本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類多羥基酞嗪酮化合物、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

雌激素受體屬于類固醇核受體，是由配體誘導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子的受體。雌激素受體是一種重要的細(xì)胞調(diào)節(jié)蛋白，它通過內(nèi)源性雌激素在眾多的生理過程中起著至關(guān)重要的作用，包括女性第二性征發(fā)育和維護(hù)，包括肌肉和骨骼的質(zhì)量等。內(nèi)源性甾體雌激素一般被稱為女性性激素，包括雌二醇。雌二醇是在女性血清中發(fā)現(xiàn)的主要的甾體雌激素，它主要由卵巢分泌的。

雌激素受體(er)包括受體亞型er-α(雌激素受體α)和er-β(雌激素受體β)。此外還有與雌激素受體結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的受體(errs)，如err-α，err-β和err-γ。類固醇類核受體在身體生理功能中起著重要作用，其中包括有關(guān)電解質(zhì)和水平衡的轉(zhuǎn)錄動態(tài)平衡、生長發(fā)育、傷口愈合、生育、應(yīng)激反應(yīng)、免疫功能和認(rèn)知功能。因此，化合物具有調(diào)節(jié)(即拮抗劑，激動劑，部分拮抗劑，部分激動劑)類固醇核受體活動的調(diào)節(jié)劑都具有治療和預(yù)防受類固醇核受體活動影響的疾病。例如，雌激素受體er-β存在于腦、骨骼、免疫系統(tǒng)、胃腸道、肺、卵巢、子宮內(nèi)膜、前列腺、血管系統(tǒng)、泌尿生殖道、涎腺等組織中。因此，有關(guān)這些組織的病癥可通過er-β受體選擇性配體調(diào)節(jié)劑來治療。er-β可通過與雌激素受體er-α異二聚而對er-α受體起到拮抗劑的作用。例如，er-β受體激動劑可以阻止雌激素受體er-α在前列腺癌和乳腺癌組織中促進(jìn)腫瘤的增生的作用。

眾所周知，內(nèi)源性雌激素對絕經(jīng)前婦女的血管系統(tǒng)的影響巨大，對心肌也具有保護(hù)作用。雌激素直接影響各種血管組織舒張功能(即降低血管收縮或血管張力)，降低全身血管阻力，改善微血管循環(huán)。雌激素還減少血管細(xì)胞增殖和遷移，降低血管反應(yīng)性、粘性，減緩血管的纖維化。er-β受體激動劑可能對高血壓和各種其他心血管疾病如動脈粥樣硬化和充血性心力衰竭有治療效用。

er-β受體激動劑也具有抗氧化活性。在體內(nèi)氧化磷酸化的過程中，會產(chǎn)生各種活性氧自由基，超氧(o2·^-)和過氧化氫(h2o2)等不穩(wěn)定分子。這些活性氧與內(nèi)源性大分子如dna、脂類和蛋白質(zhì)產(chǎn)生各種氧化反應(yīng)而損害其功能。隨著時間的推移這氧化損傷積累會導(dǎo)致各種與年齡有關(guān)的病癥。例如，神經(jīng)退行性疾病包括老年癡呆癥、帕金森病、亨廷頓氏病，多發(fā)性硬化癥，肌萎縮性側(cè)索硬化癥，多種類型的癌癥，包括前列腺和結(jié)腸、中風(fēng)等血管疾病和各種年齡相關(guān)的動脈粥樣硬化等?？箟难?維生素c)，來自紅酒的茶多酚和源自大豆產(chǎn)品的染料木黃酮與香豆雌酚等植物雌激素分子具有消除體內(nèi)活性氧的功能。erβ受體激動劑是多酚類化合物，具有抗氧化活性。很多文獻(xiàn)與專利報道了非甾體類小分子erβ受體激動劑，但多羥基酞嗪酮化合物作為erβ受體激動劑還沒有報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一類新的多羥基酞嗪酮化合物。

為了實現(xiàn)上述目的以及其他相關(guān)目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一類多羥基酞嗪酮化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如式(i)所示：

其中r1、r2、r3、r4各自獨立的為氫、羥基、c1～3烷氧基或鹵素；r5為氫、c1～4烷基、c1～4鹵代烷基、苯基或氰基；r6為氫或鹵素。所述鹵素為氟、氯或溴。

