專利名稱：：4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物以及制備方法和用途，屬于化學醫(yī)藥領域。
背景技術：
：惡性腫瘤已成為人類死亡的第二大死因，嚴重地威脅著人類的健康。而在我國，據(jù)最新統(tǒng)計，腫瘤已成為我國人民死亡的第一大原因，據(jù)最新流行病學調査資料顯示我國現(xiàn)有癌癥病人300多萬人，每年死于惡性腫瘤的患者約為130萬人，每年有160萬到200萬新發(fā)的惡性腫瘤病例，并以3%的速度遞增，給我國人民的生活和健康造成巨大威脅，給社會和家庭帶來巨大的壓力，一定程度上制約了我國經濟的可持續(xù)發(fā)展。傳統(tǒng)的腫瘤治療方法主要為以外科手術為主的多學科綜合治療。由于現(xiàn)有的治療手段或藥物的選擇性不高，在殺滅腫瘤細胞的同時損害體內某些類型的正常細胞，使治療過程中出現(xiàn)明顯的毒副作用。近年來隨著分子生物學的進展和對癌癥發(fā)病機制的深入研究，出現(xiàn)了以特定分子為耙點的抗腫瘤藥物，如gefitinib(Iressa)、erlotinib(Tarceva)、Gleevec(imatinib)、Nexavar(sorafenib)、Sutent(sunitinibmalate)等。腫瘤血管在實體瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，研究證明，臨床上任何可探測出的實體瘤的生長和轉移是依賴于血管生成的。Folkman等提出，實體瘤的生長有賴于血管的生成，如果沒有血管，腫瘤直徑不會超過l2mm，因此，靶向腫瘤血管的新藥研發(fā)已成為一個熱點領域。目前研究已證實許多與腫瘤血管生成密切相關的細胞因子受體，典型的包括血管內皮生長因子受體(VEGFR)、血小板衍生生長因子受體(PDGFR)等等。實驗研究已發(fā)現(xiàn)，抑制這些細胞因子受體的活性可以破壞腫瘤的血管生成，從而達到抑制腫瘤生長的目的?；赩EGFR2和PDGFR等的抑制劑在抗腫瘤中的重要價值，本發(fā)明的發(fā)明人近年來開展了針對腫瘤血管的耙向小分子藥物設計和合成研究工作，設計并合成了一些實體化合物，經過體外細胞篩選，發(fā)現(xiàn)其中的一些化合物對腫瘤細胞增殖具有一定的抑制活性，通過進一步的結構優(yōu)化和合成，得到了一些新型的化合物，它們在多種腫瘤細胞株上顯示出良好的抑制活性，并在體內實驗中也顯示了較好的結果。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于為抗腫瘤血管生成的藥物提供一類新的化合物。本發(fā)明的技術方案是提供4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的衍生物，所述衍生物的結構如式I所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>I其中，Rl為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。優(yōu)選的，Ri為氫，氯代基或三氟甲基；R2為氫，氯代基或三氟甲基；R3為氫，氯代基或三氟甲基。更優(yōu)的，Rl為氫；R2為氫，氯代基或三氟甲基；R3為氫，氯代基或三氟甲基。最優(yōu)的，所述4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的衍生物為4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶，4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶，或4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶。本發(fā)明所要解決的第二個技術問題是提供上述式I所示化合物的合成方法，由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶與相應化合物通過?；磻苽涞玫?，具體可以采用以下幾種方法a、由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶與取代苯甲酰氯以吡啶作為溶劑和縛酸劑，通過?；磻苽涞玫健、由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶與取代苯甲酰氯以四氫呋喃作為溶劑和碳酸鉀作為縛酸劑，通過?；磻苽涞玫健Ｆ渲?-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶可以購買獲得，也可以由4-(4-氯)苯胺基-2-(甲基氨甲?；?吡啶與對氨基苯酚按照現(xiàn)有技術公開的方法制備得到。本發(fā)明所要解決的第三個技術問題是提供上述4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，是由上述式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物添加藥學上可以接受的輔助性成分制備而成的。該藥物組合物可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物是在大量篩選的基礎上得到的，具有抗腫瘤活性，為抗腫瘤藥物的開發(fā)和應用提供了新的選擇。圖1化合物4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶對不同腫瘤細胞的抑制作用。其中符號l表示化合物對人肺癌細胞株(A549)的抑制作用，2表示化合物對人肝癌細胞株(H印G2)的抑制作用，3表示化合物對人結腸癌細胞株(HCT116)的抑制作用。