Schiglautone A 衍生物的組合物用于制備抗慢性阻塞性肺病藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗慢性阻塞性肺病藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有抗慢性阻塞性肺病的作用，具有開發(fā)抗慢性阻塞性肺病藥物的價值。
【專利說明】
Schiglautone A衍生物的組合物用于制備抗慢性阻塞性肺 病藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，C0PD)是一種全 球范圍內(nèi)常見的慢性病，目前在全球死亡原因中排名第四，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2020 年，coro將在全球疾病發(fā)病中排名第五，死亡原因中排名第三。
[0003] coro是一種不完全可逆的氣流受限特征的疾病，與肺部對有害氣體或有毒顆粒的 異常炎癥反應(yīng)有關(guān)，其慢性炎癥反應(yīng)遍及氣道、肺實質(zhì)和肺血管。參與coro的細胞有中性粒 細胞、τ淋巴細胞和巨噬細胞等炎性細胞，當(dāng)細胞被激活后釋放多種炎性介質(zhì)，如白三烯B 4 (LTB4)、白細胞介素8(IL-8)、RANTES、Eotaxin、腫瘤壞死因子Ct(TNFa)、基質(zhì)金屬蛋白酶9 (MMP-9)等，參與肺實質(zhì)破壞、肺血管等炎癥反應(yīng)。病理變化特征表現(xiàn)為肺泡腔炎性細胞(如 巨噬細胞)浸潤、小支氣管和細支氣管周圍灶性炎性細胞浸潤，肺組織邊緣肺泡腔擴張、破 壞，肺泡壁變寬，其上皮細胞腫脹、變圓、部分脫落。COPD與慢性支氣管炎和肺氣腫密切相 關(guān)，但定義上有所不同，支氣管哮喘與特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，其氣流受限具可逆性(與慢性 氣管炎合并時會出現(xiàn)氣流受限不完全可逆）。現(xiàn)在尚無藥物能遏制coro病情的進行性發(fā)展， 其藥物治療的研究進展相當(dāng)緩慢，目前臨床常常將治療哮喘的藥物用于治療C0PD，由于 coro的發(fā)病機制不同于哮喘，難以取得滿意的療效。
[0004] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0005] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個201 1年發(fā)表（Fan-Yu Meng et al .， 2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011) 1502-1505)的化合物，我們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物 III和化合物IV，并用化合物ΠI和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗慢性阻塞性肺病 活性進行了評價，其具有抗慢性阻塞性肺病活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為80%和20%。
[0007]
[0008] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0009] 長期吸煙是最常見的人類coro致病因素，我們實驗室用香煙誘導(dǎo)模擬小鼠 coro模 型，擬研究本發(fā)明組合物對香煙誘導(dǎo)的小鼠 coro的緩解作用。
[0010]本發(fā)明目的在于提供本發(fā)明組合物在制備抗coro疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明組合 物在劑量l〇mg/kg下灌胃給藥，對香煙誘導(dǎo)的coro小鼠 MLF中炎性細胞因子TNFa的生成有 抑制作用;對趨化因子RANTES的分泌有抑制作用;對BALF中的炎性細胞的募集有抑制作用。 [0011]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1化合物Schiglautone A的制備
[0013] 化合物Schiglautone A(I)的制備方法參照Fan-Yu Meng等人發(fā)表的文獻(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/ 7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011 )1502-1505)的方法。
[0014]
[0015] 實施例2 Schiglautone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0016] 將化合物I(502mg，l.OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(7.52(^，40.00111111〇1)和61^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Sh 13Sh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后 對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100: l.〇，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(508mg，71 % )。
[0017] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.40(s,lH),6.10(s,lH),5.63(s,lH),5.53(s,lH), 3.85(d,J = 11.2Hz,4H) ,3.52(d,J=10.8Hz,4H) ,2.96(s,lH) ,2.20(s,lH) ,2.16(s,2H), 2.00(s,lH),1.84(d,J=13.9Hz,4H),1.69(s,lH),1.58(dd,J = 22.2,8.5Hz,4H) ,1.51(s, lH),1.47(s,lH),1.26(dd,J=9.1,4.4Hz,4H),1.21(s,lH),I.08-0.98(m,4H),0.96-0.94 (m,9H),0.94-0.85(m,6H).
