本發(fā)明涉及內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜(docetaxel)單糖苷的脂質體的制造方法。

背景技術：
作為抗癌劑大量存在具有抑制細胞的增殖失控的癌細胞的分裂的機制的物質。由于這樣的抗癌劑顯示非常有效的抗癌作用，所以可有效地使用，但由于對正常的細胞也顯示細胞增殖抑制作用，所以副作用多，使用時經常成為阻礙。因此，對于抗癌劑，需要對正常的細胞不起作用而對癌細胞特異性送達藥劑的DDS技術。為了這樣降低副作用，將各種抗癌劑與DDS技術進行組合而得到了發(fā)展。這樣的DDS技術中可優(yōu)選使用利用由脂質雙層膜構成的脂質體的技術。例如，已開發(fā)使用這樣的脂質體和奧沙利鉑、順氯氨鉑或者卡鉑等鉑配合物系抗癌劑的技術(專利文獻1)。另外，使用主動載藥法導入這樣的抗癌劑時，僅限于具有弱堿性的抗癌劑，作為用于消除該問題的方法，雖然開發(fā)了利用溶解度梯度的主動載藥法，但該方法的適用僅限于水溶性高的藥劑，其導入效率也非常低(專利文獻2)。另一方面，適用于乳癌、子宮頸癌等的紫杉醇、紫杉萜等幾乎不溶于水，因此使其在醇等溶劑中進行溶解而經時制備后給藥，但這樣的話存在耗費時間，且伴有危險這方面的問題。出于提高這樣的紫杉醇、紫杉萜等的對水的溶解度的目的，制作有各種紫杉醇衍生物，例如，非專利文獻1所示，開發(fā)有向紫杉醇加成葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖等單糖的技術。然而，即使是這樣的紫杉醇單糖苷、紫杉萜單糖苷等紫杉醇衍生物，也得不到充分的水溶性，關于組合這些衍生物和脂質體的DDS制劑，還沒有任何報道。先行技術文獻專利文獻專利文獻1：國際專利公報WO2008/072584號專利文獻2：日本特開2009-132629號廣報非專利文獻非專利文獻1：Biol.Pharm.Bull.2008Jun；31(6)：1155-8

技術實現要素：
為了降低具有優(yōu)異的抗癌作用的紫杉醇衍生物的副作用，嘗試制造內包紫杉醇單糖苷、紫杉萜單糖苷等紫杉醇衍生物的脂質體，但存在紫杉醇衍生物等向脂質體內的導入效率差，達不到實用等級這種問題。為了解決上述課題，本申請發(fā)明人反復進行深入研究，結果發(fā)現為了在脂質體中高效地導入紫杉醇單糖苷、紫杉萜單糖苷等紫杉醇衍生物，在特定比例的溶劑成分的存在下混合紫杉醇衍生物和脂質體的脂質即可。另外，還發(fā)現通過預先在脂質體內含有溶解紫杉醇衍生物的混合溶劑，能夠在脂質體內高效率內包紫杉醇單糖苷、紫杉萜單糖苷等。而且，發(fā)現通過這樣的方法得到的內包紫杉醇、紫杉萜單糖苷等的脂質體可作為DDS發(fā)揮優(yōu)異的效果。本發(fā)明基于上述見解而完成，包括下述方式。項1一種內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體的制造方法，其特征在于，包括對含有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷、聚氧乙烯酯衍生物、低級醇、構成脂質體的脂質以及緩沖液或水的混合物實施脂質體形成處理的工序，該紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷相對于混合物的總容量，含有1500以上且小于3000重量％，相對于該緩沖液或水1容量份，含有0.1～0.2容量份該聚氧乙烯酯衍生物，含有0.1～0.2容量份該低級醇，相對于構成該脂質體的總脂質1重量份，內包0.1～2.5重量份的上述紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷。項2根據上述項1記載的制造方法，脂質體形成處理是利用薄膜靜置水和法、凍結干燥法、液滴法、AC法、超聲波法、逆相蒸發(fā)法、脂質溶解法、噴霧干燥法、CO2/H2O乳液的制法或者采用微通道的制法中的任一種。項3根據上述項1或2記載的制造方法，糖苷是選自葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、木糖苷、果糖苷、鼠李糖苷、阿糖胞苷、阿洛糖苷、阿卓糖苷、艾杜糖苷、N-乙酰氨基葡糖苷、N-乙酰氨基半乳糖苷、塔羅糖苷(taloside)、葡萄糖醛酸苷、氨基葡糖苷、氨基半乳糖苷以及巖藻糖苷中的1種糖苷。項4根據上述項1～3中任一項記載的制造方法，紫杉醇單糖苷為7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇。項5根據上述項1～4中任一項記載的制造方法，聚氧乙烯酯衍生物為聚氧乙烯蓖麻油酯。項6根據上述項1～5中任一項記載的制造方法，聚氧乙烯蓖麻油酯為Cremophor(注冊商標)EL。項7一種脂質體制劑，內包有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液且具有特異性識別癌細胞的抗體。項8根據上述項7記載的脂質體制劑，紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液是在含有聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的混合溶劑中溶解該紫杉醇和/或紫杉萜單糖苷的溶解液。項9根據上述項7或8記載的脂質體制劑，糖苷是選自葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、木糖苷、果糖苷、鼠李糖苷、阿糖胞苷、阿洛糖苷、阿卓糖苷、艾杜糖苷、N-乙酰氨基葡糖苷、N-乙酰氨基半乳糖苷、塔羅糖苷、葡萄糖醛酸苷、氨基葡糖苷、氨基半乳糖苷以及巖藻糖苷中的1種糖苷。項10根據上述項7～9中任一項記載的脂質體制劑，紫杉醇單糖苷為7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇。項11根據上述項7～10中任一項記載的脂質體制劑，聚氧乙烯酯衍生物為聚氧乙烯蓖麻油酯。項12根據上述項7～11中任一項記載的脂質體制劑，聚氧乙烯蓖麻油酯為Cremophor(注冊商標)EL。項13根據上述項7～12中任一項記載的脂質體制劑，脂質體分別以3：0.5～3的物質量比含有DPPC和膽固醇。項14根據上述項7～15中任一項記載的脂質體制劑，相對于脂質體的總脂質的1摩爾量的紫杉醇單糖苷摩爾量為1.0～15.5×10-2。項17根據上述項7～16中任一項記載的脂質體制劑，癌細胞為乳癌細胞。項18根據上述項7～17中任一項記載的脂質體制劑，抗體是與HER2蛋白質特異性結合的抗體。此外，本發(fā)明還包括以下示出的方式的發(fā)明。項I一種內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷且具有特異性識別癌細胞的抗體的脂質體的制造方法，包括使內包聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的脂質體與在含有烷撐二醇的緩沖液或水中溶解了紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶液接觸的工序。項II根據上述項I記載的制造方法，溶解了紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶液是溶解于含有烷撐二醇的緩沖液或水中的溶液。項III根據上述項I或II記載的制造方法，糖苷是選自葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、木糖苷、果糖苷、鼠李糖苷、阿糖胞苷、阿洛糖苷、阿卓糖苷、艾杜糖苷、N-乙酰氨基葡糖苷、N-乙酰氨基半乳糖苷、塔羅糖苷、葡萄糖醛酸苷、氨基葡糖苷、氨基半乳糖苷以及巖藻糖苷中的1種糖苷。項IV根據上述項I～III中任一項記載的制造方法，紫杉醇單糖苷為7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇。項V根據上述項I～IV中任一項記載的制造方法，聚氧乙烯酯衍生物為聚氧乙烯蓖麻油酯。項VI根據上述項I～V中任一項記載的制造方法，聚氧乙烯蓖麻油酯為Cremophor(注冊商標)EL。項VII根據上述項I～VI中任一項記載的制造方法，脂質體分別以3：0.5～3的物質量比含有DPPC和膽固醇。項VIII根據上述項I～VII中任一項記載的制造方法，接觸時間為5～60分鐘。項IX根據上述項I～VIII中任一項記載的制造方法，癌細胞為乳癌細胞。