本發(fā)明涉及藥物制備領(lǐng)域，具體涉及到一種2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物的制備方法及其作為乙酰膽堿酯酶和/或丁酰膽堿酯酶抑制劑的在阿爾茲海默病治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿爾茨海默病是一種常見于老年人中的腦神經(jīng)退行性病變，其具有高發(fā)病率、高死亡率等特點(diǎn)，其死亡率僅次于心血管疾病、癌癥和中風(fēng)，已經(jīng)成為了現(xiàn)代社會(huì)中最具威脅的疾病之一。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，2010年世界上共有3600萬人患有阿爾茨海默病，病預(yù)計(jì)人數(shù)將在2020年升至4230萬人并在2040年達(dá)到8110萬人。

阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)理目前尚不明確，近年來針對(duì)阿爾茨海默病的病因、病理以及相關(guān)的分子生物學(xué)研究，科學(xué)家們從不同角度提出了多種病因假說，其中具有代表性的假說有膽堿能學(xué)說、β淀粉樣蛋白毒性作用、自由基氧化損傷、炎癥病變、腦能量代謝障礙、基因缺陷與突變等。

膽堿能學(xué)說是目前比較令人信服的一種學(xué)說，人腦中的膽堿能系統(tǒng)與人的學(xué)習(xí)、記憶功能密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)患有阿爾茨海默病的病人的腦膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)受到了損害，導(dǎo)致腦內(nèi)乙酰膽堿含量下降，從而造成病人的學(xué)習(xí)、記憶能力受損。

目前臨床上廣泛應(yīng)用的乙酰膽堿酯酶抑制劑有化學(xué)合成藥物如：他克林、多奈哌齊、利凡斯的明，以及天然產(chǎn)物如生物堿加蘭他敏、石杉?jí)A甲等。然而，現(xiàn)有的乙酰膽堿酯酶抑制劑只能提高乙酰膽堿的含量，不能阻止中樞膽堿能神經(jīng)元的進(jìn)行性退化死亡。隨著病情發(fā)展，中樞膽堿能神經(jīng)元發(fā)生進(jìn)行性死亡，乙酰膽堿酯酶抑制劑的藥效也會(huì)逐漸降低，同時(shí)這些藥物還有一些毒副作用。因此，尋找低毒、高效的乙酰膽堿酯酶藥物成為了目前研究的主要方向。

另外，研究表明，當(dāng)阿爾茨海默病病情從輕度到重度期間，乙酰膽堿酯酶的活性僅有正常情況下的10-15％，然而相同情況下丁酰膽堿酯酶的活性則不發(fā)生改變，甚至?xí)兴岣摺Ｔ摻Y(jié)果表明了丁酰膽堿酯酶在膽堿能的傳輸中有著重要的作用。丁酰膽堿酯酶抑制劑表現(xiàn)出的良好的抗阿爾茨海默病的活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具有乙酰膽堿酯酶和/或丁酰膽堿酯酶抑制活性的2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物的制備方法及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的一種2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：

其中，R選自C₈H₁₉N-,C₆H₁₅N-,C₄H₁₁N-,C₄H₉NO-,C₅H₁₂N₂-,C₆H₁₃N-,C₄H₉N-；n代表二溴烷烴的碳鏈長度，其中n＝1,2,3。

本發(fā)明的一種權(quán)利要求1所述的2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物的制備方法，包括如下步驟：

(1)取對(duì)羥基硫代苯甲酰胺3.00-4.00g于圓底燒瓶中，加入45.00-55.00mL無水乙醇及5.00mL含量為80％的3-溴丙酮酸乙酯，75-80℃加熱3-4h；反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，加入100-120mL蒸餾水，析出固體，抽濾，取固體，水洗，真空干燥后得到化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯的淡黃色粉末；

(2)取0.50-1.50g的化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯于圓底燒瓶中，加入0.55-1.66g無水碳酸鉀，然后加入1.13-1.64mL 1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷或1,5-二溴戊烷，6.00-8.00mL二甲基甲酰胺DMF，50-55℃加熱3-4h，反應(yīng)完成后冷卻至室溫，使用乙酸乙酯—水體系萃取，乙酸乙酯層柱層析分離得到化合物2-(4-(3-溴丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯4a、2-(4-(4-溴丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯4b，或2-(4-((5-溴代戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯4c；

