作為免疫調(diào)節(jié)劑的1，3，4-*二唑和1，3，4-噻二唑衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及作為治療劑的能夠抑制程序性細(xì)胞死亡1(PD1)信號(hào)傳導(dǎo)通路的1，3，4?二唑和1，3，4?噻二唑化合物。本發(fā)明還涉及治療劑的衍生物。本發(fā)明還包括所述治療劑和衍生物用于經(jīng)由包括抑制由PD?1、PD?L1或PD?L2誘發(fā)的免疫抑制信號(hào)在內(nèi)的免疫增強(qiáng)作用治療病癥的用途和使用它們的療法。
【專利說(shuō)明】作為免疫調(diào)節(jié)劑的1，3,4-噁二唑和1，3,4-噻二唑衍生物
[0001 ]本申請(qǐng)要求2013年9月6日提交的印度臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?012/CHE/2013的權(quán)益；其在此 通過(guò)參考結(jié)合。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及1，3，4-卩惡二唑和1，3，4_噻二唑化合物，其在治療上用作免疫調(diào)節(jié)劑。 本發(fā)明還涉及作為治療劑的包含所述1，3，4-卩惡二唑和1，3，4-噻二唑化合物的藥物組合物。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 程序性細(xì)胞死亡-l(PD-l)是CD28超家族的成員，其與它的兩種配體，PD-L1或PD- L2相互作用時(shí)遞送負(fù)性信號(hào)。PD-1和其配體廣泛表達(dá)并且與其他⑶28成員相比，在T細(xì)胞活 化和耐受方面發(fā)揮更寬范圍的免疫調(diào)節(jié)作用。PD-1和其配體參與減弱感染性免疫和腫瘤免 疫，并且促進(jìn)慢性感染和腫瘤進(jìn)展。PD-1和其配體的生物學(xué)重要性提示了PD-1通路的操作 對(duì)各種人類疾病的治療可能性（Ariel Pedoeem等人，Curr Top Microbiol Immunol. (2011)；350：17-37)〇
[0005] T細(xì)胞活化和功能失調(diào)依賴于直接和調(diào)節(jié)的受體?；谒鼈兊墓δ芙Y(jié)果，共信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)分子可以分為共刺激劑和共抑制劑，其正面和負(fù)面控制T細(xì)胞應(yīng)答的啟動(dòng)、生長(zhǎng)、分化和 功能成熟（Li Shi，等人，Journal of Hematology & Oncology 2013,6:74)〇
[0006] 阻斷程序性細(xì)胞死亡蛋白-l(PD-l)免疫檢查點(diǎn)通路的治療性抗體阻止T細(xì)胞下調(diào) 并且促進(jìn)針對(duì)癌癥的免疫應(yīng)答。多種ro-ι通路抑制劑在臨床實(shí)驗(yàn)的各個(gè)階段顯示出強(qiáng)烈的 活性（RD Harvey，Clinical Pharmacology & Therapeutics(2014);96 2,214_223)〇
[0007] 程序性死亡-l(PD-l)是T細(xì)胞主要表達(dá)的共受體。PD-1與其配體，PD-L1或PD-L2的 結(jié)合，對(duì)于免疫系統(tǒng)的生理調(diào)節(jié)至關(guān)重要。PD-1信號(hào)傳導(dǎo)通路的主要功能作用是抑制自反 應(yīng)性τ細(xì)胞，其用于保護(hù)免于自身免疫性疾病。因此ro-i通路的消除可以導(dǎo)致免疫耐受的破 壞，其可以最終導(dǎo)致發(fā)展出病理性自身免疫。相反，腫瘤細(xì)胞有時(shí)可以指定ro-i通路逃脫免 疫監(jiān)督機(jī)制。因此，阻斷ro-i通路已經(jīng)變?yōu)榘┌Y治療的有吸引力的靶點(diǎn)。目前的方法包括六 種藥劑，其是靶向PD-1和PD-L1的中和抗體或融合蛋白。多于四十個(gè)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行中，以 更好地定義Η)-1阻斷在多種腫瘤類型中的作用(Hyun-Tak Jin等人，Clinical Immunology (Amsterdam,Netherlands)(2014),153(1),145-152)〇
[0008] 國(guó)際申請(qǐng)TO 01/14557、W0 02/079499、W0 2002/086083、W0 03/042402、W0 2004/ 004771、W0 2004/056875、TO2006121168、W02008156712、W02010077634、W02011066389、 W02014055897、W02014059173、W02014100079 和美國(guó)專利 US08735553 報(bào)道了 PD-1 或 PD-L1 抑 制性抗體或融合蛋白。
[0009] 此外，國(guó)際申請(qǐng)W02011161699、W02012/168944、W02013144704 和 W02013132317 報(bào) 道了能夠壓制和/或抑制程序性細(xì)胞死亡i(roi)信號(hào)傳導(dǎo)通路的肽或肽類化合物。
[0010]然而，對(duì)ro-i通路的更有效、更好和/或選擇性的免疫調(diào)節(jié)劑，仍然存在需要。本發(fā) 明提供1，3，4-卩惡二唑和1，3，4-噻二唑化合物，這些化合物能夠壓制和/或抑制程序性細(xì)胞 死亡i(roi)信號(hào)傳導(dǎo)通路。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 根據(jù)本發(fā)明，提供的1，3，4-卩惡二唑和1，3，4-噻二唑化合物或其藥用鹽或立體異構(gòu) 體，它們能夠壓制和/或抑制程序性細(xì)胞死亡i(roi)信號(hào)傳導(dǎo)通路。
[0013] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供式(I)的1，3，4-卩惡二唑和1，3，4-噻二唑化合物：
[0014]
[0015] 其中，
[0016] Rl是選自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的側(cè)鏈；
[0017] X是 S或 0;
[0018] R2 是氫或-CO-Aaa;
[0019] Aaa是選自Ser，Asn或Thr的氨基酸殘基;其中其c-末端是游離末端、是被酰胺化的 或是被酯化的；
[0020] R3是選自36!'，厶]^，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的側(cè)鏈；
[0021]----是任選的鍵；
[0022] R4和R5獨(dú)立地是氫或不存在；
[0023]或其藥用鹽或立體異構(gòu)體。
[0024] 在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，其涉及包含式（I)的化合物或藥用鹽或立體異構(gòu)體的藥 物組合物和用于制備其的方法。
[0025] 在本發(fā)明的再其他方面，其提供式（I)的1，3，4-噁二唑和1，3，4-噻二唑化合物或 其藥用鹽或立體異構(gòu)體的用途，它們能夠壓制和/或抑制程序性細(xì)胞死亡i(roi)信號(hào)傳導(dǎo) 通路。
[0026] 發(fā)明詳述
[0027] 本發(fā)明提供作為治療劑的1，3，4-噁二唑和1，3，4-噻二唑化合物，用于經(jīng)由包括抑 制由H)-1、PD-L1或TO-L2誘發(fā)的免疫抑制信號(hào)的免疫增強(qiáng)作用治療，并且提供使用它們的 療法。
[0028]通過(guò)解釋本發(fā)明的方式，并且不是通過(guò)限制本發(fā)明的方式，提供各個(gè)實(shí)施方案。實(shí) 際上，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將顯而易見(jiàn)的是，在本發(fā)明中，在不偏離本發(fā)明的范圍和精 神的情況下，可以進(jìn)行各種改進(jìn)和變化。例如，作為一個(gè)實(shí)施方案的部分說(shuō)明或描述的特征 可以用于另一實(shí)施方案以獲得更進(jìn)一步的實(shí)施方案。因此，意在本發(fā)明覆蓋這樣的改進(jìn)和 變化，如在所附權(quán)利要求和其對(duì)等物的范圍內(nèi)。本發(fā)明的其他目標(biāo)、特征和方面在以下詳述 中公開(kāi)，或從以下詳述顯而易見(jiàn)。本領(lǐng)域技術(shù)人員要理解，本討論僅是示例性實(shí)施方案的描 述，并且不理解為限制本發(fā)明的較寬范圍。
[0029]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(I)的化合物
[0030]
[0031] 其中，
[0032] Rl是選自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的側(cè)鏈；
