本發(fā)明涉及一類含氮雜環(huán)氨基醇(醇胺)類化合物在醫(yī)藥方面的新用途，更具體地涉及含氮雜環(huán)氨基醇(醇胺)類化合物在制備抗寄生蟲藥物中的應用。
背景技術：
我國的寄生蟲種類繁多，可感染人的寄生蟲約有229種。1988-1992年全國人體寄生蟲分布調查報告顯示，我國寄生蟲感染率為62.63％，感染人數達7.08億。近年來，隨著寄生蟲病防控力度的加強以及人民生活水平和衛(wèi)生條件的改善，寄生蟲病的防治在我國取得了巨大的成績，但是目前仍面臨嚴峻的挑戰(zhàn)：如國際交流日益頻繁和瘧原蟲抗藥株的存在為瘧疾防治添加了新的難度；腸道寄生蟲的感染仍十分嚴重，鉤蟲、蛔蟲、鞭蟲的感染人數分別為1.94、5.31和1.12億；組織內寄生蟲病如旋毛蟲病、囊蟲病、包蟲病等在西南、西北地區(qū)是常見和多發(fā)病種；隨著人民生活水平的提高和一些不良飲食習慣的存在，食源性寄生蟲病的種類和發(fā)病人數也在不斷增加。
棘球蚴病俗稱包蟲病，是全球分布的重要人畜共患疾病之一，嚴重危害人民健康并且給畜牧業(yè)帶來巨大的經濟損失。據不完全統計，我國包蟲病患者高達60～70萬，受威脅人群約為達6600萬以上。包蟲病在患者體內發(fā)展緩慢，主要產生占位性病變，使患者喪失勞動能力，對患者的身心健康造成嚴重的損害。尤其是泡球蚴病，死亡率高，有“寄生蟲腫瘤”和“第二癌癥”之稱。但是，目前治療包蟲病僅有甲苯達唑和阿苯達唑兩個藥物，且這些藥物的治愈率僅為30％左右。亟待找到新的有效替代藥物，最終達到提高藥物治療效果，減輕患者疾病痛苦的目標。
血吸蟲病仍是目前一些發(fā)展中國家，特別是撒哈拉以南非洲地區(qū)的一個重要的公共衛(wèi)生問題。據估計全球有2億以上的人感染血吸蟲，其中1.2億人有臨床癥狀。血吸蟲的主要病理損傷是蟲卵肉芽腫所導致的肝臟纖維化。吡喹酮是血吸蟲治療的唯一藥物且療效較好，但是在一些地區(qū)已經出現了吡喹酮的抗藥性。為了豐富血吸蟲的治療手段，亟需尋到新的治療藥物。
技術實現要素：
發(fā)明人在前期實驗研究基礎上發(fā)現具有如下結構特征的化合物對寄生蟲具有一定的藥理作用：同時具有取代或未取代的氨基和取代或未取代的羥基；N原子和O原子之間間隔1-3個碳原子；以及至少一個N原子以雜環(huán)或稠雜環(huán)存在。因此，對具有上述結構特征的一系列化合物進行了研究，結果發(fā)現該類化合物具有顯著的體外抗血吸蟲和棘球蚴的活性，從而完成本發(fā)明。
本發(fā)明提供了以下式(I)或式(II)所示雜環(huán)氨基醇(醇胺)類化合物在抗寄生蟲方面的用途。
其中，n＝0-2；R選自下組：氫、直鏈或支鏈的C1-C8烷基、鹵素取代的直連或支鏈C1-C8烷基、烷氧基或烷硫基、C5-C6環(huán)、芳環(huán)、芳香雜環(huán)和稠雜環(huán)、芳氧基和芳硫基；R1和R2和與它們相連的N原子組成取自下組的雜環(huán)、取代雜環(huán)或取代稠雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、氫化喹啉基、咔唑基、嘌呤基和吲哚基；R3和R4選自：氫、直鏈或支鏈的C1-C5 烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C 1-C5烷基；或R3和R4和與它們相連的N原子組成取自下組的雜環(huán)、取代雜環(huán)或取代稠雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、氫化喹啉基、咔唑基、嘌呤基和吲哚基。
例如，式(I)或式(II)所示雜環(huán)氨基醇類化合物可以是如下式I-A、式I-B、式I-C或式II-A化合物：
更具體地，舉例如下：
一、I-A結構舉例
1.當式I-A中R1、R2與氮原子組成取代哌嗪基時，式I化合物為哌嗪氨基醇類化合物，結構式如下：