[0018] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.46(s),209.14(s),170.06(s),161.12(s),143.51 (s) ,132.01(s) ,127.77(s) ,85.96(s),82.40(s),70.19(s),69.10(s),57.14(s),52.73 (s),51.90(s),45.77(s),40.67(s),38.57(s),38.32(s),35.04(s),33.55(s),33.27(s), 29.85(s),28.98(s),26.71(s),25.50(s),24.05(s),22.31(s),21.06(s),20.56(s),20.00 (s),18.69(s),18.11(s),15.07(s).
[0019] HRMS(ESI)m/z[M-H]_calcd for C34HsiBr2Oe:715.2032；found 715.2027.
[0020]
[0021] 實施例3 Schiglautone A的0-(1Η-四氮唑基）乙基衍生物（III)的合成
[0022] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀（84mg，0 · 5mmo 1)和IH-四氮唑（140 Img，20mmo 1)，混合物加熱回流5h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因 為互變異構(gòu)作用，在反應(yīng)條件下會生成IH-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶，再將 淡黃色洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:0.5，v/v)，依次收 集兩個淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物III的淡黃色固體(79.8mg，23%)。
[0023] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.29(s,lH),9.99(s,lH),9.93(s,lH),6.25(s,lH), 5.76(s,lH),5.40(s,lH) ,4.57(s, 1H) ,4.38(s , 1H) ,4.32(s, 1H) ,4.21 (s , 1H), 3.96(d J = 11.9Hz,4H),3.33(s,lH),2.55(s,lH),2.51(s,2H),2.39(s,lH),1.98(s,3H),1.82-1.76 (m,3H),1.73(s,lH),1.65(d,J=6.5Hz,2H),1.60(s,lH),1.53(s,lH),1.47-1.37(m,4H), 1.30(s,lH) ,1.19(s,lH),1.10(t ,J=12.5Hz,3H) ,1.08(t ,J=12.5Hz,9H) ,1.03(s,3H), 0.86(s,3H).
[0024] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.72(s),209.42(s),170.36(s),161.38(s),145.37 (s),143.80(s),132.29(s),128.04(s),86.25(s),82.68(s),66.14(s),65.60(s),57.33 (s),52.91(s),52.08(s),46.81(s),45.95(s),40.84(s),38.76(s),38.50(s),35.21(s), 33.74(s),30.01(s),29.16(s),26.91(s),25.66(s),24.23(s),22.51(s),21.22(s),20.74 (s),20.20(s),18.85(s),18.29(s),15.27(s).
[0025] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for C36H55N8〇6:695.4245;found:695.4248〇
[0026]
[0027] 實施例4 Schiglautone A的0-(苯并咪唑基）乙基衍生物的合成 [0028] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀(84mg，0 · 5mmol)和苯并咪唑（1180mg，IOmmol)，混合物加熱回流6h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物IV的棕色固體（169.9mg，43 % )。
[0029] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.32(s,lH) ,8.38(s,2H) ,7.66(d,J = 25.0Hz,4H), 7.39(s,2H),7.32(s,2H) ,6.25(s, 1H), 5.64(d J= 18.7Hz , 2H) ,4.34(s , 1H) ,4.28(s,lH), 4.18(d J=13.7Hz,2H),4.04(s,2H),3.99(s,2H),3.13(s,lH),2.65(s, 2H), 2.26(s, 1H), 2.17(s,lH) ,2.06(s,lH),1.98(s,3H) ,1.87(d,J=16.4Hz,2H) ,1.66(dd,J = 8.0,6.6Hz, 4H),1.62(s,lH),1.49(s,lH),1.41(dd J=19.6,10.4Hz,2H),1.37(d,2H),1.20-l.ll(m, 4H) ,1.07(d,J = 20.0Hz,6H),103(d,J = 20.0Hz,3H),1.01(d,J = 20.0Hz,3H) ,0.95(d J = 20.0Hz,3H).
