專利名稱：取代苯甲酰脲類化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類作為親環(huán)素A的小分子非 肽類抑制劑的取代苯甲酰脲類化合物及其制備方法和藥理用途，該類化合物可作為免疫抑 制劑和抗HIV-1藥物。
背景技術(shù)：
親環(huán)素(Cyclophilin，CyP)的發(fā)現(xiàn)與命名起源于它對環(huán)孢素(Cyclosporin A, CsA)的高度親合性，CsA是臨床上廣泛使用的一種免疫抑制藥物(Handschumacher RE 等.Science，1984，226 :544-547)。CyP 是一個(gè)保守的蛋白質(zhì)家族(Gothel SF, Marahiel MA. Cell Mo. Life Sci，1999，55 :423_436)，從低等原核生物到哺乳動物都有這類蛋白。該 組蛋白的共同特征是具有肽脯氨酰順反異構(gòu)酶(P印tidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase)活性(Takahashi N, Hayano T, Suzuki M. Nature，1989，337 :473_475)。依據(jù)相對 分子量以及亞細(xì)胞定位等特征，目前已知人CyP家族有CypA、CypB、CypC和CypD等16種 成員，人親環(huán)素A(hCypA)是最重要的，也是研究最廣泛的成員(Braaren D，Luban J. EMB0 J, 2001, 20 :1300-1309)，它由165個(gè)氨基酸組成，相對分子量18，000，約占細(xì)胞蛋白總量 的0. 0.4%，主要位于胞質(zhì)內(nèi)。除了作為CsA的體內(nèi)結(jié)合蛋白，在體內(nèi)外，hCypA都 能結(jié)合蛋白質(zhì)并催化加速它們的折疊、裝配和轉(zhuǎn)運(yùn)，起分子伴侶的作用(Freskgard P0 等 Science,1992，258 466)。CypA包含八股反平行0片層，這些0片層組成一個(gè)桶狀結(jié)構(gòu)，在桶的上下口各 有一段a螺旋將桶的兩端封閉，CypA的配體結(jié)合口袋則位于該桶狀結(jié)構(gòu)的側(cè)面(Kallen J 等.Nature，1991，353 :276_279)，主要由兩個(gè)大的亞口袋組成亞口袋A和亞口袋B。亞口 袋 A 主要由 Thr73、Gly74、Asnl02、Alal03、Thrl07、Glyl09、Serll0 和 Glnlll 等殘基組成， 它們大部分為親水性殘基；亞口袋B為一深的疏水性凹槽，主要由Phe60、Met61、Phell3和 Leul22等殘基組成。CypA與多種疾病密切相關(guān)，1993年，Luban等人發(fā)現(xiàn)CypA和CypB可以與I型 愛滋病毒(HIV-1)的Gag蛋白特異性地結(jié)合，而CsA可以有效地抑制Gag-CypA之間的 相互作用(Luban J 等 Cell, 1993,73 :1067_1078) ； 1994 年，F(xiàn)ranke (Franke EK, Yuan HE. Nature，1994，372 :359-362)和 Thali 等人(Thali M 等.Nature，1994，372 :363_365) 分別在Nature上發(fā)表論文報(bào)道發(fā)現(xiàn)CypA特異性地?fù)饺氲紿IV-1病毒顆粒中，阻斷CypA 的摻入，抑制HIV-1的復(fù)制，這說明CypA與Gag蛋白的結(jié)合是功能相關(guān)的(Luban J. Cell, 1996,87 :1157-1159)。HIV-1的Gag蛋白為一個(gè)多蛋白，它在病毒組裝、成熟和出芽過程 中起著決定性作用(Gamble TR等.Cell，1996，87 :1285_1294)。CypA與Gag蛋白中的衣 殼蛋白(Capsid，CA ；231 residues)區(qū)域相結(jié)合，通過這一作用，CypA被特異性地包裹進(jìn) HIV-1病毒顆粒中。但CypA的缺失并不影響病毒的組裝、出芽和成熟，它在HIV-1生命周期 的早期(病毒逆轉(zhuǎn)錄開始之前)是必需的。因此，CypA可能在病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后的脫殼 (Uncoating)過程中發(fā)揮作用，幫助病毒核心發(fā)生解裝配(Viral CA core disassembly) 0
中國科學(xué)院上海藥物研究所蔣華良等人(Luo C等.Biochem Biophys Res Commun，2004，321 :557_565)通過生物信息學(xué)的手段發(fā)現(xiàn)雖然SARS_CoV并不編碼CA蛋 白，但SARS-CoV N蛋白的Val235 Pro369片斷與HIV-1 CA蛋白的N端結(jié)構(gòu)域(殘基1 151)具有較高的序列相似性(36. 7%),因此推測SARS-CoV N蛋白可能也與CypA發(fā)生相互 作用。之后，蛋白-蛋白結(jié)合活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一假設(shè)SARS-CoV N蛋白和CypA具有很高 的親和性，KD值約為6 160nM ；接下來的定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)初步地確定了 SARS-CoV N蛋白的 Trp302 Pro310片斷為與CypA結(jié)合的區(qū)域。以上結(jié)果說明CypA很有可能參與SARS-CoV 的生命活動過程。hCypA與配體形成的復(fù)合物對多重神經(jīng)元具有保護(hù)作用，對于損傷后的軸突、髓 鞘均有顯著的促再生作用(Yoshimoto T, Siesjo BK. Brain Res，1999，839 :283_291)。 Andreeva等證實(shí)CypA是一種氧化應(yīng)激誘導(dǎo)分泌的生長因子，介導(dǎo)活性氧介質(zhì)對細(xì)胞外信 號調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)的激活和血管平滑肌細(xì)胞增殖，表明CypA在血管疾病發(fā)病機(jī)制中發(fā) 揮重要作用(Andreeva L, Heads R, Green CJ. Int J Exp Path，1999，80 :305_315)。除了具有上述生理效應(yīng)，hCypA關(guān)于免疫抑制方面的作用是研究的最深入的。目前 公認(rèn)的免疫抑制作用機(jī)制是hCypA與胞漿內(nèi)的配體結(jié)合，形成的復(fù)合物然后與鈣調(diào)磷酸 酶(Calcineurin，CaN)結(jié)合并抑制 CaN 的磷酸化活性(Liu J等.Cell，1991，66 :807_815)。 CaN在淋巴細(xì)胞的活化過程中具有非常重要的作用，它通過脫磷酸化活化T細(xì)胞核因子 (Nuclear factor of activated T cell，NF-AT)，使之活化而移位進(jìn)入核內(nèi)，然后參與IL-2 和其它一些因子的轉(zhuǎn)錄過程。抑制了 CaN的磷酸化活性就抑制了具有免疫作用的細(xì)胞因子 的釋放，從而發(fā)揮免疫抑制作用。鑒于CypA在多個(gè)生理途徑中都發(fā)揮作用，因此有關(guān)它的抑制劑研究一直是個(gè)熱 點(diǎn)。按結(jié)構(gòu)劃分，CypA抑制劑分為三大類天然產(chǎn)物及其類似物、肽類及擬肽化合物和有機(jī) 合成小分子化合物。為了克服天然產(chǎn)物的毒副作用，以及肽類化合物的易代謝性，尋找選擇 性高、活性強(qiáng)的有機(jī)合成小分子CypA抑制劑成為必然?；钚苑肿訌念^設(shè)計(jì)法是指分子在合適的算法控制下，在受體結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)自動生 長，最終形成完整的配體結(jié)構(gòu)。與基于分子對接的虛擬篩選不同，活性分子從頭設(shè)計(jì)法能夠 在更大的化合物空間進(jìn)行取樣，因此可獲得結(jié)構(gòu)全新的化合物結(jié)構(gòu)。活性分子從頭設(shè)計(jì)法 在上世紀(jì)九十年代得到較大發(fā)展，如日本科學(xué)家于1992年開發(fā)出了 LEGEND程序，中國科 技大學(xué)劉海燕教授等于1999年發(fā)表了 DycoBlock程序(Proteins 1999，36，462-470)，北 京大學(xué)來魯華教授課題組分別于1996年和2000年發(fā)表了用于全新結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的RASSE程序 (J. Chem. Inf. Comput. Sci, 1996，36，1187-1194)和 LigBuilder 程序(J. Mol. Model. 2000， 6，498-516)，并在此基礎(chǔ)上，開發(fā)了 LigBuilder2.0程序。新版本功能更齊全，完善了結(jié)合 部位探測功能，并能對藥物靶標(biāo)進(jìn)行初步的可設(shè)計(jì)性預(yù)測，增加了結(jié)構(gòu)優(yōu)化模塊、鎖鑰匹配 模塊和可合成性分析模塊，形成了完整的基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的藥物從頭設(shè)計(jì)流程。特別是該 程序加入了內(nèi)置的化學(xué)反應(yīng)數(shù)據(jù)庫(目前包含465個(gè)反應(yīng))，可以在分子的產(chǎn)生及輸出過程 中用逆向合成原理對分子的可合成性進(jìn)行分析，降低了從頭藥物設(shè)計(jì)得到的新化學(xué)實(shí)體的 合成難度，突破了從頭藥物設(shè)計(jì)程序帶來的分子難以合成這一瓶頸。綜上所述，以CypA作為靶標(biāo)，結(jié)合從頭藥物設(shè)計(jì)方法和各種水平的生物活性測試 試驗(yàn)，設(shè)計(jì)并合成小分子化合物，對開發(fā)靶向CypA的免疫抑制藥物或抗HIV-1藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 綜合運(yùn)用從頭藥物設(shè)計(jì)方法和酶抑制活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)明人已經(jīng)找到了一個(gè)取代苯甲 酰脲化合物，運(yùn)用合理藥物設(shè)計(jì)方法針對此化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到一類化合物，并測試 了此類化合物在體外酶水平實(shí)驗(yàn)測試中抑制CypA的活性。結(jié)果證明本申請的化合物具有 較強(qiáng)的CypA抑制活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的-
