2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法及應(yīng)用，采用原位聚合法，以2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸為模板分子、4-乙烯基吡啶為功能單體、甲醇與蒸餾水的混合溶液為致孔劑，直接將預(yù)聚合溶液注入到色譜柱內(nèi)，在柱管內(nèi)一步完成聚合，避免了繁瑣的裝柱手續(xù)，制備過程簡單，大大減少了制備時間。采用本發(fā)明方法得到的整體柱對模板分子、鏈格孢霉毒素及其結(jié)構(gòu)類似物具有特異選擇性，穩(wěn)定性好，可重復(fù)使用，而且用便宜的偽模板分子代替要檢測的物質(zhì)，減少了檢測費用，避免了模板分子的泄漏問題，提高了檢測的準(zhǔn)確性。
【專利說明】2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體
柱的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于鏈格孢酚毒素的分離檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種原位聚合法制備2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的方法及其在分離檢測鏈格孢酚毒素中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]鏈格孢霉是廣泛存在于大氣、土壤和植物中的一類真菌。這種真菌在全球分布最為廣泛，少數(shù)作為植物內(nèi)生真菌的鏈格孢可以產(chǎn)生長春堿、紫杉醇等抗癌藥物，而大多數(shù)鏈格孢能夠引起多種植物病害，而它產(chǎn)生的代謝物會造成對蔬菜、水果、谷物和飼料的污染，繼而引起全球性的田間和產(chǎn)后巨大的經(jīng)濟損失。由于它能在低溫下生長，因此能夠造成在低溫下長期保存和運輸?shù)氖卟恕⑺拿棺兏瘮?。主要的鏈格孢霉毒素有鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、細交鏈孢菌酮酸、鏈格孢霉素，這些毒素具有一定的細胞毒性，對動物有一定的致畸、致癌、致突變作用等，對人體健康危害較大，因此對鏈格孢霉毒素建立高效率、低檢出限的分析方法，來檢測食品中的鏈格孢霉毒素的含量迫在眉睫。
[0003]分子印跡技術(shù)具有特異選擇性、穩(wěn)定性好、使用壽命長、可重復(fù)使用等優(yōu)點，作為樣品的預(yù)處理介質(zhì)，能從復(fù)雜體系中選擇性地富集目標(biāo)分析物，已成為化學(xué)分析領(lǐng)域里最具應(yīng)用前景的技術(shù)之一。但現(xiàn)有的制備分子印跡聚合物整體柱的方法都存在明顯的局限性:本體聚合得到的聚合物為塊狀，使用前須經(jīng)過研磨、篩分等處理，尺寸和形狀不規(guī)則使得樣品處理困難，工作繁瑣、費時，且產(chǎn)率低(一般<50%)，應(yīng)用效率大幅降低；沉淀聚合法對溶劑的要求高，難以得到廣泛應(yīng)用；乳液聚合法制得的聚合物粒徑小(< lum)，不適合在液相色譜中使用且吸附后不易分離；懸浮聚合法雖制備工藝簡單，但獲得的粒徑分布寬，產(chǎn)物的單分散性和規(guī)整性都急劇下降，且亞微米級的微球難以得到，需經(jīng)繁瑣的分級處理才可使用；多步溶脹聚合法雖能制得微米級且粒徑較均勻的微球，經(jīng)簡單的洗滌即可使用，但需經(jīng)多步溶脹，過程較為繁瑣、制備周期較長，難以實現(xiàn)工業(yè)化；表面模板聚合法雖然較為簡單，但只能進行少部分特定的分子的印跡，應(yīng)用范圍較窄。此外，以上方法都要經(jīng)過繁瑣的裝柱過程。原位聚合是近期發(fā)展的制備分子印跡聚合物的新技術(shù)，可以通過一步聚合完成，在空的色譜柱內(nèi)用該方法形成整體柱，通過洗脫除去模板分子即可以使用，該技術(shù)的關(guān)鍵是針對不同的模板分子尋找合適的致孔劑體系和聚合體系，以獲得通透性好、選擇性好、柱效高的分子印跡聚合物整體柱。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的所要解決的一個技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有方法存在的缺點，提供一種操作簡單的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法。
·[0005]本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題在于為上述2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱提供一種用途。[0006]解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:將2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸按摩爾比為1:4~9.4:23~25溶于甲醇與蒸餾水的體積比為2~3.5:1的混合溶液中，乙二醇二甲基丙烯酸與混合溶液的體積比為0.3:1，加入偶氮二異丁腈混合均勻，偶氮二異丁腈與2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸的質(zhì)量比為1:2.8，除去混合物中的氧氣，裝入到色譜柱中，密封，55~70V反應(yīng)12~18小時，用甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液沖洗，得到2-[(6-氧代-6!1-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0007]本發(fā)明所述的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸與4_乙烯基吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸的摩爾比最佳為1:6:24 ;所述的反應(yīng)條件最佳為65°C反應(yīng)16小時。
[0008]本發(fā)明的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測鏈格孢酚毒素中的用途，所述的鏈格孢酚毒素為鏈格孢酚或鏈格孢酚甲醚。其具體使用方法為:將制備的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱直接用作液相色譜儀的檢測柱進行鏈格孢酹毒素的分離檢測。
[0009]本發(fā)明采用原位聚合法，直接將預(yù)聚合溶液注入到色譜柱內(nèi)，在柱管內(nèi)一步完成聚合，避免了繁瑣的裝柱手續(xù)，制備過程簡單，大大減少了制備時間。本發(fā)明得到的整體柱對模板分子2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸、鏈格孢霉毒素及其結(jié)構(gòu)類似物具有特異選擇性，穩(wěn)定性好，可重復(fù)使用。用相對便宜的模板代替昂貴的鏈格孢酚毒素，減少了色譜柱制備的成本。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星在實施例1制備的整體柱上的色譜分離圖。
