在下無 法對損傷的DNA片段進行有效的修復化ummar S，化enA，Pa;rchment RE.et al.BMC Med， 2012，10,25)。
[0007] 雖然根據(jù)很多研究表明PARP抑制劑單藥對于同源重組修復化R)缺陷的腫瘤細胞 具有合成致死作用，如化yant W及化rmer等的研究發(fā)現(xiàn)PARP抑制劑單藥對于BRCA巧郵RCA2 突變的乳腺癌及卵巢癌細胞有明顯的抑制作用（B巧ant皿，Schultz N，Thomas HD，et al.Pfe1:ure，2005,434(7035):9l3-9l7;F'a;rme;rH，MccabeN，LordCJ，etal.Na1:ure，2005， 434(7035): 917-921.)，但是，更多的研究的重點則放在將PARP抑制劑與DNA損傷藥物或放 療聯(lián)合應用上，通過抑制由PARP介導的DNA的損傷修復，從而達到增強治療效果，并通過減 少用藥(或放療）劑量W達到降低毒副作用的效果(Damal G，DincalctI M.化r J Cancer, 2007,43(12)：1791-1801；Peralta LA,Rodriguez MI,Linares JL,et al.Free Radic Biol Med，2009,47(l):13-26;Chalmers AJ.化 Med Bull ,2009,89(1):23-40;Underhill C，Toulmonde M，Bonnefol H.Ann Oncol,2011,22(2):268-279)0
[000引奧拉帕尼(AZD-2281)是FDA批準的第一個PARP-1抑制劑，主要用于晚期卵巢癌患 者。該藥于2014年12月批準上市。
[0009] 本發(fā)明化合物可用于抑制PARP的活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的第一方面提供式(1)的化合物：
[0011]
[0012] 其中；
[0013] A和D-起表示可被取代的稠合芳族環(huán)；
[0014] X可 W 是 NRX或 CRXrY;
[001引如果X是NRX，則η是域2，如果X是CRXrY，則η是1;
[0016] RX可選自Η，可被取代的Cl-20控基、C日-20芳基、C3-2日雜環(huán)基、酷胺基、硫代酷胺基、醋、 酷基W及橫酷基；
[0017] rY取自H，徑基，氨基等；
[0018]或者rX和護可W-起構(gòu)成螺-C3-7環(huán)控基或雜環(huán)基；
[0019] R2和R3都是H，或是當X = CRXrY時，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可W構(gòu) 成可被取代的稠和芳香環(huán)；
[0020] 化選自Η或面素。
[0021] 進一步的優(yōu)選：
[0022] 下列優(yōu)選能夠應用于本發(fā)明的任一方面，只要適用的話。
[0023] 本發(fā)明中，由-A-D-代表的稠和芳環(huán)優(yōu)選為僅由碳環(huán)原子構(gòu)成，因而可W是苯、糞， 更優(yōu)選為苯。如上所述，運些環(huán)可W被取代，但是在有些實施方案中優(yōu)選為連接的原子本身 連接于中屯、環(huán)幾基的間位。因而，如果稠和芳環(huán)是苯環(huán)，優(yōu)選的取代位置如下結(jié)構(gòu)式中的* 所示：
[0024]
[0025] 它通常被認為2-硫代哇挫嘟二酬部分的6-位。
[0026] 如果由-A-D-代表的稠和芳環(huán)優(yōu)選為苯環(huán)，其取代的優(yōu)選為連接的原子為H、C1、F， 更優(yōu)選為F。
[0027] 化優(yōu)選為山(：1、。，更優(yōu)選為尸。
[002引優(yōu)選地，R2和化都是氨。
[00巧]當n = 2時，X是NRX，rX優(yōu)選地選自下列基團：H;可被取代的Ci-20控基；可被取代的 C5-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被取代的酷胺基； 可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0030] 當n = l時，X可 W是 NRX或 CRXrY。
[0031] 在其中X是NRX的實施方式中，RX優(yōu)選自下列基團：Η;可被取代的Ci-20控基;可被取 代的Cs-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被取代的酷胺 基;可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0032] 在其中X是CRXrY的實施方式中，RY優(yōu)選為氨;RX優(yōu)選自下列基團：可被取代的。-20控 基;可被取代的C5-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被 取代的酷胺基;可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0033] 本發(fā)明第二方面提供藥物組合物，包含第一方面化合物和藥學上可接受的載體或 稀釋劑。