[0033] X是 S或 0;
[0034] R2 是氫或-C〇-Aaa;
[0035] Aaa是選自Ser，Asn或Thr的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酰胺化的 或是被酯化的；
[0036] R3是選自36!'，厶]^，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的側(cè)鏈；
[0037]是任選的鍵；
[0038] R4和R5獨(dú)立地是氫或不存在；
[0039]或其藥用鹽或立體異構(gòu)體。
[0040] 亦另一窀施方鎣中，太發(fā)明榲供式（IA)的化合物
[0041]
[0042]或其藥用鹽或立體異構(gòu)體;其中，
[0043] Rl是選自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的側(cè)鏈；
[0044] X是 S或 0;
[0045] R2 是氫或-CO-Aaa;
[0046] R3是選自Ser，Ala，Glu，Gln，Asn或Asp的氨基酸的側(cè)鏈；
[0047] Aaa是選自Ser，Asn或Thr的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酰胺化的 或是被酯化的。
[0048] 在另一審講一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式（IB)的化合物
[0049]
[0055]
[0056] 或其藥用鹽或立體異構(gòu)體;其中，
[0057] Rl是選自56!'，1111'，？116，厶13或厶811的氨基酸的側(cè)鏈；
[0058] R3是選自361'，厶1&，6111，6111，厶811或厶8口的氨基酸的側(cè)鏈；
[0059] Aaa是選自Ser，Asn或Thr的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酰胺化的 或是被酯化的。
[0060]在另一更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式(I)的化合物，其中，
[0061 ] Ri是Ser或Thr的側(cè)鏈；
[0062] R2 是-CO-Aaa;
[0063] Aaa是氨基酸殘基Ser或Thr;其中C-末端是游離的；
[0064] R3 是 Asn，Gin，Glu 或 Asp 的側(cè)鏈。
[0065] 以下實(shí)施方案說(shuō)明本發(fā)明并且不意在將權(quán)利要求限制于所舉例說(shuō)明的具體實(shí)施 方案。
[0066] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，具體提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中X是0。
[0067]根據(jù)另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中X是S。
[0068] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)和(IA)的化合物，其中R2是氫。
[0069] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)的化合物，其中RjPR5是氫。
[0070] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)的化合物，其中R4和抱不存在。
[0071] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)的化合物，其中辦是-〇)-5#。
[0072]根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)的化合物，其中辦是-〇)-11^。
[0073]根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中辦是 Ser的側(cè)鏈。
[0074]根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中辦是 Thr的側(cè)鏈。
[0075]根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA))和(1C)的化合物，其中心是?以， Ala或Asn的側(cè)鏈。
[0076]根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)、（IB)和（1C)的化合物，其中R3是 Asn的側(cè)鏈。
[0077] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)和（IB)的化合物，其中R3是Ser的 側(cè)鏈。
[0078] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Gin的 側(cè)鏈。
[0079] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Glu的 側(cè)鏈。
[0080] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)和（1C)的化合物，其中R3是Ala或 Asp的側(cè)鏈。
[0081] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(IB)和(1C)的化合物，其中Aaa是Ser。
[0082] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(1C)的化合物，其中Aaa是Thr。
[0083] 根據(jù)再另一實(shí)施方案，具體提供的是式(I)、（IA)和（IB)的化合物，其中一種、多種 或全部氨基酸是D氨基酸。
[0084] 在一個(gè)實(shí)施方案中，在沒(méi)有任何限制的情況下，式（I)的具體化合物被列舉在表 ⑴中：
[0085] 表 1
[0086]
[0087]
[0088]
[0089]或其藥用鹽或其立體異構(gòu)體。
[0090]配制本發(fā)明中公開(kāi)的化合物用于藥物施用。
[0091] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含所公開(kāi)的化合物，和藥用 載體或稀釋劑。
[0092] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物還包含至少一種抗癌劑、化療劑或抗增殖 化合物。
[0093]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用作藥物。
[0094]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用作用于治療癌癥 或感染性疾病的藥物。
[0095] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用作藥物，所述藥物 用于治療骨癌、頭或頸癌、胰腺癌、皮膚癌、皮膚或眼內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸 癌、肛門區(qū)域癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍 奇金病(Hodgkin's Desease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's Desease)、食道癌、小腸 癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性 或急性白血病，包括急性髓細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋 巴細(xì)胞白血病、兒童實(shí)體瘤、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng) 系統(tǒng)(CNS)腫瘤、原發(fā)性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波 濟(jì)氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋巴瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌癥，包括石棉誘發(fā)的癌 癥、和所述癌癥的組合。
[0096] 在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用于治療癌癥。
[0097] 在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用于治療感染性疾病。
[0098] 在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明所公開(kāi)的化合物，其用作藥物，所述藥物用于 治療細(xì)菌感染性疾病、病毒感染性疾病或真菌感染性疾病。
