專利名稱：復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體及其制備 方法。
背景技術(shù)：
磺胺藥是一類人工合成的抗微生物藥，自1935年發(fā)現(xiàn)以來，在控制細菌性感染病 中發(fā)揮了巨大作用。具有抗菌譜廣；性質(zhì)穩(wěn)定，便于長期保存，價格低廉等優(yōu)點。如磺胺間 甲氧嘧啶鈉，為N-(6-甲氧基-4-嘧啶基)-4氨基苯磺酰胺鈉鹽一水合物。體內(nèi)乙酰化率 低，因而在體內(nèi)抗菌效力較強，并且較少引起泌尿道特別是腎的損害；內(nèi)服后吸收良好，血 中濃度較高，但有效濃度維持時間較短(豬5.8小時，山羊7小時，湖羊2小時)；對豬弓形 蟲病、豬水腫病和家畜球蟲病等都有較好的療效，常用于畜禽敏感菌感染。 磺胺類藥物的抗菌增效劑甲氧芐啶(TMP)均為淡黃色或白色結(jié)晶粉末；無臭，味 微苦；幾乎不溶于水，易溶于酸及有機溶劑。口服或注射后吸收迅速，維持時間短?？咕饔?同磺胺藥，但較弱；二者合用，能使磺胺類藥物的抗菌作用增加數(shù)倍至數(shù)十倍，并可呈現(xiàn)殺 菌作用，對磺胺類藥有耐藥性的菌株，亦能增效作用；此外還能增強各種抗生素如四環(huán)素、 青霉素及紅霉素的抗菌效力。在臨床應(yīng)用上，常以1 5與磺胺藥合用。甲氧芐啶單用時 可能在某些菌株迅速出現(xiàn)耐藥性，但毒性很低，治療量不會出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)?；前烽g甲 氧嘧啶鈉與甲氧芐啶兩者聯(lián)合使用，使得磺胺類藥物在抗微生物新藥不斷涌現(xiàn)的今天，仍 然在臨床上廣泛應(yīng)用。盡管磺胺間甲氧嘧啶鈉與甲氧芐啶配合后抗菌作用顯著增強，臨床應(yīng)用較為廣 泛，但在臨床應(yīng)用上仍然具有一些缺陷，如它的半衰期較短，由于是抑菌劑，首次劑量要加 倍且需要不斷反復(fù)給藥。仍然具有一定的副作用，常表現(xiàn)為精神沉郁、食欲減退或廢絕、貧 血、白細胞減少、尿少或無尿、血尿和體溫升高等；禽類過量使用可致大批死亡，或見增重減 慢、產(chǎn)蛋量下降及因腸道菌群失調(diào)引起維生素BpK吸收減少產(chǎn)生的多發(fā)性神經(jīng)炎和全身性 出血癥。另外該藥物易產(chǎn)生骨髓抑制、白細胞減少癥、血小板減少癥等，免疫系統(tǒng)受損傷時 該藥物會產(chǎn)生更高的毒性。因此，合理的用藥、提高臨床療效、降低藥品不良反應(yīng)就成了當 物之舉。脂質(zhì)體(liposome)是磷脂依靠疏水締合作用在水中自發(fā)形成的一種分子有序組 合體，為多層囊泡結(jié)構(gòu)，每層均為類脂雙分子膜，層間和脂質(zhì)體內(nèi)核為水相，雙分子膜間為 油相，膜厚度約為4nm。正因為既有水相，又有油相，這一基本性質(zhì)，為親水親油藥物包裹在 同一脂質(zhì)體中提供了依據(jù)。而且因為其粒子大小處于納米級的介觀范圍，有許多獨特的物 理、化學(xué)性質(zhì)，它由磷脂在水中自發(fā)形成，制備工藝簡單，在人體內(nèi)具有無毒、無免疫原性、 可降解、緩釋等特點，所載藥物廣泛，并減少所需藥量，增強其體內(nèi)穩(wěn)定性和藥理作用，降低 毒副作用，使藥物具有被動靶向性特征，還可制成免疫脂質(zhì)體實現(xiàn)主動靶向性。然而由卵磷 月旨(PC)和膽固醇(Chol)等組成的傳統(tǒng)脂質(zhì)體是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在體內(nèi)外的弱穩(wěn)定性 限制了它的使用，極大影響其作為藥物載體的應(yīng)用。
此外，脂質(zhì)體在血液中的穩(wěn)定性是發(fā)揮藥物載體作用的關(guān)鍵。血液中有多種破壞因素高密度脂蛋白(HDL)是破壞脂質(zhì)體的主要成分，載脂蛋白A-I (apoA-Ι)易從HDL上 脫落并與脂質(zhì)體磷脂結(jié)合，且HDL和脂質(zhì)體易發(fā)生apoA-Ι與磷脂的互換，脂質(zhì)體膜形成孔 洞；同時脂質(zhì)體在血液中激活補體系統(tǒng)，最終形成攻膜復(fù)合體，脂質(zhì)體膜出現(xiàn)親水性通道， 引起藥物滲漏和水、電解質(zhì)的大量進入，最終滲透裂解脂質(zhì)體；血清白蛋白與脂質(zhì)體磷脂結(jié) 合形成復(fù)合物，降低其穩(wěn)定性；血液中的磷脂酶可水解磷脂，該反應(yīng)強弱由磷脂結(jié)構(gòu)決定； 脂質(zhì)體進入循環(huán)系統(tǒng)后，未經(jīng)修飾的脂質(zhì)體大部分運轉(zhuǎn)至肝臟和脾臟等單核吞噬細胞系統(tǒng) (MPS)豐富的部位，少量被肺、骨髓及腎攝取；肝細胞膜受體對直接暴露于表面的磷脂負電 基進行識別，因而脂質(zhì)體首先被肝細胞吞噬。這些因素綜合使傳統(tǒng)脂質(zhì)體的半衰期僅十幾 min0因此傳統(tǒng)脂質(zhì)體作為藥物的載體還是存在著明顯的缺陷。而多囊脂質(zhì)體(Muhivesicular liposomes,MVL)是采用貯庫泡沫技術(shù)(D印ofoam technology,Depo-Foam)于1983年研制(英國Sky印harma PLC公司)成功的一種新型月旨 質(zhì)體，主要用于運載親水性藥物。注射后，作為藥物貯庫隨時間釋放被包封的藥物。由于以 上特點以及粒子在顯微鏡下泡沫狀的外觀，MVL也被稱為貯庫泡沫藥物傳遞系統(tǒng)。MVL注射 途徑廣泛，可用于敏感部位的注射如眼部、硬膜外或關(guān)節(jié)腔等，人體研究表明安全性較高。 另外，D印ofoam技術(shù)經(jīng)證明可以進行工業(yè)化大生產(chǎn)，具有良好的貯藏期穩(wěn)定性。多囊脂質(zhì) 體的主要特點之一是緩釋時間明顯長于普通脂質(zhì)體，如果能將親水藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉 和親脂藥甲氧芐啶包裹在同一多囊脂質(zhì)體中，將發(fā)揮良好的藥理作用；目前還沒有這方面 的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種選材和操作簡單的將親水藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉和 親脂性藥物甲氧芐啶包裹在同一多囊脂質(zhì)體中的制備方法。