本發(fā)明屬于藥物化學領域，具體而言，本發(fā)明涉及具有良好抗EGFRWT高表達腫瘤細胞活性的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物。另外，本發(fā)明還涉及這類化合物的制備方法及其抗EGFRWT高表達的腫瘤細胞A549、A431的活性。
背景技術：
惡性腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，其特點是細胞或變異細胞異常增殖。目前人類因惡性腫瘤引起的死亡占所有疾病死亡率的第二位,僅次于心腦血管疾病。由于現(xiàn)有抗腫瘤藥物存在毒性大、易產(chǎn)生耐藥性等缺點，所以研制靶向性抗腫瘤藥物一直是全球藥業(yè)公司和各國政府重點關注和發(fā)展的領域。
現(xiàn)如今的小分子抗腫瘤藥物，它們的靶點多為表皮生長因子受體(EGFR)、成纖維生長因子(FGFR)或肝細胞生長因子(c-MET)等，而最常見的EGFR，是一種受體酪氨酸激酶，能激活并誘導癌細胞異常增殖、存活和遷移的信號路徑，且存在于各種表皮癌(如皮膚癌、乳腺癌、卵巢癌以及和非小細胞肺癌、頭頸部腫瘤、腸癌、膀胱癌)中。因此，通過抑制EGFR的表達，可降低相關腫瘤細胞的存活率。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物及其制備方法和應用，該6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物對EGFR高表達的癌細胞A549具有較高的抑制活性。
一種6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物，結(jié)構如式(I)所示：
式(I)中，R選自取代或者未取代的芐基、C2～C5烷基、取代或者未取代的苯甲?；?、C1～C6烷?；?；
所述芐基或者苯基上的取代基獨立地選自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、硝基或者鹵素。
作為優(yōu)選，所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物，結(jié)構如式(II)或式(III)所示：
式(II)～(III)中，R1獨立地選自取代或者未取代的芐基、C2～C3烷基；
R2獨立地選自取代或者未取代的苯基、環(huán)己基；
所述芐基或者苯基上的取代基獨立地選自甲基、甲氧基、硝基、F或者Cl，這兩類化合物具有良好抗EGFRWT高表達腫瘤細胞活性。
作為優(yōu)選，所述6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物選自以下具體化合物中的一種：
6-氯-N-(3-氟芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K1)
6-氯-N-(4-甲基芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K2)
6-氯-N-(4-硝基芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K3)
N-芐基-6-氯-苯并[d]噻唑-2-胺(K4)
N-(6-氯-苯并[d]噻唑-2-基)-4-甲氧基苯甲酰胺(K5)
N-(6-氯-苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(K6)
本發(fā)明還提供了一種所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物的前藥、溶劑化物或其可藥用鹽。
在本發(fā)明中，“可藥用鹽”是指化合物與酸形成的符合藥用安全標準且不影響活性化合物發(fā)揮藥效的加成鹽。其中，酸可以是有機酸，也可以是無機酸。常用的酸可以選自氫溴酸、鹽酸、硫酸、亞硫酸、乙酸、草酸、戊酸、油酸、棕櫚酸、甲磺酸、葡萄糖酸、酒石酸、乳糖酸。
本發(fā)明還提供了一種所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物的制備方法，包括：
2-氨基-6-氯苯并噻唑與鹵代烴或者酰氯發(fā)生反應，反應完全后經(jīng)過后處理得到所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物。
本發(fā)明還提供了一種所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤藥物包括活性成分和藥學上可接受的輔料；
所述的活性成分包括所述的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物、前藥、溶劑化物或其可藥用鹽。
作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤藥物的劑型為膠囊、片劑、口服液、注射劑、粉劑、膏劑或外用藥液。
作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤藥物用于預防或者治療肺癌、乳腺癌、腸癌、卵巢癌、腎癌、膀胱癌、口腔癌、喉癌、食道癌或胃癌。作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤藥物用于EGFR依賴性腫瘤，即由ErbB激酶介導而細胞癌化的腫瘤。