式中，X為亞甲基或選自氧、硫的雜原子；R5選自：直鏈或支鏈的C1-C5烷基，鹵代直鏈或支鏈的C1-C5烷基，取代雜環(huán)、取代稠雜環(huán)、取代苯、取代稠環(huán)芳基、取代苯甲基等；R6選自、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈C1-C5烷基取代苯基、取代苯并吡咯基、取代哌啶基、取代哌嗪基、取代嘧啶基或取代吡啶基。
2.當式I-A中R1、R2與氮原子組成取代哌啶基時，式I化合 物為哌啶氨基醇類化合物，結構式如下：
式中，X為亞甲基或選自氧、硫的雜原子；R5選自取代雜環(huán)、取代稠雜環(huán)、取代苯、取代苯烷基、取代巰基、取代烷氧基、取代芳氧基、芳環(huán)或雜環(huán)取代的氨基；R6選自直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈C1-C5烷基、取代苯基、取代苯并吡咯基、取代哌啶基、取代哌嗪基、取代嘧啶基或者取代吡啶基。
二、II-A結構舉例
1.當式II-A中R1、R2與氮原子組成取代咔唑基時，式II化合物為咔唑氨基醇類化合物：
式中，
R3和R4選自：氫、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C1-C5烷基；或R3和R4和與它們相連的N原子組成取自下組的雜環(huán)、取代雜環(huán)或取代稠雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、氫化喹啉基、咔唑基、嘌呤基和吲哚基。
2.當式II-A中，R1、R2與氮原子組成取代吲哚基時，式II化合物為吲哚氨基醇類化合物，結構式如下：
R3和R4選自：氫、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C1-C5烷基；或R3和R4和與它們相連的N原子組成取自下組的雜環(huán)、取代雜環(huán)或取代稠雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、氫化喹啉基、咔唑基、嘌呤基和吲哚基。；R5、R6選自：氫、鹵素、羥基、硝基、氨基、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C1-C5烷基。
3.當式II-A中，R1、R2與氮原子組成取代嘌呤環(huán)時，式II化合物為嘌呤氨基醇類化合物，結構式如下：
R3和R4選自：氫、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C1-C5烷基；或R3和R4和與它們相連的N原子組成取自下組的雜環(huán)、取代雜環(huán)或取代稠雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、氫化喹啉基、咔唑基、嘌呤基和吲哚基。R8、R9選自：氫、直鏈或支鏈的C1-C5烷基、鹵代的直鏈或支鏈的C1-C5烷基、芳基、芐基或雜環(huán)基取代的亞甲基；或R8和R9與相連的氮原子組成選自下組的含氮雜環(huán)基：吡咯基、四氫吡咯基、咪唑基、哌啶基、嗎啉基和哌嗪基。
上述化合物至今未見其具有抗血吸蟲和包蟲活性的報道。
本發(fā)明利用上述化合物作為活性成分，單獨或組合使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的用于寄生蟲 病治療的藥物。
在治療寄生蟲病中，用本發(fā)明的化合物，以常規(guī)的制劑工藝，單獨使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。如：注射劑、散劑、丸劑、膠囊劑、片劑、微囊劑、軟膠囊劑、膜劑、栓劑、膏劑、酊劑、沖劑、氣霧劑等各種制劑。
藥理實驗結果表明，本發(fā)明的化合物具有顯著地殺滅血吸蟲和棘球蚴的作用，提示可以用于抗寄生蟲治療。
具體實施方式
實施例1體外殺滅血吸蟲作用效果
實驗材料及實驗方法
血吸蟲的收集：日本血吸蟲尾蚴感染昆明小鼠(SPF級)35d后,用冰冷的亨氏鹽平衡液將寄生于小鼠腸系膜靜脈的日本血吸蟲成蟲沖出體外并置于亨氏鹽平衡液中備用。
