與多糖交聯(lián)的蛋白質的制備和/或制劑相關申請的引用本申請涉及2010年11月23日提交的美國臨時申請U.S.61/3444,940；其全文并入本文作為參考。技術領域本申請披露內容涉及且可以應用于與多糖交聯(lián)的蛋白質的制備和/或制劑。

背景技術：
可注射植入物目前被用于在聲帶重建、大小便失禁、以及皺紋的美容處理的醫(yī)學應用中膨脹（bulk）或增大組織。目前的植入物由多種材料組成，包括透明質酸、蛋白質（如膠原蛋白）、聚合物（如聚乳酸）和生物材料（如羥基磷灰石）。例如，透明質酸（“HA”）有時被稱為玻尿酸（hyaluronan）或透明質酸鹽（hyaluronate），是一種天然存在的粘多糖，發(fā)現(xiàn)于例如滑液、玻璃體液、血管壁和臍帶及其他結締組織中。該多糖由交替的N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡萄糖醛酸殘基組成，所述殘基由交替的β-1-3葡糖苷酸鍵和β-1-4葡糖胺鍵連接。是利用多種方法使透明質酸類產品交聯(lián)，包括例如使用化學物質，如BDDE和二乙烯基硫烷（divinylsulfane）。然后，將交聯(lián)透明質酸微粉化以使其能夠用于注射（例如和）。透明質酸植入物通過膨脹組織和保持植入物中的水分并緩慢地被身體再吸收而產生作用。另一個實例是基于從動物或人組織中提取的膠原蛋白的膠原蛋白類植入物，其進一步被交聯(lián)（例如，戊二醛（）或核糖基交聯(lián)劑（））、均質化，然后懸浮在鹽水中準備用于植入。膠原蛋白植入物通過與透明質酸產品類似的方式膨脹組織而產生其作用；然而，它們還能夠使更多細胞浸潤到植入物中，并產生新生膠原蛋白物質。使用聚合物如聚乳酸（例如）和生物材料如羥磷灰石（例如）的方法是基于制備微粒材料在可注射凝膠（通常為多糖，如透明質酸或羧甲基纖維素）中的懸浮液。微粒植入物通過誘導對微粒的異物反應產生其作用，對微粒的異物反應引起該微粒的成纖維細胞包封和膠原蛋白生成—通過進一步組織增大（buildup）而膨脹組織。目前的使用組織膨脹劑（tissuebulkingagent）的方法存在的一個問題是，它們不能使遞送基于或結合全長蛋白質或基本上全長蛋白質的生物材料?；诨蚪Y合類似于體內天然存在的全長或基本上全長蛋白質物質的制劑很可能保留用于許多預期應用所期望的生物相容性和自身識別的水平?；瘜W交聯(lián)方法通常導致大量的分子內交聯(lián)，其會破壞分子的天然結構；使產品能夠用于注射的微粉化或均質化技術不能有助于保持全長或基本上全長蛋白質分子結構。另外，用于交聯(lián)透明質酸和蛋白質的化學交聯(lián)劑具有已知的毒性，并且會引起刺激、炎癥或帶來致癌風險。本申請披露內容特別地涉及提供粘結性（coherent）生物材料的可注射制劑，所述粘結性生物材料基于或來源于蛋白質，并且能夠結合蛋白質殘基以保持其全長或基本上全長結構，并且還能夠保護蛋白質殘基以避免快速再吸收和/或由于例如蛋白水解而遭到破壞。另外，本申請披露內容特別地涉及基于和來源于全長或基本上全長蛋白質的生物材料，所述蛋白質適合用于進行針注射，保持粘結性結構，足夠交聯(lián)以減慢體內再吸收或其組合。另外，本申請披露內容特別地涉及基本上不含有毒化學交聯(lián)劑的生物材料。本申請披露內容還特別地提供了至少一種交聯(lián)的蛋白質基質的制備和/或制劑的方法、系統(tǒng)和/或試劑盒，所述交聯(lián)的蛋白質基質包含至少一個蛋白質殘基和至少一個生物分子交聯(lián)劑殘基，其中至少一種蛋白質分子與至少一個生物分子交聯(lián)劑交聯(lián)，以形成交聯(lián)的蛋白質基質。另外，本申請披露內容還特別地還提供了至少一種交聯(lián)的蛋白質基質的制備和/或制劑的系統(tǒng)和/或試劑盒，所述交聯(lián)的蛋白質基質包含至少一種蛋白質殘基和至少一種多糖殘基，其中蛋白質分子（如基本上全長蛋白質分子或全長蛋白質分子）與多糖交聯(lián)劑交聯(lián)，以形成至少一種交聯(lián)的蛋白質基質。對本文公開的組合物、方法、系統(tǒng)和/或試劑盒存在需要。

技術實現(xiàn)要素：
在某些實施方式中，可注射的組合物可以是至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其中該至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含：i）至少一種蛋白質殘基；和ii）至少一種含糖交聯(lián)殘基。在某些實施方式中，可注射組合物可以是在水性和/或生理性介質中基本上可溶的組合物。在某些實施方式中，可注射組合物在水性和/或生理性介質中基本上可溶、部分可溶或基本上不溶。在某些實施方式中，可注射組合物可以包含至少一種來源于至少一種含糖交聯(lián)分子的含糖殘基，所述含糖交聯(lián)分子可以是基本上生物可利用的、基本上生物可降解的、基本上可生物吸收的和/或基本上可生物再吸收的。在某些方面，該至少一種含糖殘基可以包含至少一種多糖殘基、至少一種低聚糖殘基或其組合。在某些方面，可注射組合物可以包括含至少一種多糖，其中所述至少一種多糖殘基包含低分子量、中等分子量和/或高分子量的多糖殘基。在某些方面，可注射組合物可以包含至少一種具有分子量為約500至約500,000道爾頓之間的多糖殘基。在某些方面，可注射組合物可以包含至少一種含糖殘基，其包括含有一個或多個帶負電荷的官能團和/或一個或多個帶正電荷的官能團的至少一種多糖殘基或至少一種低聚糖殘基。在某些方面，可注射組合物可以包含至少一種聚陰離子多糖殘基或至少一種聚陰離子低聚糖殘基。在某些方面，可注射組合物可以包含至少一種多糖殘基，其來源于或包含下述物質的殘基：透明質酸、纖維素衍生物、羧基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基直鏈淀粉、黃原膠、瓜爾膠、α-葡聚糖、β-葡聚糖、β-1,4-葡聚糖、β-1,3-葡聚糖、海藻酸鹽、羧甲基葡聚糖、糖胺聚糖衍生物、軟骨素-6-硫酸鹽、硫酸皮膚素、肝素、硫酸肝素、或生物材料如聚乳酸、聚乙醇酸、聚(乳酸-共-乙醇酸)、磷酸三鈣、1-羥磷灰石、和/或它們的可藥用鹽、衍生物和/或組合。在某些方面，可注射組合物可以包含至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其包含濃度為約0.01%至約30%之間的至少一種含糖殘基。在某些實施方式中，該可注射組合物可以包含至少一種來源于或包括全長蛋白質殘基的蛋白質殘基。在某些方面，該可注射組合物可以包括至少一個含有具有胺的側鏈殘基的蛋白質殘基，其包括至少一個賴氨酸殘基和/或至少一個精氨酸殘基。在某些方面，該可注射組合物可以包含來源于或包括彈性蛋白原、彈性蛋白、白蛋白、膠原蛋白、膠原蛋白單體、免疫球蛋白、胰島素、和/或其衍生物或組合的至少一種蛋白質殘基。在某些實施方式中，可注射組合物可以包含至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其可擠出為至少或約10cm。在某些實施方式中，可注射組合物是可擠出的。在某些實施方式中，可注射組合物可擠出為約5cm至約30cm之間的長度。在某些實施方式中，可注射組合物可以包含至少一種包含約或至少約25mg/ml的蛋白質殘基的交聯(lián)的蛋白質基質。在某些實施方式中，可注射組合物可以包含至少一種包含約1mg/ml至約250mg/ml之間的蛋白質殘基的交聯(lián)的蛋白質基質。在某些實施方式中，可注射組合物可以包含至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其是通過使用下述物質制備的：i）活化劑和/或偶聯(lián)劑；和ii）修飾劑和/或輔助偶聯(lián)劑；以形成一個或多個連接和/或交聯(lián)（crosslinkage）。在某些實施方式中，可注射組合物可用于治療性應用，包括用于外科手術、美容、組織膨脹、治療失禁、皮膚替代物、皮膚病學、皮膚病手術、眼睛手術、風濕病學、藥理學、和/或化妝品領域。在某些實施方式中，公開了制備所述組合物的方法，包括使至少一種蛋白質分子與至少一種含糖交聯(lián)分子交聯(lián)。在某些實施方式中，制備所述組合物的方法包括：i）對至少一種含糖分子進行修飾，以使其包括至少一個與至少一種蛋白質分子上的反應性化學基團互補的反應性化學基團；ii）使經修飾的至少一個含糖分子與至少一個蛋白質分子結合；和iii）在至少一個蛋白質分子和經修飾的至少一個含糖分子之間形成至少一個鍵。在某些實施方式中，制備組合物的方法包括：i）對至少一種含糖分子進行修飾，以使其包括至少一個反應性化學基團；ii）使所述經修飾的至少一個含糖分子與至少一個蛋白質分子結合，其中至少一個蛋白質分子包含至少一個與經修飾的至少一個含糖分子上的反應基團互補的反應性化學基團；和iii）在至少一個蛋白質分子和經修飾的至少一個含糖分子之間形成至少一個共價鍵。在某些方面，經修飾的至少一個含糖分子可以包含經修飾的多糖分子，該多糖分子是通過連接包括在固相多糖合成期間能夠結合蛋白質分子或修飾的蛋白質分子的反應性接頭的至少一個部分制備的。在某些方面，該至少一個部分可以通過共價鍵連接。進一步地，該至少一個部分可以包括聯(lián)接基團（spacergroup）。進一步地，該聯(lián)接基團可以包含聚合的環(huán)氧乙烷。該聯(lián)接基團也可以為PEG或PEO。在某些實施方式中，該結合物（conjugate）可以由共價連接形成。進一步地，在某些實施方式中，該共價連接可以選自：酰胺、肟、腙、硫化物、醚、胺（如仲胺或叔胺）、烯醇醚、硫醚、酯、三唑和二硫化物。在某些方面，該共價連接可以包含酰胺或腙。在某些實施方式中，所公開的方法可以是強有力的（robust）、更有效的、成本更低的、簡單的和/或其組合。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包含一種或多種蛋白質殘基或經修飾的蛋白質殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包含兩種不同的蛋白質殘基或經修飾的蛋白質殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包含一種或多種多糖殘基或經修飾的多糖殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包含兩種不同的多糖殘基或經修飾的多糖殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以是可注射組合物。附圖說明附圖有助于理解本文公開內容的多種實施方式?，F(xiàn)在僅僅作為舉例，參照附圖進一步詳細地描述程序、系統(tǒng)、試劑盒、制備、方法、純化或其組合的示例性實施方式，其中：圖1圖示出了根據(jù)某些實施方式的透明質酸的理想重復結構。透明質酸是一種由β-D-葡萄糖醛酸-[1,3]-β-D-N-乙?；咸前范菃卧M成的多糖，每個二糖單元包含一個羧基，所述二糖單元可以是活化且交聯(lián)的。圖2圖示出了根據(jù)某些實施方式由EDC和NHS與圖示的含羧酸酯（carboxylate）分子（1）和胺（2）可能的中間體結構（包括O-酰基異脲酯和NHS酯中間體，由修飾劑如N-琥珀酰亞胺（NHS）形成）介導的反應，從而形成NHS活化的羧酸酯中間體，該羧酸酯中間體能夠與伯氨基（1）反應形成酰胺鍵。圖3圖示出了根據(jù)某些實施方式由實施例5的制劑浸泡在PBS中提取的蛋白質的SDSPAGE凝膠，包含下述泳道：標志物（泳道M）；上清液（泳道A和B）；和純TE（泳道TE）。具體實施方式提供了關于可以共有常見特性和特征的一些實施方式的下述說明。應當理解，一種實施方式的一個或多個特征可以與其他實施方式的一個或多個特征組合。另外，某些實施方式中的單個特征或特征組合可以構成另外的實施方式。在本說明書中，術語“包含”應當理解為其“開放”含義，即“包括”的含義，因此，并沒有限定為其“封閉”含義，即“僅僅由...組成”的含義。當其出現(xiàn)時，相應含義應歸于相應術語“包含”。在具體實施方式部分使用的主標題僅僅是為了方便讀者參考，不應當用于限制在整個說明書和權利要求中存在的主題。主標題不應當用于解釋權利要求的范圍或限制權利要求。除非另有定義，否則本文使用的技術術語具有與如本領域技術人員通常理解的相同的含義。術語“活化的”可以包括分子的中間體形式，其可以易受和/或發(fā)起親核化合物的親核攻擊和/或親核取代。例如，在某些實施方式中，含羧基分子（如包含羧基的含糖分子），例如包含羧基的多糖，當例如用活化劑處理時，可以活化形成活化中間體，如活化的酯，其中活化中間體可以易受或發(fā)起親核化合物（例如胺）的親核攻擊和/或親核取代，在含羧基分子和親核化合物之間形成鍵，例如酰胺鍵。在某些實施方式中，含羥基分子（如包含羥基的含糖分子），例如包含羥基的多糖，當例如用活化劑處理時，可以活化形成活化中間體，如環(huán)氧（epoxy）或鹵代醇（halohydrin）反應基團，其中活化中間體可能夠與化合物如胺反應，含羥基分子和化合物之間形成鍵，如仲胺鍵或叔胺鍵。術語“氨基酸”可以是指α-氨基酸，其為外消旋的或D-構型或L-構型。在某些實施方式中，氨基酸可以是天然存在氨基酸或非天然存在的氨基酸，如合成來源的非天然存在的氨基酸。氨基酸命名之前的標識“d”（例如，dAla、dSer、dVal等）是指氨基酸的D-異構體。氨基酸命名之前的標識“dl”（例如dlSer）是指氨基酸的L-和D-異構體的混合物。術語“可生物相容的”物質可以包括能夠在特定位置與合適的宿主進行反應的物質，例如，沒有任何醫(yī)學上不可接受的毒性或對生物功能的有害作用的物質。術語“生物結合物”可以是指來源于至少兩種生物分子、至少兩種生物聚合物、或至少一種生物分子和至少一種其他生物聚合物的結合物。生物結合物也可以包括來源于三種或更多種生物分子、生物聚合物和/或其組合的結合物，使得至少一種生物分子和/或生物聚合物結合于超過一種生物分子和/或生物聚合物，從而具有分子間交聯(lián)。生物結合物也可以包括已經結合的單獨組分之間的一個或多個聯(lián)接，如分子內交聯(lián)。在某些實施方式中，生物結合物可以具有一個或多個分子間交聯(lián)，例如，該生物結合物可以僅僅是分子間交聯(lián)的，或者可以基本上或主要是分子間交聯(lián)的。