一種新型羅漢果醇衍生物單體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型的羅漢果醇衍生物單體(4)，可以被制成用于治療和/或預(yù)防不同癌癥和/或腫瘤的藥物，也可以被制成用于免疫調(diào)節(jié)和/或改善微循環(huán)和/或提高生命質(zhì)量的保健品，重點(diǎn)應(yīng)用于惡性腫瘤的治療，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】
一種新型羅漢果醇衍生物單體
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種新型羅漢果醇衍生物單體。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是殘害人類生命的世界第二大疾病，死亡率僅次于心腦血管疾病，是人類死 亡的最主要因素之一。由世衛(wèi)組織組織下屬的的官方癌癥機(jī)構(gòu)國(guó)際癌癥研究中心（I ARC)負(fù) 責(zé)的最新版《世界癌癥報(bào)告》預(yù)測(cè)，全球癌癥病例將呈現(xiàn)迅猛增殖態(tài)勢(shì)，由2012年的1400萬(wàn) 人，逐年迅增至2025年的1900萬(wàn)人，到2035年將達(dá)到2400萬(wàn)人。報(bào)告還顯示，2012年全球新 增癌癥病例有近一半出現(xiàn)在亞洲，其中大部分在中國(guó)，中國(guó)新增癌癥病例高居首位。2012年 中國(guó)新增307萬(wàn)癌癥患者并造成約220萬(wàn)人死亡，分別占全球總量的21.9 %和26.8 %。世衛(wèi) 的數(shù)據(jù)略低于中國(guó)自己的統(tǒng)計(jì)。全國(guó)腫瘤登記中心發(fā)布的2012年數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)每年新增 癌癥病例約350萬(wàn)，約有250萬(wàn)人因此死亡。
[0003] 現(xiàn)今癌癥的常用治療方法主要有三種模式:手術(shù)、放療和藥物治療，而選定哪個(gè)治 療方法則取決于腫瘤的位置、惡性程度、發(fā)展程度以及病人身體狀態(tài)。三種模式中，手術(shù)的 治療方法，常因?yàn)榘┘?xì)胞入侵蔓延到鄰近組織或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移而效果有限;放療的治療方法，則 受限于對(duì)體內(nèi)其他正常組織造成的傷害;藥物的治療方法，對(duì)于晚期彌散性和轉(zhuǎn)移性惡性 腫瘤是最基本的治療方法。過(guò)去的幾十年里，著眼于直接殺傷腫瘤細(xì)胞的化療雖有明顯的 發(fā)展和進(jìn)步，成為腫瘤藥物治療的中堅(jiān)，但這一治療模式對(duì)增殖緩慢的實(shí)體瘤效果差、藥物 選擇性小、毒副反應(yīng)多且嚴(yán)重的缺陷成為臨床治療中的重要限制因素。繼手術(shù)、放療和化療 之后的第四種模式是腫瘤的生物治療，其主要是通過(guò)腫瘤宿主防御機(jī)制或生物制劑的作用 來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體自身的生物學(xué)反應(yīng)，從而抑制或消除腫瘤;生物治療雖然沒(méi)有太大毒副作用，但 由于技術(shù)要求嚴(yán)、工藝復(fù)雜，因此價(jià)格高，眾多癌癥患者及家屬難以承受，影響其在癌癥治 療領(lǐng)域的普及。
[0004] 由于存在上述各種限制，天然抗腫瘤藥物的研發(fā)取得了越來(lái)越多的關(guān)注。天然抗 癌藥物無(wú)論是在抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞、調(diào)整機(jī)體免疫功能、改善癥狀與特征和減輕放化療 毒副作用上，還是在腫瘤的病后調(diào)理上，均具有重要作用。由此，天然植物新療法將成為繼 手術(shù)、放療、化療和生物療法之后的第五種模式。
[0005] 羅漢果是一種名貴藥材，屬于萌蘆科多年生藤本植物，性涼味甘。羅漢果提取物中 含非糖甜味的皂苷成分，又稱羅漢果總皂苷，根據(jù)其中皂苷元連接糖基的數(shù)目以及連接位 置的不同已經(jīng)在羅漢果總皂苷中分離鑒定出羅漢果二糖苷、三糖苷、四糖苷、五糖苷、六糖 苷等多種皂苷單體，分別命名為羅漢果甜苷II、m、IV、V、VI(MogrosideII、III、IV、V、VI) 等，其中羅漢果甜苷V-Mogroside V(1A)(如圖1所示）的甜度是蔗糖的256-344倍，羅漢果甜 苷IV-Mogroside IV(1B)(如圖1所示）的甜度為蔗糖的126倍，其熱量為零，具有清熱潤(rùn)肺鎮(zhèn) 咳、潤(rùn)腸通便之功效，對(duì)肥胖、便秘、糖尿病等具有防治作用。
[0006] 羅漢果皂苷Mogrosides是兩條由四個(gè)以下葡萄糖單位組成的葡萄糖苷側(cè)鏈以β-糖苷鍵與皂苷元羅漢果醇Mogrol(2)(如圖2所示）的C-3、C-24相連，在側(cè)鏈葡萄糖之間的連 接鍵為β-1，6和β-1，2糖苷鍵。