[0030] 13C NMR(I25MHz,DMS0-d6)δ21I·30(s),208·98(s),169·90(s),160·96(s),146·28 (s),143.34(s),139.64(s),133.48(s),131.85(s),127.61(s),123.92(s),123.35(s), 118.55(s),110.85(s),85.79(s),82.26(s),67.74(s),67.20(s),57.00(s),52.56(s), 51.73(s),45.63(s),44.94(s),40.49(s),38.42(s),38.17(s),34.86(s),33.40(s),29.68 (s),28.81(s),26.57(s),25.33(s),23.88(s),22.17(s),20.89(s),20.39(s),19.86(s), 18.52(s),17.87(s),14.93(s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C48H63N4〇6:791.4748;found:791.4744。
[0032]
[0033] 實施例5組合物抗慢性阻塞性肺病實驗
[0034] 方法：SPF級雌性BALB/c小鼠，18-20g，隨機分為正常對照組、模型對照組、藥物處 理組(組合物、化合物III和化合物IV 10mg/kg，灌胃給藥），每組10只。將小鼠置于4L容器 內(nèi)，每日煙熏（南京牌香煙一紅殼，焦油含量小于16mg)，一周五次，連續(xù)四周，每日煙熏前1 小時灌胃給藥，小鼠在末次煙熏后1小時，以苯巴比妥鈉麻醉，用0.6mL預(yù)冷的PBS緩沖液 (pH7.0)肺部灌流，沖洗3次，吸出支氣管肺泡灌洗液(BALF)，250 X g離心10min，上清用于分 析TNFa、RANTES的含量。細胞用PBS緩沖液重懸，計數(shù)，細胞涂片后用瑞氏-吉姆薩染色，分析 BALF中炎性細胞的變化。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的SOmg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的20mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036]實驗例1組合物對COB)小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎癥介質(zhì)生成抑制作用 [0037] (1)組合物對COB)小鼠 BALF中TNFa生成抑制作用
[0038] 前炎性細胞因子TNFa是COB)的發(fā)病過程中的啟動因子。COB)患者的TNFa水平高于 正常人，培養(yǎng)的支氣管上皮細胞與香煙的煙霧接觸可分泌TNFa JNFa可促使中性粒細胞脫 顆粒，誘導(dǎo)起到粘膜細胞增生和高分泌，增加上皮細胞IL-8生成，增加巨噬細胞基質(zhì)金屬蛋 白酶生成，促進氣道高反應(yīng)性。本實驗?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對⑶PD小鼠 MLF中TNFa生成的 影響，結(jié)果見表1.
[0039] 表1組合物對COB)小鼠 BALF中TNFa生成的影響
[0041 ] 注:*P〈0.05，與模型對照組相比;#P〈0.05，與正常對照組相比。η= 10。
[0042] 結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COB)模型小鼠灌胃給藥，可顯著降低小鼠 MLF中TNFa 的生成，而化合物III和化合物IV無此作用。
[0043] (2)組合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌抑制作用
[0044] 炎癥細胞的迀移受到趨化因子的調(diào)節(jié)，各種結(jié)構(gòu)細胞核炎性細胞均可分泌這些小 分子蛋白，COro發(fā)病過程中RANTES分泌增加，趨化單核/巨噬細胞，T淋巴細胞，嗜酸性細胞。 本實驗?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌的影響，結(jié)果見表2。
[0045] 表2組合物對COro小鼠 BALF中RANTES分泌的影響
[0047] 注:*P〈0.05，與模型對照組相比;#P〈0.01，與正常對照組相比。n= 10。
[0048] 結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COB)模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠 MLF中RANTES的 分泌，而化合物III和化合物IV無此作用。
[0049] 實驗例2組合物對COro小鼠 BALF中炎性細胞募集的抑制作用
[0050] (1)組合物對COB)小鼠 BALF中中性粒細胞募集的抑制作用
