本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及1,2-二取代苯并咪唑衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，該衍生物的制備方法，以該衍生物為活性成分的藥物組合物，以及在制備Pin1抑制劑，用于制備治療和/或預(yù)防各種癌癥的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：
近年來，受到環(huán)境污染、生活壓力以及不良生活習(xí)慣等因素的影響，全球腫瘤疾病患病率逐年上升趨勢。癌癥的預(yù)防和治療已經(jīng)成為世界醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。在眾多的癌癥治療手段中，化學(xué)治療仍是目前治療腫瘤的有效方法之一。傳統(tǒng)的化療藥物往往具有較大的毒副作用，為了減輕癌癥患者在疾病治療過程中的痛苦，研究人員當(dāng)前更傾向于開發(fā)靶向化療藥物。
腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個極其復(fù)雜的過程，與細(xì)胞信號通路調(diào)控的異常密切相關(guān)。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)步，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了多個能夠調(diào)控細(xì)胞信號通路新靶點(diǎn)。肽脯氨酰順反異構(gòu)酶Pin1(Protein interaction with NIMA1)參與多條信號通路的調(diào)控，并且在大量腫瘤中呈現(xiàn)過表達(dá)，引起了研究人員的廣泛關(guān)注。大量分子生物學(xué)研究表明，抑制Pin1可以同時抑制多條致癌信號通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，因而Pin1有望成為新的腫瘤診斷和治療的理想靶標(biāo)。
目前Pin1抑制劑的研究熱點(diǎn)主要集中于小分子抑制劑的設(shè)計(jì)，經(jīng)過多年的研究，各種結(jié)構(gòu)類型的Pin1小分子抑制劑不斷涌現(xiàn)。
本發(fā)明人設(shè)計(jì)并合成了一系列1,2-二取代苯并咪唑衍生物，經(jīng)酶活性篩選，所合成的化合物具有較好的Pin1酶抑制活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供1,2-二取代苯并咪唑類衍生物的制備方法，及其作為Pin1抑制劑在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及通式I所示的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中
Ar為5-6元芳香基、5-6元雜芳基，所述雜芳基含有1-3個N、O或S的雜原子；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子，鹵素，鹵素取代或未取代的C1-C4烷基，氰基；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的5-10元芳基，取代或未取代的5-10元雜環(huán)基，苯氧苯基，芐氧苯基；所述雜環(huán)基含有1-3個N、O或S的雜原子；
所述取代基為C1-C4烷基，鹵代C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，硝基，5-6元芳基；可以為單取代或者多取代；
X為CH2，C＝O；
Y為N，O；
當(dāng)Y為O時，僅為R5或R6取代；
n為0～2的整數(shù)。
優(yōu)選為：
其中，
Ar為苯基、噻唑基；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子，鹵素，鹵素取代或未取代的C1-C4烷基，氰基；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的5-10元芳基，取代或未取代的5-10元雜環(huán)基，苯氧苯基，芐氧苯基；
所述取代基為C1-C4烷基，鹵代C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，硝基，5-6元芳基；可以為單取代或者多取代；
X為CH2，C＝O；
Y為N，O；
當(dāng)Y為O時，僅為R5或R6取代；
n為0～2的整數(shù)。
進(jìn)一步優(yōu)選為：
Ar為苯基、噻唑基；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子，鹵素，鹵素取代或未取代的C1-C4烷基，氰基；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的苯基、萘基，取代或未取代的苯氧苯基，芐氧苯基；
所述取代基為C1-C4烷基，鹵代C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，硝基，取代或未取代的5-6元芳基(取代基為鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基)；可以為單取代或者多取代；
X為CH2，C＝O；
Y為N，O；
當(dāng)Y為O時，僅為R5或R6取代；
n為0～2的整數(shù)。
進(jìn)一步優(yōu)選為：
其中，
Ar為苯基；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子，Cl，CH3，鹵素取代或未取代的C1-C4烷基，氰基；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的苯基，萘基，取代或未取代的苯氧苯基，芐氧苯基；
所述取代基可以為C1-C4烷基，鹵代C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，硝基，苯基；可以為單取代或者多取代；
X為CH2，C＝O；
Y為N，O；
當(dāng)Y為O時，僅為R5或R6取代；
n為0～2的整數(shù)。
再進(jìn)一步優(yōu)選為：
其中，
Ar為苯基；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子，Cl，CH3，鹵素取代或未取代的C1-C4烷基，氰基；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯氧苯基，芐氧苯基；
所述取代基可以為甲基，甲氧基，CF3，F(xiàn)，Cl，Br，硝基，苯基；可以為單取代或者多取代；
X為C＝O；
Y為N，O；
當(dāng)Y為O時，僅為R5或R6取代；
n為0～2的整數(shù)。
更進(jìn)一步優(yōu)選為：
Ar為苯環(huán)；
R1、R2、R3、R4分別獨(dú)立的為氫原子；
R5、R6分別獨(dú)立的為氫原子，取代或未取代的C1-C4烷基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的苯氧苯基，芐氧苯基；
所述取代基可以為甲基，甲氧基，CF3，F(xiàn)，Cl，Br，硝基，苯基；可以為單取代或者多取代；
X為C＝O；
Y為N；
n為1。
特別優(yōu)選的化合物包括：