[0099] 在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療癌癥的方法，其中所述方法包括向需要其 的受治療者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
[0100]在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)受治療者中由ro-i信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的 免疫應(yīng)答的方法，其包括向受治療者施用治療有效量本發(fā)明的化合物，從而調(diào)節(jié)受治療者 中的免疫應(yīng)答。
[0101] 在另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供抑制受治療者中腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和/或迀移的方法，其 包括向受治療者施用治療有效量的能夠抑制程序性細(xì)胞死亡1(PD1)信號(hào)傳導(dǎo)通路的本發(fā) 明的化合物。
[0102] 所述腫瘤細(xì)胞包括癌癥，比如但不限于骨癌、頭或頸癌、胰腺癌、皮膚癌、皮膚或眼 內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)域癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮 內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng) 癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病 (包括急性髓細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血 ?。和瘜?shí)體瘤、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS) 腫瘤、原發(fā)性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、 表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋巴瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌癥(包括石棉誘發(fā)的癌癥）、和所述 癌癥的組合。
[0103] 在另一更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療受治療者中的感染性疾病的方 法，其包括向受治療者施用治療有效量的能夠抑制程序性細(xì)胞死亡i(roi)信號(hào)傳導(dǎo)通路的 本發(fā)明的化合物，從而對(duì)受治療者治療感染性疾病。
[0104] 本發(fā)明的另一更進(jìn)一步實(shí)施方案提供治療受治療者中的細(xì)菌、病毒和真菌感染的 方法，其包括向受治療者施用治療有效量的能夠抑制程序性細(xì)胞死亡1(PD1)信號(hào)傳導(dǎo)通路 的本發(fā)明的化合物，從而對(duì)受治療者治療細(xì)菌、病毒和真菌感染。
[0105] 感染性疾病包括但不限于HIV、流感、皰疹、賈第蟲、瘧疾、利什曼原蟲、由肝炎病毒 (A、B、&C)導(dǎo)致的致病感染、皰疹病毒（例如、VZV、HSV-I、HAV-6、HSV-lUPCMV、EB(Epstein Barr)病毒）、腺病毒、流感病毒、蟲媒病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯薩奇病毒、冠狀病毒、呼吸 道合胞體病毒、聰腺炎病毒、輪狀病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、細(xì)小病毒、牛痘病毒、HTLV病 毒、登革熱病毒、乳頭瘤病毒、軟疣病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、狂犬病毒、JC病毒和蟲媒病毒腦 炎病毒、細(xì)菌衣原體導(dǎo)致的致病感染、立克次體細(xì)菌、分枝桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球 菌(pneumonococci)、腦膜炎球菌和conococci、克雷白氏桿菌、變形桿菌、沙雷氏菌、假單胞 菌、大腸桿菌、軍團(tuán)桿菌、白喉、沙門氏菌、桿菌、霍亂、破傷風(fēng)、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、細(xì)螺旋 體病、和萊姆病細(xì)菌，以下真菌引起的致病感染:假絲酵母（白色假絲酵母、克魯斯假絲酵母 (1〇'1186；〇、光滑假絲酵母(8131?^七3)、熱帶假絲酵母(1：1'(^；[03118)等）、新型隱球菌、曲霉屬 (煙曲霉（fumigatus)、黑曲霉（niger)等）、毛霉屬（毛霉菌、腐化米霉菌、根霉 (rhizophus))、申克抱子絲菌、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西副球抱子菌 (Paracoccidioides brasiliensis)、粗球抱子菌(Coccidioides immitis)和莢膜組織胞 衆(zhòng)菌（Histoplasma capsulaturn)，和由以下寄生蟲導(dǎo)致的致病感染：痢疾內(nèi)變形蟲 (Entamoeba histolytica)、結(jié)腸小袋蟲（Balantidium coli)、福納氏蟲 (Naegleriafowleri)、棘變形蟲（Acanthamoeba sp·)、吸晚賈第蟲（Girdia lambia)、隱抱 子蟲（Cryptosporidium sp·)、卡氏肺囊蟲（Pneumocystis carinii)、間日癥原蟲 (Plasmodium vivax)、果氏巴貝蟲（Babesia microti)、布魯斯維蟲（Trypanosoma brucei)、克魯斯維蟲（Trypanosoma cruzi)、多氏利什曼原蟲（Leishmania donovani)、鼠 弓衆(zhòng)蟲(Toxoplasma gondi)、巴西曰圓線蟲(Nippostrongylus brasiliensis)。
[0106] 本發(fā)明的化合物可以用作單個(gè)藥物或作為藥物組合物，其中將所述化合物與不同 藥用材料混合。
[0107] 藥物組合物通常通過(guò)口服或吸入途徑施用，但可以通過(guò)腸胃外施用途徑施用。在 本發(fā)明的實(shí)踐中，組合物可以例如通過(guò)口服、靜脈輸注、外用、腹膜內(nèi)、膀胱內(nèi)或鞘內(nèi)施用。 腸胃外施用的實(shí)例包括但不限于關(guān)節(jié)內(nèi)（在關(guān)節(jié)中）、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、和皮下 途徑，包括水性和非水性的等滲無(wú)菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使得 制劑與預(yù)期接受者的血液等滲的溶質(zhì)，以及水性和非水性無(wú)菌懸浮液(其可以包括懸浮劑、 增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、和防腐劑）?？诜┯谩⒛c胃外施用、皮下施用和靜脈施用是優(yōu)選的 施用方法。
[0108] 本發(fā)明的化合物的劑量根據(jù)年齡、重量、癥狀、療效、劑量給藥方案和/或治療次數(shù) 而變化。通常，在成人的情況下，它們可以通過(guò)口服或吸入途徑，以lmg至100mg/次的量，數(shù) 天一次、3天一次、2天一次、一天一次、一天多次施用，或通過(guò)口服或吸入的途徑一天連續(xù)施 用1至24小時(shí)。因?yàn)閯┝渴芨鞣N條件影響，小于上述劑量的量有時(shí)可以足夠好地起作用，或 在一些情況下可以需要較高劑量。
[0109] 本發(fā)明的化合物可以與其他藥物聯(lián)合施用，以用于（1)本發(fā)明的預(yù)防性和/或治療 性藥物的預(yù)防和/或治療功效的補(bǔ)充和/或增強(qiáng)，（2)本發(fā)明的預(yù)防性和/或治療性藥物的動(dòng) 力學(xué)、吸收改善、劑量減少，和/或(3)本發(fā)明的預(yù)防性和/或治療性藥物的副作用的減少。
[0110] 包含本發(fā)明的化合物和其他藥物的伴隨藥物（concomitant medicine)可以作為 其中在單個(gè)制劑中含有兩種成分的組合制劑施用，或以分開(kāi)的制劑施用。通過(guò)分開(kāi)的制劑 施用包括同時(shí)施用和間隔一些時(shí)間施用。在間隔一些時(shí)間施用的情況下，可以首先施用本 發(fā)明的化合物，接著施用另一藥物，或可以首先施用另一藥物，然后施用本發(fā)明的化合物。 各個(gè)藥物的施用方法可以相同或不同。
