阿掏比克酸苯并咪唑基與二羥乙胺基衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有預(yù)防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物的價(jià)值。
【專利說明】
阿掏比克酸苯并咪唑基與二羥乙胺基衍生物的組合物用于制 備防治胰腺纖維化藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時(shí)也是與其伴隨的組織病 理學(xué)特點(diǎn)，表現(xiàn)為大量成纖維細(xì)胞增生和富含連接組織的細(xì)胞外基質(zhì)。是多種原因?qū)е乱?腺損傷修復(fù)的結(jié)果，近期發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細(xì)胞和多種細(xì)胞因子與胰腺纖維化有關(guān)，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價(jià)值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗胰 腺纖維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85%和15%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué) 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備
[0011] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻(xiàn) (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0012]
[0013] 實(shí)施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(266mg，l .OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然 后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0015] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0016] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0017] HRMS(ESI)m/zrM+Hl+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014：found 373.1017.
[0018]
[0019] 實(shí)施例3 Artalbic acid的0_(苯并咪唑基）乙基衍生物（III)的合成 [0020] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，碘化鉀(84mg，0 · 5mmol)和苯并咪唑（1180mg，IOmmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮= 100: ι.ο，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物π I的棕色固體(80.0 mg，39 % )。
[0021] 1H MMR(500MHz，DMS0-d6)Sl6.65(s，lH)，8.22(s，lH)，7.61(d，J = 25.0Hz，2H)， 7.25(s，1H)，7.16(s，1H)，6.05(s，1H)，5.76(s，1H)，4.90(s，1H)，4.67(s，1H)，4.58(s，1H)， 4.12(s，1H)，4.00(s，1H)，3.85(s，2H)，2.63(s，1H)，2.43(s，2H)，2.35(s，2H)，1.95(s，1H)， 1.61(s，3H)，1.52(s，2H)，1.37(s，lH)，0.94(s，3H).
[0022] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)S201.70(s),175.59(s),149.OO(s),147.93(s),146.20 (s),139.75(s),133.40(s),123.95(s),123.48(s),118.46(s),116.84(s),110.97(s), 109.08(s),81,62(s),67.86(s),57.36(s),44.96(s),41.15(s),38.72(s) ,38.62(s), 35.56(s),30.41(s),20.19(s),18.28(s).
[0023] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C24H3IN2O4^ll .2284；found:411.2281 〇
[0024]
[0025] 實(shí)施例4 Artalbic acid的0-(二輕乙胺基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0_31)，碘化鉀（25211^，1.5_31)和二乙醇胺（105111^，10_31)，混合物加熱回流111。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶 并揮去溶劑即得到化合物IV的淡黃色固體(146.9mg，74% )。
[0027] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl8.72(s，lH)，S6.11(s，lH)，5.80(s，lH)，5.14(s，lH)， 4.73(s,lH),4.63(s,lH),3.57(s,2H),3.45(s,4H),2.70(d,J=15.6Hz,3H),2.60(s,4H), 2.50(s,2H),2.46(s,2H),2.33(s,lH),1.88(s,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J=19.9Hz,3H), 1.02(s,3H).
[0028] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5202.01(s),176.11(s),149.21(s),148.55(s),117.15 (s),109.60(s),81.93(s),67.25(s),59.28(s),57.88(s),56.83(s),53.74(s),41.36(s), 39.24(s),38.93(s),35.88(s),30.82(s),20.61(s),18.49(s).
[0029] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for C2iH36Ni〇6:398.2543;found:398.2547〇
[0030]
[0031] 實(shí)施例5組合物抗胰腺纖維化活性
[0032] 1 材料
[0033] 1 · 1動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重180_200g。
[0034] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的85mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的15mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時(shí)用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0037] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個(gè)月，可出現(xiàn) 胰臟腺細(xì)胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0038] 2.2分組及給藥方法
[0039]模型大鼠隨機(jī)分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設(shè)空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時(shí)解剖動(dòng) 物。
[0040] 2.3檢測指標(biāo)
[00411 2.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取胰臟稱重。
[0042] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取IOOmg樣本在水中勻漿，IlOcClON HCl中水解20小 時(shí)。HCl用氮?dú)鈸]發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的IM過碘酸混合。加1.75ml提取緩沖 液(5份甲苯:5份2-甲基-卜丙醇:2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相(0.6ml)與Ehrlich, s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，含量 以u(píng)g/g組織表示。
[0043] 2.3.3組織學(xué)檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評(píng)分(0-3分）。
[0044] 3 結(jié)果
[0045] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數(shù)的影響
[0046] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計(jì)算其與體重的比值(胰臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見表1。組合物對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異。化合 物III和化合物IV對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0047] 表 1
[0049] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0050] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0051] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對各組大鼠進(jìn)行肺部羥脯氨酸含量測定，結(jié)果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔颕II和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0052] 表 2
[0054] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0055] 3.3組織學(xué)檢查
[0056] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將大鼠處死、解剖;標(biāo)本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0057]結(jié)果:模型組第60天可見胰導(dǎo)管周圍嚴(yán)重炎癥反應(yīng);嗜中粒細(xì)胞核淋巴細(xì)胞浸潤， 間質(zhì)水腫，出血以及偶見胰泡細(xì)胞壞死;胰泡細(xì)胞消失位置及胰泡間出現(xiàn)纖維化。
[0058] 組合物可減少炎癥反應(yīng)和纖維化。評(píng)分結(jié)果見表3。組合物對評(píng)分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0059]表 3
[0061] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化評(píng)分都為0.
[0062] 結(jié)論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實(shí)了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0063] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0064] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0065] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0066] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85%和15%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85%和15%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的膜臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的徑脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的炎癥細(xì)胞浸潤升高。
【文檔編號(hào)】C07D235/06GK106074516SQ201610402870
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司