2-[1-[3-氧代-(3-苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(2-溴苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3-溴苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[[3-氧代-3-(3-硝基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3-三氟甲基苯胺基)]丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3-甲氧基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(4-三氟甲基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3,5-二甲氧基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3,5-二氯苯胺基)]丙基-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
2-[1-[3-氧代-3-(3-氟-4-甲基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸
4-[1-[3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-(4-叔丁基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-(4-氯-3,5-二甲基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-(4-苯氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-(4-芐氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-叔丁基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-氯-3,5-二甲基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-苯氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(1-萘氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-溴苯乙基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(2-溴苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(3-溴苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(3-甲基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(3-甲氧基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(3-三氟甲基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(3-硝基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(苯并噻唑-2-胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-[(1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-基)胺基]丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[1-[3-氧代-3-(N-苯基-N-1-萘基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(N-甲基-N-苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(N，N-二芐基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(N-甲基-N-苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(N，N-二芐基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸
除非另外指出，本發(fā)明所用的術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氯和溴；“烷基”是指直鏈或支鏈的烷基。
本發(fā)明包括藥物組合物，該組合物含有通式I的1，2-二取代苯并咪唑衍生物，及其藥物上可接受的賦型劑。所述藥物上可接受的賦型劑是指任何可用于藥物領(lǐng)域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。本發(fā)明的衍生物可以與其他活性成分組合使用，只要它們不產(chǎn)生其他不利的作用，例如過敏反應(yīng)。
本發(fā)明的藥物組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥物領(lǐng)域中常用的一些賦型劑，例如，口服制劑(如片劑，膠囊劑，溶液或混懸液)；可注射的制劑(如可注射的溶液或混懸液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制劑(例如軟膏或溶液)。
用于本發(fā)明藥物組合物的載體是藥物領(lǐng)域中可得到的常見類型，包括：口服制劑用的粘合劑、潤滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、色素、矯味劑等；可注射制劑用的防腐劑、加溶劑、穩(wěn)定劑等；局部制劑用的基質(zhì)、稀釋劑、潤滑劑、防腐劑等。藥物制劑可以經(jīng)口服或胃腸外方式(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部)給藥，如果某些藥物在胃部條件下是不穩(wěn)定的，可將其配制成腸衣片劑。
通過體外抑酶試驗(yàn)篩選，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明衍生物可抑制Pin1酶活力，因此，本發(fā)明衍生物可用于與Pin1酶活性異常表達(dá)相關(guān)的疾病中的應(yīng)用，如各種癌癥。
通過體外活性篩選，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明衍生物具有抗腫瘤活性，因此本發(fā)明衍生物可以用于制備治療和/或預(yù)防各種癌癥的藥物，如乳腺、肺、結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、膀胱、子宮、胰腺和卵巢的癌。
本發(fā)明活性化合物可作為唯一的抗癌藥物使用，或者與一種或多種其它抗腫瘤藥物聯(lián)合使用。聯(lián)合治療通過將各個治療組分同時、順序或隔開給藥來實(shí)現(xiàn)。
下文中提供的實(shí)施例和制備例進(jìn)一步闡明和舉例說明本發(fā)明化合物及其制備方法。應(yīng)當(dāng)理解，下述實(shí)施例和制備例的范圍并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
合成路線一：
Reagents and conditions：a)CH2(OH)COOH，HCl/H2O，100℃；b)KMnO4，H2O，100℃；c)SOCl2，NH3·H2O，70℃；d)Lawsson′s reagents，THF，66℃；e)ethyl 3-bromo-2-oxopropanoate，ethanol，78℃；f)3-bromopropionic acid，K2CO3，acetone/DMF/H2O，70℃；g)RNH2，EDCI，HOBT，4-methylmorpholine，CH2Cl2，r.t.；h)LiOH，THF/H2O，r.t..