本發(fā)明另一目的旨在提供上述方法制備的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體，其 緩釋時間長、親水藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉和親脂性藥物甲氧芐啶包裹在同一多囊脂質(zhì)體 中，包封率高、穩(wěn)定性好，可作為獸藥新劑型，為臨床推廣應(yīng)用打下基礎(chǔ)。本發(fā)明的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體是由脂質(zhì)大豆卵磷脂、膽固醇和三 酰甘油形成的多囊脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中同時包裹了親水性藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉和親脂性藥物 甲氧芐啶；所述的多囊脂質(zhì)體中小囊粒徑范圍10-40 μ m;合成所述多囊脂質(zhì)體時，磺胺間 甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶總質(zhì)量與脂質(zhì)的總質(zhì)量的添加比例為1 4-1 10，優(yōu)選為1 4; 磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的添加質(zhì)量比為10 3-4 1，優(yōu)選為4 1;大豆卵磷脂與 膽固醇的添加質(zhì)量比為1-4 1，優(yōu)選為1 1;三酰甘油的用量為8-16/mmol·!/1，優(yōu)選為 16/mmol · L-1。上述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟(1)按比例稱取大豆卵磷酯、膽固醇、甲氧芐啶、三酰甘油溶解于10_15mL三氯甲 烷中形成脂溶液；(2)將磺胺間甲氧嘧啶鈉溶解于10_15mL超純水中形成水溶液；(3)將脂溶液和水溶液混合，渦旋振蕩Ι-lOmin，然后在超聲波細胞破碎機上乳化 2-12min形成形成W/0型初乳；
(4)取W/0型初乳5-10mL，加入超純水10_15mL，在渦旋混合儀上振蕩1-lOmin，超 聲乳化2-5min ；形成W/0/W型復(fù)乳；(5)取上述W/0/W型復(fù)乳于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上揮發(fā)掉三氯甲烷，即得復(fù)方磺胺間甲氧 嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體。步驟(1)中還加入Vit-E溶解于三氯甲烷中。
步驟(1)在25_30°C水浴中形成脂溶液。步驟(3)在乳化前保溫2-5min。步驟(4)中加入超純水后再加入Tween-80和Span-80，在渦旋混合儀上振蕩。步驟(5)中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度45_50°C，時間10-20min。多囊脂質(zhì)體是一種新型的藥物緩釋制劑，與傳統(tǒng)的脂質(zhì)體相比，其具有包封率高、 包封體積大、藥物滲漏少等眾多優(yōu)點。相對傳統(tǒng)脂質(zhì)體，多囊脂質(zhì)體的脂質(zhì)成分中除了磷脂 等兩性磷脂外，尚需加入至少1種中性磷脂如三酰甘油，它們無成膜能力但能填充于脂質(zhì) 雙分子層交匯處的疏水空間，穩(wěn)定交叉處的連接，還能以小油滴形式分散在水相隔室中，使 脂質(zhì)體包封藥物后具有不連續(xù)的藥物溶液囊泡，因而具有更多的包封容積和更大的粒徑。 多囊脂質(zhì)體脂質(zhì)層的非同心結(jié)構(gòu)會使脂質(zhì)體的穩(wěn)定性增加，且藥物釋放時間延長。在制備 過程中影響復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體包封率的原因主要是復(fù)乳的破裂和聚合以 及膜的致密性等，膜材的組成會影響膜的剛性，剛性不足，膜易破裂，得到不穩(wěn)定的多囊脂 質(zhì)體。故本發(fā)明采用復(fù)乳法制備多囊脂質(zhì)體，篩選了合適的膜材組成和乳化條件，使制備的 多囊脂質(zhì)體在普通光學(xué)顯微鏡下和投射電子顯微鏡下觀察可見“大囊包小囊”的典型多囊 脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，包封率高達86.2%。在制備脂質(zhì)體的過程中除了在油相中加入膜穩(wěn)定劑，如 Vit-E外，在外水相中也加入輔助乳化劑(如Tween-80和Span-80)穩(wěn)定復(fù)乳；反之則易聚 合結(jié)塊，得不到多囊脂質(zhì)體。多囊脂質(zhì)體的膜是隨著有機溶劑的揮發(fā)在原油相部位形成的，制備溫度及溶劑揮 發(fā)速率直接影響多囊脂質(zhì)體的形成。制備時溫度太高或太低，除有機溶劑速度過快或過慢， 都容易造成復(fù)乳在轉(zhuǎn)化成多囊脂質(zhì)體之前即已破裂，最終無法形成多囊脂質(zhì)體。在制備過 程中，最好始終保持相同的溫度，避免介質(zhì)的表面張力以及表面活性劑的HLB值隨著溫度 的變化而發(fā)生變化，影響復(fù)乳的穩(wěn)定性。本發(fā)明考察了不同溫度條件下的成囊情況，最終選 擇始終控制溫度為25-30°C，所得復(fù)乳較穩(wěn)定，囊形狀較好。采用復(fù)乳法法作為復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體制備方法，這也是目前制備 多囊脂質(zhì)體的唯一方法。乳化條件的控制是影響粒徑的一個很重要的因素，第一次乳化和 第二次乳化的強弱對多囊脂質(zhì)體粒徑的影響最為顯著，第一次乳化采用大功率，乳化條件 適當延長，第二次功率較小，乳化時間適當縮短，這樣能增大多囊脂質(zhì)體的粒徑，反之亦然。 根據(jù)這些條件，采取合適的乳化條件，來控制粒徑。在制備的過程中影響復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體形成及包封率、含量的因 素很多，其中主要因素是大豆磷脂_膽固醇的比例，若磷脂用量太多，膽固醇用量太少，則 脂質(zhì)體的穩(wěn)定性差；反之，脂質(zhì)體不易形成；其次是脂質(zhì)體膜材-藥物的比例，若膜材用量 多，藥物量少，雖然脂質(zhì)體對藥物的包封率高，但脂質(zhì)體的含藥量少，造成脂質(zhì)體膜材的浪費。