項X根據上述項I～IX中任一項記載的制造方法，抗體為與HER2蛋白質特異性結合的抗體。根據本發(fā)明的制造方法，能夠高效地使紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷內包在脂質體中。另外，通過本發(fā)明的方法得到的內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體，能夠與特異性識別癌細胞的抗體結合，結合了這樣的抗體的通過本發(fā)明的制造方法得到的脂質體，作為DDS，非常有用。附圖說明圖1是試驗例4的急性毒性試驗結果。圖的縱軸表示生存比例、橫軸表示給藥次數。圖2是表示通過試驗例5的本發(fā)明的制造方法得到的內包紫杉醇單糖苷且擔載有識別乳癌細胞的抗體的脂質體的向乳癌細胞的積聚的熒光照片。圖中的棒表示10μm。圖3是試驗例8的急性毒性試驗結果。圖的縱軸表示生存比例、橫軸表示給藥后的天數。圖4是試驗例8的急性毒性試驗結果。圖的縱軸表示體重、橫軸表示給藥后的天數。圖5是試驗例10的體內輸送實驗結果。左圖是表示將內包由Cy5.5標識化的HAS且具有抗體的脂質體尾靜脈注射到小鼠后的積聚位置和其積聚程度，圖右是表示將內包由Cy5.5標識化的HAS且不具有抗體的脂質體尾靜脈注射到小鼠后的積聚位置和其積聚程度。圖中的棒箭頭表示腫瘤，三角表示肝臟。圖6是將圖5所示的成像效果坐標化的圖。(A)是腫瘤組織的結果、(B)是肝臟的結果、(C)是將相對于肝臟的在腫瘤組織的積聚度以比例的形式數值化的結果。應予說明，對于數值化而言，根據閾值選擇腫瘤和肝臟部位，測定總熒光強，具體而言，使用DigitalMicroscopySoftwareSlideBook4.2(株式會社NipponRoper)。圖7是試驗例11的體內抗癌活性實驗結果。圖的縱軸表示腫瘤體積，橫軸表示給藥后的天數。圖8是試驗例11的體內抗癌活性實驗結果。圖的縱軸表示體重，橫軸表示給藥后的天數。圖9是試驗例11的體內抗癌活性實驗結果。圖的縱軸表示生存率，橫軸表示給藥后的天數。圖10是試驗例11的小鼠的照片。圖中的箭頭表示腫瘤。具體實施方式＜脂質體的制造方法＞作為本發(fā)明的脂質體的制造方法的一個方式(以后，有時稱為“第1方式的制造方法”)的內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體的制造方法，包括對含有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷、聚氧乙烯衍生物、低級醇、構成脂質體的脂質以及緩沖液或水的混合物實施脂質體形成處理的工序。這里，也可以是以下方法，即，預先制備含有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷和聚氧乙烯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的溶液，將其與構成脂質體的脂質混合，接著供于脂質體形成處理的方法。作為其它方式，也可以是制備含有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷和聚氧乙烯衍生物以及低級醇的溶液，之后與含有構成脂質體的脂質和緩沖液或水的混合物混合，接著供于脂質體形成處理。即，無論混合紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷和脂質的順序如何，紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷相對于紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷、聚氧乙烯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的總容量的使用量為1500以上且小于3000重量％左右。優(yōu)選為1700以上且小于2500重量％以下左右，更優(yōu)選為1800～2200重量％左右。聚氧乙烯衍生物的使用量相對于緩沖液或水1容量份為0.1～0.2容量份左右，優(yōu)選為0.12～0.19容量份左右，更優(yōu)選為0.13～0.18容量份左右。低級乙醇的使用量相對于緩沖液或水1容量份為0.1～0.2容量份左右，優(yōu)選為0.12～0.19容量份左右，更優(yōu)選為0.13～0.18容量份左右。應予說明，本說明書中使用的用語“容量份”是指，在常壓和室溫環(huán)境下測定得到的數值。聚氧乙烯酯衍生物沒有特別限定，例如，可舉出聚氧乙烯烷基醚硫酸鈉、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯烷基苯基醚磷酸、聚(氧化乙烯·氧化丙烯)甲基聚硅氧烷共聚物、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚氧乙烯硬脂基醚、聚氧乙烯硬脂酸酰胺、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙二醇、聚氧乙烯蓖麻油酯等。其中，優(yōu)選為聚氧乙烯蓖麻油酯，更優(yōu)選為聚氧化烯(C24)蓖麻油脂肪酸酯(Cremophor(注冊商標)EL)。低級醇沒有特別限定，通常為碳原子數1～4的醇即可。緩沖液沒有特別限定，例如可舉出PBS、MES、ADA、PIPES、ACES、乙醇胺鹽酸、BES、TES、HEPES、檸檬酸、硼酸、酒石酸。作為脂質體的構成成分，可舉出磷脂質、膽固醇類、脂肪酸等。具體而言，作為磷脂質，可舉出磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、心磷脂、鞘磷脂、蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、溶血卵磷脂、利用常法將它們加氫而成的磷脂質等天然磷脂質；二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(DPPC)、二棕櫚?；字Ｒ掖及?DPPE)、二硫代吡啶-二棕櫚?；字Ｒ掖及?DTP-DPPE)、二棕櫚?；字８视?DPPG)、二棕櫚?；字＝z氨酸(DPPS)、桐酰磷脂酰膽堿、桐酰磷脂酰乙醇胺、桐酰磷脂酰絲氨酸等合成磷脂質等。上述磷脂質、膽固醇類、以及脂肪酸可以各自進行適當地修飾。具體的修飾沒有特別的限定，例如可舉出利用聚乙二醇、聚丙二醇等之類的聚烷撐二醇等進行的修飾。這些磷脂質可以適當地組合使用。作為膽固醇類，例如可舉出膽固醇、植物甾醇等。另外，作為脂肪酸，例如可舉出油酸、棕櫚油酸、亞油酸、或含有這些不飽和脂肪酸的脂肪酸混合物等。其中，含有側鏈小的不飽和脂肪酸的脂質體因曲率的關系對制作粒徑小的脂質體有效。通過本發(fā)明的第1方式的制造方法得到的脂質體在脂質體內包有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷。本說明書中使用的用語“內包”，可以是在脂質體內部完全包含紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷，而在構成脂質體的脂質雙層膜中紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷分子貫通的狀態(tài)也是“內包”的意思。另外，本說明書中，有時也使用與“內包”同義的“內封”的用詞。通過本發(fā)明的第1方式的制造方法得到的脂質體相對于總脂質1重量份內包0.1～2.5重量份左右的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷。更優(yōu)選為1.3～2.4重量份，更優(yōu)選為1.6～2.3重量份左右。紫杉醇單糖苷和紫杉萜單糖苷，分別是紫杉醇和紫杉萜加成單糖而得的物質。例如，對紫杉醇而言，加成單糖的位置沒有特別限定，例如可在紫杉醇所具有的紫杉烷環(huán)的10位或7位加成單糖。已知在自然界存在紫杉醇7位的糖衍生物，根據結合的穩(wěn)定性的觀點，優(yōu)選在7位加成。另外，對于紫杉萜而言，加成單糖的位置沒有特別限定，例如在紫杉萜所具有的紫杉烷環(huán)的10位或7位加成單糖。具體的單糖沒有特別限定，例如，可舉出葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、艾杜糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、塔羅糖、葡糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺、巖藻糖等。