合成路線二：
Reagents and conditions：a)BrBn，K2CO3，DMF，r.t.；b)1，2-diaminobenzene，DMF/H2O，80℃；c)BrCH2CH2CH2Br，K2CO3，CH3CN，82℃；d)ROH，K2CO3，r.t.；e)LiOH，THF/H2O，r.t..
合成路線三：
Reagents and conditions：a)BrBn，K2CO3，DMF，r.t.；b)1，2-diaminobenzene，DMF/H2O，80℃；c)3-bromopropionic acid，K2CO3，acetone/DMF/H2O，70℃；d)Amine or Alcohol，EDCl，HOBT，4-methylmorpholine，CH2Cl2，r.t.；e)LiOH，THF/H2O，r.t.or H2，Pd-C，CH3OH，r.t..
合成路線四：
Reagents and conditions：a)β-amino acid，Et3N，CH3CH2OH，78℃；b)Amine or Alcohol，EDCI，HOBt，CH2Cl2，r.t.；c)NH4ClZn，EtOH/H2O，95℃；d)Substituted PhCHO，DMF，80℃；e)LiOH，THF/H2O，r.t..
具體實(shí)施方式：
實(shí)施例旨在闡述而不是限制本發(fā)明的范圍。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1：2-[1-[3-氧代-(3-苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
步驟A：(1H-苯并咪唑-2-基)甲醇的制備
室溫下，將10.0g(92.6mmol)鄰苯二胺和20.0g(263.0mmol)乙醇酸置于250mL茄形瓶中，加入80mL 4mol/L的鹽酸，100℃回流4h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，用氫氧化鉀調(diào)pH至8.0，固體大量析出，過濾收集固體，用水進(jìn)行重結(jié)晶。收率：85.0％。
步驟B：1H-苯并咪唑-2-甲酸的制備
室溫下，將6.0g(1H-苯并咪唑-2-基)甲醇、4.3g碳酸鉀和6.4g高錳酸鉀置于250mL茄型瓶中，加入150mL水，100℃下回流反應(yīng)1h。反應(yīng)結(jié)束后趁熱過濾，濾液用2M鹽酸調(diào)pH至7，析出大量淡黃色固體，過濾收集固體，干燥。收率：50.0％。
步驟C：1H-苯并咪唑-2-甲酰胺的制備
室溫下，將3.0g(18.6mmol)1H-苯并咪唑-2-甲酸置于100mL茄型瓶中，加入30mL氯化亞砜，79℃回流反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后蒸干溶劑。加入30mL氨水，70℃反應(yīng)5h，冷卻反應(yīng)液，過濾得黃色固體，干燥。收率：55.0％。
步驟D：1H-苯并咪唑-2-硫代甲酰胺的制備
室溫下，將3.0g(18.6mmol)1H-苯并咪唑-2-甲酰胺和7.5g(18.6mmol)勞森試劑置于250mL茄型瓶中，加入150mL四氫呋喃，66℃回流反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后蒸干溶劑，所得固體用二氯甲烷溶解，飽和碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗，收集有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析得白色固體。收率：60.0％。
步驟E：2-(1H-苯并咪唑-2-基)噻唑-4-甲酸乙酯的制備
室溫下，將1.8g(10.0mmol)1H-苯并咪唑-2-硫代甲酰胺和1.98g(10.0mmol)3-溴代丙酮酸乙酯置于250mL茄型瓶中，加入無水乙醇100mL，78℃下回流反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后蒸干溶劑，得黑色固體，柱層析純化。收率：90.0％。
步驟F：3-[2-[4-(乙氧羰基)噻唑-2-基]-1H-苯并咪唑-1-基]丙酸的制備
室溫下，將1.0g(3.7mmol)2-(1H-苯并咪唑-2-基)噻唑-4-甲酸乙酯、2.2g(14.8mmol)溴丙酸和10.0g(74.0mmol)碳酸鉀置于250mL茄型瓶中，加入100mL丙酮、20mL DMF和2mL H2O，70℃反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，蒸干溶劑，加入適量水，調(diào)節(jié)pH至5，有大量淺黃色固體析出，過濾收集固體，干燥。收率：40.0％。
步驟G：2-[1-[3-氧代-(3-苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸乙酯的制備
0℃下，將500mg(1.45mmol)3-[2-[4-(乙氧羰基)噻唑-2-基]-1H-苯并咪唑-1-基]丙酸、0.8mL(4.25mmol)N-甲基嗎啉和162mg(1.74mmol)苯胺置于100mL茄型瓶中，加入50mL干燥的二氯甲烷，加入389mg(2.90mmol)HOBt，最后分批加入557mg(2.90mmol)EDCI，繼續(xù)攪拌30min后升至室溫，過夜。反應(yīng)結(jié)束后，水洗3次，飽和氯化鈉洗1次，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析得白色粉末狀固體。收率：20.0％。
步驟H：2-[1-[3-氧代-(3-苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
