一種靈芝萜烯酮醇的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物化學領域，具體的說設及一種靈芝祗締酬醇的制備方法。
【背景技術】
[0002] 靈芝祗締酬醇為S祗類化合物，CAS號104700-97-2,分子式〔3化6〇2,分子量 438. 685,分子結構式如下：
[0003]
[0004] 靈芝=祗是靈芝的次級代謝產(chǎn)物，具有多種藥理活性。文獻報道，靈芝祗締酬醇在 體外細胞實驗中都具有良好的抗腫瘤、美白、消炎、防止紫外傷害的作用。 陽〇化]通過文獻檢索，目前還沒有發(fā)現(xiàn)靈芝祗締酬醇的規(guī)?；苽浞椒ā?br>
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種靈芝祗締酬醇的制備方法，該方法包括如下步驟：
[0007] (1)提取和富集靈芝祗締酬醇：將靈芝子實體加入乙醇溶液加熱提取，收集提取 液并濃縮；濃縮的提取液經(jīng)大孔樹脂乙醇梯度洗脫后，洗脫液進行減壓濃縮，再經(jīng)硅膠柱層 析獲得富含靈芝祗締酬醇的組分；
[0008] (2)高速逆流色譜法分離靈芝祗締酬醇：用高速逆流色譜儀進行靈芝祗締酬醇分 離；然后用高效液相色譜法分析檢測，收集、濃縮、干燥，分離得到靈芝祗締酬醇。
[0009] 具體的說，本發(fā)明的一種靈芝祗締酬醇的制備方法，包括如下步驟：
[0010] (1)提取和富集靈芝祗締酬醇：將靈芝子實體加入5-10倍體積的75-95%乙醇水 溶液加熱至50-70°C提取，每次1-3小時，重復2-3次；收集每次的提取液并將提取液加熱 減壓濃縮，濃縮液經(jīng)DlOl大孔樹脂用50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %乙醇依次梯度洗 脫，每個梯度用3-5倍體積的溶液洗脫；得到的洗脫液分別減壓濃縮，然后合并95 %和90 % 洗脫組分，過正相硅膠柱層析（100-200目），氯仿與甲醇（氯仿：甲醇=100:0-7:3(體積 比））梯度洗脫，每份收集1000ml，共收集92個流份；根據(jù)薄層層析CTLC)檢測結果合并相 似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇=98:2洗脫）中富含靈芝祗締酬醇；
[0011] (2)高速逆流色譜法分靈芝祗締酬醇：溶劑體系由正己燒、乙酸乙醋、甲醇、水組 成，按10-14 :22-26 :16-22 :7-11體積比混合，取上相做固定相，下相為流動相，將富含靈芝 祗締酬醇的流份（46-52流份）用下相溶解并進樣，轉(zhuǎn)速700-1000;rmp，流速為l-3ml/min， 每4~IOmL收集為一個饋分；然后用高效液相色譜法分析檢測各試管收集液成分，按不同 成分收集、濃縮、干燥，并與靈芝祗締酬醇標準品作對比，確定分離得到靈芝祗締酬醇。
[0012] 高速逆流色譜是一種無固相載體的連續(xù)液-液分配色譜技術，與傳統(tǒng)的色譜技術 相比具有很多優(yōu)勢，利用該色譜技術來制備靈芝=祗化合物，不需固態(tài)支持物作載體，不存 在不可逆吸附，靈芝=祗的分離效率高、回收率高、分離時間短，此外，在制備過程中，樣品 分解率較低；溶劑流失也較少，是一種經(jīng)濟實用獲得靈芝=祗化合物的方法。
[0013] 采用本發(fā)明的方法制備靈芝祗締酬醇，成本低，污染小，操作簡單，且靈芝祗締酬 醇的得率、純度高。
【附圖說明】：
[0014] 圖1為實施例1的高速逆流分離譜圖
[0015] 圖2為實施例1中獲得的靈芝祗締酬醇的高效液相譜圖
[0016] 圖3為實施例2的高速逆流分離譜圖