卜目的是提供具有抑制CypA作用的新型取代苯甲酰脲類化合物，其
結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述取代苯甲酰脲類化合物的制備方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供作為CypA抑制劑的取代苯甲酰脲類化合物在制備預(yù) 防或治療CypA介導(dǎo)的相關(guān)疾病(如移植排斥反應(yīng)、由移植引起的宿主疾病、自身免疫疾病 和HIV-1入侵感染)方面的藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供包含治療有效量的一種或多種上述取代苯甲酰脲類化合物以及藥 學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑的藥物組合物。其中，上述取代苯甲酰脲類化合物占所 述藥物組合物總重量的0. 001-99. 9%，更優(yōu)選占總重量的0. 1-90%。 本發(fā)明提供具有如下通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物 其中和R2各自獨(dú)立地選自氫，Q-C；直鏈或支鏈的烷基、烷氧基和烷硫基，羥基，硝基， 氨基，鹵素，氰基，三氟甲基和芐氧基。 R3選自以下結(jié)構(gòu)II，III，IV, V, VI和VII 其中，X選自N、0和S ;m是0R4、R5和R6各自獨(dú)立地選自氧，CfC；直鏈或支鏈的烷基，CrC4烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，羥基，三氟甲基，羧基，巰基和Q-C；?；?；芳香基Ar選自取代或未取代的苯基或萘基，其取代基是1 4個(gè)選自鹵素、CrC6 直鏈或支鏈烴基、羥基、crc4烷氧基、crc4不飽和烴氧基、羧基、羧基取代的Ci-Ce烷氧基、 氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基和Ci-C；?；幕鶊F(tuán)。優(yōu)選地，通式(I)中，R3選自咕噸基，芴基，2，3-二氫-茚-1-基，R4取代的環(huán)己 基，R5和R6取代的二苯甲基以及未取代或被1 2個(gè)選自鹵素、crc6直鏈或支鏈烷基、羥 基、CfC4烷氧基、羧基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基和巰基的基團(tuán)取代的萘基、 苯基、苯甲基和苯乙基；其中，R4、R5和&各自獨(dú)立地選自氫，C「C6直鏈或支鏈的烷基，C「C4 烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，羥基，三氟甲基，羧基，巰基和Q-Q?；小１景l(fā)明式(I)化合物的第一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是化合物(IA)
其中，R3選自以下結(jié)構(gòu)其中，X選自N、0和S ;m是0 2的整數(shù)；n是1 3的整數(shù)；p是0 3的整數(shù)；
r4、r5和r6各自獨(dú)立地選自氫，Ci-Ce直鏈或支鏈的烷基，crc4烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨 基，羥基，三氟甲基，羧基，巰基和(^-(；酰基；芳香基Ar選自取代或未取代的苯基或萘基，其 取代基是1 4個(gè)選自鹵素、CfC；直鏈或支鏈烴基、羥基、C「C4烷氧基、Q-Q不飽和烴氧 基、羧基、羧基取代的CfQ烷氧基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基和(^-(；酰 基的基團(tuán)。本發(fā)明式(I)化合物的第二個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是化合物(IB) 其中，禮和R2各自獨(dú)立地選自氧，Q-C；直鏈或支鏈的烷基、烷氧基和烷硫基，羥基， 硝基，氨基，鹵素，氰基，三氟甲基和芐氧基。本發(fā)明式(I)化合物的第三個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是化合物(Ie) 其中，隊(duì)為氨基或硝基；R2選自氫，Ci-Q直鏈或支鏈的烷基、烷氧基和烷硫基，羥 基，硝基，氨基，鹵素，氰基，三氟甲基和芐氧基。具體地，所述的取代苯甲酰脲類化合物為1-(1-咕噸基)-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-萘-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、 1-苯甲基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-苯乙基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-環(huán)己 基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-苯基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-(4-氟苯基)-3-(2， 6-二羥基苯甲酰)脲、1-(2，3_ 二氫-茚-1-基)-3-(2，6_ 二羥基苯甲酰)脲、1-二苯甲 基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氰基苯甲酰)脲、 1-芴-3- (2-氟苯甲酰)脲、1-芴-3- (2-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3- (2-甲基苯甲酰)脲、 1-芴-3-(2-三氟甲基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2，6-二氟苯甲酰)脲、1-芴-3-(2，6-二氯苯 甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-氟苯甲酰)脲、1-芴_3-(苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-甲 巰基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-甲巰基苯甲 酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-芐氧基苯甲酰)脲、 1-芴-3-(2-甲巰基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-芐氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-硝基苯甲 酰)脲或1-芴-3-(2-胺基苯甲酰)脲。本發(fā)明還提供本申請要求保護(hù)的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物(具 體為IA、IB和及其中間體化合物VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV和XV的制備方法，具體 合成方法如下。方法一 IA的合成1)將芐醇鈉和2，6_ 二氟苯腈溶于二甲亞砜中，快速升溫至110 130°C后攪拌 5 10小時(shí)。冷至室溫，向反應(yīng)液中加入冰水，攪拌30分鐘，析出大量固體，抽濾，水洗，干 燥，得白色固體。用乙醇重結(jié)晶得白色片狀晶體2，6_ 二芐氧基苯腈(VIII)。2)將步驟1)得到的化合物VIII溶于芐醇中，并加入氫氧化鉀和少量水，120 140°C下攪拌10 15小時(shí)。減壓蒸餾除去溶劑，向殘余物中加入冰水，攪拌30分鐘，析出 大量固體，抽濾，水洗，干燥，得白色固體。將其用硅膠柱層析分離純化，得到白色粉末狀固 體2，6-二芐氧基苯甲酰胺(IX)。3)將三光氣溶于1，2-二氯乙烷中，冰浴冷卻至0 5°C，將溶于1，2-二氯乙烷的 民取代胺類化合物(R3-NH2)緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，加畢，繼續(xù)冰浴冷卻下攪 拌反應(yīng)30分鐘，后升溫至室溫反應(yīng)1小時(shí)，然后加熱至回流，當(dāng)反應(yīng)液呈無色透明狀時(shí)，將 三乙胺加入反應(yīng)液中，繼續(xù)回流30分鐘。減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯，抽濾，濾液蒸干得 到淡黃色固體，為R3取代的異氰酸酯(X)。4)將步驟2)和步驟3)得到的化合物IX和X溶入甲苯中，加熱至回流反應(yīng)10 15小時(shí)。減壓蒸除反應(yīng)溶劑得到淡黃色固體，將其用硅膠柱層析分離純化，得到1-民取 代-3-(2，6-二芐氧基苯甲?；?脲(XI)。5)將步驟4)得到的化合物XI加入45%的溴化氫醋酸溶液中，控溫50 70°C下 攪拌5 10小時(shí)。