苯甲酰胺衍生物及制備和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學領域，涉及苯甲酰胺衍生物、制備及應用，尤其涉及 N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物及其制 備方法和作為Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制劑的應用。
【背景技術】
[0002] 慢性粒細胞白血?。–hronicMyelogenousLeukemia,CML)是惡性的骨髓造血干 細胞克隆增殖性疾病，95%的病人有特征性Ph染色體及其分子標志Bcr-Abl融合基因。研 究證明，融合基因Bcr-Abl是慢性粒細胞白血病的分子生物學特征，其產(chǎn)物Bcr-Abl激酶是 發(fā)病的關鍵因素。
[0003] 目前臨床上最常用的針對Bcr-Abl酪氨酸激酶的小分子抑制劑（TKI)包括：第一 代藥物伊馬替尼；第二代藥物達沙替尼、尼洛替尼和伯舒替尼；第三代藥物普納替尼。伊馬 替尼（Imatinib)是瑞士諾華公司研發(fā)的口服抗慢性粒細胞白血病小分子酪氨酸激酶抑制 劑。它開創(chuàng)了以激酶為靶標治療疾病的新時代，Imatinib能夠與Bcr-Abl激酶區(qū)域的ATP 位點結合，阻止氨基酸殘基磷酸化，從而阻斷信號傳導途徑，抑制細胞增殖，可以有效緩解 CML。治療后患者5年存活率可達90%，并且它能特異性的作用于CML癌細胞，而對正常 細胞幾乎沒有傷害，毒副作用大大降低。隨著Imatinib的使用，Bcr-Abl基因的突變導致 了耐藥性的出現(xiàn)，很大程度上降低了伊馬替尼的療效。達沙替尼（Dasatinib)是一種針對 Bcr-Abl酪氨酸激酶、Src激酶家族（Src，Lck，F(xiàn)yn)、c-Kit和TOGFR-B等多種激酶都作用的 多靶點口服激酶抑制劑，于2006年6月28日由百時美施貴寶研發(fā)獲得FDA批準上市。和 Imatinib-樣，競爭性地和Bcr-Abl激酶區(qū)域的ATP位點結合，但是抑制Bcr-Abl激酶的活 性是Imatinib的300倍。盡管能克服多種Imatinib出現(xiàn)的耐藥性，但對Bcr-Abl無效。尼 洛替尼（Nilotinib) -種新型苯胺嘧啶類Imatinib的衍生物，于2007年10月29日獲得美 國FDA批準上市。它對Bcr-Abl激酶的親和力比Imatinib強20倍，并且對出現(xiàn)Imatinib 耐藥性的患者（T315I突變除外）有廣泛的活性。使用Nilotinib治療CML的大多數(shù)患者 會存在腸胃反應、骨髓抑制、高膽紅素血癥等常見的不良反應。針對Imatinib、Dasatinib 和Nilotinib所產(chǎn)生的耐藥性，美國惠氏制藥公司研發(fā)了 4-取代苯胺-3-喹啉加甲腈類藥 物伯舒替尼（Bosutinib)，用于治療CML，于2012年9月4日被FDA批準上市。Bosutinib 既能抑制多種人腫瘤細胞中Scr蛋白的自主磷酸化，也能抑制Bcr-Abl蛋白的自主磷酸化， 并且在針對KU812和K562細胞（含Bcr-Abl的CML細胞）的抗增殖試驗中，Bosutinib活 性要明顯高于Imatinib，另外Bosutinib口服生物利用度叫較高，但是接受Bosutinib治療 的患者經(jīng)常會出現(xiàn)腹痛、腹瀉、血小板減少、發(fā)熱和疲勞等不良發(fā)應。普納替尼（Ponatinib) 是一種能夠作用于Abl，TOGFRa，VEGFR2,FGFR1和Src激酶的口服多靶點抑制劑。由于它 獨特的作用機制，服用可抑制對T315I突變在內(nèi)的Bcr-Abl激酶活性。但是據(jù)FDA最新報 道服用Ponatinib的患者，會出現(xiàn)嚴重的血管問題，所以期待對該藥進行安全性評估。
[0004] Imatinib和Ponatinib在治療CML過程中表現(xiàn)出非常好的療效，但是他們都很昂 貴，據(jù)統(tǒng)計服用Imatinib和Ponatinib的患者每年分別需要92 000和138 000美元的費 用。因此，尋求Imatinib和Ponatinib的低成本替代藥物已經(jīng)成為當務之急。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供N- (3- (4- (3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基 苯基）苯甲酰胺衍生物及其制備方法和作為Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制劑的應用。
[0006] 本發(fā)明提供了式⑴表示的N- (3- (4- (3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑 基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物，
[0007]
[0008] R1 表示-0CH3、-F、_CF3、_CH2CH3、-H、
[0009] R2表不-CF3、_F、_C1 或-Η。
[0010] 本發(fā)明化合物均具有對Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制作用，其中部分化合物的抑制 效果顯著。
[0011] 本發(fā)明還提供了N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物的制備方法，包括以下步驟：
[0012] (a)將2-甲基-5-硝基苯胺溶解在乙醇中，加入37%的濃鹽酸，將上述體系置于 冰浴條件下，然后將亞硝酸鈉的水溶液滴加到上述體系中，優(yōu)選反應溫度〇~5°C，反應時 間0. 5~1小時，得到式（II)表示的2-甲基-5-硝基苯肼鹽酸鹽；