在某些實施方式中，生物結合物可以具有一個或多個分子內交聯(lián)，例如生物結合物可以僅僅是分子內交聯(lián)的，或者可以基本上或主要是分子內交聯(lián)的。在某些實施方式中，生物結合物可以同時具有分子間交聯(lián)和分子內交聯(lián)。生物結合物也可以包括在結合一種或多種單獨組分的一個或多個聯(lián)接之間的一個或多個聯(lián)接基團，或者聯(lián)接基團可以位于單獨組分和聯(lián)接之間。例如，聯(lián)接基團可以包括，但不限于環(huán)氧乙烷部分、由重復-(-CH2-CH2-O-)-部分形成的聚合物、聚乙二醇（PEG）、聚氧化乙烯（PEO）和/或它們的衍生物。術語“生物分子”可以是指天然存在的化合物、天然存在的化合物的衍生物（即，天然存在的分子）、天然存在的化合物的合成修飾的類似物，天然存在的化合物的遺傳工程類似物、或天然存在的化合物的遺傳工程修飾類似物。例如，生物分子可以包括，但不限于氨基酸、肽、生物活性肽、遺傳工程肽、蛋白質、糖蛋白、生物活性蛋白質、部分消化蛋白、前活化（pro-active）形式的蛋白質、遺傳工程蛋白質、酶、抗體、遺傳工程抗體、糖、二糖、三糖、低聚糖、多糖、寡核苷酸、RNA、DNA、肽核酸（PNA）、抗原、低聚糖、酶的底物、核受體底物、和/或它們的衍生物或組合。術語“生物聚合物”可以是指天然存在的化合物、天然存在的化合物的衍生物，天然存在的化合物的合成修飾的類似物、天然存在的化合物的遺傳工程類似物、或天然存在的化合物的遺傳工程修飾類似物，其中該生物聚合物可以由單體單元組成。例如，生物聚合物可以包括，但不限于肽、肽核酸（PNA）、寡核苷酸、RNA、DNA、蛋白質、酶、抗體、糖蛋白、三糖、低聚糖、多糖、和/或它們的衍生物。在某些實施方式中，生物聚合物可以是直鏈或支鏈的，或者可以具有特定的三維設計，如星爆結構（starburststructure）或基質樣結構。單體單元的實例包括，但不限于氨基酸、氨基酸衍生物、單糖、二糖、三糖、糖衍生物、PNA單體、核苷酸、核苷、和/或它們的衍生物或組合。在某些實施方式中，本文提供的化合物可以含有手性中心。這樣的手性中心可以是(R)或(S)構型，或者可以是其混合物。例如，本文提供的化合物可以是對映異構體純的、非對映異構體純的或立體異構體純的。在某些實施方式中，本文提供的化合物可以是立體異構混合物或非對映異構體混合物。例如，在氨基酸殘基的情況下，每個殘基可以是L或D形式。例如，天然存在氨基酸殘基的優(yōu)選的構型為L型。術語“互補的反應基團”是指當一起反應時形成共價聯(lián)接的那些基團。例如，氨基反應基團可以是指可直接與含有反應性胺部分反應形成酰胺鍵或胺鍵的部分。例如，硫醇反應基團可以是指可直接與含有反應性巰基基團反應形成穩(wěn)定的硫化物鍵的部分。例如，氨基可以與羧基衍生物互補。例如，氨基可以與羥基衍生物互補。例如，肼基可以與羰基衍生物互補。例如，氧基氨基也可以與羰基衍生物互補。術語“結合物”可以代表包含至少兩個或更多個連接在一起的組分的化合物，例如連接在一起的至少兩個或更多個生物分子和/或生物聚合物。單獨組分可以通過一個或多個共價鍵、一個或多個離子鍵、通過螯合、和/或其聯(lián)接的混合或組合直接地連接在一起。在某些實施方式中，結合物可以包括單獨組分之間的直接聯(lián)接，如離子鍵或共價鍵，例如將至少兩個或更多個生物分子和/或生物聚合物直接連接在一起的酰胺鍵。例如，結合物可以包含第一組分，例如蛋白，其可以通過一個或多個共價鍵直接連接于第二組分（如多糖）以形成結合物（例如，蛋白質-多糖結合物）。在某些實施方式中，結合物可以包含單獨組分之間的聯(lián)接基團，其中所述結合物包含經由聯(lián)接基團將兩種單獨組分結合在一起的至少兩個聯(lián)接。例如，第一生物分子可以與聯(lián)接基團形成第一聯(lián)接，而第二生物分子可以與聯(lián)接基團形成第二聯(lián)接。結合物可以包括在將兩種或多種單獨組分結合在一起的一個或多個聯(lián)接之間的一個或多個聯(lián)接基團，或者可以是在單獨組分和聯(lián)接之間的一個或多個聯(lián)接基團。例如，聯(lián)接基團可以包括，但不限于乙二醇部分、環(huán)氧乙烷部分、由重復-(-CH2-CH2-O-)-部分形成的聚合物，如聚乙二醇（PEG）、或聚氧化乙烯（PEO）、多胺、多元醇和/或其衍生物或組合。術語“交聯(lián)的蛋白質基質”可以是指包含連接于至少一個或多個分子殘基的至少一個或多個交聯(lián)的一個或多個蛋白質殘基，所述分子殘基例如為一個或多個生物分子殘基和/或一個或多個生物聚合物殘基或其衍生物或組合。術語“殘基”可以是指殘存于反應產物中的分子物質或殘余分子物質的部分。例如，殘存于反應產物（如來源于蛋白質分子和交聯(lián)劑反應產生的交聯(lián)產物）中的蛋白質分子物質的部分稱為蛋白質殘基。例如，殘存于反應產物（如來源于含糖分子和蛋白質分子反應產生的交聯(lián)產物）中的含糖分子物質的部分稱為含糖殘基。術語“細針”或“細規(guī)格針”或“細針注射”可以是指，但不限于使用尺寸為約25G或更小的針。較寬范圍規(guī)格的針也可以用于如本文進一步討論的某些應用中。術語“透明質酸”或“HA”可以包括透明質酸和任一種其透明質酸鹽，包括例如透明質酸鈉（鈉鹽）、透明質酸鉀、透明質酸鎂和透明質酸鈣。本文可以使用來自各種來源的透明質酸。例如，透明質酸可以是從動物組織提取的、作為細菌發(fā)酵產物收集的、或者通過生物方法技術以工業(yè)規(guī)模生產的。術語“聯(lián)接（linkage）”可以是指連接在一起的兩個單獨分子組分之間的連接或鍵。在某些實施方式中，可以連接在一起的單獨分子組分可以包括，但不限于生物聚合物、經修飾的生物聚合物如生物學和/或合成修飾的生物聚合物、生物分子、經修飾的生物分子如生物學和/或合成修飾的生物分子。例如，兩個生物分子之間、生物分子和聯(lián)接基團之間、兩個生物聚合物之間、生物聚合物和聯(lián)接基團之間、兩個經修飾的分子之間、和/或其衍生物或組合之間的連接或鍵。在某些實施方式中，聯(lián)接可以對熱分解或水解或兩者都是穩(wěn)定的。在某些實施方式中，聯(lián)接可以是生物相容的。在某些實施方式中，聯(lián)接可以通過形成共價鍵、離子鍵和/或其組合而形成。例如，聯(lián)接可以通過形成一個或多個共價鍵和/或一個或多個離子鍵的組合而形成。在某些實施方式中，共價聯(lián)接可以包括，但不限于形成酰胺鍵、肟鍵、腙鍵、三唑鍵、硫化物鍵、醚鍵、胺鍵（如仲胺鍵或叔胺鍵）、烯醇醚鍵、酯鍵、二硫鍵或其混合物。在某些實施方式中，酰胺鍵可以例如在含糖生物分子的羧酸基團或活化的羧酸部分和含氨基酸生物分子的胺基之間形成，所述含氨基酸生物分子為例如蛋白質，例如包含賴氨酸殘基的蛋白質。例如，在某些實施方式中，酰胺鍵可以位于例如包含修飾的糖部分（如用聯(lián)接基團部分修飾的多糖）的生物分子和包含氨基酸部分的生物分子（如蛋白質）之間。例如，酰胺鍵可以位于例如包含糖部分的生物分子和包含修飾的氨基酸部分的生物分子（如用聯(lián)接基團修飾的蛋白質）之間。術語“修飾的”可以是指通過天然存在的方法、合成化學修飾、生物工程等、和/或其組合或變化對分子（如生物分子或生物聚合物）和/或分子上的部分的修飾。在某些實施方式中，分子和/或分子上的部分可以通過轉化分子上早已存在的部分，例如通過合成化學轉化方法和/或天然存在的方法，連接另外的部分和/或其組合或變化來進行修飾。例如，在某些實施方式中，分子上的部分的連接可以通過形成共價鍵來進行。在某些實施方式中，例如，包含轉化部分的修飾分子可以能夠或完全能夠與互補的反應基團反應形成聯(lián)接、交聯(lián)和/或其組合或衍生物。在某些實施方式中，例如，包含連接部分的修飾分子可以能夠或完全能夠與互補的反應基團反應形成聯(lián)接、交聯(lián)和/或其組合或其衍生物。在某些實施方式中，包含轉化部分和/或連接部分的修飾分子可以包括例如反應基團、連接基團、聯(lián)接基團、互補的反應基團、和/或其組合或衍生物。在某些實施方式中，包含轉化部分和/或連接部分的修飾分子可以包括部分如反應基團，其可以通過合成化學修飾或天然存在的方法形成和/或脫保護，以能夠反應形成聯(lián)接或交聯(lián)，例如與互補的反應基團反應。例如，在某些實施方式中，修飾的分子可以通過活化化學基團如羧基、連接聯(lián)接基團、使反應性部分脫保護、和/或其組合或變化來得到。如本文使用的術語多糖的“摩爾”或“摩爾濃度（M）”是指聚合物內包含的重復單體單元的摩爾數(shù)。術語“多糖”可以包括例如包含至少三個糖殘基的含糖分子，所述至少三個糖殘基為例如至少三個糖單體重復單元，如至少三個單糖重復單元、至少三個二糖重復單元、至少三個三糖重復單元、至少三個低聚糖重復單元、和/或其組合或衍生物。在某些實施方式中，多糖可以包含相同和/或不同的糖殘基，例如一個或多個相同和/或不同的糖殘基、兩個或更多個相同和/或不同的糖殘基、三個或多個相同和/或不同的糖殘基、和/或其組合或衍生物。術語“含糖分子”可以包括，例如包含單糖、二糖、三糖、低聚糖和/或多糖的分子。在某些實施方式中，例如，含糖分子可以包含包含單糖、二糖、三糖、低聚糖和/或多糖的單體重復單元。在某些實施方式中，含糖分子可以包含一個或多個相同或不同的糖單體重復單元，例如含糖分子可以包括一個或多個相同或不同的二糖、三糖、低聚糖和/或多糖單體重復單元。在某些實施方式中，含糖殘基可以衍生自低聚糖、修飾的低聚糖、多糖、修飾的多糖和/或其衍生物，或者可以衍生自含糖交聯(lián)分子，例如低聚糖交聯(lián)接頭、修飾的低聚糖交聯(lián)接頭、多糖交聯(lián)接頭、修飾的多糖交聯(lián)接頭、和/或其衍生物。術語“蛋白質”或“蛋白質單位”或“蛋白質單體”可以包括，例如全長蛋白質、基本上全長蛋白質、蛋白質片段、生物活性蛋白質、生物活性蛋白質片段、前活化形式的蛋白質、非活化蛋白質、包含活性位點的蛋白質、包含結合位點的蛋白質、包含蛋白酶剪切位點的蛋白質、部分消化蛋白、部分水解蛋白、包含一個或多個單點突變的蛋白質、包含約50%至約99.99%的全長蛋白質的蛋白質、在全長蛋白質中包含約50%至約99.99%的氨基酸保守位點的蛋白質。在某些實施方式中，蛋白質可以包含例如包含至少一個生物活性肽序列的肽、包含至少一個受體結合位點的肽、包含至少一個蛋白酶剪切位點的肽、寡肽、多肽、和/或它們的組合或衍生物。在某些實施方式中，蛋白質可以包括例如包含至少一個賴氨酸殘基、至少一個精氨酸殘基、至少一個半胱氨酸殘基、至少一個絲氨酸殘基、至少一個蘇氨酸殘基、至少一個酪氨酸殘基、至少一個谷氨酸殘基、至少一個天冬氨酸殘基、至少一個脯氨酸殘基和/或其組合或衍生物的蛋白質。在某些實施方式中，蛋白質可以包括例如包含至少一個二聚體殘基，如至少一個胱氨酸殘基的蛋白質。在某些實施方式中，蛋白質可以包括例如包含至少一個胺基的蛋白質、包含至少一個具有胺的側鏈的蛋白質、包含至少一個具有胺的氨基酸殘基的蛋白質，例如包含至少一個賴氨酸殘基的蛋白質、包含至少一個精氨酸殘基的蛋白質、和/或其組合或衍生物。例如，在某些實施方式中，蛋白質可以包括包含富含胺區(qū)域的蛋白質，如富含賴氨酸區(qū)域或富含精氨酸區(qū)域、和/或組合或衍生物。在某些實施方式中，蛋白質可以包括例如聚(胺-殘基)蛋白質，如聚賴氨酸、聚精氨酸和/或其組合或衍生物。在某些實施方式中，蛋白質可以包括均聚物或共聚物，例如氨基酸殘基的均聚物或共聚物。例如，在某些實施方式中，蛋白質包括賴氨酸殘基、精氨酸殘基、和/或組氨酸殘基的均聚物或共聚物，如包含富含賴氨酸區(qū)域的蛋白質。在某些實施方式中，例如，包含富含賴氨酸區(qū)域的蛋白質可以包括至少兩個賴氨酸單元，如包含聚賴氨酸區(qū)域，例如包含至少5個賴氨酸單元。在某些實施方式中，例如，包含富含精氨酸區(qū)域的蛋白質可以包括至少兩個精氨酸單元，如包含聚精氨酸區(qū)域，例如包含至少5個精氨酸單元。在某些實施方式中，其可以包括至少兩個不同的富含殘基區(qū)域，例如包含至少一個富含賴氨酸區(qū)域和至少一個富含精氨酸區(qū)域和/或其組合或衍生物的蛋白質。在某些實施方式中，蛋白質可以包括，但不限于彈性蛋白原、彈性蛋白、白蛋白、膠原蛋白、膠原蛋白單體、免疫球蛋白、胰島素、和/或其衍生物或組合。在某些實施方式中，蛋白質可以包括修飾的蛋白質或蛋白質衍生物。在某些實施方式中，例如，修飾的蛋白質或蛋白質衍生物可以是由天然存在的過程、合成化學修飾和/或其組合制備的和/或由其衍生的或通過其制備的。在某些實施方式中，例如，修飾的蛋白質或蛋白質衍生物可以是由天然存在的過程（如在真核細胞、原核細胞和/或其組合中存在的）制備的和/或由其衍生的或通過其制備的。例如，在某些實施方式中，天然存在的過程可以包括蛋白合成、蛋白降解、水解、酶促過程和/或結合、氧化、還原、糖基化、胺化、羧化、結合氨基酸殘基或聯(lián)接基團（有時稱為接頭基團）、氨基酸殘基或聯(lián)接基團的修飾和/或衍生化、和/或其組合或變化。在某些實施方式中，例如，修飾的蛋白質或蛋白質衍生物可以是由合成化學修飾制備的和/或由其衍生的或通過其制備的。例如，在某些實施方式中，合成化學修飾可以包括氧化、還原、結合、水解、胺化、酯化、酰胺化、還原性胺化、羧基活化、羧基修飾、結合氨基酸殘基或聯(lián)接基團（有時稱為接頭基團）、氨基酸殘基或聯(lián)接基團的修飾和/或衍生化、和/或其組合。在某些實施方式中，修飾的蛋白質或蛋白質衍生物可以通過固相合成、液相合成和/或其組合制備。在某些實施方式中，修飾的蛋白質或蛋白質衍生物可以通過包含富含載胺氨基酸殘基（如富含賴氨酸的區(qū)域）的蛋白質制備。在某些實施方式中，蛋白質殘基可以衍生自如本文公開的蛋白質和/或其衍生物。術語“聯(lián)接基團”可以包括例如結合一個或多個單組分的部分，如結合蛋白質和多糖的部分。術語“合成分子”可以是指非天然來源的小分子或聚合物。例如，合成分子是經由固相合成、液相合成或其組合通過化學修飾制備的。某些實施方式提供采用當與蛋白結合時能夠形成共價鍵的化學基團修飾或衍生化含糖分子如多糖的方法。多糖可以以能夠使其保持可溶、或完全可溶于水中和/或鹽溶液中的方式進行修飾。通過例如沉淀或過濾除去在多糖修飾之后的大部分剩余反應物。然后，修飾的含糖分子，如多糖可以用作交聯(lián)劑。接著，可以將修飾的多糖溶液與所需蛋白質混合，并使其反應。