[0111] 基于已經(jīng)在臨床使用的劑量，可以適當(dāng)選擇其他藥物的劑量?？梢愿鶕?jù)要施用的 受治療者的年齡和體重、施用方法、施用時(shí)間、要治療的病癥、癥狀和其組合適當(dāng)選擇本發(fā) 明的化合物和其他藥物的復(fù)合比例。例如，基于1質(zhì)量份的本發(fā)明的化合物，其他藥物可以 以0.01至100質(zhì)量份的量使用。其他藥物可以是適當(dāng)比例的兩種或更多種任意藥物的組合。 基于上述機(jī)制，補(bǔ)充和/或增強(qiáng)本發(fā)明的化合物的預(yù)防性和/或治療性功效的其他藥物不僅 包括已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的那些，而且包括未來(lái)將要發(fā)現(xiàn)的那些。
[0112] 該伴隨使用發(fā)揮預(yù)防性和/或治療性作用所針對(duì)的疾病不特別限制。伴隨藥物可 以用于任何疾病，只要其補(bǔ)充和/或增強(qiáng)本發(fā)明的化合物的預(yù)防性和/或治療性功效即可。
[0113] 本發(fā)明的一種或多種化合物可以與現(xiàn)有化療劑同時(shí)使用或以混合形式使用?；?劑的實(shí)例包括烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝物、抗癌抗體、植物來(lái)源的生物堿、拓?fù)洚悩?gòu)酶 抑制劑、激素藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑、P-糖蛋白抑制劑、鉬配合物衍生物、其他免 疫治療性藥物和其他抗癌藥物。此外，其可以與癌癥治療輔助劑，如白細(xì)胞減少癥(嗜中性 白血球減少癥)治療藥物、血小板減少癥治療藥物、止吐和癌癥疼痛干預(yù)藥物，同時(shí)使用或 以混合形式一起使用。
[0114] 在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種或多種化合物可以與其他免疫調(diào)節(jié)劑和/或增效 劑同時(shí)或以混合形式一起使用。免疫調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括各種細(xì)胞因子、疫苗和佐劑。刺激免 疫應(yīng)答的這些細(xì)胞因子、疫苗和佐劑的實(shí)例包括但不限于 β或 γ ，IL-l，IL-2，IL-3，IL-12，Poly(I:C)^PCPG。
[0115] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，增效劑包括環(huán)磷酰胺和環(huán)磷酰胺的類似物，抗-TGF0和伊馬 替尼（Imatinib) (Gleevac)，有絲分裂抑制劑，如紫杉醇，舒尼替尼(Sunitinib) (Sutent)或 其他抗血管生成劑，芳香酶抑制劑，如來(lái)曲唑，A2a腺苷受體(A2AR)拮抗劑，血管生成抑制 劑，蒽環(huán)類抗生素，奧沙利鉬(oxaliplatin)，阿霉素(doxorubicin)，TLR4詰抗劑，和IL-18 拮抗劑。
[0116] 除非另有限定，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本文中的主題術(shù)語(yǔ)的領(lǐng)域 中的通常所理解的相同的意義。如本文中所使用的，提供以下定義以幫助理解本發(fā)明。
[0117] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)'一種或多種化合物'是指本發(fā)明中公開(kāi)的化合物。
[0118] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"包含(comprise)"或"包含(comprising)"通常以包括的 意義使用，即允許存在一個(gè)或多個(gè)特征或成分。
[0119]如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"包括(including)"以及其他形式，如"包括（include)"， "包括（includes)"，和"包括（included)"不受限制。
[0120] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"氨基"是指-NH2基團(tuán)。除非有相反解釋或陳述，本文描述 和要求的所有氨基均可以是取代的或未取代的。
[0121] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"氨基酸"是指在α碳具有L或D立體化學(xué)的氨基酸。
[0122] 采用"藥用鹽"意為包括其一種鹽的形式的式（I)的化合物活性成分，尤其是如果 與之前使用的活性成分的游離形式或活性成分的任何其他鹽形式相比，該鹽形式賦予該活 性成分改善的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)?；钚猿煞炙幱名}形式還可以首次為該活性成分提供其 之前不具有的所需的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，并且可以甚至就其在體內(nèi)的治療功效而言對(duì)該 活性成分的藥物代謝動(dòng)力學(xué)具有積極影響。
[0123] 〃藥用〃意為其可以用于制備通常安全、無(wú)毒的、并且既不是生物學(xué)上不希望的也 不是其他方面不希望的藥物組合物，并且包括其適于獸用以及人藥用。
[0124] 術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)體"是指式（I)的化合物的任何對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或幾何 異構(gòu)體(不論它們?cè)诤翁幘哂惺中曰蛩鼈兒螘r(shí)帶有一個(gè)或多個(gè)雙鍵）。當(dāng)式（I)的化合物和 相關(guān)分子式是手性的時(shí)，它們可以以外消旋或以光學(xué)活性形式存在。因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的化 合物的外消旋物或立體異構(gòu)體的藥學(xué)活性可能不同，可能希望使用對(duì)映異構(gòu)體。在這些情 況下，可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學(xué)或物理方法將終產(chǎn)物或甚至中間體分離為對(duì)映 異構(gòu)化合物或甚至以原樣在合成中使用。在外消旋胺的情況下，非對(duì)映異構(gòu)體通過(guò)與光學(xué) 活性拆分劑反應(yīng)從所述混合物形成。適當(dāng)?shù)牟鸱謩┑膶?shí)例是光學(xué)活性酸如R和S形式的酒石 酸、二乙?；剖?、二苯甲?；剖帷⒈馓宜?、蘋果酸、乳酸、合適的N-保護(hù)的氨基酸(例 如N-苯甲?；彼峄騈-苯黃?；彼幔蚋鞣N光學(xué)活性樟腦磺酸。此外有利的是在光 學(xué)活性拆分劑(例如固定在硅膠上的二硝基苯甲?；交拾彼?，三乙酸纖維素或碳水化 合物的其他衍生物或手性衍生的甲基丙烯酸聚合物)的幫助下的色譜對(duì)映異構(gòu)體拆分。
[0125] 術(shù)語(yǔ)〃受治療者〃包括哺乳動(dòng)物(特別是人)和其他動(dòng)物，如馴養(yǎng)動(dòng)物(例如，家庭寵 物，包括貓和狗)和非馴養(yǎng)動(dòng)物(如野生動(dòng)物）。
[0126] "治療有效量"或"有效量"是指本發(fā)明的一種或多種化合物（i)治療或預(yù)防特定疾 病、病癥或綜合征（ii)減輕、改善或消除特定疾病、病癥或綜合征的一個(gè)或多個(gè)癥狀或 (iii)阻止或延遲本文所述的特定疾病、病癥或綜合征的一個(gè)或多個(gè)癥狀的開(kāi)始的足夠量。 在癌癥的情況下，治療有效量的藥物可以減少癌細(xì)胞的數(shù)量;降低癌尺寸;抑制（即，減慢到 一定程度或備選地終止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)入周圍器官;壓制（即，減慢到一定程度或備選地終止） 腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或一定程度上緩解與癌癥相關(guān)的一個(gè)或多個(gè)癥 狀。在感染性疾病狀態(tài)的情況下，治療有效量是足以降低或緩解感染性疾?。ㄓ杉?xì)菌、病毒 和真菌引起的感染癥狀)的量。
[0127] 天然存在氨基酸在全文中均由下表2中指出的常規(guī)三字母縮寫標(biāo)識(shí)。
[0128] 表2 (氨基酸編碼）
[0129]
