一種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素Ⅲ的培養(yǎng)基添加劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇(paclitaxel)是從紅豆杉科紅豆杉屬(Taxus)植物的樹皮中提取得到的二萜類化合物。它是一種新型的微管穩(wěn)定劑，具有獨(dú)特抗癌活性，被美國(guó)國(guó)立癌癥研究所認(rèn)為是近15?20年來(lái)腫瘤化療的最重要的進(jìn)展。作為晚期卵巢癌的二線治療藥，至今已在40多個(gè)國(guó)家獲準(zhǔn)上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃腸道癌及介入治療后的血管再狹窄等治療上顯示了令人鼓舞的療效。紫杉醇由于資源匱乏和水溶性低的問(wèn)題而限制了它的臨床應(yīng)用。
[0003]多烯紫杉醇是在C4和C5位置上含有一個(gè)帶有氧四環(huán)的紫杉烷環(huán)結(jié)構(gòu)，并在C13位置上含有一個(gè)龐大的酯側(cè)鏈。在其體外活性結(jié)構(gòu)關(guān)系中顯示C13酯側(cè)鏈的特性和構(gòu)型對(duì)于多烯紫杉醇體外抗微管蛋白活性是置關(guān)重要的。相對(duì)于紫杉醇而言，多烯紫杉醇的水溶性顯著提升，用于細(xì)胞凋亡和癌癥治療的藥物活性高于紫杉醇，因此其制備方法受到了廣泛的關(guān)注。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，多烯紫杉醇的制備方法是利用其前體物質(zhì)10-去乙酰漿果赤霉素III進(jìn)行化學(xué)修飾實(shí)現(xiàn)的，該前體物質(zhì)目前仍主要通過(guò)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)的方式獲得。然而一方面由于受代謝調(diào)控的限制，紅豆杉細(xì)胞分泌10-去乙酰漿果赤霉素III的傾向并不旺盛；另一方面受限于培養(yǎng)密度、細(xì)胞產(chǎn)量等因素，使得目標(biāo)產(chǎn)物的得率較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，以解決現(xiàn)有技術(shù)中紅豆杉細(xì)胞對(duì)10-去乙酰漿果赤霉素III的分泌量較低的技術(shù)問(wèn)題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0007]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，包括以下重量份的成分:鉬酸鈉8?10份，秋水仙素4?6份，組氨酸2?3份，芹菜素1?2份，蛋白胨1?2份，酵母粉1?2份，連翹1?2份，雞骨草1?2份，扁豆衣1?2份，景天三七1?2份，水50?60份。
[0008]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的金銀花。
[0009]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的松花粉。
[0010]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的絞股藍(lán)。
[0011]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的升麻。
[0012]作為優(yōu)選，所述添加劑由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉9份，秋水仙素5份，組氨酸2.5份，芹菜素1.5份，蛋白胨1.5份，酵母粉1.5份，連翹1.5份，雞骨草1.5份，扁豆衣1.5份，景天三七1.5份，水55份。
[0013]作為優(yōu)選，所述添加劑由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8.5份，秋水仙素5.5份，組氨酸2.1份，芹菜素1.3份，蛋白胨1.7份，酵母粉1.6份，連翹1.2份，雞骨草1.1份，扁豆衣1.4份，景天三七1.5份，金銀花1.4份，松花粉1.1份，絞股藍(lán)1.5份，升麻1.8份，水57份。
[0014]本發(fā)明通過(guò)在培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)子的方式干涉紅豆杉細(xì)胞自身代謝模式，從而定向誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞分泌多烯紫杉醇半合成前體一一10-去乙酰漿果赤霉素III。本發(fā)明在用于細(xì)胞培養(yǎng)的慣常營(yíng)養(yǎng)物基礎(chǔ)上優(yōu)選了多種微量元素并確定了最佳配比，在此基礎(chǔ)上添加了一定量的天然藥物成分旨在進(jìn)一步促進(jìn)該前體物質(zhì)的產(chǎn)率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加本發(fā)明添加劑后，紅豆杉細(xì)胞對(duì)10-去乙酰漿果赤霉素III的分泌量顯著提升，同時(shí)能夠在一定程度增進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)密度。本發(fā)明技術(shù)思路清晰，技術(shù)方案合理，具有良好的規(guī)?；瘧?yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下將對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過(guò)多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。
[0016]實(shí)施例1
[0017]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8份，秋水仙素4份，組氨酸2份，芹菜素1份，蛋白胨1份，酵母粉1份，連翹1份，雞骨草1份，扁豆衣1份，景天三七1份，水50份。