其中，從不過度損害紫杉醇和紫杉萜所具有的抗癌效果的觀點考慮，優(yōu)選使用葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖等。即，作為本發(fā)明涉及的紫杉醇單糖苷和紫杉萜單糖苷中的糖苷，可舉出葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、木糖苷、果糖苷、鼠李糖苷、阿糖胞苷、阿洛糖苷、阿卓糖苷、艾杜糖苷、N-乙酰氨基葡糖苷、N-乙酰氨基半乳糖苷、塔羅糖苷、葡萄糖醛酸苷、氨基葡糖苷、氨基半乳糖苷、巖藻糖苷等。上述紫杉醇單糖苷和紫杉萜單糖苷，可以在紫杉醇及紫杉萜與單糖之間具有其它基團，例如可舉出碳原子數為1～8的烷?；?。即，對于上述紫杉醇單糖苷和紫杉萜單糖苷，各自的紫杉醇和紫杉萜的紫杉烷環(huán)的7位或10位的羥基的氫原子可以被烷酰氧基取代，所述烷酰氧基是被上述單糖取代的碳原子數為1～8的烷酰氧基。應予說明，單糖加成前的紫杉醇可以是公知的紫杉醇衍生物。另外，還可舉出日本特開平8-73449號公報、日本特開平7-233159號公報等記載的紫杉醇衍生物。作為上述紫杉醇單糖苷最優(yōu)選的是由下述式(1)表示的7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇。上述的紫杉醇單糖苷可使用公知的方法制造，例如可以參照非專利文獻1中記載的方法來制造。具體的制造方法如下，即，將所希望加成到紫杉醇的單糖預先乙?；缟鲜鏊龅赝ㄟ^在紫杉醇所具有的紫杉烷環(huán)的7位或10位進行酯化而賦予糖鏈。作為上述紫杉萜單糖苷最優(yōu)選的是由下述式(2)～(4)表示的紫杉萜單糖苷。式中的α葡萄糖基可以是β葡萄糖基、α半乳糖基、β半乳糖基或者α甘露糖基。式中的n為2、3、4、6或8中的任一個。上述紫杉萜單糖苷可使用公知的方法制造，例如，適當參照HETEROCYCLES，2001,Vol54，N0.2，561-566.，Biol.Pharm.Bull.2008，31(6)1155-1158(2008)等記載的方法制造即可。通過本發(fā)明的第1方式的制造方法制造的脂質體的種類由上述脂質體的構成脂質決定，可以是陰離子性脂質體、陽離子性脂質體、兩性脂質體中任一種。例如，從對細胞高效導入物質這種觀點考慮，與其它種的脂質體相比更優(yōu)選陽離子性脂質體，但從對細胞發(fā)生非特異性吸附的方面考慮，在將通過本發(fā)明的方法得到的含有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體向特定的細胞發(fā)揮DDS效果方面較差，因此不優(yōu)選。本發(fā)明的第1方式的制造方法的脂質體形成處理方法可使用公知的方法制造，沒有特別限定，例如可通過薄膜靜置水和法、凍結干燥法、液滴法、AC法、超聲波法、逆相蒸發(fā)法、脂質溶解法、噴霧干燥法、利用CO2/H2O乳液的制法、或者采用微通道等的方法制造。若具體說明本發(fā)明的第1方式的制造方法的脂質體形成處理的例子，則例如將上述磷脂質、膽固醇等溶解在適當的有機溶劑中，將其放入適當的容器后在減壓下餾去溶劑在容器內面形成磷脂質膜，向其加入含有上述紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶液優(yōu)選為其緩沖液并進行攪拌，從而能夠得到內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體。這樣的脂質體可以凍結干燥保存。另外，通過本發(fā)明的第1方式的制造方法得到的脂質體的粒徑沒有特別限定，但從通過本發(fā)明的制造方法得到的脂質體可很好地用作內包具有抗癌作用的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體制劑的觀點考慮，通常為50～300nm左右即可。滿足這樣的數值范圍的脂質體制劑在向生物體內給藥時，成為能夠通過毛細血管，特別是通過基于由癌細胞誘發(fā)的血管生成等的毛細血管等的大小而優(yōu)選。如果為50nm以上的粒徑的脂質體，則由于實質上不易向細胞中泄漏，所以優(yōu)選。另外，300nm以下的粒徑的脂質體在向生物體內給藥后不易被血中的白血球(巨噬細胞)吞噬，所以優(yōu)選。從這樣的觀點考慮，可以對通過本發(fā)明的第1方式的制造方法得到的脂質體的規(guī)定的粒徑進行調節(jié)。具體而言，在預先進行脂質體形成處理時，可通過變更各種條件來實現，但也可以使其通過調節(jié)了細孔徑的過濾器來實現。作為通過過濾器來調節(jié)脂質體制劑的粒徑的方法，可舉出使用擠出機等的方法。通過本發(fā)明的第1方式的制造方法得到的脂質體，可以具有識別癌細胞的抗體。這樣的抗體可以是單克隆抗體，還可以是多克隆抗體，作為抗體的來源的動物種類也沒有特別限定。另外，若為單鏈抗體、Domino抗體、短鏈抗體、多價化抗體、雙特異性抗體、Fab化抗體、F(ab′)2化抗體、嵌合抗體、人源化抗體等這樣的具有抗原識別功能的分子，則可以是具有任意分子結構的抗體，并不限定于以IgG為代表的具有免疫球蛋白結構的抗體。這樣的抗體與通過上述本發(fā)明的制造方法得到的脂質體的脂質雙層膜進行結合，其結合方式沒有特別限定，通過根據所使用的抗體的結構適當地選擇而能夠得到具有所希望的抗體的脂質體。例如，抗體如果為免疫球蛋白，則使用SPDP(N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)等來使抗體與脂質體結合即可。另外，抗體的擔載可以是在通過上述本發(fā)明的第1方式的制造方法內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體上結合抗體，也可以使抗體預先與脂質體的構成脂質結合。為了使結合的抗體更多地呈現在脂質體表面，優(yōu)選通過本發(fā)明的制造方法內包有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的脂質體上結合抗體。本發(fā)明的脂質體所具有的抗體可識別癌細胞。這樣的癌細胞沒有特別限定，可舉出肺癌細胞、非小細胞肺癌、乳癌細胞、食道癌、胃癌細胞、肝癌細胞、胰腺癌細胞、結腸癌細胞、卵巢癌、子宮頸癌細胞、子宮內膜癌細胞、前列腺癌細胞、頭頸部癌細胞(包含口腔癌細胞、咽癌細胞、喉癌細胞、鼻腔或副鼻腔癌細胞、唾液腺癌細胞、甲狀腺癌細胞等)等。其中，基于紫杉醇的臨床應用經驗，優(yōu)選非小細胞肺癌細胞、乳癌細胞、食道癌細胞、胃癌細胞、子宮內膜癌細胞、卵巢癌細胞、前列腺癌細胞等。識別上述癌細胞的抗體是特異性識別存在于癌細胞的表層的蛋白質(例如，CD44、CD133等的形成CD蛋白質群的CD蛋白質；生長因子或荷爾蒙的受體；具有膜貫通或膜結合區(qū)域的蛋白質等)、肽、糖鏈等生物體分子的抗體。這樣的抗體沒有特別限定，只要是已知可在對應的癌細胞的表層進行表達的抗體即可。例如作為識別乳癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患乳癌的患者采集的乳癌細胞、來自乳癌組織的細胞的Hs274.T細胞、Hs280.T細胞、Hs281.T細胞、Hs343.T細胞、Hs362.T細胞、Hs739.T細胞、Hs741.T細胞、Hs742.T細胞、Hs190.T細胞、Hs319.T細胞、Hs329.T細胞、Hs344.T細胞、Hs350.T細胞、Hs371.T細胞、Hs748.T細胞、Hs841.T細胞、Hs849.T細胞、Hs851.T細胞、Hs861.T細胞、Hs905.T細胞、Hs479.T細胞、Hs540.T細胞、Hs566(B).T細胞、Hs605.T細胞、Hs606細胞、BT-20細胞、UACC-812細胞、HCC1954細胞、Hs574.T細胞、BT-483細胞、BT-549細胞、DU4475細胞、Hs578T細胞、BT-474細胞、UACC-893細胞、HCC38細胞、HCC70細胞、HCC202細胞、HCC1143細胞、HCC1187細胞、HCC1395細胞、HCC1419細胞、HCC1500細胞、HCC1599細胞、HCC1937細胞、HCC2157細胞、HCC2218細胞、HCC1569細胞、MB157細胞、SK-BR3細胞、MDA-MB-330細胞、MDA-MB-453細胞、MDA-MB-157細胞、MDA-MB-134細胞、T-47D細胞、ZR-75細胞、MCF-7細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體(抗ErbB2抗體)、抗CEA抗體等。