[0007] 許多研究表明，羅漢果皂苷能提高葡萄糖和脂肪的利用，增加胰島素的敏感性，但 羅漢果降血糖作用的有效成分和作用機(jī)制并不明確。中科院上海藥物研究所胡立宏課題組 和沈旭課題組對(duì)羅漢果的降血糖作用進(jìn)行了研究，首先在HepG2細(xì)胞中，對(duì)羅漢果中含量最 高的羅漢果甜苷V( 1A)進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)它對(duì)AMPK沒(méi)有活性;而羅漢果醇Mogrol (2)及其衍生 物3α-羥基-25-脫羥基_24_酮-羅漢果醇（3a-hydroxy-25-dehydroxy-24_oxomogro 1) (3) (如圖3所不）卻能夠激活A(yù)MPK(Chen X.B.，et al;Bioorganic&Medicinal Chemistry 2011，19:5776)。目前，還沒(méi)有任何專利和文獻(xiàn)報(bào)道通過(guò)羅漢果醇(2)在特定條件下生成羅 漢果醇衍生物單體(3)和羅漢果醇衍生物單體(4)(如圖4所示），也沒(méi)有任何專利和文獻(xiàn)報(bào) 道存在有羅漢果醇衍生物單體(4)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種新型的羅漢果醇衍生物單體(4)，此羅漢 果醇衍生物單體(4)可以制成藥物制劑或保健品，用于腫瘤和/或癌癥的治療和/或預(yù)防。
[0009] 本發(fā)明第一方面提供了一種羅漢果醇衍生物單體(4)，具有如下結(jié)構(gòu)：
[0010]
[0011] 本發(fā)明第二方面提供了一種組合物，包含如下結(jié)構(gòu)的
[0012] / \
[0013] 羅漢果醇衍生物單體(4)。
[0014] 在一優(yōu)選例中，所述組合物為藥物制劑，所述藥物制劑還包括藥學(xué)可接受的稀釋 劑、載體、賦形劑、輔料或媒介物。
[0015] 在一優(yōu)選例中，所述藥物制劑的劑型為口服劑型、注射劑型或局部用藥劑型。
[0016] 在一優(yōu)選例中，所述口服劑型為片劑、粉劑、懸濁液、乳濁液、膠囊、顆粒劑、糖衣 片、藥丸、液體、醑劑、糖漿或檸檬水劑。
[0017] 在一優(yōu)選例中，所述注射劑型包括水劑、懸濁液或溶液。
[0018] 在一優(yōu)選例中，所述局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸濁液、水劑、醑劑、粉劑、糊 劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、洗劑、灌腸劑或乳劑。
[0019] 在一優(yōu)選例中，所述組合物用于治療和/或預(yù)防腫瘤和/或癌癥；
[0020] 其中所述的腫瘤和/或癌癥選自：
[0021] 惡性腫瘤，包括膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、頭和頸癌、食管癌、膽囊 癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌；
[0022] 淋巴系統(tǒng)的造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血 病、B-細(xì)胞淋巴癌、T-細(xì)胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛細(xì)胞淋巴癌、外套細(xì) 胞淋巴瘤、骨髓瘤和BurketV s氏淋巴癌；
[0023] 骨髓系統(tǒng)的造血腫瘤，包括急性和慢性髓細(xì)胞性白血病、骨髓增生異常綜合征和 前髓細(xì)胞性白血病；
[0024] 間質(zhì)成因的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；
[0025] 中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成纖維神經(jīng)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng) 鞘瘤；以及
[0026] 其他腫瘤，包括黑素瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素頸瘤、甲狀腺濾 囊癌和卡波氏肉瘤。
[0027] 在一優(yōu)選例中，所述組合物為保健品，還包括任選的保健品中可接受的載體。
[0028] 在一優(yōu)選例中，所述組合物用于免疫調(diào)節(jié)、改善微循環(huán)和/或提高生命質(zhì)量。
[0029]本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)具有以下定義，除非另有描述：
[0030]本文所用的術(shù)語(yǔ)"羅漢果醇衍生物單體(3)"意指3α_羥基-25-脫羥基-24-酮-羅漢 果醇(3a-hydroxy-25-Dehydroxy-24_oxomogro 1)(結(jié)構(gòu)式如圖3所示）；本文所用的術(shù)語(yǔ)"新 型羅漢果醇衍生物單體（4)"意指3a-羥基_22、24_二烯_24、25_脫羥基-羅漢果醇（3 〇-hydroxy-22、24-diene-24、 25-dehydroxy-mogrol) (4)(結(jié)構(gòu)式如圖4所不）〇 [0031 ]本文所用的術(shù)語(yǔ)"組合物"意指包括包含指定量的各指定成分的產(chǎn)品，以及直接或 間接從指定量的各指定成分的組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)品。所述局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸 濁液、水劑、醑劑、粉劑、糊劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、洗劑、灌腸劑或乳劑。。