[0013]
[0014] (b)將二水合氯化亞錫溶于濃鹽酸（質量百分濃度37% )中，置于冰浴條件下，然 后把2-甲基-5-硝基苯肼鹽酸鹽滴加到上述體系中，優(yōu)選式（II)化合物與二水合氯化亞 錫的物質的量比為1 : (1. 5~2)，反應溫度0~10°C，反應時間1~2小時，加NaOH溶液 (如濃度lmol/L)中和，得到式（III)表示的2-甲基-5-硝基苯肼；
[0015]
[0016] (c)將式（III)化合物與2-溴丙二醛在乙醇中反應，優(yōu)選式（III)化合物與2-溴 丙二醛的物質的量比為1 : (1.1~1.5)，反應溫度55~65°C，反應時間2~4小時，得到 式（IV)表示的4-溴-1-(2-甲基-5-硝基苯基）吡唑；
[0017]
[0018] (d)將式（IV)化合物溶解到乙醇中，加入氯化銨的水溶液和鐵粉，優(yōu)選反應溫度 80~90°C，反應時間2~3小時，得到式（V)表示的3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0019]
[0020] (e)將式（V)化合物和Boc酸酐在四氫呋喃中反應，優(yōu)選式（V)化合物與Boc酸酐 的物質的量比為1 : (1. 1~1. 4)，反應溫度66~70°C，反應時間2~3小時，得到式（VI) 表示的N-Boc-3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0021]
[0022] (f)將式（VI)化合物溶于二氧六環(huán)中，加入聯(lián)硼酸頻哪醇酯、醋酸鉀和二（三苯 基膦）二氯化鈀，優(yōu)選式（VI)化合物、聯(lián)硼酸頻哪醇酯、醋酸鉀和二（三苯基膦）二氯化鈀 的物質的量比為1 : (1.1~1.5) : 3 : (0.1~0.2)，反應溫度100~110°C，反應時間 15~18小時，得到式（VII)表示的N-Boc-3-(4-(2-(4, 4, 5, 5-四甲基-1，3, 2-二氧硼戊環(huán) 基））-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0023]
[0024] (g)將咪唑并[1，2-b]噠嗪、NBS和催化量的AIBN在氯仿中反應，優(yōu)選咪唑并 [l，2-b]噠嗪、NBS和AIBN物質的量比為1 : (1.5~2) : (0.1~0.2)，反應溫度65°C， 反應時間2~3小時得到式（VIII)表示的3-溴咪唑并[1，2-b]噠嗪；
[0025]
[0026] (h)將式（VII)化合物和式（VIII)化合物溶解到二氧六環(huán)和水的混合溶液中，加 入四（三苯基磷）鈀和碳酸鈉，優(yōu)選式（VII)化合物、式（VIII)化合物、碳酸鈉和四（三苯 基磷）鈀的物質的量比為1 : 2 : 3 : (0.1~0.2)，反應溫度110~120°C，反應時間7~ 10小時，得到式（IX)示的N-Boc-3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基 苯胺；
[0027]
[0028] ⑴將式（IX)和三氟乙酸在二氯甲烷中反應，優(yōu)選反應時間5~6小時，得到式 (X)表示的3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0029]
[0030] (j)將式⑴化合物、4-氯甲基苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反應，優(yōu)選式（X) 化合物、4-氯甲基苯甲酰氯和三乙胺的物質的量比為1 : (2~3) : (0.2~0.5)，反應時 間2~3小時，得到式（XI)表示的4-氯甲基-N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡 唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺；
[0031]
[0032] (K)將式（XI)化合物、親核試劑和碘化鉀在DMF中反應，優(yōu)選式（XI)化合物、親核 試劑和碘化鉀的物質的量比為1 : (2~3) : (0. 1~0. 2)，反應溫度，80~90 °C，反應時 間2~3小時，得到式（I)表示的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲 基苯基）苯甲酰胺衍生物；
[0036] 或⑴將式⑴化合物、取代苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反應，優(yōu)選式⑴化 合物、取代苯甲酰氯和三乙胺的物質的量比為1 : (2~3) : (0.2~0.5)，反應時間2~ 3小時，得到式（I)表示的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物；
[0037]
[0038]R1 表示-0CH3、-F、-CF3、-CH2CH3或-H，R2表示-CF3、-F、-C1 或-H。
[0040] 本發(fā)明方法使用工業(yè)上普通的試劑和常規(guī)的生產(chǎn)條件，反應條件溫和，步驟簡單。
[0041] 上述合成過程中的化學反應式如下：
[0042]
[0043]其中，R1 表示-0CH3、-F、_CF3、_CH2CH3或-H，進一步表示
[0045] 本發(fā)明方法是首先以2-甲基-5-硝基苯胺為原料，經(jīng)過重氮化和還原反應生成 2-甲基-5-硝基苯肼，然后與2-溴丙二醛進行縮合關環(huán)，得到4-溴-1-(2-甲基-5-硝 基苯基）吡唑中間體，然后經(jīng)還原，Boc酸酐保護，鈀催化下和聯(lián)硼酸頻哪醇酯反應，得到 N-Boc-3- (4- (2- (4, 4, 5, 5-四甲基-1，3, 2-二氧硼戊環(huán)基））-1-吡唑基）-4-甲基苯胺，之