例如作為識別肺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患肺癌的患者采集的肺癌細胞、來自肺癌組織的細胞的Hs229.T細胞、NCI-H2066細胞、NCI-H2286細胞、NCI-H1703細胞、Hs573.T細胞、A549細胞、A427細胞、N417細胞、NCI-H596細胞、SW1573細胞、NCI-H835U細胞、MC11細胞、NCI-H727細胞、NCI-H720細胞、NCI-H810細胞、NCI-H292細胞、NCI-H2126細胞、H69細胞、NCI-H1688細胞、NCI-H1417細胞、NCI-H1672細胞、NCI-H1836細胞、DMS79細胞、DMS53細胞、DMS114細胞、SW1271細胞、NCI-H2227細胞、NCI-H1963細胞、SHP-77細胞、H69細胞，H69AR細胞、NCI-H2170細胞、NCI-H520細胞、SW900細胞等的表層的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體、抗CEA抗體等。例如作為識別非小細胞肺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患非小細胞肺癌的患者采集的非小細胞肺癌細胞、來自非小細胞肺癌組織的細胞的NCI-H23細胞、NCI-H522細胞、NCI-H1435細胞、NCI-H1563細胞、NCI-H1651細胞、NCI-H1734細胞、NCI-H1793細胞、NCI-H1838細胞、NCI-H1975細胞、NCI-H2073細胞、NCI-H2085細胞、NCI-H2228細胞、NCI-H2342細胞、NCI-H2347細胞、NCI-H2135細胞、NCI-H2172細胞、NCI-H2444細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體等。例如作為識別食道癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患食道癌的患者采集的食道癌細胞、來自食道癌組織的細胞的SGF-3細胞、EC-YO細胞、TE-1細胞、TE-2細胞、TE-3細胞、TE-4細胞、TE-5細胞、TE-6細胞、TE-7細胞、TE-8細胞、TE-9細胞、TE-10細胞、TE-11細胞、TE-12細胞、TE-13細胞、TE-14細胞、TE-15細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體等。例如作為識別胃癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患胃癌的患者采集的胃癌細胞、來自胃癌組織的細胞的AZ521細胞、AGS細胞、SNU-1細胞、SNU-5細胞、SNU-16細胞、NCI-N87細胞、Hs746T細胞、KATOIII細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體、抗CEA抗體、抗SLX抗體等。作為識別肝癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患肝癌的患者采集的肝癌細胞、來自肝癌組織的細胞的HepG2細胞、Huh-7細胞、C3A細胞、SNU-398細胞、SNU-449細胞、SNU-182細胞、SNU-475細胞、Hep3B2.1-7細胞、PLHC-1細胞、SNU-387細胞、SNU-423細胞、SK-HEP-1等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體等。作為識別胰腺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患胰腺癌的患者采集的胰腺癌細胞、來自胰腺癌組織的細胞的MIAPaCa-2細胞、BxPC-3細胞、HPAF-II細胞、HPAC細胞、Panc03.27細胞、Panc08.13細胞、Panc02.03細胞、Panc02.13細胞、Panc04.03細胞、Panc05.04細胞、Capan-2細胞、CFPAC-1細胞、PL45細胞、Panc10.05細胞、PANC-1細胞、AsPC-1細胞、Capan-1細胞、SW1990細胞、Hs766T細胞、SU.86.86細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗Her2抗體、抗CEA抗體、抗SLX抗體等。作為識別結腸癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患結腸癌的患者采集的結腸癌細胞、來自結腸癌組織的細胞的WiDr細胞、Caco-2細胞、NCI-H548細胞、Hs255.T細胞、TAC-1細胞、COLO320DM細胞、COLO320HSR細胞、DLD-1細胞、HCT-15細胞、SW480細胞、SW403細胞、SW48細胞、SW1116細胞、SW948細胞、SW1417細胞、LS123細胞、LS180細胞、LS174T細胞、C2BBe1細胞、Hs257.T細胞、Hs587.Int細胞、HT-29細胞、HCT-8細胞、Hs675.T細胞、HCT116細胞、ATRFLOX細胞、Hs698.T細胞、SW626細胞、SNU-C1細胞、COLO205細胞、COLO201細胞、SW620細胞、LoVo細胞、SK-CO-1細胞、T84細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體、抗CEA抗體等。作為識別卵巢癌的抗體，使用識別存在于屬于從患卵巢癌的患者采集的卵巢癌細胞、來自卵巢癌組織的細胞的PA-1細胞、Caov-3細胞、TOV-21G細胞、TOV-112D細胞、Hs38.T細胞、Hs571.T細胞、ES-2細胞、TE84.T細胞、NIH：OVCAR-3細胞、SK-OV-3細胞、Caov-4細胞、OV-90細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體等。作為識別子宮頸癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患子宮頸癌的患者采集的子宮頸癌細胞、來自子宮頸癌組織的細胞的HeLa細胞、HeLa229細胞、HeLaS3細胞、H1HeLa細胞、Hs588.T細胞、GH329細胞、GH354細胞、HeLaNR1細胞、C-4I細胞、C-4II細胞、DoTc24510細胞、C-33A細胞、SW756細胞、SiHa細胞、HT-3細胞、MS751細胞、CaSki細胞、ME-180細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體等。作為識別子宮內膜癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患子宮內膜癌的患者采集的子宮內膜癌細胞、來自子宮內膜癌組織的細胞的HHUA細胞、KLE細胞、HEC-1-A細胞、HEC-1-B細胞、HEC-6細胞、HEC-50細胞、HEC-59細胞、HEC-108細胞、HEC-116細胞、RL95-2細胞、SK-UT-1細胞、SK-UT-1B細胞、MES-SA細胞、MES-SA/Dx5細胞、MES-SA/MX2細胞、AN3CA細胞、SNG-P細胞、SNG-M細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗CEA抗體等。作為識別前列腺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患前列腺癌的患者采集的前列腺癌細胞、來自前列腺癌組織的細胞的LNCaP細胞、22Rv1細胞、PC-3細胞、MDAPCa2b細胞、TRAMP-C3細胞、DU145細胞、NCI-H660細胞、TSU-PR1PC-82細胞、PPC-1細胞、VCRU-Pr-2細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體等。