一種原魯烷型倍半萜類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從香鱗毛蕨的干燥全草中分離得到的一種具 有治療前列腺癌作用的原魯烷型倍半萜類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 香鱗毛蕨Dryopteris fragrans(L. )Schott.是一種野生多年生蕨類植物，系鱗毛 蕨科鱗毛蕨屬。其生境極其特殊，生于海拔700-2400米的林下或高寒地區(qū)的滑石坡、森林中 的碎石坡上和火山周圍的巖漿縫隙中。主要分布于黑龍江省五大連池地質(zhì)公園內(nèi)、塔河縣 白卡獸山、呼中的大白山的高山地帶及小興安嶺北部地區(qū)。其中尤以生長于五大連池的香 鱗毛蕨活性最強(qiáng)。民間流傳香鱗毛蕨對銀肩病、頭皮炎、干癬、痤瘡等多種皮膚病有良好的 治療效果。
[0003] 香鱗毛蕨的化學(xué)成分主要有間苯三酚類、黃酮類以及萜類等，具有多種藥理作用， 是一種藥用價值很高的植物。間苯三酚類不僅是鱗毛蕨屬植物的主要特征性化學(xué)成分，也 是產(chǎn)生藥理活性的主要成分。該類化合物主要由各種脂肪鏈取代的綿馬酸片斷和綿馬酚片 斷通過亞甲基連接而成。芳香環(huán)上的c-或〇-被不同的取代基取代形成了不同的化合物。黃 酮類化合物發(fā)現(xiàn)的數(shù)量不多，代表性的有4種，分別為(^38 8；[1'111201]1〇81(10八、13、(]和 sutchuenos ide A。砲類化合物，包括倍半砲和三砲類。
[0004] 在黑龍江省北部的居民用香鱗毛蕨的水提取液涂擦患處治療牛皮癬、皮疹、皮炎、 痤瘡等，有的居民還用其水提取液洗頭達(dá)到去頭肩、止癢的目的。民間驗(yàn)方利用香鱗毛蕨已 有幾十年的歷史，通過多年的人體試驗(yàn)，證實(shí)香鱗毛蕨對老年性皮膚瘙癢、各種皮膚病的治 療效果顯著?，F(xiàn)代藥理研究表明香鱗毛蕨具有抗皮膚癬菌作用、治療銀肩病的作用、治療痤 瘡作用、止癢及抗過敏作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從香鱗毛蕨的干燥全草中分離得到的一種具有治療前 列腺癌作用的原魯烷型倍半萜類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將香鱗毛蕨的干燥全草粉 碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫10個 柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗 脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為75:1、45 :1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、 12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~12個柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較；
[0020] 圖3為不同濃度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0021] 圖4為10.0 mg/L化合物（I)作用不同時間后PC3和DU145存活率。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0023]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0025]制備方法：（a)將香鱗毛蕨的干燥全草（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取(25L X 3次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次)和水 飽和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃 取物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體 積，再用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (157g);(c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為75:1(8個柱體 積）、45:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、12 :1 (8個柱體積）和1:1 (5個柱體積）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(49g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用 體積比為20:1(8個柱體積）、12:1(10個柱體積)和5:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(25g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10-12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純 的化合物（I)(35mg)。
[0026] 結(jié)構(gòu)確證：白色粉末;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 273.1520，結(jié)合核磁特征可得 分子式為Ci5H22〇3，不飽和度為5。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ( ΡΡπι，DMS〇-d6，500MHz):H-1 (1 · 31， ddd，J = 8.3,8.3，10.7)，H-l(2.16，ddd，J = 4.4,9.2，10.7)，H-2(1.60，m)，H-2(1.72，m)，H-2a(l .86，m)，H-3(1.86，m)，H-4(3.96，dd，J = 5.1，9·9)，H-4a(2.18，ddd，J = 4.8,9.9， ll.l)，H-5(1.29，br，dd，J = 4.8，12.2)，H-5(1.82，ddd，J = 3.4，ll.l，12.2)，H-8(0.87，d，J = 7.0)，H-9(1.20，s)，H-10(3.41，d，J = 6.4)，H-10(3.49，dd，J = 3.4,6.4)，H-ll(0.97，s); 核磁共振碳譜數(shù)據(jù)知化口111，0150-(16，1251抱）：28.5(〇12，1-(：)，22.6((：!12,2-〇,50.7(〇1，2&-C)，37.8(CH，3-C)，73.6(CH，4-C)，42.1(CH，4a-C)，37.5(CH2,5-C)，53.8(C，6-C)，205.5(C， 7-C)，116.7(C，7a-C)，41.1(C，7b-C)，14.2(CH3,8-C)，19.1(CH 3,9-C)，76.7(CH2，10-C)， 25.1(013，11-〇;碳原子標(biāo)記參見圖1。1!1-匪1?譜顯示三個甲基信號[6!10.87((1，1 = 7.0抱，!1- 8)，0.97(8，!1-11)和1.20(8，!1-9)]，一個含氧亞甲基信號[3!13.41((1，了 = 6.4抱，!1-10)，3.49 (dd，J = 3.4,6.4HZ，H-10)]</3C NMR譜顯示15個碳信號，包括三個甲基，四個亞甲基(一個含 氧亞甲基），四個次甲基(一個含氧次甲基），以及四個季碳(一個羰基季碳，一個含氧季碳）。 HMBC譜中，Me-8 (δΗΟ · 87)與C-4 (SC73 · 6)，以及H-4 (δΗ3 · 96)與C-4a(SC42 · 1)和C-5 (SC37 · 5) 的相關(guān)性可知C-4位連有一個羥基。HMBC譜中，甲基信號Me-9(δΗΙ. 20)與亞甲基C-5，季碳〇 6(SC53.8)，含氧亞甲基C-10(SC76.7)和羰基C-7(SC205.5)的相關(guān)性表明C-6位連有一個甲 基。通過HMBC譜中含氧亞甲基質(zhì)子信號(H 2-10)與含氧季碳(C-7a)的相關(guān)性可知C-10和C-7a通過醚橋連接。R0ESY譜中，H-4與Η-5(δΗ1.82)的相關(guān)性表明H-4為β構(gòu)型，則C-4位羥基為 α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該 化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖2)。 [0027]實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn) [0028] 一、材料和儀器
[0029] 前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌細(xì)胞株DU145(ATCC-HTB-81)?；?合物⑴自制，HPLC歸一化純度大于98%，用二甲基亞礬(DMS0)配制成濃度為1.0g/L的儲存 液備用。CCK-8試劑盒為日本同仁化學(xué)研究所產(chǎn)品。RPMI-1640培養(yǎng)基購自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)購自Hyelone公司。青/鏈霉素為上海先鋒藥業(yè)產(chǎn)品。胰蛋白酶購自華美生物工程 公司。二甲基亞砜(DMS0)購自上海華舜生物工程公司。瓊脂(Agarose)、二硫蘇糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)為Sigma公司產(chǎn)品。十二烷基磺酸鈉(SDs)、三 氯甲基烷基甲燒(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100為?1'0111683公司產(chǎn)品。丙稀酞胺、過硫酸