將反應(yīng)液傾入冰水中，攪拌30分鐘，析出大量固體，抽濾，水洗，干燥，得 1_R3取代-3-(2，6-二羥基苯甲酰基)脲(IA)。 其中，R3的定義同上。優(yōu)選地，民是咕噸基、萘基、苯甲基、苯乙基、環(huán)己基、苯基、 4-氟苯基、2，3- 二氫-茚-1-基或二苯甲基。方法二 IB的合成1)將9-芴酮與鹽酸羥胺加入70%乙醇水溶液中，回流攪拌2 5小時(shí)。將反應(yīng) 液傾入冰水中，析出大量黃色固體，抽濾，水洗，干燥，得黃色固體9-芴肟(XII)。2)將步驟1)得到的化合物XII加入含少量水的醋酸溶液中，加熱至回流。將Zn 粉緩慢加入反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1 3小時(shí)。將反應(yīng)液乘熱過濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾除去大部 分溶劑，抽濾，得9-芴胺醋酸鹽。將其加入稀鹽酸中，冰浴冷卻下攪拌10 15小時(shí)。抽濾， 得9-芴胺鹽酸鹽。將9-芴胺鹽酸鹽加入氨水中攪拌1 3小時(shí)，抽濾，氨水洗滌并干燥。 用石油醚重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶9-芴胺(XIII)。3)將三光氣溶于1，2-二氯乙烷中，冰浴冷卻至0 5°C，將溶于1，2-二氯乙烷的 9-芴胺XIII緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，加畢，繼續(xù)冰浴冷卻下攪拌反應(yīng)30分鐘， 后升溫至室溫反應(yīng)1小時(shí)，然后加熱至回流，當(dāng)反應(yīng)液呈無色透明狀時(shí)，將三乙胺加入反應(yīng) 液中，繼續(xù)回流30分鐘。減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯，抽濾，濾液蒸干得到淡黃色固體，為 9_芴異氰酸酯(XIV)。4)將步驟3)得到的化合物XIV和R” R2-二取代苯甲酰胺溶入甲苯中，加熱至回 流反應(yīng)10 15小時(shí)。減壓蒸除反應(yīng)溶劑得到淡黃色固體，將其用硅膠柱層析分離純化，得 到1-芴-3-(隊(duì)，1 2-二取代苯甲?；?脲(IB)。
其中，禮和&的定義同上。優(yōu)選地，隊(duì)為氫時(shí)，R2為2-氯、2-氰基、2-氟、2-甲氧基、2-甲基、2-三氟甲基、
氫、2-甲巰基或2-芐氧基；為2-氟時(shí)，R2為6-氟、6-甲巰基、6-甲氧基或6_芐氧基；為2-氯時(shí)，R2為6-氯、6-氟、6-甲巰基或6-甲氧基。方法三IC的合成1)將2-硝基_R2取代-苯甲酰胺溶于干燥甲苯中，控溫20 30°C，慢慢滴加草 酰氯，待反應(yīng)放熱結(jié)束后，加熱回流3-5小時(shí)，使懸浮固體全部溶解，反應(yīng)液變澄清且無氯 化氫氣體放出，結(jié)束反應(yīng)，將反應(yīng)液減壓蒸餾除去過量的甲苯和草酰氯，得2-硝基-R2取 代-苯甲酰異氰酸酯(XV)。2)將步驟1)得到的化合物XV和IB合成中步驟3)得到的9-芴胺(XIII)溶入甲 苯中，加熱至回流反應(yīng)10 15小時(shí)。減壓蒸除反應(yīng)溶劑，將殘余物用硅膠柱層析分離純化， 得到1-芴-3-(2-硝基-R2取代-苯甲?；?脲(Ic_l)。3)將步驟2)得到的化合物1「1，氯化銨和Fe粉投入到THF中，回流反應(yīng)1 3小時(shí)。冷至室溫，抽濾，濾液被減壓蒸除溶劑，將殘余物用硅膠柱層析分離純化，得 1-芴-3-(2-氨基-民取代-苯甲?；?脲(Ic-2)。 其中，R2的定義同上。優(yōu)選地，R2是氫。


圖1為化合物Ia-3對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖2為化合物Ia_5對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖3為化合物IB_1對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖4為化合物Ib_2對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖5為化合物Ib_3對CypA酶活抑制的量效曲線圖。
圖6為化合物Ib_6對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖7為化合物Ib_7對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖8為化合物Ib_8對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖9為化合物Ib_9對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖10為化合物IB_11對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖11為化合物Ib_17對CypA酶活抑制的量效曲線圖。圖12為化合物對CypA酶活抑制的量效曲線圖。
具體實(shí)施例方式在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，但 不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例中的所有參數(shù)以及其余的說明，除另有說明外，都是以質(zhì) 量(克)為單位。實(shí)施例12，6- 二芐氧基苯腈(中間體VIII) 將0. 5克芐醇鈉溶于10毫升二甲亞砜中，攪拌下加入2，6- 二氟苯腈?？焖偕郎?至115°C后繼續(xù)攪拌8小時(shí)。冷至室溫，將100毫升冰水傾入反應(yīng)液中，攪拌30分鐘，析 出大量固體，抽濾，水洗，干燥，得白色固體。用乙醇重結(jié)晶得白色片狀晶體中間體VIII。 ^-WR(400Hz，DMS0-d6) 8 5. 19 (4H, s, _CH2)，6. 60 (2H, d, Ar-H), 7. 30-7. 35 (3H, m, Ar-H)， 7. 38 (4H, t)，7. 45 (4H, d)。實(shí)施例2 2，6- 二芐氧基苯甲酰胺(中間體IX) 將0.4克2，6-二芐基苯腈(VIII)溶于7毫升芐醇中，并加入0. 6克K0H和0. 1 毫升水，130°C下攪拌12小時(shí)。減壓蒸餾除去溶劑，將100毫升冰水傾入反應(yīng)液中，攪拌30 分鐘，析出大量固體，抽濾，水洗，干燥，得白色固體。硅膠柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯 =12/1)，得到白色粉末狀固體中間體 IX。匪R(400Hz，DMS0-d6) 8 :5. 15 (4H, s, _CH2)， 6. 60 (2H, d, Ar-H), 7. 18-7. 48(12H, m, Ar-H) ；EI-MS m/z 333. 2 (M+)，91. 1 (100% )。實(shí)施例3 1-(1_咕噸基)-3_(2，6-二芐氧基苯甲酰)脲(中間體XI-1) 將0.5克三光氣溶于3毫升1，2_二氯乙烷中，冰浴攪拌至溶解。將0.25克咕噸胺溶于10毫升1，2- 二氯乙烷中，并緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，反應(yīng)液呈白色混濁。 繼續(xù)冰浴0. 5小時(shí)后，升溫至25V反應(yīng)1小時(shí)，然后回流加熱至反應(yīng)液呈無色透明狀時(shí)，將 1毫升三乙胺加入反應(yīng)液中繼續(xù)回流0.5小時(shí)。減壓蒸餾除去溶劑，加入10毫升甲苯，抽濾， 濾液不經(jīng)后處理，向其中加入0. 25克2，6-二芐氧基苯甲酰胺(IX)，回流反應(yīng)10小時(shí)。減壓 蒸除溶劑，加水析出固體，將其用硅膠柱層析分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1/4， 得到白色固體產(chǎn)物中間體 XI-1。收率 44% ；1H-WR(400Hz，DMS0-d6) 8 :5. 13 (4H，s，-CH)， 6. 39 (1H, d, Ar-H)，6. 56 (2H, t, Ar-H)，6. 81 (2H, d, Ar-H)，7. 03 (2H, d, Ar-H)，7. 19 (2H, t, Ar-H)，7. 29 (3H, t, Ar-H)，7. 39-7. 50 (10H, m, Ar-H)，9. 13 (1H, d, -NH)。
實(shí)施例4 1-(1-咕噸基)-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(IA_1))將0.3克1-(1-咕噸基)-3-(2，6-二芐氧基苯甲酰)脲(XI-1)加入4毫升45% 溴化氫醋酸溶液中，60°C下攪拌6小時(shí)。反應(yīng)液傾入150毫升冰水中，攪拌30分鐘，析出 大量固體，抽濾，水洗，干燥得灰白色固體，少量乙醚清洗，得白色固體化合物IA_1。收率 40% ；1H-WR(400Hz，DMS0_d6) 8 :6. 23 (1H, d, Ar-H)，6. 60 (2H, t, Ar-H)，6. 86 (2H, d, Ar-H)， 7. 05 (2H, d, Ar-H) ,7. 24 (2H, t, Ar-H), 7. 29 (3H, t, Ar-H) ,9. 34 (1H, d, -NH) ；EI-MS m/z 376. 1 (M+), 180. 1(100% )。實(shí)施例5 1-萘-3-(2，6- 二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(IA_2))將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成1-萘胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施 例 1 4，得灰白色固體化合物 Ia-2。收率 50% ；Mp 203-208°C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 6. 46 (1H, d, -CH)，7. 26 (1H, s, Ar-H)，7. 47-7. 64 (5H, m, Ar-H)，7. 66 (1H, d, Ar-H, 7. 93-8. 08 (3H, m, Ar-H), 8. 21 (1H, d, Ar-H) ；EI-MS m/z322 (M+)，169. 1(100% )。實(shí)施例6 1-苯甲基-3-(2，6- 二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(IA_3)) 將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成芐胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例 1 4，得灰白色固體化合物 Ia-3。收率 52% ；Mp 210-215 °C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 4. 42 (2H, d, _CH2)，6. 42 (2H, d, Ar-H)，7. 18-7. 33 (6H, m, Ar-H)，8. 34 (1H, br, Ar-H)， 10. 54 (1H, s, -NH), 11. 74 (2H, s, -OH) ；EI-MS m/z286. 1 (M"), 136. 0 (100% )。

