鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物的制作方法
【專利說明】鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物
[0001 ] 序列表
[0002] 本申請通過引用并入命名為"250_PCT1. ST25"的文件中的核苷酸序列，該文件大 小為24kb，以IBM-PC機器格式創(chuàng)建于2014年7月27日，與MS-Windows具有操作系統(tǒng)兼容性， 并隨附提交。
[0003] 相關(guān)申請
[0004] 本申請要求于2013年7月31日提交的題為"SPHINGOLIPID-P OLYALKYLAMINE-0LIG0NUCLE0TIDE COMPOUNDS"的第61/860,274號美國臨時申請的權(quán)益，其出于所有目的通 過引用整體并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0005] 本文公開了包括鞘脂-聚烷基胺亞磷酰胺在內(nèi)的鞘脂-聚烷基胺基化合物和生成 鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物的方法、所述鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物、包含所述 鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物的藥物組合物及其用于調(diào)芐基因表達(dá)的使用方法。所述寡 核苷酸包括三鏈DNA和單鏈及雙鏈寡核苷酸(包括反義分子），和可用于治療患癌受試者的 RNAi 分子例如雙鏈 DNA(dsDNA)，包括 siRNA、siNA、miRNA、anti-mi!lSsaRNA。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 治療性寡核苷酸(包括雙鏈RNA(dsRNA))在臨床上的應(yīng)用由于缺乏安全有效的遞 送系統(tǒng)而受到阻礙。已使用陽離子脂質(zhì)來遞送治療性寡核苷酸，然而，其使用受限于細(xì)胞毒 性和陽離子脂質(zhì)主要在肝中累積的事實。
[0008] 國際專利公開號TO 2008/104978、W0 2009/044392、W0 2011/066475、W0 2011/ 084193和WO 2011/085056公開了經(jīng)化學(xué)修飾的dsRNA，其通過引用整體并入本文。
[0009] US 6,469，148中提供了用于大規(guī)模制備鞘氨醇的方法，US 7,771，711中公開了鞘 脂-聚烷基胺綴合物;二者均通過引用整體并入本文。
[0010] PCT公開號W0 2010/150004涉及攜帶脂質(zhì)分子的寡核苷酸及其作為基因表達(dá)抑制 劑的用途。
[0011] 仍然需要具有活性且安全的dsRNA治療劑，其表現(xiàn)出以下中的至少之一:與未經(jīng)修 飾對應(yīng)物相比增加的細(xì)胞攝取、增強的內(nèi)體釋放、增加的循環(huán)時間、有利的生物分布、降低 的細(xì)胞毒性和降低的免疫原性，同時保留治療活性。
[0012] 發(fā)明概述
[0013] 本文提供了含鞘脂-聚烷基胺綴合物的寡核苷酸化合物、所述化合物的制備方法 及可用于生成所述化合物的中間體。本文公開的鞘脂-聚烷基胺寡核苷酸化合物具有可用 于例如提供與未經(jīng)修飾核酸分子相比以下中的至少一者的結(jié)構(gòu)和修飾:增加的細(xì)胞攝取、 增強的內(nèi)體釋放、增加的循環(huán)時間、改進(jìn)的生物分布、降低的毒性、降低的免疫原性、降低的 脫靶效應(yīng)(off-target)或增加的載入RISC化合物。鞘脂-聚烷基胺有益地與單鏈或雙鏈核 酸分子相連，并且可在癌癥治療中用作治療劑。