室溫下，將100mg(0.24mmol)2-[1-[3-氧代-(3-苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸乙酯置于25mL茄型瓶中，加入15mL四氫呋喃，滴加2.8mL 3.5mol/L的氫氧化鋰水溶液，室溫反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，蒸干溶劑，加入20mL水，用2mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至5，有白色固體析出，過濾，干燥。收率：90.0％。
LC-MS m/z:393.1[M+H]+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.89(1H,s)，8.64(1H,s)，7.74(2H,dd)，7.42(2H,d)，7.35(1H,t)，7.28(1H,t)，7.22(2H,t)，6.98(1H,t)，5.14(2H,t)，2.95(2H,t).
實(shí)施例2：2-[1-[3-氧代-3-(2-氯苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:427.1[M+H]+
實(shí)施例3：2-[1-[3-氧代-3-(3-氯苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:427.1[M+H]+
實(shí)施例4：2-[1-[[3-氧代-3-(3-硝基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:438.1[M+H]+
實(shí)施例5：2-[1-[3-氧代-3-(3-甲基苯胺基)]丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:407.2[M+H]+
實(shí)施例6：2-[1-[3-氧代-3-(3-氟苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:411.0[M+H]+
實(shí)施例7：2-[1-[3-氧代-3-(4-乙基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:421.2[M+H]+
實(shí)施例8：2-[1-[3-氧代-3-(3,5-二甲基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:421.1[M+H]+
實(shí)施例9：2-[1-[3-氧代-3-(3,5-二氯苯胺基)]丙基-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
按照實(shí)施例1的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:461.0[M+H]+
實(shí)施例10：2-[1-[3-氧代-3-(4-乙氧基苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]噻唑-4-甲酸的制備
LC-MS m/z:437.0[M+H]+
實(shí)施例11：4-[1-[3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
步驟A：4-甲?；郊姿崞S酯的制備
將1.49g(10mmol)4-甲酰基苯甲酸溶于25mL干燥的DMF中，加入10mmol碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0min，滴加11mmol的溴芐，繼續(xù)攪拌反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入60mL冰水中，析出大量固體，抽濾得淺黃色固體。收率：95％。
步驟B：4-(1H-苯并咪唑-2-基)苯甲酸芐酯的制備
將1.08g(10mmol)鄰苯二胺溶于50mL混合溶劑中(VDMF:VH2O＝2:1)，加入10mmol 4-甲?；郊姿崞S酯，升溫至80℃反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入100mL冰水中，析出大量固體，抽濾得淺黃色固體。收率85％。
步驟C：4-[1-(3-溴丙基)-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯的制備
將5mmol的4-(1H-苯并咪唑-2-基)苯甲酸芐酯溶于30mL乙腈中，加入10mmol的無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0min。滴加15mmol的1,3-二溴丙烷，82℃回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)完成后，稍冷，蒸干溶劑，加入50mL水，用50mL乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，柱層析純化得黃色固體。收率：50％。
步驟D：4-[1-[3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯的制備
將2mmol 4-氯苯酚溶于20mL丙酮中，加入4mmol碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0min。加入2mmol 4-[1-(3-溴丙基)-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯，56℃回流反應(yīng)5h。反應(yīng)完成后，稍冷，蒸干溶劑，加入30mL水，用30mL乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，柱層析純化得白色固體。收率：65％。
步驟E：4-[1-[3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