脂質(zhì)體是磷脂等分散在水中形成的封閉囊泡，磷脂含有親水和疏水基團，在水中閉合的過程本身能形成雙分子層，根據(jù)這一原理，本發(fā)明采取兩種藥物，一種親水性藥物和 一種親脂性藥物，使脂質(zhì)體在形成的過程中，即能包裹親水性藥物和親脂性藥物。由于多囊 脂質(zhì)體主要用來包封親水性藥物，磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶在多囊脂質(zhì)體的比例也將 會是影響藥效的一個重要因素。故該試驗在設(shè)計的過程中，采用磺胺間甲氧嘧啶鈉(親水 性)和甲氧芐啶(親脂性)兩種藥物，并優(yōu)選相差比較大的比例(4 1)來制備復(fù)方磺胺 間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體，取得了較好的效果。本發(fā)明制備得到的多囊脂質(zhì)體多囊脂質(zhì)體是由許多大小不一、形狀不規(guī)則的小囊 緊密堆積在一起形成的，小囊與小囊之間被脂質(zhì)雙層膜隔開。光學(xué)顯微鏡觀察，可看到多 囊脂質(zhì)體呈球形，內(nèi)部有許多小粒，類似蜂窩狀的形成；一般情況下采用貯庫泡沫技術(shù)研制 的脂質(zhì)體適合于包封水溶性藥物。但本發(fā)明藥物選擇巧妙，在制備多囊脂質(zhì)體時除了磷脂 和膽固醇外，還使用了三酰甘油，三酰甘油不是均一地夾雜在脂質(zhì)雙層膜中，而是有一部分 以一小油滴的形式分布散在多囊脂質(zhì)體的內(nèi)水相中；另一部分則填充在小囊與小囊之間的 脂質(zhì)膜交聯(lián)部位的空隙中，起著連接、架橋、穩(wěn)定內(nèi)部小囊的作用。甲氧芐啶只含"2%, 而且是脂溶性藥物，剛好溶解在三酰甘油的小油滴形態(tài)中，并不干擾水溶性藥物的包裹。因 此，本發(fā)明利用了獨有的既能運載親水性藥物，又能運載脂溶性藥物的結(jié)構(gòu)特點，克服了多 囊脂質(zhì)體只用做水溶性藥物運載系統(tǒng)的缺陷；而將水溶性藥物和脂溶性藥物完美的組成多 囊脂質(zhì)體。本發(fā)明將不同溶解性藥物按一定的配比填充于脂質(zhì)體的親水親脂囊腔，這種特殊 的包封方式，還提高了脂質(zhì)體的包封容積，藥物包封率最高達80%以上。彌補以往的脂溶性 藥物包封少會影響臨床藥效的缺陷；而且其制備工藝簡單，制備的多囊脂質(zhì) 體性質(zhì)穩(wěn)定，在 體內(nèi)具有用藥量極低、無免疫原性、可降解、緩釋等重要特點，減少所需藥量，增強其體內(nèi)穩(wěn) 定性和藥理作用，降低毒副作用(脂質(zhì)體中磺胺間甲氧嘧啶鈉含量極低、但療效顯著；大豆 磷酯為大豆提取物，無毒)、使藥物具有被動靶向性特征，還可制成免疫脂質(zhì)體實現(xiàn)主動靶 向性?？朔擞陕蚜字?PC)和膽固醇(Chol)等組成的傳統(tǒng)脂質(zhì)體的熱力學(xué)不穩(wěn)定體系的 缺點，大豆磷酯比卵磷脂和膽固醇的熱穩(wěn)定性要高。本發(fā)明藥物具有高效、長效和低殘留等特點。本發(fā)明的高效性主要體現(xiàn)在水溶 性藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉與脂溶性藥物甲氧芐啶按適合的比例包裹在同一多囊脂質(zhì)體中 形成一個整體，充分發(fā)揮了藥物的組合效應(yīng)，比單純用藥的療效大大增強，使磺胺間甲氧嘧 啶鈉的抗菌作用增強療效幾倍、甚至幾十倍。其長效性主要體現(xiàn)在本發(fā)明形成的新型多 囊脂質(zhì)體是一個藥物貯庫，隨時間緩慢釋放被包封的藥物，也就是藥物緩釋時間明顯長于 普通脂質(zhì)體(多囊脂質(zhì)體的最大特點就是長效，他像很多的小的脂質(zhì)體粘在一起，外面的 破裂后里面的還是小的完整的脂質(zhì)體，一直消融到最后還是完整的小的脂質(zhì)體，他的結(jié)構(gòu) 就像泡沫一樣，把泡沫掰開，里面都是小的完整的顆粒，)其低殘留主要體現(xiàn)在本發(fā)明形成 的多囊脂質(zhì)體中磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的含藥量極低，總用藥量只有正常用量的 1/10-1/100。本發(fā)明的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體可制成注射劑或口服制劑。


圖1為本發(fā)明的多囊脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)形態(tài)；
圖2為本發(fā)明多囊脂質(zhì)體的藥動學(xué)研究中空白血漿色譜圖；圖3為本發(fā)明多囊脂質(zhì)體的藥動學(xué)研究中磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液色譜圖；圖4為本發(fā)明多囊脂質(zhì)體的藥動學(xué)研究中血漿提取后磺胺間甲氧嘧啶鈉色譜圖；圖5為本發(fā)明多囊脂質(zhì)體的藥動學(xué)研究中血漿提取后復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉色 譜圖； 圖6為本發(fā)明多囊脂質(zhì)體的藥動學(xué)研究中肌肉注射復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊 脂質(zhì)體平均藥-時曲線。
具體實施例方式從圖1能看到很多小的囊體聚集，像泡沫一樣緊緊的堆積在一起，累計成多囊脂 質(zhì)體。以下實施方式旨在進一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。按以下步驟制備得到了本發(fā)明的多囊脂質(zhì)體。(1)按比例稱取大豆卵磷酯、膽固醇、甲氧芐啶、三酰甘油，Vit-E溶解于10_15mL 三氯甲烷中，25-30°C水浴中形成脂溶液；(2)將磺胺間甲氧嘧啶鈉溶解于10_15mL超純水中形成水溶液；(3)將脂溶液和水溶液混合，渦旋振蕩1-lOmin，25_30°C水浴保溫2-5min ；然后在 超聲波細胞破碎機上乳化2-12min形成形成W/0型初乳；(4)取W/0型初乳5-10mL，加入超純水10_15mL，再加Tween-80Span_80 ；在渦旋混 合儀上振蕩，超聲乳化2-5min ；形成W/0/W型復(fù)乳；(5)取上述W/0/W型復(fù)乳于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上揮發(fā)掉三氯甲烷，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度 45-50°C，時間10-20min ；即得復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體。