[0017] 圖4為實施例2中獲得的靈芝祗締酬醇的高效液相譜圖
【具體實施方式】
[0018] 供試子實體：滬農(nóng)靈芝1號GanodermaIucidum,由上海市農(nóng)業(yè)科學院食用菌研究 所提供。
[0019] 靈芝祗締酬醇標準品購自國家標準物質(zhì)標準樣品信息中屯、。
[0020] D-IOl大孔樹脂，凈品級，天津海光化工有限公司。
[0021] 正相硅膠（100-200目），青島海洋化工廠。 陽〇巧薄層層析（TLC)板腿GF2M):煙臺匯友硅膠開發(fā)有限公司。
[0023] 其余試劑為普通市售產(chǎn)品。
[0024] 中試提取設備：200化提取罐，江蘇天宇機械有限公司。 陽0巧]2化旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：BC-R2001，上海貝凱生物化工設備有限公司；配用甜B(yǎng)-B95型循 環(huán)水式多用真空累，鄭州長城科工貿(mào)有限公司。
[00%] 高速逆流色譜儀購自上海同田生物技術股份有限公司，儀器型號為：T邸-300B。
[0027] 高效液相色譜儀為Waters公司產(chǎn)品，儀器型號為2695-717-600E。 陽02引 實施例1 :
[0029] 將50kg靈芝子實體切片，投料進入中試提取設備中，加入8倍體積的87%乙醇水 溶液提取2次，第一次化，第二次比。提取溫度均為65°C。將兩次的提取液合并，在蒸煮罐 中加熱蒸煮濃縮后再用WL旋蒸儀減壓加熱濃縮，獲得靈芝子實體提取物。
[0030]將靈芝子實體提取物過大孔樹脂D101，用50%、60%、70%、80%、90%、95%乙醇 依次梯度洗脫，洗脫液分別減壓濃縮，然后合并95%和90%洗脫組分（共194g)，過正相娃 膠柱層析（100-200目，2200g)，氯仿：甲醇（100:0-7:3)梯度洗脫，每份收集1000ml，共收 集92個流份。根據(jù)薄層層析（TLC)檢測結果合并相似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇 = 98:2洗脫）中富含靈芝祗締酬醇。 陽〇3U 取正己燒、乙酸乙醋、甲醇、7心按12 :24 :18 :9的體積比混合，充分分層后，取上相 做固定相，注滿高速逆流色譜管后，開轉(zhuǎn)主機，轉(zhuǎn)速9(K)巧m，同時累入下相做流動相，流速為 2ml/min，用流動相溶解樣品500mg，待出口處流出流動相且系統(tǒng)穩(wěn)定后，由進樣閥進樣，紫 外檢測器在線監(jiān)測，每8ml收集為一個饋分。HPLC分析檢測分離情況，并與靈芝祗締酬醇標 準品作對比，確定收集合并靈芝祗締酬醇的饋分，濃縮干燥，用高效液相面積歸一化法測得 純度為90. 9 %的靈芝祗締酬醇52.Img。 陽03引 實施例2 :
[0033] 將50kg靈芝子實體切片，投料進入中試提取設備中，加入8倍體積的87%乙醇水 溶液提取2次，第一次化，第二次比。提取溫度均為65°C。將兩次的提取液合并，在蒸煮罐 中加熱蒸煮濃縮后再用WL旋蒸儀減壓加熱濃縮，獲得靈芝子實體提取物。