實(shí)施例7 1-苯乙基-3-(2，6_ 二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(IA_4))將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成苯乙胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例 1 4，得土黃色固體化合物 Ia-4。收率 67% ；Mp 208-212°C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 2. 80 (2H, t, -CH2)，3. 44 (2H, q, _CH2)，6. 41 (2H, d, Ar-H)，7. 21-7. 30 (6H, m, Ar-H)，8. 34 (1H, br, Ar-H)，10. 54(1H, s, -OH)，11. 74(2H, s, -OH) ；EI-MS m/z 300. 1 (M+)，136. 0(100% )。實(shí)施例8 1-環(huán)己基-3_(2，6- 二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(IA_5))將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成環(huán)己胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施 例 1 4，得灰白色固體化合物 Ia_5。收率 41 % ；Mp > 300 °C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 :1. 52-1. 68(10H, m, _CH2)，3. 60 (1H, d, _CH)，6. 42 (2H, d, Ar-H), 7. 22 (1H, s, Ar-H)， 8. 214 (1H, br, Ar-H) , 10. 52 (1H, s N-H) ,11. 68 (2H, s, -OH) ；EI-MS m/z 278. 1 (M+), 136. 0(100% )。實(shí)施例9 1-苯基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(Ia_6))將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成苯胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1 4，得白色固體化合物 Ia_6。收率 40%;Mp 251-255t^H-WR(400Hz，DMS0-d6) S 7. 02 (2H, d, Ar-H) ,7. 10(2H，d，Ar-H)，7. 38 (2H, t, Ar-H), 7. 34 (1H, t, Ar-H), 7. 34-7. 53 (7H, m, Ar-H), 7. 62 (2H, d, Ar-H), 7. 78 (1H, d, Ar-H), 7. 81 (2H, d, Ar-H) ,8. 69 (1H, d, Ar-H)，11. 23 (1H, s，-0H)。EI-MS m/z 272. 1 (M+)，136. 0 (100% )。實(shí)施例10 1-(4-氟苯基)-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(Ia_7)) 將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成4-氟苯胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施 例 1 4，得灰白色固體化合物 Ia-7。收率 49% ；Mp 192-195°C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 7. 15 (3H, t, Ar-H)，7. 35 (3H, dd, Ar-H)，8. 8 (1H, d, Ar-H) ；EI-MS m/z 290. 1 (M+)， 136. 0(100% )。
實(shí)施例11 1-(2，3_ 二氫-茚-1-基)-3-(2，6_ 二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的 一種(IA_8))
將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成2，3- 二氫-茚-1-胺，其余所需原料、試劑及制備 方法同實(shí)施例1 4，得淺褐色固體化合物Ia-8。收率82% ；Mp 250-252°C ；1H-匪R(400Hz， DMS0-d6) 8 :1. 65 (2H, m, _CH2)，2. 38 (2H, m, _CH2)，2. 76-2. 87 (4H, m, _CH2)，5. 13 (1H， dd, -CH)，6. 15 (1H, d, _CH)，6. 38 (1H, d, Ar-H)，7. 17-7. 30 (7H, m, Ar-H)，8. 54 (1H, d, Ar-H)， 11. 65(1H, s, Ar-H) ；EI-MS m/z312. 1 (M+)，132. 1(100% )。實(shí)施例12 1-二苯甲基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲(化合物IA的一種(Ia_9)) 將實(shí)施例3中的咕噸胺替換成二苯甲胺，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施 例 1 4，得土黃色固體化合物 Ia-9。收率 70% ；Mp 222-224V ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 6. 08 (1H, d, -CH), 6. 24 (2H, d, Ar-H), 7. 11 (1H, t, Ar-H), 7. 10-7. 12 (2H, m, Ar-H)， 7. 32-7. 37 (8H, m, Ar-H) ,9. 19 (1H, d, Ar-H) ；EI-MS m/z 361. 1 (M+), 302. 1(100% )實(shí)施例13 9-芴月虧(中間體XII) 將5克9-芴酮與5克鹽酸羥胺加入到50毫升70%乙醇溶液中，回流攪拌3小時(shí)。 將反應(yīng)液傾入100毫升冰水中，析出大量黃色固體，抽濾，水洗，干燥得黃色固體產(chǎn)物中間 體 XII(4. 9g，90% )。EI-MS m/z 195. 1 (M"), 179. 1(100% ) 實(shí)施例14 9-芴胺(中間體XIII) 將3克9-芴肟(XII)加入到50毫升95%醋酸水溶液中，加熱至回流。將6克 Zn粉緩慢加入反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1小時(shí)。將反應(yīng)液乘熱過濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾除去大部 分溶劑，抽濾，得晶狀醋酸鹽固體。繼續(xù)加入60毫升5N鹽酸，于冰浴下攪拌12小時(shí)。將
反應(yīng)液過濾，得白色9-芴胺鹽酸鹽固體。將9-芴胺鹽酸鹽加入100毫升氨水中攪拌2小 時(shí)，抽濾，氨水洗滌并干燥。用石油醚重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶中間體XIII。屯-匪1 (400泡， DMS0-d6) 8 4. 91 (d, 2H, Ar-H)，7. 32 (t, 2H)，7. 45 (t, 2H, Ar-H)，7. 71 (d, 2H, Ar-H)，7. 79 (d, 2H, Ar-H), 7. 71 (m, 1H) ；EI-MS m/z 180. 1 (M")，180. 1 (100% )。
