一種木通酸的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開(kāi)了一種木通酸的制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]木通酸是三萜類(lèi)成分，分子式C3tlH32O4,其結(jié)構(gòu)為3 α，24- 二羥基_30_去甲齊墩果烷-12，20 (29 )-二烯-28-酸，木通酸為木通的專(zhuān)屬性成分，具有抗炎活性。木通為木通科木通屬植物，味苦，性微寒，具有清心火，利小便，通經(jīng)下乳之功效。主治胸中煩熱、喉痹咽痛，尿赤，五淋，水腫，周身攣痛，經(jīng)閉乳少等癥?，F(xiàn)代藥理研宄表明，木通具有利尿、抗菌和抗腫瘤活性。
[0003]陶瓷膜又稱(chēng)無(wú)機(jī)陶瓷膜，是以無(wú)機(jī)陶瓷材料經(jīng)特殊工藝制備而形成的非對(duì)稱(chēng)膜。陶瓷膜管壁密布微孔，在壓力作用下，原料液在膜管內(nèi)或膜外側(cè)流動(dòng)，小分子物質(zhì)(或液體)透過(guò)膜，大分子物質(zhì)(或固體)被膜截留，從而達(dá)到分離、濃縮、純化和環(huán)保等目的。陶瓷膜具有分離效率高、效果穩(wěn)定、化學(xué)穩(wěn)定性好、耐酸堿、耐有機(jī)溶劑、耐菌、耐高溫、抗污染、機(jī)械強(qiáng)度高、再生性能好、分離過(guò)程簡(jiǎn)單、能耗低、操作維護(hù)簡(jiǎn)便、使用壽命長(zhǎng)等眾多優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成功應(yīng)用于食品、飲料、植(藥)物深加工、生物醫(yī)藥、發(fā)酵、精細(xì)化工等眾多領(lǐng)域，可用于工藝過(guò)程中的分離、澄清、純化、濃縮、除菌、除鹽等。
[0004]通過(guò)文獻(xiàn)檢索，在現(xiàn)有專(zhuān)利中有關(guān)從木通中制備木通酸的方法，大多通過(guò)常規(guī)試劑提取和柱層析分離。該類(lèi)方法所得產(chǎn)品純度低，植物有效成分的提取率不高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為了補(bǔ)充現(xiàn)有木通酸制備方法的不足，提供一種對(duì)環(huán)境友好，提取效率高、生產(chǎn)成本低的制備方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，木通酸的制備方法采用以下技術(shù)方案:
(1)原材料的處理:取木通經(jīng)60~70°C干燥，粉碎，過(guò)20~80目篩；
(2)酶解:將上述粗粉放入pH值4~5、固液比為1:0.5~1的稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量0.1%~0.3%的生物酶，在溫度為45~50°C的條件下酶解l~2h ；
(3)微波提取:將步驟(2)中酶解混合物置于功率大小為1000~2000W的微波提取器中，加入料液比為1:2~5、70~80%的乙醇，進(jìn)彳丁醇提，得到木通酸粗提液；
(4)純化:將上述木通酸粗提液首先在溫度為20~40°C的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出部分雜質(zhì)；再將所得到的提取液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用2~3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用2~4倍柱體積、40~60%的乙醇洗脫，最后用2~5倍柱體積、80~90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液用0.1-0.5微米有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，通過(guò)HPLC外標(biāo)法檢測(cè)，收集富含木通酸的部分；
(5)真空濃縮、冷凍干燥:將上述富含木通酸的液體部分經(jīng)70~80°C真空濃縮至固體含量為20?25%時(shí)，冷凍干燥得到木通酸產(chǎn)品。
[0007]步驟(2)所述生物酶為纖維素酶、果膠酶、半纖維素酶中的一種。
[0008]步驟(3)中所述微波提取在溫度為60~90°C的條件下提取300~900s。
[0009]步驟(4)中所述大孔吸附樹(shù)脂為X-5、LSA-21、WLD中的一種。
[0010]本發(fā)明采用生物酶酶解輔助微波提取法來(lái)制備木通酸具有很多優(yōu)點(diǎn)，其中生物酶在酸性環(huán)境中可以破壞植物細(xì)胞壁，使得植物的有效成分充分流出，從而大大提高了木通酸的提取率，另外微波提取法具有選擇性好、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)產(chǎn)品純化時(shí)應(yīng)用陶瓷膜和大孔吸附樹(shù)脂可以大大提高所得產(chǎn)品的純度，其中陶瓷膜具有分離效率高、效果穩(wěn)定、化學(xué)穩(wěn)定性好、耐酸堿、耐有機(jī)溶劑、耐菌、耐高溫、抗污染、機(jī)械強(qiáng)度高、再生性能好、分離過(guò)程簡(jiǎn)單、能耗低、操作維護(hù)簡(jiǎn)便、使用壽命長(zhǎng)等眾多優(yōu)勢(shì)。
[0011]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1:
取木通經(jīng)60°C干燥，粉碎，過(guò)20目篩；將上述粗粉放入pH值為4、固液比為1:0.5的稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量0.1%的纖維素酶，在溫度為45°C的條件下酶解Ih ;將所得酶解混合物置于功率大小為1000W的微波提取器中，加入料液比為1:2、70%的乙醇，在溫度為60°C的條件下提取300s，得到木通酸粗提液；將木通酸粗提液首先在溫度為20°C的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出部分雜質(zhì)；再將所得到的提取液上X-5型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用2倍柱體積、40%的乙醇洗脫，最后用2倍柱體積、80%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液用0.1微米有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，通過(guò)HPLC外標(biāo)法檢測(cè)，收集富含木通酸的部分；將富含木通酸的液體部分經(jīng)70°C真空濃縮至固體含量為20%時(shí)，冷凍干燥得到木通酸產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)所得產(chǎn)品中木通酸的含量為87.25%，木通酸的提取率為51.03%o