[0014] 在一個方面，本文提供了含鞘脂-聚烷基胺綴合物的化合物，其具有通式I:
[0015]
[0016] 其中
[001 7] R1是支鏈或直鏈C7-C24烷基、烯基或多烯基；
[0018] R2、R3和R4各自獨立地為氫、支鏈或直鏈聚烷基胺或其衍生物、核苷酸、寡核苷酸、 偶聯(lián)部分或保護基團；
[0019] R3'是氫、CrC4烷基或保護基團；
[0020] A2、A3和A4各自獨立地存在或不存在，但若存在則為c(o)、c(o)nhx、c(o)nhr 5x、c (o)r5x、c(o)r5c(o)x、r5x 或 r5oc(o)x;
[0021 ] R5是任選地被一個或多個雜原子取代的支鏈或直鏈&-C20烴基鏈；
[0022] X存在或不存在，但若存在則為S、P、0或NH;
[0023] R2、R3或R4中的至少一者為支鏈或直鏈聚烷基胺或其衍生物;并且
[0024] R2、R3或R4中的至少一者為核苷酸、寡核苷酸或偶聯(lián)部分；
[0025] 或者所述化合物的鹽。
[0026] 在一些實施方案中，R1是C7-C24烷基、C1Q-C 2Q烷基或C1Q-C16烷基。優(yōu)選地，R1是C13烷 基。
[0027] 在一些實施方案中，六2是以0)。在一些實施方案中，A4是C(0)。在一些實施方案中， R2是直鏈聚烷基胺或其衍生物。在一些實施方案中，R4是直鏈聚烷基胺或其衍生物。優(yōu)選地， 所述直鏈聚烷基胺是亞精胺或精胺。在一些實施方案中，R 2是亞精胺。在其他實施方案中，R2 是精胺。在一些實施方案中，R4是亞精胺。在其他實施方案中，R4是精胺。
[0028] 在一些實施方案中，R3是氫，A2是C(0)，A3不存在，R2是精胺并且在本文中提供為具 有通式(la)的化合物：
[0029]
[0030] 其中
[0031 ] A4 存在或不存在，但若存在則選自由 C(0)、C(0)NHX、C(0)NHR5X、C(0)R5X、C(0)R5C (o)x，、r5x 和 r5oc(o)x 組成的組；
[0032] R3是氫或保護基團；
[0033] R4是核苷酸、寡核苷酸或偶聯(lián)部分；
[0034] R5是任選地被一個或多個雜原子取代的支鏈或直鏈&-C20烴基鏈;并且
[0035] 每個R6獨立地為氫或保護基團；
[0036] 或者所述化合物的鹽。
[0037] 在一些實施方案中，R3是氫，A2是C(0)，A3不存在，R2是亞精胺并且在本文中提供為 具有通式(lb)的化合物：
[0038]
[0039] 其中
[0040] A4 存在或不存在，但若存在則選自由 C(0)、C(0)NHX、C(0)NHR5X、C(0)R5X、C(0)R5C (o)x、r5x 和 r5oc(o)x 組成的組；
[0041] R3是氫或保護基團；
[0042] R4是核苷酸、寡核苷酸或偶聯(lián)部分；
[0043] R5是任選地被一個或多個雜原子取代的支鏈或直鏈&-C20烴基鏈;并且
[0044] 每個R6獨立地為氫或保護基團；
[0045]或者所述化合物的鹽。
[0046]在通式I、Ia和lb的多種實施方案中，A4是C(0)NHR5X，其中R4是核苷酸、寡核苷酸或 偶聯(lián)部分。在一些這樣的實施方案中，R5是C6烴基鏈并且X是0。
[0047]在通式I、Ia和lb的多種實施方案中，R4是偶聯(lián)部分。偶聯(lián)部分可選自亞磷酰胺;胺 (-NH2);羧基(-C00H)或活化羧基包括NHS酯;巰基(-SH)和二硫鍵(-S-S-)，其還原為巰基； 羰基(-CH0);氰基(-CN)、羥基(-OH)和疊氮化物包括芳基疊氮化物。在一些實施方案中，R 5 是亞磷酰胺，例如2-氰乙基N，N，N'，N'_四異丙基亞磷酰二胺。在一些實施方案中，R4是活化 羰基，優(yōu)選NHS酯。
[0048] 在通式I、Ia和lb的多種實施方案中，R4是2-氰乙基N，N，N'，N'_四異丙基亞磷酰二 胺，并且在本文中提供為具有如下所示通式(Ila)或（lib)的化合物：