[0034] 包括運些取代基熟知的離子、鹽、溶劑合物和被保護形式。例如，對簇酸(-C00H)的 稱謂還包括陰離子(簇酸根)形式(-cocn、其鹽或溶劑合物W及其常規(guī)被保護形式。類似 地，對氨基的稱謂包括其質(zhì)子化物(-N+HRiR2)、氨基的鹽或溶劑合物W及氨基的常規(guī)保護形 式。類似地，對徑基的稱謂包括其陰離子形式(-(Π 、其鹽或溶劑形式W及徑基的常規(guī)被保 護形式。
[0035] 異構(gòu)體、鹽、溶劑合物和被保護形式。
[0036] 某些化合物可W存在一種或多種特定的幾何、旋光、對映、非對映、差向異構(gòu)、立體 異構(gòu)、互變異構(gòu)、構(gòu)象或端基異構(gòu)型，包括但不限于順式kis)與反式(trans)型;E-與Z-型； c-、t-與r-型；內(nèi)-與外-型；R-、S-與內(nèi)消旋-型;〇-與心型；d-與1-型；（+ )與（-)型；酬基、締 醇與締醇化物-型;順(syn)-與反(anti)-型;順錯-與反錯-型;α-與β-型；軸向-與平伏-型； 船-、椅-、扭曲-、信封-與半椅-型;及其組合，一下統(tǒng)稱為"異構(gòu)體"（或"異構(gòu)型"）。
[0037] 如果化合物是結(jié)晶的形式，則它可W存在多種不同的多晶型。
[0038] 注意的是除了下文關于互變異構(gòu)體的討論，特別要從本文所用的術語"異構(gòu)體"中 排除在外的是結(jié)構(gòu)(或構(gòu)造)異構(gòu)體。例如對甲氧基-0C曲的稱謂不被解釋為對其結(jié)構(gòu)異構(gòu) 體即徑甲基-C此0Η的稱謂。但是，對一類結(jié)構(gòu)的稱謂也可W包括屬于運種類別的結(jié)構(gòu)異構(gòu) 體。例如，甲氧基苯基包括鄰-、間-、和對-甲氧基苯基;丙基包括正丙基和異丙基。
[0039] 上述的排除不包括互變異構(gòu)型，例如酬-、締醇-和締醇化物-形式。例如下列的互 變異構(gòu)對：酬/締醇、亞胺/締胺、酷胺/亞氨基醇、脈/脈、亞硝基/朽、硫酬/締硫醇、N-亞硝 基/徑基偶氮和硝基/酸式硝基。
[0040] 與本發(fā)明特別相關的是下列互變異構(gòu)對：
[0041]
[0042] 值得注意的是：在術語"異構(gòu)體"中特別包括具有一個或多個同位素取代的化合 物。例如，Η可W是任意同位素形式，包括1山皆(0)、化(1')。類似地，(：可^是任意同位素形式， 包括1?、1?、1化;0包括is〇、is〇;等等。
[0043] 除非有另有指定，對特定化合物的稱謂包括全部運樣的異構(gòu)型，包括其(完全或部 分)外消旋和其它混合物。制備和分離運類異構(gòu)體的方法是本領域中已知的，或者用已知方 式調(diào)整本文所教導的方法或已知方法而容易獲得的。
[0044] 除非有另有指定，對特定化合物的稱謂也包括其離子、鹽、溶劑合物和被保護的形 式W及它的不同多晶型。
[0045] 本發(fā)明的第Ξ方面提供用在人或動物體治療方法中的第一方面的化合物。
[0046] 本發(fā)明的第四方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在制備用于抑制PARP 活性的藥物中的用途。
[0047] 本發(fā)明的其他方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在藥物制備中的用途， 該藥物治療:血管疾病;脈毒性休克;缺血損傷；神經(jīng)毒性；出血性休克；病毒感染;或著因 PARP活性抑制而改善的疾病。
[0048] 本發(fā)明的另一方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在藥物制備中的用途， 該藥物用于癌癥療法的輔助手段或者用于強化電離放射或化學治療劑對腫瘤細胞的治療。
[0049] 本發(fā)明的其他方面提供因 PARP抑制而改善的疾病的治療，包括對需要治療的對象 給與治療有效量的如第一方面所定義的化合物，優(yōu)選藥物組合物的形式和癌癥的治療，包 括對需要治療的對象給予同時或先后與電離放射或化學治療劑組合的治療有效量的如第 一方面所定義的化合物、優(yōu)選藥物組合物形式。
[0050] 在本發(fā)明的其他方面中，化合物可W用于制備用于治療癌癥的藥物，該癌癥是同 源重組HR依賴性的DNA DSB修復活性缺陷的，或者用于治療癌癥患者，該癌癥是皿依賴性的 DNA DSB修復活性缺陷的，包括對所述患者給與治療有效量的化合物。