作為優(yōu)選，本發(fā)明的抗腫瘤藥物用于抑制EGFRWT高表達腫瘤細胞A431、A549。
作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤藥物用于廣譜性抑制EGFR激酶。
作為優(yōu)選，EGFR激酶是野生型或耐藥突變的EGFR激酶。
同現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
(1)本發(fā)明的6-氯-2-氨基苯并噻唑類衍生物對EGFRWT高表達的腫瘤細胞具有較好的抑制活性。
(2)這兩類衍生物的制備方法簡單，原料廉價易得。
(3)本發(fā)明所述的苯并噻唑類化合物為腫瘤治療提供了新策略和新思路，為抗腫瘤藥物的研發(fā)提供新的方向和思路
具體實施方式
實施例1制備6-氯-N-(3-氟芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K1)：
3.4mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，2mmol的K2CO3作縛酸劑加入到100ml三頸瓶中，再加入6ml的乙腈超聲溶解，用移液槍吸取原料1mmol3-氟芐溴，溶于15ml乙腈中，用恒壓滴定管以1滴/5s的速度滴入三頸瓶中，加熱回流6～7h，反應過程通過TLC監(jiān)測。反應結(jié)束后，將反應液降至室溫，減壓蒸干溶劑。加入8ml水與等體積乙酸乙酯萃取，少量多次反復萃取3次，棄水層，有機層用Na2SO4干燥。干燥后的有機層減壓蒸干，制砂過柱。產(chǎn)物通過柱層析色譜提取，流動相為石油醚：乙酸乙酯＝9：1。產(chǎn)率55％。
熔點：145.6℃。ESI-MS[M+H]+：292.5；
核磁數(shù)據(jù)：1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.545(d，J＝2.1Hz,1H,Ph-H)，7.429(d,J＝8.64Hz,1H,Ph-H),7.246(d,J＝2.16Hz,1H,Ph-H),7.163(d,J＝7.98Hz,2H,Ph-H),7.103(d,J＝6.78Hz,2H,Ph-H),5.149(s,1H,-NH),4.646(s,2H,-CH2)。
實施例2制備6-氯-N-(4-甲基芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K2)
3.4mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，2mmol的K2CO3作縛酸劑加入到100ml三頸瓶中，再加入6ml的乙腈超聲溶解，用移液槍吸取1mmol原料4-甲基芐溴，溶于15ml乙腈中，用恒壓滴定管以1滴/5s的速度滴入三頸瓶中，加熱回流6～7h,反應過程通過TLC監(jiān)測。反應結(jié)束后，將反應液降至室溫，減壓蒸干溶劑。加入8ml水與等體積乙酸乙酯萃取，少量多次反復萃取3次，棄水層，有機層用Na2SO4干燥。干燥后的有機層減壓蒸干，制砂過柱。產(chǎn)物通過柱層析色譜提取，流動相為石油醚：乙酸乙酯＝9：1。產(chǎn)率75％。
熔點：113.5℃。ESI-MS[M+H]+：288.5；
核磁數(shù)據(jù)1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):7.536(d,J＝2.1Hz,1H,Ph-H),7.233(d,J＝2.1Hz,1H,Ph-H),7.174(s,1H,Ph-H),7.061-7.078(m,4H,Ph-H),5.115(s,2H,-CH2),4.577(s,1H,-NH)，2.351(s,3H,-CH3)。
實施例3制備6-氯-N-(4-硝基芐基)苯并[d]噻唑-2-胺(K3)
3.4mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，2mmol的K2CO3作縛酸劑加入到100ml三頸瓶中，再加入6ml的乙腈超聲溶解，稱取1mmol原料4-硝基芐溴溶于15ml乙腈中，用恒壓滴定管以1滴/5s的速度滴入三頸瓶中，加熱回流6～7h,反應過程通過TLC監(jiān)測。應結(jié)束后，將反應液降至室溫，減壓蒸干溶劑。加入8ml水與等體積乙酸乙酯萃取，出現(xiàn)不溶物，抽濾，棄固體，用少量水與乙酸乙酯沖洗固體，再多次反復萃取3次，棄水層，有機層用Na2SO4干燥。干燥后的有機層減壓蒸干，制砂過柱。產(chǎn)物通過柱層析色譜提取，流動相為石油醚：乙酸乙酯＝7：1。產(chǎn)率45％。
熔點:145.7℃。ESI-MS[M+H]+：318.39；
核磁數(shù)據(jù)1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):8.412(d,J＝8.4Hz,1H,Ph-H),8.217(d,J＝8.4Hz,2H,Ph-H),8.199(s,1H,Ph-H),8.144(d,J＝8.4Hz,1H,Ph-H),7.451(d,J＝8.4H,2H,Ph-H),4.850(s,2H,-CH2),3.007((s,1H,N-H)。
實施例4制備N-芐基-6-氯-苯并[d]噻唑-2-胺(K4)