實(shí)施例15 1-芴-3-(2-氯苯甲酰)脲(化合物IB的一種(IB_1)) 將0. 5克三光氣溶于3毫升1，2- 二氯乙烷中，冰浴攪拌至溶解。將0. 25克9-芴 胺(XIII)溶于10毫升1，2_ 二氯乙烷中，并緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，反應(yīng)液呈 白色混濁。繼續(xù)冰浴0. 5小時(shí)后升溫至25V反應(yīng)1小時(shí)，然后加熱回流至反應(yīng)液呈無色透 明狀時(shí)，將1毫升三乙胺加入反應(yīng)液中后繼續(xù)回流0. 5小時(shí)。減壓蒸餾除去溶劑，加入10 毫升甲苯過濾。向?yàn)V液中加入0.15克2-氯苯甲酰胺，回流反應(yīng)12小時(shí)。減壓蒸除溶劑， 將其用硅膠柱層析分離純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1/2，干燥。得到白色固體產(chǎn) 物化合物 IB_1。收率 41% ；Mp 203-205°C ；1H_NMR(400Hz，DMS0_d6) 8 5. 97 (1H, d, C_H)， 7. 37-7. 57 (8H, m, Ar-H)，7. 64 (2H, d, Ar-H)，7. 88 (1H, d, Ar-H)，8. 66 (1H, d, N_H), 11. 61 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/z 362. 2 (M+)，180. 1 (100% )。實(shí)施例16 1-芴-3-(2-氰基苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_2)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氰基苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib-2。收率45% ；Mp224-226 °C ； 'H-NMR(400Hz, DMS0-d6) 8 :5.97(1H，d, C_H)，7. 29—7. 47 (4H，m, Ar-H), 7. 56-7. 71 (3H, m, Ar-H) ,7. 75-7. 91 (5H, m, N-H) , 8. 55 (1H, d, N-H)，11. 47 (1H, s, Ar-H) ；EI-MS m/z 353. 2 (M+)，207. 1(100% )。實(shí)施例17 1-芴-3-(2-氟苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_3)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氟苯甲酰胺，其余所需原料、試劑及制 備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib_3。收率49 % ;Mp 272-275 °C ； 'H-NMR (400Hz，DMS0-d6) 8 6. 19 (1H, d, C_H)，7. 22 (1H, q, Ar-H)，7. 28-7. 36 (3H, m, Ar-H)，7. 41-7. 45 (2H, t, Ar-H)，7. 58 (1H, m, Ar-H)，7. 70 (2H, d, Ar-H)，7. 73 (2H, d, Ar-H)，8. 02 (1H, td, Ar-H)， 8. 71-8. 75(2H，m，N-H) ；EI-MS m/z346. 2 (M+)，180. 1 (100% )。
實(shí)施例18 1-芴-3-(2-甲氧基苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_4))將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-甲氧基苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib-4。收率37% ；Mp206-209°C ； 'H-NMR(400Hz, DMS0_d6) 8 3. 92 (3H, s, -0CH3), 6. 00 (1H, d, C-H), 7. 03 (1H, q, Ar-H), 7. 19 (1H, d, Ar-H)，7. 34-7. 38 (2H, d, Ar-H)，7. 40-7. 47 (2H, m, Ar-H)，7. 57 (2H, t, Ar-H)， 7. 63(2H, d, Ar-H),7. 88 (2H, d, Ar-H),8. 88(1H, s, N_H)，10. 43(1H，d, N-H) ；EI-MS m/z 358. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例19 1-芴_3-(2_甲基苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_5))將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-甲基苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib-5。收率47% ；Mp206-209 °C ； 'H-NMR(400Hz, DMS0-d6) 8 2. 43 (3H, s, -CH3), 5. 99 (1H, d, C-H), 7. 27 (2H, d, Ar-H), 7. 38 (3H, m, Ar-H)，7. 46 (3H, t, Ar-H)，7. 65 (2H, m, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H)，，8. 86 (1H, d, N-H)，11. 25 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/z 342. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例20 1-芴-3-(2-三氟甲基苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_6)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-三氟甲基苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得土黃色固體化合物Ib-6。收率44% ；Mp 272-275°C ； iH-WR(400Hz，DMS0-d6) 8 5. 97 (1H, d, C-H)，7. 37-7. 46 (4H, m, Ar-H)，7. 60 (2H, d, Ar-H)， 7. 69 (2H, d, Ar-H)，7. 70-7. 82 (2H, m, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H)，8. 60 (1H, d, N-H)，11. 25 (1H， s, N-H) ；EI-MS m/z 396. 2 (M+)，180. 1 (100% )。實(shí)施例21 1-芴-3_(2，6-二氟苯甲酰)脲(化合物IB的一種(Ib_7)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2，6_ 二氟苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得土黃色固體化合物Ib-7。收率68% ；Mp252-255°C ； ^-WR(400Hz，DMS0-d6) 8 5. 94 (1H, d, C_H)，7. 20 (2H, d, Ar-H), 7. 36-7. 60 (4H, m, Ar-H)， 7. 87 (3H, m, Ar-H),7. 88(2H, d, Ar-H),8. 54(1H, d, N_H)，11. 44(1H，s, N_H) ；EI-MS m/z 464. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例22 1-芴-3_(2，6- 二氯苯甲酰)脲(化合物IB的一種(IB_8)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2，6_ 二氯苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得淺黃色固體化合物Ib-8。收率42% ；Mp240-242°C ； 'H-NMR (400Hz, DMS0_d6) 8 :5. 99 (1H, d, C_H)，7. 27-7. 50 (6H, m, Ar-H), 7. 50-7. 72 (3H, m, Ar-H), 7. 38 (2H, t, Ar-H), 7. 88 (2H, d, Ar-H) ,8. 58 (1H, d, N_H)，11. 51 (1H，s, N_H) ；EI-MS m/z 396. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例23 1-芴-3_(2-氯-6-氟苯甲酰)脲(化合物IB的一種(IB_9))將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氯-6-氟苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得淺黃色固體化合物Ib-9。收率46% ；Mp236-238°C ； 'H-NMR (400Hz, DMS0-d6) 8 :5. 99 (1H, d, C_H)，7. 27-7. 50 (6H, m, Ar-H), 7. 50-7. 72 (3H, m, Ar-H), 7. 38 (2H, t, Ar-H), 7. 88 (2H, d, Ar-H) ,8. 58 (1H, d, N_H)，11. 51 (1H，s, N_H) ；EI-MS m/z 380. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例24 1-芴-3_(苯甲酰)脲(化合物IB的一種(IB-10)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成苯甲酰胺，其余所需原料、試劑及制備方