在無(wú)菌 條件下將活性化合物與藥學(xué)可接受的載體和任何所需的防腐劑、緩沖劑或推進(jìn)劑混合。目艮 用制劑、眼軟膏劑、散劑和溶液劑也被考慮在本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0032] 當(dāng)用于上述治療或其他治療時(shí)，治療和/或預(yù)防有效量的一種本發(fā)明化合物可以 以純形式應(yīng)用，或者以藥學(xué)可接受的鹽、酯或前藥形式(在存在這些形式的情況下)應(yīng)用?；?者，所述化合物可以以含有該目的化合物與一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物 給藥。詞語(yǔ)"治療和/或預(yù)防有效量"的本發(fā)明化合物指以適用于任何醫(yī)學(xué)治療的合理效果/ 風(fēng)險(xiǎn)比治療障礙的足夠量的化合物。但應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明化合物和組合物的總?cè)沼昧宽氂?主診醫(yī)師在可靠的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)作出決定。對(duì)于任何具體的患者，具體的治療和/或預(yù)防 有效劑量水平須根據(jù)多種因素而定，所述因素包括所治療的障礙和該障礙的嚴(yán)重程度;所 采用的具體化合物的活性;所采用的具體組合物;患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和 飲食;所采用的具體化合物的給藥時(shí)間、給藥途徑和排泄率;治療持續(xù)時(shí)間；與所采用的具 體化合物組合使用或同時(shí)使用的藥物；及醫(yī)療領(lǐng)域公知的類似因素。例如，本領(lǐng)域的做法 是，化合物的劑量從低于為得到所需治療效果而要求的水平開(kāi)始，逐漸增加劑量，直到得到 所需的效果。
[0033] 本發(fā)明還提供包含任選地與一種或多種無(wú)毒藥學(xué)可接受的稀釋劑、載體、賦形劑、 輔料或媒介物配制在一起的本發(fā)明化合物的藥物制劑。所述藥物制劑可特別專門(mén)配制成以 固體或液體形式供口服給藥、供胃腸外注射或供直腸給藥。
[0034] 本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)口服、直腸、胃腸外、池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(如通 過(guò)散劑、軟膏劑或滴劑）、口頰給予人類和其他哺乳動(dòng)物，或者作為口腔噴霧劑或鼻腔噴霧 劑給予。本文所用術(shù)語(yǔ)"胃腸外"指包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射 和輸液的給藥方式。
[0035]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明成分和生理可耐受稀釋劑的藥物組合物。 本發(fā)明包括一種或多種上述化合物，其與一種或多種無(wú)毒生理可耐受或可接受的稀釋劑、 載體、輔料或媒介物(本文將它們統(tǒng)稱為稀釋劑)一起配制成組合物，以供胃腸外注射、鼻內(nèi) 傳遞、以固體或液體形式口服給藥、直腸或局部給藥等等。
[0036]適合于胃腸外注射的組合物可包括生理上可接受的無(wú)菌含水或非水溶液劑、分散 劑、混懸劑或乳劑，及供重構(gòu)成無(wú)菌可注射溶液劑或分散劑的無(wú)菌散劑。合適的含水或非水 載體、稀釋劑、溶劑或媒介物的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等）、植物 油(如橄欖油）、可注射有機(jī)酯如油酸乙酯及它們的合適混合物。
[0037]這些組合物也可含有輔料，如防腐劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑和分散劑。通過(guò)各種抗細(xì)菌 劑和抗真菌劑，例如尼泊金酯類、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可確保防止微生物的作用。 還期望包括等滲劑，例如糖類、氯化鈉等。通過(guò)使用能延遲吸收的物質(zhì)，例如單硬脂酸鋁和 明膠，可達(dá)到可注射藥物形式的延長(zhǎng)吸收。
[0038]混懸劑中除活性化合物外還可含有懸浮劑，例如乙氧基化異十八醇、聚氧乙烯山 梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤(rùn)土、瓊脂和黃蓍膠或者這 些物質(zhì)的混合物等。