修飾的多糖上的修飾化學基團與蛋白質反應，形成生物材料。與利用常規(guī)方法得到的生物材料相比，如此得到的生物材料具有某些獨特的性質。例如，由使用引起分子內交聯(lián)的化學物質交聯(lián)的蛋白質產生的制劑通常是不透明的，而是通常為帶有淺黃色或淺褐色的白色。由某些公開的方法得到的制劑是透明無色的制劑。進一步地，用化學物質例如戊二醛交聯(lián)的蛋白質可具有殘留在制劑中的殘余化學物，其會在體內引起炎癥和/或降低產物的生物相容性。由一些公開的方法得到的制劑基本上不含任何這種殘余化學物質。利用化學交聯(lián)劑或短的交聯(lián)分子得到的制劑通常會產生需要微粉化或均質化以使得能夠使用注射器或針進行遞送的生物材料；或者需要交聯(lián)水平保持在能夠使針擠出的最小水平的生物材料。采用化學物質例如戊二醛交聯(lián)的蛋白質，其交聯(lián)程度太大而不能通過細規(guī)格的針擠出。通過一些公開的方法制備的制劑可以通過細規(guī)格的針擠出，而不需要進一步處理，或者實質的進一步處理。某些公開的制劑甚至在針擠出之后也能保留足夠的粘結性（cohesiveness），使得可以由針擠出足夠長的物質的絲（string）而不會出現(xiàn)物質斷裂（例如>10cm、>12cm、>15cm、>18cm或>20cm等）。進一步地，使用本文描述的某些實施方式，基于全長蛋白質且使用修飾的多糖作為交聯(lián)劑的制劑產生柔性基質結構，其能夠產生相當堅固的（firm）生物材料，該生物材料仍然保持足夠的柔性以允許通過細規(guī)格針排出。交聯(lián)的蛋白質基質在所公開的實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以不同。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以衍生自一個或多個蛋白質分子（如一個或多個全長蛋白質）與一個或多個含糖分子（如一個或多個修飾的含糖分子）的交聯(lián)。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與一個或多個含糖殘基交聯(lián)的一個或多個蛋白質殘基，如糖交聯(lián)的蛋白質、二糖交聯(lián)的蛋白質、三糖交聯(lián)的蛋白質、低聚糖交聯(lián)的蛋白質、或多糖交聯(lián)的蛋白質。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如經由一個或多個聯(lián)接連接一個或多個多糖殘基的一個或多個蛋白質殘基之間的一個或多個連接，例如，一個或多個蛋白質殘基可以經由一個或多個聯(lián)接連接一個或多個含糖殘基或將其連接在一起。交聯(lián)的蛋白基質可以包括例如至少一個與至少一個含糖殘基（例如低聚糖殘基或多糖殘基）連接的蛋白質殘基，通過一個或多個共價鍵和/或一個或多個離子鍵或其組合連接。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如聯(lián)接，即一個或多個交聯(lián)，例如一個或多個分子間交聯(lián)和/或一個或多個分子內交聯(lián)，或其混合或組合。交聯(lián)的蛋白質基質可以是分子間交聯(lián)的、基本上分子間交聯(lián)的、分子內交聯(lián)的、基本上分子內交聯(lián)的、和/或同時為分子間和分子內交聯(lián)的。交聯(lián)的蛋白質基質可以衍生自一種或多種交聯(lián)劑，如含糖交聯(lián)劑，例如多糖或修飾的多糖，如透明質酸或修飾的透明質酸。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以衍生自一種或多種交聯(lián)劑，并且該一種或多種交聯(lián)劑可以連接和/或交聯(lián)一個或多個蛋白質分子和/或形成連接同一個蛋白質分子的一個或多個聯(lián)接。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括基質結構，例如連接和/或交聯(lián)一個或多個含糖交聯(lián)劑殘基的蛋白質殘基的基質。交聯(lián)的蛋白質基質的基質結構可以提供柔韌性，其中交聯(lián)的蛋白質基質之內的交聯(lián)度可以改變所提供的柔韌性。在某些實施方式中，使用衍生自基本上不含如本文公開的分子內交聯(lián)劑的全長蛋白質的交聯(lián)的蛋白質基質可以得到組織更相容、增大組織向內生長（in-growth）、增大組織再生長或其組合的制劑。這樣的制劑也可以被重塑（remodel）為更典型的且期望的結構和/或結合到新組織中。在某些實施方式中，使用衍生自基本上不含如本文公開的分子內交聯(lián)劑的基本上全長蛋白質的交聯(lián)的蛋白質基質可以得到組織更相容、增大組織向內生長、增大組織再生長或其組合的制劑。這樣的制劑也可以被重塑為更典型的且期望的結構和/或結合到新組織中。本文公開的其他實施方式可以在交聯(lián)的蛋白質基質的蛋白質殘基中具有一定的分子內交聯(lián)度，且仍然提供使用可接受的足夠的性質。在某些實施方式中，使用衍生自基本上全長蛋白質（其中蛋白質殘基的結構基本上沒有被交聯(lián)方法所掩蔽）的交聯(lián)的蛋白質基質可以得到組織更相容、增大組織向內生長、再生長或其組合的制劑。這樣的制劑也可以被重塑為更典型的且期望的結構和/或結合到新組織中。交聯(lián)度在某些實施方式中，可以通過在多糖的修飾、衍生化和/或處理期間使用特定比例的化學試劑保持含糖交聯(lián)劑如多糖交聯(lián)劑的溶解度。在某些實施方式中，為了確保衍生化多糖本身不交聯(lián)，可能需要在衍生化過程之后使用一些預防措施。例如，在其沉淀之后，衍生化的HA可能需要相當快地處理，以便沖洗其余反應物。在某些實施方式中，沉淀衍生化的HA、沖洗反應物、和在水溶液中再懸浮可以在約30分鐘內進行?？梢愿鶕?jù)特定情形使用其他時間周期。例如，沉淀衍生化的HA、沖洗反應物、和在水溶液中再懸浮可以在至少20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、1小時或2小時之內進行。在某些實施方式中，為了增加溶出速度（其可能花費數(shù)小時，例如至少1、2或3小時），在溶解之前將衍生化的HA沉淀物進一步分成較小的塊也可能是有用的。一旦溶解，在某些應用中，可能期望在一定時間段之內（例如，在至少1、2、3、4或24小時之內）使用衍生化的多糖。然而，這可能不是必需的，而是取決于特定制劑和/或應用。在某些實施方式中，用于在制劑中形成交聯(lián)的蛋白質基質使用的蛋白質分子可能受能夠使其被多糖交聯(lián)劑交聯(lián)的合適反應基團的要求的限制。在某些實施方式中，至少或約50%的蛋白質單體可以與生物分子和/或生物聚合物交聯(lián)，所述生物分子和/或生物聚合物如含糖分子，例如低聚糖、多糖或其衍生物。在其他實施方式中，至少或約40%、50%、60%、70%、90%、95%、98%或99%的蛋白質單體可以與生物分子和/或生物聚合物或其衍生物交聯(lián)。在某些實施方式中，蛋白質單體可以與生物分子和/或生物聚合物基本上交聯(lián)或完全交聯(lián)。在某些實施方式中，每個多糖的每個可能交聯(lián)位點的交聯(lián)數(shù)量可以是至少0.5%、1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或50%。在某些實施方式中，沒有結合到交聯(lián)的蛋白質基質復合物中且保持未結合的蛋白質單元或蛋白質單體的數(shù)量可以是至少1%、3%、5%、7%、9%、10%、15%或20%。在某些應用中，期望將在形成交聯(lián)的蛋白質基質或復合物之后保持未結合的蛋白質單元的百分數(shù)降至最小。例如，在某些應用中，期望在交聯(lián)之后的制劑中具有少于20%、15%、10%、7%、5%、3%或1%的未結合的蛋白質單元。沒有未結合的蛋白質單元或蛋白質單體是本發(fā)明的一些應用的益處之一。百分比可能取決于許多需要考慮的事項，包括但不限于對于特定應用所選擇的蛋白質和所選擇的化學過程類型。例如，對于彈性蛋白原和賴氨酸鍵，在某些應用中位點的可能數(shù)目通常為約30至約35，因此該比例可以為1-35（或約3%至100%）。關于該組合，交聯(lián)的蛋白質基質的優(yōu)選百分比可以是與一個或多個生物分子和/或生物聚合物（如含糖分子或其衍生物）交聯(lián)的一個或多個蛋白質分子上位點的可能數(shù)目的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。另一個需要考慮的事項是含糖分子如多糖的長度，以及用于活化、衍生化或修飾的化學過程。例如，在某些應用中，可以用活化劑如NHS活化低聚糖或多糖羧基上一個或多個羧酸基的1%至30%、1%至40%、3%至30%、或5%至30%，以形成可用于與蛋白質交聯(lián)的1%至30%、1%至40%、3%至30%、或5%至30%的活化酯位點。例如，在某些應用中，可以用活化劑如烯丙基縮水甘油醚活化低聚糖或多糖上一個或多個羥基的1%至30%、1%至50%、3%至30%、或5%至30%，并且用鹵化物如溴進一步修飾，以形成可用于與蛋白質交聯(lián)的1%至30%、1%至40%、3%至30%、5%至30%或1%至50%的活化環(huán)氧或鹵代醇位點。也可以使用或多或少有效的其他化學過程。另一個需要考慮的事項是保持剩下的可呈單體（即，未結合的）的蛋白質單元的百分比低，例如5%或更低。在某些實施方式中，蛋白質單體可以與生物分子和/或生物聚合物交聯(lián)，以使得約40%至約99%的蛋白質單體可以結合到制劑中。在其他實施方式中，蛋白質單體可以交聯(lián)，使得約30%至約99%、約40%至約99%、約50%至約100%、約60%至約100%、約70%至約99%、80%至約100%、或約90%至約100%的蛋白質單體可以結合到制劑中。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以具有對生物降解、降解、熱解、水解和/或其組合在一定時間段內的可接受的抗性。在某些實施方式中，包括交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以具有對生物降解、降解、熱解、水解和/或其組合在一定時間段內的可接受的抗性。根據(jù)交聯(lián)的蛋白質基質，所述時間段可以是至少1、2、3、6、9或12個月。根據(jù)包括交聯(lián)的蛋白質基質的制劑，所述時間段可以是至少1、2、3、6、9或12個月。在某些實施方式中，包括交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以在體內保持可接受的完整性和/或持續(xù)1周至1年。取決于特定的制劑，所述時間段可以變化。例如，包括交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以持續(xù)至少1周至4周、2-8周、1-3個月、1-6個月、3-9個月或6-12個月、1周至24個月、或12個月至24個月。在某些實施方式中，包括交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以在體內持續(xù)存在至少1周、2周、4周、2個月、3個月、6個月、9個月、12個月、15個月或24個月。例如，在某些實施方式中，包括交聯(lián)的蛋白質的制劑，如0.05ml、0.1ml、0.2ml、或0.5ml、1ml、2ml或3ml的植入物可以在體內持續(xù)存在約1周至約2年。在某些實施方式中，制劑內的交聯(lián)的蛋白質基質組分可以在該制劑儲存期間對熱解穩(wěn)定、抗熱解、對水解穩(wěn)定、抗水解、或其組合。例如，制劑可以在約2-8°C的溫度儲存下穩(wěn)定至少6個月、12個月或24個月。制劑內的交聯(lián)的蛋白質基質組分可以在制劑儲存期間對熱解穩(wěn)定、抗熱解、對水解穩(wěn)定、抗水解、或其組合，如果儲存在合適的溫度例如低于或在約-10°C下，則其可以穩(wěn)定好幾年。制劑內的交聯(lián)的蛋白質基質組分可以在將該制劑儲存在室溫下至少1周、2周、3周、4周、1個月、2個月、6個月或12個月期間是穩(wěn)定的和/或抗熱解和/或抗水解。在某些實施方式中，制劑內的交聯(lián)的蛋白質基質組分可以在儲存在室溫下至少1周至12個月、2周至8個月、1周至5周、或1個月至6個月期間是穩(wěn)定的和/或抗熱解和/或抗水解。同源和異源交聯(lián)的蛋白質基質交聯(lián)的蛋白質基質可以在結構和組成方面不同。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如，包含一個或多個與一個或多個均質或同源生物分子（如同源生物聚合物）交聯(lián)的均質或同源蛋白質殘基的交聯(lián)的蛋白質基質。例如，同源含糖分子。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括一個或多個與一個或多個異質或異源生物分子殘基（例如，兩個或更多個不同的生物分子殘基，如異源生物聚合物殘基）交聯(lián)的同源蛋白質殘基。例如，異源含糖殘基。與一個或多個不同分子或兩個或更多個不同分子，例如不同的生物分子或生物聚合物和/或其衍生物或其組合的蛋白質。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括一個或多個與一個或多個不同的含糖殘基交聯(lián)的蛋白質殘基，所述一個或多個不同的含糖殘基如一個或多個不同的低聚糖或多糖殘基和/或其組合。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括一個或多個與一個或多個不同的多糖殘基的混合物，如透明質酸殘基和羧甲基纖維素殘基的摻合物或混合物交聯(lián)的蛋白質殘基。交聯(lián)的蛋白質基質可以通過使一個或多個蛋白質分子與一個或多個不同的活化多糖混合物（例如，活化的透明質酸和活化的羧甲基纖維素的摻合物或混合物）交聯(lián)來制備。