[0050]其中，R3和R6各自獨立地為氫或保護基團。
[0051 ] 在通式I、Ia和lb的多種實施方案中，A4是C(0)NHR5C(0)X，R4是NHS酯，R 5是C6烷基 鏈，X是〇，并且在本文中提供為具有通式II la或II lb的化合物：
[0052]
[0053] 其中，R3、R3'和R6各自獨立地為氫或保護基團。
[0054] 在以上公開的任意通式的多種實施方案中，R4是寡核苷酸。所述寡核苷酸是單鏈 寡核苷酸或雙鏈寡核苷酸，其可以被部分或完全化學(xué)修飾。
[0055] 所述單鏈寡核苷酸為例如選自由以下組成之組的反義分子:反義DNA、反義RNA、反 義DNA/RNA嵌合體、外顯子跳躍分子、an t i -mi R、aRNA、適體、合成mRNA、IncRNA和shRNA。在一 些實施方案中，所述寡核苷酸是雙鏈核酸(dsNA)分子。所述雙鏈寡核苷酸為例如dsRNA，如 s iRNA、miRNA 或 miRNA 模擬物。
[0056] 在所述方法、用于使用的化合物或用途的一些實施方案中，經(jīng)化學(xué)修飾的dsNA分 子包含：
[0057] a.具有5 '端和3 '端的8至49個核苷酸的有義鏈；
[0058] b.長度為15至49個核苷酸的反義鏈，并且每條鏈均具有5 '端和3 '端；
[0059] c.反義鏈的15至49個核苷酸序列與靶基因 RNA的連續(xù)序列互補；
[0060] d.有義鏈的8至49個核苷酸序列與反義鏈互補。
[0061 ]在一些實施方案中，反義鏈與有義鏈不對稱，例如，有義鏈的長度為8至14個核苷 酸，而反義鏈的長度為15至23個核苷酸。在一些實施方案中，反義鏈和有義鏈的長度各自獨 立地為19至23個核苷酸。在一些實施方案中，反義鏈與有義鏈的長度相同。在一些實施方案 中，反義鏈和有義鏈的長度為19至23個核苷酸，優(yōu)選19個核苷酸。在一些實施方案中，有義 鏈包含兩組或更多組共價連接但并非通過共價鍵(即，有義鏈?zhǔn)?帶切口"）相連的連續(xù)核苷 酸。
[0062] 在一些實施方案中，雙鏈核酸分子是具有如下結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA(dsRNA):
[0063] 5'（N)x-Z33(反義鏈）
[0064] 3'Z'-(N'）y_z"5'（有義鏈）
[0065]其中，N和Ν'各自為未經(jīng)修飾核糖核苷酸、經(jīng)修飾核糖核苷酸或非常規(guī)部分；
[0066] 其中，（Ν)χ和(Ν'）y分別為寡核苷酸，其中每個連續(xù)的Ν或Ν'通過共價鍵與下一Ν或 Ν'相連；
[0067] 其中，X和y各自獨立地為15至49之間的整數(shù)；
[0068] 其中，z"存在或不存在，但若存在則為與有義鏈的5 '端共價連接的封端部分；
[0069]其中，Z和Z '各自獨立地存在或不存在，但若存在則為1至5個連續(xù)核苷酸或非核苷 酸部分或在其所在鏈之3 '端共價連接的其組合；
[0070] 其中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與反義鏈的3'端、有義鏈的3'端或有義鏈的5'端中的 至少一者共價連接；
[0071] 其中，（N'）y的序列與(N)x的序列基本互補，并且其中（N)x包含與靶RNA中的連續(xù) 序列互補的反義序列；
[0072] 前提是當(dāng)鞘脂-聚烷基胺綴合物與有義鏈的5'端相連時，z"不存在。
[0073] 在dsRNA的一些實施方案中，連接各個連續(xù)的N或Ν'的各共價鍵獨立地選自磷酸二 醋鍵或憐fe^?醋鍵。
[0074]在dsRNA的某些實施方案中，x = y;并且X和y各自為15至49的整數(shù)，或17至40,優(yōu)選 18至25。在一些實施方案中，1 = 7 = 19、20、21、22或23。優(yōu)選地4 = 7 = 19或21。