[0039] 在一些情況下，為延長(zhǎng)藥物的作用，期望減慢皮下或肌內(nèi)注射藥物的吸收。這可通 過(guò)使用水溶性差的晶體或無(wú)定形物質(zhì)的液體混懸劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。這樣，藥物的吸收速度取決于 其溶解速度，而溶解速度又可取決于晶體大小和晶型?；蛘撸改c外給藥的藥物形式的延遲 吸收通過(guò)將該藥物溶解于或懸浮于油媒介物中來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0040] 可注射貯庫(kù)制劑形式可通過(guò)在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯 (polylactide-polyglycolide)中形成藥物的微膠囊基質(zhì)來(lái)制備。可根據(jù)藥物與聚合物之 比和所采用的具體聚合物的性質(zhì)，對(duì)藥物釋放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的實(shí) 例包括聚原酸酯類(poly (orthoesters))和聚酐類(poly(anhydrides))?？勺⑸鋷?kù)制劑 也可通過(guò)將藥物包埋于能與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來(lái)制備。
[0041] 可注射制劑可例如通過(guò)用濾菌器過(guò)濾或通過(guò)摻入無(wú)菌固體組合物形式的滅菌劑 來(lái)滅菌，所述固體組合物可在臨用前溶解或分散于無(wú)菌水或其他無(wú)菌可注射介質(zhì)。
[0042] 供口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在此類固體劑型 中，活性化合物可與至少一種惰性的藥學(xué)可接受的賦形劑或載體如檸檬酸鈉或磷酸二鈣 和/或以下物質(zhì)混合:a)填充劑或增量劑如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸;b)粘 合劑如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯樹(shù)膠;c)保濕劑如甘 油;d)崩解劑如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉;e)溶液阻 滯劑如石蠟;f)吸收加速劑如季銨化合物;g)濕潤(rùn)劑如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯;h)吸附劑 如高嶺土和膨潤(rùn)土以及i)潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基 硫酸鈉和它們的混合物。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，所述劑型中也可包含緩沖劑。
[0043] 相似類型的固體組合物使用賦形劑例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作軟 膠囊和硬膠囊中的填充物。
[0044] 片劑、糖衣丸劑(dragees )、膠囊劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型可與包衣和殼料如 腸溶衣材和醫(yī)藥制劑領(lǐng)域公知的其他衣材一起制備。這些固體劑型可任選含有遮光劑，且 其組成還可使其只是或優(yōu)先地在腸道的某個(gè)部位任選以延遲方式釋放活性成分?？梢允褂?的包埋組合物的實(shí)例包括高分子物質(zhì)和蠟類。如果適合，活性化合物也可與一種或多種上 述賦形劑配成微囊形式。
[0045] 供口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)可接受的乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。 液體劑型除含有活性化合物外還可含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增 溶劑和乳化劑例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3_ 丁二 醇、二甲基甲酰胺、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻 油）、甘油、四氫糠醇<^61:抑117(11'(^1^^11巧131(3〇11〇1)、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸 酯及它們的混合物?？诜M合物除包含惰性稀釋劑外還可包含輔料，例如濕潤(rùn)劑、乳化和懸 浮劑、甜味劑、矯味劑和香味劑。
[0046] 供直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選是栓劑。栓劑可通過(guò)將本發(fā)明化合物與合適的非 刺激性賦形劑或載體例如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟混合來(lái)制備，它們?cè)谑覝叵聻楣腆w，但 在體溫下則為液體，因此可在直腸腔或陰道腔內(nèi)熔化而釋放出活性化合物。
[0047] 本發(fā)明化合物也可以脂質(zhì)體形式給藥。如本領(lǐng)域所公知，脂質(zhì)體通常用磷脂或其 他脂類物質(zhì)制得。脂質(zhì)體由分散于含水介質(zhì)中的單層或多層水化液晶所形成。任何能夠形 成脂質(zhì)體的無(wú)毒、生理上可接受和可代謝的脂質(zhì)均可使用。脂質(zhì)體形式的本發(fā)明組合物除 含有本發(fā)明化合物外，還可含有穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂類是天然和合成的磷 脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂），它們可單獨(dú)或者一起使用。形成脂質(zhì)體的方法是本領(lǐng)域公知的。