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如，包含異源蛋白質殘基例如兩個或更多個不同的蛋白質殘基的交聯(lián)的蛋白質基質，其與同源生物分子殘基，如同源生物聚合物殘基，例如同源含糖（saccharid）分子殘基交聯(lián)。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如，包含異源蛋白質殘基例如兩個或更多個不同的蛋白質殘基的交聯(lián)的蛋白質基質，其與異源生物分子殘基，例如兩個或更多個不同的生物分子殘基，如異源生物聚合物殘基，例如異源含糖殘基交聯(lián)。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與分子殘基交聯(lián)的一個或多個不同的蛋白質殘基，例如兩個或更多個不同的蛋白質殘基，所述分子殘基例如生物分子殘基、生物聚合物殘基、和/或其衍生物或其組合。交聯(lián)的蛋白質包括一個或多個不同的蛋白質殘基，例如，兩個或更多個不同的蛋白質殘基，其與含糖殘基如低聚糖或多糖殘基交聯(lián)。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與一個或多個不同的分子殘基交聯(lián)的一個或多個不同的蛋白質殘基，例如，兩個或更多個不同的蛋白質殘基，所述一個或多個不同的分子殘基為例如一個或多個不同的生物分子殘基、一個或多個不同的生物聚合物殘基、和/或其衍生物或其組合。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與一個或多個不同的含糖殘基交聯(lián)的一個或多個不同的蛋白質殘基，例如兩個或更多個不同的蛋白質殘基，所述一個或多個不同的含糖殘基為例如一個或多個不同的低聚糖殘基和/或一個或多個不同的多糖殘基，如兩個或更多個不同的低聚糖殘基和/或兩個或更多個不同的多糖殘基，或其混合物或組合。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與一個或多個不同的分子殘基交聯(lián)的蛋白質殘基，所述一個或多個不同的分子殘基為例如一個或多個不同的生物分子殘基、一個或多個不同的生物聚合物殘基、和/或其衍生物或其組合。例如，在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括與一個或多個不同的含糖殘基交聯(lián)的蛋白質殘基，所述一個或多個不同的含糖殘基為例如兩個或更多個不同的含糖殘基，例如一個或多個不同的低聚糖殘基和/或不同的多糖殘基，如兩個或更多個不同的低聚糖殘基和/或兩個或更多個不同的多糖殘基，或其混合物或組合。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括例如每個多糖殘基一個或多個蛋白質殘基，如每個多糖殘基兩個或更多個蛋白質殘基。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括，例如每個蛋白質殘基一個或多個多糖殘基，如每個蛋白質殘基兩個或更多個多糖殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括例如比例為約0.1%-1.5%的多糖殘基與約2.5%-10%的蛋白質殘基。其他的比例實例為：0.75%-1.5%的多糖殘基與3%-6%的蛋白質殘基；0.1%-1.5%多糖殘基與0.1%-6%的蛋白質殘基；0.25%-0.85%的多糖殘基與1%-4%的蛋白質殘基；0.1%-3%的多糖殘基與0.5%-15%的蛋白質殘基；小于或等于3%的多糖殘基與至少0.5%的蛋白質殘基；至少0.25%的多糖殘基與小于或等于15%的蛋白質殘基；至少0.01%的多糖殘基與小于或等于12%的蛋白質殘基；或至少1%的多糖殘基與小于或等于8%的蛋白質殘基。可以使用其他比例，這取決于衍生交聯(lián)的蛋白質基質所使用的蛋白質分子的期望性質和結構。例如，在較軟的制劑中，使用的多糖分子的量可以減少。例如，在使用較長鏈糖的一些制劑中，可以使用較少量的多糖分子，而仍然產生可接受的制劑。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括生物相容的和/或可生物利用的物質。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以是和/或衍生自生物相容的和/或可生物利用的物質；或者交聯(lián)的蛋白質基質可以是生物相容的和/或可生物利用的。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括和/或衍生自水溶性的交聯(lián)劑，例如水溶性的含糖交聯(lián)劑或水溶性的修飾的含糖交聯(lián)劑，如水溶性的低聚糖交聯(lián)劑或水溶性的修飾的低聚糖交聯(lián)劑。交聯(lián)的蛋白質基質也可以包括和/或衍生自水溶性的含多糖交聯(lián)劑，或水溶性的修飾的含多糖交聯(lián)劑。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括例如生物分子-蛋白質結合物或生物聚合物-蛋白質結合物或其組合。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括含糖分子-蛋白質結合物，如糖-蛋白質結合物、二糖-蛋白質結合物、三糖-蛋白質結合物、低聚糖-蛋白質結合物、多糖-蛋白質結合物和/或其組合。含糖分子在某些實施方式中，含糖分子如低聚糖可以包括一個或多個二糖、一個或多個三糖、兩個或更多個二糖、兩個或更多個三糖、三個或更多個二糖、三個或更多個三糖、和/或其組合或衍生物。例如，低聚糖可以包括至少或約3、4、5、6、7、8或11個糖殘基或單元。在某些制劑中，衍生化交聯(lián)的蛋白質基質所使用的低聚糖也可以包括約3至約15、3至約14、約3至約12、約3至約11、約3至約10、約4至約15、約5至約15、或約至約10個糖殘基或單元。在某些實施方式中，多糖可以包括一個或多個二糖單元或殘基、一個或多個三糖單元或殘基、一個或多個低聚糖；兩個或更多個二糖單元或殘基、兩個或更多個三糖單元或殘基、兩個或更多個低聚糖；三個或更多個二糖單元或殘基、三個或更多個三糖單元或殘基、三個或更多個低聚糖、或其組合。例如，多糖可以包括至少或約25、50、100、200、500、800、1,000、1,200、1,500、2,000、5,000、10,000或20,000個糖單元或殘基。在某些制劑中，衍生化交聯(lián)的蛋白質基質所使用的多糖也可以包括約25至約5000、500至約2000、約3000至約5000、約150至約250、約175至約225、約100至約175、約150至約200、或約100至約200個糖殘基或單元。在某些實施方式中，可以使用在約100至300個糖單元或殘基范圍內，例如約200個糖單元或殘基的HA。在其他實施方式中，可以使用在約200至20,000個糖單元或殘基范圍內的HA。在其他實施方式中，可以使用在約500至2000個糖單元或殘基范圍內的HA。在其他實施方式中，可以使用在3000至5000個糖單元或殘基范圍內的HA。在其他的制劑中，使用的HA可以包括至少或約25、50、75、100、125、150、175、200、500、800、1,000、1,200、1,500、2,000、5,000、10,000或20,000個糖單元或殘基。在某些制劑中，衍生化交聯(lián)的蛋白質基質所使用的HA也可以包括約25至約5000、500至約2000、約3000至約5000、約150至約250、約175至約225、約100至約175、約150至約200、或約100至約200個糖殘基或單元。含糖分子如多糖可以具有低分子量、中等分子量或高分子量。例如，組合物或制劑可以獲自低分子量、中等分子量或高分子量的多糖或多糖交聯(lián)劑。低分子量含糖分子可以包括的分子量為約25,000至約300,000道爾頓，例如約50,000至約275,000道爾頓、約100,000至約250,000道爾頓、或約50,000至約300,000道爾頓。中等分子量含糖分子可以包括的分子量為約300,000至約900,000道爾頓、約600,000至約800,000、約500,000至約900,000、或約500,000至約750,000道爾頓。高分子量含糖分子可以包括的分子量為約900,000至約4,000,000道爾頓、約1,000,000至約3,500,000、約900,000至約3,500,000、約1,500,000至約3,700,000、或約1,250,000至約3,000,000道爾頓。也可以預期可以使用具有的分子量范圍為本文給出的分子量組合的多糖。例如，可以使用具有分子量范圍為約25,000至約750,000、約50,000至約900,000、約100,000至約750,000、或約250,000至約500,000道爾頓的多糖。也可以選擇其他范圍。在某些實施方式中，能夠使用低分子量至中等分子量的多糖來從制備/加工前景而言比較容易的進行這些方法。例如，使用較低分子量HA能夠進行HA修飾、沉淀和沖洗，并且HA保持相當?shù)驼承匀芤海淇梢砸子谟米鹘宦?lián)劑。使用較高分子量多糖可以提供另外的處理問題(例如，粘性溶液、混合、通風的問題等)，但是在某些實施方式中，可以使用寬范圍的分子量來獲得期望的結果。處理較高分子量多糖的一個方法可以是使用更稀的溶液。例如，（例如，使用1,500,000道爾頓的HA，但是使用0.1%的溶液來保持粘度降低）。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括濃度為約0.1%至約15%的含糖殘基，如多糖殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括如下濃度的含糖殘基：約0.1%至約10%、約0.2%至約5%、約0.25%至約5%、約0.1%至約3.5%、約0.20%至約3%、約0.25%至約3%、約0.5%至約4%、約0.5%至約3%、約0.75%至約3.5%、約1%至約3%、約1.5%至約3.5%、或約0.2%至約4%。含糖分子，如多糖可以包括至少或約500道爾頓的分子量，例如分子量為至少或約5,000、10,000、25,000、50,000、100,000、150,000、200,000、250,000、300,000、500,000、750,000或1,500,000道爾頓。在某些實施方式中，分子如生物分子或生物聚合物可以包括至少一個可連接的部分，如至少一個可交聯(lián)部分，例如羧基、羥基、胺、硫醇、醇、鏈烯、炔、氰基基團，或疊氮化物、或其修飾物、衍生物、或其組合。例如，在某些實施方式中，生物分子或生物聚合物如蛋白質或含糖分子，例如低聚糖或多糖，可以包括至少一個可交聯(lián)的部分，如羧基、羥基、胺、硫醇、醇、鏈烯、炔、氰基基團、或疊氮化物、和/或其修飾物、衍生物、或它們的組合。在某些實施方式中，可連接的部分，如可交聯(lián)的部分，可以是能夠活化的部分，例如羧基部分或羥基部分，以使得可連接的部分的活化允許和/或促進與相同和/或第二分子上互補的反應基團的反應，形成聯(lián)接（例如共價鍵），與相同和/或第二分子反應，例如形成與第二分子如第二生物分子或生物聚合物的交聯(lián)。在某些實施方式中，分子如生物分子或生物聚合物，例如含糖分子或蛋白質，可以包括聯(lián)接基團，以使得該聯(lián)接基團能夠連接相同和/或第二分子，例如第二生物分子或生物聚合物。例如，在某些實施方式中，聯(lián)接基團可以包括至少一個或多個可連接的部分，由此能夠使聯(lián)接基團連接相同和/或第二分子。在某些實施方式中，例如，分子如含糖分子或蛋白質可以包括含有至少一個或多個可連接部分的聯(lián)接基團，從而經由聯(lián)接基團上可連接部分形成的鍵使分子與第二分子形成聯(lián)接，如交聯(lián)，所述第二分子如第二生物分子或生物聚合物，例如蛋白質或含糖分子。例如，在某些實施方式中，含糖分子如寡糖、多糖或修飾的多糖可以包括含有至少一個或多個可連接部分的聯(lián)接基團，如羧基或活化的或修飾的羧基，從而經由寡糖、多糖或修飾的多糖的聯(lián)接基團上可連接部分形成的酰胺聯(lián)接，使多糖與第二分子形成聯(lián)接，如交聯(lián)，所述第二分子如蛋白質，例如包含胺的蛋白質。在某些實施方式中，含糖分子如寡糖或多糖可以包括帶負電荷的官能團或帶正電荷的官能團，例如包含帶負電荷的官能團或帶正電荷的官能團的寡糖；或者包含帶負電荷的官能團或帶正電荷的官能團的多糖；和/或其衍生物或組合。例如，在某些實施方式中，含糖分子如寡糖或多糖可以包括艾杜糖醛酸、葡萄糖醛酸或N-乙酰葡糖胺殘基。在某些實施方式中，例如含糖分子可以包括，例如包含羧基的寡糖或包含羧基的多糖，如包含多糖的聚羧酸，例如透明質酸或羧甲基纖維素；包含胺基的寡糖或包含胺基的多糖；和/或其衍生物。結構特征—直鏈或支鏈在某些實施方式中，含糖分子可以包括直鏈寡糖、支鏈寡糖、直鏈多糖和/或支鏈多糖。含糖分子可以包括，但不限于寡糖和/或多糖，如透明質酸（“HA”）；纖維素衍生物，例如羧基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素（“HPC”）、羥丙基甲基纖維素（“HPMC”）、羥丙基纖維素羧甲基直鏈淀粉（“CMA”）；黃原膠；瓜爾膠；α-葡聚糖；β-葡聚糖；β-1,4-葡聚糖；β-1,3-葡聚糖；藻酸鹽；羧甲基葡聚糖；糖胺聚糖衍生物；軟骨素-6-硫酸鹽；硫酸皮膚素;肝素;硫酸肝素；聚乳酸（“PLA”）；或生物材料,如聚乙醇酸（“PGA”）；聚(乳酸-共-乙醇酸)（“PLGA”）；磷酸三鈣（“TCP”）；1-羥磷灰石（“PAH”）；和/或其可藥用鹽或衍生物，或其組合。含糖分子可以包括果膠和/或其衍生物，包括直鏈和支鏈的寡糖和/或多糖。含糖分子可以是由天然存在的過程、合成化學修飾和/或其組合制備的和/或由其衍生的或通過其制備的。例如，含糖分子可以包括由真核細胞或原核細胞制備的和/或由其衍生的含糖分子，例如，通過經由真核細胞或原核細胞或其組合進行的天然存在的過程。例如，含糖分子可以包括由合成化學修飾如固相合成制備的和/或由其衍生的含糖分子。含糖分子包括在固相多糖合成期間的接頭。