[0075]在某些實施方案中，x = y=19。在一些實施方案中，X為19至25的整數(shù)，y為15至17 的整數(shù)，從而產(chǎn)生具有15至17個核苷酸堿基對的dsRNA。
[0076] 鞘脂-聚烷基胺綴合物優(yōu)選地與有義鏈(Ν'）y的3'端、反義鏈(N)x的3'端或有義鏈 (Ν'）y的5'端中的至少一者共價連接;在一些實施方案中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與(N)x的 3'端共價連接。在一些實施方案中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與(Ν'）y的3'端共價連接。(N)x或 (Ν'）y的3'端可分別包括Z或Z'，例如鞘脂-聚烷基胺綴合物與之相連的核苷酸或非核苷酸 突出(overhang)。所述化合物還可包含與有義鏈的5'端共價連接的封端部分(z"）。
[0077] 在一些優(yōu)選實施方案中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與(Ν'）y的5'端共價連接。在這樣 的化合物中，一個或多個核苷酸或非核苷酸部分或其組合與(N)x的3'端和/或(N)y的3'端 共價連接。在一些實施方案中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與(Ν'）y的3'端或5'端相連時，Z存在。 在一些實施方案中，鞘脂-聚烷基胺綴合物與(N)x的3'端或(Ν'）y的5'端相連時，Z存在。 [0078] 在一些實施方案中，（Ν'）y的序列與(N)x的序列完全互補，（N)x的序列與靶RNA完 全互補。（N'）y的序列還可與(N)x的序列完全互補，并且(N)x的序列與靶RNA部分互補。在這 樣的化合物中，例如，反義鏈[(N)X]的5 '端核苷酸與靶RNA錯配。
[0079]在dsRNA的一些實施方案中，N和Ν'各自為未經(jīng)修飾的核糖核苷酸。
[0080]在dsRNA的一些實施方案中，Ν或Ν'中的至少一者為經(jīng)糖修飾的核糖核苷酸。
[00811在dsRNA的一些實施方案中，Ν或Ν'中的至少一者為選自以下的非常規(guī)部分:DNA、 LNA、鏡像核苷酸、2 ' 5 '連接的核苷酸和無堿基部分。
[0082] 在一些實施方案中，（Ν'）y的序列與(Ν)χ的序列完全互補，并且(Ν)χ的序列與靶 RNA完全互補。
[0083] 在一些實施方案中，（Ν'）y的序列與(Ν)χ的序列完全互補，并且(Ν)χ的序列與靶 RNA部分互補。
[0084] 在一些實施方案中，（Ν'）y的序列與(Ν)χ的序列部分互補，并且(Ν)χ的序列與靶 RNA部分互補。
[0085] 在一些實施方案中，反義鏈[(Ν)χ]的5'端核苷酸與靶RNA錯配。
[0086] 在本文所述任意通式的一些實施方案中，其中靶RNA是mRNA，優(yōu)選人mRNA。在其他 實施方案中，靶RNA是非編碼RNA，或長或短，轉(zhuǎn)錄自哺乳動物基因組。
[0087] 在另一個方面，本文提供了包含本文所公開化合物或所述化合物的鹽及載體的組 合物。在一些優(yōu)選實施方案中，所述化合物包括鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物，其包括上 文公開的特征。在一些實施方案中，所述載體是藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方案中， 所述組合物配制用于皮下、腹膜內(nèi)或瘤內(nèi)施用。
[0088] 在第三方面，本文提供了用于在患癌受試者中治療癌癥的方法，其包括向所述受 試者施用治療量的鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物，從而治療癌癥。
[0089] 還提供了鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物或所述化合物的鹽或包含所述化合物 或所述化合物的鹽的組合物，其用于治療癌癥。