(3)取0.30-0.75g的化合物4a、4b或4c，加入與化合物4a、4b或4c摩爾比＝1:6.30的胺類，再加入6.00-8.00mL乙腈溶解，50-55℃加熱3-4h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系水萃取2次，取乙酸乙酯層。乙酸乙酯層用飽和食鹽水萃取一次，向乙酸乙酯層中加入過量無水硫酸鎂，抽濾，濾液柱層析得到目標(biāo)產(chǎn)物5a1-7，5b1-7，5c1-7；即為2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，所述洗脫劑由乙酸乙酯和石油醚組成，所述乙酸乙酯：石油醚的體積比為1：4。

進(jìn)一步地，在步驟(3)中，所述洗脫劑由二氯甲烷和甲醇的組成，所述二氯甲烷和甲醇的體積比為15：1。

進(jìn)一步地，在步驟(3)中，所述的胺類為二正丁胺、二正丙胺、二乙胺、嗎啡啉、N-甲基哌嗪、環(huán)己胺或吡咯烷中的任意一種。

本發(fā)明的一種權(quán)利要求1所述的2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物在制備乙酰膽堿酯酶和/或丁丁酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的一種所述的2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。

有益效果：本發(fā)明合成方法簡(jiǎn)單安全，污染小，能耗低，速度快。使用該方法合成出2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物，后處理方便，收率高，是一種快速高效的合成方法。同時(shí)，合成出的目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)丁酰膽堿酯酶和/或乙酰膽堿酯酶具有較強(qiáng)的抑制作用。對(duì)乙酰膽堿酯酶抑制活性最好的化合物的IC₅₀值達(dá)到2.47μM，對(duì)丁酰膽堿酯酶抑制活性最好的化合物的IC₅₀值達(dá)到0.16μM。因此，此類結(jié)構(gòu)化合物可用于制備抗阿爾茨海默病藥物，在該領(lǐng)域擁有廣闊的前景。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例是本發(fā)明的闡釋和舉例，并不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明所述的合成方法中的步驟(1)所述的原料對(duì)羥基硫代苯甲酰胺與3-溴丙酮酸乙酯均購買自阿拉丁試劑。步驟(2)、(3)所述二溴烷烴，胺類均為分析純，并未經(jīng)過純化處理。合成步驟過程中加熱均在油浴中實(shí)現(xiàn)。

本發(fā)明2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物的鑒定采用核磁共振氫譜、核磁共振碳譜以及高分辨質(zhì)譜：核磁共振氫譜與核磁共振碳譜采用布魯克超導(dǎo)核磁共振儀(AVANCEⅢHD 500MHz)，采用氘代氯仿或氘代DMSO作為溶劑，四甲基硅烷為基準(zhǔn)物質(zhì)；高分辨質(zhì)譜采用安捷倫飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(HPLC1260-6230TOF MASS)。

實(shí)施例1

(1)2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(3)的合成

取對(duì)羥基硫代苯甲酰胺3.93g于圓底燒瓶中，加入50.00mL無水乙醇及5.00mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80％的3-溴丙酮酸乙酯，80℃加熱4h；反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，加100mL蒸餾水，析出固體，抽濾，取固體，水洗，真空干燥后得到化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯的淡黃色粉末,產(chǎn)率為88.56％。¹H NMR(500MHz,DMSO)δ10.11(s,1H),8.44(s,1H),7.85–7.75(m,2H),6.95–6.86(m,2H),4.33(q,J＝7.1Hz,2H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H).

(2)2-(4-(3-溴丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(4a)的合成

取步驟(1)中反應(yīng)所得化合物0.50g于圓底燒瓶中，加入0.55g無水碳酸鉀、1.13mL 1,3-二溴丙烷以及6.00mL二甲基甲酰胺DMF。50℃加熱3h。反應(yīng)完成后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取，乙酸乙酯層進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑—石油醚：乙酸乙酯體積比為4:1。分離后旋蒸得到化合物白色固體，即化合物4a，產(chǎn)率為74.16％。¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),8.02–7.88(m,2H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.17(t,J＝5.8Hz,2H),3.62(t,J＝6.4Hz,2H),2.44–2.27(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).