室溫下，將0.4mmol 4-[1-[3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯置于25mL茄型瓶中，加入15mL四氫呋喃，滴加1.5mL 3.5mol/L的氫氧化鋰水溶液，室溫反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，蒸干溶劑，加入15mL水，用2mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至5，有白色固體析出，過濾，干燥。收率：90.0％。
LC-MS m/z:407.1[M+H]+,429.1[M+Na]+,405.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.17(1H,s),8.00(2H,d),7.86(2H,d),7.71(2H,t),7.28(2H,m),7.22(2H,d),6.70(2H,d),4.55(2H,t),3.77(2H,m),2.11(2H,t).
實(shí)施例12：4-[1-[3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例11的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:403.1[M+H]+,425.1[M+Na]+,401.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.17(1H,s),8.02(2H,d),7.87(2H,d),7.70(2H,t),7.28(2H,m),6.76(2H,d),6.64(2H,d),4.53(2H,t),3.75(2H,t),3.67(3H,s),2.11(2H,m).
實(shí)施例13：4-[1-[3-(4-叔丁基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例11的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:429.2[M+H]+,427.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.20(1H,s),8.02(2H,d),7.87(2H,d),7.76(1H,t),7.35(1H,m),7.20(2H,d),7.16(1H,d),6.67(1H,d),6.61(2H,d),4.57(2H,t),3.80(2H,t),2.15(2H,m),1.24(9H,s).
實(shí)施例14：4-[1-[3-(4-氯-3,5-二甲基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例11的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:435.1[M+H]+,457.1[M+Na]+,433.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.02(2H,d),7.78(2H,d),7.68(2H,t),7.27(2H,m),6.51(2H,s),4.52(2H,t),3.75(2H,t),2.23(6H,s),2.11(2H,m).
實(shí)施例15：4-[1-[3-(4-苯氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例11的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:465.2[M+H]+,463.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.32(1H,s),8.03(2H,d),7.86(2H,d),7.70(2H,t),7.34(2H,t),7.28(2H,t),7.07(1H,t),6.90(4H,d),6.73(2H,d),4.56(2H,t),3.79(2H,t),2.14(2H,m).
實(shí)施例16：4-[1-[3-(4-芐氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例11的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:479.2[M+H]+,477.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.23(1H,s),8.04(2H,d),7.88(2H,d),7.73(2H,d),7.43(2H,d),7.38(2H,t),7.31(3H,m),6.85(2H,d),6.63(2H,d),5.01(2H,s),4.55(2H,t),3.76(2H,t),2.11(2H,m).
實(shí)施例17：4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
步驟A和步驟B按照實(shí)施例11中的步驟A和步驟B進(jìn)行操作。
步驟C和步驟D按照實(shí)施例1中的步驟F和步驟G進(jìn)行操作。
步驟E：4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
將0.25mmol的4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯溶于15mL甲醇中，加入0.01mmol的鈀碳，通入氫氣，室溫反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后，過濾蒸干溶劑的白色固體。收率：95％。
LC-MS m/z:421.1[M+H]+,443.1[M+Na]+,418.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.05(2H,d),7.76(2H,d),7.70(2H,t),7.42(2H,d),7.29(2H,m),6.96(2H,d),4.69(2H,t),3.08(2H,t).