[0090] 還提供了所述鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物或所述化合物的鹽用于制備用于 治療癌癥的藥物的用途。
[0091 ]在又一方面，提供了用于增強治療性寡核苷酸內(nèi)體釋放入細(xì)胞之細(xì)胞質(zhì)的方法， 包括使所述細(xì)胞與鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸相接觸，從而增強內(nèi)體釋放?？梢允顾黾?xì)胞 直接與所述化合物或與所述化合物的組合物相接觸。還提供了鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化 合物，其用于增強治療性寡核苷酸內(nèi)體釋放入細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。
[0092]還提供了鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物用于制備用于增加治療性寡核苷酸內(nèi) 體釋放入細(xì)胞之細(xì)胞質(zhì)的藥物的用途。
[0093]在另一方面，本文提供了鞘脂-聚烷基胺亞磷酰胺。所述亞磷酰胺可用于產(chǎn)生鞘 脂-聚烷基胺寡核苷酸化合物。在鞘脂-聚烷基胺亞磷酰胺的某些實施方案中，鞘脂是鞘氨 醇;其中聚烷基胺是精胺或亞精胺。下文中還提供了合成鞘脂-聚烷基胺亞磷酰胺的方法。 [0094]鞘脂-聚烷基胺綴合物與寡核苷酸的偶聯(lián)可以在寡核苷酸的化學(xué)合成期間或之后 實施，從而形成鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物。鞘脂-聚烷基胺綴合物可以與寡核苷酸的 末端或與寡核苷酸中的內(nèi)在位置相連。鞘脂-聚烷基胺綴合物可偶聯(lián)為亞磷酰胺、H-膦酸酯 或磷酸三酯衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將確定合適的化合物及偶聯(lián)方法。
[0095]該公開內(nèi)容意在涵蓋本文多種實施方案中公開的特征組合的任意和全部修改或 變化。盡管本文中對具體實施方案進(jìn)行了舉例說明和描述，但應(yīng)理解，本發(fā)明涵蓋用于實現(xiàn) 相同目的的這些實施方案之特征的任何安排。在閱讀本文描述之后，形成未在本文具體描 述之實施方案的上述特征之組合對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是明顯的。
[0096] 附圖簡述
[0097]圖1提供了用于生成鞘脂-精胺亞磷酰胺和鞘脂亞精胺亞磷酰胺的化學(xué)合成途徑。 對該合成的描述提供于下文的實施例2中。
[0098] 圖2是示出2,鞘脂聚烷基胺siRNA化合物的海腎熒光素酶活性劑量依賴性敲低而 其未綴合的對應(yīng)物并非如此的圖。
[0099] 圖3是示出鞘脂-精胺siRNA化合物的海腎熒光素酶活性劑量依賴性敲低而其未綴 合的對應(yīng)物并非如此的圖。
[0100]圖4是示出細(xì)胞提取物和血漿中鞘脂-精胺siRNA的有義鏈和反義鏈的穩(wěn)定性的 PAGE凝膠的圖。
[0101] 圖5是示出血漿中鞘脂精胺siRNA化合物的水平的圖。
[0102] 圖6A、6B和7是示出鞘脂-聚烷基胺siRNA化合物未激發(fā)免疫應(yīng)答的結(jié)果的圖。
[0103] 圖8是示出鞘脂-聚烷基胺siRNA化合物未活化補體的結(jié)果的圖。
[0104]圖9A和9B是示出肝和脾中鞘脂-聚烷基胺siRNA化合物的累積水平的圖。
[0105] 圖10是示出皮下施用之后LLC1腫瘤細(xì)胞中鞘脂-聚烷基胺siRNA化合物的累積水 平的圖。