(3)2-(4-(3-(二丁基氨基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-1)的合成

取步驟(2)中所得產(chǎn)物4a 0.30g于圓底燒瓶中，加入0.86mL二正丁胺，用8.00mL乙腈溶解，50℃加熱3h。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取，取乙酸乙酯層，再用飽和食鹽水萃取一次，乙酸乙酯層中加入過量無水硫酸鎂，抽濾。濾液柱層析法分離純化，洗脫劑—二氯甲烷：甲醇體積比為15:1。分離后得到黃色液體即化合物5a-1，產(chǎn)率59.30％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.07(t,J＝6.3Hz,2H),2.63(t,J＝6.9Hz,2H),2.52–2.38(m,4H),2.00–1.91(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,7H),1.30(dd,J＝14.9,7.4Hz,4H),0.90(t,J＝7.3Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.85,161.57,161.16,147.80,128.50,126.20,125.56,114.76,66.37,61.45,53.89,50.41,29.04,26.86,20.69,14.38,14.07.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₃H₃₄N₂O₃S 419.2363,found 419.2367.

實(shí)施例2

實(shí)施例2與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-(丙基氨基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-2)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為二正丙胺。得到黃色液體即化合物5a-2，產(chǎn)率84.34％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.09(t,J＝6.1Hz,2H),2.79(s,2H),2.56(d,J＝6.8Hz,4H),2.14–2.00(m,2H),1.58(dd,J＝15.0,7.4Hz,4H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),0.91(t,J＝7.4Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.74,161.55,160.91,147.82,128.54,126.27,125.76,114.73,66.06,61.45,55.67,53.44,50.46,19.24,14.38,11.75.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₃₀N₂O₃S 391.2050,found 391.2053.

實(shí)施例3

實(shí)施例3與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-(二甲基氨基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-3)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為二乙胺。得到淡黃色粉末，即化合物5a-3，產(chǎn)率90.27％。m.p.64-66℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),6.95(d,J＝8.3Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.09(t,J＝5.9Hz,2H),2.80–2.75(m,2H),2.71(dd,J＝13.3,6.4Hz,4H),2.13–2.01(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.14(t,J＝7.0Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.74,161.55,160.91,147.82,128.53,126.26,125.76,114.75,66.17,61.46,49.26,46.91,26.16,14.38,10.93.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₁₉H₂₆N₂O₃S 363.1737,found 363.1740.

實(shí)施例4

實(shí)施例4與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-嗎啉代丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-4)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為嗎啡啉。得到黃色固體即化合物5a-4，產(chǎn)率為51.68％。m.p.85-87℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.08(t,J＝6.3Hz,2H),3.90–3.63(m,4H),2.55(t,J＝7.3Hz,2H),2.49(s,4H),2.14–1.92(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.76,161.54,161.05,147.81,128.51,126.24,125.66,114.76,66.95,66.27,61.45,55.45,53.74,26.32,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₁₉H₂₄N₂O₄S 377.1530,found 377.1531.

實(shí)施例5

實(shí)施例5與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-5)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為N-甲基哌嗪。得到棕色固體即化合物5a-5，產(chǎn)率為49.59％。m.p.64-65℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.07(t,J＝6.3Hz,2H),2.53(dd,J＝32.8,25.3Hz,8H),2.32(s,4H),2.05–1.91(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.79,161.56,161.09,147.81,128.50,126.23,125.64,114.78,66.39,61.45,55.01,53.44,53.01,45.90,26.64,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₀H₂₇N₃O₃S 390.1846,found 390.1847.

實(shí)施例6

實(shí)施例6與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-(環(huán)己基氨基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-6)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為環(huán)己胺。得到黃色固體即為化合物5a-6，產(chǎn)率為91.19％。m.p.113-115℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.93(d,J＝8.8Hz,2H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.09(t,J＝6.0Hz,2H),2.98(t,J＝7.3Hz,2H),2.68(d,J＝3.6Hz,1H),2.18–2.11(m,2H),2.03(d,J＝8.4Hz,2H),1.97(s,2H),1.86–1.71(m,2H),1.64(d,J＝12.0Hz,1H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.28(d,J＝8.6Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.79,161.56,161.06,147.80,128.51,126.23,125.65,114.76,66.62,61.45,56.91,43.79,33.50,29.97,26.12,25.07,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₂₈N₂O₃S 389.1893,found 389.1894.

