一種紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑及 其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫杉醇藥物是治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的主要用藥。自上世紀(jì)九十年代中期以來，多項 II、III期研究均肯定了紫杉醇藥物對轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效，并與多柔比星進(jìn)行比較，其至 疾病進(jìn)展時間（TTP)與生存期較多柔比星略優(yōu)或相似。
[0003] 已有紫杉醇白蛋白納米制劑由聚乙二醇為代表構(gòu)成聚合物包膜，其空間結(jié)構(gòu)在傳 遞藥物致靶向部位后會阻礙藥物的釋放與細(xì)胞靶向；聚乙二醇類物質(zhì)與配體的連接不穩(wěn)定 且在人體內(nèi)迅速降解，致使藥物靶向性低、穩(wěn)定性差、安全性降低，不利于臨床使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明利用獨特的納米技術(shù)使紫杉醇與白蛋白結(jié)合，提供一種使用方便，具有較 好的安全性、有效性及良好臨床應(yīng)用前景的納米級藥物制劑及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明具體的技術(shù)方案如下：
[0006] 本發(fā)明的紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑，由包括紫杉醇、分散劑、溶劑的原料，采 用白蛋白結(jié)合納米微粒方法制備而成，紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑平均粒徑小于220nm。
[0007] 其中，所述紫杉醇與所述分散劑的質(zhì)量比為1:7~1:10,優(yōu)選為1:8~ 1:9。
[0008] 所述分散劑為人血白蛋白、牛血白蛋白中的一種或二種任意比例的混合。
[0009] 所述溶劑為三氯甲烷、無水乙醇、注射用水中的一種或多種任意比例的混合。在本 發(fā)明中溶劑優(yōu)選使用無水乙醇-三氯甲烷質(zhì)量比1 : 4。
[0010] 本發(fā)明還提供了上述紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑的制作方法，包括以下步驟： 將所述分散劑溶于水中配制咸水相，所述紫杉醇溶于所述溶劑中配制成油相；將所述水相 與所述油相混合高速剪切后均質(zhì)，再經(jīng)溶劑蒸發(fā)，冷凍干燥，制得所述紫杉醇白蛋白結(jié)合型 凍干制劑。
[0011] 所述分散劑在配制咸水相之前，優(yōu)選先進(jìn)行除菌過濾。本發(fā)明對除菌過濾的過程 沒有特殊的限定，只要能達(dá)到除茵過濾雜質(zhì)的效果都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0012] 本發(fā)明將所述紫杉醇溶于所述溶劑中配制成油相。本發(fā)明對所使用的溶劑量沒有 具體的限定，根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，能達(dá)到紫杉醇溶解效果的溶劑量都在本發(fā)明的保護(hù) 范圍之內(nèi)。在本發(fā)明中紫杉醇和溶劑的質(zhì)量比為1 : 4-6,優(yōu)選為1 : 5。配制好的油相若 不能立即用于后續(xù)步驟，優(yōu)選將其置于1~l〇°C保存。
[0013] 本發(fā)明將所述水相與所述油相混合高速剪切。其高速剪切的具體步驟為：將所述 水相進(jìn)行降溫，優(yōu)選降至2°C~5°C進(jìn)行高速剪切，更優(yōu)選為2°C-3°C進(jìn)行高速剪切。水相 高速剪切l(wèi)-5min后向水相中加入油相，繼續(xù)高速剪切l(wèi)min~5min，優(yōu)選為lmin-3min。本 申請中高速剪切的速度為3000-4000rpm，優(yōu)選為3500rpm。