[0048] 本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的前藥"代表本發(fā)明化合物的前藥，其在可靠的醫(yī)學(xué) 判斷范圍內(nèi)適合用于與人類和低等動(dòng)物的組織接觸而不出現(xiàn)過(guò)度的毒性、刺激、過(guò)敏反應(yīng) 等，與合理的效果/風(fēng)險(xiǎn)比相稱且對(duì)其預(yù)定用途有效，在可能的情況下還代表本發(fā)明化合物 的兩性離子形式。本發(fā)明的前藥可例如通過(guò)在血液中水解而在體內(nèi)快速轉(zhuǎn)化成上式的母體 化合物。
[0049] 本發(fā)明提供了一種新型的羅漢果醇衍生物單體(4)，可以被制成用于治療和/或預(yù) 防不同癌癥和/或腫瘤的藥物，以及用于免疫調(diào)節(jié)和/或改善微循環(huán)和/或提高生命質(zhì)量的 保健品，重點(diǎn)應(yīng)用于惡性腫瘤的治療，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0050] 圖1為羅漢果甜苷V(1A)、VI(1B)的分子結(jié)構(gòu)示意圖。
[0051 ]圖2為羅漢果醇Mogrol(2)的分子結(jié)構(gòu)示意圖。
[0052]圖3為羅漢果醇衍生物單體(3)的分子結(jié)構(gòu)示意圖。
[0053]圖4為新型羅漢果醇衍生物單體(4)的分子結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0054]除非特殊說(shuō)明，本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的一般含義。
[0055]下面參考具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，需要說(shuō)明的是，這些實(shí)施例僅僅是說(shuō)明 性的，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的 文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者， 均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0056]實(shí)施例1:從羅漢果總皂苷98%的提取物制備羅漢果醇衍生物單體(3)和(4)
[0057]將羅漢果提取物50g(羅漢果總皂苷98%，含55%羅漢果甙V，購(gòu)買于桂林萊茵生物 科技股份有限公司）加入250mL的乙醇的水溶液（乙醇和水的體積比為1:1)(預(yù)先用鹽酸調(diào) 節(jié)至PH值為3.0)，在反應(yīng)釜中攪拌溶解，然后升溫至120°C下加熱2小時(shí)，冷卻至室溫25°C 后，反應(yīng)液用1M的NaOH堿液中和至PH值為7，在90-95°C下將乙醇盡量蒸出，剩下的濃縮液加 入200mL蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬罄鋮s、靜置，將上面的水層分離棄去，得到咖啡色浸膏；分別用 100mL、50mL、50mL乙酸乙酯萃取咖啡色浸膏3次，合并3次萃取液后，在100-120°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀濃縮，把乙酸乙酯完全蒸干，即得到含羅漢果醇衍生物單體(3)和羅漢果醇衍生物單 體(4)的淺咖啡色固體18.2g;用乙醇將淺咖啡色固體載入硅膠柱，用乙腈:水(體積比20:1) 梯度洗脫，按先后順序收集不同的流出液，濃縮后得到A(6.8g)、B(5.6g)兩組分;先收集得 到的A(6.8g)組分再用硅膠柱分離(氯仿：乙醇/60: 5洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體(3) llgCHPLOgg^hESMS m/z 503(458+45)[M+H⑶0-] -(calcd for C3iH5i〇5);13C-匪R (600MHz，MeOD) δρρπι: 29 · 1 (C-l)，31 · 7 (C-2)，
[0058] 79.4(C-3),42.8(C-4),144.1(C-5),120.7(C-6),25.2(C-7),44.8(C-8),41.1(C-9),35.4(C-10),77.7(C-11),30.6(C-12),48.3(C-13),
[0059] 49.6(C-14),34.9(C-15),27.5(C-16),50.7(C-17),17.2(C-18),
[0060] 26.6(C-19),41.1(C-20),19.0(C-21),37.8(C-22),40.3(C-23),
[0061 ] 218.2(C-24),35.4(C-25),18.8(C-26),18.8(C-27),26.4(C-28),
[0062] 19.9(C-29)，19.3(C-30);與文獻(xiàn)報(bào)道的3a-羥基-25-脫羥基-24-羰基-羅漢果醇 (3a-hydroxy-25-Dehydroxy-24_oxomogrol)碳譜數(shù)據(jù)比較，二者基本一致（Chen X.B.，et al；Bioorganic&Medicinal Chemistry 2011,19:5776)。
