鹽酸林可霉素提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于抗生素提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用雙水相萃取技術(shù)提取鹽酸林可霉素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鹽酸林可霉素(Lincomycin Hydrochloride )，別名潔霉素，林肯霉素，是由鏈霉菌(Streptomyces Lincoensis)發(fā)酵產(chǎn)生的一種林可胺類堿性抗生素?？勺鳛獒t(yī)藥、獸藥、飼料添加劑及合成克林霉素及其衍生物的中間體。
[0003]目前，文獻記載的提取鹽酸林可霉素的方法有很多，如丁醇(辛醇)萃取-鹽酸反萃技術(shù)，大孔樹脂吸附-丁醇解析-鹽酸反萃技術(shù)等，其中丁醇(辛醇)萃取-鹽酸反萃技術(shù)存在溶媒消耗量大，萃取過程易乳化，收率不穩(wěn)定問題，大孔樹脂吸附-丁醇解析-鹽酸反萃技術(shù)存在操作技術(shù)要求高，收率不穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量波動大、樹脂再生廢水量大等問題。
[0004]雙水相提取是利用兩種不同的水溶性聚合物，在聚合物濃度達到一定值時，形成互不相溶的雙水相體系，兩相極性不同，可以根據(jù)相似相容原理對物料進行萃取分離。其技術(shù)優(yōu)勢是乳化輕，萃取收率高，無有機溶媒，安全性高，環(huán)保影響小。目前，尚沒有利用雙水相提取鹽酸林可霉素的工藝技術(shù)被公開報道過。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種利用雙水相萃取技術(shù)進行提取鹽酸林可霉素的方法。
[0006]為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為:
一種鹽酸林可霉素的提取方法，其特征在于其工藝步驟為:
1)酸化預(yù)處理:將林可霉素發(fā)酵液進行酸化處理至PH2.5?3.5，然后間隔20分鐘，分別加入凈化劑黃血鹽、硫酸鋅，充分?jǐn)嚢?，板框過濾，用草酸或用2mol/L HCL配制pH2.5?
3.5水溶液頂洗，得到濾洗液，濾洗液效價5000~7000u/ml ;
2)雙水相萃取:將上述濾洗液加入到預(yù)先配置好的雙水相體系中，用液堿調(diào)整PH9.5-10.0，充分?jǐn)嚢?，靜置分層，其中所述的雙水相體系為質(zhì)量濃度為16%PEG2000與18%1(2即04的混合液；
3)提取:將過程2)分層所得的上層液與丁醇按體積比3?5:1混和，用液堿調(diào)pH10.5-11.0，得到丁醇提取液，效價 50000~90000u/ml ；
4)反萃取:將丁醇提取液加入純化水，充分?jǐn)嚢瑁?mol/LHCL調(diào)pH至2.2?2.6，靜置分層，收取下層反萃液；
5)吸附脫色:在上述下層反萃液中加入活性炭進行吸附脫色，后依次經(jīng)過板框過濾，精濾得到精制脫色液；
6)結(jié)晶:將上述精制脫色液在溫度8?10°C條件下，滴加丙酮，養(yǎng)晶，抽濾，丙酮洗滌，真空干燥得到鹽酸林可霉素成品，水分含量低于6%。
[0007]所述過程1)中，酸化處理所用的酸為草酸或混酸酸化(首先加入草酸調(diào)PH4.5±0.5，再用 2mol/L 鹽酸調(diào) PH2.5 ?3.5)。
[0008]所述過程1)中，凈化劑的用量為0.08-0.24% (W/V)林可霉素發(fā)酵液體積