正交設(shè)計優(yōu)化復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體處方和制備工藝按照上述步驟，本實驗使用四因素四水平的正交設(shè)計篩選脂質(zhì)體制備的最優(yōu)條 件，即以藥脂比(質(zhì)量比，其中磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的質(zhì)量比為4 1)、磷脂和膽 固醇比(質(zhì)量比)、油相中三酰甘油的用量、兩次乳化時間比4個因素，每個因素取3個水 平，以包封率作為指標，優(yōu)化最佳工藝配方。主要的影響因素和水平見表1。表1正交設(shè)計實驗因素和水平表 根據(jù)已確定的四因素四水平，按[L9(34)]正交設(shè)計配制9份樣品，以包封率為考 察指標進行正交試驗，結(jié)果詳見表2。由[L9(34)]正交設(shè)計可見，4個因素中對復(fù)方磺胺間 甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體包封率的影響順序為D > B > C > A，得出優(yōu)化處方為A1B1C3Dy即m(藥物)m(脂質(zhì))=1 4;m(磷脂)m(膽固醇)=1:1 ；三酰甘油的用量為16/ mmol · L—1 ；第一次乳化時間和第二次乳化時間比為4 1 (12min 3min)。表2正交設(shè)計實驗結(jié)果 注XpX2、X3分別為各因素不同水平3次實驗的平均包封率；R為各因素不同水平極差。依據(jù)數(shù)學(xué)模型優(yōu)化所得最優(yōu)處方制備樣品3批，結(jié)果表明3批樣品包封率基本一 致，分別為86. 2%,85. 1%,83. 7%，平均包封率為85%，說明該制備工藝重現(xiàn)性好。本發(fā)明的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的毒性研究在臨床應(yīng)用中，磺胺間甲氧嘧啶鈉作為磺胺類藥物中的強效抑菌劑，其抗菌譜廣， 運用廣泛，但同時也表現(xiàn)出較強的局部刺激性和肝、腎等器官毒性及神經(jīng)肌肉阻滯等毒副 作用，脂質(zhì)體適合體內(nèi)降解，無毒性和免疫原性，脂質(zhì)體作為藥物載體可以提高藥物的治療 指數(shù)，降低藥物毒性，減少藥物副作用，并具有能延長有效血藥濃度時間，減少藥物用量等 優(yōu)點。本實驗從復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的急性毒性試驗、亞慢性毒性試驗入手， 考察了該制劑的安全性，為保證臨床用藥安全提供依據(jù)。使本發(fā)明的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體質(zhì)量濃度為22. 5mg/mL，備用。試驗動物SPF級昆明小鼠60只，早J各半，18 24g/只，購于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院小 動物實驗室。室溫控制在18 22°C，相對濕度40 70%，保持室內(nèi)通風(fēng)良好，雌雄分籠飼養(yǎng)，籠底墊料為創(chuàng)木花屑，經(jīng)日光曬后使用，隔日清掃鼠籠一次，更換墊料并消毒鼠籠，飼料 為湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院小動物實驗室提供的全價營養(yǎng)固體顆粒鼠飼料，其中含蛋白質(zhì) 約21%，自由采食，自由飲水，動物飼養(yǎng)7d觀察后，確定為健康動物，方可進行試驗。方法
1)急性毒性試驗在預(yù)試驗中，發(fā)現(xiàn)復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體以極限容量ImL/只腹腔注 射后，小鼠無死亡，不能進行LD50值的測定，因此進行最大耐受量實驗。在多次預(yù)試驗基礎(chǔ) 上，取小白鼠20只，雌雄各半，隨機分為兩組，一組注射復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液，劑 量為837. 52mg/kg. bw[83]，腹腔注射0. 5mL，另一組按1700mg/kg. bw (相當于復(fù)方磺胺間甲氧 嘧啶鈉臨床用藥量的85倍，)給小白鼠腹腔注射復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體，分3次 在24小時內(nèi)給藥完畢(受制備方法的影響，無法得到高濃度的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊 脂質(zhì)體，所以分多次給藥以達到所需劑量)。給藥后，觀察并記錄7天內(nèi)動物外觀體征、飲食 欲、行為活動、大小便、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及死亡動物數(shù)。如有動物死亡，及時尸檢，觀察臟 器變化，分析小鼠死亡原因，如有病變組織則進行切片鏡檢。2)亞慢性毒性試驗根據(jù)半數(shù)致死量法并結(jié)合擬用臨床劑量法進行劑量設(shè)計，設(shè)高、中、低3個劑量組 和1個陰性對照組，高劑量組為300mg/kg. bw (為臨床用藥量的15倍)、中劑量組為IOOmg/ kg. bw (為臨床用藥量的5倍)、低劑量組為50mg/kg. bw (為臨床用藥量的2. 5倍)。取小白 鼠80只，雌、雄各半，隨機分為4組，每組20只(雌雄各半)，雌雄分籠飼喂。將復(fù)方磺胺 間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體用滅菌生理鹽水稀釋適當倍數(shù)，每鼠隔天于固定時間腹腔注射藥 物0. 5mL，每隔三天稱一次體重，根據(jù)體重變化調(diào)整藥物的稀釋倍數(shù)，對照組同樣每天于固 定時間腹腔注射生理鹽水0. 5mL,連續(xù)4w，觀察臨床反應(yīng)。4w于停藥24小時內(nèi)對各組小鼠 進行體重、血液學(xué)檢測，并取各組1/2小鼠斷頭處死，進行臟器系數(shù)測定、組織學(xué)檢查和血 液生化學(xué)檢測，余下小鼠停藥繼續(xù)飼喂2w時間，觀察并記錄停止給藥后2w時間內(nèi)的動物死 亡情況及體重的變化。