[0013]實(shí)施例2:
取木通經(jīng)65°C干燥，粉碎，過(guò)60目篩；將粗粉放入pH值為4、固液比為1:1的稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量0.2%的果膠酶，在溫度為45°C的條件下酶解1.5h ;將所得酶解混合物置于功率大小為2000W的微波提取器中，加入料液比為1:4、75%的乙醇，在溫度為80°C的條件下提取600s，得到木通酸粗提液；將木通酸粗提液首先在溫度為30°C的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出部分雜質(zhì)；再將所得到的提取液上LSA-21型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3倍柱體積、50%的乙醇洗脫，最后用4倍柱體積、85%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液用0.3微米有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，通過(guò)HPLC外標(biāo)法檢測(cè)，收集富含木通酸的部分；將上述富含木通酸的液體部分經(jīng)75°C真空濃縮至固體含量為20%時(shí)，冷凍干燥得到木通酸產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)所得產(chǎn)品中木通酸的含量為87.95%，木通酸的提取率為 51.43%ο
[0014]實(shí)施例3:
取木通經(jīng)70°C干燥，粉碎，過(guò)80目篩；將上述粗粉放入pH值為5、固液比為1:1的稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量0.3%的半纖維素酶，在溫度為50°C的條件下酶解2h ;將所得酶解混合物置于功率大小為2000W的微波提取器中，加入料液比為1:5、80%的乙醇，在溫度為90°C的條件下提取900s，得到木通酸粗提液；將木通酸粗提液首先在溫度為40°C的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出部分雜質(zhì)；再將所得到的提取液上WLD型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用4倍柱體積、60%的乙醇洗脫，最后用5倍柱體積、90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液用0.5微米有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，通過(guò)HPLC外標(biāo)法檢測(cè)，收集富含木通酸的部分；將上述富含木通酸的液體部分經(jīng)80°C真空濃縮至固體含量為25%時(shí)，冷凍干燥得到木通酸產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)所得產(chǎn)品中木通酸的含量為88.25%，木通酸的提取率為 51.89%ο
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種木通酸的制備方法，其特征在于，它主要是采用以下步驟: (1)原材料的處理:取木通經(jīng)60~70°C干燥，粉碎，過(guò)20~80目篩； (2)酶解:將上述粗粉放入pH值4~5、固液比為1:0.5~1的稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量0.1%~0.3%的生物酶，在溫度為45~50°C的條件下酶解l~2h ； (3)微波提取:將步驟(2)中酶解混合物置于功率大小為1000~2000W的微波提取器中，加入料液比為1:2~5、70~80%的乙醇，進(jìn)彳丁醇提，得到木通酸粗提液； (4)純化:將上述木通酸粗提液首先在溫度為20~40°C的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出部分雜質(zhì)；再將所得到的提取液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用2~3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用2~4倍柱體積、40~60%的乙醇洗脫，最后用2~5倍柱體積、80~90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液用0.1-0.5微米有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，通過(guò)HPLC外標(biāo)法檢測(cè)，收集富含木通酸的部分； (5)真空濃縮、冷凍干燥:將上述富含木通酸的液體部分經(jīng)70~80°C真空濃縮至固體含量為20?25%時(shí)，冷凍干燥得到木通酸產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木通酸的制備方法，其特征在于:步驟(2)所述生物酶為纖維素酶、果膠酶、半纖維素酶中的一種。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木通酸的制備方法，其特征在于:步驟(3)中所述微波提取在溫度為60~90°C的條件下提取300~900s。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木通酸的制備方法，其特征在于:步驟(4)中所述大孔吸附樹(shù)脂為X-5、LSA-21、WLD中的一種。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種木通酸的制備方法，具體涉及一種生物酶酶解輔助微波提取法提取木通酸的方法。具體的工藝步驟為：原材料的處理→酶解→微波提取→純化→真空濃縮、冷凍干燥，即得木通酸。本發(fā)明利用了生物酶酶解，不僅可以充分破壞植物的細(xì)胞壁，使得有效成分充分流出，同時(shí)加入的酸水，既增強(qiáng)了生物酶的活性，也可以使木通酸游離，從而提高了木通酸的出率；利用陶瓷膜和大孔吸附樹(shù)脂柱對(duì)木通酸的純化，可以很好地提高所得產(chǎn)品的純度。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和、選擇性高、所得木通酸純度高等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】C07J63/00
【公開(kāi)號(hào)】CN104910243
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510270105
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年5月26日