[0130]本文整個(gè)說(shuō)明書中使用的縮寫可以被總結(jié)在下文中，其具有它們的特定意義。 [0131]。(:（攝氏度）J(delta); % (百分?jǐn)?shù)）；鹽水(NaCl溶液）；CH2C12/DCM(二氯甲烷）；br s(寬的單重峰）；Cs2C03(碳酸銫）；d(雙重峰）；DMF(二甲基甲酰胺）；DMS0(二甲亞砜）；DMS〇- d6(氘化DMS0);EDC.HCl/EDCI(l-(3-二甲基氨基丙基）-3-碳二亞胺鹽酸鹽）；Et2NH(二乙 胺）；Fm〇c(芴基甲氧基碳酰氯）；g或gr(克）；!1或!12(氫）；H20(水）；H0Bt/H0BT(l-羥基苯并三 唑）；HC1 (鹽酸）；h或hr (小時(shí)）；Hz (赫茲）；HPLC(高效液相色譜）；12(碘）；ΚΚ03 (碳酸鉀）； LCMS(液相色譜質(zhì)譜）;MeOH(甲醇）;mmol(毫摩）;Μ(摩爾）；μL(微升）;mL(毫升）;mg(毫克）;m (多重峰）；MHz (兆赫）；MS(ES)(質(zhì)譜-電噴霧）；min.(分鐘）；Na(鈉）；NaHC03(碳酸氫鈉）； ΝΗ2ΝΗ2.Η20(水合肼）；NMM(N-甲基嗎啉）；Na 2S〇4(硫酸鈉）；N2(氮）；NMR(核磁共振譜）；ro-Ll (程序性死亡-配體1);H)-L2(程序性細(xì)胞死亡1配體2);制備型HPLC/制備型HPLC(制備型高 效液相色譜）；S(單重峰）；沱11 (叔丁基）；TEA/Et3N(三乙胺）；TLC(薄層色譜）；THF(四氫呋 喃）；TIPS(三異丙基硅烷）；TFA/CF3COOH(三氟乙酸）；t(三重峰）；tR=(保留時(shí)間）；TPP(三苯 基勝）；等。
[0132] 實(shí)驗(yàn)
[0133] 本發(fā)明的實(shí)施方案提供使用適當(dāng)材料的根據(jù)以下實(shí)施例的式（I)的化合物的制 備。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，以下制備程序的條件和方法的已知改變可以用于制備這些化 合物。此外，通過(guò)詳細(xì)描述的步驟，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以制備本發(fā)明的其他化合物。
[0134] 起始材料通常從商業(yè)來(lái)源，比如從美國(guó)或德國(guó)的Sigma-Aldrich ;美國(guó)的Chem- Impex;中國(guó)的G.L.Biochem和印度的Spectrochem獲得。
[0135] 化合物的純化和表征
[0136] 分析型HPLC方法:使用ZIC HILIC 200A。柱(4.6mmX250mm，5ym)進(jìn)行分析型HPLC， 流速:1. OmL/min。使用的洗脫條件是:緩沖液A: 5mmo 1乙酸氨，緩沖液B:乙腈，用90 %緩沖液 B平衡柱，并且在30min期間內(nèi)用90 %至40 %緩沖液B梯度洗脫。
[0137] 制備型 HPLC 方法：使用 SeQuant ZIC HILIC 200A。柱（10mmX250mm，5ym)，流速： 5.〇1111/1]1；[11進(jìn)行制備型!^]^。使用的洗脫條件是:緩沖液4:51111]1〇1乙酸氨（用乙酸調(diào)節(jié)至口!1- 4)，緩沖液B:乙腈，用90%緩沖液B平衡柱并且在20min內(nèi)用90%至40%緩沖液B梯度洗脫。
[0138] 利用具有G1315B DAD的Agilent 1100系列HPLC，使用Mercury MS柱或利用具有 G1315B DAD的Agilent 1100系列HPLC的Agilent LC/MSD VL單四極（single quad)，使用 Mercury MS柱或使用具有SPD-20A DAD的Prominence UFLC系統(tǒng)的Shimadzu LCMS 2020單 四極，在 API 2000LC/MS/MS 三聯(lián)四極（triple quad)(應(yīng)用生物系統(tǒng)（Applied bio systems))進(jìn)行 LCMS 〇
[0139] 實(shí)施例1:化合物1的合成
[0140] 步驟 la:
[0141]
[0142] 將碳酸鐘(7 · 9g，57 · 39mmo 1)和甲基鵬（1 · 3mL，21 · 04mmol)加入至化合物 la (5 · 0g， 19.13mmo 1)在DMF (35mL)中的溶液中并且在室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將 反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分開(kāi)。將有機(jī)層用水、鹽水洗滌，經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓 下蒸發(fā)，得到5.0g的化合物lb(收率:96.1%)。^^:176.1(1-8〇。) +。
[0143] 步驟 lb:
[0144]
[0145] 水合肼(7 · 2mL)加入至化合物lb(5.0g，18.16mmo 1)在甲醇（30mL)中的溶液中并且 在室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)，將獲得的殘留 物在水和乙酸乙酯之間分開(kāi)。將有機(jī)層用水、鹽水洗滌，經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓下蒸發(fā)，得 到4.0g 的化合物 lc(收率:80.0%)。1^1^:276.3(]\1+!〇 +。
[0146] 步驟lc:
[0147]
：
[0148] 在0°(：將匪1(0.671111，6.52111111〇1)緩慢加入至1。（1.28,4.35111111〇1)，1(1(1.43 8， 4·35mmol)，H0Bt(0·7g，5·22mmol)和EDC·HCl(0·99g，5·22mmol)在DMF(15mL)中的攪拌溶液 中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)用冰猝滅并且將沉 淀的固體過(guò)濾并在真空下干燥，獲得2.0g純的產(chǎn)物le(收率:83.3%)。^^:591.5(1+他)+。
[0149] 步驟 Id:
[0150]
[0151 ]在 0 °C 向 le (1 · 5g，2 · 63mmol)在無(wú)水 THF( 15 · OmL)和 DMF( 5 · OmL)中的攪拌溶液中加 入三苯基膦（1.38g，5.27mmol)和碘（1.33g，5.27mmol)。在將碘完全溶解后，在冰冷的溫度 將Et3N( 1.52mL，10.54mmol)加入至該反應(yīng)混合物中。讓反應(yīng)混合物達(dá)到室溫并攪拌4h。反 應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)用冰水猝滅并且用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用飽和硫代 硫酸鈉和鹽水溶液洗滌。將分離的有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓下蒸發(fā)，得到殘留物，將 其通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己烷中的30%乙酸乙酯)進(jìn)一步純化，獲得0.8g的化合物If (收
[0152] 步驟 le:
[0153]
[0154] 在 〇°C 通過(guò)將二乙胺（20.01^)加入至化合物1以0.88，1.45臟〇1)在〇12(：1 2(20.01^) 中的溶液中而將Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)。將反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h。將得到的溶液在真空中濃縮，得到 厚膠質(zhì)殘留物。將粗制化合物通過(guò)中性鋁土柱色譜(洗脫劑:氯仿中的2%甲醇)純化，獲得 0.388的化合物18(收率:80.0%):1^1^:329.4(]\1+!〇 +。
[0155] 步驟 If:
[0156]
[0157] 在 〇°C 將化合物 lg(0.38g，l · 16mmol)，溶解在 DMF(lOmL)中的 TEA(0.33mL， 2.32mmol)逐滴加入至lh(0.55g，1.39mmol)的溶液中用于脲鍵形成并且將混合物在室溫?cái)?拌2h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)用冰水猝滅，將沉淀的固體過(guò)濾并在真空下干 燥，得到粗制化合物，其進(jìn)一步通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己烷中的0-35%乙酸乙酯）純化， 得到 〇.4g 產(chǎn)物li (收率:59.7%)。1^1^:586.4(]\1+!〇 +。
[0158] 步驟 1S:
[0159]
[0160] 向化合物1 i (0 · 4g，0 · 68mmo 1)在CH2C12 (5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(5mL)和催 化量的三異丙基硅烷并且在室溫?cái)嚢?h以移除酸敏感性保護(hù)基團(tuán)。將得到的溶液在氮下濃 縮并且將固體材料通過(guò)如實(shí)驗(yàn)條件下描述的制備型HPLC方法純化（收率A.OSghLCMS: 318.0(M+H) + ;HPLC:tR=10.96 分鐘。
[0161] 化合物 1 h (N〇2-C6H4-〇C〇-Thr (tBu) -〇*Βιι)的合成：
[0162]