觀察指標(1) 一般生理性狀觀察每天觀察并記錄各組小鼠的外觀、活動、攝食、飲水、被毛、鼻、口腔、肛門等天然孔 以及大小便等體征，如有動物死亡，及時尸檢，肉眼觀察后，如有病變組織則進行切片鏡檢， 分析死亡原因。(2)生長發(fā)育指標隔天稱一次體重，記錄數(shù)據(jù)，分別在給藥4w恢復(fù)期(2w后)計算小鼠增重情況。(3)外周血液學(xué)指標給藥4w后尾靜脈采血，血樣用肝素鈉抗凝后，按常規(guī)檢驗方法進行血紅蛋白 (HB)，紅細胞(RBC)，白細胞(WBC)計數(shù)及分類。血常規(guī)檢查項目及方法分別為血紅蛋白 測定用堿化血紅蛋白光電比色法；紅細胞和白細胞計數(shù)采用目視計數(shù)法；白細胞分類計數(shù) 采用顯微鏡分類計數(shù)法。(4)血液生化學(xué)檢測給藥4w后斷頭處死動物并采血，2 3只小鼠血液合并成一個血樣，常規(guī)制備血清，測定堿性磷酸酶(ALP)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，總蛋白(TP)，白蛋白 (ALB)，尿素氮(BUN)，肌酐(Cre)等指標。試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司提供， 按試劑盒說明操作，在半自動血清生化分析儀(MD-110美國產(chǎn))上測定。(5)系統(tǒng)尸檢及臟器系數(shù)測定給藥4w后各組隨機取采血處死的5只小鼠解剖，觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸 腺、胃、小腸等器官大小、形態(tài)、色澤、質(zhì)感。取心、肝、脾、肺、腎等重要臟器進行臟器系數(shù)測 定，臟器系數(shù)=(器官濕重/體重)X100%。(6)病理組織學(xué)檢查將心、肝、脾、肺、腎用生理鹽水清洗干凈后，用10%福爾馬林固定三天，石蠟包埋， 切片經(jīng)HE染色，在光學(xué)顯微鏡下進行組織學(xué)檢查。統(tǒng)計處理將試驗所得數(shù)據(jù)整理成表，判斷各數(shù)據(jù)是否在正常范圍，計算均值和標準差，用t檢驗測定各服藥組均數(shù)和對照組均數(shù)的差異顯著性。結(jié)果1、急性毒性試驗結(jié)果以837. 52mg/kg. wb劑量注射復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液的小鼠，有6只小鼠立 即出現(xiàn)精神委靡，躁動不安，站立不穩(wěn)，被毛逆立，腹部著地不起，肌肉震顫直至抽搐，7d內(nèi) 小鼠死亡5只。以1700mg/kg.wb劑量注射復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的小鼠在給 藥后7d內(nèi)，未見有小鼠死亡，但有20%以上的小鼠在最后一次注射后，產(chǎn)生行走減少、嗜睡 的癥狀，兩小時后恢復(fù)正常。可知復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體對小鼠的最大耐受量 大于1700mg/kg. wb，此量相當于臨床用量的85倍。結(jié)果表明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂 質(zhì)體的毒性顯著低于復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉。2、亞慢性毒性試驗結(jié)果1)體重與攝食量變化小鼠體重稱重結(jié)果見表3由試驗結(jié)果可知，攝食量的變化同體重增長變化一致。 經(jīng)方差分析，各試驗組體重增長值與對照組相比無顯著性差異(P > 0. 05)，說明各試藥組 在本試驗條件下對小鼠的生長無明顯影響。表3小鼠體重稱定結(jié)果表 2)血液學(xué)檢查小鼠血液學(xué)指標的檢測結(jié)果見表4.結(jié)果顯示各項數(shù)值均在正常范圍之內(nèi)波動， 各劑量組與對照組比較無顯著性差異(P > 0. 05)，未見因藥物引起的異常。
表4小鼠血液學(xué)指標結(jié)果 3)血清生化學(xué)檢測小鼠血清生化指標的檢測結(jié)果見表5.各試驗組對小鼠血清生化指標的影響試驗 結(jié)果表明各劑量組小鼠血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)與對照組相比無顯著性的差異 (P > 0. 05)，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，尿素氮(BUN)，總 膽固醇(TCH0)，堿性磷酸酶(ALP)等指標與對照組相比也均無顯著影響。停藥2周后，與給 藥4W后各項指標相比沒有統(tǒng)計意義上的差異(P >0.05)。說明各試藥組在本試驗條件下 對小鼠的血液學(xué)生化指標無明顯影響。表5小鼠血清生化指標結(jié)果表 4)臟器系數(shù)檢查小鼠重要臟器的臟器系數(shù)見表6，由結(jié)果可知，在小鼠給藥4W后，與對照組相比各 試藥組腦、心、肝、脾、肺、腎主要臟器系數(shù)均無顯著差異(P >0.05)，均未見異常。表6小鼠臟器系數(shù)結(jié)果表 5)剖檢檢查結(jié)果肉眼觀察各試藥組小鼠腦、心、肝、脾、腎等器官，與對照組比較，各臟器大小、形 態(tài)、色澤質(zhì)感均無明顯的異常發(fā)現(xiàn)。將腦、心、肝、脾、腎等重要臟器固定，包埋后切片，切片經(jīng)HE染色，在光學(xué)顯微鏡 下進行組織學(xué)檢查，各組小白鼠臟器組織結(jié)構(gòu)基本正常、細胞染色均勻。(1) 4、各組均無充血，壞死和炎癥變化。心外膜光滑，無出血點，心肌厚度及色澤未見異 常，未見心肌細胞結(jié)構(gòu)壞死或疤痕，心瓣膜厚度正常，心內(nèi)膜光滑，冠狀動脈未見狹窄或硬 化。(2)月干各組未見肝細胞變性、壞死、炎癥、硬化、癌瘤等病理變化，肝臟表面光滑潤澤，肝 小葉結(jié)構(gòu)清晰，門靜脈區(qū)無變化，未見主要靜脈擴張。(3)脾各組硬度色澤均正常，切面輪廓整齊清晰，未見異常變化。(4)月市肺臟大小、硬度、色澤均無異常，切面輪廓整齊清晰，各組均未見水腫、出血、炎性 變化，未見肺褐色硬變，未見支氣管、血管異常變化。(5)腎二腎大小、硬度、色澤均無異常，切面光滑，未見包膜粘連，切面皮、髓質(zhì)交界清晰， 皮層條紋清晰，輸尿管內(nèi)未見結(jié)石，腎動脈壁未見異常。各組均未見變性、壞死、炎癥、萎縮、 纖維化等病變。