[0034] 將靈芝子實體提取物過大孔樹脂D101，用50%、60%、70%、80%、90%、95%乙醇 依次梯度洗脫，洗脫液分別減壓濃縮，然后合并95%和90%洗脫組分（194g)，過正相硅膠 柱層析（100-200目，2200g)，氯仿：甲醇（100:0-7:3)梯度洗脫，每份收集1000ml，共收集 92個流份。根據(jù)薄層層析（TLC)檢測結果合并相似流份，其中46-52流份（氯仿：甲醇= 98:2洗脫）中富含靈芝祗締酬醇。 陽03引取正己燒、乙酸乙醋、甲醇、水，按12 :24 :20 :9的體積比混合，充分分層后，取上相 做固定相，注滿高速逆流色譜管后，開轉(zhuǎn)主機，轉(zhuǎn)速9(K)巧m，同時累入下相做流動相，流速為 2ml/min，用流動相溶解樣品200mg，待出口處流出流動相且系統(tǒng)穩(wěn)定后，由進樣閥進樣，紫 外檢測器在線監(jiān)測，每8ml收集為一個饋分。HPLC分析檢測分離情況，并與靈芝祗締酬醇標 準品作對比，確定收集合并靈芝祗締酬醇的饋分，濃縮干燥，用高效液相面積歸一化法測得 純度為92. 1 %的靈芝祗締酬醇17. 5mg。
【主權項】
1. 一種靈芝萜烯酮醇的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟： (1) 提取和富集靈芝萜烯酮醇：將靈芝子實體加入乙醇溶液加熱提取，提取液濃縮；濃 縮液進行大孔樹脂乙醇梯度洗脫，洗脫液進行減壓濃縮，再經(jīng)硅膠柱層析獲得富含靈芝萜 烯酮醇的組分； (2) 高速逆流色譜法分離靈芝萜烯酮醇：用高速逆流色譜儀進行靈芝萜烯酮醇分離； 然后用高效液相色譜法分析檢測，收集、濃縮、干燥，得到靈芝萜烯酮醇。2. 根據(jù)權利要求1所述的靈芝萜烯酮醇的制備方法，其特征在于該方法包括如下步 驟： (1) 提取和富集靈芝萜烯酮醇：將靈芝子實體加入5-10倍75-95 %乙醇溶液加熱 50-70°C提取，每次1-3小時，重復2-3次。將提取液加熱減壓濃縮，濃縮液經(jīng)過D101大孔樹 脂用50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %乙醇依次梯度洗脫，每個梯度用3-5倍溶液體積洗 脫。將洗脫液分別減壓濃縮，然后將95%和90%洗脫組分合并，過正相硅膠柱層析100-200 目，氯仿與甲醇梯度洗脫，每份收集l〇〇〇ml，共收集92個流份。根據(jù)薄層層析檢測結果合并 相似流份，其中46-52流份中富含靈芝萜烯酮醇； (2) 高速逆流色譜法分離靈芝萜烯酮醇：溶劑體系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水組成， 按10-14 :22-26 :16-22 :7-11體積比混合，取上相做固定相，下相為流動相，將富含靈芝萜 稀酮醇的流份，46-52流份，用下相溶解并進樣，轉(zhuǎn)速700-1000rmp，流速為l-3ml/min，每 4~10mL收集為一個餾分；然后用高效液相色譜法分析檢測各試管收集液成分，按不同成 分收集、濃縮、干燥，分離得到靈芝萜烯酮醇。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種靈芝萜烯酮醇的制備方法，該方法包括步驟；(1)提取和富集靈芝萜烯酮醇：將靈芝子實體加入乙醇溶液加熱提取，提取液濃縮；濃縮液經(jīng)大孔樹脂乙醇梯度洗脫吸附后，進行減壓濃縮，再過柱層析獲得富含靈芝萜烯酮醇的組分；(2)高速逆流色譜法分離靈芝萜烯酮醇：用高速逆流色譜儀進行靈芝萜烯酮醇分離；然后用高效液相色譜法分析檢測，收集、濃縮、干燥，分離得到靈芝萜烯酮醇。本發(fā)明的一種靈芝萜烯酮醇的制備方法操作簡單，污染小，成本低，靈芝萜烯酮醇的得率、純度高。
【IPC分類】C07J9/00
【公開號】CN105294802
【申請?zhí)枴緾N201510793776
【發(fā)明人】馮娜, 張勁松, 田振, 唐慶九, 馮杰, 楊焱, 唐傳紅, 魏雨恬
【申請人】上海市農(nóng)業(yè)科學院
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月17日