[0163] 在0°C向氯甲酸4-硝基苯酯(4.798,23.77111111〇1)在0〇1(25.〇1^)中的溶液中，加入 H-Thr (tBu) -OtBu (5 · 0g，21 · 6 lmmo 1) TEA( 6 · 2mL，43 · 22mmo 1)在CH2CI2 (25mL)中的溶液并且 將其攪拌30分鐘。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。反應(yīng)完成后，將其用DCM稀釋并且用1.0M的 檸檬酸洗滌，接著用1.0M碳酸鈉溶液洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓下蒸發(fā)，獲得 粗制化合物lh，將其進(jìn)一步通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己烷中的0-5%乙酸乙酯）純化，得到 3.(^的產(chǎn)物111。1!1匪1?(0)(：13,40010^):31.17(8,9!1)，1.28((1，3!〇，1.50(8,9!〇,4.11(111， lH)，4.28(m，lH)，5.89(d，lH)，7.37(d，2H)，8.26(d，2H)。
[0164] 實(shí)施例2:化合物2的合成
[0165] 步驟 2a:
[0166]
[0167] 在0°(：將麗1(1.811^，18.15111111〇1)緩慢加入至1。（2.(^，7.26111111〇1)，2(1(4.3 8， 7 · 26mmol)、H0Bt(1 · 17g，8 · 7mmol)和EDC· HC1 (1 · 66g，8 · 7mmol)在DMF( 15mL)中的攪拌溶液 中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)用冰猝滅，將沉淀 的固體過(guò)濾并在真空下干燥，獲得3.7g的純的產(chǎn)物2e(收率:59.6%)。^^:854.4(1+!〇 +。
[0168] 步驟 2b:
[0169]
[0170] 在0°C 向溶解在于燥THF(25 · OmL)和DMF(10 · OmL)中的2e(3 · 7g，4 · 33mmol)的攪拌 溶液中加入三苯基膦(2.28g，8.66mmo 1)和碘(2.2g，8.66mmo 1)。將碘完全溶解后，在相同溫 度加入Et3N(2.5mL，17.32mm0l)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確 認(rèn)。將反應(yīng)用冰水猝滅并且用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用飽和硫代硫酸鈉和鹽水溶液洗滌。 將分開(kāi)的有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓下蒸發(fā)，將其進(jìn)一步通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己 烷中的30 %乙酸乙酯）純化，得到2. Og的化合物2f (收率:55 % )。LCMS: 858.4(M+Na) +。
[0171] 步驟 2c:
[0172]
[0173] 在 〇uC 將二乙肢（30.011^)加人全化合物2八2.(^，1.17111111〇1)在〇12(：12(30.01^)中的 溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢鑜h。將得到的溶液在真空中濃縮，得到稠的膠質(zhì)殘留物。 將粗制化合物通過(guò)中性鋁土柱色譜(洗脫劑：氯仿中的2%甲醇）純化，獲得l.Og化合物2g (收率：71.4%)。1^1^:614.5(]\1+!〇 +。
[0174] 步驟 2d:
[0175]
[0176] 在〇°C 將溶解于DMF( 10mL)中的化合物2g( 1 · 0g，1 · 63mmol)和ΤΕΑ(0 · 47mL， 3.2mmol)逐滴加入至lh(0.7g，1.79mmol)的溶液中。然后使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫并且繼續(xù) 攪拌2h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反應(yīng)用冰水猝滅，將沉淀的固體過(guò)濾并在真空下 干燥。將獲得的粗制化合物進(jìn)一步通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己烷中的0-30%乙酸乙酯）純 化，得到 〇.8g 的產(chǎn)物 2i (收率:57.1%)。1^1^:871.6(]\1+!〇 +。
[0177] 步驟 2e:
[0178]
[0179] 向化合物2丨（0.88,0.92111111〇1)在012(：1 2(61^)中的溶液中加入三氟乙酸(61^)和催 化量的三異丙基硅烷并且在室溫?cái)嚢?h。將得到的溶液在氮?dú)庀聺饪s并且將固體材料通過(guò) 實(shí)驗(yàn)條件下所描述的制備型HPLC方法純化（收率：0.065g) dPLC: tR = 12.01分鐘；LCMS: 361.34(M+H)+〇
[0180] 實(shí)施例3:化合物3的合成
[0181] 步驟 3a:
[0182]
[0183] 將勞森試劑（Lawesson ' s reagent) (2 · 85g，7 · 03mmol)加入至化合物2e(4g， 4.68mmo 1)在THF(40mL)中的溶液中，并在75 °C攪拌4h。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。將反 應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)并且將獲得的殘留物在冰水和乙酸乙酯之間分開(kāi)。將有機(jī)層用 NaHC03溶液洗滌，然后用鹽水溶液洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na2S〇4干燥，過(guò)濾并且在減壓下蒸發(fā)，獲 得殘留物，將其進(jìn)一步通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫劑：己烷中的0-5%乙酸乙酯）純化，獲得2.7g 的化合物 3a(收率:67.66%)。1^1^:852.3(]\1+!〇 +。
[0184] 步驟 3b:
[0185：
[0186」 旭;寸一mjja J 丄g，丄?丄（mmol 丄· omL·)中的溶'液 中而將化合物3a上的Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將得到的溶液在 真空中濃縮，得到稠的膠質(zhì)殘留物。將粗制化合物通過(guò)中性鋁土柱色譜(洗脫劑：己烷中的 0-50 %乙酸乙酯，然后氯仿中的0-5 %甲醇）純化，獲得0.62g的化合物3b。LCMS: 630.5 (M+H )+。
[0187]步驟 3c:
[0188]
[0189] 向化合物3b (0.6g)在CH2C12 (7.5mL)中的溶液中加入三氟乙酸（2.5mL)和催化量的 三異丙基硅烷并且在室溫?cái)嚢?h。將得到的溶液在真空中濃縮，得到0.13g的化合物3,將其 通過(guò)實(shí)驗(yàn)條件下所描述的制備型HPLC方法純化。LCMS: 232.3 (M+H) +。
[0190] 實(shí)施例4:化合物4的合成
[0191] 步驟 4a:
[0192]
[0193] 通過(guò)在室溫將THF(lOmL)中的化合物313(0.58,7.9111111〇1)與化合物46(0.34 8， 7·9mmol)偶聯(lián)來(lái)進(jìn)行脲連接。通過(guò)加入THF(10mL)中的TEA(0·16g，15·8mmol)來(lái)引發(fā)偶聯(lián) 并且將得到的混合物在室溫?cái)嚢琛?2h后，從反應(yīng)材料中蒸發(fā)THF，并且在水和乙酸乙酯之間 分開(kāi)。將有機(jī)層用水、鹽水洗滌，經(jīng)Na2S04干燥并且在減壓下蒸發(fā)，獲得4a，將其進(jìn)一步通過(guò) 硅膠柱色譜（洗脫劑：己烷中的0-50 %乙酸乙酯）純化，得到0.45g的產(chǎn)物4a (收率： 61.64%)〇LCMS：921.8(M+H) + 〇
[0194] 步驟 4b:
[0195] 4a
[0196] 在惰性氣氛下向化合物4a (0.55g)在甲醇（20mL)中的溶液中加入10 % Pd-C (0.15g)。將混合物在H2氣氛下攪拌lh。反應(yīng)的完成通過(guò)TLC分析確認(rèn)。然后Pd-C催化劑通過(guò) 經(jīng)Celite?墊過(guò)濾移除并且用2〇mL甲醇洗滌。將合并的有機(jī)濾液在減壓下蒸發(fā)，從而分離產(chǎn) 物 4b(收率:0.428,85.71%)。1^1^:831.5(]\1+!〇 +。
[0197] 步驟 4c:
[0198]
[0199] 向化合物4b(0.2g，0.3mmo 1)在CH2C12(5mL)中的溶液中，加入三氟乙酸（5mL)和催 化量的三異丙基硅烷，并且在室溫?cái)嚢?h。將得到的溶液在真空中濃縮并且將固體材料通 過(guò)實(shí)驗(yàn)條件下所描述的制備型HPLC方法純化（收率:0.0658)。冊(cè)^：:4=14.1分鐘江015 :377.3(M+H) + 〇
