一種雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取物領(lǐng)域，尤其涉及一種雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]油橄欖(Olea europea)又名洋橄欖、齊敦果，主要分布在地中海沿岸國家，主要利用鮮果加工成素有“植物油皇后”之稱的橄欖油。現(xiàn)代生物技術(shù)分析表明，油橄欖葉中含有豐富的抗氧化活性成分，這些活性物質(zhì)主要有橄欖多酚、黃酮類、裂環(huán)烯醚萜類(包括橄欖苦苷)、雙黃酮等。而這些活性物質(zhì)需要從油橄欖葉中提取出來，現(xiàn)有技術(shù)中與本發(fā)明相近的提取方法如下:
專利號為201010535347，發(fā)明名稱為“一種從油橄欖葉中高效富集高品質(zhì)羥基酪醇的方法”的中國專利公開如下制備方法:通過從10個油橄欖品種葉中篩選高含量羥基酪醇的生產(chǎn)原料，采用超聲波或微波提取，大孔樹脂吸附和中壓柱色譜分離，制備90%以上羥基酪醇提取物。
[0003]專利號為201210088677，發(fā)明名稱為“一種高含量橄欖苦苷提取物的制備方法”的中國專利公開如下制備方法:在獲得粗提液后，先經(jīng)大孔吸附樹脂吸附分離，再加堿性溶液溶解、萃取后經(jīng)硅膠或氧化鋁柱層析分離，最后干燥得高含量橄欖苦苷提取物。
[0004]專利號為201010523056，發(fā)明名稱為“富含高純度橄欖苦甙的油橄欖葉提取物的制備方法”中的油橄欖葉提取物制備方法是:將油橄欖干葉投料到極性溶劑中進(jìn)行提??；提取液回收溶劑后，加水和輔料，混勻、靜置、壓濾，合并濾液；濾液經(jīng)大孔樹脂吸附、乙醇水混合液解吸附后，收集解吸液；解吸液回收溶劑后真空濃縮，干燥，得到油橄欖葉提取物。
[0005]目前，上述油橄欖葉提取物的制備方法采用微波或超聲波法萃取油橄欖葉提取物再進(jìn)行大孔吸附樹脂富集，或只用有機(jī)溶劑萃取再進(jìn)行大孔吸附樹脂富集，而沒有用選擇度高，極大保存生物物質(zhì)活性的新興分離技術(shù)-雙水相萃取技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明解決的技術(shù)問題在于提供一種雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的制備方法，提取物選擇度高，純度高，活性強(qiáng)。
[0007]本發(fā)明提供的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的制備方法，包括如下步驟:
(I)雙水相體系組成:配制pH值范圍為5.5-7.5的體系緩沖液，將親水小分子有機(jī)溶劑和無機(jī)鹽用體系緩沖液溶解，混合，形成萃取油橄欖葉多酚的雙水相體系。無機(jī)鹽在體系中的最終濃度范圍為20%-40%、親水小分子有機(jī)溶劑在體系中的最終濃度范圍為20%-50%。
[0008](2)油橄欖葉干燥粉碎，過篩，得到60目-100目油橄欖葉的粉末。
[0009](3)將粉末按照固液比為1:10至1:30的比例加入到雙水相體系制成萃取溶液。
[0010](4)將萃取溶液在 300 W -500W，30°C -50°C下超聲波處理 20 min_30min。
[0011](5)將萃取溶液室溫靜置30min-100min，分相并收集上相。
[0012](6)將上相溶液加到非極性吸附樹脂的層析柱內(nèi)，層析柱的徑高比為1:10至1:30，上相溶液的流速為0.5ml/min-3ml/min，上柱樣為15-20個柱體積；
(7)然后用蒸餾水洗脫1-5個柱體積后，再用5-10個柱體積的濃度為50%-90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；
(8)將乙醇洗脫液在40°C_50°C環(huán)境下旋轉(zhuǎn)加熱濃縮得到原體積的1/5-1/2倍體積的濃縮液；
(9)將濃縮液在40°C_50°C真空環(huán)境干燥得到油橄欖葉提取物的膏狀物，將膏狀物在負(fù)15°C -負(fù)25°C冷凍干燥，制成油橄欖葉提取物產(chǎn)品。
[0013]優(yōu)選地，在步驟(I)中，配制pH值范圍為6-7的體系緩沖液，將親水小分子有機(jī)溶劑和無機(jī)鹽用體系緩沖液溶解，混合，形成萃取油橄欖葉多酚的雙水相體系。無機(jī)鹽在體系中的最終濃度范圍為25%-35%、親水小分子有機(jī)溶劑在體系中的最終濃度范圍為30%-40%。
[0014]優(yōu)選地，在步驟(2)中，將油橄欖葉在400C -500C溫度下干燥2h_4h，通過高速組織搗碎機(jī)粉碎得到油橄欖葉的粉末，將粉末過70-90目篩，制成油橄欖葉粉末。