[0051] 中性粒細胞在COPD發(fā)病中具有重要作用，它可以釋放兩種絲氨酸蛋白酶，彈性蛋 白酶和半胱氨酰蛋白酶-3,誘導(dǎo)動物產(chǎn)生人類肺氣腫樣的病理變化。中性粒細胞生命短暫， 它循環(huán)招募到氣道以及穿越間隙腔的過程十分迅速。病理研究證明有些coro患者支氣管組 織內(nèi)中性粒細胞數(shù)目增加與氣流阻塞的程度有關(guān)。吸煙的coro患者氣道內(nèi)中性粒細胞數(shù)目 增加，特別是那些伴有慢性支氣管炎的患者。影響COPD患者肺內(nèi)中性粒細胞募集的主要因 素為IL-8趨化活性增強。本實驗?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對coro小鼠 BALF中中性粒細胞募集的 影響，結(jié)果見表3。
[0052] 表3組合物對coro小鼠 BALF中中性粒細胞募集的影響
[0055]注:*P〈0 · 05; #P〈0 · 01，與正常對照組相比。n = 10。
[0056]結(jié)果:組合物在10mg/kg下對COPD模型小鼠灌胃給藥，可降低小鼠 BALF中中性粒細 胞的募集，而化合物ΠI和化合物IV無此作用。
[0057] (2)組合物對COro小鼠 BALF中巨噬細胞募集的抑制作用
[0058]吸煙者和COPD患者肺內(nèi)巨噬細胞較正常人群水平增加，多聚集在肺泡、細支氣管 和小氣道。肺泡壁巨噬細胞數(shù)目和輕中度肺氣腫以及COPD患者的小氣道疾病程度呈正相 關(guān)。組織病變和損傷部位可見到COPD緩慢進展和慢性病變與巨噬細胞長期增加平行。巨噬 細胞可能通過釋放基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)致彈性組織降解能力異常增高，誘發(fā)肺氣腫的發(fā)生。 本實驗?zāi)康脑谟诳疾旖M合物對COB)小鼠 BALF中巨噬細胞募集的影響，結(jié)果見表4。
[0059] 表4組合物對coro小鼠 BALF中巨噬細胞募集的影響
[0061 ] 注:*P〈0.05，與模型對照組相比;#P〈0.01，與正常對照組相比。η = 10。
[0062] 結(jié)果:組合物在lOmg/kg下對COPD模型小鼠灌胃給藥，可顯著降低小鼠 BALF中巨噬 細胞的募集，而化合物III和化合物IV無此顯著作用。
[0063] 結(jié)論:組合物在10mg/kg下灌胃給藥，對香煙誘導(dǎo)的小鼠慢性阻塞性肺病過程中的 炎性介質(zhì)的生成和趨化因子的分泌有顯著抑制作用，對炎性細胞的浸潤有顯著的抑制，對 慢性阻塞性肺病有顯著的治療作用。而化合物III和化合物IV在10mg/kg下灌胃給藥，對香 煙誘導(dǎo)的小鼠慢性阻塞性肺病過程中的炎性介質(zhì)的生成和趨化因子的分泌無顯著抑制作 用，對炎性細胞的浸潤無顯著抑制，對慢性阻塞性肺病無任何治療作用。
[0064] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0065] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0066] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0067] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為80%和20%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為80%和20%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述慢 性阻塞性肺病是由吸煙引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制慢性阻塞性肺病過程中炎性介質(zhì)的釋放。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述炎 性介質(zhì)為TNFa。7. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制慢性阻塞性肺病過程中趨化因子的分泌。8. 如權(quán)利要求7所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述趨 化因子為RANTES。9. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組 合物抑制炎性細胞的募集。10. 如權(quán)利要求9所述的組合物在治療慢性阻塞性肺病藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 炎性細胞為中性粒細胞或者巨隧細胞。
【文檔編號】A61K31/41GK106074513SQ201610416171
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日 公開號201610416171.1, CN 106074513 A, CN 106074513A, CN 201610416171, CN-A-106074513, CN106074513 A, CN106074513A, CN201610416171, CN201610416171.1
【發(fā)明人】陸賢
【申請人】南京廣康協(xié)生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司