實(shí)施例7

實(shí)施例7與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5a-7)的合成

制備方法同實(shí)施例1，其中胺類換為環(huán)己胺。得到淡黃色粉末即為化合物5a-7，產(chǎn)率66.55％。m.p.78-80℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(d,J＝7.1Hz,2H),4.09(t,J＝6.4Hz,2H),2.67(t,J＝7.4Hz,2H),2.58(s,4H),2.10–2.02(m,2H),1.86–1.79(m,4H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.81,161.56,161.07,147.80,128.49,126.22,125.62,114.77,66.50,61.45,54.24,53.07,28.58,23.46,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₁₉H₂₄N₂O₃S 361.1580,found 361.1578.

實(shí)施例8

實(shí)施例8與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(1)取對(duì)羥基硫代苯甲酰胺3.00g于圓底燒瓶中，加入45.00mL無水乙醇及5.00mL含量為80％的3-溴丙酮酸乙酯，75℃加熱3.5h；反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，加入110mL蒸餾水，析出固體，抽濾，取固體，水洗，真空干燥后得到化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯的淡黃色粉末；

(2)2-(4-(4-溴丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(4b)的合成

反應(yīng)所得化合物1.50g于圓底燒瓶中，加入1.66g無水碳酸鉀、1.44mL 1,4-二溴丁烷以及7.00mL二甲基甲酰胺DMF。55℃加熱4h。反應(yīng)完成后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取，乙酸乙酯層進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑—石油醚：乙酸乙酯體積比為15:1，分離后旋蒸得到化合物白色固體，即為化合物4b，產(chǎn)率為63.05％。¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.7Hz,2H),6.94(d,J＝8.7Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.05(t,J＝6.0Hz,2H),3.50(t,J＝6.6Hz,2H),2.13–2.03(m,2H),2.03–1.90(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).

(3)2-(4-(4-(二丁基氨基)丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-1)的合成

取化合物4b 0.30g于圓底燒瓶中，加入0.82mL二正丁胺，使用7.00mL乙腈溶解，55℃加熱4h。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取，取乙酸乙酯層，再用飽和食鹽水萃取一次，乙酸乙酯層中加入過量無水硫酸鎂，抽濾。濾液柱層析分離純化，洗脫劑—二氯甲烷：甲醇體積比＝15:1，得到無色液體即化合物5b-1。產(chǎn)率為53.63％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.94(d,J＝8.3Hz,2H),6.95(d,J＝8.3Hz,2H),4.44(q,J＝7.0Hz,2H),4.03(t,J＝6.1Hz,2H),2.54–2.38(m,6H),1.86–1.78(m,2H),1.64(d,J＝6.7Hz,2H),1.43(t,J＝6.7Hz,6H),1.30(dd,J＝14.6,7.3Hz,5H),0.91(t,J＝7.2Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.8,161.57,161.18,147.80,128.50,126.20,125.54,114.76,68.05,61.45,53.75,53.68,29.70,27.20,23.48,20.75,14.38,14.10.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₄H₃₆N₂O₃S 433.2519,found 433.2523.

實(shí)施例9

實(shí)施例9與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(4-(二丙基氨基)丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-2)的合成

制備方法同實(shí)施8，其中胺類換為二正丙胺。得到黃色液體即為化合物5b-2，產(chǎn)率為85.27％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),6.94(d,J＝8.4Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),2.53(t,J＝7.0Hz,2H),2.46–2.38(m,4H),1.86–1.78(m,2H),1.70–1.61(m,2H),1.49(dd,J＝14.9,7.4Hz,3H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),0.89(t,J＝7.3Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.83,161.57,161.16,147.80,128.51,126.21,125.56,114.76,68.02,61.45,56.02,53.71,27.16,23.43,19.97,14.38,11.94.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₂H₃₂N₂O₃S 405.2206,found 405.2203.

實(shí)施例10

實(shí)施例10與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(4-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-3)的合成

制備方法同實(shí)施例8，其中胺類換為二乙胺。得到透明液體即為化合物5b-3，產(chǎn)率為83.38％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.3Hz,2H),6.94(d,J＝8.3Hz,2H),4.44(q,J＝7.0Hz,2H),4.04(t,J＝6.1Hz,2H),2.64(dd,J＝14.1,7.0Hz,4H),2.61–2.56(m,2H),1.87–1.79(m,2H),1.75–1.66(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.09(t,J＝7.1Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.80,161.56,161.07,147.80,128.52,126.23,125.62,114.76,67.87,61.45,52.29,46.75,27.16,23.07,14.38,11.18.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₀H₂₈N₂O₃S 377.1893,found 377.1898.

