醇各治療組小鼠腦內(nèi)APP和PS-1蛋白表達(dá)水平顯著降低（P< 0. 05或P < 0. 01);化拉西坦組也能顯著降低模型小鼠腦內(nèi)APP蛋白表達(dá)水平（P< 0. 05)，但不能顯 著降低PS-1蛋白表達(dá)水平（P> 0. 05) ;VE組可W顯著降低模型小鼠腦內(nèi)PS-1蛋白表達(dá)水 平（P< 0. 05)，而對(duì)于APP蛋白表達(dá)水平無明顯影響（P> 0. 05)。
[0120] 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察各組小鼠皮層和海馬CA1區(qū)APP表達(dá)的變化，在 光鏡下可見APP免疫組化染色陽性標(biāo)記物為棟褐色顆粒，主要分布于神經(jīng)元胞漿。圖像分 析系統(tǒng)分析結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠皮層和海馬CA1區(qū)神經(jīng)元APP陽性細(xì)胞數(shù) 明顯增多，胞漿著色加深，光密度值增高（P< 0. 05或P< 0. 01)。與模型組相比，徑基酪醇 各劑量組均能減少小鼠皮層和海馬CA1區(qū)APP陽性細(xì)胞數(shù)（P< 0. 05或P< 0. 01)，但均 不能顯著改善胞漿著色程度（高劑量除外），即光密度值（P> 0. 05) ;VE組和化拉西坦組 均能明顯減少小鼠皮層APP陽性細(xì)胞數(shù)（P< 0. 05或P< 0. 01)，但不影響海馬CA1區(qū)APP 陽性細(xì)胞數(shù)（P> 0. 05)。
[0121] 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察各組小鼠頂葉皮層和海馬CA1區(qū)PS-1表達(dá)的變 化，在光鏡下可見PS-1陽性標(biāo)記的神經(jīng)元表現(xiàn)為核周圍的胞質(zhì)中呈現(xiàn)棟黃色顆粒。圖像 分析結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠皮層和海馬CA1區(qū)PS-1陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加 (P< 0. 01)，細(xì)胞著色明顯加深，光密度值增大（P< 0. 01)。與模型組相比，徑基酪醇治療 組各組小鼠皮層PS-1陽性細(xì)胞數(shù)目顯著減少（P< 0.01)，但光密度值無顯著性差異（P> 0. 05)，而在海馬CA1區(qū)低劑量組和高劑量組均能明顯減少PS-1陽性細(xì)胞數(shù)（P< 0. 05)，但 光密度值無顯著性差異（P> 0. 05) ;VE組能夠顯著減少模型小鼠海馬CA1區(qū)PS-1陽性細(xì) 胞數(shù)（P< 0. 05)，但皮層PS-1陽性細(xì)胞數(shù)無顯著差異（P> 0. 05);化拉西坦組對(duì)模型小鼠 皮層和海馬CA1區(qū)PS-1陽性細(xì)胞數(shù)無顯著差異（P> 0. 05)。
[0122] 3小結(jié)及討論：
[0123] 動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠較空白對(duì)照組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降。給 藥各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力均有不同程度的增強(qiáng)趨勢。通過對(duì)各組動(dòng)物血清中各項(xiàng)指標(biāo)的檢 巧。，結(jié)果模型組血清中乙酷膽堿醋酶（A化巧活性、一氧化氮合酶（NO巧活性、一氧化氮（NO) 和丙二醒（MDA)含量明顯高于正常對(duì)照組，而總抗氧化能力（T-A0C)明顯低于空白對(duì)照組； 通過對(duì)各組動(dòng)物腦組織中各項(xiàng)指標(biāo)的檢測，結(jié)果模型組腦組織中一氧化氮合酶（NO巧活 性、一氧化氮（NO)和丙二醒（MDA)含量明顯高于正常對(duì)照組，而膽堿乙酷基轉(zhuǎn)移酶（ChAT) 活性、總抗氧化能力（T-A0C)和超氧化物歧化酶（T-S0D)活性明顯低于空白對(duì)照組，該模型 與臨床血清檢測指標(biāo)相似。
[0124] 給予徑基酪醇后，各給藥組均能不同程度的降低血清和腦組織中乙酷膽堿醋酶 (A化巧活性、一氧化氮合酶（NO巧活性、一氧化氮（NO)和丙二醒（MDA)含量，升高膽堿乙酷 基轉(zhuǎn)移酶（ChAT)活性、超氧化物歧化酶燈-SOD)活性和總抗氧化能力燈-A0C)，其作用與陽 性藥VE和化拉西坦相當(dāng)。并不同程度降低小鼠腦組織中P淀粉樣前提蛋白（AP巧、P分 泌酶度ACE1)、糖原合成酶激酶-3P(GSK3b)mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)W及升高膜島素 降解酶（IDE)mRNA水平的表達(dá)。
[0125] 徑基酪醇對(duì)雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)夾閉再通造成的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙有一定的治療 和保護(hù)作用。
[0126] 實(shí)施例3徑基酪醇對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注（MCA0)模型的影響：
[0127] 1實(shí)驗(yàn)方法：
[0128] 1.1造模及給藥方法：
[0129]Wistar雄性大鼠，體重200g至220g;實(shí)驗(yàn)分5組，每組8只：（1)假手術(shù)（空白） 對(duì)照組；（2)模型對(duì)照組；（3)徑基酪醇低劑量組（Img/kg);(4)徑基酪醇中劑量組巧mg/ kg) ;(5)徑基酪醇高劑量組（25mg/kg);參照ZeaLonga等的方法，模型對(duì)照組和各徑基 酪醇低劑量組中的Wistar雄性大鼠用質(zhì)量百分比為10 %的水合氯醒350mg/Kg腹腔注射 麻醉，體積百分比為75%的酒精頸前皮膚消毒，頸正中切口，分離暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA) 與頸內(nèi)（ICA)、頸外動(dòng)脈巧CA)，夾閉CCA;結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，距頸總動(dòng)脈分叉處約 7mm處結(jié)扎，導(dǎo)入頭端圓純浸蠟的魚線插入頸內(nèi)動(dòng)脈，W頸動(dòng)脈分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)18mm至 20mm感阻力后結(jié)扎，阻斷腦血流量，同時(shí)開放夾閉的CCA;缺血化后，固定Wistar雄性大 鼠，將魚線抽拉出實(shí)現(xiàn)再灌注；假手術(shù)組大鼠線栓只插入10mm，不造成腦栓塞；造模前后維 持Wistar雄性大鼠體溫34°C，室溫28°C;各徑基酪醇劑量組分別在再灌注后即時(shí)和再灌注 后2小時(shí)灌胃給藥，假手術(shù)對(duì)照組和模型對(duì)照組在造模后相同再灌注時(shí)間點(diǎn)給予等劑量的 生理鹽水。