[0200] 化合物4e，（Nf^-CsHfOCO-ThHOtBiO-Bzl，）的合成：
[0201]
[0202]向化合物Fmoc-Thr (*Βιι) -OH(15g，37 · 73mmo 1)在 10OmL DMF中的溶液中，加入 Cs2C03(14.75g，45.2mmo 1)并且將得到的混合物冷卻至0°C。向冷卻的反應(yīng)混合物中加入芐 基溴(7.74g，45.2mmol)并且.將溶液在冰冷溫度攪拌30min，然后在室溫?cái)嚢?2h。將反應(yīng)混 合物在減壓下濃縮并用乙酸乙酯稀釋。將有機(jī)層用水洗滌，然后用鹽水溶液洗滌并經(jīng)Na2S04干燥。將過(guò)濾的溶液濃縮并通過(guò)硅膠柱色譜純化(洗脫劑：己烷中的0-30%乙酸乙酯），得到 18g 的 4c，為白色固體。1^1^:433.1(]?-0%11) +，397.2(]\1-0821) +。
[0203] 在室溫?cái)嚢柘?，通過(guò)向CH2Cl2(100mL)中的化合物4d(25g，51.3mmol)中加入二乙胺 (100mL)而將化合物4c (25g，51.3mmo 1)上的Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)lh。將得到的溶液在真空中濃 縮并且將稠的殘留物通過(guò)中性鋁土柱色譜(洗脫劑：己烷中的0-50%乙酸乙酯，然后氯仿中 的0-5 %甲醇）純化，獲得10.6g的化合物4d。LCMS: 266.5 (M+H) +。
[0204]
[0205] 向化合物4d(l .5g，5.65mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液中，加入TEA(1 · 14g， 11.3mmol)，并且將溶液在室溫?cái)嚢?-10分鐘。向該混合物中加入氯甲酸4-硝基苯酯（1.4g， 6.78mmo 1)在CH2C12 (1 OmL)中的溶液并且將得到的混合物在室溫?cái)嚢?2h。反應(yīng)的完成通過(guò) TLC分析確認(rèn)。反應(yīng)完成后，將其用DCM稀釋并且用1.0M硫酸氫鈉溶液洗滌，然后用1.0M碳酸 鈉溶液洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥，過(guò)濾并且在減壓下蒸發(fā)，獲得粗制化合物4e，將其通過(guò) 硅膠柱色譜（洗脫劑：己烷中的0-20 %乙酸乙酯）進(jìn)一步純化，獲得0.7g的產(chǎn)物4e。4匪R (DMS0-d6,300MHz):Sl.04(s，9H)，1.16(d，3H)，4.11(m，lH)，5.11(m，3H)，6.91(d，2H)，7.40 (m，5H)，8.10(d，2H)，8.26(br s，lH)。
[0206] 基于上述實(shí)驗(yàn)步驟制備下表3中的化合物。
[0207] 表 3
[0209]
[0210]
[0211] 可以通過(guò)按照與上文所述類似的步驟制備（具有本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)改 變)的下表4中所示的化合物也包括在本申請(qǐng)的范圍內(nèi)。
[0212] 表4
[0213]
[0214] 在重組PD-L1/PD-L2的存在下小鼠脾細(xì)胞增殖的挽救:
[0215] 使用重組小鼠 PD-Ll(rm-PDL-1，目錄號(hào)：1019-B7-100和R&D系統(tǒng)）作為H)-L1的來(lái) 源。
[0216]必需品：
[0217] 從6-8周齡C57 BL6小鼠獲得的小鼠脾細(xì)胞；RPMI 1640(GIB⑶，Cat#11875);高葡 萄糖 01^]?(618〇)，03丨#06429);胎牛血清[辦(310116,03丨#5!130071.03] ;青霉素（10000單位/ ml)-鏈霉素（10,000μg/ml)液體(618〇)，03七#15140-122);]\^]\1丙酮酸鈉溶液100111]\1(10(^)， 液體（GIB⑶，Cat#11360);非必需氨基酸（GIB⑶，Cat#11140);L-谷氨酰胺（GIB⑶，Cat# 25030);抗-CD3 抗體（eBiosciences-16-0032);抗-CD28 抗體（eBiosciences-16-0281);ACK 裂解緩沖液（lmL) (GIBC0，Cat#-A10492) ;Histopaque(密度-1 ·083gm/mL) (SIGMA 10831); 臺(tái)盼藍(lán)溶液（SIGMA_T8154);2mL Norm Ject Luer Lock注射器-(Sigma 2014-12) ;40μΜ尼 龍細(xì)胞濾器(BD FALCON 35230);血球計(jì)(Bright line-SIGMA Z359629);FACS緩沖液(PBS/ 0 · 1 %BSA):具有0 · 1 %牛血清白蛋白（BSA) (SIGMA A7050)和疊氮化鈉 (SIGMA 08591)的磷 酸緩沖鹽水(PBS)pH 7.2(HiMedia TS1006);5mM CFSE儲(chǔ)存溶液:CFSE儲(chǔ)存溶液通過(guò)用180μ L的二甲亞砜(DMSO C2H6S0，SIGMA-D-5879)稀釋凍干的CFSE而制備并且等分到小管中用于 進(jìn)一步使用。將工作濃度從1〇μΜ滴定到ΙμΜ. (eBioscience-650850-85) ;0.05%胰蛋白酶和 0.02%EDTA(SIGMA 59417C);96-孔形式 ELISA 板（Corning CLS3390);BD FACS 口徑 (E6016);重組小鼠 B7-H1/PDL1 Fc Chimera，（rm-PD-Ll 目錄號(hào)：1019-B7-100)〇[0218] 方案
[0219]脾細(xì)胞制備和培養(yǎng)：
[0220] 將通過(guò)在40μπι細(xì)胞濾器磨碎小鼠脾而獲得的在50mL離心管中的脾細(xì)胞進(jìn)一步在 室溫用lmL ACK裂解緩沖液處理5min。在用9mL RPMI完全培養(yǎng)基洗滌后，將細(xì)胞重懸在15mL 管中的3mL的lxPBS中。將3mL Histopaque小心加入至管底，不破壞上面覆蓋的脾細(xì)胞懸浮 液。在室溫在800xg離心20min后，小心收集脾細(xì)胞的不透明層，不使層破壞/混合。用冷的 lxPBS洗滌脾細(xì)胞兩次，然后使用臺(tái)盼藍(lán)排除方法進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù)，并且進(jìn)一步用于基于細(xì) 胞的測(cè)定。
[0221] 將脾細(xì)胞培養(yǎng)在1^11完全培養(yǎng)基(1^11 + 10%胎牛血清+111^丙酮酸鈉+10,000單 位/ml青霉素和10,000μg/ml鏈霉素）中，并且在37°C維持在具有5%C02的C02溫箱中
[0222] CFSE增殖測(cè)定：
[0223] CFSE是被動(dòng)散布到細(xì)胞中并且結(jié)合于細(xì)胞內(nèi)蛋白的染料。將lxlO6個(gè)細(xì)胞/mL的所 獲得的脾細(xì)胞用預(yù)溫?zé)岬? xPBS/0.1 % BSA溶液中的5μΜ的CFSE在37 °C處理1 Omin。將5體積 的冰冷的培養(yǎng)基使用于細(xì)胞并在冰上孵育5分鐘以將過(guò)量的CFSE猝滅。將標(biāo)記的脾細(xì)胞用 冰冷的完全RPMI培養(yǎng)基進(jìn)一步洗滌三次。將CFSE標(biāo)記的lxlO5個(gè)脾細(xì)胞加入至含有MDA- MB231細(xì)胞(在高葡萄糖DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的lxlO5個(gè)細(xì)胞)或重組人roL-l(100ng/mL)和測(cè) 試化合物的孔中。用抗-小鼠 CD3和抗-小鼠 CD28抗體(各自1 yg/mL)刺激脾細(xì)胞，并且將培養(yǎng) 物進(jìn)一步在37°C用5%⑶2孵育72h。收獲細(xì)胞并且用冰冷的FACS緩沖液洗滌兩次并且通過(guò) 流式細(xì)胞術(shù)用488nm激發(fā)和521nm發(fā)射濾波器分析增殖百分?jǐn)?shù)。
[0224]數(shù)據(jù)搜集，加工和推斷：
[0225] 使用細(xì)胞尋找FACS程序分析脾細(xì)胞增殖百分?jǐn)?shù)，并且在減去％背景增殖值并且相 對(duì)于作為100 %的％刺激的脾細(xì)胞增殖（陽(yáng)性對(duì)照)標(biāo)準(zhǔn)化后，評(píng)估化合物導(dǎo)致的脾細(xì)胞增 殖的挽救百分?jǐn)?shù)。
[0226] 刺激的脾細(xì)胞:脾細(xì)胞+抗-⑶3/⑶28刺激
[0227] 背景增殖:脾細(xì)胞+抗-CD3/CD28+PD-L1
[0228] 化合物增殖:脾細(xì)胞+抗-⑶3/⑶28+PD-L1+化合物
[0229] 通過(guò)在配體(PDL-1)的存在下向抗-CD3/CD28刺激的脾細(xì)胞中加入需要濃度的化 合物來(lái)檢測(cè)化合物效應(yīng)。
[0230] 表 5
[0231]