[0化1 ] 皿依賴性DNA DSB修復途徑經(jīng)由同源機理修復DNA的雙鏈斷鏈(DSB)，W生成連續(xù) 的DNA螺旋化.K.趾anna; S. P Jackson.化t. Genet. 2001，27 (3): 247-254)。皿依賴性DNA DSB修復途徑的組分包括但不限于W下幾種:ATM(NM_000051)、RAD51(NM_002875)、RAD51L1 (NM_002877)、RAD51C(NM_002876)、RAD51L3(NM_002878)、DMC 1(NM_007068)、XRCC2(NM_ 005431)、XRCC3(M1_005432)、RAD52(M1_002879)、RAD54L(應_003579)、RAD54B(應_ 012415)、BRCA 1(NM_007295)、BRCA2(NM_000059)、RAD50(NM_005732)、MRE11A(NM_005590) 和NBS1(NM_002485)。其它相關的參與皿依賴性DM DSB修復途徑中的蛋白質(zhì)包括如EMSY調(diào) 節(jié)因子等化U曲es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell,2003,115:523-535)。皿的 詳細組分可見于相關文獻中（Wood 畑，Mitchell M，Sgou;ros J，Lind址 1 T.Science,2001， 291:1284-1289)。
[0052] HR依賴性DM DSB修復缺陷的癌癥可W包含或者由一種或多種運樣的癌細胞組 成，它們相對于正常細胞而言通過該途徑修復DNA DSB的能力降低或者取消，即HR依賴性 DNA DSB修復途徑的活性可能在一種或多種癌細胞中降低或者取消。
[0化3] HR依賴性DNA DSB修復途徑的一種或多種組分的活性可能在患有HR依賴性DNA DSB修復缺的個體的一種或多種癌細胞中被消除。皿依賴性DNA DSB修復途徑的組分在本領 域中被充分表征，例如參見文獻（Wood RD，Mitchell M，Sgouros J，LindahlT.Science, 2001，291:1284-1289)所述W及包括上文索列舉的組分。
[0054] 在有些優(yōu)選的方案中，癌細胞可能具有BRCA巧日/或BRCA2缺陷的表型，即BRCA巧口/ 或BRCA2活性在癌細胞中被降低或消除。具有運種表型的癌細胞可能是BRCA1和/或BRCA2缺 陷的，即BRCA1和/或BRCA2的表達/或活性可能在該癌細胞中被降低或消除，例如可W借助 編碼性核酸的突變或多態(tài)性，或者借助編碼調(diào)節(jié)因子的基因的擴增、突變或多態(tài)性，例如編 碼服CA2調(diào)節(jié)因子的EMSY基因化U曲es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell，2003， 115:523-535)。
[0055] BRCAl和BRCA2是已知的腫瘤抑制基因，它們的野生型等位基因經(jīng)常在雜合載體腫 瘤中喪失（Jasin M.，0ncogene，2002,21(58):8981-8993;Tutt A.，Ashwo;rth A.Trends Mol Med. ,2002,8(12) :571-576)eBRCAl和/或BRCA2突變與乳腺癌的關聯(lián)在本領域中已經(jīng) 被充分認識(Radice P.J.E邱 Clin Cancer 1?63.，2002,21(3):9-12)。編碼服〔42結(jié)合因子 的EMSY基因的擴增抑制也與乳腺癌和卵巢癌有關。
[0056] BRCA1和/或BRCA2中突變的載體也處于卵巢、前列腺和膜腺癌癥的升高風險中。
[0057] 在有些優(yōu)選的實施方案中，個體就BRCA1和/或BRCA2或其調(diào)節(jié)劑的一種或多種變 異，如突變和多態(tài)性而言是雜合的。BRCA1和BRCA2變異的檢測在本領域是熟知的 (Neuhausen S.L.，Ostrander E.A.Genet.Test,1992,1：75-83；Chappnis P.O.，F(xiàn)oulkes W.D.Cancer Treat Res.,2002,107:29-59;Janatova M.Neoplasm,2003,50(4):246-250: 化ncarkovaN. CeskaGynekol. 2003，6( 1): 11-16)。服CA2結(jié)合因子EMSY擴增的測定描述可見 于 Hu 曲 es-Davies 的文章中（Hu 曲 es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell，2003， 115:523-535)。
[0058] 與癌癥有關的突變和多態(tài)性可W通過檢測變異核酸序列的存在而在核酸水平上 檢測，或者通過檢測變異(即突變或等位基因變異)多膚的存在而在蛋白水平上檢測。
【附圖說明】
[0059] 圖1~圖11顯示的是使用Alarm blue法測定部分受試樣品及陽性對照AZD2281在 MDA-MB-436腫瘤細胞中的藥物濃度-細胞活力圖，用來測定受試樣品對腫瘤細胞的半抑制 濃度，即IC50。
【具體實施方式】
[0060] 在下文給出的合成路徑中，為方便起見，-A-D-稠合環(huán)被顯示為苯環(huán)。使用適當?shù)?替代原料，利用下文所述的方法可W合成其中-A-D-稠合環(huán)不是苯環(huán)的化合物。
[0061] 本發(fā)明化合物可W運樣合成:使用式1化合物(見下結(jié)構(gòu)式）：
[0062]
[0063] 其中化如前文所定義，與式2化合物(見下結(jié)構(gòu)式)反應：
[0064]