含糖分子可以包括基本上可溶的含糖分子，例如完全可溶的、部分可溶的，如基本上可溶于水溶液和/或生理溶液中的寡糖或多糖。含糖分子可以包括例如聚陰離子糖、聚陽離子糖、生物相容性糖分子、生物可利用糖、生物可降解的糖、生物可吸收的糖、生物可再吸收的糖、或其組合。蛋白質和多糖在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括例如具有電子電荷特征的含糖殘基組分，其補充了交聯(lián)的蛋白質基質中蛋白質殘基組分的電子電荷特征。各種組分的電荷補充特征可以有助于和/或促進組分結合在一起。各種組分的電荷補充特征可以增加組合物的一般整體性質。交聯(lián)的蛋白質基質可以進一步包括可以補充具有電子電荷特征的含糖殘基組分的藥學和/或生理學可接受的抗衡離子，或者可以補充蛋白質殘基組分的電子電荷特征的藥學和/或生理學可接受的抗衡離子，或兩者。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括聚陰離子含糖殘基組分，如交聯(lián)到帶正電荷的蛋白質殘基的聚陰離子多糖殘基。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括聚陽離子含糖殘基組分，如交聯(lián)到帶負電荷的蛋白質殘基的聚陽離子多糖殘基。蛋白質和多糖的選擇在某些實施方式中，可以基于得到的生物材料產品的最終功能要求選擇包括在交聯(lián)的蛋白質基質內的蛋白質組分如彈性蛋白原。例如，包括在交聯(lián)的蛋白質基質中的蛋白質殘基組分可以包括蛋白質殘基，如白蛋白或膠原蛋白殘基。在某些實施方式中，可以基于得到的生物材料產品的最終生物活性要求選擇包括在交聯(lián)的蛋白質基質內的蛋白質殘基組分。在某些實施方式中，可以基于期望在得到的生物材料產品中包括的蛋白質殘基的組合來選擇包括在交聯(lián)的蛋白質基質內的蛋白質殘基組分。在某些實施方式中，包括在交聯(lián)的蛋白質基質制劑中的蛋白質殘基組分可以在制劑方面不同。例如，在某些實施方式中，制劑可以具有25-50mg/ml的蛋白質殘基和1-30mg/ml的多糖交聯(lián)劑殘基。在某些制劑中，包括在交聯(lián)的蛋白質基質制劑中的蛋白質殘基組分可以是1-200mg/ml；5-30mg/ml、20-100mg/ml、50-200mg/ml、20-100mg/ml、25-80mg/ml、30-60mg/ml。40-70mg/ml或25-65mg/ml。在某些實施方式中，包括在交聯(lián)的蛋白質基質制劑中的蛋白質殘基組分的合適數(shù)量范圍和多糖殘基組分的合適數(shù)量范圍可以基于特定應用的要求而不同。偶聯(lián)/共軛/交聯(lián)在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過將蛋白質如含胺蛋白質連接如偶聯(lián)和/或交聯(lián)到含糖分子來制備，形成酰胺或胺聯(lián)接，所述含糖分子包含羧基、羥基、活化的羧基、活化的羥基、活化的羥基、修飾的羧基或修飾的羥基，如包含羧基、羥基、活化的羧基、活化的羥基、活化的羥基、修飾的羧基或修飾的羥基的寡糖、多糖和/或其衍生物。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過如下方法制備：使蛋白質如載有胺殘基的蛋白質偶聯(lián)和/或交聯(lián)包含羧基、羥基、活化的羧基、活化的羥基、修飾的羧基或修飾的羥基的寡糖和/或修飾的寡糖，在蛋白質和寡糖之間形成酰胺或胺聯(lián)接。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過如下方法制備：使蛋白質如載有胺殘基的蛋白質偶聯(lián)和/或交聯(lián)包含羧基、羥基、活化的羧基、活化的羥基、修飾的羧基或修飾的羥基的多糖和/或修飾的多糖，在蛋白質和多糖之間形成酰胺或胺聯(lián)接。在某些實施方式中，可以通過施用活化劑和/或偶聯(lián)劑或同時施用活化劑和/或偶聯(lián)劑和修飾劑和/或輔助偶聯(lián)劑，以在交聯(lián)的蛋白質的蛋白質組分和交聯(lián)的蛋白質的第二分子如生物分子、生物聚合物或聯(lián)接基團或其組合或其衍生物之間形成聯(lián)接和/或交聯(lián)，來促進交聯(lián)的蛋白質基質形成。交聯(lián)的蛋白質基質可以通過施用活化劑和/或偶聯(lián)劑以形成鍵和/或交聯(lián)鍵來制備。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過如下方法制備：用活化劑和/或偶聯(lián)劑活化包含羧基的寡糖或多糖如透明質酸上的一個或多個羧酸基，形成活化的寡糖或活化的多糖，并且使活化的寡糖或活化的多糖偶聯(lián)和/或交聯(lián)蛋白質，如具有胺殘基的蛋白質，以在寡糖或多糖和蛋白質之間形成酰胺聯(lián)接。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以如下方法制備：用活化劑和/或偶聯(lián)劑活化包含羥基的寡糖或多糖如透明質酸上的一個或多個羥基，形成活化的寡糖或活化的多糖，并且使活化的寡糖或活化的多糖偶聯(lián)和/或交聯(lián)蛋白質，如具有胺殘基的蛋白質，以在寡糖或多糖和蛋白質之間形成胺聯(lián)接。活化劑/偶聯(lián)劑/修飾劑在某些實施方式中，活化劑，有時稱為偶聯(lián)劑，可以包括但不限于二酰亞胺，例如碳二亞胺或水溶性碳二亞胺，例如l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺（“EDC”）、l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺甲碘化物（“ETC”）、1-環(huán)己基-3-(2-嗎琳子基乙基)-碳二亞胺（“CMC”）和/或其相應鹽或其混合物?；罨瘎┮部梢园ɡ绫讲⑷?1-基氧基三-(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸酯（“Bop-試劑”）、O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯、溴-三(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸酯和/或其相應鹵化物鹽或其混合物。在某些實施方式中，活化劑，有時稱為偶聯(lián)劑，可以包括但不限于環(huán)氧化物如烯丙基縮水甘油醚或鹵代烯如烯丙基氯，和/或其相應的鹽或混合物。交聯(lián)的蛋白質基質可以通過同時施用活化劑和/或偶聯(lián)劑以形成修飾劑和/或輔助交聯(lián)劑以形成聯(lián)接和/或交聯(lián)來制備。例如，交聯(lián)的蛋白質基質可以如下方法制備：用活化劑和/或偶聯(lián)劑活化包含羧基的寡糖或多糖如透明質酸上的一個或多個羧酸基，形成活化的寡糖或活化的多糖，用修飾劑和/或輔助偶聯(lián)劑修飾活化的寡糖或活化的多糖上一個或多個活化的羧基，形成修飾的寡糖或修飾的多糖，并且使修飾的寡糖或修飾的多糖偶聯(lián)和/或交聯(lián)蛋白質，如具有胺殘的基蛋白質，以在寡糖或多糖和蛋白質之間形成酰胺聯(lián)接。在某些實施方式中，修飾劑，有時稱為輔助偶聯(lián)劑，可以包括但不限于在活化的羧基和/或羥基部分，如多糖上活化的羧基和/或羥基部分的存在下，與活化的羧基和/或羥基部分反應形成更穩(wěn)定或更能夠與親核試劑反應的修飾物質的試劑。例如，修飾劑或輔助偶聯(lián)劑可以包括，但不限于N-羥基琥珀酰亞胺（“NHS”）、N-羥基磺基琥珀酰亞胺（“sulf-NHS”）、1-羥基苯并三唑水合物（“HOBt”）、1-羥芐基三唑一水合物、3,4-二氫-3-羥基-4-氧代-l,2,3-苯并三唑（HOOBt）、l-羥基-7-氮雜苯并三唑（HAT）、4-硝基苯酚、2-硝基苯酚、4-硝基硫苯酚、2-硝基硫苯酚、五氯苯酚、五氟苯酚、咪唑、四唑、4-二甲基氨基吡啶、鹵化物和/或其他相關化合物。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過如下方法制備：用活化劑和/或修飾劑活化和/或修飾包含一個或多個羧基和/或羥基的含糖分子，如寡糖或多糖，例如透明質酸，并且結合蛋白質，以在含糖分子和蛋白質之間形成一個或多個鍵和/或交聯(lián)鍵，如一個或多個酰胺或胺聯(lián)接。制備交聯(lián)的蛋白質基質的方法可以包括混合和/或結合活化劑和/或修飾劑與包含一個或多個羧基和/或羥基的含糖分子，例如透明質酸，以形成活化的和/或修飾的含糖分子，并且混合和/或結合活化的和/或修飾的含糖分子與蛋白質，以在含糖分子和蛋白質之間形成一個或多個鍵和/或交聯(lián)鍵，如一個或多個酰胺鍵或胺鍵。例如，可以用活化劑如EDC或烯丙基縮水甘油醚和/或修飾劑如NHS、HOBt或溴活化和/或修飾包含一個或多個羧基和/或羥基的含糖分子，如透明質酸。例如，活化的和/或修飾的含糖分子可以包括一個或多個活化的和/或修飾的一個或多個羧基和/或羥基，如活化的和/或修飾的酯，例如活化的和/或修飾的三唑酯或如活化的和/或修飾的N-羥基琥珀酰亞胺酯、活化的和/或修飾的環(huán)氧化物、或活化的和/或修飾的鹵代醇?？梢圆捎没罨瘎┤鏓DC或烯丙基縮水甘油醚和/或修飾劑如NHS,HOBt或溴活化和/或修飾包含一個或多個羧基和/或羥基的含糖分子，如透明質酸，并且可以與載有一個或多個胺部分的化合物，例如包含一個或多個載胺側鏈的蛋白質結合、混合和/或反應，以在含糖分子和載有一個或多個胺部分的化合物之間形成一個或多個聯(lián)接和/或交聯(lián)，例如酰胺或胺聯(lián)接。在某些實施方式中，一個或多個胺部分的分子，如包含一個或多個胺部分的蛋白質、肽或聯(lián)接基團，可以偶聯(lián)含糖分子上的一個或多個羧基和/或羥基，例如可以在水性環(huán)境中偶聯(lián)包含一個或多個羧基和/或羥基的寡糖或多糖，如包含一個或多個已經用活化劑和/或修飾劑活化和/或修飾的羧基和/或羥基的寡糖或多糖。在某些實施方式中，用于修飾多糖的方法可以取決于交聯(lián)的蛋白質和/或用作交聯(lián)劑的多糖。例如，用于修飾多糖的方法可以包括使用高碘酸鹽氧化。用于修飾多糖的方法可以包括使用活化劑，如碳二亞胺，例如EDC。用于修飾多糖的方法可以包括使用活化劑，如環(huán)氧化物，例如烯丙基縮水甘油醚。用于修飾多糖的方法可以進一步包括使用修飾劑，如N-琥珀酰亞胺(NHS)或鹵化物，如溴。例如，透明質酸和/或羧甲基纖維素可以被活化劑如碳二亞胺活化，并且可以被修飾劑如N-琥珀酰亞胺進一步修飾。例如，透明質酸和/或羧甲基纖維素可以被活化劑如環(huán)氧化物活化，并且可以被修飾劑如溴進一步修飾。雙功能分子試劑在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過如下方法制備：蛋白質與多功能試劑如包含兩個或更多個反應性部分的含糖分子或包含兩個或更多個反應性部分的聯(lián)接基團反應，一形成兩個或更多個聯(lián)接或交聯(lián)。例如，多功能試劑可以包括兩個或更多個相同或不同的反應性部分，如羧基和/或羥基、活化的羧基和/或羥基、修飾的羧基和/或羥基、和/或其組合或其衍生物的混合物。例如，多功能試劑上的每個反應性部分可以與相同分子或另一個分子上的互補反應基團反應。例如，多功能試劑上的一個或多個反應性部分可能需要脫保護，如除去保護基，以能夠與相同分子或另一個分子上的互補反應基團反應。聯(lián)接基團（spacergroup）聯(lián)接基團可以包括結合一個或多個單組分的部分。聯(lián)接基團可以連接一個或多個分子，例如通過共價鍵連接蛋白，通過共價鍵連接多糖，通過共價鍵同時連接蛋白質和多糖，和/或其組合。聯(lián)接基團可以包括例如，但不限于二醇部分、環(huán)氧乙烷部分、由重復基團-(-CH2-CH2-O-)-部分形成的聚合物，如聚乙二醇（PEG）、或聚氧化乙烯（PEO）、多胺或多元醇。聯(lián)接基團可以對熱解或水解或兩者都是穩(wěn)定的。聯(lián)接基團可以是生物相容的、生物可利用的、可溶于和/或基本上可溶于水性和/或生理性介質中、或其組合。生物分子或生物聚合物可以包括一個或多個聯(lián)接基團殘基，例如如聚乙二醇（PEG）或聚氧化乙烯基團（PEO）。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括一個或多個聯(lián)接基團殘基，例如如聚乙二醇（PEG）或聚氧化乙烯基團（PEO）。含糖分子可以包括一個或多個聯(lián)接基團殘基，例如如聚乙二醇（PEG）或聚氧化乙烯基團（PEO）。含糖分子可以包括一個或多個包括反應基團的部分，例如當與可以為蛋白或修飾的蛋白質的一部分的互補反應基團反應時可以形成共價鍵的反應基團。蛋白或修飾的蛋白質可以包括一個或多個部分，其包括反應基團，例如當與為含糖分子的一部分的互補反應基團反應時可以形成共價鍵的反應基團。多糖的修飾度在某些實施方式中，包含一個或多個羧基和/或羥基的含糖交聯(lián)劑，例如透明質酸可以活化和/或修飾為包括大量活化的和/或修飾的羧基和/或羥基，和大量未活化和/或未修飾的羧基和/或羥基。例如，活化的和/或修飾的含糖交聯(lián)劑可以活化和/或修飾為包括至少或約2%的活化的和/或修飾的羧基和/或羥基，如至少或約0.5%、1%、3%、5%、10%、20%、25%、30%或35%的活化的和/或修飾的羧基和/或羥基。在某些應用中，含糖交聯(lián)劑可以包含基本上或完全活化的和/或修飾的羧基和/或羥基。在某些實施方式中，活化的和/或修飾的含糖交聯(lián)劑可以活化和/或修飾為包括約0.5%至約40%、約1%至約30%、約1%至約25%、約3%至約30%、或約5%至約25%的活化的和/或修飾的羧基和/或羥基。在某些實施方式中，含糖交聯(lián)劑中活化的和/或修飾的基團水平的變化可以提高或降低含糖交聯(lián)劑與生物分子交聯(lián)的能力。例如，含糖交聯(lián)劑中活化的和/或修飾的基團水平的變化可以導致在含糖交聯(lián)劑和生物分子或生物聚合物之間形成一個或多個連接。