[0011]圖2是2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星在對比實施例1制備的非印跡空白柱上的色譜分離圖。
【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。
[0013]實施例1
[0014]將14.21mg(0.05mmol)2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿 _3-基)氧基]丙酸、32uL(0.3mmol) 4-乙烯基吡卩定、240uL (1.2mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于800uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮氣10分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長為50mm的色譜柱,密封,65°C反應(yīng)16小時，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0015]對比實施例1
[0016]在實施例1中，不加模板分子2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸，其他步驟與實施例1相同，得到非印跡空白柱。
[0017]實施例2
[0018]將14.21mg(0.05mmol)2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿 _3_ 基)氧基]丙酸、50uL(0.47mmol) 4-乙烯基吡卩定、240uL (1.2mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于800uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮氣10分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長為50mm的色譜柱,密封，65°C反應(yīng)16小時，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0019]實施例3
[0020]將15.6mg(0.055mmol)2_[ (6_ 氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸、23uL(0.22mmol)4-乙烯基吡啶、251uL (1.33mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于837uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮氣10分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長為50mm的色譜柱,密封,65°C反應(yīng)16小時，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0021]實施例4
[0022]實施例1制備的2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚中的用途。其使用方法如下:
[0023]將2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱直接作為液相色譜儀的檢測柱，對待測物質(zhì)進行分離檢測，待測物質(zhì)為:2-[(6-氧代-611-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸(以下稱為模板分子)、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星；色譜檢測條件:流動相是乙酸與體積分?jǐn)?shù)為50%的乙腈水溶液的體積比為3:100的混合液，流速為0.8mL/min ;紫外檢測器檢測波長為280nm。同時用對比實施例1制備的非印跡空白柱作對比試驗。試驗結(jié)果見圖1和圖2，圖中I為鏈格孢酚，2為模板分子，3為鏈格孢酚甲醚，4為諾氟沙星，5為氧氟沙星，6為氯霉素，7為環(huán)丙沙星。
[0024]由圖1和圖2可見，實施例1制備的整體柱對模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的保留時間不同，對模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的印跡因子分別為:17.06,24.15，16.82，0.483，1.842,0.471,0.475，而非印跡空白柱對模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的保留時間相差不多，不能將它們分開，說明本發(fā)明制備的整體柱對模板分子以及與模板分子結(jié)構(gòu)相近的鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚有很強的保留能力，具有特異選擇性，可以用于富集分離鏈格孢酚毒素類物質(zhì)，而對氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星沒有特異選擇性。
【權(quán)利要求】
1.一種2-[(6_氧代-6H-苯并[C]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:將2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡唳、乙二醇二甲基丙烯酸按摩爾比為1:4~9.4:23~25溶于甲醇與蒸餾水的體積比為2~3.5:1的混合溶液中，乙二醇二甲基丙烯酸與混合溶液的體積比為0.3:1，加入偶氮二異丁腈混合均勻，偶氮二異丁腈與2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸的質(zhì)量比為1:2.8，除去混合物中的氧氣，裝入到色譜柱中，密封，55~70°C反應(yīng)12~18小時，用甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液沖洗，得到2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡唆、乙二醇二甲基丙烯酸的摩爾比為1:6:24。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:所述的反應(yīng)條件為65°C反應(yīng)16小時。
4.權(quán)利要求1的2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測鏈格孢酹毒素中的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測鏈格孢酚毒素中 的用途，所述的鏈格孢酚毒素為鏈格孢酚或鏈格孢酚甲醚。
【文檔編號】B01J20/285GK103524676SQ201310376068
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】張靜, 王艷麗, 田永樂, 鄭曉玲, 倪艷麗 申請人:陜西師范大學(xué)