具體實施例方式本發(fā)明提供的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的衍生物如式I所示0I其中，Rl為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。上述式I所示化合物的合成方法，由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶與相應化合物通過?；磻苽涞玫剑唧w可以采用以下幾種方法一、將4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶溶于吡啶中，室溫下緩慢加入R取代苯甲酰氯，升溫到8(TC。氮氣保護下約l小時，反應完畢。向反應體系中加水，攪拌10分鐘，加入飽和NaHC03溶液到無氣泡產生，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水MgS04干燥，濃縮得粗品，乙酸乙酯重結晶得純品。二、將4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶與碳酸鉀的混合物溶于四氫呋喃(THF)中，室溫攪拌下，緩慢滴加酰氯，然后攪拌l小時，過濾得產品。4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶合成方法包括以下幾種方法一室溫下將對氨基苯酚溶于無水DMF，再加入叔丁醇鉀，氮氣保護下攪拌2小時。加入N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺和碳酸鉀，加熱反應6小時。室溫下向反應液中倒入乙酸乙酯和水，收集有機層干燥旋干得到粗產品，重結晶得到棕色晶體。方法二將N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺溶于THF中，加入對氨基苯酚、相轉移催化劑聚乙二醇600、氫氧化鈉和45%氫氧化鈉溶液，回流12h。蒸除THF，剩余物中加入水，過濾，濾餅以異丙醇重結晶、冷異丙醇洗滌，4(TC減壓干燥，得淺棕色固體。以下結合實施例對本發(fā)明作進一步的闡述。實施例僅用于說明本發(fā)明，而不是以任何方式來限制本發(fā)明。實施例14-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制備合成路線如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>1、4-氯-2-吡啶甲酰氯鹽酸鹽的制備由2-甲酸吡啶按照現(xiàn)有公開的方法制備得到，例如在干燥的反應瓶中，將2-甲酸吡啶(30.OOg，0.244mmol)和NaBr(4.OOg，0.040mmol)混合后，加入到氯苯(40ml)中，待混懸液加熱到5(TC時緩慢加入二氯亞砜(61ml，0.840mmo1)，使放出的氣體(S02，HC1)有效地得以控制?；旌衔锛訜岬?5。C，攪拌19小時。反應完畢后，冷卻至2(TC，旋蒸除去過量的二氯亞砜和氯苯混合物。再加入甲苯(65.70g，75.5ml)，再次旋蒸除去仍然殘留的二氯亞砜和大量的氯苯，所得粗品溶于甲苯(84.80g，97.5ml)，以待下步反應使用。也可以購買獲得。2、N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺的制備由4-氯-2-(氯甲?；?吡啶鹽酸鹽按照現(xiàn)有公開的方法制備得到，例如25%甲胺溶液(95.50g，0.77mol)冷至-5°C，20°C以下滴加上述4-氯-2-(氯甲?；?吡啶鹽酸鹽的甲苯溶液。滴畢同溫反應90分鐘。靜置分層，甲苯層用水(45mlX2)洗滌，減壓蒸除溶劑，剩余棕色油狀物中加入THF(170ml)，冷至5。C，20°C以下滴加36%鹽酸(29.40g，0.30mol)。加畢同溫攪拌1小時，過濾，濾餅用THF(20mlX2)洗滌，溶于水(120ml)中，加20%氫氧化鈉溶液調至pH=7，攪拌30分鐘，過濾，濾餅用水(20mlX2)洗滌，2(TC減壓干燥，得白色固體(38.60g，產率93.1%，以2-甲酸吡啶計)，mp3538°C。也可以購買獲得。工H麗R(400腿z，CDC13)S:3.00(s，3H，NHCH3)，7.40(dd，J=l.9、5.2Hz，lH)，7.95(br，s，1H，NH)，8.18(d，J=l.9Hz，1H，pyridine)，8.41(d，J=5.2Hz，1H，pyridine)。質譜(m/e)170(M+l)。3、4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的制備N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺(3.40g，0.02mol)溶于THF(16ml)，加入對氨基苯酚(2.40g，0.02mol)、相轉移催化劑聚乙二醇600(2.40g)、氫氧化鈉(1.20g，0.03mol)和45X氫氧化鈉溶液(2.7ml)，回流12小時。蒸除THF溶劑，剩余物中加入水(20ml)，過濾，濾餅以異丙醇重結晶、冷異丙醇(5mlX2)洗滌，4(TC減壓干燥，得淺棕色固體(3.50g，產率72.2%)，mp108110。C。實施例24-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制備室溫下將對氨基苯酚(0.70g，6.40mmo1)溶于7ml無水DMF加入叔丁醇鉀(0.72g，6.40mmol)氮氣保護下攪拌2小時。加入N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺(O.50g，2.90mmo1)，碳酸鉀(0.20g，1.40mmo1)，加熱反應6小時。室溫下將反應液倒入(乙酸乙酯200ml+水20ml)混合液中，收集有機層，去除溶劑，得粗產品，柱層析分離，得到棕黑色固體0.41g，(產率57.1%)。