[0106] 圖11是示出皮下施用之后LLC1腫瘤細(xì)胞中鞘脂-聚烷基胺siRNA化合物的累積水 平的圖。
[0107] 圖12是示出腫瘤中由鞘脂-精胺siRACl化合物進(jìn)行RAClmRNA的RNAi介導(dǎo)的切割所 得RACE產(chǎn)物的PAGE凝膠圖。
[0108] 圖13A和13B示出未經(jīng)處理和經(jīng)鞘脂-精胺s iRNA處理之細(xì)胞的FACS移位。
[0109] 現(xiàn)在將描述的化合物、方法、材料和實施例僅為示例性，而無意于限制；與本文所 述的那些相似或等同的材料和方法可用于實施或測試本發(fā)明。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將 從以下詳述和權(quán)利要求顯而易見。
[0110] 發(fā)明詳述
[0111] 本文公開了可用于生成鞘脂-聚烷基胺寡核苷酸化合物的鞘脂-聚烷基胺衍生物， 所述化合物可用于調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)，特別是用于下調(diào)靶基因表達(dá)。本文公開的化合物表現(xiàn) 出以下中的一個或多個:與未經(jīng)修飾的雙鏈核酸化合物相比提高的中革G (on-target)活性、 降低的脫靶活性、增加的攝入細(xì)胞伴隨增加的內(nèi)體釋放入細(xì)胞質(zhì)、提高的核酸酶穩(wěn)定性(核 酸外切酶和/或核酸內(nèi)切酶)和降低的免疫調(diào)節(jié)。不希望受到理論約束，鞘脂-聚烷基胺的存 在通過在核內(nèi)體中產(chǎn)生"質(zhì)子海綿效應(yīng)"為體液中的寡核苷酸提供了穩(wěn)定性、增加細(xì)胞攝入 并促進(jìn)內(nèi)體逃逸。所述分子和組合物能夠下調(diào)、敲低、減弱、降低或抑制靶基因表達(dá)，并且可 用于治療患有與其中基因表達(dá)具有不利后果之疾病或病癥或和/或與這樣的疾病或病癥相 關(guān)的癥狀或有罹患這樣的疾病或病癥之風(fēng)險的受試者。
[0112] 因此，在某些方面，提供了可用于下調(diào)基因表達(dá)的經(jīng)修飾dsRNA化合物和包含所述 化合物的藥物組合物。所述靶基因是哺乳動物或非哺乳動物靶基因。
[0113]
[0114] 應(yīng)注意，本文中使用的單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)形式，另有清楚說明的內(nèi)容除外。當(dāng)本發(fā) 明的方面或?qū)嵤┓桨敢择R庫什組或其他替代組的形式描述時，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到本 發(fā)明還因而以任意單獨成員或組成員之亞組的形式描述。
[0115] 本文所用術(shù)語"抑制"是指將基因的表達(dá)或所述基因之產(chǎn)物的活性降低至足以獲 得期望的生物或生理效應(yīng)的程度。抑制是完全抑制或部分抑制。
[0116] 術(shù)語"dsNA"和"ssNA"還包括saNA(短活化核酸)分子，其以轉(zhuǎn)錄和/或轉(zhuǎn)錄后水平 誘導(dǎo)靶基因表達(dá)。例如，活化NA可通過靶向基因啟動子誘導(dǎo)相關(guān)基因的有效轉(zhuǎn)錄活化。 [0117]本文公開的dsNA分子可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)化學(xué)地或生物地合成。
[0118] "siNA抑制劑"、"dsRNA抑制劑"、"dsRNA分子"是能夠?qū)⒒虮磉_(dá)或所述基因之產(chǎn) 物的活性降低至足以實現(xiàn)期望的生物或生理效應(yīng)之程度的化合物。本文所用術(shù)語"siNA抑 制劑"是指siRNA、shRNA、合成shRNA、miRNA中的一個或多個。抑制還可指下調(diào)，或者對于 RNAi而言沉默。dsRNA分子包括有義鏈和反義鏈，所述有義鏈也稱為過客鏈，其與靶RNA具有 同源性;所述反義鏈也稱為引導(dǎo)鏈，其與有義鏈完全或部分互補。
