專利名稱：新的取代的丙酰胺苯甲酰脲衍生物，含它們的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽，其制備方法，含它們的藥物組合物及其作為微管蛋白抑制劑的用途。
背景技術(shù)：
微管是真核生物細胞骨架的重要組成成分，參與細胞的分裂，運動和物質(zhì)運輸?shù)龋哂卸喾N生物學活性。阻斷微管功能的抗微管藥物廣泛運用于醫(yī)學領(lǐng)域，比較熟知的有抗腫瘤，抗痛風，細胞核型診斷試劑，抗寄生蟲及農(nóng)業(yè)上的殺蟲劑等方面?？刮⒐艿鞍姿幬锸悄壳坝行У囊活惪鼓[瘤藥物，它能干擾細胞分裂中紡錘體的形成，從而使細胞停滯在有絲分裂中期，阻斷細胞分裂增值；同時，由于微管是信號傳導和物質(zhì)運輸?shù)耐ǖ?，干擾微管的形成可影響與凋亡相關(guān)的信號傳導通路，引起細胞凋亡；基于這些抗腫瘤分子機制的闡明，這類抗腫瘤藥日益引起人們的關(guān)注。微管蛋白抑制劑主要可分為兩種類型一類是紫杉醇型，其促進微管蛋白聚合，抑制微管解聚；紫杉醇自1989年問世，相繼有紫杉醇類似物產(chǎn)生Epothilone(1995)，Discodermolide(1996)，Eleutherobins(1997)and DepoB & DepoF(2001)等；另一類是秋水仙素或長春新堿型，與微管蛋白結(jié)合，抑制微管聚合。這類藥物的類似物有phomopsinA(1995)，cryptophycin(1998)，2-aroylindoles(2001)。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是尋找新的微管蛋白抑制劑。
發(fā)明簡述本發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)2-取代的丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽具有優(yōu)良的抑制微管蛋白組裝的作用，從而可成為有效的抗腫瘤化合物。
由此，本發(fā)明第一方面涉及式I的2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽 式I其中X為鹵素，如氟、氯、溴或碘。
本發(fā)明還涉及作為抗腫瘤劑的式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽 其中X為鹵素，如氟、氯、溴或碘。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
本發(fā)明還涉及作為微管蛋白抑制劑或抗腫瘤劑的藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
本發(fā)明還涉及式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽在制備用于治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關(guān)疾病的藥物中的用途。
本發(fā)明還涉及治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關(guān)疾病的方法，其包括將治療有效量的式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物給藥于需治療的患者。
本發(fā)明進一步涉及式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽的制備方法，其包括將下式的化合物 與下式化合物反應， 其中X為鹵素。
發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明，“X”為氟，氯，溴或碘，優(yōu)選為溴。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選X為溴的式I化合物，即3-(2-溴代丙酰氨基)苯甲酰脲。
根據(jù)本發(fā)明，式I丙酰胺苯甲酰脲衍生物的藥用鹽包括式I丙酰胺苯甲酰脲衍生物與無機酸或有機酸形成的藥用鹽，無機酸舉例有鹽酸，硫酸或磷酸；有機酸舉例有甲酸，乙酸，苯甲酸，甲磺酸，乙磺酸。
本發(fā)明中所用術(shù)語“患者”意指哺乳動物，例如人。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的化合物或藥物組合物可單獨或通過口服或非腸道或局部途徑使用，口服的劑型舉例講有片劑，膠囊，溶液，混懸液，粉劑。非腸道給藥的劑型舉例講有注射液，粉針劑等。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明所用的原料3-氨基苯甲酰脲的制備可見(Jiang ID，Roboz J.Weisz I.Deng L，Holland JF，Bekesi JG.Synthesis，canceridal and antimicrotubule activities of 3-(haloacetamido)-benzolureas.Anticancer Drug Des.1998，13(7)735-747)。
式II化合物的制備可見“Beil 2，248；256。


圖1和圖2表示本發(fā)明化合物1對微管組裝和解聚的作用。圖1具體表示在本發(fā)明化合物1(1或4μM)或paclitaxel(20μM)或長春堿(20μM)存在或不存在下于反應緩沖液中的游離微管與GTP和Mg2+D于37℃培養(yǎng)從而進行的組裝；圖2具體表示在本發(fā)明化合物1(32μM)或Paclitaxel(20μM)或長春堿(20μM)存在或不存在下組裝的微管在冰中培養(yǎng)從而進行的解聚。微管的組裝或解聚每5分鐘于350nM測定OD(光密度)。
下面的實施例和生物活性試驗用來進一步說明本發(fā)明，但不意味著對本發(fā)明的任何限制。