作為識別頭頸部癌細胞中的口腔癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患口腔癌的患者采集的口腔癌細胞、來自口腔癌組織的細胞的Hs53.T細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別頭頸部癌細胞中的咽癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患咽癌的患者采集的咽癌細胞、來自咽癌組織的細胞的C666-1細胞、NPC-TY861細胞、MPC-Y851細胞、MPC-K852細胞、KKK-YT細胞、MPC-ST細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別頭頸部癌細胞中的喉癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患喉癌的患者采集的喉癌細胞，來自喉癌組織的細胞的FaDu細胞、Hs840.T細胞、Detroit562細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別頭頸部癌細胞中的鼻腔或副鼻腔癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患鼻腔或副鼻腔癌的患者采集的鼻腔或副鼻腔癌細胞、來自鼻腔或副鼻腔癌組織的細胞的RPMI2650細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別頭頸部癌細胞中的唾液腺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患唾液腺癌的患者采集的唾液腺癌細胞、來自唾液腺癌組織的細胞的SGT-1細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別頭頸部癌細胞中的甲狀腺癌細胞的抗體，使用識別存在于屬于從患甲狀腺癌的患者采集的甲狀腺癌細胞、來自甲狀腺癌組織的細胞的HTC/C3細胞、SW579細胞、TT細胞等的表面的蛋白質、肽、糖鏈等生物體分子的抗體即可。作為識別這些頭頸部癌細胞的抗體，具體而言，可舉出抗HER2抗體、抗EGFR抗體等。從本發(fā)明的脂質體制劑所具有的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷可在所應用的癌細胞的表層大量表達的觀點出發(fā)，上述抗體中最優(yōu)選的是抗HER2抗體。這樣的抗體可使用公知的方法制造，也可以購入一般作為分子標靶藥物的抗體醫(yī)藥品，使用其有效成分。例如，針對特異性識別上述乳癌細胞等的HER2的抗HER2抗體，是由中外制藥以Herceptin(注冊商標)進行銷售的抗體醫(yī)藥品的有效成分。本發(fā)明的脂質體的制造方法的另一個方式(以后，有時稱為“第2方式的制造方法”)，是內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷且具有特異性識別癌細胞的抗體的脂質體的制造方法，包括使含有聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的脂質體與在含有烷撐二醇的緩沖液或水中溶解上述紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷而成的溶液接觸的工序。第2方式的制造方法可以是包括：在使內包聚氧乙烯酯衍生物、低級醇、以及緩沖液或水的脂質體與在含有烷撐二醇的緩沖液或水中溶解紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷而成的溶液接觸的工序，以及，其后，在得到的脂質體上結合特異性識別癌細胞的抗體的工序的方法(方法1)，也可以是包括在包含聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的脂質體上預先結合特異性識別癌細胞的抗體，使得到的物質與在含有烷撐二醇的緩沖液或水中溶解紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶液接觸的工序的方法(方法2)。關于第2方式的制造方法中的“紫杉醇單糖苷”、“紫杉萜單糖苷”、“癌細胞”、“特異性識別癌細胞的抗體”、“脂質體”的脂質組成，“脂質體”的制造方法(形成處理方法)、“脂質體”的粒徑、使“脂質體”與特異性識別癌細胞的抗體進行結合的“脂質體”的結合方法、“聚氧乙烯酯衍生物”、“低級醇”等，可以將用本發(fā)明的第1方式的制造方法詳述的內容直接使用或適當地改變后使用。應予說明，脂質體可以是特異性識別癌細胞的抗體的結合的前后的任一種，也可以是內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷前后的任一種。應予說明，關于第2方式的制造方法中的脂質體的脂質組成，優(yōu)選含有DPPC和膽固醇，這些具體的物質量比沒有特別限定，通常為3：0.5～3左右即可，優(yōu)選為3：1～3，更優(yōu)選為3：1～2，最優(yōu)選為3：1。關于第2方式的制造方法中的內包于脂質體的聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水，這些的容量比與上述的第1方式的制造方法同樣，沒有特別限定，通常相對于緩沖液或水1容量份，聚氧乙烯酯衍生物通常為0.1～0.2容量份左右即可，優(yōu)選為0.12～0.19容量份左右，更優(yōu)選為0.13～0.18容量份左右即可。另外，通常相對于緩沖液或水1容量份，低級乙醇為0.1～0.2容量份左右即可，優(yōu)選為0.12～0.19容量份左右，更優(yōu)選為0.13～0.18容量份左右即可。這樣的在脂質體中內包聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的方法，適當地參照上述第1方式的制造方法即可。第2方式的制造方法中的烷撐二醇沒有特別限定，例如可舉出乙二醇、丙二醇、丁二醇等。應予說明，這些烷撐二醇可以適當地組合使用。這樣的烷撐二醇的使用量相對于上述緩沖液或水的1容量份，通常為0.1～1.5容量份左右即可，優(yōu)選為0.2～1.0容量份左右，更優(yōu)選為0.3～0.8容量份左右，最優(yōu)選為0.4～0.7容量份。紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷對含有烷撐二醇的緩沖液或水的溶解度，通常為0.1～2mg/mL左右。第2方式的制造方法中的包含聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的脂質體與在含有烷撐二醇的緩沖液或水中溶解上述紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷而成的溶液的接觸時間，沒有特別限定，通常為5分鐘～60分鐘左右即可。更優(yōu)選為10～30分鐘左右，進一步優(yōu)選為10～20分鐘左右。應予說明，關于接觸時的溫度等其他條件，沒有特別限定，基于公知的主動載藥法即可。在本發(fā)明的第2方式的制造方法中，紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷對脂質體的導入效率，通常為50～90％左右，更優(yōu)選為70～90％。這樣的導入效率可以根據在后述的實施例中進行說明的包封率(EE：％)而求得。應予說明，對于本發(fā)明的脂質體的制造方法而言，可以是上述的第1方式，也可以是第2方式，還可以供于精制所得到的脂質體的工序。具體的精制方法采用公知的方法即可，沒有特別限定，例如，可舉出使用凝膠過濾樹脂等層析法、超濾法、透析法等方法。用上述方法得到的脂質體可用適當的公知的方法保存，沒有特別限定，例如可以進行凍結干燥，也可以根據需要在含有公知的防腐劑的對羥基苯甲酸酯、苯氧基乙醇等液體中保存。通過上述本發(fā)明的制造方法得到的脂質體，能夠對上述癌細胞賦予基于由脂質體所含有的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷帶來的高效的抗癌活性效果。具體而言，能夠抑制癌細胞的增殖，以至于縮小癌組織。另外，通過本發(fā)明的制造方法得到的內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的、或者內包紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液的脂質體，通過其含有的抗體的作用能夠進行癌細胞特異性送達，所以還有副作用變少這種優(yōu)點。