法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib-IO。收率80% ；Mp 241-243°C ；1H-NMR(400Hz, DMS0-d6) δ 5. 97 (1Η, m)，6. 40 (4H, m, Ar-H)，7. 22 (1H，t, Ar-H)，7. 35 (3H, t, Ar-H)， 7. 45 (3H, t, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H)，8. 68 (1H, dd, Ar-H) ；EI-MS m/z 328. 2 (M+), 180. 1(100% )。實(shí)施例25 1-芴-3-(2_氟_6_甲巰基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_11)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氟-6-甲巰基苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得灰白色固體化合物IB-11。收率32%;Mp 241_243°C; 1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) δ :2. 9(3H, s, -SCH3), 5. 99 (1Η, d, C-H), 7. 13 (1Η，t, Ar-H), 7. 24 (1Η, d, Ar-H)，7. 38 (2Η, t,Ar-H)，7. 43-7. 52 (3Η, m, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H) ,8. 78 (1H, d，N-H)，11. 03 (1H，s，N-H) ；EI-MS m/z 392. 2 (M+), 180. 1(100% )。實(shí)施例26 1-芴-3-(2-氟_6_甲氧基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(ΙΒ_12)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氟-6-甲氧基苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ιβ-12。收率45% ；Mp 112_114°C ； 1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) δ 3. 75 (3Η, s, -OCH3), 5. 89 (1Η, d, C-H) ,6. 87 (1H, t, Ar-H), 6. 97 (1Η, d, Ar-H)，7. 38 (2Η, t,Ar-H)，7. 41-7. 48 (3H, m, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H)，7. 89 (2H, d, Ar-H), 8. 78 (1H, d, N-H)，11. 03 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/z 376. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例27 1-芴-3-(2-氯_6_甲巰基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_13)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氯-6-甲巰基苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得類白色固體化合物Ib-13。收率56%;Mp 230-235°C； 1H-WRGOOHz, DMS0_d6) δ :3· 34 (3Η, s, -SCH3), 5. 99 (1Η, d, C-H), 7. 30-7. 51 (9Η, m, Ar-H)， 7. 58-7. 62 (2Η, d, Ar-H)，7. 92 (2Η, d, Ar-H)，8. 68 (1Η, d, N-H)，11. 33 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/ ζ 408. 2 (M+), 180. 1(100% )。
實(shí)施例28 1-芴-3-(2-氯_6_甲氧基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_14)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氯-6-甲氧基苯甲酰胺，其余所需原料、 試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得類白色固體化合物Ib-14。收率44%;Mp 258-260°C ； 1H-WRGOOHz, DMS0-d6) δ :3. 75 (3Η, s)，5. 89 (1H, d, C-H), 7. 02 (2Η, d, Ar-H), 7. 10 (2Η, d, Ar-H)，7. 38 (2Η, t, Ar-H)，7. 34 (1H, t, Ar-H)，7. 34-7. 53 (7H, m, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H)， 7. 78 (1H, d, Ar-H) ,7. 81 (2H, d, Ar-H) ,8. 69 (1H, d, N-H)，11. 23 (1H，s, N-H) ；EI-MS m/z 392. 2 (M+)，180. 1(100% )。實(shí)施例29 1-芴-3-(2-氟_6_芐氧基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_15)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-氟-6-芐氧基苯甲酰胺，其余所需 原料、試劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得類白色固體化合物Ib-15。收率36% ；Mp 242-244 "C ；1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) δ :5· 15 (2Η, s, -OCH2), 5. 97 (1Η, d, C-H)，6· 95 (2Η， d, Ar-H)，7. 24-7. 73 (13Η, m, Ar-H)，7. 42-750 (3Η, m, Ar-H)，7. 54 (1Η, d, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H), 7. 88 (2Η, d, Ar-H), 8. 78 (1Η, d, N-H)，11. 03 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/z 542. 3 (M+)， 206. 1(100% )。實(shí)施例30 1-芴-3-(2-甲巰基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_16)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-甲巰基苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得白色固體化合物Ib-16。收率46% ；Mp204-207°C ； 1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) δ 2. 40 (3Η, s, -SCH3), 5. 99 (1Η, d, C-H), 7. 22 (2H, d, Ar-H), 7. 35-7. 40 (3Η, m, Ar-H)，7. 42-750 (3Η, m, Ar-H)，7. 54 (1H，d, Ar-H)，7. 62 (2H, d, Ar-H), 7. 88 (2Η, d, Ar-H), 8. 78 (1Η, d, N-H), 11. 03 (1Η, s, N-H) ；EI-MS m/z 374. 2 (M+), 180. 1(100% )。
實(shí)施例31 1-芴-3-(2_芐氧基苯甲酰)脲(化合物Ib的一種(IB_17)) 將實(shí)施例15中的2-氯苯甲酰胺替換成2-芐氧基苯甲酰胺，其余所需原料、試 劑及制備方法同實(shí)施例13 15，得淺黃色固體化合物Ib-17。收率43% ；Mp204-207°C ； 1H-NMR(400Hz, DMS0_d6) δ 5. 27(2H, s, -CH2), 5. 98 (1Η, d, -CH), 7. 06 (1Η, q, Ar-H), 7. 28 (1Η, d, Ar-H)，7. 32-7. 46 (7Η, m, Ar-H)，7. 53 (3Η, d, Ar-H)，7. 63 (2H, d, Ar-H)，7. 65 (2H, dd, Ar-H)，7. 88 (2H, d, Ar-H)，8. 79 (1H, s, N-H)，10. 54 (1H, d, N-H) ；EI-MS m/z 434. 3 (M+)， 180. 1(100% )。實(shí)施例32鄰硝基苯甲酰異氰酸酯(中間體XV) 將1. 66克鄰硝基苯甲酰胺溶于10毫升干燥甲苯中，室溫下慢慢滴加2. 52克草酰 氯，待反應(yīng)放熱結(jié)束后，加熱回流5小時(shí)，使懸浮固體全部溶解，反應(yīng)液變澄清且無氯化氫 氣體放出，結(jié)束反應(yīng)，將反應(yīng)液減壓蒸餾除去過量的甲苯和草酰氯，得淡黃色油狀液體中間 體XV，無須進(jìn)一步純化，立即用于下一步反應(yīng)或密封保存?zhèn)溆?。?shí)施例33 1-芴-3-(2-硝基苯甲酰)脲(化合物Ic的一種(Ic-I)) 將0.2克鄰硝基苯甲酰異氰酸酯(XV)和0. 18克9-芴胺(XIII)加入到10毫升甲 苯中，回流反應(yīng)10小時(shí)。減壓蒸除溶劑，殘余物用硅膠柱層析分離(乙酸乙酯/石油醚= 1/1)，得到黃色固體產(chǎn)物化合物 Ic-1。收率 37%;Mp 230-232°C; 1H-WrgooHz^mso-CI6) δ 5. 96 (1Η, d, C-H)，7. 36 (2H, t, Ar-H)，7. 43 (2H, t, Ar-H)，7. 60 (2H, d, Ar-H)，7. 84-8. 16 (3H, m, Ar-H), 8. 16 (1H, d, Ar-H), 8. 53 (1H, d, N-H)，11. 28 (1H, s, N-H) ；EI-MS m/z 373. 