[0065] 其中n、R2、R3和X如前文所定義，反應可W運樣進行:在偶聯(lián)試劑系統(tǒng)存在下，例如 0-苯并Ξ氮挫-N，N，N/，滬-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)、2-(7-偶氮苯并Ξ氮挫)-四甲基脈 六氣憐酸醋化ATU)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽化DCIVI-^基苯并Ξ 氮挫化0BT)，在堿（例如N，N-二異丙基乙胺(DIEA))存在下，在溶劑如N，N-二甲基甲酯胺 (DM巧或二氯甲燒(DCM)中，在(TC至所用溶劑沸點的溫度范圍內(nèi)。
[0066] -般檢測方法：
[0067] 使用Agilent 1260型冊LC-MS(Agilent Dorshell 120EC-C18,2.7皿，4.6mmX 50mm;Agilent Qua化upole MS;VWD范圍190-400nm)進行分析。流動相A(含0.1 %甲酸的水） 和B(乙臘)按梯度使用：5%B達1分鐘，10分鐘后升至100%B，保持5分鐘，流速Iml/min，在 254nm下檢測。
[0068] 1H和/或"C-NMR利用化址er Ascend核磁共振譜儀分別在400MHz和75MHz下記錄。 化學位移按百萬分之分數(shù)(ppm)、相對于內(nèi)標四甲基硅烷(TMS)的δ報告。除非另有規(guī)定，全 部樣品均溶于DMSO-d6或CDC13中測定。
[0069] 關鍵中間體的合成：
[0070] 2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)-苯甲酸(A)
[0071]
[0072] 將2-氨基-5-氣苯甲酸甲醋（10.0邑，59.12111111〇1)，2-氣-5-甲酯基苯甲臘（22.0邑， 147.80111111〇1)，無水醋酸（10.01111，174.85111111〇1)加入到3001111二氯甲燒中，加回流裝置，攬拌， 加熱至回流，反應2~3小時。冷卻至室溫后，再將反應液置于冰浴中，待溫度降至(TCW下， 在劇烈攬拌下分批加入棚氨化鋼(6.7g，177.36mmol)，加完后在室溫下反應18小時。向反應 液中加入300ml飽和氯化錠水溶液，分液，水相用二氯甲燒萃取2遍（150ml X 2)，合并有機 相，用大量飽和氯化鋼水溶液洗涂，無水硫酸鋼干燥，旋干有機相，真空干燥，得2-( 3-臘基- 4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸甲醋（15.Og，產(chǎn)率84.0%)，為黃色固體(純度為99.0%)，m/z(M+ 1)+303,無需進一步純化即可直接使用。
[0073] 將2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸甲醋（15.0g，49.65mmol)溶于500ml異丙 醇中，在室溫攬拌下，緩慢加入200ml氨氧化裡（12.5g，297.90mmol)水溶液，溶液由黃色變 為草綠色。由LC-MS監(jiān)測反應，反應2小時后反應完全，加入大量水(大約1L)并用1N HC1調(diào)節(jié) 溶液PH，有大量淺黃色固體析出，繼續(xù)加入1N HC1直至沒有固體析出后，過濾，濾餅用大量 水潤洗，再用少量乙醇潤洗，真空干燥，得淺黃色2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸固體 12.2g(產(chǎn)率85.3%，純度96.4% )，m/z(M+l )+289，無需進一步純化即可直接使用。
[0074] 將2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸（10.0 g，34.71mmol)加入150ml氯化亞諷 溶液中，加熱回流3小時。冷卻至室溫，旋干氯化亞諷，并用二氯甲燒帶旋3次（100ml X3)，加 入200ml丙酬溶解。將硫氯酸錠(3.1肖，40.73111111〇1)溶于1001111丙酬中。將硫氯酸錠丙酬溶液 緩慢滴加入上述溶液中，溶液顏色由血紅色逐漸變成黃色，并有大量黃色固體析出。反應液 在室溫下繼續(xù)攬拌18小時后，過濾，濾餅先用大量水潤洗，后用少量丙酬潤洗，真空干燥得 2-氣-5-( 6-氣-4氧代-2-硫-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)苯甲臘(8.4g，產(chǎn)率73.5 % )， 黃色固體粉末，m/z(M+l)+330,無需進一步純化即可直接使用。
[00巧]將2-氣-5-( 6-氣-4氧代-2-硫-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基）苯甲臘（7 . Og， 21.26mmol)分批加入500ml氨氧化鋼(8.5g，212.56mmol)水溶液中，緩慢升溫至90°C，反應 大約2小時，用LC-MS檢測，無原料后冷去至室溫，用1N肥1溶液調(diào)節(jié)PH，由大量固體析出，繼 續(xù)加1N HC1溶液直至無固體析出為止，過濾，濾餅用大量水潤洗，再用少量乙醇潤洗，真空 干燥，得淺黃色2-氣-5-(6-氣-4氧代-2-硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基）苯甲酸固體 (6.8g，產(chǎn)率92 %，純度為96.0 % )，m/z (M+1) +349，無需進一步純化即可直接使用。