因此，具有特異性識別上述癌細胞的抗體的通過本發(fā)明的制造方法得到的脂質體可作為脂質體制劑用作癌的治療劑。＜脂質體制劑＞本發(fā)明的脂質體制劑內包有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液且具有特異性識別癌細胞的抗體。本發(fā)明的脂質體制劑可以將通過上述本發(fā)明的制造方法得到的脂質體直接或采用公知的制劑化技術制造即可。即，本發(fā)明的脂質體制劑內包有紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液且具有特異性識別癌細胞的抗體。本發(fā)明的脂質體制劑中的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的溶解液，優(yōu)選是在含有聚氧乙烯酯衍生物、低級醇以及緩沖液或水的混合溶劑中溶解紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷而成的溶解液。關于本發(fā)明的脂質體制劑中的“紫杉醇單糖苷”、“紫杉萜單糖苷”、“癌細胞”、“特異性識別癌細胞的抗體”、“脂質體”的脂質組成、“脂質體”的制造方法(形成處理方法)，“脂質體”的粒徑，抗體與“脂質體”的結合方法、“聚氧乙烯酯衍生物”、“低級醇”等，可直接或適當改變上述方式的本發(fā)明的脂質體的制造方法而使用即可。脂質體的脂質組成與上述的本發(fā)明的脂質體的制造方法中的情況相同，特別是通常以3：0.5～3左右的物質量比含有DPPC和膽固醇即可，優(yōu)選為3：1～3，更優(yōu)選為3：1～2，最優(yōu)選為3：1。本發(fā)明的脂質體制劑中的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的含有摩爾量相對于脂質體中的總脂質的摩爾量，通常為1.0～15.0×10-2倍的摩爾量左右，優(yōu)選為7.0～15.0×10-2倍的摩爾量左右。應予說明，這樣的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的摩爾量可以根據在后述的實施例中說明的擔載率(LE：％)來求得。本發(fā)明的脂質體制劑通過給藥到生物體中從而高效且特異性送達到癌細胞。另外，還兼具送達后侵入細胞內的效果。這樣的脂質體制劑的給藥方法，沒有特別限定，例如優(yōu)選向血中直接給藥。作為具體的給藥，可舉出經靜脈給藥、經動脈給藥、肌肉內給藥、心臟內給藥、皮下給藥、骨內給藥、皮內給藥、蛛網膜下(腔)給藥、腹腔內給藥、膀胱內給藥等。給藥手段也沒有特別限定，采用注射、點滴、注入泵等之類的公知方法即可。本發(fā)明的脂質體制劑的給藥量可以根據希望進行癌治療的患者的年齡、性別、癌變的程度等決定，并沒有具體決定，但通常換算成脂質體制劑中含有的紫杉醇單糖苷和/或紫杉萜單糖苷的量，每次10～100mg/kg左右即可。給藥間隔、給藥次數等也如上述那樣，根據希望進行癌的治療的患者的年齡、性別、癌變的程度等決定即可。應予說明，作為給藥對象的癌只要是以上的本發(fā)明的脂質體的制造方法詳述的癌就沒有特別限定，適當選擇即可。另外，如果使本發(fā)明的脂質體制劑擔載抗體，作為DDS進行生物體給藥，無論目的部位，如何都會發(fā)生一定程度積聚在肝臟這樣的問題時，則例如通過聚乙二醇進行修飾對此也是有效的。對于這樣的方法，適當采用公知的方法即可。實施例進一步詳細說明本發(fā)明。其中，本發(fā)明并不限定于以下所示的實施例。試驗例1：7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇的溶解度對由化學式(1)表示的7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇(以下，本實施例中記為gPTX。)的溶解度進行了研究。分別稱量規(guī)定量的用在上述非專利文獻1中示出的方法制成的粉末狀的gPTX和紫杉醇(以下，在本實施例中記為PTX。)，加入120μL的乙醇，通過渦流使其混合。進而，在溶解液中混合120μL的Cremophor(注冊商標)EL(從和光純藥獲得)混合后，再混合760μL的PBS(pH7.4)來確認gPTX和PTX的溶解性。將結果示于表1。表1※表中×表示不溶○表示溶解-表示不實施。可明確作為非配糖體的PTX僅以2mg/ml左右的濃度溶解，如果是gPTX，則能以20mg/ml的高濃度溶解。即，可明確PTX和gPTX通常幾乎不溶于水，即使是聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：PBS(pH7.4)為容量比12：12：76的比例的非水系混合溶劑，PTX也不顯示充分的溶解度，但gPTX能夠以非常高的濃度溶解于上述非水系混合溶劑中。另外，作為比較實驗例，將gPTX對含有10～40％(容量)的乙二醇(EG)的10mM磷酸緩沖液的溶解度同樣地進行實驗，結果示于表2。是全部成為1mg/mL的濃度的方式混合gPTX的結果。表2乙二醇(EG)(％)102030401mg/mL的gPTX的溶解度××△○※表中×表示不溶△表示部分溶解○表示溶解?？擅鞔_gPTX不溶解于含有10～20％(容量)的乙二醇的PBS中，在含有30％(容量)的乙烯葡萄糖的PBS中開始溶解，在含有40％(容量)的乙烯葡萄糖的PBS溶解。此時的溶解度大約為1mg(gPTX)/mL左右。因此，可明確gPTX本身對只是水系溶劑時幾乎不能溶解，為含有30～40％(容量)左右的乙二醇的混合溶劑時能夠溶解。試驗例2：7-α-葡萄糖基氧基乙酰紫杉醇內包脂質體分別稱量13.5、1.5以及1.5mg1,2-二棕櫚?；?外消旋-甘油-3-磷酸膽堿(DPPC)、1,2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸-外消旋-(1-甘油)鈉鹽(DPPG)以及膽固醇，在50ml的茄形燒瓶內混合。將混合的脂質用3ml的有機溶劑(氯仿：甲醇＝9：1)溶解后，用旋轉蒸發(fā)儀干燥，其后，進行2小時的真空干燥，由此完全除去溶劑而制備脂質膜。接下來，將茄形燒瓶在60℃的溫浴中浸漬5分鐘后，加入1ml的制備成20mg/ml的濃度的gPTX溶液(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：超純水＝12：12：76；容量比)或2mg/ml的PTX溶液(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：超純水＝12：12：76；容量比)，將脂質膜溶解，制備多片層囊泡(MLV)。將其隔1分鐘的間隔進行5分鐘的超聲處理共3次來制備層狀小囊泡(SLV)。為了除去未包入的藥劑溶液和游離的脂質，進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。另外，將內包了gPTX的脂質體以后記為gPTX-L，而且將內包了PTX的脂質體以后記為PTX-L。進而，作為比較例，代替gPTX，使用上述的1mg/ml的gPTX溶液(含40％(容量)乙二醇10mM磷酸緩沖液)在脂質體內包gPTX。接著，進行以結合了抗體的脂質體內包上述gPTX的實驗。首先，分別稱量13.5、1.5以及1.5mg的DPPC、DPPG以及膽固醇，在50ml茄形燒瓶內混合。將混合后的脂質用3ml的有機溶劑(氯仿：甲醇＝9：1)溶解，向其加入27μl(0.2mg)的8mM的N-3-(2-二硫代)丙酰二棕櫚?；字Ｒ掖及?DTP-DPPE)溶液。其后，用旋轉蒸發(fā)儀干燥后，進行2小時的真空干燥從而完全除去溶劑而制備脂質膜。接下來，將茄形燒瓶在60℃的溫浴中浸漬5分鐘后，加入1ml的制備成20mg/ml的濃度的gPTX溶液(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：超純水＝12：12：76；容量比)來溶解脂質膜，制備多片層囊泡(MLV)。將其隔1分鐘的間隔進行5分鐘的超聲處理共3次來制備層狀小囊泡(SLV)。為了除去未包入的藥劑溶液和游離的脂質而進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。同時，制備與脂質體結合的抗體。將1mg的N-丁二酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)溶解于脫水甲醇500μl，得到2mg/ml的SPDP溶液。