實(shí)施例11

實(shí)施例11與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(4-嗎啉代丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-4)的合成

制備方法同實(shí)施例8，其中胺類換為嗎啡啉。得到淡黃色固體即為化合物5b-4，產(chǎn)率為48.90％。m.p.44-46℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.73(t,J＝4.6Hz,4H),2.47(s,3H),2.44–2.40(m,2H),1.92–1.78(m,2H),1.77–1.64(m,3H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.25(s,1H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.78,161.56,161.08,147.81,128.51,126.22,125.61,114.73,67.84,66.95,61.45,58.57,53.70,27.10,23.03,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₀H₂₆N₂O₄S 391.1686,found 391.1684.

實(shí)施例12

實(shí)施例12與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-5)的合成

制備方法同實(shí)施例8，其中胺類換為N-甲基哌嗪。得到淡黃色固體即為化合物5b-5，產(chǎn)率64.09％。m.p.37-39℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),2.69–2.39(m,9H),2.33(s,4H),1.91–1.77(m,2H),1.76–1.65(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.82,161.57,161.10,147.80,128.51 126.23,125.59,114.75,67.87,61.46,58.07,54.93,52.90,45.86,27.17,23.33,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₂₉N₃O₃S 404.2002,found 404.2003.

實(shí)施例13

實(shí)施例13與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

2-(4-(4-(環(huán)己基氨基)丁氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-6)的合成

制備方法同實(shí)施例8，其中胺類換為環(huán)己胺。得到白色固體即為化合物5b-6，產(chǎn)率為91.11％。m.p.71-73℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.97–7.91(m,2H),6.96–6.91(m,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),2.71(t,J＝7.3Hz,2H),2.44(tt,J＝10.5,3.7Hz,1H),1.96–1.79(m,4H),1.76–1.70(m,2H),1.70–1.65(m,2H),1.65–1.59(m,1H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.31–1.02(m,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.83,161.57,161.11,147.80,128.51,126.22,125.58,114.76,67.95,61.46,56.89,53.44,46.52,33.51,27.10,26.13,25.09,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₂H₃₀N₂O₃S 403.2050,found 403.2052.

實(shí)施例14

實(shí)施例14與實(shí)施例8的區(qū)別在于：

(3)2-(4-(4-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5b-7)的合成

制備方法同實(shí)施例8，其中胺類換為吡咯烷。得到淡黃色粉末即為化合物5b-7，產(chǎn)率為67.87％。m.p.64-66℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.93(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),2.62–2.51(m,6H),1.85(d,J＝8.1Hz,2H),1.84–1.79(m,4H),1.78–1.71(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.31–1.19(m,1H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.82,161.57,161.11,147.80,128.50,126.22,125.58,114.75,67.86,61.44,56.05,54.15,27.24,25.30,23.42,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₀H₂₆N₂O₃S 375.1737,found 375.1740.

實(shí)施例15

實(shí)施例15與實(shí)施例1的區(qū)別在于：

(1)取對(duì)羥基硫代苯甲酰胺4.00g于圓底燒瓶中，加入55.00mL無水乙醇及5.00mL含量為80％的3-溴丙酮酸乙酯，70℃加熱3h；反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，加入120mL蒸餾水，析出固體，抽濾，取固體，水洗，真空干燥后得到化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯的淡黃色粉末；

(2)2-(4-((5-溴戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(4c)的合成

取1.00g的化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯于圓底燒瓶中，加入1.25g無水碳酸鉀，加入1.64mL 1,5-二溴戊烷，加入8mL二甲基甲酰胺DMF，53℃加熱3.5h。反應(yīng)完成后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取，乙酸乙酯層柱層析分離。洗脫劑—石油醚：乙酸乙酯體積比＝4:1。分離后旋蒸得到白色固體，即化合物4c，產(chǎn)率為86.73％。¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.08(s,1H),7.98–7.86(m,2H),7.00–6.87(m,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.45(t,J＝6.7Hz,2H),2.02–1.90(m,2H),1.88–1.81(m,2H),1.69–1.60(m,4H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).