[0076] 1,4-二疊氮燒-1-基(2-四氨巧喃）甲酬(B)
[0077]
[007引將2-四氨巧喃甲酸（1.0g，8.61mmol)溶于10ml氯化亞諷中，加熱回流2小時。旋干 氯化亞諷，并用二氯甲燒帶2次（10ml X 2)，用10ml二氯甲燒溶解。將N-B0C高贓嗦（1.72g， 8.eimmol)溶于10ml二氯甲燒中，緩慢滴加入上面溶液中，室溫下攬拌2小時，旋干二氯甲 燒，真空干燥，得4-(四氨巧喃-2-甲酯基）-1,4-二疊氮燒-1-基-甲酸叔下醋（1.58g，產(chǎn)率 92.5 % )，棟色油狀液體，無需進一步純化即可直接使用。
[0079] 將4-(四氨巧喃-2-甲酯基)-1,4-二疊氮燒-1-基-甲酸叔下醋（1. Og，5.04mmol)溶 于20ml無水甲醇中，在劇烈攬拌下通入干燥HC1氣體，持續(xù)通入1小時后，溶液中由大量白色 固體析出，停止通氣。再室溫攬拌1小時后，旋干反應液。加入20ml飽和碳酸鋼水溶液，用二 氯甲燒萃取3遍(30ml X3)，合并有機相，先后用大量飽和碳酸鋼水溶液、氯化鋼飽和水溶液 潤洗，有機相用無水Na2S〇4干燥，旋干，真空干燥，得1,4-二疊氮燒-1-基-(2-四氨巧喃）甲酬 棟色油狀液體(〇.95g，產(chǎn)率95.0%)，m/z(M+lΓl99，無需進一步純化即可直接使用。其它胺 化合物用類似的方法合成或直接購買。
[0080] 2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基)苯甲酸(C)和3-(4-氧 代-2-硫代-3,4-二氨-哇挫嘟-1-基-甲基)苯甲酸化）的合成參考2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2- 硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)-苯甲酸(A)的合成，只要將原料2-氨基-5-氣苯甲酸甲 醋/2-氣-5-甲酯基苯甲臘分別換成2-氨基苯甲酸甲醋/2-氣-5-甲酯基苯甲臘、2-氨基苯甲 酸甲醋/5-甲酯基苯甲臘即可。
[0081]
[0082] 實施例1:
[0083] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇 挫嘟-4-酬（1)的合成
[0084]
[00化]將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (2.0g，5.74mmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬（1.3g，7.13mmol)、0-苯并ミ氮挫-N，N，N'，N'- 四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(2.8g，8.72mmol)和N，N-二異丙基乙胺(2.2g，17.05mmol)加入 到二甲基甲酯胺（20ml)中，攬拌18小時。加入水（100ml )，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應液 PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用大量水，少量乙 醇潤洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2， 3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（1)白色固體（2.74g，93%);iH-NMR(400M，DMS0-d6):12.99(s， lH)，7.78(d，lH，J = 細z)，7.64(t，lH，J = 細z)，7.46(s，lH)，7.34-7.29(m，3H)，5.79(s， 2H) ,3.57-2.89(m，SH)，1.75-1.52(m，8H)，1.26-1.24(m，lH);m/z(M+l)+513(99%純度）。
[0086]按照類似于上文所述的方式合成下列化合物，但是要使用適當?shù)脑洗嫔衔闹?帶不同取代基的原料。所合成的化合物列在了下面。
[0089]
[0090] 實施例2:
[0091] i-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代- 2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(8)的合成
[0092]