[0130] 1. 2神經(jīng)功能缺損評(píng)分：
[0131] 參照Bederson等確立的5級(jí)評(píng)分法，對(duì)造模后的假手術(shù)（空白）對(duì)照組、模型對(duì) 照組和各徑基酪醇劑量組中的Wistar雄性大鼠的神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評(píng)分：0級(jí)：未觀察到 神經(jīng)癥狀；1級(jí)：提尾懸空時(shí)，Wistar雄性大鼠的手術(shù)對(duì)側(cè)前肢表現(xiàn)為腕肘屈曲、肩內(nèi)旋、肘 外展、緊貼胸壁；2級(jí)：將Wistar雄性大鼠置于光滑平面上，推手術(shù)側(cè)肩向?qū)?cè)移動(dòng)，阻力降 低；3級(jí)：Wistar雄性大鼠自由行走時(shí)向手術(shù)側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈；4級(jí)：Wistar雄性大鼠軟擁，肢 體無自發(fā)活動(dòng)。
[0132] 1. 3腦梗死范圍和腦含水量測定：
[0133] Wistar雄性大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分后，斷頭處死，迅速取出完整大腦，W預(yù)冷 的生理鹽水洗去血跡，-20°C凍存化后，從前面起作冠狀切片共5片（2mm)，置1 %TTC溶液 中溫度37°C水浴中染色lOmin，避光，計(jì)算機(jī)分析腦梗塞面積和水腫程度。
[0134] 1.AWesternblot檢測：
[0135] 將取出的大腦提取總蛋白，定量后進(jìn)行聚丙締酷胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜、封閉化，一抗 37°C解育2h，TBST緩沖液洗膜3次，二抗37°C解育比，TBST緩沖液洗膜3次，曝光、洗片， 掃描，軟件分析光密度值。
[0136] 1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：
[0137] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均W均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比 較，樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，P< 0. 05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[013引 2結(jié)果：
[0139] 2. 1徑基酪醇對(duì)腦局灶性腦缺血再灌注Wistar雄性大鼠的神經(jīng)功能缺陷評(píng)分、腦 梗死范圍和腦水腫的平均影響：
[0140] 徑基酪醇對(duì)腦局灶性腦缺血再灌注Wistar雄性大鼠的神經(jīng)功能缺陷評(píng)分、腦梗 死范圍和腦水腫的影響結(jié)果可W看出，與假手術(shù)對(duì)照組相比，模型組Wistar雄性大鼠神經(jīng) 功能缺陷明顯嚴(yán)重（P< 0.05或P< 0.01)，腦梗死范圍（P< 0.05或P< 0.01)和腦水 腫程度均明顯增大（P< 0. 05或P< 0. 01);與模型組相比較，各徑基酪醇給藥組均能減輕 Wistar雄性大鼠的神經(jīng)功能缺陷（P< 0. 05或P< 0. 01)，W及減少腦梗死范圍（P< 0. 05 或P< 0. 01)和減輕腦水腫程度（P< 0. 05或P< 0. 01)。
[014U 2. 2徑基酪醇對(duì)調(diào)亡相關(guān)基因bcl-2、caspase-3表達(dá)的平均影響：
[0142] 缺血再灌注2地后模型組腦組織bcl-2表達(dá)量顯著降低，而caspase-3表達(dá)量顯 著升高；各徑基酪醇劑量組能夠顯著升高bcl-2表達(dá)量W及降低caspase-3表達(dá)量；結(jié)果 顯示徑基酪醇能夠通過抑制細(xì)胞調(diào)亡，保護(hù)缺血再灌注損傷，控制損傷進(jìn)一步惡化。
[0143] 3 結(jié)論：
[0144] 徑基酪醇能夠減輕神經(jīng)功能缺陷，減少腦梗死范圍和減輕腦水腫程度；從而抑制 細(xì)胞調(diào)亡，最終保護(hù)局灶性腦缺血再灌注造成的損傷。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種羥基酪醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基酪醇在制備抗血管性癡呆藥物中的應(yīng)用，其特征在于羥 基酪醇以干品重量計(jì)質(zhì)量百分含量為50%-99. 9%。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種羥基酪醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明經(jīng)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，羥基酪醇能夠減輕神經(jīng)功能缺陷，減少腦梗死范圍和減輕腦水腫程度，有效抑制血管性癡呆大鼠神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)改變，提高血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，減輕癡呆癥狀。
【IPC分類】A61K31/05, A61P25/28
【公開號(hào)】CN105213356
【申請?zhí)枴緾N201510671740
【發(fā)明人】閆明, 霍仕霞, 李建梅, 高莉, 彭曉明
【申請人】新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所, 閆明
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年10月15日