以上剖檢及病理組織學(xué)檢查表明，各器官沒有表現(xiàn)與藥物作用相關(guān)的病理變化， 說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體組小鼠主要臟器無病理損害。結(jié)論1、由于復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的毒性很低，以及制備方法的限制不能 得到高濃度的脂質(zhì)體，無法求出其LD5tl，目前對腹腔注射給藥的最大容量也無明確規(guī)定，所 以急性毒性試驗只粗略地進行了最大耐受量試驗，比較了復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉與復(fù)方磺 胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的急性毒性，復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體對小鼠的最大 耐受量大于1700mg，此量相當于臨床用量的85倍。結(jié)果表明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊 脂質(zhì)體的毒性顯著低于復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉，同時也說明脂質(zhì)體確有降低藥物毒性的作 用，相對與傳統(tǒng)制劑來說安全范圍更大。
2、復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的亞慢性毒性試驗中，對心、肝、脾、肺、腎等 重要器官進行剖檢及病理組織學(xué)鏡檢，結(jié)果表明，復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體各劑 量組與生理鹽水對照組相比，上述各器官和組織形態(tài)學(xué)正常，無組織學(xué)病變，說明復(fù)方磺胺 間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體各劑量組對小鼠的組織和器官無明顯損害作用。給藥4w后，對各 組小鼠心、肝、脾、肺、腎等重要器官的臟器系數(shù)進行測定，結(jié)果表明，復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶 鈉多囊脂質(zhì)體各劑量組與生理鹽水對照組相比無顯著性差異，說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉 多囊脂質(zhì)體對小鼠重要臟器的生長發(fā)育無明顯影響。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的亞慢性毒性試驗中，檢查了小鼠血清生化指 標，包括血紅蛋白、紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、總蛋白、白蛋白、ALT、AST、ALP、BUN。血紅蛋白、 紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)主要反映小鼠的一般生理狀況，結(jié)果表明，高、中、低劑量組與生理 鹽水對照組相比均無顯著差異，說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體脂質(zhì)體對小鼠的一 般生理狀況無明顯影響；總蛋白、白 蛋白、ALT、AST、ALP主要反映小鼠肝功能，結(jié)果表明， 高、中、低劑量組與生理鹽水對照組相比均無顯著差異，說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂 質(zhì)體對小鼠的肝功能無明顯影響；BUN主要反映小鼠腎功能狀況，結(jié)果表明，高、中、低劑量 組與生理鹽水對照組相比均無顯著差異，說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體對小鼠的 腎功能狀況無影響。以上結(jié)果均表明，復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體對小鼠無蓄積毒 性作用，說明本制劑在治療劑量范圍內(nèi)安全可靠。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉具有較強的肝、腎 毒性，將該藥物包封于脂質(zhì)體中后，由于脂質(zhì)體具有能在疾病靶區(qū)濃集的作用，藥物也從給 藥部位轉(zhuǎn)送到靶區(qū)，在靶區(qū)濃集，在其它臟器和組織分布較少，濃度很低，因而能大大降低 其對機體特別是肝、腎毒性。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體能降低藥物毒性的另一重 要原因可能在于脂質(zhì)體顆粒較大，難以進入腎皮層，因而能顯著降低對腎臟的損害。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)的藥動學(xué)研究據(jù)資料介紹，脂質(zhì)體劑型通過各種途徑進入體循環(huán)后，大部分選擇性地分布于富 有吞噬細胞的網(wǎng)狀內(nèi)皮組織系統(tǒng)，導(dǎo)致某些部位特別是肝、脾對包裹藥物的滯留量增加， 較少進入骨骼、心肌和神經(jīng)組織，因此，脂質(zhì)體劑型能顯著改變藥物的動力學(xué)性質(zhì)和組織分 布。目前磺胺間甲氧嘧啶鈉普通注射劑，具有半衰期較短，對感染部位靶向性差等缺點。將 磺胺間甲氧嘧啶鈉制備成多囊脂質(zhì)體后，能增加感染部位的靶向性，降低毒副作用，大大延 長有效血藥濃度時間。本實驗將復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體給家兔肌肉注射，采用 HPLC法測定了 96h內(nèi)不同時間點的血漿中藥物濃度，研究了復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂 質(zhì)體的經(jīng)時變化過程，重點討論了磺胺間甲氧嘧啶鈉的一些參數(shù)。供試動物與藥物健康家兔6只，雌雄各半，體重1.6 2. 2kg，購自湖南醫(yī)科大學(xué)實驗動物部。常規(guī) 飼養(yǎng)，自由采食。觀察一周，臨床表現(xiàn)健康。