實施例1 3-(2-溴代丙酰氨基)苯甲酰脲的制備 將0.895g(5.0mmol)3-氨基苯甲酰脲于室溫下溶解于1.0ml N，N-二甲基乙酰胺中，滴加1.0ml2-溴丙酰溴，并在室溫下繼續(xù)攪拌2小時，攪拌下加入100ml冰水，有沉淀析出，抽濾，用水充分洗滌，得灰白色固體，用甲醇重結(jié)晶，得白色固體0.8g，收率為51.1％。
Mp252-254℃；FABM+1314；IR(kBr)cm-11712cm-1，1674cm-1；300MHZ，1H-NMR(d6-DMSO)δ7.80(dd，1H，2-芳環(huán)氫)，7.68(d，1H，6-芳環(huán)氫)，7.43(m，2H，4-5-芳環(huán)氫)，4.70(q，1H，-CHBr)，1.75(d，3H，-CH3)，10.55，10.52，8.14，8.0(4s，活潑氫)
本發(fā)明實施例1化合物(化合物1)的體外抗腫瘤活性化合物1體外對腫瘤淋巴細胞和多種不同的實體瘤細胞的抑制作用見下面表1，其中化合物1的抗瘤活性以半數(shù)有效濃度IC50表示，IC50值在0.3μM-3.0μM之間，結(jié)果見表1。
表1.化合物1對多種腫瘤細胞的半數(shù)有效濃度IC50

由表1結(jié)果可看到，本發(fā)明化合物對多種腫瘤細胞有良好的抑制作用。
化合物1對微管蛋白組裝的抑制純化的牛腦微管蛋白購自Sigma(St.Lows，MO)?；衔?對微管蛋白組裝一解組裝過程的作用采用Vender建議的條件進行測定。對于組裝抑制，是將100μl微管蛋白溶液(500-600μg蛋白/ml)溫和地與400μl反應緩沖液(含0.1M MES，1mM EGTA，0.5mM MgCl2)，0.1mM EDTA和2.5M甘油于35℃混合。然后將化合物1加到每個樣品池中。在加GTP到每個樣品中使最終濃度為1mM之后，在分光光度計(pharmaceia LKB，Uppsala，Sweden)上于350nm每隔5分鐘測量光密度(OD)的變化以監(jiān)測微管蛋白組裝過程。于室溫40分鐘內(nèi)觀察到整個組裝過程。對于解組裝的抑制，按上述方法將化合物1加到含再聚微管蛋白的池中，并在融冰中培養(yǎng)。于350nm監(jiān)測OD變化30分鐘直到對照組中OD值返回到起始水平，即組裝一脫組裝循環(huán)完全。溶劑用作對照但對組裝或脫組裝過程均無作用。結(jié)果見圖A和B。圖A和B表明本發(fā)明化合物1可抑制微管蛋白的組裝，而不阻滯微管蛋白的解聚。
化合物1體內(nèi)抗腫瘤作用裸鼠(6-7周齡，16-20克重)來自中國醫(yī)科院實驗動物中心并用于人肝癌細胞BEC-7402異種移植。在培養(yǎng)前小心除去所有腫瘤移植組織的結(jié)締組織和血塊。在實驗小鼠背部皮下移植人腫瘤細胞(4mm3/鼠)。一星期后，帶腫瘤裸鼠隨機分為溶劑對照和治療組，每組8只小鼠。在移植后第8天腹膜給予化合物1(劑量5，10或15mg/kg)。每隔4天給予一次，再給予6次。每星期測腫瘤體積來觀察治療反應，直到對照組腫瘤體積達到2000mm3。由測經(jīng)儀得到兩個垂直腫瘤直徑，寬和長，然后由下式得到腫瘤體積，腫瘤腫瘤＝長×寬2×0.52，結(jié)果見表2表2.化合物1對人肝癌細胞裸鼠體內(nèi)異種移植的生長抑制作用組別給藥方案動物數(shù) 體重(X±SD) 瘤體積 抑瘤率開始最后 (％)對照 8 20.1±2.2 23.4±5.0 2026.8±1072.1化合物1i.p 7 19.2±2.1 21.9±3.6 831.8±477.0*58.910mg/kg/4天*P＜0.0權(quán)利要求
1.式I的2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽 式I其中X為鹵素，如氟、氯、溴或碘。
2.作為抗腫瘤劑的式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽 其中X為鹵素，如氟、氯、溴或碘。
3.權(quán)利要求1或2的式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽，其中所述化合物是3-(2-溴代丙酰氨基)苯甲酰脲。
4.藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
5.作為微管蛋白抑制劑或抗腫瘤劑的藥物組合物，其包括式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽及藥用賦形劑或載體。
6.權(quán)利要求4或5的藥物組合物，其中式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽是3-(2-溴代丙酰氨基)苯甲酰脲。
7.式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽在制備用于治療腫瘤或與微管蛋白組裝有關(guān)疾病的藥物中的用途。
8.權(quán)利要求7的用途，其中式I 2-取代的丙酰胺苯甲酰胺衍生物或其藥用鹽是3-(2-溴代丙酰氨基)苯甲酰脲。
9.式I 2-取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽的制備方法，其包括將下式的化合物 與下式化合物反應， 其中X為鹵素。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的2－取代丙酰胺苯甲酰脲衍生物或其藥用鹽，其制備方法，含它們的藥物組合物及其作為微管蛋白抑制劑的用途。
文檔編號C07C273/18GK1488624SQ0214428
公開日2004年4月14日 申請日期2002年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月10日
發(fā)明者蔣建東, 李建農(nóng), 宋丹青 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所