優(yōu)選的，所述r1、r2、r3為羥基，r4和r6為氫；r5為氫、c1～4烷基、c1～4鹵代烷基、苯基或氰基。

優(yōu)選的，所述r1、r2、r3為羥基，r4和r6為氫；r5為氯或溴。

優(yōu)選的，所述r1、r2、r3為羥基；r4為氫或鹵素；r5為氫；r6為氯或溴。所述鹵素為氟、氯或溴。

本發(fā)明的第二目的在于提供一類多羥基酞嗪酮化合物的制備方法，當(dāng)所述r1、r2、r3為羥基，r4和r6為氫；r5為氫、c1～4烷基、c1～4鹵代烷基、苯基或氰基時，包括如下步驟：

以化合物(1)為起始原料與烷基或苯基格式試劑反應(yīng)得到相應(yīng)的二級醇化合物(2)；再溴化為化合物(3)，化合物(3)經(jīng)羧基化反應(yīng)得到化合物(4)；化合物(4)經(jīng)氧化生成(5)；化合物(5)和相應(yīng)的肼經(jīng)過縮合反應(yīng)生成化合物(6)；化合物(6)經(jīng)脫甲基反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(7)，其化學(xué)反應(yīng)式如下：

當(dāng)r1、r2、r3為羥基，r4和r6為氫；r5為氯或溴時，包括如下步驟：化合物(8)與肼縮合生成化合物(9)；化合物(9)再經(jīng)過鹵化反應(yīng)得到中間體(10)；化合物(10)通過脫甲基反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(11)，其化學(xué)反應(yīng)式如下：

當(dāng)所述r1、r2、r3為羥基；r4為氫或鹵素；r5為氫；r6為氯或溴時，包括如下步驟：化合物(12)與溴代琥珀亞酰胺或氯代琥珀亞酰胺反應(yīng)生成化合物(13)；化合物(13)再經(jīng)過脫甲基化反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(14)，其化學(xué)反應(yīng)式如下：

本發(fā)明的第三目的在于提供上述多羥基酞嗪酮化合物在制備治療和/或預(yù)防與雌激素相關(guān)的疾病中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述與雌激素相關(guān)的疾病包括前列腺疾病、腫瘤、泌尿生殖道疾病、胃腸疾病、炎癥、骨質(zhì)疏松癥、周圍血管疾病、阿茲海默癥、帕金森病、中風(fēng)、眼疾病、關(guān)節(jié)炎、更年期潮熱、心血管疾病、肥胖及脂肪肝。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種組合物，包含上述多羥基酞嗪酮化合物或其鹽，以及藥學(xué)上可接受的輔料。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次公開了多羥基酞嗪酮化合物具有良好的erβ受體激動效果，有望開發(fā)出新型的erβ受體激動劑。

具體實施方式

下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實施例1

6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)-4-甲基酞嗪酮，(c15h12n2o4)

步驟1.在50ml園底燒瓶中加入原料3，5-二甲氧基苯甲醛1.0克，無水四氫呋喃20ml作為溶劑，在-20℃下滴加7.2毫摩爾甲基溴化鎂格式試劑，攪拌，反應(yīng)時間2.5～3.5小時，點層析板確定反應(yīng)終點，反應(yīng)完成后，水解，乙酸乙酯萃取，濃縮抽干，得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝9：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得1.0克3,5-二甲氧基苯乙醇，產(chǎn)率約為92％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺183.09。

步驟2.在50ml園底燒瓶中加入原料3，5-二甲氧基苯乙醇1.00克，溴代琥珀酰亞胺1.17克，無水氯仿30ml作為溶劑，攪拌，反應(yīng)時間6小時，點層析板確定反應(yīng)終點，反應(yīng)完成后，水解，乙酸乙酯萃取，濃縮抽干，得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝9：1)分離，純化，得到黃色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得1.3克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為91％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺261.01。

步驟3.在250ml園底燒瓶中加入原料2-溴-3,5-二甲氧基苯乙醇17.4克，無水四氫呋喃100ml作為溶劑，在-78℃下滴加140毫摩爾正丁基鋰，攪拌，反應(yīng)時間2小時，然后通入二氧化碳，反應(yīng)完成后，水解，乙酸乙酯萃取，濃縮抽干，得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝9：2)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得10.0克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為72％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺209.09。