將5μL的SPDP溶液加入到1ml的曲妥珠單抗(人源化抗HER2單克隆抗體)溶液(1mg/ml)中在室溫下攪拌30分鐘。為了除去未結合的SPDP而在透析管(截留分子量：14000)中加入SPDP修飾曲妥珠單抗溶液，通過100mM乙酸緩沖液(pH4.5)進行透析。透析在4℃的冷暗處中進行，3小時進行4次、12小時進行2次外液交換。在SPDP修飾曲妥珠單抗溶液中混合50mM的二硫蘇糖醇(DTT)溶液500μl，在室溫下攪拌30分鐘。為了除去未反應的DTT和作為副生成物的吡啶-2-硫酮，進行了超濾((AmiconUltra10Kmembrane(Millipore公司制))。過濾后，與內包有上述PTX或gPTX的脂質體混合，使曲妥珠單抗與脂質體結合。將在結合有抗體的脂質體中內包有上述gPTX的脂質體以后記為gPTX-IL，而且將內包有PTX的脂質體記為PTX-IL。另外，將在沒有抗體的脂質體中內包有上述gPTX的脂質體以后記為gPTX-L，而且將內包有PTX的脂質體記為PTX-L。另外，作為比較例，代替gPTX，使用上述的1mg/ml的gPTX溶液(含40％乙二醇10mM磷酸緩沖液)進行內包于結合了抗體的脂質體的實驗。得到的內包于脂質體或免疫脂質體內的紫杉醇單糖苷的效率按以下方法計算。首先得到gPTX和PTX的校準曲線。校準曲線是用HPLC檢測0.01到0.5mg/ml的藥劑溶液(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：PBS(pH7.4)為12：12：76；容量比)，由各藥劑濃度中的峰面積作成。接下來，在制備的脂質體中添加1/10體積量的0.1％的TritonX-100，通過超聲波處理破壞脂質體后，用HPLC測定該溶液10μl，使用校準曲線求得被內包的藥劑含量。HPLC的柱使用WP300C18、5μm4.6×150mm，測定條件為檢測波長227nm，移動相使用甲醇：超純水＝6：4的溶劑，以1.0ml/min的流速進行送液。使用下式(1)和(2)，根據得到的藥劑含量計算內包封率(Encapsulationefficiency：EE)和擔載率(loadingefficiency：LE)。內包封率(EE：％)＝藥劑含量/初始使用藥劑量×100(1)擔載率(LE：％)＝{(藥劑含量/藥劑摩爾重量)/初始脂質摩爾數}×100(2)另外，得到的脂質體的粒徑作為基于動態(tài)光散射法的Z平均粒徑進行測定。將這些結果示于下述表3。表3由表3所示的結果可明確，溶解于40％的乙二醇中的PTX沒有被內包于脂質體。另外，從內包封率來看，可明確溶解于含有聚氧乙烯蓖麻油等的溶劑中的gPTX比PTX優(yōu)異。此外，關于PTX對構成脂質體的脂質的擔載率，溶解于含有聚氧乙烯蓖麻油的溶劑中的PTX僅顯示1.2％左右的數值，與此相對，相同地溶解于含有聚氧乙烯蓖麻油的溶劑中的gPTX，顯示13.7％的數值，根據對結合了抗體的脂質體的內包實驗，也顯示11.4％的數值。這表明，與PTX相比，gPTX對于構成脂質體的脂質的擔載量也大約上升9.5～11.4倍。即，表示gPTX有利于在脂質體中內包。另外，關于內包封率，還可明確溶解于40％(容量)的乙二醇溶液的gPTX，對脂質體僅0.41％、對結合了抗體的脂質體僅0.51％左右內包，與此相對，溶解于含有聚氧乙烯蓖麻油的溶劑中的gPTX，對脂質體內包封率為17.6％，對結合了抗體的脂質體內包封率為14.8％，為30～40倍左右，內包封率上升。因此，表明在脂質體中內包gPTX時，使用溶解于含有聚氧乙烯蓖麻油的溶劑中的gPTX是非常有利的。試驗例3：抗癌活性評價通過MTT比色法對使用溶解于二甲基亞砜中的PTX、gPTX以及溶解于40％(容量)的乙二醇溶液中的gPTX制成的gPTX-L和gPTX-IL的IC50進行評價。作為試驗對象細胞，使用來自人的乳癌細胞的SK-BR-3。另外，計算了IT50。IT50是表示達到殺死100％細胞的藥劑濃度的一半濃度的時間，可以通過相對于時間軸繪制細胞生存率而得到的生存曲線為基礎容易地計算。將這些結果示于表4。表4藥劑名IC50(nM)IT50(h)PTX5.9115.9gPTX46.018.7gPTX-L47.817.2gPTX-IL22.15.2根據表4所示的結果，對于IC50而言，無論是gPTX，還是gPTX-L，關于它們的乳癌細胞的殺死效果，沒有看到特別的差別。另一方面，對于gPTX-IL而言，顯示與這些相比對乳癌細胞的殺死效果高。應予說明，PTX雖然顯示最高的對乳癌細胞的殺死效果，但從向個體給予藥劑這種觀點考慮，無法向想要殺死的癌細胞積極送達藥劑，因此即使顯示優(yōu)異的抗癌作用也很有可能向非目標部位送達藥劑，所以必然會顯現副作用，并不能解決現有的問題。另外，對于IT50而言，PTX、gPTX以及gPTX-L的直至100％殺死細胞所需的時間沒有看到差別。對于gPTX-IL而言，與這3者相比，顯示其三分之一左右的數值。即，gPTX-IL與其他3者相比，顯示直至殺死細胞所需的時間大幅縮短。認為這是由于gPTX-IL向乳癌細胞積極送達，且進入乳癌細胞內，發(fā)揮由PTX本身帶來的高抗癌作用。因此，可明確gPTX-IL對乳癌細胞發(fā)揮優(yōu)異的DDS效果。試驗例4：急性毒性試驗通過尾靜脈注射每隔1小時的間隔向BALB/c小鼠(♀,5周齡)給藥gPTX、gPTX-L、溶劑對照組(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：超純水＝12：12：76；容量比)共5次(N＝3)。1次的給藥以200μl/20g進行。gPTX的合計給藥量為200mg/kg。給藥中途和給藥后進行觀察。將結果示于圖1。在給藥gPTX的組群中，出現第三次給藥時幾乎全部被殺死的結果，但在脂質體中內包有gPTX的gPTX-L中，可確認與對照組同程度地生存。根據以上結果，為了增強抗癌作用，可將在脂質體中包入gPTX的gPTX-L，與以往的gPTX的給藥量相比更多地給藥。試驗例5：細胞觀察使內包有FITC的脂質體(脂質組成與上述相同：以后，記為FITC-L。)和用與上述方法同樣制成的結合了曲妥珠單抗的脂質體(脂質組成與上述相同：以后，記為FITC-IL。)作用于來自人類的乳癌細胞的SK-BR-3細胞，進行2小時的培育后，根據使用熒光顯微鏡的常法來觀察細胞。將結果示于圖2。由圖2可觀察，在FITC-L中，看不到向細胞的積聚，與此相對，在FITC-IL中，不僅向細胞積聚，還進入細胞內部的樣子。由以上可明確，結合了曲妥珠單抗的脂質體與在SK-BR-3細胞表面上表達的HER2結合，進而進入細胞內。試驗例6：gPTX內包脂質體的制備改變法(脂質體脂質組成的研究)稱量13.2、10.6或8.8mgDPPC、2.1、3.7或4.6mg膽固醇以及2.1mgmPEG-DSPE，在50ml的茄形燒瓶內混合。將混合的脂質用3ml的有機溶劑(容量比：氯仿：甲醇＝9：1；容量比)溶解，通過熱水浴式超聲儀進行5分鐘超聲處理后，用旋轉蒸發(fā)儀干燥后，真空干燥一晚，從而完全除去溶劑來制備脂質膜。接著，使茄形燒瓶在60℃的溫浴中浸漬5分鐘后，加入1ml的CEP緩沖液(聚氧乙烯蓖麻油EL：乙醇：PBS(pH7.4)＝12：12：76；容量比)將脂質膜溶解，制備多片層囊泡(MLV)。通過對其進行5分鐘的超聲處理，從而制備層狀小囊泡(SLV)。為了除去未包入的緩沖液和游離的脂質，進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。向制備的脂質體加入1ml含有上述1mg/ml的gPTX溶液(溶劑：40％EG的PBS(pH7.4))，在60℃的熱水中浸漬15分鐘。為了除去未包入的藥劑溶液而進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。進一步進行2次的以上操作，進行藥劑的封入。封入后，進行PBS清洗，完全除去未包入的藥劑溶液。內包在得到的脂質體中的紫杉醇單糖苷的效率，用與上述試驗例2同樣的方法測定并計算被內包的藥劑含量和粒徑。將這些結果示于下述表5。表5如表5所示，在DPPC：Chol(膽固醇)的重量比為3：1、3：2以及3：3的全部情況中，內包率為60％以上，發(fā)揮非常高的效率。此外，DPPC：Chol的重量比為3：1和3：2時，即使內包gPTX，平均粒徑也幾乎沒有變化。另外，進行來自得到的內包gPTX的脂質體的gPTX的滲漏試驗的結果，可明確DPPC：Chol的重量比為3：1的情況下，發(fā)揮最優(yōu)異的gPTX的擔載·保持效果(沒有數據顯示)。