實(shí)施例18：4-[1-[3-氧代-3-(4-甲氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:417.1[M+H]+,439.1[M+Na]+,414.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.04(2H,d),7.75(3H,m),7.70(1H,d),7.29(2H,m),6.88(2H,d),6.81(2H,d),4.68(2H,t),3.72(3H,s),3.05(2H,t).
實(shí)施例19：4-[1-[3-氧代-3-(4-叔丁基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:443.1[M+H]+,440.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.69(1H,s),8.12(2H,d),7.91(2H,d),7.79(1H,d),7.72(1H,d),7.31(4H,m),6.80(2H,d),4.71(2H,t),3.09(2H,t),1.25(9H,s).
實(shí)施例20：4-[1-[3-氧代-3-(4-氯-3,5-二甲基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:449.1[M+H]+,446.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.05(2H,d),7.76(2H,d),7.71(2H,t),7.29(2H,m),6.68(2H,s),4.70(2H,t),3.02(2H,t),2.26(6H,s).
實(shí)施例21：4-[1-[3-氧代-3-(4-苯氧基苯氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:479.1[M+H]+,476.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.04(2H,d),7.72(4H,m),7.38(2H,t),7.28(2H,m),7.16(1H,m),6.99(4H,m),6.92(2H,m),4.69(2H,t),3.06(2H,t).
實(shí)施例22：4-[1-[3-氧代-3-(1-萘氧基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:437.1[M+H]+,434.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.09(2H,m),7.94(2H,m),7.85(2H,m),7.79(2H,m),7.51(4H,m),7.33(2H,m),7.10(1H,m),4.78(2H,t),3.37(2H,t).
實(shí)施例23：4-[1-[3-氧代-3-(4-溴苯乙基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:492.1[M+H]+,414.1[M+Na]+,489.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.61(1H,s),8.22(2H,d),8.15(1H,t),8.04(3H,d),7.89(1H,d),7.62(2H,m),7.40(2H,d),7.03(2H,d),4.65(2H,t),3.12(2H,3.12),2.67(2H,t),2.53(2H,t).
實(shí)施例24：4-[1-[3-氧代-3-(2-溴苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:464.1[M+H]+,486.1[M+Na]+,461.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.21(1H,s),8.08(2H,d),7.86(2H,d),7.72(2H,m),7.44(4H,m),7.28(2H,m),4.65(2H,t),2.84(2H,t).
實(shí)施例25：4-[1-[3-氧代-3-(3-溴苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:464.1[M+H]+,486.1[M+Na]+,461.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.56(1H,s),8.11(2H,d),7.96(2H,d),7.73(2H,m),7.61(1H,dd),7.42(1H,d),7.31(2H,m),7.22(1H,m),7.12(1H,m),4.66(2H,t),2.92(2H,t).
實(shí)施例26：4-[1-[3-氧代-3-(3-甲基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:400.2[M+H]+,422.2[M+Na]+,397.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.13(1H,s),9.92(1H,s),8.07(2H,d),7.87(2H,d),7.71(2H,m),7.27(2H,m),7.13(1H,m),6.83(1H,m),4.64(2H,t),2.82(2H,t),2.24(3H,s).
實(shí)施例27：4-[1-[3-氧代-3-(3-甲氧基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:416.2[M+H]+,413.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.34(1H,s),8.12(2H,d),7.98(2H,d),7.94(2H,d),7.43(2H,m),7.21(1H,s),7.14(1H,m),7.05(1H,d),6.58(1H,d),4.69(2H,t),3.68(3H,s),2.92(2H,t).
實(shí)施例28：4-[1-[3-氧代-3-(3-三氟甲基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:454.1[M+H]+,476.1[M+Na]+,451.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.77(1H,s),8.04(3H,s),7.74(4H,m),7.67(1H,d),7.50(1H,t),7.36(1H,d),7.25(2H,m),4.64(2H,t),2.91(2H,t).
實(shí)施例29：4-[1-[3-氧代-3-(3-硝基苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:431.1[M+H]+,453.1[M+Na]+,428.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.39(1H,s),10.85(1H,s),8.46(1H,t),8.14(3H,m),8.03(2H,d),7.87(2H,m),7.78(1H,m),7.62(2H,m),7.54(1H,m),4.83(2H,t),2.99(2H,t).