[0063] 后收集得到的B(5.6g)組分再用硅膠柱分離(石油醚：乙酸乙酯/5:2洗脫），得到羅 漢果醇衍生物單體(4)。3.2 8(冊(cè)1^099%)<^51]\^111/2 441[]\1+!1] + (。&1。(1€(^〇3()1149〇2);13(：-NMR(600MHz，MeOD)Spp m: 23 · 5(C-1 )，29· 5(C-2) ,87 ·8(03)，44.2(04)，144.1(05) ,121.8 (C-6),25.5(C-7),40.9(C-8),40.8(C-9),51,3(C-10),71,9(C-11),41,5(C-12),48.2(C-13),52.2(C-14),35.3(C-15),24.9(C-16),
[0064] 54.3(C-17),15.2(C-18),18.6(C-19),40.2(C-20),20.3(C-21),
[0065] 137.4(C-22),128.8(C-23),125.4(C-24),143.3(C-25),19.7(C-26),
[0066] 25.7(C-27)，21.7(C-28)，21.7(C-29)，18.6(C-30)。
[0067] 實(shí)施例2:從羅漢果總皂苷95%的提取物制備羅漢果醇衍生物單體(3)和(4)
[0068]將羅漢果提取物50g(羅漢果總皂苷95%，含45%羅漢果甙V，從桂林萊茵生物科技 股份有限公司購(gòu)買）加入250mL的甲醇的水溶液（甲醇和水的體積比為3:2)(預(yù)先用硫酸調(diào) 節(jié)至PH值為2.8)，在反應(yīng)釜中攪拌溶解，然后升溫至120°C下加熱2小時(shí)，冷卻至室溫后，反 應(yīng)液用1M的Κ0Η堿液中和至PH值為7，在90-95°C下將甲醇盡量蒸出，剩下的濃縮液加入 200mL蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬罄鋮s、靜置，將上面的水層分離棄去，得到咖啡色浸膏；分別用 100mL、50mL、50mL乙酸乙酯萃取咖啡色浸膏3次，合并3次萃取液后，在100-120°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀濃縮，把乙酸乙酯完全蒸干，即得到含羅漢果醇衍生物單體(3)和羅漢果醇衍生物單 體(4)的淺咖啡色固體15.5g;用甲醇將淺咖啡色固體載入硅膠柱，用乙腈:水（19:1)梯度洗 脫，按先后順序收集不同的流出液，濃縮后得到A(6.0g)、B(5.2g)兩組分;先收集得到的A (6.Og)組分再用硅膠柱分離（氯仿：乙醇/60: 5洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體（3)3.9g (HPLC>99%);HPLC、13C-NMR、ES頂S檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的化合物(3)-致。后收集得到的B (5.2g)組分再用硅膠柱分離(石油醚：乙酸乙酯/3:1洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體(4)。 3.0g(HPLC>99%);HPLC、 13C-NMR、ES頂S檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的羅漢果醇衍生物單體(4) 一 致。
[0069]實(shí)施例3:從羅漢果總皂苷90%的提取物制備羅漢果醇衍生物單體(3)和(4)
[0070]將羅漢果提取物50g(羅漢果總皂苷90%，含40%羅漢果甙V，從桂林萊茵生物科技 股份有限公司購(gòu)買）加入250mL的正丙醇的水溶液(正丙醇和水的體積比為2:3)(預(yù)先用甲 酸調(diào)節(jié)至PH值為3.2,在反應(yīng)釜中攪拌溶解，然后升溫至120°C下加熱2小時(shí)，冷卻至室溫后， 反應(yīng)液用1M的NaOH堿液中和至PH值為7，在90-95°C下將正丙醇盡量蒸出，剩下的濃縮液加 入200mL蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬罄鋮s、靜置，將上面的水層分離棄去，得到咖啡色浸膏；分別用 100mL、50mL、50mL乙酸乙酯萃取咖啡色浸膏3次，合并3次萃取液后，在100-120°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀濃縮，把乙酸乙酯完全蒸干，即得到含羅漢果醇衍生物單體(3)和羅漢果醇衍生物單 體(4)的淺咖啡色固體14.2g;用甲醇/乙醇將淺咖啡色固體載入硅膠柱，用乙腈:水(20:1) 梯度洗脫，按先后順序收集不同的流出液，濃縮后得到A(5.4g)、B(4.3g)兩組分;先收集得 到的A(5.4g)組分再用硅膠柱分離(氯仿：乙醇/60: 5洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體(3) 3.58(!^099%);!^(：、13(：-匪1?』3頂3檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的化合物(3)-致。后收集得 到的B(4.3g)組分再用硅膠柱分離(石油醚：乙酸乙酯/6:4洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體 (4)2.8g(HPLC>99%);HPLC、 13C-匪R、ESIMS檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的羅漢果醇衍生物單體 (4) 一致。
[0071]實(shí)施例4:從羅漢果總皂苷80%的提取物制備羅漢果醇衍生物單體(3)和(4)