步驟4.在50ml園底燒瓶中加入原料5，7-二甲氧基-3-甲基-異苯基呋喃酮500毫克，2摩爾當(dāng)量的硝酸錳，5摩爾當(dāng)量的高錳酸鉀和水20ml，在70-80℃下攪拌，反應(yīng)時間2小時，乙酸乙酯萃取，濃縮抽干，得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝19：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得250毫克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為46％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺225.08。

步驟5.在50ml園底燒瓶中加入原料3-羥基-5，7-二甲氧基-3-甲基-異苯基呋喃酮2.0克，1.1摩爾當(dāng)量的4-甲氧基苯肼鹽酸鹽，1.2摩爾當(dāng)量的醋酸鈉和醋酸20ml作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，濃縮抽干，乙酸乙酯萃取，抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝19：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得1.3克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為45％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺327.14。

步驟6.在50ml園底燒瓶中加入原料6，8-二甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-4-甲基酞嗪酮500毫克，5摩爾當(dāng)量的三溴化硼，30ml1,2-二氯乙烷作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，加入甲醇和水水解，二氯乙烷萃取，濃縮抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝9：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得300毫克目標(biāo)產(chǎn)物6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)-4-甲基酞嗪酮，產(chǎn)率約為70％。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.70(s,1h,oh)10.88(s,1h,oh),9.74(s,1h,oh),7.33(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.87(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.68(s,1h,arh),6.61(s,1h,arh),3.35(s,3h,ch3)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-283.23。

實施例2

4-乙基-6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)-酞嗪酮，(c16h14n2o4)

化合物按照實例1的合成方法反應(yīng)得到白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h,oh)10.87(s,1h,oh),9.74(s,1h,oh),7.36(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.86(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.73(d,j＝2.0hz，1h,arh),6.60(d,j＝2.0hz，1h,arh),2.86(q,j＝7.2hz，2h,ch2)；1.24(t,j＝7.2hz，3h,ch3)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-297.18。

實施例3

6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)-酞嗪酮，(c14h10n2o4)

化合物以3，5-二甲氧基苯甲醇為原料按照實例1的合成方法反應(yīng)得到白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.73(s,1h,oh)10.88(s,1h,oh),9.76(s,1h,oh),8.07(s，1h，ch＝n)，7.35(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.87(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.71(d,j＝2.0hz，1h,arh),6.63(d,j＝2.0hz，1h,arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-269.04。

實施例4

2-(3-氟-4-羥基苯基)-6,8-二羥基-4甲基酞嗪酮，(c15h11fn2o4)

化合物按照實例1的合成方法反應(yīng)得到相應(yīng)白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.73(s,1h,oh)10.87(s,1h,oh),10.25(s,1h,oh),7.45(dd，1h，j＝11.7，2.4hz，arh)，7.17-7.03(m，2h，arh)，6.67(s,1h,arh),6.62(s,1h,arh),3.36(s,3h,ch3)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-301.06。

實施例5

6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)-4-苯基酞嗪酮，(c20h14n2o4)

化合物以3，5-二甲氧基苯甲醛和苯基格式試劑為原料按照實例1的合成方法反應(yīng)得到白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.70(s,1h,oh)10.86(s,1h,oh),9.73(s,1h,oh),7.53-7.38(m，5h，arh)，7.33(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.86(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.72(d,j＝2.0hz，1h,arh),6.62(d,j＝2.0hz，1h,arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-345.11。

實施例6

4-溴-6，8-二羥基-2(4—羥基苯基)酞嗪酮，(c14h9brn2o4)

步驟1.在50ml園底燒瓶中加入原料4,6-二甲氧基-異苯并呋喃-1,3-二酮1.00克，1.1摩爾當(dāng)量的4-甲氧基苯肼鹽酸鹽，1.2摩爾當(dāng)量的醋酸鈉和醋酸20ml作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，濃縮抽干，乙酸乙酯萃取，抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝19：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得0.89克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為56％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺329.14。