(3)2-(4-((5-(二乙基氨基)戊氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-1)的合成

取化合物4c 0.75g于干凈的圓底燒瓶中，加入0.80mL二正丁胺，使用6.00mL乙腈溶解，53℃加熱3.5h。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，用乙酸乙酯—水體系萃取兩次，取乙酸乙酯層，再用飽和食鹽水萃取一次，乙酸乙酯層中加入過量無水硫酸鎂，抽濾。濾液柱層析分離純化，洗脫劑—二氯甲烷：甲醇體積比＝15:1，得到黃色液體即為化合物5c-1，產(chǎn)率為51.96％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.05–2.93(m,6H),1.93–1.85(m,4H),1.78–1.73(m,4H),1.63–1.54(m,2H),1.41(dt,J＝21.8,7.3Hz,7H),0.97(t,J＝7.4Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.70,161.54,160.89,147.82,128.56,126.29,125.80,114.72,67.48,61.47,52.7052.35,28.61,25.30,23.60(d,J＝18.1Hz),20.19,14.38,13.60.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₅H₃₈N₂O₃S 447.2676,found 447.2676.

實(shí)施例16

實(shí)施例16與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-(二丙基氨基)戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-2)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成二正丙胺，得到黃色液體即為化合物5c-2。產(chǎn)率為66.47％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.02(t,J＝6.3Hz,2H),2.79–2.57(m,6H),1.89–1.79(m,2H),1.76–1.59(m,6H),1.58–1.45(m,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),0.94(t,J＝7.4Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.79,161.56,161.05,147.79,128.53,126.26,125.65,114.75,67.80,61.46,55.15,53.38(d,J＝16.8Hz),28.88,23.86,18.52,14.38,11.64.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₃H₃₄N₂O₃S 419.2363,found 419.2363.

實(shí)施例17

實(shí)施例17與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-(二乙基氨基)戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-3)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成二乙胺，得到黃色液體即為化合物5c-3。產(chǎn)率為87.74％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.93(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.01(t,J＝6.5Hz,2H),2.55(q,J＝7.2Hz,4H),2.50–2.40(m,2H),1.89–1.79(m,2H),1.58–1.45(m,4H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.04(t,J＝7.2Hz,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.84,161.56,161.19,147.78,128.49,126.21,125.52,114.75,68.07,61.44,52.76,46.85,29.14,26.73,24.15,14.38,11.54.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₃₀N₂O₃S 391.2050,found 391.2051.

實(shí)施例18

實(shí)施例18與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-嗎啉代戊氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-4)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成嗎啡啉，得到淡黃色固體即為化合物5c-4。產(chǎn)率為59.76％。m.p.77-79℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.73(t,J＝4.6Hz,4H),2.46(s,4H),2.41–2.35(m,2H),1.87–1.80(m,2H),1.62–1.55(m,2H),1.52(d,J＝7.0Hz,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.82,161.58,161.15,147.82,128.52,126.22,125.59,114.73,67.95,66.95,61.46,58.94,53.77,29.07,26.25,23.97,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₂₈N₂O₄S 405.1843,found 405.1843.

實(shí)施例19

實(shí)施例19與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-5)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成N-甲基哌嗪，得到淡黃色粉末即為化合物5c-5。產(chǎn)率為76.63％。m.p.77-79℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.73(t,J＝4.6Hz,4H),2.47(s,3H),2.44–2.40(m,2H),1.92–1.78(m,2H),1.77–1.64(m,3H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.25(s,1H).¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.81,161.56,161.14,147.80,128.50,126.21,125.56,114.72,67.94,61.44,58.42,54.91,53.01,45.89,29.05,26.50,24.01,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₂H₃₁N₃O₃S 418.2159,found 418.2163.

實(shí)施例20

實(shí)施例20與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-(環(huán)己胺)戊氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-6)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成環(huán)己胺，得到白色粉末即為化合物5c-6。產(chǎn)率為64.05％。m.p.152-154℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.08(s,1H),7.93(d,J＝8.3Hz,2H),6.94(d,J＝8.3Hz,2H),4.44(q,J＝7.0Hz,2H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),2.66(t,J＝6.7Hz,2H),2.43(t,J＝10.2Hz,1H),1.89(d,J＝11.8Hz,2H),1.85–1.80(m,2H),1.73(d,J＝12.4Hz,3H),1.57(ddd,J＝23.5,18.0,9.9Hz,5H),1.43(t,J＝7.0Hz,3H),1.32–1.02(m,6H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.84,161.57,161.17,147.79,128.50,126.20,125.54,114.74,67.99,61.44,56.95,46.79,33.54,30.13,29.08,26.15,25.11,23.92,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₃H₃₂N₂O₃S 417.2206,found 417.2208.