血吸蟲的體外培養(yǎng)：用RPMI1640培養(yǎng)基加10％的小牛血清(熱滅活)、青霉素100u/mL、鏈霉素100u/mL和二性霉素2.5μg/mL等為培養(yǎng)液。12孔板培養(yǎng)血吸蟲，每孔容量為4mL，培養(yǎng)合抱雌、雄蟲4對。
給藥方式：藥物以二甲基亞砜配置成一定濃度的藥液，吸取一定體積的藥液加入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿中的藥物濃度為20μg/ml、10μg/ml和5μg/ml。
觀察指標：死亡率100％
實驗結果
化合物1-12在20μg/ml濃度下，體外對日本血吸蟲均有100％的殺滅活性。其中化合物11和化合物12在10μg/ml和5μg/ml的濃度下均有100％的殺滅活性。
表1氨基醇類化合物體外殺滅日本血吸蟲活性
實施例2體外殺滅棘球蚴原頭節(jié)作用效果
實驗材料及實驗方法
棘球蚴原頭節(jié)的采集：在流行區(qū)采集棘球蚴囊，吸取含有原頭節(jié)的囊液，將此囊液傾至容量為50ml的圓底離心管中，自然沉淀10min后，去上清液，隨后用生理鹽水將含原頭節(jié)的沉淀物洗滌5-8次，每次10min。將一定量的含青霉素鈉鹽50萬u/L的生理鹽水加至洗滌完畢的原頭節(jié)中，混懸均勻后吸取10-20μl，在倒置顯微鏡下計數，并觀察原頭節(jié)存活狀況。
棘球蚴原頭節(jié)的體外培養(yǎng)：培養(yǎng)器皿可用24孔板，每孔加培養(yǎng)基1.6ml及待試藥物溶液0.2ml。每孔加入定量原頭節(jié)，然后置于5％CO2、相對濕度為95％的37℃溫箱培養(yǎng)。
給藥方式：藥物以二甲基亞砜配置成一定濃度的藥液，吸取一定體積的藥液加入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿中的藥物濃度為待測定濃度。
觀察指標：給藥后72小時用臺盼藍染液對原頭節(jié)進行染色，死亡的原頭節(jié)會被染成深藍色，計數進行原頭節(jié)活性計算。
原頭節(jié)活性＝活的原頭節(jié)數目/原頭節(jié)總數×100％。
實驗結果：化合物8及化合物13-23均對棘球蚴原頭節(jié)具有一定程度的殺滅作用，在20μg/ml濃度下，原頭節(jié)死亡率結果如表2所示。
實施例3體外對棘球蚴生發(fā)層細胞的抑制效果
實驗材料及實驗方法
繼發(fā)棘球蚴小鼠模型的建立：在流行區(qū)采集棘球蚴囊，取出并用HBSS清洗其中的原頭節(jié)。接種時將原頭節(jié)稀釋至4000只/ml備用。用1ml注射器吸取原頭節(jié)懸液0.5ml(2000只原頭節(jié))，用75％酒精擦涂小鼠皮膚，將原頭節(jié)注入小鼠腹腔內。該模型建立8-10月后可用于后續(xù)實驗。
生發(fā)層細胞的分離：剖檢上述小鼠，取出其體內的棘球蚴囊，用生理鹽水清洗囊3-5次后將其剪碎后加入0.25％胰酶，37℃消化 10-30分鐘，取上清液500rpm離心5分鐘后棄去上清，用1640培養(yǎng)基制備細胞懸液。
給藥方式：藥物以二甲基亞砜配置成一定濃度的藥液，吸取一定體積的藥液加入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿中的藥物濃度為20μg/ml、10μg/ml和5μg/ml。
細胞活性檢測：分別于給藥后72小時后棄去培養(yǎng)基，加入5mg/ml的MTT溶液50μl，置于37℃，2h后加入100μl DMSO，待甲臜全部溶解后用紫外分光光度計測量570nm波長下的吸光度。計算該待測藥物對生發(fā)層細胞活性的抑制率：細胞活性抑制率＝[(對照度吸光度值-調零孔吸光度值)-(藥物組吸光度值-調零孔吸光度值)]/(對照度吸光度值-調零孔吸光度值)×100％。
實驗結果
化合物8及化合物13-23均對棘球蚴生發(fā)層細胞的生長具有一定的抑制作用，在20μg/ml濃度下的抑制率及半數抑制濃度IC50如表2所示。
表2氨基醇類化合物對包蟲的體外活性試驗
*N/A未測及。