[0072]將羅漢果提取物50g(羅漢果總皂苷80%，含20%羅漢果甙V，從桂林萊茵生物科技 股份有限公司購(gòu)買）加入250mL的乙醇的水溶液（乙醇和水的體積比為1:1)(預(yù)先用乙二酸 調(diào)節(jié)至PH值為2.6)，在反應(yīng)釜中攪拌溶解，然后升溫至120°C下加熱2小時(shí)，冷卻至室溫后， 反應(yīng)液用1M的Na 2C03堿液中和至PH值為7，在90-95°C下將乙醇盡量蒸出，剩下的濃縮液加入 200mL蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬罄鋮s、靜置，將上面的水層分離棄去，得到咖啡色浸膏；分別用 100mL、50mL、50mL乙酸乙酯萃取咖啡色浸膏3次，合并3次萃取液后，在100-120°C下用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀濃縮，把乙酸乙酯完全蒸干，即得到含羅漢果醇衍生物單體(3)和羅漢果醇衍生物單 體(4)的淺咖啡色固體8.8g;用甲醇/乙醇將淺咖啡色固體載入硅膠柱，用乙腈:水(95:5)梯 度洗脫，按先后順序收集不同的流出液，濃縮后得到A(3.8g)、B(3.0g)兩組分;先收集得到 的A(3.8g)組分再用硅膠柱分離(氯仿：乙醇/60:5洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體(3)2. lg (HPLC>99%);HPLC、13C-NMR、ES頂S檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的化合物(3)-致。后收集得到的B (3.Og)組分再用硅膠柱分離（石油醚：乙酸乙酯/4:1洗脫），得到羅漢果醇衍生物單體(4) 1.88(即1^099%);即^：、 13(：-匪1?43頂3檢測(cè)結(jié)果和實(shí)施例1中的羅漢果醇衍生物單體(4)一 致。
[0073]實(shí)施例5:羅漢果醇衍生物單體(4)抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) [0074] 實(shí)驗(yàn)樣品：
[0075]測(cè)試藥物:實(shí)施例1制備得到的羅漢果醇衍生物單體(4);
[0076] 對(duì)照藥物：紫杉醇（SELLECK; Cat · #S1150);人參皂苷單體Rg3(自上海源葉生物科 技有限公司購(gòu)買，商品貨號(hào)為B21059)。
[0077] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0078]以24種細(xì)胞系（包括23種腫瘤細(xì)胞系和1種人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系）為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞 系，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞(3xl04/mL至2.5xl05/mL)，以每孔100yL接種在96孔板內(nèi)，每個(gè)細(xì)胞系 用一個(gè)96孔板;然后，除對(duì)照藥物紫杉醇以外，以高濃度150μΜ至低濃度2μΜ取7個(gè)對(duì)數(shù)遞減 濃度(每個(gè)濃度設(shè)兩個(gè)復(fù)孔），分別加入測(cè)試藥物溶液和對(duì)照藥物溶液500nL(測(cè)試藥物溶液 或?qū)φ账幬锶芤号渲?分別采用測(cè)試藥物或?qū)φ账幬锶苡?.5%的DMS0溶液）。紫杉醇的加 入濃度為由高濃度ΙμΜ至低濃度0.0014μΜ的7個(gè)三倍遞減濃度。經(jīng)測(cè)試/對(duì)照藥物溶液作用 72小時(shí)后，用CellTiter-Glo⑧（Promega;Cat.#G7573)發(fā)光細(xì)胞活力檢測(cè)法求出各細(xì)胞系 中的每種藥物的每個(gè)濃度對(duì)該系細(xì)胞的增殖抑制百分率，并繪制量效關(guān)系圖，最后根據(jù)圖 中曲線測(cè)算IC 5Q和最高抑制百分率(Emax)，如表1和表2所示。表1:羅漢果醇衍生物單體(4)以 及對(duì)照藥Rg3抑制細(xì)胞增殖活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。
[0079]
[0080] 表2:羅漢果醇衍生物單體(4)以及對(duì)照藥紫杉醇、Rg3抑制細(xì)胞增殖有效性實(shí)驗(yàn)檢 測(cè)結(jié)果。
[0081]
[0082] 使用SPSS Statistics軟件（提供者：IBM corporation，軟件版本:XL fit 21)提 供統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
[0083] 用假設(shè)方差不相等的獨(dú)立樣本檢驗(yàn)（independent-sample T-test)來(lái)檢測(cè)藥物組 與對(duì)照組平均值的差異是否呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)顯著(P〈〇. 05或P〈0.01)。
[0084]分析結(jié)果：