所述過程2)中，雙水相體系中16%PEG2000與18%K2HP04等體積混合，濾洗液按照濾洗液與16%PEG2000的體積比3?5:1加入到雙水相體系中。
[0009]所述過程2 )中，堿液為10%Na0H。
[0010]所述過程4)中，純化水的加入量為1/3?1/4 丁醇提取液體積。
[0011 ] 所述過程4)中，酸液為6mol/LHCLo
[0012]所述過程5)中，吸附脫色時，活性炭加入量為反萃液體積的3-5%，在溫度55?60°C下攪拌30-60分鐘進行吸附脫，然后降溫到40°C后板框過濾，精濾是指依次經(jīng)0.45um、0.22um不銹鈉過濾器精濾。
[0013]所述過程6)中，結(jié)晶所用的丙酮為經(jīng)0.45um、0.22um不銹鈉過濾器精濾后的丙酮，其水份< 1%，加入量為0.30-0.35倍反萃液體積。
在所述過程2)中所得的下層液加入Κ2ΗΡ04至分層，取上清液返雙水相體系，進行循環(huán)套用。
[0014]本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢:
1本發(fā)明提供了一種利用雙水相萃取技術(shù)提取鹽酸林可霉素的方法，能有效富集林可霉素，減少丁醇萃取用量，降低溶媒損耗。
[0015]2本發(fā)明用雙水相原料，對環(huán)境無污染。
[0016]3本發(fā)明用雙水相萃取技術(shù)富集林可霉素后，用丁醇萃取，減少污水排放量，減輕環(huán)保處理廢水壓力。
[0017]具體實施方法
下面用實例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
[0018]下述實施例中的林可霉素發(fā)酵液來源:以鏈霉菌為發(fā)酵菌種，按照林可霉素通用發(fā)酵工藝獲得，工藝過程如下:
砂土孢子——母瓶——一級種子——二級種子——三級種子——發(fā)酵——發(fā)酵液
配置雙水相體系:用水分別配置18%K2HP04溶液500L，16%PEG2000溶液500L，在以下實施例使用時，分別取相同體積，混合后，形成雙水相體系。
[0019]實施例1
取林可霉素發(fā)酵液300L，發(fā)酵液效價742011/1111，攪拌下加入草酸5.51^，調(diào)pH2.5-3.5，間隔20分鐘，依次分別加入黃血鹽0.36kg、硫酸鋅0.36kg，繼續(xù)攪拌30分鐘，板框過濾，料液進完后，用草酸或用2mol/L HCL配制PH2.5?3.5水溶液頂洗，得到濾洗液330L，效價 6560u/ml，收率 97.25%。
[0020]按16%PEG2000與濾洗液體積比1:3，分別取110L配制好的18%K2HP04和16%PEG2000溶液，攪拌混和，靜置10分鐘，形成雙水相體系，將上述濾洗液，攪拌下加入雙水相體系中，用10%液堿調(diào)pH9.5-10.0，攪拌15分鐘，靜置40分鐘，分層，上層體積108L，上、下層分別取樣測效價。測樣結(jié)果，上層效價19086u/ml，下層效價175u/ml，收率95.22%。
[0021]將上述上層液轉(zhuǎn)入丁醇抽提罐中，上層液與丁醇體積比3:1，用液堿調(diào)ρΗΙΟ.5-11.0，攪拌15分鐘，靜置20分鐘，分層，上、下層分別取樣測效價。上層為丁醇提取液，體積35L，測效價56300u/ml，提取收率96.52 ;下層為萃余液(PEG2000在本層)，效價122u/ml，將上層液進行后面反萃操作。將下層液加入1(2即04至分層，上層為PEG2000相，下層為1(2即04相，取上層清液返雙水相體系，進行循環(huán)套用。