步驟2.在50ml園底燒瓶中加入原料6,8-二甲氧基-2-(4-甲氧基-苯基)-2,3-二氫-酞嗪-1,4-二酮500毫克，2摩爾當(dāng)量的三溴氧磷，30ml1，2-二氯乙烷作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，加入水水解，碳酸氫鈉中和，二氯乙烷萃取，濃縮抽干得到油狀物。硅膠柱層析(乙酸乙酯:己烷＝4：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得270毫克目標(biāo)產(chǎn)物4-溴-6,8-二甲氧基-2-(4-甲氧基-苯基)-2,3-二氫-酞嗪-1,4-二酮，產(chǎn)率約為45％。(esi,positive)m/z[m+h]⁺391.04。

步驟3.在50ml園底燒瓶中加入原料4-溴-6,8-二甲氧基-2-(4-甲氧基-苯基)-2,3-二氫-酞嗪-1,4-二酮500毫克，5當(dāng)量的三溴化硼，30ml1，2-二氯乙烷作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，加入甲醇和水水解，二氯乙烷萃取，濃縮抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝9：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得340毫克目標(biāo)產(chǎn)物4-溴-6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)酞嗪酮，產(chǎn)率約為76％。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.78(s,1h,oh)10.87(s,1h,oh),9.74(s,1h,oh),7.32(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.86(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.70(d,j＝2.0hz，1h,arh),6.61(d,j＝2.0hz，1h,arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-348.13。

實施例7

4-氯-6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)酞嗪酮，(c14h9cln2o4)

化合物按照實例6的合成方法反應(yīng)得到白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h,oh)10.86(s,1h,oh),9.77(s,1h,oh),7.33(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.88(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.72(d,j＝2.0hz，1h,arh),6.61(d,j＝2.0hz，1h,arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-303.04。

實施例8

4-溴-2-(3-氟-4-羥基苯基)-6,8-二羥基酞嗪酮，(c14h8brfn2o4)

化合物按照實例6的合成方法反應(yīng)得到白色粉末物質(zhì)。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.78(s,1h,oh)10.88(s,1h,oh),10.28(s,1h,oh),7.42(dd,j＝11.7，2.4hz,1h,arh),7.17-7.04(m，2h，arh)，6.71(d,j＝2.0hz，1h,arh)；6.62(d,j＝2.0hz，1h,arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-364.98。

實施例9

5-溴-2-(4-羥基苯基)-6,8-二羥基酞嗪酮，(c14h9brn2o4)

步驟1.在50ml園底燒瓶中加入原料6,8-二甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)酞嗪酮500毫克，1.2當(dāng)量的溴代琥珀亞酰胺，無水四氫呋喃30ml作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間4小時，，濃縮抽干，乙酸乙酯萃取，抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝19：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得0.51克產(chǎn)物，產(chǎn)率約為81％。質(zhì)譜：(esi,positive)m/z[m+h]⁺391.04。

步驟2.在50ml園底燒瓶中加入原料5-溴-6,8-二甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)酞嗪酮500毫克，5摩爾當(dāng)量的三溴化硼，30ml1,2-二氯乙烷作為溶劑，攪拌，回流反應(yīng)時間24小時，加入甲醇和水水解，二氯乙烷萃取，濃縮抽干得到油狀物。硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝9：1)分離，純化，得到白色粉末物質(zhì)，烘干，稱重，得355毫克目標(biāo)產(chǎn)物5-溴-6,8-二羥基-2-(4-羥基苯基)酞嗪酮，產(chǎn)率約為79％。

核磁共振譜：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h,oh)，11.38(s,1h,oh),9.78(s,1h,oh),8.06(s，1h，ch＝n)，7.36(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.86(d,j＝8.8hz,2h,arh),6.53(s，1h，arh)；質(zhì)譜：(esi,negative)m/e[m-h]^-346.96。

實施例10

化合物的活性按下述方法得到：先將化合物溶于dmso中，配成6-8個濃度梯度的溶液。將雌激素受體和帶有放射性標(biāo)記的雌二醇([³h]-estradiol，100nm)加入到緩沖液中，混勻，配制成反應(yīng)液。將各化合物濃度梯度稀釋液分別加入到反應(yīng)液中，混勻，4℃下孵育過夜，使化合物及雌二醇與雌激素受體充分反應(yīng)。然后，通過gf/b過濾，topcountnxt液閃儀(perkinelmer)進(jìn)行放射性強度檢測。根據(jù)檢測到的各濃度的數(shù)值進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到化合物的雌激素受體親合常數(shù)，見下表：

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。