2 (M+)， 180. 1(100% )。實(shí)施例34 1-芴-3-(2-胺基苯甲酰)脲(化合物Ic的一種(Ic_2)) 在25毫升茄型瓶中加入35毫克的1_芴_3_ (2_硝基苯甲酰)脲(Ic-I)，0.75毫 克氯化銨，50毫克Fe粉，在10毫升THF中回流反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)完過濾，濾液蒸干，用少 量乙醚洗滌，得淡黃色固體化合物Ic_2。收率90%;Mp 194-197 °C ；1H-NMR (400Hz, DMS0-d6) δ 6. 02 (1Η, d, C-H)，6. 49 (1Η, t, Ar-H)，6. 72 (1H, d, Ar-H)，7. 18 (1H, t, Ar-H)，7. 21 (2H, t, Ar-H)，7. 35 (2H, d, Ar-H)，7. 63 (2H, d, Ar-H)，7. 70 (1H, d, Ar-H)，7. 87 (2H, d, Ar-H)， 8. 95(1H，d，N-H)，10. 56(1H，s，N-H) ；EI-MS m/z 353. 2 (M+), 207. 1(100% ) 實(shí)施例35本發(fā)明化合物對CypA肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶百分抑制活性的測定(I)CypA蛋白的表達(dá)和純化將構(gòu)建好的質(zhì)粒PET15b_CypA轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中得到表達(dá)工程菌，將工程菌培 養(yǎng)于含100 μ g/mL氨芐青霉素的IOmL LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜(蛋白胨10g/L，酵母提取物 5g/L，氯化鈉10g/L)。然后按1 100轉(zhuǎn)接入IL含氨芐青霉素的新鮮LB培養(yǎng)基中，37°C 220轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)。當(dāng)OD6tltl達(dá)到約0.8時(shí)，加入IPTG (異丙基β-D硫代半乳糖苷，IM溶液) 至終濃度0. 5mM,同時(shí)將溫度降到25°C培養(yǎng)5小時(shí)進(jìn)行蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。4000轉(zhuǎn)/分離心 30分鐘收集菌體，收集好后放于-80°C超低溫冰箱保存過夜。將菌體用20mL的結(jié)合緩沖液 (20mM Tris-Cl, 0. 5M NaCl，5mM咪唑，ρΗ8· 0)懸起，將懸浮液冰浴上超聲波破碎(300W, X 作30分鐘，一次5秒，中間間隔10秒)。破碎后得到的細(xì)胞勻漿在4°C以10000轉(zhuǎn)/分離 心30分鐘，保留上清。之后該蛋白粗提液注入預(yù)先用結(jié)合緩沖液平衡好的M-NTA樹脂中， 在4°C充分結(jié)合1小時(shí)，再分別用10倍柱體積的結(jié)合緩沖液和10倍柱體積的清洗緩沖液 (20mM Tris-Cl,0. 5M NaCl，60mM咪唑，pH8. 0)沖洗樹脂，去除與樹脂有非特異性吸附的雜 蛋白，最后用洗脫緩沖液(20mM Tris-Cl, 0. 5M NaCl，IOOmM咪唑，pH 8. 0) IOmL洗脫樹脂， 收集洗脫的hCypA。用SDS-PAGE檢測蛋白的分子量和純度。透析好的蛋白即可進(jìn)行酶活測 定。(2)本發(fā)明化合物對CypA抑制活性的測定依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)糜蛋白酶偶聯(lián)試驗(yàn)(Biochemistry 1991,30(25) :6127_6134)，測定目 標(biāo)物的肽脯氨酸順反異構(gòu)酶(PPIase)活性。整個(gè)試驗(yàn)在恒溫4°C下進(jìn)行，酶作用底物為 Suc-Ala-Ala-cis-Pro-Phe-pNA，用含有400mM LiCl的四氫呋喃溶解成3. 8mM的母液。糜 蛋白酶溶解到ImM的HCl溶液中，配成3mg/mL的母液。首先向519 μ L反應(yīng)緩沖液(50mM HEPES, IOOmM NaCl)中加入30 μ L hCyPA蛋白母液(終濃度10 μ g/ml)和溶于DMSO的待測 化合物溶液(終濃度為 ο μ M)，在冰上預(yù)冷，將它們加到石英杯中，再加入15 μ L糜蛋白酶， 最后加入12 μ L底物起始反應(yīng)。4°C下390nM處通過U-2010分光光度計(jì)每隔0. 1秒檢測光 吸收強(qiáng)度的變化并收集數(shù)據(jù)，1分鐘之后，反應(yīng)結(jié)束。每個(gè)反應(yīng)重復(fù)3次。利用反應(yīng)前6秒 的線性增長的斜率(K)來表示CypA酶的活力大小。用下列公式得出待測化合物在10 μ M 下百分抑制率，計(jì)算公式為(陽性對照組K值-實(shí)驗(yàn)組K值)/(陽性對照組K值-陰性實(shí)驗(yàn)組K值)X 100%
其中陽性對照組K值為不加待測化合物所測值，陰性對照組K值為不加待測化合 物和CypA所測值。(3)化合物活性測試結(jié)果表1取代苯甲酰脲類化合物對CypA抑制率數(shù)據(jù) 由表1可以看出，本發(fā)明的具有結(jié)構(gòu)通式(I)的取代苯甲酰脲類化合物大部分具 有較強(qiáng)的CypA抑制活性，說明本發(fā)明的化合物為CypA抑制劑。實(shí)施例36本發(fā)明部分化合物對CypA半數(shù)有效抑制濃度(IC5tl)的測定選取10 μ M抑制率在50%以上的化合物測IC5tl，選擇合適的化合物濃度梯度，實(shí)驗(yàn) 方法和體系如實(shí)施例35。根據(jù)化合物在不同濃度下對CypA酶活的反應(yīng)速率K，計(jì)算化合物 在不同濃度下對CypA酶活的抑制率，使用Sigmoidal公式用origin軟件進(jìn)行擬合得到化 合物的IC5tl值，結(jié)果見表2和附圖。表2取代苯甲酰脲類化合物對CypA酶活抑制IC5tl值 由表2可以看出，本發(fā)明的具有結(jié)構(gòu)通式(I)的部分取代苯甲酰脲類化合物具有 納摩級(nM)的CypA蛋白酶抑制活性，說明本發(fā)明的化合物為CypA抑制劑?；衔颕A-3、IA-5、Ib-I、IB_2、IB_3、IB_6、IB_7、IB_8、IB_9、Ib-IU IB_17 和 Ic-I 對 CypA酶活抑制的量效曲線圖見圖1 圖12。由量效曲線圖可以看出，這12個(gè)抑制劑對CypA 酶的抑制活性具有較好的濃度依賴性。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的取代苯甲酰脲類化合物的制備方法具有反應(yīng)條件溫和、原料豐富易得、 操作及后處理簡單等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的取代苯甲酰脲類化合物在從頭藥物設(shè)計(jì)以及在CypA抑制試驗(yàn)中均顯示 了陽性結(jié)果，印證了其藥理作用機(jī)制。因此，本發(fā)明的化合物可用于制備CypA抑制劑并發(fā) 展為免疫抑制藥物或抗HIV-I藥物。
權(quán)利要求
一種具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物其中R1和R2各自獨(dú)立地選自氫，C1-C6直鏈或支鏈的烷基、烷氧基和烷硫基，羥基，硝基，氨基，鹵素，氰基，三氟甲基和芐氧基；R3選自以下結(jié)構(gòu)其中，X選自N、O和S；m是0～2的整數(shù)；n是1～3的整數(shù)；p是0～3的整數(shù)；R4、R5和R6各自獨(dú)立地選自氫，C1-C6直鏈或支鏈的烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，羥基，三氟甲基，羧基，巰基和C1-C4?；?；芳香基Ar選自取代或未取代的苯基或萘基，其取代基是1～4個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烴基、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4不飽和烴氧基、羧基、羧基取代的C1-C6烷氧基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基和C1-C4?；幕鶊F(tuán)。F200910050646XC0000011.tif,F200910050646XC0000012.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物，其特征在于，通 式(I)中，R3選自咕噸基，芴基，2，3- 二氫-茚-1-基，R4取代的環(huán)己基，R5和R6取代的二苯甲基 以及未取代或被1 2個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烷基、羥基、C1-C4烷氧基、羧基、氰基、 硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基和巰基的基團(tuán)取代的萘基、苯基、苯甲基和苯乙基；其中， R4、R5和R6各自獨(dú)立地選自氫，C1-C6直鏈或支鏈的烷基，C1-C4烷氧基，鹵素，氰基，硝基，氨 基，羥基，三氟甲基，羧基，巰基和C1-C4?；?。