[0015]優(yōu)選地，在步驟(3)中，將粉末按照固液比為1:15-1:25的比例加入到雙水相體系制成萃取溶液。
[0016]優(yōu)選地，在步驟(4)中，將萃取溶液在300 W -500W, 30°C _50°C下超聲波處理20min_30mino
[0017]優(yōu)選地，在步驟(5)中，將萃取液靜置50min-70min，分相并收集上相。
[0018]優(yōu)選地，在步驟(6)中，將上相溶液加到非極性大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)，上相溶液的流速為 lml/min-2ml/min。
[0019]優(yōu)選地，在步驟(7)中，用蒸餾水洗脫2-3個柱體積后，再用6-8個柱體積的濃度為60%-80%的乙醇洗脫。
[0020]優(yōu)選地，在步驟(8)中，乙醇洗脫液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液在40°C -50°C,60轉(zhuǎn)/min-80轉(zhuǎn)/min環(huán)境下旋轉(zhuǎn)加熱濃縮。
[0021]優(yōu)選地，在步驟(9)中，濃縮液通過真空干燥箱在40°C _45°C真空環(huán)境干燥得到油橄欖葉提取物的膏狀物。
[0022]優(yōu)選地，在步驟(9)中，膏狀物在負(fù)20°C冷凍干燥。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，能在將油橄欖葉多酚萃取到上相的同時將蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)萃取到下相或在兩相界面，從而提高目標(biāo)產(chǎn)物純度；結(jié)合超聲波萃取技術(shù)，能大大提高油橄欖葉多酚的萃取率。
【具體實施方式】
[0024]為了本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明所提供的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例進(jìn)行闡述。
[0025]本發(fā)明的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，包括如下步驟:
(1)將油橄欖葉室溫陰干，用前在50°C下干燥3h，通過高速組織搗碎機(jī)粉碎得到油橄欖葉的粉末，將粉末過80目篩，得到油橄欖葉的粉末；
(2)將粉末按照固液比為1:20的比例加入雙水相體系制成萃取溶液，雙水相體系組成為35%的乙醇或甲醇，29%的硫酸銨，體系pH為6.5。
[0026](3)將萃取溶液置于超聲波萃取裝置中，在400w，40°C下萃取25min，然后靜置60min分相；
(4)將上相加到非極性大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)，層析柱的徑高比為1:15，上清液的流速為1.5ml/min，上柱樣為18個柱體積；
(5)然后用蒸餾水洗脫1.5個柱體積后，再用7個柱體積的濃度為70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；
(6)乙醇洗脫液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液在45°C、70轉(zhuǎn)/min環(huán)境下旋轉(zhuǎn)加熱濃縮，得到原體積的1/5-1/2倍體積的濃縮液。
[0027](7)濃縮液通過真空干燥箱在42°C真空環(huán)境干燥得到油橄欖葉提取物的膏狀物，膏狀物在負(fù)20°C冷凍干燥，制成油橄欖葉多酚產(chǎn)品。油橄欖葉多酚回收率在90%以上，純度達(dá)80%以上。
對所公開的實施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。
【主權(quán)項】
1.一種雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)配制pH值范圍為5.5-7.5的體系緩沖液，將親水小分子有機(jī)溶劑和無機(jī)鹽用體系緩沖液溶解，混合，形成萃取油橄欖葉多酚的雙水相體系；無機(jī)鹽在體系中的最終濃度范圍為20%-40%、親水小分子有機(jī)溶劑在體系中的最終濃度范圍為20%-50%; (2)油橄欖葉在40°C-50°C下干燥2h-4h，通過高速組織搗碎機(jī)粉碎得到油橄欖葉的粉末，將粉末過60目篩-100目篩得到粉末； (3)將粉末按照固液比為1:5至1:50的比例加入到雙水相體系制成萃取溶液； (4)將萃取溶液在300W-500W, 3 O °C -50 °C下超聲波處理20min_30min，靜置30min-100min，分相并收集上相； (5)將上相溶液加到非極性吸附樹脂的層析柱內(nèi)，層析柱的徑高比為1:10至1:30，上相溶液的流速為0.5ml/min-3ml/min，上柱樣為15-20個柱體積； (6)然后用蒸餾水洗脫1-5個柱體積后，再用5-10個柱體積的濃度為50%-90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； (7)將乙醇洗脫液在40°C_50°C環(huán)境下旋轉(zhuǎn)加熱濃縮得到原體積的1/5-1/2倍體積的濃縮液； (8)將濃縮液在40°C_45°C真空環(huán)境干燥得到油橄欖葉提取物的膏狀物，將膏狀物在負(fù)15°C -負(fù)25°C冷凍干燥，制成油橄欖葉多酚產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(O中，將親水小分子有機(jī)溶劑和無機(jī)鹽用pH 5.5-pH7.5的體系緩沖液溶解，混合，形成萃取油橄欖葉多酚的雙水相體系；無機(jī)鹽在體系中的最終濃度范圍為20%-40%、親水小分子有機(jī)溶劑在體系中的最終濃度范圍為20%-50%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(2)中，將油橄欖葉在40°C_50°C溫度下干燥2h-4h，通過高速組織搗碎機(jī)粉碎得到油橄欖葉的粉末，將粉末過70目篩-90目篩得到粉末。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(3)中，油橄欖葉粉末按照固液比為1:15至1:25的比例加入到雙水相體系制成萃取溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(4 )中，將萃取溶液在300w-500w, 30 V -50 V下超聲波處理20min_30min。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(4)中，將萃取液靜置30min-90min，分相并收集上相。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(5)中，將步驟(4)中得到的上相加到非極性大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)，上相液的流速為lml/min-2ml/min08.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(6)中，用蒸餾水洗脫2-3個柱體積后，再用6-8個柱體積的濃度為60%-80%的乙醇洗脫。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(7)中，乙醇洗脫液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液在40°C-50°C,60轉(zhuǎn)/min-80轉(zhuǎn)/min環(huán)境下旋轉(zhuǎn)加熱濃縮。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(8)中，濃縮液通過真空干燥箱在40°C _45°C真空環(huán)境干燥得到油橄欖葉提取物的膏狀物。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，其特征在于，在步驟(8)中，膏狀物在負(fù)20°C冷凍干燥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雙水相體系萃取油橄欖葉多酚的方法，它包括如下步驟：將干燥粉碎的油橄欖葉加到親水小分子有機(jī)溶劑和無機(jī)鹽溶液雙水相體系中，混合，進(jìn)行超聲波萃取，油橄欖葉多酚萃取到上相；上相經(jīng)過大孔吸附樹脂富集，有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮，干燥，即得油橄欖葉多酚。油橄欖葉多酚回收率在90%以上，純度達(dá)80%以上。本方法將雙水相萃取技術(shù)這一新型的分離技術(shù)與傳統(tǒng)的超聲波輔助有機(jī)溶劑萃取技術(shù)相結(jié)合應(yīng)用于油橄欖葉多酚的分離提取，具有產(chǎn)物得率高，產(chǎn)物純度高，提取快速，條件溫和，設(shè)備簡單，易于放大等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A61P39/06, A61K36/63, A61K127/00
【公開號】CN104922220
【申請?zhí)枴緾N201510211626
【發(fā)明人】王維香, 楊劍波
【申請人】西華大學(xué)
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年4月30日