[0119] 本文所用術(shù)語靶基因的"抑制"或"基因表達(dá)的下調(diào)"意指基因表達(dá)(轉(zhuǎn)錄或翻譯） 或多肽活性的抑制。靶RNA序列的多核苷酸序列是指靶mRNA、靶RNA或與靶mRNA或RNA優(yōu)選地 具有至少70 %同一性、更優(yōu)選80 %同一性、甚至更優(yōu)選90 %或95 %同一性的其任意同源序 列。因此，本發(fā)明涵蓋本文所述經(jīng)過突變、改變或修飾的多核苷酸序列。術(shù)語"mRNA多核苷酸 序列"和"mRNA"可互換使用。
[0120] 術(shù)語"靶RNA"是指與dsNA或ssNA的至少一條鏈同源或互補或者與miRNA具有同源 性的RNA分子。靶RNA分子可以是mRNA (信使RNA)和IncRNA (長非編碼RNA)或1 incRNA (大基因 間非編碼RNA)，包括但不限于天然反義RNA(AS RNA)和eRNA(增強子RNA)以及pre-miRNA或 pro-miRNA。未經(jīng)加工的mRNA、核糖體RNA和病毒RNA序列也可以是靶標(biāo)。
[0121] 靶RNA通常由dsNA或ssNA調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)通常是指轉(zhuǎn)錄后下調(diào)（例如，通過RNAi或AS活 性)或上調(diào)(例如，通過anti-miR活性）。在一些實施方案中，ss-或dsNA(單鏈或雙鏈核酸)可 以調(diào)節(jié)其革ERNA而不影響其水平，而非通過調(diào)節(jié)其功能(例如，阻斷miRNA活性的anti-miR)。 在其他實施方案中，靶RNA是指在NA與靶標(biāo)之間不存在直接序列同源性時其水平受ssNA和/ 或dsNA影響的RNA。這可發(fā)生在例如當(dāng)靶RNA表達(dá)的活化在轉(zhuǎn)錄水平而非轉(zhuǎn)錄后水平實現(xiàn)時 的RNAa情況下。
[0122]本文所用術(shù)語"多核苷酸"和"核酸"可以互換使用，指包括脫氧核糖核酸(DNA)和 核糖核酸(RNA)在內(nèi)的核苷酸序列。該術(shù)語應(yīng)理解為包括由核苷酸類似物產(chǎn)生的RNA或DNA 類似物作為等同物。貫穿本公開，給出了 mRNA序列代表相應(yīng)的基因。
[0123] "寡核苷酸"或"低聚物"是指約2至約100個核苷酸或更長的脫氧核糖核苷酸或核 糖核苷酸序列。在一些實施方案中，所述寡核苷酸是mRNA。所述寡核苷酸中的每個DNA或RNA 核苷酸可以獨立地為天然的或合成的，和/或經(jīng)修飾或未經(jīng)修飾的。修飾包括糖、堿基和核 苷酸間修飾。本文所公開的寡核苷酸包括單鏈分子和雙鏈分子，其調(diào)芐基因表達(dá)。寡核苷酸 包括反義分子(經(jīng)RNAi或RNASEH機制切割的分子，包括DNA，RNA或DNA/RNA嵌合體）、雙鏈RNA (dsRNA)(包括8丨卩祖、8丨嫩、!^1?祖、8&1?祖等）、抗1^1?、1^財莫擬物、核酶、適體、外顯子跳躍分 子、合成mRNA等。"調(diào)芐基因表達(dá)"包括下調(diào)（例如，siRNA)基因表達(dá)或上調(diào)（例如，saRNA)基 因表達(dá)。
[0124]如本文中使用的，"接頭（linker)"和"鍵(linkage)"是指連接一個化學(xué)部分與另 一化學(xué)部分的一個或多個原子，例如鞘脂-聚烷基胺與亞磷酰胺或鞘脂-聚烷基胺與寡核苷 酸。接頭是含一個原子或例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個