3.4mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，2mmol的K2CO3作縛酸劑加入到100ml三頸瓶中，再加入6ml的乙腈超聲溶解，吸取1mmol 4-硝基芐溴原料液體溶于15ml乙腈中，用恒壓滴定管以1滴/5s的速度滴入三頸瓶中，加熱回流6～7h,反應過程通過TLC監(jiān)測。反應結(jié)束后，將反應液降至室溫，減壓蒸干溶劑。加入8ml水與等體積乙酸乙酯萃取，出現(xiàn)不溶物，抽濾，棄固體，用少量水與乙酸乙酯沖洗固體，再多次反復萃取3次，棄水層，有機層用Na2SO4干燥。干燥后的有機層減壓蒸干，制砂過柱。產(chǎn)物通過柱層析色譜提取，流動相為石油醚：乙酸乙酯＝9：1。產(chǎn)率75％。
熔點：123.5℃；ESI-MS[M+H]+：275.11；
核磁數(shù)據(jù)1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):7.540(d,J＝2.04Hz,1H,Ph-H),7.357-7.395(m,3H,Ph-H),7.305-7.332(m,3H,Ph-H,),7.243(d,J＝2.04Hz,1H,Ph-H),5.161(s,1H,-NH2),.4.613(s,2H,-CH2)。
實施例5制備N-(6-氯-苯并[d]噻唑-2-基)-4-甲氧基苯甲酰胺(K5)
首先取4mmol的4-甲基苯甲酸溶于SOCl2中(重蒸后)，105℃回流3～4h，蒸干溶劑，得淡黃色液體，在低溫下結(jié)晶成黃色固體為4-甲基苯甲酰氯粗品。然后稱取1mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，4mmol的酰氯粗品，1ml的三乙胺作縛酸劑，10ml二氧六環(huán)作溶劑。加熱回流3～4h,反應過程通過TLC監(jiān)測。應結(jié)束后，將反應液降至室溫，加入與酰氯等摩爾比的飽和Na2CO3,攪拌過夜。產(chǎn)物析出，抽濾，烘干，計算產(chǎn)率90％。
熔點:>300℃；ESI-MS[M+H]+：318.33；
核磁數(shù)據(jù)1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):10.081(s,1H,-NHCO),7.947(d,J＝8.3Hz,2H,Ph-H),7.813(s,1H,Ph-H),7.376(d,J＝8.6Hz,1H,Ph-H),7.291(d,J＝8.6Hz,1H,Ph-H),3.862(s,3H,-OCH3).
實施例6制備N-(6-氯-苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(K6)
首先取4mmol的苯甲酸溶于SOCl2中(重蒸后)，105℃回流3～4h，蒸干溶劑，得淡黃色液體，在低溫下結(jié)晶成黃色固體為苯甲酰氯粗品。然后稱取1mmol的2-氨基-6-氯苯并噻唑，4mmol的酰氯粗品，1ml的三乙胺作縛酸劑，10ml二氧六環(huán)作溶劑。加熱回流3～4h,反應過程通過TLC監(jiān)測。應結(jié)束后，將反應液降至室溫，加入與酰氯等摩爾比的飽和Na2CO3,攪拌過夜。產(chǎn)物析出，抽濾，烘干，計算產(chǎn)率90％。
熔點:>300℃；
ESI-MS[M+H]+：289.08；
核磁數(shù)據(jù)1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):1HNMR(600MHz，CDCl3)δ(ppm):11.011(s,1H,-NHCO),7.985(d,J＝7.86Hz,2H,Ph-H),7.819(s,1H,Ph-H),7.610(t,J＝7.1Hz,2H,Ph-H),7.481(d,J＝7.5Hz,2H,Ph-H),7.273(s,1H,Ph-H)
實施例7本發(fā)明的化合物對EGFR高表達的人皮膚鱗癌細胞A431、人非小細胞肺癌細胞A549的增殖抑制作用
具體實施方式：取對數(shù)期生長的細胞A431、A549，臺盼藍計數(shù)，5000個/孔。24h后，換液加藥1μl，每種待測化合物設置5個濃度梯度1mM，500μM，100μM，50μM，10μM，1μM。三個平行復孔，培養(yǎng)箱48h，避光加MTT 20μl，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4h，取出，吸掉液體，加入150μlDMSO，混勻10min。酶標儀測吸光度(λ＝490nm)(或570nm)。通過計算獲得實施例化合物對于A431、A549細胞的IC50值：每個化合物至少兩次獨立實驗。IC50結(jié)果見表1。
表1化合物K1～K6的IC50
實驗結(jié)果表明，化合物K1、K2、K3、K4、K5、K6對EGFR高表達的表皮鱗癌細胞A431、人非小細胞肺癌細胞A549均具有較高的抑制活性。
本發(fā)明不局限于上述最佳實施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其他各種形式的產(chǎn)品，但不論在其細節(jié)上作任何變化，凡是具有與本申請相同或相近似的技術方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。