應用于制備交聯(lián)蛋白質的包含活化的和/或修飾的基團的含糖交聯(lián)劑的水平的變化可以控制或基本上控制能夠與生物分子或生物聚合物反應的活化和/或修飾的基團的數(shù)量，如與蛋白質連接和/或交聯(lián)可以穩(wěn)定或基本上穩(wěn)定蛋白質。擠出在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以通過針擠出。例如，通過細規(guī)格的針擠出。交聯(lián)的蛋白質基質可以保持足夠的粘結性，例如，即使在針擠出之后保持足夠的粘結性，以便可以從針擠出材料的長絲（longstring）而不會使該材料斷裂。例如，如可以由針擠出至少約15cm的材料的絲而不使該材料斷裂。交聯(lián)的蛋白質基質可以包括柔性的基質結構。例如，交聯(lián)的蛋白質基質的柔性基質結構可以促進產生堅固的生物材料，該生物材料仍然保持足夠的柔性以允許穿過細規(guī)格的針排出。在某些實施方式中，包含交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以通過針擠出，例如，擠出通過細規(guī)格的針而不需要進一步加工。在某些實施方式中，包含交聯(lián)的蛋白質基質的制劑可以保持足夠的粘結性，甚至在針擠出之后，可以從針擠出長的材料絲而不是使該材料斷裂，如至少約15cm的材料的絲。在某些實施方式中，制劑可以包含柔性基質結構的交聯(lián)的蛋白質基質。例如，在某些實施方式中，制劑中交聯(lián)的蛋白質基質的柔性基質結構可以促進形成堅固的生物材料，如保持柔性例如實質上和/或足夠柔性的堅固的生物材料，并且可以使制劑和/或生物材料通過針例如細規(guī)格針排出。制備方法在某些實施方式中，反應中多糖的濃度可以是約0.1%至約5%，例如約0.25%至約3%、約0.5%至約3%、或約0.25%至3.5%。在某些實施方式中，試劑的化學計量可以隨所選擇的化學過程和多糖而變化。例如，對于HA:EDC:NHS，該比例可以為1:1:1、1:1:2、1:1:3、1:0.5:2、1:0.5:3。對于NHS，已經發(fā)現(xiàn)在將NHS結合到可溶性多糖交聯(lián)劑中時1:1:1比例得到良好的結果。在某些實施方式中，多糖與活化劑的摩爾比可以為至少1:1至至少約1:4。在某些實施方式中，活化劑與多糖的羧酸單元的摩爾比可以在約2%至約200%之間，例如約5%至約100%之間。在某些實施方式中，修飾劑與活化劑的摩爾比可以在約1:1至約3:1之間，例如在約1.5:1至約2.5:1之間，例如約2:1。在某些實施方式中，用于進行多糖交聯(lián)劑制備反應的pH可以是至少4、5、6、7、8.0或8.5。在某些實施方式中，用于進行多糖交聯(lián)劑制備反應的pH可以為約5至約15，約6.5至約9，約7至約8.6/也可以使用其他pH。在某些實施方式中，進行活化、偶聯(lián)和/或交聯(lián)反應的溫度范圍為在約15°C至約30°C之間、20°C至約25°C之間、或室溫的溫度下。在某些實施方式中，純化和/或分離衍生化的多糖的方法可以是穩(wěn)定的、簡單的、高產率的或其組合。例如，相對于起始多糖，所述方法可以得到至少40%的分離的衍生化多糖。在其他方法中，相對于起始多糖或修飾的多糖，產率可以為至少40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的分離的衍生化多糖。治療用途本文公開的交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質、制劑、使用方法、系統(tǒng)和/或試劑盒可以應用于多種治療環(huán)境，包括但不限于應用于人類醫(yī)學或獸醫(yī)學，如外科手術。例如，其可以治療性應用于恢復手術、美容手術、美容、組織膨脹如失禁或皮膚替代產品、皮膚病學如皮膚病學手術、眼睛手術、風濕病學、藥理學或化妝品領域。其他的治療用途可以包括普通外科手術中的出血填塞（stemminghemorrhage），神經外科中重建神經和血管，神經和整形外科，以及整形外科中固定皮膚、血管或軟骨移植物或接枝物，如治療膝骨關節(jié)炎（炎性膝）、血管和整形外科。某些實施方式可以用作用于遞送細胞或生物活性分子如生長因子以刺激病灶修復的載體；局部遞送生長因子與交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以促進許多情形下的傷口愈合和組織再生，如促進骨形成、在矯形手術中刺激軟骨修復、治療病理性傷口病癥如慢性潰瘍、和/或充當支架以通過培養(yǎng)物中自身細胞的增殖而生成人工組織。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑的可注射性質可以使其適用于在整形外科中的組織增大，作為惰性生物相容性填充材料，例如填充皺痕（dermalcreases）或嘴唇重建。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以用于填充體腔或凹陷（deficit）。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以用于美容醫(yī)學、矯形治療、恢復外科手術期間如眼睛外科手術期間流出的內容物（volumeeffused）、和/或局部應用在健康或受損的組織如皮膚上，例如局部應用在美容和/或皮膚病學中。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質、和/或制劑可以用于填充面部皺紋、細紋、治療衰老的皮膚、瘢痕組織和/或皮膚凹陷，如脂質營養(yǎng)不良。某些實施方式可用于穩(wěn)定蛋白質，例如生物活性蛋白質，用于遞送一種或多種穩(wěn)定的蛋白質，例如一種或多種生物活性蛋白質。某些實施方式可以包括分散在其中的藥物活性物質，并且可以用作藥物遞送系統(tǒng)。某些實施方式可以包括例如蛋白質、生長因子、酶、藥物生物聚合物、生物學相容性合成聚合物、和/或其組合、衍生物或變化。特征；穩(wěn)定性在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質可以包括至少一個下述性質：包括但不限于可注射的、生物相容的、基本上生物相容的、穩(wěn)定的、基本上穩(wěn)定的、保持生物活性、基本上保持生物活性、保持生物活性構型、提供彈性或基本彈性、彈性模量、粘性模量、提供結構剛度或基本剛度、耐熱或基本耐熱、抗熱解或基本抗熱解、抗生物降解或基本抗生物降解、可以是可生物降解的、可以引發(fā)異物應答或顯著異物應答（即，自身識別）、具有至少約25%的純度水平、可擠出、可擠出通過針、可擠出通過細規(guī)格的針。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以包括具有下述性質中至少一種的含糖分子：包括但不限于基本溶解性、水溶性、基本可溶于水溶液和/或緩沖水溶液中、生理學溶解性、基本生理學溶解性、可注射的、生物相容的、基本上生物相容的、穩(wěn)定的、基本上穩(wěn)定的、保持生物活性、基本上保持生物活性、保持生物活性構型、抗生物降解或基本抗生物降解、可以是可生物降解的、可以引發(fā)異物應答或顯著異物應答（即，自身識別）、具有至少約25%的純度水平。打擊某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以具有和/或包括下述性質中的至少一種：包括但不限于可注射的、生物相容的、基本上生物相容的、穩(wěn)定的、基本上穩(wěn)定的、保持生物活性、基本上保持生物活性、保持生物活性構型、提供彈性或基本彈性、彈性模量、粘性模量、提供結構剛度或基本剛度、耐熱或基本耐熱、抗熱解或基本抗熱解、抗生物降解或基本抗生物降解、可以是可生物降解的、可以引發(fā)異物應答或顯著異物應答（即，自身識別）、具有至少約25%的純度水平、可擠出、可擠出通過針、或可擠出通過細規(guī)格的針。某些實施方式可以具有的彈性模量為約500Pa至約50Pa、約450Pa至約100Pa、約400Pa至約125Pa；約400Pa至約150Pa、或約385Pa至約150Pa。彈性模量將根據(jù)使用的濃度和組分而變化。例如，對于1%的HA交聯(lián)的4%彈性蛋白原基質產品，彈性/儲存模量在約80-100Pa的頻率范圍下是穩(wěn)定的，且控制物質損失模量開始于約5-10Pa且逐漸隨著角頻率的增大而增加。當擠壓通過25G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過25G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即粘合和結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過27G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過27G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即粘合和結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過30G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過30G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即粘合和結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過31G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。當擠壓通過31G針時，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即粘合和結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。通過細規(guī)格針，某些實施方式可以具有的可擠出長度為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。某些實施方式可以具有的可擠出長度為約5cm至約30cm、約10cm至約20cm；約10cm至約15cm，或約15cm至約30cm。通過細規(guī)格針，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。通過細規(guī)格針，某些實施方式可以具有的可擠出長度（即粘合和結合在一起而沒有支撐）為至少約5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm、或25cm。某些實施方式可以具有的可擠出長度為約5cm至約30cm、約10cm至約20cm；約10cm至約15cm，或約15cm至約30cm，當擠出時其基本上粘合和基本上結合在一起而沒有支撐。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、材料和/或制劑可以被產物的蛋白質組分穩(wěn)定。交聯(lián)的蛋白質基質組合物、材料和/或制劑的穩(wěn)定性可以由全長蛋白質殘基組分和交聯(lián)殘基組分如多糖殘基組分的組合得到。在某些實施方式中，最終材料的性質取決于多糖殘基組分的粘度，如起始多糖分子組分。交聯(lián)的蛋白質基質組合物、材料和/或制劑可以被產物的交聯(lián)殘基組分穩(wěn)定，如含糖交聯(lián)殘基，例如多糖交聯(lián)殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、材料和/或制劑包含生物相容性交聯(lián)的蛋白質殘基。在某些實施方式中，交聯(lián)的蛋白質基質組合物、材料和/或制劑可以是適用于加入注射器中。在某些實施方式中，可以使用細規(guī)格針。例如，可以使用25G、27G、29G、30G或31G針。然而，某些實施方式可以使用較大的規(guī)格針，例如20G至25G、15G至25G、15G至20G、10G至20G、10G至15G等。在某些實施方式中，針的尺寸取決于注射的材料，例如注射材料的類型和/或稠度，遞送特定量的材料體積和/或其組合或變化的期望。某些實施方式能夠使用細規(guī)格的針，其中所公開的制劑在針擠出之后保持足夠的粘結性，以便可以從該針擠出>15cm長的材料絲而不會使該材料斷裂。例如，采用某些實施方式，可以由25G、27G、29G或30G針擠出>15cm長的材料絲而不會使該材料斷裂。對于某些應用，例如膨脹應用如膀胱頸，可以使用18、19、20、21、22或23G的針。在某些應用中可以使用較寬的針，因為針長度比較長(通常為幾英寸)，從而流過針的阻力更大。在某些應用中，注射體積也可以增加幾毫升，例如至少1.5ml、2ml、2.5ml、3ml或4ml。在某些應用中，當可以使用較小體積時，（例如，“穿線（threading）”或填充細皺紋或薄皮膚（thinskin）增大（時，使用的體積可以為例如小于2ml、1.5ml、1.0ml、0.75ml、0.5ml或0.1ml。通常，本申請使用較短的窄規(guī)格針，例如長度為1/2英寸的29G、30G或31G。使用的針的規(guī)格和針的長度可以根據(jù)具體應用和/或制劑而變化。例如，可用于提供結構上更持久組織支撐的較高衍生化水平的制劑（例如，20-30%的可能位點修飾的，1.5%的多糖和5%的蛋白質含量）通?？墒褂枚痰妮^寬針（如27或25Gx1/2”或1”）施用。另一個實例應當為具有第衍生化（約5%）、低HA（<1%）和/或蛋白質（<3%）的制劑，起2通常通過較細的針如31G針遞送。在某些實施方式中，擠出的材料可以擠出而沒有支撐-通常從與原表面垂直或與垂直45°的角度擠出。形成粘合材料絲的能力可以使其應用特別有吸引力，在皮膚中以矩陣或網(wǎng)格進行植入物的穿線來提供結構支撐。也可以使用其他遞送方法，例如套管、導管、柔性聚合物導管、和/或無針注射器。在某些實施方式中，本文公開的方法和/或交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑的益處之一是可以包括在最終材料制劑中的蛋白質的含量不成為限制因素。