實(shí)施例30：4-[1-[3-氧代-3-(4-氯苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:420.1[M+H]+,417.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.11(1H,s,-COOH),10.17(1H,s),8.08(2H,d),7.89(2H,d),7.72(2H,m),7.66(1H,s),7.29(4H,m),7.07(1H,m),4.67(2H,t),2.83(2H,t).
實(shí)施例31：4-[1-[3-氧代-3-(苯并噻唑-2-胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:443.1[M+H]+,465.1[M+Na]+,440.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.19(1H,s),12.39(1H,s),8.07(2H,d),7.96(1H,d),7.91(2H,d),7.76(1H,d),7.71(2H,t),7.41(1H,t),7.30(3H,m),4.71(2H,t),3.02(2H,t).
實(shí)施例32：4-[1-[3-氧代-3-[(1-甲基-3-苯基-1H-吡唑-5-基)胺基]丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:466.2[M+H]+,588.1[M+Na]+,464.5[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.24(1H,s),10.09(1H,s),8.12(2H,d),7.96(2H,d),7.80(1H,d),7.74(1H,d),7.70(2H,d),7.36(4H,m),7.26(1H,t),6.49(1H,s),4.69(2H,t),3.53(3H),2.92(2H,t).
實(shí)施例33：4-[1-[3-氧代-3-(N-苯基-N-1-萘基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例17的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:512.2[M+H]+,534.1[M+Na]+,509.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.11(1H,s),8.03(2H,t),7.81(3H,m),7.72(3H,m),7.53(4H,m),7.26(8H,m),4.66(2H,t),2.69(2H,t).
實(shí)施例34：4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
步驟A：3-[(4-氯-2-硝基苯基)胺基]丙酸的制備
將10mmolβ-氨基丙酸溶于50mL乙醇中，加入12mmol三乙胺攪拌10min。加入10mmol 5-氯-2-氟硝基苯，回流反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，蒸干溶劑，加入適量水，2M鹽酸調(diào)PH至酸性，析出大量固體。收率：90％。
步驟B：3-[(4-氯-2-硝基苯基)胺基]-N-苯基丙酰胺的制備
按照實(shí)施例1中的步驟G進(jìn)行操作。
步驟C：3-[(2-氨基-4-氯苯基)胺基]-N-苯基丙酰胺的制備
將2mmol氯化銨，10mmol鋅粉置于50mL茄型瓶中，加入10mL EtOH/H2O(2:1)，攪拌加熱至95℃。加入2mmol 3-[(4-氯-2-硝基苯基)胺基]-N-苯基丙酰胺，繼續(xù)反應(yīng)4h。反應(yīng)完成后，用飽和碳酸氫鈉調(diào)PH7～8，二氯甲烷萃取兩次，無水硫酸鈉干燥。
步驟D：4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸芐酯的制備
按照實(shí)施例11中的步驟B進(jìn)行操作。
步驟E：4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例1中的步驟H進(jìn)行操作。
LC-MS m/z:508.4[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.46(1H,s),10.08(1H,s),8.11(2H,d),7.95(3H,t),7.84(1H,s),7.45(3H,t),7.24(2H,t),6.99(1H,t),4.69(2H,t),2.86(2H,t).
實(shí)施例35：4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(N-甲基-N-苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例34的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:431.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.42(1H,s),8.16(2H,d),7.93(3H,m),7.87(1H,s),7.48(3H,m),7.19(2H,m),6.95(1H,m),4.69(2H,t),3.15(3H,s),2.86(2H,t).
實(shí)施例36：4-[5-氯-1-[3-氧代-3-(N,N-二芐基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例34的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:521.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.44(1H,s),8.14(2H,d),7.90(2H,d),7.73(1H,d),7.60(1H,s),7.26(7H,m),7.09(2H,d),6.99(2H,m),4.66(2H,t),4,41(2H,s),4.38(2H,s),2.99(2H,t).
實(shí)施例37：4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(苯胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例34的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:397.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.22(1H,s),9.99(1H,s),8.08(2H,d),7.92(2H,d),7.67(1H,d),7.51(1H,s),7.45(2H,d),7.24(2H,t),7.18(1H,d),7.00(1H,t),4.63(2H,t),2.83(2H,t),2.43(3H,s).