[0022]將以上丁醇提取液，按照1/4 丁醇提取液體積加入純化水，室溫，攪拌下，加入6mol/L HCL,調(diào)pH2.2-2.6，靜置30分鐘，分層，分出下層反萃液8.5L，效價223000u/ml，反萃收率96.19%ο
[0023]將上述反萃液，加入0.36kg活性碳，溫度55~60°C，攪拌30分鐘，進行吸附脫色，降溫到40°C，經(jīng)板框粗濾，再分別經(jīng)0.45um、0.22um不銹鈉過濾器精濾，得到精制脫色液。
[0024]將上述精制脫色液溫度控制在8~10°C，滴加經(jīng)0.45um、0.22um精濾后丙酮(水份^ 1%)，丙酮加入量2.6L，析出鹽酸林可霉素晶體，養(yǎng)晶8hr，抽濾，再將濕晶體用精濾丙酮少量多次洗滌，抽濾，真空干燥，得到鹽酸林可霉素產(chǎn)品1.92kg，結(jié)晶收率81.94%，提煉收率 70.45%ο
[0025]實施例2
取林可霉素發(fā)酵液300L，發(fā)酵液效價756011/1111，攪拌下加入草酸5.71^，調(diào)ρΗ2.5-3.5，間隔20分鐘，依次分別加入黃血鹽0.36kg，硫酸鋅0.36kg，繼續(xù)攪拌30分鐘，板框過濾，料液進完后，用草酸或用2mol/L HCL配制PH2.5?3.5水溶液頂洗，得到濾洗液332L,效價 662011/1111，收率96.85%。
[0026]按16%PEG2000與濾洗液體積比1:4，分別取83L配制好的18%K2HP04和16%PEG2000溶液，攪拌混和，靜置10分鐘，形成雙水相體系，將上述濾洗液，攪拌下加入雙水相體系中，用液堿調(diào)PH9.5-10.0，攪拌15分鐘，靜置40分鐘，分層，上層體積82L，上、下層分別取樣測效價。測樣結(jié)果，上層效價26050u/ml，下層效價182u/ml，收率97.19%。
[0027]將上述上層液轉(zhuǎn)入丁醇抽提罐中，上層液與丁醇體積比3:1，用10%液堿調(diào)PH10.5-11.0，攪拌15分鐘，靜置20分鐘，分層，上、下層分別取樣測效價。上層為丁醇提取液，體積27L，測效價76360u/ml，提取收率96.52 ;下層為萃余液(PEG2000在本層)，效價130u/ml，將上層液進行后面反萃操作，將下層液加入1(2即04至分層，上層為PEG2000相，下層為1(2即04相，取上層清液返雙水相體系，進行循環(huán)套用。
[0028]將以上丁醇提取液，按照1/3 丁醇提取液體積加入純化水，室溫，攪拌下，加入6mol/L HCL,調(diào)pH2.2-2.6，靜置30分鐘，分層，分出下層反萃液8.9L，效價227500u/ml，反萃收率98.21%。
[0029]將上述反萃液，加入0.26kg活性碳，溫度55~60°C，攪拌30分鐘，進行吸附脫色，降溫到40°C，經(jīng)板框粗濾，再分別經(jīng)0.45um、0.22um不銹鈉過濾器精濾，得到精制脫色液。
[0030]將上述精制脫色液溫度控制在8~10°C，滴加經(jīng)0.45um、0.22um精濾后丙酮(水份^ 1%)，丙酮加入量2.8L,析出鹽酸林可霉素晶體，養(yǎng)晶8hr，抽濾，再將濕晶體用精濾丙酮少量多次洗滌，抽濾，真空干燥，得到鹽酸林可霉素產(chǎn)品2.06kg，結(jié)晶收率82.41%，提煉收率 73.53%o
[0031]實施例3
取林可霉素發(fā)酵液300L，發(fā)酵液效價7730u/ml，攪拌下加入草酸5.8kg，調(diào)pH2.5-3.5，間隔20分鐘，依次分別加入黃血鹽0.36kg、硫酸鋅0.36kg，繼續(xù)攪拌30分鐘，板框過濾，料液進完后，用草酸或用2mol/L HCL配制PH2.5?3.5水溶液頂洗，得到濾洗液340L,效價 655011/1111，收率96.03%。