例如，使用其他交聯(lián)蛋白質的方法如化學交聯(lián)劑如戊二醛（當交聯(lián)的物質可以相當稠）時，包括在交聯(lián)的蛋白質基質中的蛋白質殘留量可以包括約35mg/ml或40mg/ml以上的量，會抵抗針擠出。蛋白質殘基可以是分子內交聯(lián)的、分子間交聯(lián)的和/或其組合。蛋白質殘基可以是基本上或僅僅分子間交聯(lián)的。交聯(lián)的蛋白質基質制劑可以更柔性些，和/或能夠以高蛋白濃度注射。本文公開的交聯(lián)的蛋白質基質組合物、物質和/或制劑可以用于試劑盒或包裝中。在某些實施方式中，試劑盒或包裝包括注射器，其預裝交聯(lián)的蛋白質基質組合物和一種類型的合適尺寸的針或針遞送系統(tǒng)，如滾針球型系統(tǒng)、自動注射筆型系統(tǒng)或美塑（mesotherapy）注射槍型系統(tǒng)。所述包裝或試劑盒也可以包含注射所提供組合物的使用說明。在其他實施方式中，試劑盒或包裝可以包括至少一個注射器、至少一個包含所使用組合物的單獨的容器如小瓶或安瓿、多個針、及如何使用該試劑盒的使用說明。實施例給出下述實施例和方案作為發(fā)明內容的具體實施方式，并且用于證實發(fā)明優(yōu)點。應當理解，給出所述實施例和方案作為示例，而不打算限制說明書和隨后的權利要求。使用EDC和NHS衍生化透明質酸（HA）的方法：1.將HA溶于水中至最終濃度1%（可至多2%）。2.加入1g的N-琥珀酰亞胺(NHS)/g待衍生化的HA。3.加入1g的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)/gHA。4.通過充分攪拌（約10-20分鐘）確保反應物完全溶解。5.在20-25°C下反應60分鐘。6.加入NaCl至最終濃度1%。7.通過加入2體積的異丙醇（IPA）沉淀衍生化HA。8.過濾回收沉淀的衍生化HA，溫和離心或其他合適的方法處理，并棄去上清液。9.輕壓回收的衍生化/HA，以除去過量液體。10.沖洗在60%IPA中的沉淀衍生化HA。11.除去和棄去沖洗液體。12.輕壓回收的衍生化的HA，以除去過量液體。13.稱重回收的衍生化/HA的量。14.將回收的衍生化/HA溶解在無菌水中至基于在步驟1中溶解的HA初始量計最終濃度2.5%。15.分析NHS衍生化的量（基于化學修飾和UV分析計）。16.分析溶解的衍生化的HA的濃度（基于化學修飾和UV分析或干重計）。17.調節(jié)衍生化的HA的濃度至2%（20mg/mL）。18.無菌過濾衍生化的HA。注意：步驟7-14應當盡快進行，例如進行所有這些步驟應當少于30分鐘（盡管沉淀的HA的實際溶解可能更久）。交聯(lián)的蛋白質基質的制備方法1.將蛋白質溶解在無菌PBS中至最終濃度為100mg/mL，并過濾滅菌。2.分析蛋白質濃度（例如，基于UV分析）。3.在充分混合/攪拌下，混合等體積的20mg/ml衍生化的HA與100mg/ml蛋白質，而沒有引入任何氣泡。4.靜置凝膠化30-60分鐘（20-25°C）。5.裝入注射器。如下在所有實施例中使用的通用方法。實施例1使用碳二亞胺和N-琥珀酰亞胺（NHS）制備可溶性透明質酸交聯(lián)劑的示意圖：透明質酸（HA）是一種包含β-D-葡萄糖醛酸-[1-3]-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖二糖單元的多糖。HA的理想結構顯示在圖1中。如可以看到的，HA包含一個羧基/二糖單元，其為可以在本文公開的至少一個交聯(lián)方法中使用的官能團。在該方法中，HA的羧基和蛋白的游離氨基之間形成共價化學鍵。這可以通過使HA與碳二亞胺如1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺（EDC）反應，形成活性o-酰基異脲酯來進行。當該化合物與親核試劑如伯氨基反應時，其也是不穩(wěn)定的，且在不沒有任何合適的反應基團下在水中快速水解。因此，由活性o-?；愲艴バ纬筛€(wěn)定的中間體活性酯通常是更優(yōu)選的，其可能受到使用化合物如N-琥珀酰亞胺（NHS）或硫代-N-琥珀酰亞胺（Sulfo-NHS）的縮合反應的影響。這導致形成NHS活化的HA，然后其可以與來自蛋白的伯氨基反應，形成非常穩(wěn)定的酰胺鍵。這些反應的示意圖示于圖2中。該方法的一個主要益處是在與蛋白質混合之前可以使HA衍生化，其將限制或避免在最終制劑中存在殘余衍生化試劑。除去過量試劑的主要方法是采用水混溶性有機溶劑如異丙醇（IPA）或乙醇沉淀，接著用水/溶劑混合物沖洗，或者使用具有合適截留分子量的半透膜滲濾。一旦已經純化了衍生化的HA，則可以將其溶于水或合適的緩沖液如磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中，然后與蛋白質混合，通過HA的NHS活化的羧酸和蛋白質的氨基反應形成交聯(lián)的制劑。在該方法中，HA有效地變成蛋白質的交聯(lián)劑。預期得到的制劑的性質不同于其中蛋白質與短交聯(lián)劑交聯(lián)的制劑，或者不同于其中在不存在蛋白質下HA與短的交聯(lián)劑交聯(lián)的制劑。實施例2使用雜雙官能試劑烯丙基縮水甘油醚（AGE）制備可溶性透明質酸交聯(lián)劑的示意圖該方法是基于衍生化透明質酸（HA）與雜雙官能試劑，其是蛋白質與HA交聯(lián)的兩步方法。在該實施例中選擇的方法使用烯丙基縮水甘油醚（AGE），其中當在強堿性條件下環(huán)氧乙烷基團與HA的羥基反應形成穩(wěn)定的醚鍵時，發(fā)生AGE的初始結合。然后，如此結合的烯丙基可以通過與鹵化物如溴反應轉化為鹵代醇。然后，這些鹵代醇可以與蛋白反應，通過伯氨基形成穩(wěn)定的仲胺鍵。鹵代醇和伯氨基之間的反應在高pH值下會更有效地發(fā)生，但是某些反應在高于pH8.5-9下開始出現(xiàn)。2.HA-R-CH=CH2+Br2+H2O→HA-R-CH(OH)-CH2Br+HBr對于蛋白質與HA的交聯(lián)，以上示出了反應方案。HA=透明質酸，R=O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2，AGE=烯丙基縮水甘油醚，Pr=蛋白質。實施例3多糖交聯(lián)劑A的制備：在該實施例中，將5ml的1%低分子量透明質酸溶液、1ml的H2O、100mg的NHS（Sigma）和100mg的EDC（Sigma）混合在一起，并且在室溫下進行反應1小時。然后，用兩體積的IPA沉淀衍生化的透明質酸，短暫按壓以降低沉淀物的水和溶劑含量，用66%乙醇沖洗，然后在室溫下再溶于4ml磷酸鹽緩沖鹽水（Sigma）中。衍生化的HA在1小時之內完全溶解。使用溫度分析器測量衍生化的HA的濃度，然后稀釋至2%溶液，之后用于蛋白質交聯(lián)。所有制品都是無菌的，并且當可能時在層流凈化罩中進行該實驗。實施例4多糖交聯(lián)劑B的制備：在該實施例中，將5ml的1%羧甲基纖維素溶液、1ml的H2O、100mg的NHS（Sigma）和100mg的EDC（Sigma）混合在一起，并且在室溫下進行反應1小時。然后，用兩體積的IPA沉淀衍生化的衍生化的羧甲基纖維素，短暫按壓以降低沉淀物的水和溶劑含量，用66%乙醇沖洗，然后在室溫下再溶于4ml磷酸鹽緩沖鹽水（Sigma）中。所有制品都是無菌的，并且當可能時在層流凈化罩中進行該實驗。實施例5多糖交聯(lián)劑C的制備：在這些實施例，將4ml的2%HA與0.5ml的10MNaOH和0.5ml的AGE混合，并且在室溫下靜置反應1小時。然后，用1ml9M乙酸中和該溶液，加入40mg的NaCl，接著用2體積的IPA沉淀。將沉淀物用60%IPA沖洗，在濾紙上墊干，然后再溶解在3ml水中。接著，用溴水（加入250μL，但是完全轉化所需的量為200μL至250μL之間）轉化結合的烯丙基。為了除去過量的溴，通過加入30mg的NaCl，接著加入2體積的IPA再沉淀所述溶液。將沉淀物用60%IPA沖洗，在濾紙上墊干，然后再溶于2ml水中。在溫度分析器中使用0.5ml的溶液測試衍生化的HA的最終濃度，發(fā)現(xiàn)干物質含量為2.59%。將衍生化的HA稀釋至2%溶液，之后用于蛋白質交聯(lián)中。實施例6使用rh彈性蛋白原1制備基于蛋白質的制劑：在該實施例中，將250μL在磷酸鹽緩沖鹽水（Elastagen）中的200mg/mlrh彈性蛋白原溶液與250μL磷酸鹽緩沖鹽水混合，接著加入500μL實施例3的透明質酸交聯(lián)劑。將該組合充分混合，接著短暫離心以除去氣泡。將該材料在室溫下靜置30分鐘用于制備。然后，在層流凈化罩中，將制劑裝入無菌1ml注射器中。用這種方法制備的制劑全部呈現(xiàn)出堅固的材料的性質，通過細規(guī)格31G針將其擠出為10-20cm長的粘結絲。實施例7使用牛血清白蛋白（BSA）制備基于蛋白質的制劑：在該實施例中，將250μL在磷酸鹽緩沖鹽水（Sigma）中的200mg/ml牛BSA溶液與250μL磷酸鹽緩沖鹽水混合，接著加入500μL實施例3的透明質酸交聯(lián)劑。將該組合充分混合，接著短暫離心以除去氣泡。將該材在室溫下靜置30分鐘用于制備。用這種方法制備的制劑全部呈現(xiàn)出堅固的材料的性質，通過細規(guī)格31G針將其擠出為10-20cm長的粘結絲。實施例8使用rhHSA制備基于蛋白質的制劑：在該實施例中，將20mg/ml的重組HSA（Sigma）在磷酸鹽緩沖鹽水（Sigma）中的溶液與等體積的實施例3的透明質酸交聯(lián)劑混合。將該組合充分混合，接著短暫離心以除去氣泡。將該材料在室溫下靜置30分鐘用于制備。得到柔軟交聯(lián)的澄清無色HSA制劑，其可擠出通過細規(guī)格31G針。實施例9使用rh彈性蛋白原2制備基于蛋白質的制劑：在該實施例中，在pH8.5下，將500μL在磷酸鹽緩沖鹽水（Elastagen）中的100mg/mlrh彈性蛋白原溶液與500μL實施例5的2%透明質酸交聯(lián)劑實施例混合。將該組合充分混合，接著短暫離心以除去氣泡。將該物質在室溫下靜置12小時用于制備。得到的制劑為HA交聯(lián)的彈性蛋白原的堅固的澄清無色基質制劑。實施例10制劑中單體含量的評價在該實施例中，在實施例6中得到的制劑的等分試樣浸泡在PBS中，并且通過SDS-PAGE分析得到的上清液（將得到的凝膠圖解在圖3中）。負載：實施例6中制備的制劑，浸泡在PBS中泳道M：標志物。泳道A和B：上清液泳道TE：純TE。如從凝膠可看到的，從HA-TE制備中沒有萃取出任何單體。實施例11制劑流變學的評價在該實施例中，使用HaakeRS150流變儀，利用錐形和板塊幾何學研究在實施例6中制備的制劑剪切流中的流變特性。在該研究中使用35mm/1°鈦錐體，溫度保持在25°C下。通過角頻率范圍為0.1至100rad/s下的儲存模量(G’)控制備型隨角頻率的變化對小振幅振蕩剪切流的響應。在該范圍下，儲存模量對角頻率的變化相對不敏感。在穩(wěn)定的剪切流下，應變隨應力線性增加直到約200Pa。超過該值，施加應力的小變化都會導致應變顯著增加，當剪切粘度針對液體剪切率做圖時，證實在低剪切率下恒定粘度為約260Pas。然而，在剪切率超過約0.4/s下，粘度隨剪切率的提高而快速降低。在實施例6中制備的基于蛋白質制劑的流變性質顯著地不同于未交聯(lián)的多糖和與短的交聯(lián)劑如BDDE交聯(lián)的多糖產物（然后，將其微粉化以能夠擠出細針）經相同的頻率檢查時，這些多糖產品表現(xiàn)為差不多的粘性流體，并且對其損耗模量（G”）的流變性質具有更大的貢獻。在實施例6中制備的制劑的復數(shù)模量的相對恒定值提供了基于多糖產物的特定差異點。在下文中，提供進一步的實施方式或實施例。實施方式1.一種組合物，其包含至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包括：i)至少一種蛋白質殘基；和ii)至少一種含糖殘基。2.實施方式1的組合物，其中，所述組合物為可注射組合物。3.實施方式1或2的組合物，其中，所述組合物是通過插管、導管、柔性聚合物導管、帶針注射器、或無針注射器遞送。4.實施方式1-3中一項或多項的組合物，其中，所述組合物可擠出為至少10cm的長度。5.實施方式1-4中一項或多項的組合物，其中，所述組合物通過18G至31G針可擠出為約5cm至約30cm的長度，且擠出組合物基本上結合在一起而無需表面載體。6.實施方式1-5中一項或多項的組合物，其中，所述組合物通過25G針可擠出為至少5cm、10cm、12cm、15cm、18cm、20cm或25cm的長度。7.實施方式1-6中一項或多項的組合物，其中，當通過細規(guī)格針擠出時，所述組合物可擠出為至少10cm、15cm、20cm或25cm的長度。8.實施方式1-7中一項或多項的組合物，其中，當通過細規(guī)格針擠出時，所述組合物可擠出為5cm至30cm、10cm至20cm；或15cm至30cm的長度而無需另外的表面載體，并且其中擠出組合物基本上粘結且基本上保持在一起。9.權利要求1-8中一項或多項的組合物，其中，當通過中等規(guī)格針擠出時，所述組合物可擠出為至少10cm、15cm、20cm或25cm的長度而無需另外的物理載體，并且其中擠出組合物基本上粘結且基本上保持在一起。10.實施方式1-9中一項或多項的組合物，其中，當通過大規(guī)格針擠出時，所述組合物可擠出為至少10cm、15cm、20cm或25cm的長度而無需另外的表面載體，并且其中擠出組合物基本上粘合和基本上結合在一起。11.實施方式1-10中一項或多項的組合物，其中，在與垂直至少45°的角度下，所述組合物可擠出為至少10cm、20cm或30cm的長度而無需另外的表面載體，并且形成粘結的材料絲。12.實施方式1-11中一項或多項的組合物，其中，所述擠出組合物形成粘結的材料絲。13.實施方式1-12中一項或多項的組合物，其中，可以在基本上沒有其他處理下擠出所述組合物。14.實施方式1-13中一項或多項的組合物，其中，可以在基本上沒有其他處理下通過細規(guī)格針擠出所述組合物，并且當擠出時所述組合物基本上粘合和基本上結合在一起，而無需另外的物理載體。15.實施方式1-14中一項或多項的組合物，其中，在針擠出之后，所述組合物保持足夠的粘結性，使得擠出組合物的絲不會在擠出期間斷裂。16.實施方式1-15中一項或多項的組合物，其中，在針擠出之后，所述組合物保持足夠的粘結性，使得可以由針擠出大于10cm、大于12cm、大于15cm、大于18cm或大于20cm的組合物絲，而不會出現(xiàn)該組合物的絲斷裂。