[0014] 高速剪切后的初乳進(jìn)行均質(zhì)。均質(zhì)過程在低溫下進(jìn)行，優(yōu)選溫度為0°C~8°C;均 質(zhì)壓力在5000-25000psi范圍內(nèi)，優(yōu)選為10000-20000psi，更優(yōu)選為13000-18000psi。根 據(jù)不同壓力設(shè)置不同的循環(huán)次數(shù)。在本發(fā)明均質(zhì)壓力下均質(zhì)1~10個循環(huán)，優(yōu)選為4-8個 循環(huán)。
[0015] 均質(zhì)結(jié)束后，以0~8°C注射用水稀釋均質(zhì)料液至紫杉醇用藥濃度，進(jìn)行溶劑蒸 發(fā)。優(yōu)選使用刮板式薄膜蒸發(fā)器蒸發(fā)，視蒸發(fā)情況選擇薄膜蒸發(fā)循環(huán)。本發(fā)明優(yōu)選進(jìn)行薄膜 蒸發(fā)1~8個循環(huán)。蒸發(fā)條件為轉(zhuǎn)速350rpm，真空度50mbar，進(jìn)料速度lL/min，溫度30°C。
[0016] 將薄膜蒸發(fā)后收集的濃縮液進(jìn)行冷凍干燥，制備成本發(fā)明的紫杉醇白蛋白結(jié)合型 凍干制劑。其中冷凍干燥的具體步驟為：凍干機板溫預(yù)先降至〇°c，采用下表程序進(jìn)行凍 干，制得紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑：
[0017]
[0018] 為了保證產(chǎn)品純度，在本發(fā)明中溶劑蒸發(fā)步驟后，還包括除菌過濾的步驟。具體 為，將料液經(jīng)薄膜蒸發(fā)后收集的濃縮液攪拌均勻后，經(jīng)0. 2iim濾器除菌過濾。
[0019] 與其他劑型紫杉醇相比，本發(fā)明新型靶向化療藥物紫杉醇白蛋白結(jié)合型凍干制劑 可在腫瘤局部產(chǎn)生更高的紫杉醇濃度，且注射時間短，可通過gp60穿胞途徑及結(jié)合于腫瘤 細(xì)胞外間質(zhì)的富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC)途徑來提高腫瘤外藥物濃度。研究顯 示，在肺癌、胰腺癌等腫瘤中，本品聯(lián)合其他治療亦顯示出良好的安全性和有效性。本發(fā)明 縮小紫杉醇粒徑至納米級水平，解決了溶解度問題，使人血白蛋白吸附在紫杉醇表面，利用 人血白蛋白表面電性與立體結(jié)構(gòu)來組織紫杉醇顆粒的聚集，并加強其靶向性，在血管外廣 泛分布與組織結(jié)合，縮短給藥時間，降低不良反應(yīng)，提高療效，提高臨床使用的適用性。
[0020] 本發(fā)明產(chǎn)品主要用于治療聯(lián)合化療失敗的轉(zhuǎn)移性乳腺癌或輔助化療后6個月內(nèi) 復(fù)發(fā)的乳腺癌，本發(fā)明無需溶劑和預(yù)防用藥，更有效，總體緩解率達(dá)54%以上，比其他溶劑 型紫杉醇高一倍，總體生存期及至腫瘤進(jìn)展時間延長，明顯提高給藥劑量，更安全，毒性反 應(yīng)更易控制，使用方便，具有較好的安全性、有效性及良好的臨床應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0021] 下面將結(jié)合本發(fā)明中的實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地 描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā) 明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施 例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0022] 實施例1
[0023] ①水相配制：
[0024] 取經(jīng)除菌過濾后人血白蛋白800g，加入2L注射用水，攪拌均勻后，待用；
[0025] ②油相配制
[0026] 精密稱取紫杉醇100g，溶于無水乙醇-三氯甲烷混合溶劑500ml中（1 :4)，將其 置于2°C保存，待用；