試驗例7：gPTX內包脂質體的制備改變法(加溫時間的研究)在試驗例6所示的實驗中，測定將DPPC：Chol的物質量比為3：1時的加溫時間為5分鐘、10分鐘、30分鐘以及60分鐘時的封入效率。測定方法用與上述的試驗例2同樣的方法測定并計算。將這些結果示于下述表6。表6加溫時間5分鐘15分鐘30分鐘60分鐘EE34.972.962.326.8由表6所示的結果可明確，將加溫時間設為15分鐘時，能夠最高效地使gPTX內包在脂質體內。試驗例8：使用了用改變法得到的gPTX內包脂質體的急性毒性試驗使用在上述試驗例7中得到的gPTX內包脂質體(gPTX-L)進行急性毒性試驗。具體而言，通過尾靜脈注射每隔3小時的間隔向BALB/c小鼠(♀，6周齡)分別給藥gPTX、gPTX-L、CEPbuffer(聚氧乙烯蓖麻油：乙醇：超純水＝12：12：76；容量比)以及PBS，共進行2次給藥(N＝4)。1次給藥以200μl/20g進行。gPTX的合計給藥量換算成gPTX各自的總量為150及100mg/kg。進行給藥中途和給藥后的觀察。將結果示于圖3。如圖3所示，使總量成為150mg/kg而進行gPTX給藥的群組中，在給藥后1日確認3只死亡，在給藥CEPbuffer的群組中，給藥后1日確認2只死亡。另一方面，使總量gPTX成為150mg/kg而進行gPTX-L給藥的群組中，與PBS同樣，在14天期間，生存率為100％。接著，圖4中測定上述各給藥群中的體重變化。在給藥gPTX的群組中，可確認體重顯著減少，但在作為gPTX的總量為同量給藥的gPTX-L的群組中，可確認與給藥PBS的群相同的體重變化。由這些結果可明確，與gPTX相比，內包gPTX的脂質體顯示優(yōu)異的安全性。試驗例9：使用了用改變法得到的gPTX內包脂質體的細胞送達實驗向內包上述gPTX的脂質體(gPTX-L)，加入溶解于470μlPBS的3mg/ml的Mal-PEG-DSPE，在50℃的熱水中浸漬10分鐘。同時，制備與脂質體結合的抗體。向溶解在HEPES緩沖液(25mM的HEPES，140mM的NaCl，pH8.0)中的1.5mg的曲妥珠單抗溶液加入500nmol的2-亞氨基硫烷溶液，室溫、遮光下反應1小時，向曲妥珠單抗導入SH基。將反應后溶液使用SephadexG-25柱除去未反應物質，進行對PBS的緩沖液的交換。接著，混合導入了SH基的曲妥珠單抗溶液和脂質體溶液，通過在4℃振蕩一晚從而使曲妥珠單抗與脂質體結合。為了除去未反應的曲妥珠單抗而進行超濾(VIVASPIN2300Kmembrane(Sartorius公司制))。由此，得到內包結合了抗體的gPTX的脂質體(gPTX-IL)。另外，作為對照，在脂質體的制備中向脂質體溶液加入470μl的3mg/ml的mPEG-DSPE，在50℃的熱水中浸透10分鐘。其后，進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。與上述試驗例3同樣地測定抗癌活性。使用的細胞是使用來自人類的乳癌細胞SK-BR-3和結腸腺癌HT-29。具體而言，以5000cells/well在96孔板上播種細胞，培育24小時。其后，以各種濃度加入PTX、gPTX、gPTX-L以及gPTX-IL進行培育。72小時后，通過MTT比色法計算細胞的生存率。首先，根據生存率曲線求出殺死50％的細胞的濃度(IC50)。接著，根據生存率曲線進行殺死50％的細胞的時間(IT50)的計算。播種上述細胞后，以根據上述生存率曲線求得的成為IC100的濃度加入上述各種，培育1、2、6、12、24、48以及72小時后，進行培養(yǎng)基交換。加入藥劑之后在72小時后與上述實驗同樣地進行MTT比色法，求得生存率，根據生存率計算IT50。將結果示于表7和表8。表7※IC50、IC100單位均為nM。由表7所示的IC50和IC100的結果可明確，PTX、gPTX、gPTX-L以及gPTX-IL，均對乳癌細胞及結腸腺癌細胞發(fā)揮極其優(yōu)異的抗癌活性。另外，從gPTX和PTX的比較結果可明確，雖然因在PTX結合糖鏈，抗癌活性衰減，但通過將其內包在脂質體內，(參照gPTX-L和gPTX-IL。)抗癌活性能夠發(fā)揮與PTX同等的作用。其中，在gPTX-L與gPTX-IL之間，沒有看到特別的抗癌活性的差別。即，給出了抗體的有無對抗癌活性不會帶來特別改變的啟示。表8由表8所示的和IT50的結果可明確，gPTX-IL與gPTX-L相比，其IT50的數值低。這表示用于殺死各種癌細胞的時間短，表明PTX能夠更短時間高效地被送達癌細胞，由此能夠更迅速地殺死癌細胞。試驗例10：具有抗體的脂質體的體內輸送實驗接著，為了以體內實驗驗證結合了抗體的脂質體的向腫瘤組織的送達，制作結合有內包熒光色素的抗體的脂質體。具體而言，使10mg的人血清白蛋白(HSA)溶解于0.1M的碳酸鈉緩沖液(pH9.3)1ml中，得到10mg/ml的HSA溶液。使10mg/ml的HSA溶液1ml溶解于1樣品瓶的Cy5.5Monofunctionaldye中。將其在室溫下振蕩30分鐘后，使用SephadexG-25柱，除去未反應物得到Cy5.5結合HSA(HSA-Cy5.5)。根據上述試驗例制備脂質膜，使其在60℃溫浴中浸漬5分鐘后，加入HSA-Cy5.5溶液，溶解脂質膜。使該溶液在60℃溫浴中浸漬并且進行3分鐘超聲處理。為了除去未包入的HSA-Cy5.5而進行超濾(AmiconUltra100Kmembrane(Millipore公司制))。其后，使用試驗例8所示的方法使抗體(Trastumab)與得到的脂質體結合。通過皮下注射以3.0×106cells/mouse向ICR-nu/nu小鼠(♀，5周齡)注射HT-29細胞，給藥內包結合了抗體的HSA-Cy5.5的脂質體。作為比較實驗，還給藥內包不結合抗體的HSA-Cy5.5的脂質體。在腫瘤體積達到大約100mm3的時刻，通過尾靜脈注射給藥HSA-Cy5.5內包脂質體(L)或者具有抗體的脂質體(IL)。在給藥后1、2、3、4、5、6、24以及48小時后，利用CCD照相機(體內微距成像系統(tǒng)I.C.E.)拍攝Cy5.5的熒光(激發(fā)光650nm/熒光波長710nm)。將結果示于圖5和圖6。由圖5所示的結果可明確，無論有無抗體，脂質體都會根據EPR效果而在腫瘤處積聚。然而，結合抗體的脂質體更高效地向腫瘤組織積聚，而向肝臟的積聚少。由圖6所示的結果可明確，具有抗體的脂質體與不具有抗體的脂質體相比，始終大量向腫瘤組織積聚，另一方面，不具有抗體的脂質體始終向肝臟組織大量積聚。另外，不具有抗體的脂質體在給藥后48小時內，與具有抗體的脂質體不同，沒有看到向腫瘤組織積聚。試驗例11：內包gPTX且具有抗體的脂質體的體內抗癌活性實驗通過皮下注射以3.0×106cells/mouse向ICR-nu/nu小鼠(♀，5周齡)給藥HT-29細胞。在腫瘤體積為50～200mm3左右的時刻，利用尾靜脈注射每隔3小時的間隔進行2次給藥上述gPTX、試驗例7中制成的gPTX-L、試驗例9中制成的gPTX-IL、曲妥珠單抗、試驗例9中不內包gPTX且不結合抗體(曲妥珠單抗)而制成的脂質體(emptyL)、試驗例9中不內包gPTX且結合抗體(曲妥珠單抗)而制成的脂質體(emptyIL)、CEP緩沖液以及PBS(N＝4)。1次給藥以200μl/20g進行。gPTX的合計給藥量為150mg/kg，曲妥珠單抗為200mg/kg。進行給藥后的腫瘤體積變化的觀察。將結果示于圖中。腫瘤體積根據下述式(3)計算。腫瘤體積＝(腫瘤短邊2×腫瘤長邊)/2(3)另外，還測定各給藥群的體重變化及生存率。將結果示于圖6～9。由圖6所示的結果可明確，gPTX-IL與gPTX同樣地能夠發(fā)揮顯著優(yōu)異的抑制腫瘤增殖的效果。另一方面，其它給藥群幾乎看不到腫瘤增殖抑制效果。另外，由圖7所示的結果可知，gPTX-IL在給藥后雖然能看到體重的減少，但在其后恢復，結果，成為與其他給藥群等同樣的體重變化。而且，CEP給藥群在給藥后3小時全部死亡，gPTX給藥群中給藥后3小時死亡2只，進而在1周后死亡1只。在圖7所示的體重變化中，gPTX給藥群的體重顯著降低是由死亡的小鼠引起的。這些腫瘤增殖效果能夠從圖10所示的照片中清楚看到。由以上可明確，內包gPTX且結合了特異性識別Her2的單克隆抗體即曲妥珠單抗的脂質體，能夠發(fā)揮顯著抑制作為結腸腺癌的HT-29擔癌小鼠的腫瘤組織中的增殖。另外，還明確了這樣的脂質體通過給藥沒有顯示體重減少，致死率低，所以發(fā)揮副作用極少這樣的效果。由以上可明確，這種脂質體作為對癌細胞發(fā)揮極其優(yōu)異的效果的脂質體制劑而有用。