工HNMR(400腿z，CDC13):3.0(d，J=5.2Hz，3H，—NHCH3)，3.7(br，s，2H，—NH2)，6.7(d，J=8.8Hz，2H)，6.9(m，3H)，7.67(d，J=2.他，1H)，8.0(s，1H，NH)，8.3(d，J=6Hz，1H)MS-ESI(m/z):244.4(M+l)，266.4(M+23)實施例3化合物Ia:4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的制備將4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶(0.20g，0.82mmol)溶于吡啶(1.5ml)中，室溫下緩慢加入鄰三氟甲基苯甲酰氯(0.21ml，2.90mmo1)，升溫到8(TC。氮氣保護下反應約1小時，TCL法監(jiān)測，原料反應完為反應終點。向反應體系中加水(3ml)，攪拌10分鐘。反應液加入飽和NaHC03溶液到無氣泡產生，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水MgS04干燥，濃縮得粗品，粗品用乙酸乙酯重結晶，得淺粉色純品(0.17g，產率50%)。MS—ESI(m/z):414.2(M—1)實施例4化合物Ib:4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的制備將4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶(0.50g，2.06mmol)溶于吡啶(3ml)中，室溫下緩慢加入間三氟甲基苯甲酰氯(2.47ml，5.2mmo1)，升溫到8(TC。氮氣保護下約l小時，TCL監(jiān)測，原料化合物反應完為反應終點。向反應體系中加水(6ml)，攪拌10分鐘。反應液加入飽和NaHC03溶液到無氣泡產生，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水MgS04干燥，濃縮得粗品，柱層析分離，得到淺粉色化合物0.51g(產率60呢)。4NMR(400腿z，DMSO—d6):2.97(d，J=4.8，3H)，7.18(m，1H)，7.26(d，J=9.2Hz，2H)，7.4(d，J=2.4Hz，1H)，7.8(m，1H)，7.92(d，J=9.2Hz，2H)，7.99(d，J=7.6Hz，2H)，8.3(m，2H)，8.5(d，J=5.2Hz，1H)，8.8(m，1H)，10.63(s，1H)MS—ESI(m/z):416.2(M+l)實施例5化合物Ic:4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶(0.20g，0.82mmol)溶于吡啶(1.5ml)中，室溫下緩慢加入對三氟甲基苯甲酰氯(1.6ml，2.0mmo1)，升溫到8(TC。氮氣保護下約l小時，向反應體系中加水(3ml)，攪拌10分鐘，然后加入飽和NaHC03溶液到無氣泡產生，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌，無水MgS04干燥，濃縮得粗品0.34g，乙酸乙酯重結晶，得純品(0.19g，產率55%)。工HNMR(400腿z，DMSO—d6):2.8(d，J=4.8Hz，3H，NHCH3)，7.1(q，1H)，7.2(d，J=8.8Hz，2H)，7.4(d，J=2.他，1H)，7.9(t，J=4.8Hz，鄉(xiāng)，8.1(d，J=8.他，2H)，8.5(d，J=5.6Hz，1H)，8.7(d，J=4.8Hz，1H)，10.6(s，1H)MS—ESI(m/z):414.2(M—1)實施例6化合物Id:4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶(0.40g，1.65mmo1)與碳酸鉀(0.45g，3.30mmol)的混合物溶于THF(4ml)中，室溫攪拌下，滴加對氯苯甲酰氯(0.43g，2.47mmo1)的THF(4ml)溶液，滴畢攪拌l小時，抽濾，得粗品，用甲醇和二氯甲烷的混合溶液重結晶，艮口得產品(0.41g，產率65.9%)。工HNMR(400腿z，DMSO—d6):2.97(d，J=4.4Hz，3H，—NHCH3)，7.0(d，J=14.4Hz，1H)，7.1(d，J=14.4Hz，2H)，7.2(d，J=8.4Hz，1H)，7.5(t，J=4.2Hz，2H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)，8.5(d，J=5.2Hz，1H)，8.7(d，J=他，1H)，10.4(s，H)MS-ESI(m/z):382.1(M+1)，405.9(M+23)藥效學實驗部分試驗例細胞增殖抑制實驗1、實驗材料RPMI-1640、DMEM、胎牛血清、胰酶等購自GibcoBRL公司(InvitrogenCorporation,USA)，溴化噻唑藍四唑(MTT)、二甲亞砜(DMSO)為Sigma公司(USA)產品。本發(fā)明涉及的新化合物由我實驗室自行合成，體外實驗時用DMSO配制成20mg/ml儲存液，置4'C冰箱避光保存?zhèn)溆?，臨用時用完全培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。細胞系及培養(yǎng)本實驗所用的本實驗所用的人肝癌細胞株(H印G2)、人結腸癌細胞株(SW480和HCT116)、人乳腺癌細胞株(MCF7)和人肺癌細胞株(A549)均購于美國ATCC公司。人肝癌細胞株(H印G2)，用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100yg/mL鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基、5%C02、37。C培養(yǎng)。