[0093] 將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (5.0g，14.36mmol)、環(huán)戊基-[1，4]二氮庚燒-1-基-甲酬(4.2g，21.40mmol)、0-苯并Ξ氮挫- N，N，N'，N'-四甲基脈四氣棚酸醋（TBTU)(6.9g，21.50mmol)和N，N-二異丙基乙胺（5.6g， 43.41mmol)加入到二甲基甲酯胺（30ml)中，攬拌18小時。加入水（100ml)，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用 大量水，少量乙醇潤洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾 基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(8)白色固體(6.73g，89 % );
[0094] lH-NMR(400M，DMS0-d6):12.97(s，lH)，7.78(d，lH，J = 細z)，7.64(t，lH，J = 細z)， 7.46-7.23(m，4H)，5.76(s，2H)，3.63-3.14(m，9H)，2.89-2.85(m，lH)，1.76-1.52(m，9H);m/ z(M+l)+527(98% 純度）。
[00%]所合成的化合物列在了下面。
[009引實施例3:
[0099] 6-氣-1-{4-氣-3-[4-(R比咯燒-1-幾基)-贓晚-1-幾基]-芐基}-2-硫代-2，3-二氨- 1H-哇挫嘟-4-酬（15)的合成
[0100]
[0101] 將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (5. Og，14.36mmol)、贓晚-4-基-化咯燒-1-基-甲酬(3.9g，21.40mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N， Ν'，N'-四甲基脈四氣棚酸醋（TBTU)(6.9g，21.50mmol)和N，N-二異丙基乙胺（5.6g， 43."mmol)加入到二甲基甲酯胺（30ml)中，攬拌18小時。加入水（100ml)，在攬拌下，用IN HC1調(diào)節(jié)反應液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用 大量水，少量乙醇潤洗，真空干燥，得到6-氣氣-3-[4-(郵咯燒-1-幾基)-贓晚-1-幾 基]-芐基} -2-硫代-2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（15)白色固體(7.36g，96 % )，m/z (M+1) +513 (99%純度）。
[0102] 實施例4:
[0103] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟- 4-酬（16)的合成
[0104]
[01 05] 將2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(C) (2.5g， 7.57mmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬（1.7g，9.33mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'，N'-四甲基 脈四氣棚酸醋（TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺（3.0g，23.26mmol)加入到二 甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時。加入水(60ml)，在攬拌下，用1N肥1調(diào)節(jié)反應液PH，由大 量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用大量水，少量乙醇潤洗， 真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇 挫嘟-4-酬（16)白色固體(3.22g，86%)，m/z(M+l)+495(90%純度）。
[0106] 所合成的化合物列在了下面。
[0107]
[010 引
[0110] 實施例5:
[0111] 1-[ 3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2，3-二 氨-1H-哇挫嘟-4-酬(23)的合成
[0112]
[0113] 將2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(0(2.5邑， 7.57mmol)、環(huán)戊基-[l，4]二氮庚燒-1-基-甲酬（1.8g，9.17mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'， N/-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺(3.0g，23.26mmol) 加入到二甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時。加入水(60ml)，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應 液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用大量水，少量 乙醇潤洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基）-4-氣-節(jié) 基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（23)白色固體(3.43g，89%)，m/z(M+l)+509(90% 純度）。