實(shí)施例21

實(shí)施例21與實(shí)施例15的區(qū)別在于：

(3)2-(4-((5-(吡咯烷-1-基)戊基)氧基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(5c-7)的合成

制備方法同實(shí)施例15，其中胺類換成吡咯烷，得到黃色粉末即為化合物5c-7。產(chǎn)率為76.25％。m.p.62-64℃.；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),7.96–7.91(m,2H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),4.44(q,J＝7.1Hz,2H),4.02(t,J＝6.3Hz,2H),2.89(s,3H),2.82–2.70(m,2H),1.97(s,4H),1.88–1.83(m,2H),1.80(dd,J＝13.2,5.0Hz,2H),1.56(dd,J＝15.4,7.9Hz,2H),1.43(t,J＝7.1Hz,3H),1.25(s,2H),0.92–0.74(m,1H).；¹³C NMR(126MHz,CDCl₃)δ168.78,161.55,161.04,147.80,128.52,126.25,125.64,114.73,67.71,61.45,55.96,53.92,28.83,27.12,23.86,23.39,14.38.HRMS:(ESI,m/z):[M+H]⁺calcd for C₂₁H₂₈N₂O₃S 389.1893,found 389.1892.

試驗(yàn)1

2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的抑制活性。

利用Ellman法，采用碘化乙酰膽堿(ATCI)或S-丁酰基硫代膽堿碘化物(BTCI)為底物，二硫硝基苯甲酸(DNTB)為顯色劑，pH8.0的磷酸緩沖溶液，在96孔板上進(jìn)行樣品對(duì)乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶抑制活性。來自電鰻的乙酰膽堿酯酶和來自馬血清的的丁酰膽堿酯酶分別溶于0.1M的磷酸緩沖液中配成0.35U/mL的酶溶液?；衔锶芙庠诩状贾?，用0.1M的磷酸緩沖液配制成相應(yīng)的濃度梯度(測(cè)試體系中甲醇的終濃度小于5％)。在測(cè)試中，空白對(duì)照反應(yīng)體系中加入：20μL酶液、20μL濃度為3.33mM顯色劑(DTNB)、140μL磷酸緩沖液，待測(cè)實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)體系中加入：20μL酶液、20μL顯色劑(DTNB)、130μL磷酸緩沖液、10μL樣品液。臨測(cè)前加入20μL濃度為5.30mM底物液(ATCI或BTCI)。搖晃混勻置于酶標(biāo)儀中，在波長412nm的可見光下，每隔30s記錄反應(yīng)液的A₄₁₂nm值，循環(huán)11次，持續(xù)5.5min。

用以下公式計(jì)算酶的抑制活性：

抑制率(％)＝(1-A/B)×100％

其中A為樣品的吸光度變化值，B為空白組的吸光度變化值。測(cè)定5個(gè)濃度的樣品，繪制劑量-抑制率曲線，計(jì)算IC₅₀。每個(gè)樣品測(cè)試三次。他克林作為陽性對(duì)照。

計(jì)算測(cè)得合成的目標(biāo)化合物2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶的抑制作用，具體數(shù)據(jù)如下表1所示：

表1

由表1所示，其中，乙酰膽堿酯酶抑制活性最佳為IC₅₀＝2.47±0.11μM，丁酰膽堿酯酶抑制活性最佳為IC₅₀＝0.16±0.08μM。

綜上所述，本發(fā)明采用了操作簡(jiǎn)單安全，使用范圍廣的方法合成出2-(4-羥基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯衍生物，此方法后處理方便，收率高，是一種快速高效的合成方法。同時(shí)合成出的目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)丁酰膽堿酯酶和/或乙酰膽堿酯酶具有強(qiáng)的抑制作用。因此此類結(jié)構(gòu)化合物可用于制備抗阿爾茨海默病藥物，在該領(lǐng)域擁有廣闊的前景。

本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。