17.實施方式1-16中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包括全長蛋白質殘基。18.實施方式1-17中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包括基本上全長蛋白質殘基。19.實施方式1-18中一項或多項的組合物，其中，所述組合物是基本上柔性的，使得其可以通過針排出。20.實施方式1-19中一項或多項的組合物，其中，所述組合物具有足夠的柔性，使其能夠通過細規(guī)格針排出。21.實施方式1-20中一項或多項的組合物，其中，所述組合物能夠使至少一個蛋白質殘基保留其全長或基本上全長，并且防止至少一個蛋白質殘基被快速再吸收或破壞。22.實施方式1-21中一項或多項的組合物，其中，所述組合物能夠使至少一個蛋白質殘基保留其全長或基本上全長，并且所述組合物是可通過針注射的，維持粘合結構，且是充分交聯(lián)的以減慢該組合物在體內再吸收。23.實施方式1-22中一項或多項的組合物，其中，所述至少一個蛋白質殘基是基本上全長和基本上無分子內交聯(lián)的。24.實施方式1-23中一項或多項的組合物，其中，所述組合物是組織相容的、增大組織向內生長、增大組織再生長或其組合。25.實施方式1-24中一項或多項的組合物，其中，所述組合物可被重塑成典型的和期望的結構，且結合到新組織中。26.實施方式1-25中一項或多項的組合物，其中，至少一種含糖殘基保持可溶于或充分可溶于水或鹽溶液中。27.實施方式1-26中一項或多項的組合物，其中所述至少一種含糖殘基基本上可溶于水介質或生理介質中。28.實施方式1-27中一項或多項的組合物，其中所述至少一種交聯(lián)的蛋白質殘基是基本上分子間交聯(lián)的。29.實施方式1-28中一項或多項的組合物，其中所述至少一種含糖殘基具有下述性質的一種或多種：基本上生物可利用的、基本上生物可降解的、基本上生物可吸收的或基本上生物可再吸收的。30.實施方式1-29中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種含糖殘基包括至少一種多糖殘基、至少一個低聚糖殘基或其組合。31.實施方式1-30中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基包括低分子量、中等分子量、高分子量多糖殘基或其組合。32.實施方式1-31中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基包括的分子量為約50,000至約275,000道爾頓。33.實施方式1-32中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基來源于或包括下述物質的殘基：透明質酸、纖維素衍生物、羧基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素羧甲基直鏈淀粉、黃原膠、瓜爾膠、α-葡聚糖、β-葡聚糖、β-1,4-葡聚糖、β-1,3-葡聚糖、藻酸鹽、羧甲基葡聚糖、糖胺聚糖衍生物、軟骨素-6-硫酸鹽、硫酸皮膚素、肝素、硫酸肝素、聚乳酸、聚乙醇酸、聚(乳酸-共-乙醇酸)、磷酸三鈣、1-羥磷灰石、其可藥用鹽、衍生物或其組合。34.實施方式1-23中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基來源于或包含透明質酸殘基。35.實施方式1-34中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基來源于或包含羧甲基纖維素殘基。36.實施方式1-35中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包括濃度為約0.01%至約30%之間的至少一個含糖殘基。37.實施方式1-36中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種蛋白質殘基包括具有胺側鏈的殘基，包括至少一個賴氨酸殘基、至少一個精氨酸殘基或其組合。38.實施方式1-37中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種蛋白質殘基來源于或包括彈性蛋白原、彈性蛋白、白蛋白、膠原蛋白、膠原蛋白單體、免疫球蛋白、胰島素、其衍生物或其組合的殘基。39.實施方式1-38中一項或多項的組合物，其中，至少一種蛋白質殘基的含量為約1mg/ml至約200mg/ml。40.實施方式1-39中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含生物活性的蛋白質殘基。41.實施方式1-40中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質來源于或包括與天然存在人蛋白質基本上相同的合成蛋白質殘基。42.實施方式1-41中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質來源于或包括穩(wěn)定的蛋白質殘基。43.實施方式1-42中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質來源于或包括胞外蛋白質殘基。44.實施方式1-43中一項或多項的組合物，其中，所述胞外蛋白質為彈性蛋白原、彈性蛋白、膠原蛋白或其衍生物。45.實施方式1-44中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含濃度為約0.1%至約5%之間的至少一個含糖殘基。46.實施方式1-45中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含比例為約0.1%至約1.5%的至少一個含糖殘基與約0.1%至約6%的至少一個蛋白質殘基。47.實施方式1-46中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含比例為約0.1%至約1.5%的至少一個含糖殘基（包括多糖殘基）與約0.1%至約6%的至少一個蛋白質殘基。48.實施方式1-47中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質是由包含至少5%、10%、20%或25%的活化羧基和/或羥基、修飾羧基和/或羥基或其組合的至少一種含糖交聯(lián)分子制成。49.實施方式1-48中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質是由包含至少5%的活化羧基和/或羥基、修飾羧基和/或羥基或其組合的至少一種含糖交聯(lián)分子制成。50.實施方式1-49中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含少于5%的單體蛋白質殘基。51.實施方式1-50中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含少于1%的單體蛋白質殘基。52.實施方式1-51中一項或多項的組合物，其中，所述組合物治療性應用于下述至少一種中：外科手術、美容、組織膨脹、治療失禁、皮膚替代物、皮膚病學、皮膚病學手術、化妝品或其組合。53.實施方式1-52中一項或多項的組合物，其中，所述組合物治療性應用于皮膚病學中。54.實施方式1-53中一項或多項的組合物，其中所述組合物治療性應用于皮膚病學手術中。55.實施方式1-54中一項或多項的組合物，其中，所述組合物作為局部施用而治療性應用于美容、皮膚病學或其組合中。56.實施方式1-55中一項或多項的組合物，其中，所述組合物呈局部施用而治療性應用于皮膚病學中。57.實施方式1-56中一項或多項的組合物，其中，所述組合物用于治療面部皺紋、填充面部皺紋、治療細紋、治療皮膚老化、治療瘢痕組織、治療皮膚凹陷或其組合。58.實施方式1-57中一項或多項的組合物，其中，所述組合物應用于基本上生物活性的蛋白質殘基的局部沉積物的植入。59.實施方式1-58中一項或多項的組合物，其中，所述組合物應用于基本上生物活性的蛋白質殘基的局部沉積物的植入。60.實施方式1-59中一項或多項的組合物，其中，所述組合物應用于基本上生物活性的蛋白質殘基的緩慢釋放沉積物的植入。61.實施方式1-60中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含至少90%、95%、98%或99%的至少一種與生物分子和/或生物聚合物交聯(lián)的蛋白質殘基，其中所述生物分子和/或生物聚合物包括至少一個含糖殘基。62.實施方式1-61中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包含至少一種與交聯(lián)生物分子、生物聚合物或其組合基本上交聯(lián)的蛋白質殘基。63.實施方式1-62中一項或多項的組合物，其中，所述至少一種多糖殘基上的交聯(lián)數(shù)量可以是該至少一種多糖殘基上可能交聯(lián)部位數(shù)量的至少5%、10%、15%、20%或25%。64.實施方式1-63中一項或多項的組合物，其中，沒有結合到所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質且保持未結合的蛋白質單位的數(shù)量可以是至少1%、3%、5%或7%。65.實施方式1-64中一項或多項的組合物，其中，少于20%、15%、10%或7%的蛋白質單元沒有結合到所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質且保持未結合。66.實施方式1-65中一項或多項的組合物，其中，所述蛋白質單體可以交聯(lián)，使得約90%至約100%之間的蛋白質單體可以結合到組合物中。67.實施方式1-66中一項或多項的組合物，其中，所述至少一個蛋白質殘基來源于全長蛋白質或基本上全長蛋白質，并且其中蛋白質殘基的結構基本上沒有被至少一個含糖殘基所掩蔽。68.實施方式1-67中一項或多項的組合物，其中，所述組合物包括至少一種具有基本上沒有被至少一個含糖殘基掩蔽的結構的蛋白質殘基，所述組合物可以是組織更相容的，增大組織向內生長、再生長、或其組合。69.實施方式1-68中一項或多項的組合物，其中，所述組合物包括至少一種具有基本上沒有被至少一個含糖殘基掩蔽的結構的蛋白質殘基，所述組合物可被重塑為更常見且期望的結構和/或結合到新組織中。70.一種制備權利要求1-69中一項或多項的組合物的方法，其包括使至少一種蛋白質與至少一種可溶性含糖分子交聯(lián)。實施方式71.一種制備組合物的方法，包括至少一種交聯(lián)的蛋白質基質，其中所述至少一種交聯(lián)的蛋白質基質包括：i)至少一種蛋白質殘基；和ii)至少一種含糖殘基；其中所述交聯(lián)包括：i)修飾至少一種含糖分子，使其包括至少一個反應性化學基團；ii)使所述修飾的至少一種含糖分子與至少一種蛋白質結合，其中至少一種蛋白質包括與修飾的至少一種含糖分子上反應基團互補的反應性化學基團；和iii)在至少一種蛋白和修飾的至少一種含糖分子之間形成至少一個鍵。72.實施方式70或71的方法，其中，所述至少一個反應性化學基團為當與至少一種蛋白結合時能夠形成共價鍵的化學基團。73.實施方式70-72中一項或多項的方法，其中，所述至少一個鍵為共價鍵。74.實施方式70-73中一項或多項的方法，其中，所述修飾的至少一種含糖分子可溶于或基本上可溶于水和/或鹽溶液中。75.實施方式70-74中一項或多項的方法，其中，所述修飾的至少一種含糖分子保持可溶于或基本上可溶于水和/或生理學緩沖液中。76.實施方式70-75中一項或多項的方法，其中，所述至少一種含糖分子包括羧基和/或羥基。77.實施方式70-76中一項或多項的方法，其中，所述至少一種含糖分子通過活化羧基和/或羥基進行修飾。78.實施方式70-77中一項或多項的方法，其中，所述方法可以進一步包括通過沉淀和/或過濾修飾的至少一種含糖分子來純化修飾的至少一種含糖分子，以除去或基本上除去未反應的修飾反應物。79.實施方式70-78中一項或多項的方法，其中，當結合至少一種蛋白質時，所述修飾的至少一種含糖分子用作交聯(lián)劑。80.實施方式70-79中一項或多項的方法，其中將修飾的至少一種含糖分子的溶液與至少一種蛋白質混合，以形成至少一種交聯(lián)的蛋白質基質。81.一種使用方法，包括注射實施方式1-69中一項或多項的組合物。82.實施方式81的方法，其中，所述注射用于在至少一種下述中膨脹、增大組織或其組合：人類醫(yī)學或獸醫(yī)學；外科手術；恢復手術；美容手術；美容；組織膨脹；皮膚病學手術；眼睛手術；風濕病學；藥理學；化妝品領域；普通外科手術中的出血填塞；整形外科、神經外科中重建神經和血管；整形外科；矯形外科中固定皮膚、血管或軟骨移植物或接枝物；治療膝骨關節(jié)炎；血管手術；作為遞送細胞或生物活性分子如生長因子以刺激病灶修復的載體；局部遞送生長因子與交聯(lián)的蛋白質基質結構的組合以促進傷口愈合和組織再生或促進骨形成；在矯形手術中刺激軟骨修復；治療病理性傷口病癥，如慢性潰瘍；充當支架以通過培養(yǎng)物中自身細胞的增殖而生成人工組織；用于整形外科中組織增大，例如填充皮膚皺痕或嘴唇重建；用于補充體腔或凹陷；用于美容藥物；矯形治療；或恢復外科手術期間如眼睛外科手術期間流出的內容物（volume）。83.一種使用方法，包括：局部施用實施方式1-69中一項或多項的組合物。84.實施方式83的方法，其中，在下述的至少一種中的健康或受損組織上進行局部施用：美容；皮膚病學；填充面部皺紋；細紋；治療皮膚老化；瘢痕組織；或皮膚凹陷。85.一種試劑盒，用于給藥實施方式1-69中一項或多項的組合物。雖然已經結合一些實施方式描述了本發(fā)明，但是應當理解本發(fā)明并不限于所公開的實施方式，相反地，其意味著涵蓋各種修飾和同等排列。同時，本文描述的各個實施方式可以連同其他實施方式一起實施，例如，一個實施方式的多個方面可以結合另一個實施方式的多個方面，仍然可實現(xiàn)其他的實施方式。進一步，一個實施方式的每個獨立特征或部分可以構成另一個實施方式。