實(shí)施例38：4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(N-甲基-N-苯基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例34的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:414.2[M+H]+,412.0[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.32(1H,s),8.13(2H,d),7.83(2H,d),7.53(1H,s),7.37(4H,m),7.12(3H,m),4.55(2H,t),3.42(2H,t),3.11(3H,s),2.57(3H,s).
實(shí)施例39：4-[5-甲基-1-[3-氧代-3-(N,N-二芐基胺基)丙基]-1H-苯并咪唑-2-基]苯甲酸的制備
按照實(shí)施例34的制備方法，制備標(biāo)題化合物。
LC-MS m/z:501.9[M-H]-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.46(1H,s),8.17(2H,d),7.89(2H,d),7.43(1H,d),7.63(1H,s),7.28(7H,m),7.16(2H,d),6.98(2H,m),4.67(2H,t),4,43(2H,s),4.41(2H,s),3.01(2H,t),2.49(3H,s).
實(shí)施例40：本發(fā)明產(chǎn)物藥理作用研究
Pin1酶體外抑制活性實(shí)驗(yàn)
1.Pin1酶活性測試所需儀器及試劑
(1)底物溶劑：0.47M LiCl，溶于三氟乙醇(TFA)；
(2)緩沖Buffer：35mM Hepes(pH 7.8)；
(3)60mg/mL糜蛋白酶，溶于蒸餾水中，現(xiàn)用現(xiàn)配(Sigma,C4129)；
(4)順式脯氨酸底物Suc-Ala-Glu-cis-Pro-Phe-pNA(Bachem,L-1635)；
(5)重組人Pin1蛋白(Sino Biological Inc.,10282-H07E)；
(6)紫外可見分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司，UV-1801)。
2.Pin1酶活性測試原理
Pin1可以催化肽脯酰胺鍵的順反異構(gòu)，含順式肽脯酰胺鍵的四肽底物Suc-Ala-Glu-cis-Pro-Phe-pNA在Pin1酶的催化作用下，轉(zhuǎn)變成反式結(jié)構(gòu)Suc-Ala-Glu-trans-Pro-Phe-pNA。糜蛋白酶可以特異切割反式底物中的Phe-pNA，生成對硝基苯胺(pNA)，在390nm顯色，通過對吸光度的測定間接反映酶的活性。
3.Pin1酶活性測試方法
紫外-可見分光光度計(jì)預(yù)冷，至溫度<10℃；比色杯調(diào)零；加入緩沖液860μL，Pin1純蛋白20μL，混勻；加入待測化合物或溶劑對照10μL，分光光度計(jì)中預(yù)冷孵育20～30min；加入150μL糜蛋白酶，快速混勻；最后加入40μL底物啟動反應(yīng)，立即測定，在390nm連續(xù)監(jiān)測90s。
因?yàn)楫?dāng)?shù)孜餄舛冗h(yuǎn)小于米氏常數(shù)時，非催化的熱力學(xué)反應(yīng)速度小于10％的初速度，反應(yīng)初速度取決于底物濃度，酶促反應(yīng)過程符合一級動力學(xué)反應(yīng)，所以可以用指數(shù)擬合求得反應(yīng)的初速度。應(yīng)用軟件Graphpad Prism 5.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，根據(jù)指數(shù)擬合，得到每個反應(yīng)的反應(yīng)速度。
抑制率(％)＝[1-(Kx-K1)/(KD-K1)]×100。
Kx是加入化合物的反應(yīng)速度，KD是加入溶劑對照的反應(yīng)速度，K1是非酶促催化的自身熱力學(xué)反應(yīng)速度。
以胡桃醌為陽性對照藥。
考察目標(biāo)化合物在10μM濃度下的體外酶抑制活性，結(jié)果見Table 1。
Table 1.Pin1 inhibitory activities of target compounds.
上述試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明要保護(hù)的通式的化合物具有良好Pin1酶抑制作用。本發(fā)明的化合物具有很好的工業(yè)應(yīng)用前景。