人結腸癌細胞株(HCT116和SW480)、人乳腺癌細胞株(MCF7)和人肺癌細胞株(A549)用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100yg/mL鏈霉素的RPMI-1640完全培養(yǎng)基、5%C02、37'C培養(yǎng)。2、實驗方法(MTT法)用完全培養(yǎng)液調整細胞濃度為2X10VmL，接種于96孔板，每孔200yL，培養(yǎng)過夜，次日分別用不同劑量的IaId(終濃度分別為20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312mg/ml)處理細胞，同時設等體積的溶劑對照組，DMSO濃度為O.1%(0.P/。的DMSO對細胞增殖無影響)。每個組設5個復孔，37°C，5%C02培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)48及72小時后，取l個培養(yǎng)板，每孔加入5mg/mLMTT試劑20yL，繼續(xù)培養(yǎng)2h，棄上清，再加DMSO150yL，振蕩混勻15min，用酶標儀(入=570nm)測定吸光度(A)值(A值與活細胞數(shù)成正比)，取其平均值。相對細胞增殖抑制率(％)=(溶劑對照組A57Q-實驗組A57Q)/溶劑對照組A570X100%。以下各化合物對細胞增值抑制作用，均采用細胞增殖抑制率(％)表示。3、實驗結果化合物IaId在不同腫瘤細胞株上的對細胞增殖抑制作用見表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結果顯示，化合物Ib作用A549、H印G2及HCT116細胞后，隨藥物濃度增大，細胞增殖抑制越明顯(圖l)，具有劑量依賴性(P〈0.05)。各劑量組與溶劑對照組相比，相對細胞增殖抑制率差異均有統(tǒng)計學意義(P〈0.05)?；衔颕b處理A549，H印G2及HCT116細胞48h的半數(shù)抑制濃度(IC5o)分別約為21.5yg/ml、18.2yg/ml及8.1yg/ml。權利要求1.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物其中，R1為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2比為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。2.根據(jù)權利要求1所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物，其特征在于^為氫，氯代基或三氟甲基；&為氫，氯代基或三氟甲基；R-;為氫，氯代基或三氟甲基。3.根據(jù)權利要求2所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物，其特征在于^為氫；&為氫，氯代基或三氟甲基；R.;為氫，氯代基或三氟甲基。4.根據(jù)權利要求3所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物，其特征在于所述衍生物為4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶，4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶，4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶，或4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶。5.制備式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物的方法，其特征在于由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶與相應化合物通過氮?；磻苽涞玫?。6.根據(jù)權利要求5所述的制備式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物的方法，其特征在于:它是由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶與相應化合物以吡啶作為溶劑和縛酸劑，通過氮酰化反應制備得到；或由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶與R取代苯甲酰氯以四氫呋喃作為溶劑、碳酸鉀作為縛酸劑，通過氮?；磻苽涞玫?。7.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物在制備抗腫瘤藥物中的用途。8.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲?；?吡啶衍生物添加藥學上可以接受的輔助性成分制備而成的藥物組合物。9.權利要求8所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物以及制備方法和用途，屬于化學醫(yī)藥領域。該衍生物的結構如式I所示R₁為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R₂為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R₃為氫，鹵代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。所述衍生物可用于制備抗腫瘤藥物。文檔編號C07D213/00GK101362718SQ200810304730公開日2009年2月11日申請日期2008年9月28日優(yōu)先權日2008年9月28日發(fā)明者余洛汀,黎楊,楊勝勇,趙瀛蘭,魏于全申請人:四川大學