使本發(fā)明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體質(zhì)量濃度為20mg/mL，備用。1、血漿樣品處理取家兔血漿樣品0. 5mL于IOmL具塞離心管中，分別加入適量的磺胺間甲氧嘧啶鈉 對照品，混勻，加入醋酸乙酯3mL提取，漩渦混合器上混合3min，以3000r/min離心，分離醋 酸乙酯層于另一試管中，然后再加醋酸乙酯重提1次。中和2次提取的醋酸乙酯混合液， 在通風(fēng)櫥內(nèi)，40°C水浴，隊氣吹干。再加3mL醋酸乙酯沖洗管壁，繼續(xù)水浴吹干，殘留物用100 u L流動相溶解，分別取20 ii L進樣。2、血漿標準曲線的建立精密量取5份空白血漿各0.5mL，分別置于5只10mL具塞離心管中，各加入不同 量的磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液，使血漿中的磺胺間甲氧嘧啶鈉濃度分別為0. 05,0. 25、1、5、 10ug/mL的溶液。3、動物給藥及血樣采集取健康家兔6只，分別于給藥前采取空白對照血樣4mL左右，置于含肝素鈉的離心 管中，用自制的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體按照20mg/kg腿部肌肉給藥，分別于Oh、 lh、6h、12h、18h、24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h 采血。每次采血 2mL 左右，所有血樣均置 于含肝素鈉的離心管中，混勻。血樣在2000轉(zhuǎn)下離心15min，分離血漿，-20°C冰箱保存，待 測。4、血藥濃度測定離心后精密量取0. 5mL血漿，處理后，測定血漿中血藥濃度。5、數(shù)據(jù)處理中國藥理學(xué)會編制的3P97藥動學(xué)軟件擬合，求算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果1、色譜圖空白血清、磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液、磺胺間甲氧嘧啶鈉血清樣品、復(fù)方磺胺間甲氧 嘧啶鈉血清樣品的色譜圖如圖2 圖5所示，結(jié)果表明，在本試驗所采用的條件下，復(fù)方磺 胺間甲氧嘧啶鈉的色譜峰分離效果良好，空白血清及其他雜質(zhì)峰對其無影響，保留時間分 別為 6. 51 lmin。2、線性相關(guān)性SMM在0. 05 10 ii g/mL濃度范圍內(nèi)，峰面積(A)與藥物濃度(C)線性關(guān)系良好， 標準曲線方程:y = 20508x+235. 32 (r 0. 9999)，其中x為所測血藥濃度ug/mL，y為SMM鈉 的峰面積。3、藥物代謝動力學(xué)參數(shù)測定靜注復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體后，家兔各取樣點的血藥質(zhì)量濃度見表7， 靜注復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體組的平均藥_時曲線見圖6，血藥濃度數(shù)據(jù)經(jīng)3P97 程序擬合后符合靜脈注射一室開放模型，主要藥動學(xué)參數(shù)見表8。從表中可知，在給藥96h 后仍可檢測出藥物，說明復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體血藥濃度維持時間在96h以 上，極具長效作用。表7 復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)不同時間血藥濃度(Pg/ mL) 表8復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)代謝動力學(xué)參數(shù) 結(jié)論多囊脂質(zhì)體的粒徑一般為5 50 ym，普通的單室，多室脂質(zhì)體一般粒徑為0. 1 5 U m,多囊脂質(zhì)體的粒徑較普通脂質(zhì)體大一到兩個數(shù)量級，不適合靜脈注射，所以在藥物代 謝學(xué)試驗中采用肌肉注射，血液采集由于時間間隔比較長，沒采用藥物代謝動力學(xué)常用的 頸總動脈插管方法，用家兔耳靜脈采血，收效良好。單室，多室脂質(zhì)體具有相同的同心圓結(jié)構(gòu)，多囊脂質(zhì)體沒有相同的同心圓，其內(nèi)部 有許多大小不一，形狀很不規(guī)則的小囊，這些小囊是緊密的堆積在一起的，小囊與小囊之間 倍脂質(zhì)雙層膜隔開，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)與泡沫很相像，這是其商品名叫D印oFoam的原因。這種結(jié) 構(gòu)賦予了脂質(zhì)膜較強的機械強度，使其穩(wěn)定性優(yōu)于普通脂質(zhì)體，多囊脂質(zhì)體能實現(xiàn)藥物的 緩控釋的原因，也就在于它具有這種獨特的結(jié)構(gòu)。經(jīng)過試驗驗證復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多 囊脂質(zhì)體緩釋效果明顯，在96h仍有藥物均勻釋放，這證明了多囊脂質(zhì)體能比普通制劑，普 通單室，多室脂質(zhì)體更多的延長藥物釋放時間。本次實驗中血樣采集后，將部分樣品用3層保鮮膜包封保存于4°C冰箱中24h后測 定，其結(jié)果比立即離心分離測定，藥物濃度平均降低約10%，保存48 h后測定，藥物濃度降 低約17%，提示在冷藏保存過程中，藥物有沉降的趨勢。因此，條件允許時，應(yīng)盡量及時處理 樣品。如果因樣品數(shù)量多無法及時處理，應(yīng)及時分離血漿-20°C凍存待測。據(jù)資料報道，磺胺間甲氧嘧啶鈉注射給藥符合二室動力學(xué)模型；口服給藥符合一 室動力學(xué)模型。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體肌肉注射后的藥-時曲線為一室模型， 反應(yīng)了藥物經(jīng)脂質(zhì)體包封后，藥物在動物體內(nèi)的代謝動力學(xué)發(fā)生了明顯改變。另據(jù)資料報 道，脂質(zhì)體的組成、粒徑、電荷、給藥途徑、劑量及給藥頻率均影響藥物的體內(nèi)動力學(xué)。