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物，其特征在于，為 下述化合物Ia 其中，R3的定義同權(quán)利要求1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物，其特征在于，為 下述化合物Ib 其中，R1和R2的定義同權(quán)利要求1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物，其特征在于，為 下述化合物Ic 其中，R1為氨基或硝基；R2的定義同權(quán)利要求1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物，其特征在于，所 述化合物為1-(1_咕噸基)-3-(2，6_ 二羥基苯甲酰)脲、1-萘-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、 1-苯甲基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-苯乙基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-環(huán)己 基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-苯基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-(4-氟苯基)-3-(2， 6-二羥基苯甲酰)脲、1-(2，3_ 二氫-茚-1-基)-3-(2，6_ 二羥基苯甲酰)脲、1-二苯甲 基-3-(2，6-二羥基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氰基苯甲酰)脲、 1-芴-3- (2-氟苯甲酰)脲、1-芴-3- (2-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3- (2-甲基苯甲酰)脲、 1-芴-3-(2-三氟甲基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2，6-二氟苯甲酰)脲、1-芴-3-(2，6-二氯苯 甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-氟苯甲酰)脲、1-芴_3-(苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-甲 巰基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-甲巰基苯甲 酰)脲、1-芴-3-(2-氯-6-甲氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-氟-6-芐氧基苯甲酰)脲、 1-芴-3-(2-甲巰基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-芐氧基苯甲酰)脲、1-芴-3-(2-硝基苯甲 酰)脲或1-芴-3-(2-胺基苯甲酰)脲。
7.—種權(quán)利要求1所述的具有通式(I)結(jié)構(gòu)的取代苯甲酰脲類化合物的制備方法，其 特征在于，采用以下三種方法中的任意一種方法一1)將芐醇鈉和2，6-二氟苯腈溶于二甲亞砜中，快速升溫至110 130°C后攪拌5 10 小時(shí)；冷至室溫，向反應(yīng)液中加入冰水，攪拌30分鐘，析出大量固體，抽濾，水洗，干燥，得白色固體；用乙醇重結(jié)晶得白色片狀晶體2，6_ 二芐氧基苯腈VIII ；2)將步驟1)得到的化合物VIII溶于芐醇中，并加入氫氧化鉀和少量水，120 140°C 下攪拌10 15小時(shí)；減壓蒸餾除去溶劑，向殘余物中加入冰水，攪拌30分鐘，析出大量 固體，抽濾，水洗，干燥，得白色固體；將其用硅膠柱層析分離純化，得到白色粉末狀固體2， 6-二芐氧基苯甲酰胺IX;3)將三光氣溶于1，2-二氯乙烷中，冷卻至0 5°C，將溶于1，2- 二氯乙烷的R3取代胺 類化合物R3-NH2緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，加畢，繼續(xù)冰浴冷卻下攪拌反應(yīng)30分 鐘，后升溫至室溫反應(yīng)1小時(shí)，然后加熱至回流，當(dāng)反應(yīng)液呈無色透明狀時(shí)，將三乙胺加入 反應(yīng)液中，繼續(xù)回流30分鐘；減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯，抽濾，濾液蒸干得到淡黃色固 體，為R3取代的異氰酸酯X ；4)將步驟2)和步驟3)得到的化合物IX和X溶入甲苯中，加熱至回流反應(yīng)10 15小時(shí)；減壓蒸除反應(yīng)溶劑得到淡黃色固體，將其用硅膠柱層析分離純化，得到I-R3取 代-3-(2，6-二芐氧基苯甲?；?脲XI ；5)將步驟4)得到的化合物XI加入45%的溴化氫醋酸溶液中，控溫50 70°C下攪拌 5 10小時(shí)；將反應(yīng)液傾入冰水中，攪拌30分鐘，析出大量固體，抽濾，水洗，干燥，得I-R3 取代-3-(2，6-二羥基苯甲?；?脲IA; 其中，R3的定義同權(quán)利要求1 ；或方法二 1)將9-芴酮與鹽酸羥胺加入70%乙醇水溶液中，回流攪拌2 5小時(shí)；將反應(yīng)液傾入 冰水中，析出大量黃色固體，抽濾，水洗，干燥，得黃色固體9-芴肟XII ；2)將步驟1)得到的化合物XII加入含少量水的醋酸溶液中，加熱至回流；將Zn粉緩慢 加入反應(yīng)液中，繼續(xù)反應(yīng)1 3小時(shí)；將反應(yīng)液乘熱過濾，濾液經(jīng)減壓蒸餾除去大部分溶劑， 抽濾，得9-芴胺醋酸鹽；將其加入稀鹽酸中，冰浴冷卻下攪拌10 15小時(shí)；抽濾，得9-芴 胺鹽酸鹽；將9-芴胺鹽酸鹽加入氨水中攪拌1 3小時(shí)，抽濾，氨水洗滌并干燥；用石油醚 重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶9-芴胺XIII ；3)將三光氣溶于1，2_二氯乙烷中，冰浴冷卻至0 5°C，將溶于1，2_ 二氯乙烷的 9-芴胺XIII緩慢滴加入含有三光氣的反應(yīng)液中，加畢，繼續(xù)冰浴冷卻下攪拌反應(yīng)30分鐘， 后升溫至室溫反應(yīng)1小時(shí)，然后加熱至回流，當(dāng)反應(yīng)液呈無色透明狀時(shí)，將三乙胺加入反應(yīng) 液中，繼續(xù)回流30分鐘；減壓蒸餾除去溶劑，加入甲苯，抽濾，濾液蒸干得到淡黃色固體，為 9-芴異氰酸酯XIV ；4)將步驟3)得到的化合物XIV和R1,R2-二取代苯甲酰胺溶入甲苯中，加熱至回流反 應(yīng)10 15小時(shí)；減壓蒸除反應(yīng)溶劑得到淡黃色固體，將其用硅膠柱層析分離純化，得到 1-芴-3-(R1, R2- 二取代苯甲酰基)脲Ib ； 其中，R1和R2的定義同權(quán)利要求1 ；或方法三1)將2-硝基-R2取代-苯甲酰胺溶于干燥甲苯中，控溫20 30°C，慢慢滴加草酰氯， 待反應(yīng)放熱結(jié)束后，加熱回流3-5小時(shí)，使懸浮固體全部溶解，反應(yīng)液變澄清且無氯化氫氣 體放出，結(jié)束反應(yīng)，將反應(yīng)液減壓蒸餾除去過量的甲苯和草酰氯，得2-硝基-R2取代-苯甲 酰異氰酸酯XV ；2)將步驟1)得到的化合物XV和Ib合成中步驟3)得到的9-芴胺XIII溶入甲苯中， 加熱至回流反應(yīng)10 15小時(shí)；減壓蒸除反應(yīng)溶劑，將殘余物用硅膠柱層析分離純化，得到 1-芴-3- (2-硝基-R2取代-苯甲酰基)脲Ic-I ；3)將步驟2)得到的化合物1「1，氯化銨和Fe粉投入到THF中，回流反應(yīng)1 3小時(shí)； 冷至室溫，抽濾，濾液被減壓蒸除溶劑，將殘余物用硅膠柱層析分離純化，得1-芴-3- (2-氨 基代-苯甲酰基)脲Ic-2; 其中，R2的定義同權(quán)利要求1。
8.權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的取代苯甲酰脲類化合物作為CypA抑制劑的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的取代苯甲酰脲類化合物在制備預(yù)防或治療CypA介 導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述CypA介導(dǎo)的疾病包括移植排斥反 應(yīng)、由移植引起的宿主疾病、自身免疫疾病和HIV-I入侵感染。
11.一種藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物包含治療有效量的一種或多種權(quán)利要 求1 6中任一項(xiàng)所述的取代苯甲酰脲類化合物以及藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋 劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其特征在于，所述的取代苯甲酰脲類化合物 占該藥物組合物總重量的0. 001-99. 9%。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型的取代苯甲酰脲類化合物及其制備方法和藥理用途。該類化合物的結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示，其中R1、R2和R3的定義如說明書中所述，此類化合物可作為親環(huán)素A(Cyclophilin A，CypA)的小分子抑制劑。CypA是一類具有肽基脯氨酸順反異構(gòu)酶(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase，PPIase)活性的蛋白，與體內(nèi)蛋白質(zhì)折疊、組裝和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。目前研究表明CypA參與了多種生理途徑，如自身免疫抑制和HIV-1入侵感染等。因此，本發(fā)明涉及的化合物有望開發(fā)成為新的免疫抑制藥或抗HIV-1藥物。
文檔編號A61P37/06GK101880246SQ20091005064
公開日2010年11月10日 申請日期2009年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月5日
發(fā)明者李劍, 來魯華, 沈旭, 蔣華良, 裴劍鋒, 黃瑾 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所;華東理工大學(xué);北京大學(xué)