[0027] ③油、水相初步混合
[0028] 取水相溶液置于低溫冷卻液中降溫，待溫度降至2°C時，高速剪切，剪切速度為 3000rpm，剪切時間為2min，邊剪切邊緩慢加入油相，待油相加入完畢后，繼續(xù)高速剪切，剪 切速度為3000rpm，剪切時間為2min。
[0029] ④高壓均質(zhì)
[0030] 油、水相剪切后得到的初乳溶液由進(jìn)料口加入到高壓微射流均質(zhì)機，在5000psi 壓力情況下1個循環(huán)，在15000psi壓力情況下2個循環(huán)，在22500psi壓力情況下1個循環(huán)， 均質(zhì)過程中循環(huán)管路料液需保持在〇_8°C溫度范圍內(nèi)。
[0031] ⑤溶劑蒸發(fā)
[0032] 均質(zhì)結(jié)束后，以1°C注射用水稀釋料液至約2mg/ml(以紫杉醇理論濃度計），加 入刮板式薄膜蒸發(fā)器中蒸發(fā)，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)3個循環(huán)。蒸發(fā)條件為轉(zhuǎn)速350rpm，真空度 50mbar，進(jìn)料速度lL/min，溫度 30°C。
[0033] ⑥除菌過濾
[0034] 蒸發(fā)濃縮后料液攪拌均勻后經(jīng)0. 2ym濾器除菌過濾。
[0035] ⑦灌裝、半加塞
[0036] 以紫杉醇100mg分裝。
[0037] ⑧冷凍干燥
[0038] 凍干機板溫預(yù)先降至0°C，采用下表程序進(jìn)行凍干。
[0039]
[0040] ⑨凍干結(jié)束后，進(jìn)氮氣，充氮，壓塞，出箱，乳蓋。制備得到的紫杉醇白蛋白型凍干 制劑平均粒徑小于220nm。
[0041] 實施例2
[0042] ①水相配制：
[0043] 取經(jīng)除菌過濾后人血白蛋白900g，加入2L注射用水，攪拌均勻后，待用；
[0044] ②油相配制
[0045] 精密稱取紫杉醇100g，溶于無水乙醇-三氯甲烷混合溶劑500ml中（1 : 4)，將其 置于:TC保存，待用；
[0046] ③油、水相初步混合
[0047] 取水相溶液置于低溫冷卻液中降溫，待溫度降至3°C時，高速剪切，剪切速度為 4000rpm，剪切時間為3min，邊剪切邊緩慢加入油相，待油相加入完畢后，繼續(xù)高速剪切，剪 切速度為4000rpm，剪切時間為3min。
[0048] ④高壓均質(zhì)
[0049] 將油、水相剪切后得到的初乳溶液由進(jìn)料口加入到高壓微射流均質(zhì)機，在5000psi 壓力情況下2個循環(huán)，在15000psi壓力情況下4個循環(huán)，在22500psi壓力情況下4個循環(huán)， 均質(zhì)過程中循環(huán)管路料液需保持在〇_8°C溫度范圍內(nèi)。
[0050] ⑤溶劑蒸發(fā)
[0051] 均質(zhì)結(jié)束后，以2°C注射用水稀釋料液至約2mg/ml(以紫杉醇理論濃度計），加 入刮板式薄膜蒸發(fā)器中蒸發(fā)，進(jìn)行薄膜蒸發(fā)5個循環(huán)。蒸發(fā)條件為轉(zhuǎn)速350rpm，真空度 50mbar，進(jìn)料速度lL/min，溫度 30°C。
[0052] ⑥除菌過濾
[0053] 蒸發(fā)濃縮后料液攪拌均勻后經(jīng)0. 2 y m濾器除菌過濾。
[0054] ⑦灌裝、半加塞
[0055] 以紫杉醇l〇〇mg分裝。
[0056] ⑧冷凍干燥
[0057] 凍干機板溫預(yù)先降至0°C，采用下表程序進(jìn)行凍干。
[0058]
[0059] ⑨凍干結(jié)束后，進(jìn)氮氣，充氮:壓塞，
心箱，乳蓋。制備得到的紫杉醇白蛋白型凍干 制劑平均粒徑小于220nm。
[0060] 實施例3
[0061] ①水相配制：
[0062] 取經(jīng)除菌過濾后人血白蛋白700g，加入2L注射用水，攪拌均勻后，待用；
[0063] ②油相配制
[0064] 精密稱取紫杉醇100g，溶于無水乙醇-三氯甲烷混合溶劑500ml中（1 : 4)，將其 置于4°C保存，待用；
[0065]