[0232]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式(I)的化合物其中， 化是選自Ser，Τ'虹，F(xiàn)*he，Ala或Asn的氨基酸的側(cè)鏈； X是S或0; 化是氨或-C〇-Aaa; Aaa是選自Ser，Asn或化r的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酷胺化的或是 被醋化的； Rb是選自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的側(cè)鏈； ----是任選的鍵； R4和Rs獨(dú)立地是氨或不存在； 或其藥用鹽或立體異構(gòu)體。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物是式(IA)的化合物：或其藥用鹽或立體異構(gòu)體;其中， 化是選自Ser，Τ'虹，F(xiàn)*he，Ala或Asn的氨基酸的側(cè)鏈； X是S或0; 化是氨或-C〇-Aaa; Rb是選自Ser，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的側(cè)鏈； Aaa是選自Ser，Asn或化r的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。3. 根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物，其是式(IB)的化合物：或其藥用鹽或立體異構(gòu)體;其中， 化是選自Ser，Τ'虹，F(xiàn)*he，Ala或Asn的氨基酸的側(cè)鏈； Rb是選自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的側(cè)鏈； Aaa是選自Ser，Asn或化r的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物，其是式(IC)的化合物：或其藥用鹽或立體異構(gòu)體;其中， 化是選自Ser，Τ'虹，F(xiàn)*he，Ala或Asn的氨基酸的側(cè)鏈； Rb是選自5日1'，41日，6111，61]1，43]1或439的氨基酸的側(cè)鏈； Aaa是選自Ser，Asn或化r的氨基酸殘基;其中其C-末端是游離末端、是被酷胺化的或是 被醋化的。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物，其中X是0。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物，其中X是S。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中 化是Ser或化r的側(cè)鏈； 化是-C〇-Aaa; Aaa是氨基酸殘基Ser或化r;其中C-末端是游離的； Rs 是 Asn，Gln，Glu 或 Asp 的側(cè)鏈。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的化合物，其中化是氨。9. 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其選自由W下各項(xiàng)組成的組：或其藥用鹽或立體異構(gòu)體。10. -種藥物組合物，其包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物或其 藥用鹽或立體異構(gòu)體，和藥用載體或賦形劑。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其包含至少一種其他藥劑，其中所述其他藥劑 是抗癌劑、化療劑或抗增殖化合物。12. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物，或其藥用鹽或立體異構(gòu)體，其用作藥 物。13. 根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物，或其藥用鹽或立體異構(gòu)體，其用作用于 治療癌癥或感染性疾病的藥物。14. 根據(jù)權(quán)利要求13的用于所述用途的化合物，其中所述癌癥選自骨癌、頭或頸癌、膜 腺癌、皮膚癌、皮膚或眼內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛口區(qū)域癌、胃癌、睪丸癌、 子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋己瘤、食道 癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖 癌、慢性或急性白血病、包括急性髓細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、急性淋己細(xì)胞白血病、 慢性淋己細(xì)胞白血病、兒童實(shí)體瘤、淋己細(xì)胞性淋己瘤、膀脫癌、腎或輸尿管癌、腎孟癌、中 樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、原發(fā)性CNS淋己瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺 瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋己瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌癥、包括石棉誘 發(fā)的癌癥、和所述癌癥的組合。15. 根據(jù)權(quán)利要求13的用于所述用途的化合物，其中所述感染性疾病是細(xì)菌感染性疾 病、病毒感染性疾病或真菌感染性疾病。16. -種調(diào)節(jié)受治療者中由PD-1信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括 向受治療者施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物。17. -種抑制受治療者中腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和/或遷移的方法，所述方法包括向受治療者施 用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物。18. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述腫瘤細(xì)胞是選自由W下各項(xiàng)組成的組中的 癌癥:乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌和腎癌。19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述腫瘤細(xì)胞是選自由W下各項(xiàng)組成的列表中 的癌癥:骨癌、頭或頸癌、膜腺癌、皮膚癌、皮膚或眼內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、 肛口區(qū)域癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金 病、非霍奇金淋己瘤、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、 軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病、包括急性髓細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血 病、急性淋己細(xì)胞白血病、慢性淋己細(xì)胞白血病、兒童實(shí)體瘤、淋己細(xì)胞性淋己瘤、膀脫癌、 腎或輸尿管癌、腎孟癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤、原發(fā)性CNS淋己瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫 瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋己瘤、環(huán)境 誘發(fā)的癌癥、包括石棉誘發(fā)的癌癥、和所述癌癥的組合。20. -種治療受治療者感染性疾病的方法，所述方法包括向受治療者施用治療有效量 的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物。21. -種治療受治療者中細(xì)菌、病毒和真菌感染方法，所述方法包括向受治療者施用治 療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的化合物。
【文檔編號(hào)】A61K31/4245GK105849092SQ201480057737
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2014年9月5日
【發(fā)明人】帕塔伊爾·戈文丹·奈爾·薩西庫(kù)瑪, 穆拉里哈拉·拉馬錢德拉, 西塔拉馬伊阿·塞提·蘇達(dá)山·納里馬德帕里
【申請(qǐng)人】奧瑞基尼探索技術(shù)有限公司