[0018]實(shí)施例2
[0019]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉10份，秋水仙素6份，組氨酸3份，芹菜素2份，蛋白胨2份，酵母粉2份，連翹2份，雞骨草2份，扁豆衣2份，景天三七2份，水60份。
[0020]實(shí)施例3
[0021]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉9份，秋水仙素5份，組氨酸2.3份，芹菜素1.8份，蛋白胨1.5份，酵母粉1.6份，連翹1.7份，雞骨草1.8份，扁豆衣1.2份，景天三七1.8份，水55份。
[0022]實(shí)施例4
[0023]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8.8份，秋水仙素5.4份，組氨酸2.7份，芹菜素1.2份，蛋白胨1.2份，酵母粉1.2份，連翹1.5份，雞骨草1.6份，扁豆衣1.4份，景天三七1.7份，金銀花1份，升麻1.1份，水52份。
[0024]實(shí)施例5
[0025]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉9.4份，秋水仙素4.2份，組氨酸2.1份，芹菜素1.3份，蛋白胨1.1份，酵母粉1份，連翹2份，雞骨草1.9份，扁豆衣1.2份，景天三七1.9份，松花粉1.3份，絞股藍(lán)1.2份，升麻1.6份，水58份。
[0026]實(shí)施例6
[0027]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8.8份，秋水仙素5.4份，組氨酸2.7份，芹菜素1.2份，蛋白胨1.2份，酵母粉1.2份，連翹1.5份，雞骨草1.6份，扁豆衣1.4份，景天三七1.7份，金銀花1.5份，水55份。
[0028]實(shí)施例7
[0029]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉9.2份，秋水仙素5.7份，組氨酸2.4份，芹菜素1.5份，蛋白胨1.5份，酵母粉1.7份，連翹1.7份，雞骨草1.2份，扁豆衣1.9份，景天三七2份，絞股藍(lán)1.8份，水59份。
[0030]實(shí)施例8
[0031]—種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8.5份，秋水仙素5.5份，組氨酸2.1份，芹菜素1.3份，蛋白胨1.7份，酵母粉1.6份，連翹1.2份，雞骨草1.1份，扁豆衣1.4份，景天三七1.5份，金銀花1.4份，松花粉1.1份，絞股藍(lán)1.5份，升麻1.8份，水57份。
[0032]以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于包括以下重量份的成分:鉬酸鈉8?10份，秋水仙素4?6份，組氨酸2?3份，芹菜素1?2份，蛋白胨1?2份，酵母粉1?2份，連翹1?2份，雞骨草1?2份，扁豆衣1?2份，景天三七1?2份，水50?60份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于還包括1?2重量份的金銀花。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于還包括1?2重量份的松花粉。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于還包括1?2重量份的絞股藍(lán)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于還包括1?2重量份的升麻。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于所述添加劑由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉9份，秋水仙素5份，組氨酸2.5份，芹菜素1.5份，蛋白胨1.5份，酵母粉1.5份，連翹1.5份，雞骨草1.5份，扁豆衣1.5份，景天三七1.5份，水55份。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素III的培養(yǎng)基添加劑，其特征在于所述添加劑由以下重量份的成分組成:鉬酸鈉8.5份，秋水仙素5.5份，組氨酸2.1份，芹菜素1.3份，蛋白胨1.7份，酵母粉1.6份，連翹1.2份，雞骨草1.1份，扁豆衣1.4份，景天三七1.5份，金銀花1.4份，松花粉1.1份，絞股藍(lán)1.5份，升麻1.8份，水57份。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞生產(chǎn)10-去乙酰漿果赤霉素Ⅲ的培養(yǎng)基添加劑，該添加劑包括鉬酸鈉、秋水仙素、組氨酸、芹菜素、蛋白胨、酵母粉、連翹、雞骨草、扁豆衣、景天三七等成分。本發(fā)明通過(guò)在培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)子的方式干涉紅豆杉細(xì)胞自身代謝模式，從而定向誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞分泌多烯紫杉醇半合成前體——10-去乙酰漿果赤霉素Ⅲ。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加本發(fā)明添加劑后，紅豆杉細(xì)胞對(duì)10-去乙酰漿果赤霉素Ⅲ的分泌量顯著提升，同時(shí)能夠在一定程度增進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)密度。本發(fā)明技術(shù)思路清晰，技術(shù)方案合理，具有良好的規(guī)?；瘧?yīng)用前景。
【IPC分類】C12P17/02, C12N5/04
【公開號(hào)】CN105368889
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510960016
【發(fā)明人】夏雪城, 夏爽
【申請(qǐng)人】天津市博愛(ài)生物藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2015年12月18日