[0085] 1.本發(fā)明羅漢果醇衍生物單體(4)在24個(gè)細(xì)胞系中的平均IC50與對(duì)照藥物人參皂 苷單體Rg3在24個(gè)細(xì)胞系中的平均IC50比較時(shí)，差異呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)顯著(P〈0.05同時(shí)P〈0.01)。 [0086] 2.本發(fā)明羅漢果醇衍生物單體(4)在24個(gè)細(xì)胞系中的平均最高抑制百分率與對(duì)照 藥物紫杉醇以及對(duì)照藥物人參皂苷單體Rg3在24個(gè)細(xì)胞系中的平均最高抑制百分率比較 時(shí)，差異呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)顯著(P〈〇. 05同時(shí)P〈0.01)。
[0087]結(jié)論：
[0088] 1.本發(fā)明羅漢果醇衍生物單體(4)在所有24種所測(cè)細(xì)胞系中的抑制細(xì)胞增殖活性 均高于同類對(duì)照藥物人參皂苷單體Rg3(羅漢果醇衍生物單體(4)的IC5Q小于人參皂苷單體 Rg3 的 IC50)〇
[0089] 2.在所有被測(cè)細(xì)胞系中，本發(fā)明羅漢果醇衍生物單體(4)在人臍血靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 系HUVEC中具有最高抑制細(xì)胞增殖活性（IC 5Q = 10.72yM)，表現(xiàn)出其強(qiáng)大的抗腫瘤血管生成 潛力；羅漢果醇衍生物單體(3)在結(jié)直腸腺癌細(xì)胞系HCT-8中抑制細(xì)胞增殖活性排在其次 (IC 5〇=14.83yM)〇
[0090] 3.本發(fā)明羅漢果醇衍生物單體(4)對(duì)所有24種被測(cè)細(xì)胞系的最高抑制率(有效性） 都非常接近100% ;而對(duì)照藥紫杉醇和人參皂苷單體Rg3在已測(cè)的24種細(xì)胞系中，均只對(duì)2種 細(xì)胞系有近100%的抑制率。這表明羅漢果醇衍生物單體(4)的有效性明顯高于對(duì)照藥物， 且其高抗癌有效性適用于多類癌種。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種羅漢果醇衍生物單體(4)，具有如下結(jié)構(gòu)：羅漢果醇衍生物單體(4)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物為藥物制劑，所述藥物制劑 還包括藥學(xué)可接受的稀釋劑、載體、賦形劑、輔料或媒介物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于，所述藥物制劑的劑型為口服劑型、注射 劑型或局部用藥劑型。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述口服劑型為片劑、粉劑、懸濁液、乳 濁液、膠囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、醋劑、糖漿或巧樣水劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述注射劑型包括水劑、懸濁液或溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸濁 液、水劑、醋劑、粉劑、糊劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、洗劑、灌腸劑或乳劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于，所述組合物用于治療和/或預(yù)防腫瘤和/ 或癌癥； 其中所述的腫瘤和/或癌癥選自： 惡性腫瘤，包括膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、頭和頸癌、食管癌、膽囊癌、 卵巢癌、膜腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌； 淋己系統(tǒng)的造血腫瘤，包括白血病、急性淋己細(xì)胞白血病、急性成淋己細(xì)胞白血病、B- 細(xì)胞淋己癌、T-細(xì)胞淋己癌、霍奇金淋己癌、非-霍奇金淋己癌、毛細(xì)胞淋己癌、外套細(xì)胞淋 己瘤、骨髓瘤和Burkett^ S氏淋己癌； 骨髓系統(tǒng)的造血腫瘤，包括急性和慢性髓細(xì)胞性白血病、骨髓增生異常綜合征和前髓 細(xì)胞性白血病； 間質(zhì)成因的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤； 中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成纖維神經(jīng)瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)銷 瘤；W及 其他腫瘤，包括黑素瘤、精原細(xì)胞瘤、崎胎癌、骨肉瘤、外生性色素頸瘤、甲狀腺濾囊癌 和卡波氏肉瘤。9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物為保健品，還包括任選的保 健品中可接受的載體。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其特征在于，所述組合物用于免疫調(diào)節(jié)、改善微循環(huán) 和/或提局生命質(zhì)量。
【文檔編號(hào)】A23L33/11GK106083972SQ201610522398
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月4日
【發(fā)明人】余佩華, 鄧躍敏, 鐘牧源
【申請(qǐng)人】深圳以諾生物制藥有限公司