[0114]所合成的化合物列在了下面。
[011引 實施例6:
[0119] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟- 4-酬(30)的合成
[0120]
[01別]將3-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸（D) (5. Og， 16. OOmmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬(3.5g，19.20mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'，N'-四甲 基脈四氣棚酸醋(TBTU)(7.7g，24.00mmol)和N，N-二異丙基乙胺(6.2g，48.00mmol)加入到 二甲基甲酯胺(30ml)中，攬拌18小時。加入水(60ml )，在攬拌下，用1N肥1調(diào)節(jié)反應液PH，由 大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用大量水，少量乙醇潤 洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫代-2， 3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(37)白色固體(6.2g，81%)，m/z(M+l)+477(90%純度）。
[0122] 所合成的化合物列在了下面。
[0123]
[0124]
[0125] 實施例7:
[01%] i-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫代-2,3-二氨- 1H-哇挫嘟-4-酬(37)的合成
[0127]
[012引將3-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸（D)(2.4g， 7.68mmol)、環(huán)戊基-[l，4]二氮庚燒-1-基-甲酬（1.8g，9.17mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'， N'-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺(3.0g，23.26mmol) 加入到二甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時。加入水(60ml )，在攬拌下，用IN HC1調(diào)節(jié)反應 液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無固體析出為止。過濾，濾餅先后用大量水，少量 乙醇潤洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫 代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（37)白色固體(2.90g，77%)，m/z(M+l)+491(90%純度）。 [0129]所合成的化合物列在了下面。
[0132] 實施例8:
[0133] 為了評估化合物的抑制作用，利用下面測定法測定IC5〇(半抑制濃度)值。
[0134] 使用Alarm blue法測定受試樣品及陽性對照AZD2281在MDA-MB-436腫瘤細胞中的 IC50，每個化合物均設置9個濃度梯度(包括0濃度），2復孔。
[01巧]104436細胞在161完全培養(yǎng)基(含有10%的胎牛血清，10011-1111/1青霉素，1004邑· ml/i鏈霉素）中，在37°C，5%C〇2，95%空氣培養(yǎng)條件下傳2~3代。
[0136] 實驗第0天(DO)，將處于對數(shù)生長期細胞，用0.25%的膜蛋白酶消化，制備成單細 胞懸液并計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為1 X 1〇4細胞/mL，每孔10化L加入96孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，96孔板 置于相應條件解箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。
[0137] 陽性對照AZD2281配制:稱取適量AZD2281，加入適量DMS0,滿旋振蕩使藥物完全溶 解，分裝后放入-80°C冰箱保存。
[0138] 受試品配制：稱取適量受試品，加入適量DMS0，滿旋振蕩使藥物完全溶解，分裝后 放入-80°C冰箱保存。
[0139] 鋪板次日（D1)，每孔加入1(Κ)化含系列濃度受試化合物的完全培養(yǎng)基或?qū)φ盏耐?全培養(yǎng)液;D4時，更換含有相應藥物濃度的新鮮培養(yǎng)液。