多囊脂質(zhì)體由于其獨特的結(jié)構(gòu)，可知其釋放應(yīng)是一個緩慢勻速的過程，家兔藥物 代謝動力學(xué)研究表明，在一小時內(nèi)有突釋現(xiàn)象，原因可能與多囊脂質(zhì)體混懸液中含有一些 游離的藥物或者脂質(zhì)碎片中含有一些藥物所致，所以在應(yīng)用多囊脂質(zhì)體混懸液時需離心將 上清液出去游離藥物。復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)的生物半衰期t1/2為51. 5h，藥-時 曲線下面積AUC為1049. 70h. mg/L，表觀分布容積為1536. 53mL/kg，清除率為19. 05mL/d，在 給藥96h后仍有一定濃度的藥物出現(xiàn)。另據(jù)文獻報道，磺胺間甲氧嘧啶鈉在家兔體內(nèi)的生 物半衰期t1/2為2. 94h，藥-時曲線下面積AUC為537. 7h. u g/mL,這表明復(fù)方磺胺間甲氧 嘧啶鈉脂質(zhì)體包封后，其藥代動力學(xué)及組織分布發(fā)生了明顯變化，藥物代謝速度大大減慢， 有效血藥濃度時間延長，提高療效。
權(quán)利要求
復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體，其特征在于，所述的多囊脂質(zhì)體是包含脂質(zhì)大豆卵磷脂、膽固醇和三酰甘油形成的多囊脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中同時包裹了親水性藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉和親脂性藥物甲氧芐啶；所述的多囊脂質(zhì)體中小囊粒徑范圍10-40μm；合成所述多囊脂質(zhì)體時，磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶總質(zhì)量與脂質(zhì)的總質(zhì)量的添加比例為1∶4-1∶10；磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的添加質(zhì)量比為10∶3-4∶1；大豆卵磷脂與膽固醇的添加質(zhì)量比為1-4∶1；三酰甘油的用量為8-16/mmol·L-1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體，其特征在于，合成所述 多囊脂質(zhì)體時，磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶總質(zhì)量與脂質(zhì)的總質(zhì)量的添加比例為1 4; 磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的添加質(zhì)量比為4 1 ；大豆卵磷脂與膽固醇的添加質(zhì)量比 為1 1;三酰甘油的用量為le/mmol*!/1。
3.權(quán)利要求1所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包 括以下步驟(1)按比例稱取大豆卵磷酯、膽固醇、甲氧芐啶、三酰甘油溶解于10-15mL三氯甲烷中 形成脂溶液；(2)將磺胺間甲氧嘧啶鈉溶解于10-15mL超純水中形成水溶液；(3)將脂溶液和水溶液混合，渦旋振蕩1-lOmin，然后在超聲波細胞破碎機上乳化 2-12min形成形成W/0型初乳；(4)取W/0型初乳5-10mL，加入超純水10_15mL，在渦旋混合儀上振蕩1-lOmin，超聲乳 化2-5min ；形成W/0/W型復(fù)乳；(5)取上述W/0/W型復(fù)乳于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上揮發(fā)掉三氯甲烷，即得復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶 鈉多囊脂質(zhì)體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于步驟(1)中還加入Vit-E溶解于三氯甲烷中。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于步驟(1)在25-30°C水浴中形成脂溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于步驟(3)在乳化前保溫2-5min。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于步驟(4)中加入超純水后再加Tween-80和Span-80，在渦旋混合儀上振蕩。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于步驟(5)中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度45-50°C，時間10-20min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉多囊脂質(zhì)體及其制備方法。所述的多囊脂質(zhì)體是由脂質(zhì)大豆卵磷脂、膽固醇和三酰甘油形成的多囊脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中同時包裹了親水性藥物磺胺間甲氧嘧啶鈉和親脂性藥物甲氧芐啶構(gòu)成；合成所述多囊脂質(zhì)體時，磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶總質(zhì)量與脂質(zhì)的總質(zhì)量的添加比例優(yōu)選為1∶4；磺胺間甲氧嘧啶鈉和甲氧芐啶的添加質(zhì)量比優(yōu)選為4∶1；大豆卵磷脂與膽固醇的添加質(zhì)量比優(yōu)選為1∶1；三酰甘油的用量優(yōu)選為16/mmol·L-1。制備時，第一次乳化時間和第二次乳化時間比優(yōu)選為4∶1(12min∶3min)。該種脂質(zhì)體是將水溶性和脂溶性兩種不同溶解特性的藥物混合在一起應(yīng)用于同一個多囊脂質(zhì)體中；其緩釋時間長、包封率高、穩(wěn)定性好，可作為獸藥新劑型，為臨床推廣應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
文檔編號A61K9/127GK101836995SQ20101015969
公開日2010年9月22日 申請日期2010年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日
發(fā)明者伍冶, 劉自逵, 孫志良, 柳高峰 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);湖南農(nóng)大動物藥業(yè)有限公司