[0140] D7時，采用Alarmar blue方法檢測各孔巧光強度，并計算IC50。
[0141] 1C日日由W下公式計算：
[0142]
[0143] Min、Max和Slope分別表示最小值、最大值和斜率。
[0144] 經(jīng)測定，部分化合物的IC5〇(nM)如下表：
[0145]
【主權項】
1. 式(1)化合物及其異構(gòu)體、鹽、溶劑合物、化學保護形式和前體藥物： 其中：A和D-起表示可被取代的稠合芳族環(huán)； X可 W 是NRX或 CRXrY; 如果X是NRX，則η是1或2，如果X是CRXrY，則η是1; RX可選自Η，可被取代的Cl-20控基、C5-20芳基、C3-20雜環(huán)基、酷胺基、硫代酷胺基、醋、酷基 W及橫酷基； RY取自Η，徑基，氨基等;或者rX和rY可W-起構(gòu)成螺-C3-7環(huán)控基或雜環(huán)基； R2和R3都是H，或是當X = CRXrY時，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可W構(gòu)成可 被取代的稠和芳香環(huán)； 化選自Η或面素。2. 根據(jù)權利要求1的化合物，其中由-A-D-代表的稠合芳族環(huán)僅由可取代的碳環(huán)原子組 成。3. 根據(jù)權利要求2的化合物，其中由-A-D-代表的稠合芳族環(huán)是苯。4. 根據(jù)權利要求1至3任意一項的化合物，其中化選自H、C1和F。5. 根據(jù)權利要求1至4任意一項的化合物，其中R2和R3都是氨。6. 根據(jù)權利要求1至5任意一項的化合物，其中n = 2，X是NRX，Rx可選自H、可選被取代的 Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、可選被取 代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。7. 根據(jù)權利要求1至5任意一項的化合物，其中n = l，X是NRX，Rx可選自H、可選被取代的 Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、可選被取 代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。8. 根據(jù)權利要求1至5任意一項的化合物，其中n=l，X是CRXrY，rY是氨，Rx可選自H、可選 被取代的Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、 可選被取代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。9. 藥物組合物，包含根據(jù)權利要求1至8任意一項的化合物和藥學上可接受的載體或者 稀釋劑。10. 用在人或動物體治療方法中的根據(jù)權利要求1至8任意一項的化合物。11. 權利要求1至8任意一項的化合物在制備用于抑制多聚腺巧二憐酸核糖聚合酶 (PARP)活性的藥物中的用途。12. 根據(jù)權利要求1至8任意一項的化合物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療:血管 疾病;脈毒性休克;缺血損傷;神經(jīng)毒性；出血性休克;病毒感染;或著因 PARP活性抑制而改 善的疾病。13. 根據(jù)權利要求1至8任意一項的化合物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療個體 的癌癥，其中所述的癌癥是HR依賴性的DNA DSB修復途徑缺陷的。14. 根據(jù)權利要求13的用途，其中所述癌癥包含一種或多種通過皿修復DNA DSB的能力 相對于正常細胞而言減低或取消的癌細胞。15. 根據(jù)權利要求14的用途，其中所述癌細胞具有BRCA1或BRCA2缺陷的表型。16. 根據(jù)權利要求15的用途，其中所述癌細胞是BRCA1或BRCA2缺陷的。17. 根據(jù)權利要求12至16任意一項的用途，其中所述個體就編碼皿依賴性DNA DSB修復 途徑組分的基因的突變而言是雜合的。18. 根據(jù)權利要求17的用途，其中所述個體是BRCA1和/或BRCA2突變而言是雜合的。19. 根據(jù)權利要求12至18任意一項的用途，其中所述癌癥是乳腺癌、卵巢癌、膜腺癌或 前列腺癌。20. 根據(jù)權利要求12至19任意一項的用途，其中所述治療進一步包括給予電離放射或 化學治療劑。
【文檔編號】A61P31/00GK106083741SQ201610098627
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年2月22日 公開號201610098627.4, CN 106083741 A, CN 106083741A, CN 201610098627, CN-A-106083741, CN106083741 A, CN106083741A, CN201610098627, CN201610098627.4
【發(fā)明人】王小龍, 李福衛(wèi), 唐小航, 劉志雄, 江紅葉
【申請人】南京中醫(yī)藥大學